Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química. / Made available in DSpace on 2013-07-16T01:34:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 230325.pdf: 1730397 bytes, checksum: f006b2053bdc1ffa997d2bfb8faa2605 (MD5) / Filmes de (poli(etileno-co-metil acrilato) (EMA) e EMA/poli(caprolactona-triol)(PCL-T) foram caracterizados em relação as suas características térmicas, mecânicas, de intumescimento, interações fármaco-polímero e aplicação na liberação controlada de fármacos. O aumento no teor de metil acrilato nos filmes de EMA promoveu redução da cristalinidade, diminuição da tensão máxima, aumento da capacidade de elongação e no módulo de elasticidade, aumento na capacidade de intumescimento dos filmes em etanol e favorecimento da permeação dos fármacos, paracetamol, ibuprofeno e cloridrato de diltiazem (DZ). A aumento da fração de etanol/água utilizado como solvente para solubilizar o fármaco promoveu aumento do coeficiente de permeabilidade do cloridrato de diltiazem fator influenciado pelo maior intumescimento do filme. Os resultados de DSC, FTIR e MEV demonstraram que os filmes de EMA/PCL-T variando em concentração de 100/0 até 60/40 são imiscíveis. O DZ quando incorporado aos filmes de EMA/PCL-T sofre redução progressiva do grau de cristalinidade com a adição de PCL-T. Este efeito é associado à interações da PCL-T com o grupamento iônico da amina terciária observados por FTIR. A progesterona (PG) quando incorporada aos filmes de EMA/PCL-T sofre redução para 5% de cristalinidade somente com a presença de EMA, a adição progressiva de PCL - T não promoveu efeito aditivo sobre esta propriedade. Os filmes EMA/PCL-T/DZ 80/0/20 e 70/10/20 apresentaram baixíssima liberação do fármaco incorporado, contudo os filmes 60/20/20 e 50/30/20 apresentaram mecanismo de liberação anômalo. Os filmes de EMA/PCL-T/PG, 80/0/20, 70/10/20, 60/20/20 e 50/30/20 apresentaram total liberação do fármaco incorporado em 48 horas e o mecanismo de liberação segue o comportamento descrito por HIGUCHI.

A hipertensão arterial é responsável por mais de 7 milhões de mortes prematuras em todo o mundo. Esta patologia é influenciada por diferentes sistemas pressores e depressores e a sua elevação resulta da perda do equílibrio entre estes fatores. A sinalização purinérgica tem sido apontada como um importante regulador da (pato)fisiologia cardiovascular. Na vasculatura, o ATP, o ADP e a adenosina podem influenciar as respostas vasomotoras, a ativação plaquetária e a função cardíaca, entre outros. No rim, estão associados à modulação da reatividade vascular e ao processo de retroalimentação tubuloglomerular. Os nucleotídeos exercem seus efeitos através dos receptores purinérgicos P2, subdivididos em P2X e P2Y, e a adenosina atua via ativação de quatro subtipos de receptores P1. As ectonucleotidases, atuando sob a forma de uma cascata enzimática, regulam a degradação dos nucleotídeos e a formação dos nucleosídeos. No presente trabalho, avaliamos a influência da hipertensão arterial induzida pela inibição crônica da produção de óxido nítrico sobre o sistema purinérgico vascular e renal de ratos. No primeiro capítulo, demonstramos que as hidrólises de ATP, ADP e AMP foram diminuídas em soro e plaquetas de ratos tratados com L-NAME (30 mg/Kg/dia por 14 dias). Entretanto, a medida dos níveis de purinas indicou uma diminuição nas concentrações de ADP, AMP e hipoxantina circulantes. O segundo capítulo mostrou que as hidrólises de ATP, ADP, AMP e 5’TMP foram aumentadas em membrana renal de ratos tratados com L-NAME, e estiveram acompanhadas por uma elevação significativa na expressão gênica das enzimas NTPDase2, NTPDase3 e NPP3. Os dados preliminares do capítulo III mostram que a hidrólise dos nucleotídeos em soro e sinaptossoma cardíaco de ratos fêmeas permaneceu inalterada nos animais tratados com LNAME (30 ou 50 mg/Kg/dia por 14 dias), sinalizando um possível dimorfismo sexual na resposta à hipertensão no que se refere à sinalização purinérgica. Os dados descritos em anexo no capítulo IV, os quais foram obtidos durante um estágio no exterior, descrevem a participação diferencial da NTPDase1 no controle do vasorelaxamento dependente dos receptores P2Y1 e P2Y2 em aortas de camundongos. O receptor P2Y1 foi facilmente desensibilizado em camundongos deficientes para a enzima, enquanto que o receptor P2Y2 mostrou-se menos suscetível à desensibilização. Finalmente, descrevemos a padronização de uma metodologia para a avaliação da participação dos purinoceptores endoteliais na vasodilatação dependente do conteúdo de plaquetas ativadas. Em conjunto, os dados desta Tese apontam que alguns parâmetros da sinalização purinérgica são alterados pelo modelo de hipertensão arterial induzida por L-NAME. Portanto, concluímos que esta sinalização pode representar mais um fator associado a ser considerado em uma terapia anti-hipertensiva e estudos adicionais são necessários para ratificar a utilização das terapias purinérgicas no contexto da hipertensão arterial. / Hypertension is responsible for more than 7 million deaths around the world. This pathology is influenced by different pressor and depressor systems, and its elevation results from the loss of equilibrium between these factors. The purinergic signaling has been implicated as an important regulator in the cardiovascular (patho)physiology. In the vasculature, ATP, ADP and adenosine may influence the vasomotor responses, platelet activation, cardiac function, among others. In the kidney, they are associated with the modulation of vascular reactivity and the tubuloglomerular feedback process. The nucleotides exert their effects through purinergic P2 receptors, subdivided into P2X and P2Y, and adenosine acts via activation of four subtypes of P1 receptors. The ectonucleotidases, acting as an enzyme cascade, regulate the degradation of nucleotides and the formation of nucleosides. In this study, we evaluated the influence of hypertension induced by chronic inhibition of nitric oxide synthesis on the vascular and renal purinergic system of rats. In the first chapter, we demonstrated that the hydrolysis of ATP, ADP and AMP were decreased in serum and platelets of rats treated with L-NAME (30 mg /Kg/day for 14 days). However, the measurement of purine levels indicated a decrease of circulating ADP, AMP and hypoxanthine. The second chapter has shown that the hydrolysis of ATP, ADP, AMP and 5'TMP were increased in renal membrane of rats treated with L-NAME, which were accompanied by a significant increase in gene expression of the enzymes NTPDase2, NTPDase3 and NPP3. Preliminary data of Chapter III show that the hydrolysis of nucleotides in serum and heart synaptosomes female rats remained unchanged in animals treated with L-NAME (30 or 50 mg / kg / day for 14 days), indicating a possible sexual dimorphism in regard to purinergic signaling in a hypertensive context. The data described in Annex of Chapter IV were obtained during a pre-doctoral training period abroad and describe the differential involvement of NTPDase1 in the control of vasorelaxation dependent of P2Y1 and P2Y2 receptors in mice aortas. The P2Y1 receptor was easily desensitized in mice deficient for the enzyme, whereas the P2Y2 was less susceptible to desensitization. Finally, we describe the standardization of a methodology for assessing the involvement of endothelial purinoceptors in the vasodilation dependent of activated platelets content. Together, the data from this thesis point out that some parameters of purinergic signaling are altered by the model of hypertension induced by L-NAME. Therefore, we conclude that purinergic signaling may represent another associated factor to be considered in an antihypertensive therapy and further studies are needed to confirm the use of purinergic therapies in the context of arterial hypertension.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:58:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 327702.pdf: 2174850 bytes, checksum: d91a97be57c43c41d3fa9c447b791113 (MD5) Previous issue date: 2014 / A ansiedade é vista pela ciência moderna como um conjunto de comportamentos, com respostas endócrinas e fisiológicas, que objetivam proteger o indivíduo de possíveis ameaças. Um teste amplamente utilizado na pesquisa da ansiedade é o labirinto em cruz elevado (LCE), por ser simples, não requerer procedimentos estressantes e com sensibilidade bidirecional. Recentemente constatou-se que uma única injeção sistêmica de pilocarpina (PILO) - agonista não seletivo muscarínico - em doses não-convulsivantes induz um perfil ansiogênico em ratos avaliados 24h, 1 mês e até 6 meses após o tratamento. A fim de melhor entender os mecanismos que levam a esta alteração comportamental persistente, o presente trabalho buscou investigar o papel dos receptores NMDA, através do pré-tratamento e tratamento com MK-801, na modulação dos comportamentos relacionados à ansiedade. Ratos Wistar adultos machos foram tratados com PILO (150 mg/Kg i.p) e MK-801 (0,03 e 0,06 mg/Kg i.p.), e avaliados 24 h ou 30 dias após no LCE. A injeção de PILO promoveu efeitos ansiogênicos nos animais avaliados no teste do LCE, com uma diminuição do tempo gasto e número de entradas nos braços abertos do labirinto em comparação aos animais controle. O pré-tratamento, bem como o tratamento com antagonista, nas duas doses utilizadas, foram capazes de prevenir e bloquear, respectivamente, os efeitos ansiogênicos observados nos animais tratados com PILO 24h e 30 dias após o tratamento, havendo aumento no tempo e número de entradas nos braços abertos do labirinto e na incidência de comportamentos relacionados à avaliação de risco. Buscando melhor esclarecer o envolvimento dos receptores NMDA no modelo de ansiedade induzida pela pilocarpina, assim como as prováveis vias de ativação envolvidas, avaliou-se a participação do óxido nítrico (NO) por meio expressão das proteínas PSD-95 e nNOS. Os resultados obtidos mostram que os animais tratados com pilocarpina apresentaram diminuição da expressão de nNOS, efeito revertido pelo tratamento com antagonista. Os resultados demonstrados no presente estudo sugerem um papel importante dos receptores glutamatérgicos-NMDA numa interação sinérgica com os receptores muscarínicos, mostrando que a modulação interativa entre esses dois sistemas neurotransmissores constitui um mecanismo importante no perfil ansiogênico desencadeado pela pilocarpina, bem como um provável envolvimento do NO na regulação da função dos receptores de NMDA na modulação dos estados ansiosos.<br> / Abstract : Modern science sees anxiety as a set of behaviors with endocrine and physiological responses that aim to protect the individual from possible threats. A test widely used in anxiety research is the elevated plus maze (EPM), for being simple and not require bidirectional sensitivity and stressful procedures. Recently it was found that a single systemic injection of pilocarpine (PILO) Â a non-selective muscarinic receptor agonist - at non-convulsant doses induces an anxiogenic profile in rats evaluated 24h, 1 month and up to 6 months after treatment. In order to better understand the mechanisms that lead to this persistent behavioral change, this study investigated the role of NMDA receptors, through the pre-treatment and treatment with MK-801, in the modulation of anxiety-related behaviors. Adult male Wistar rats were treated with PILO (150 mg/kg, i.p.) and MK-801 (0.03 and 0.06 mg/kg, i.p.) and evaluated 24 h or 30 days later in the EPM. The injection of PILO promoted anxiogenic-like effects in animals evaluated in the EPM test, with a decrease in the time spent and number of entries on the open arms of the maze in comparison to control animals. The pre-treatment and treatment with antagonist, at both doses used, were able to block and prevent, respectively, the anxiogenic-like effects observed in PILO-treated animals 24 h and 30 days after the treatment, increasing the time spent and number of entries on the open arms of the maze and risk-assessment behaviors incidence. Seeking to clarify the involvement of NMDA receptors in the pilocarpine-induced anxiety model, as well as the likely activation pathways involved, we evaluated the role of nitric oxide (NO) through expression of PSD-95 and nNOS proteins. The results show that PILO-treated animals showed decreased nNOS expression, and this effect was reversed by the antagonist treatment. The results reported in this study suggested a major role of NMDA-glutamate receptors in a synergistic interaction with muscarinic receptors, showing that interactive modulation between these two neurotransmitter systems is an important mechanism in the anxiogenic-like behavior induced by pilocarpine, as well as a possible involvement of NO in regulating the function of NMDA receptors in the modulation of anxious states.

CAVALCANTE, André Luiz Cunha. Participação dos receptores nmda na via nociceptiva trigeminal e o efeito modulador do magnésio, no modelo de artrite da articulação temporomandibular induzida por carragenina em ratos. 2012. 110 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-01-27T15:58:17Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_alccavalcante.pdf: 1455600 bytes, checksum: ce78e1cb505447c9bf35110c012e1aba (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-01-27T15:59:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_alccavalcante.pdf: 1455600 bytes, checksum: ce78e1cb505447c9bf35110c012e1aba (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-27T15:59:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_alccavalcante.pdf: 1455600 bytes, checksum: ce78e1cb505447c9bf35110c012e1aba (MD5) Previous issue date: 2012 / Understanding the role of NMDA receptors and magnesium as a modulator of this receptor in the nociceptive process, we propose to study the importance of the effect of this receptor in orofacial pain caused by the TMJ inflammation, mediated via trigeminal, also analyzing the role of the magnesium which is a modulator of activation of this receptor. Nociceptive behavioral parameter was evaluated , the mechanical hypernociception was analyzed by von Frey electronic , nociceptive threshold was measured before and after injection carrageenan (4,6,10, 24 - 168 hours). The NMDA receptor antagonist, MK-801 (0.1 to 0.5 mg / kg) was used to determinate the NMDA receptor influence in nociceptive process, it was administered intraperitonialy intraperitoneally (i.p.) 30 min before carrageenan Cg injection . To determinate the role of magnesium was carried out a pre-treatment by a supplementation with magnesium chloride (MgCl2, 90 mg / kg, divided into two taken orally) for 3, 5 and 7 days. We also cause a magnesium deficiency by administration of a special diet free of magnesium and milli-Q water administered ad libitum for 9 days. The nociceptive threshold was measured before and after all treatments. Results: Pretreatment with MK-801 (1, 0.5 snd 0.25mg/kg) inhibited the hypernociception, increasing the nociceptive threshold at 83% at the peak of hypernociception (6th hour) (p <0.01), and its effect lasted until 120 hours after a single administration (16%, p <0.05). With respect to treatment with supplemental MgCl2, it was observed that there was a significant increase in the nociceptive threshold about 24% at the peak of hypernociception (6th hour) in animals that received MgCl2 for 3 days before injection of carrageenan (p <0.001), an increase from 56% in animals with pre-treatment with 5 days (6th hour) (p <0.001) and an increase of 65% in the group that received MgCl2 for 7 days. In the magnesium deficient group we observed an increase in nociceptive response when compared with the initial threshold, with a decrease of 18% (p <0.001) in that threshold. Animals deficient in magnesium and injected with carrageenan showed a persistent decrease in hipernociceptive threshold that last until the end of experiment. We also observed the plasma level of magnesium, it was significantly higher in all MgCl2 treated groups, rising to 154% by day 7 compared to baseline, and in the deficient group, magnesium levels decreased it´s levels in 27%a after 9 days of magnesium free diet compared with the control. We also evaluate the expression of NMDA subunits NR1, NR2 and NR3 by RT-PCR analysis, which we found an increased expression of NR1 and NR3 subtypes (p <0.05) and a decrease in NR2B (p <0.05) in the groups receiving supplementation with MgCl2. For animals magnesium deficient, we observed no change in the NR2B subunit, but there was an increase in NR1 and NR3 subunit (p <0.05). By immunohistochemistry findings we suggest that magnesium deficiency caused an increase in immuno-labelilng of NR1 phosphorilated in both group, treated with intra-articular saline and the group injected with intra-articular carrageenan. In relation to inflammatory parameter the intensity of cell influx showed significant increase in the numbers of cells at 6ª hour, having a more significant difference at 12ª hour (p <0.01). We observed, with this study, that the NMDA receptor has an important role in orofacial nociception and that magnesium is able to modulate the nociceptive behavior and induces rearrangements of subunits receptor in Sp5C region. This study could lead to a better understanding of the central processing of trigeminal nociceptive pathway and development of new approaches in the treatment of orofacial pain of TMJ origin. / Entendendo a importância do papel dos receptores NMDA e do magnésio como modulador desse receptor no processo nociceptivo, nos propomos a estudar a importância do efeito desse receptor nas dores orofaciais originadas pela inflamação da ATM, mediada pela via trigeminal, analisando também o papel do magnésio o qual é um modulador da ativação desse receptor. Foi avaliado o parâmetro comportamental de nocicepção, pelo teste de hipernocicepção mecânica por von Frey eletrônico, sendo medido o limiar nociceptivo antes da injeção de carragenina e após (4,6,10, 24 – 168h). O antagonista dos receptores NMDA, MK-801 (0,1 ; 0,5 e 0,25mg/kg) foi utilizado para determinar o grau de influencia do receptor NMDA, sendo administrado por via intra-peritoneal (i.p.) 30 min antes da injeção de carrageninna (Cg). Para determinar o papel do magnésio foi realizado um pré-tratamento através de uma suplementação com cloreto de magnésio (MgCl2, 90 mg/kg, divido em 2 tomadas por via oral), durante 3, 5 e 7 dias. Também provocamos uma deficiência de magnésio através da administração de uma dieta especial livre de magnésio e água mili-Q administrados ad-libidum por 9 dias. O limiar nociceptivo foi medido antes e depois de todos os tratamentos. Resultados: o pré-tratamento com o MK-801 (0,1 – 0,5mg/kg) inibiu a hipernocicepção, aumentando o limiar nociceptivo em 83% no pico de hipernocicepção (6ª hora) (p<0.01), tendo seu efeito se prolongado até 120 horas após uma única administração (16%; p<0.05). Com relação ao tratamento com suplementação com MgCl2, observou-se que houve um aumento significativo no limiar nociceptivo em 24% no pico de hipernocicepção (6ª hora) dos animais que receberam MgCl2 durante 3 dias antes da injeção de carragenina, (p<0.001), um aumento em 56% no grupo com pré-tratamento com 5 dias (6ª hora) (p<0.001) e um aumento de 65% no grupo que recebeu o Mgcl2 por 7 dias. No grupo depletado de magnésio tivemos um aumento na resposta nociceptiva quando comparado com o limiar inicial, havendo uma diminuição de 18% (p<0,001) nesse limiar. Os animais deficientes de magnésio e injetados com carragenina apresentaram uma diminuição persistente no limiar de hipernocicepção. Também observou-se que o nível plasmático do magnésio foi significativamente maior em todos os grupos tratados, subindo até 154% no 7º dia, quando comparado aos valores basais, e na deficiência, os níveis de magnésio após 9 dias chegou a ser 27% menor, comparando com o controle. Foi avaliado também a expressão relativa a subunidades NR1, NR2 e NR3 do receptor NMDA, através da analise de RT-PCR, na qual verificamos um aumento na expressão dos subtipos NR1 e NR3 (p<0.05) e uma diminuição da NR2B (p<0.05) nos grupos que receberam a suplementação com MgCl2. Em relação aos animais deficientes de magnésio, esses não apresentaram mudança na subunidade NR2B, mas observou-se um aumento na subunidade NR1 e NR3 (p<0.05). Pelos achados de imunohistoquímica podemos sugerir que a deficiência de magnésio causou um aumentou na imuno-marcação da subunidade NR1 fosforilada tanto no grupo que recebeu salina intra-articular como no grupo que recebeu carragenina intra-articular. Já em relação ao parâmetro inflamatório de intensidade de influxo celular, observou-se um aumento significativo no número de células na 6ª , tendo uma diferença mais significativa na 12ª hora (p<0,01). Observamos, com esse estudo, que o receptor NMDA possui um efeito importante na nocicepção orofacial e que o magnésio é capaz de modular o comportamento nociceptivo e induz rearranjos nas subunidades desse receptor na região Sp5C. Este estudo levar à um melhor compreensão do processamento central da via nociceptiva trigeminal e o desenvolvimento de novas abordagens no tratamento da dor orofacial de origem da ATM.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Este estudio tuvo como finalidad lograr determinar el tipo de interacción entre ketorolaco y meloxicam por medio de la utilización de un ensayo algesiométrico térmico denominado tail-flick o test de la cola, en ratones. Una vez determinadas las curvas dosis-respuesta de ketorolaco y meloxicam, administrados por vía intraperitoneal, se obtuvieron las dosis efectivas que producen el 25% del efecto máximo DE25 para cada fármaco. Se administraron mezclas de proporciones fijas de 1/2, 1/4, 1/8 y 1/16 de las DE25 de cada droga para realizar el análisis isobolográfico, a través del cual se logra determinar que la coadministración genera una interacción de tipo aditiva. El pretratamiento de los animales con L-NAME, un antagonista de la enzima oxido nítrico sintasa, transformó la naturaleza de la interacción a una de tipo supraaditiva o sinérgica; esto demuestra la participación del sistema NO-GMPc en el mecanismo analgésico de la asociación ketorolaco- meloxicam. Al tratar los animales previamente con naltrexona, antagonista no selectivo de receptores opioides, también modificó la naturaleza aditiva de los fármacos a una supraaditiva o sinérgica; esto comprueba la participación, de una manera paradójica, del sistema opioide en el mecanismo de acción de esta asociación.

O Status epilepticus induzido por LiCl-pilocarpina causa uma massiva neurodegeneração em diversas regiões cerebrais, e a maioria dos fármacos antiepilépticos clássicos não são suficientemente eficazes para proteger os neurônios da morte. Antagonistas do receptor N-metil-D-aspartato apresentam ação anticonvulsiva e são atualmente capazes de proporcionar neuroprotecção contra a morte neuronal induzida pelo SE. No entanto, estes compostos demonstraram inúmeros efeitos colaterais. Apesar disso, a memantina, um antagonista NMDA de baixa afinidade, é clinicamente bem tolerada e não induz tantos efeitos indesejados. Portanto, o objetivo do presente estudo foi investigar o efeito neuroprotetor da memantina contra a degeneração neuronal induzida pelo status epilepticus induzido por LiCl-pilocarpina nos períodos iniciais da vida. Filhotes de ratos Wistar receberam memantina (20 mg / kg ip) em diferentes regimes de tratamento. A neurodegeneração foi quantificada por fluoro jade C. Em CA1 a neurodegeneração diminuiu significativamente quando os animais receberam memantina nos regimes de pós-tratamento realizados às 0 e 0,25 horas. Além disso, o pós-tratamento foi capaz de proteger contra a neurodegeneração em uma região da amígdala. O pré-tratamento com memantina mostrou uma redução da morte celular no tálamo. Nossos resultados demonstram o efeito neuroprotetor da memantina na morte neuronal induzida pelo SE no início da vida. Este efeito é dependente do tempo de tratamento e da região cerebral. / Status epilepticus induced by LiCl-pilocarpine is accompanied by neurodegeneration and the classical antiepileptic drugs are not effective in protect neurons from death. Typical N-methyl-D-aspartate receptor antagonists exhibit anticonvulsant action and are currently able to provide neuroprotection against SE-induced neuronal death. However, these compounds have demonstrated undesirable side effects. Despite this, memantine, a low-affinity NMDA antagonist, is clinically well tolerate and does not induce side effects. Therefore, the aim of the present study was to investigate the neuroprotective effect of the memantine against neuronal degeneration induced by early life LiCl-Pilocarpine-induced status epilepticus. Wistar pup rats received memantine (20 mg/kg i.p.) at different treatment regimens before and after SE induction. Neurodegeneration was quantified by fluoro jade C staining. In CA1 subfield neurodegeneration was significantly decreased when animals received memantine at 0h and 0.25h post-treatment regimens. Additionally, post-treatment was able to protect against neurodegeneration in amygdala region. Memantine pre-treatment showed a reduction of cell death in thalamus. Our results demonstrated the neuroprotective effect of memantine on neuronal loss induced by SE early in life. This effect was time- and region-dependent.

A hipertensão arterial é responsável por mais de 7 milhões de mortes prematuras em todo o mundo. Esta patologia é influenciada por diferentes sistemas pressores e depressores e a sua elevação resulta da perda do equílibrio entre estes fatores. A sinalização purinérgica tem sido apontada como um importante regulador da (pato)fisiologia cardiovascular. Na vasculatura, o ATP, o ADP e a adenosina podem influenciar as respostas vasomotoras, a ativação plaquetária e a função cardíaca, entre outros. No rim, estão associados à modulação da reatividade vascular e ao processo de retroalimentação tubuloglomerular. Os nucleotídeos exercem seus efeitos através dos receptores purinérgicos P2, subdivididos em P2X e P2Y, e a adenosina atua via ativação de quatro subtipos de receptores P1. As ectonucleotidases, atuando sob a forma de uma cascata enzimática, regulam a degradação dos nucleotídeos e a formação dos nucleosídeos. No presente trabalho, avaliamos a influência da hipertensão arterial induzida pela inibição crônica da produção de óxido nítrico sobre o sistema purinérgico vascular e renal de ratos. No primeiro capítulo, demonstramos que as hidrólises de ATP, ADP e AMP foram diminuídas em soro e plaquetas de ratos tratados com L-NAME (30 mg/Kg/dia por 14 dias). Entretanto, a medida dos níveis de purinas indicou uma diminuição nas concentrações de ADP, AMP e hipoxantina circulantes. O segundo capítulo mostrou que as hidrólises de ATP, ADP, AMP e 5’TMP foram aumentadas em membrana renal de ratos tratados com L-NAME, e estiveram acompanhadas por uma elevação significativa na expressão gênica das enzimas NTPDase2, NTPDase3 e NPP3. Os dados preliminares do capítulo III mostram que a hidrólise dos nucleotídeos em soro e sinaptossoma cardíaco de ratos fêmeas permaneceu inalterada nos animais tratados com LNAME (30 ou 50 mg/Kg/dia por 14 dias), sinalizando um possível dimorfismo sexual na resposta à hipertensão no que se refere à sinalização purinérgica. Os dados descritos em anexo no capítulo IV, os quais foram obtidos durante um estágio no exterior, descrevem a participação diferencial da NTPDase1 no controle do vasorelaxamento dependente dos receptores P2Y1 e P2Y2 em aortas de camundongos. O receptor P2Y1 foi facilmente desensibilizado em camundongos deficientes para a enzima, enquanto que o receptor P2Y2 mostrou-se menos suscetível à desensibilização. Finalmente, descrevemos a padronização de uma metodologia para a avaliação da participação dos purinoceptores endoteliais na vasodilatação dependente do conteúdo de plaquetas ativadas. Em conjunto, os dados desta Tese apontam que alguns parâmetros da sinalização purinérgica são alterados pelo modelo de hipertensão arterial induzida por L-NAME. Portanto, concluímos que esta sinalização pode representar mais um fator associado a ser considerado em uma terapia anti-hipertensiva e estudos adicionais são necessários para ratificar a utilização das terapias purinérgicas no contexto da hipertensão arterial. / Hypertension is responsible for more than 7 million deaths around the world. This pathology is influenced by different pressor and depressor systems, and its elevation results from the loss of equilibrium between these factors. The purinergic signaling has been implicated as an important regulator in the cardiovascular (patho)physiology. In the vasculature, ATP, ADP and adenosine may influence the vasomotor responses, platelet activation, cardiac function, among others. In the kidney, they are associated with the modulation of vascular reactivity and the tubuloglomerular feedback process. The nucleotides exert their effects through purinergic P2 receptors, subdivided into P2X and P2Y, and adenosine acts via activation of four subtypes of P1 receptors. The ectonucleotidases, acting as an enzyme cascade, regulate the degradation of nucleotides and the formation of nucleosides. In this study, we evaluated the influence of hypertension induced by chronic inhibition of nitric oxide synthesis on the vascular and renal purinergic system of rats. In the first chapter, we demonstrated that the hydrolysis of ATP, ADP and AMP were decreased in serum and platelets of rats treated with L-NAME (30 mg /Kg/day for 14 days). However, the measurement of purine levels indicated a decrease of circulating ADP, AMP and hypoxanthine. The second chapter has shown that the hydrolysis of ATP, ADP, AMP and 5'TMP were increased in renal membrane of rats treated with L-NAME, which were accompanied by a significant increase in gene expression of the enzymes NTPDase2, NTPDase3 and NPP3. Preliminary data of Chapter III show that the hydrolysis of nucleotides in serum and heart synaptosomes female rats remained unchanged in animals treated with L-NAME (30 or 50 mg / kg / day for 14 days), indicating a possible sexual dimorphism in regard to purinergic signaling in a hypertensive context. The data described in Annex of Chapter IV were obtained during a pre-doctoral training period abroad and describe the differential involvement of NTPDase1 in the control of vasorelaxation dependent of P2Y1 and P2Y2 receptors in mice aortas. The P2Y1 receptor was easily desensitized in mice deficient for the enzyme, whereas the P2Y2 was less susceptible to desensitization. Finally, we describe the standardization of a methodology for assessing the involvement of endothelial purinoceptors in the vasodilation dependent of activated platelets content. Together, the data from this thesis point out that some parameters of purinergic signaling are altered by the model of hypertension induced by L-NAME. Therefore, we conclude that purinergic signaling may represent another associated factor to be considered in an antihypertensive therapy and further studies are needed to confirm the use of purinergic therapies in the context of arterial hypertension.

O Status epilepticus induzido por LiCl-pilocarpina causa uma massiva neurodegeneração em diversas regiões cerebrais, e a maioria dos fármacos antiepilépticos clássicos não são suficientemente eficazes para proteger os neurônios da morte. Antagonistas do receptor N-metil-D-aspartato apresentam ação anticonvulsiva e são atualmente capazes de proporcionar neuroprotecção contra a morte neuronal induzida pelo SE. No entanto, estes compostos demonstraram inúmeros efeitos colaterais. Apesar disso, a memantina, um antagonista NMDA de baixa afinidade, é clinicamente bem tolerada e não induz tantos efeitos indesejados. Portanto, o objetivo do presente estudo foi investigar o efeito neuroprotetor da memantina contra a degeneração neuronal induzida pelo status epilepticus induzido por LiCl-pilocarpina nos períodos iniciais da vida. Filhotes de ratos Wistar receberam memantina (20 mg / kg ip) em diferentes regimes de tratamento. A neurodegeneração foi quantificada por fluoro jade C. Em CA1 a neurodegeneração diminuiu significativamente quando os animais receberam memantina nos regimes de pós-tratamento realizados às 0 e 0,25 horas. Além disso, o pós-tratamento foi capaz de proteger contra a neurodegeneração em uma região da amígdala. O pré-tratamento com memantina mostrou uma redução da morte celular no tálamo. Nossos resultados demonstram o efeito neuroprotetor da memantina na morte neuronal induzida pelo SE no início da vida. Este efeito é dependente do tempo de tratamento e da região cerebral. / Status epilepticus induced by LiCl-pilocarpine is accompanied by neurodegeneration and the classical antiepileptic drugs are not effective in protect neurons from death. Typical N-methyl-D-aspartate receptor antagonists exhibit anticonvulsant action and are currently able to provide neuroprotection against SE-induced neuronal death. However, these compounds have demonstrated undesirable side effects. Despite this, memantine, a low-affinity NMDA antagonist, is clinically well tolerate and does not induce side effects. Therefore, the aim of the present study was to investigate the neuroprotective effect of the memantine against neuronal degeneration induced by early life LiCl-Pilocarpine-induced status epilepticus. Wistar pup rats received memantine (20 mg/kg i.p.) at different treatment regimens before and after SE induction. Neurodegeneration was quantified by fluoro jade C staining. In CA1 subfield neurodegeneration was significantly decreased when animals received memantine at 0h and 0.25h post-treatment regimens. Additionally, post-treatment was able to protect against neurodegeneration in amygdala region. Memantine pre-treatment showed a reduction of cell death in thalamus. Our results demonstrated the neuroprotective effect of memantine on neuronal loss induced by SE early in life. This effect was time- and region-dependent.

A hipertensão arterial é responsável por mais de 7 milhões de mortes prematuras em todo o mundo. Esta patologia é influenciada por diferentes sistemas pressores e depressores e a sua elevação resulta da perda do equílibrio entre estes fatores. A sinalização purinérgica tem sido apontada como um importante regulador da (pato)fisiologia cardiovascular. Na vasculatura, o ATP, o ADP e a adenosina podem influenciar as respostas vasomotoras, a ativação plaquetária e a função cardíaca, entre outros. No rim, estão associados à modulação da reatividade vascular e ao processo de retroalimentação tubuloglomerular. Os nucleotídeos exercem seus efeitos através dos receptores purinérgicos P2, subdivididos em P2X e P2Y, e a adenosina atua via ativação de quatro subtipos de receptores P1. As ectonucleotidases, atuando sob a forma de uma cascata enzimática, regulam a degradação dos nucleotídeos e a formação dos nucleosídeos. No presente trabalho, avaliamos a influência da hipertensão arterial induzida pela inibição crônica da produção de óxido nítrico sobre o sistema purinérgico vascular e renal de ratos. No primeiro capítulo, demonstramos que as hidrólises de ATP, ADP e AMP foram diminuídas em soro e plaquetas de ratos tratados com L-NAME (30 mg/Kg/dia por 14 dias). Entretanto, a medida dos níveis de purinas indicou uma diminuição nas concentrações de ADP, AMP e hipoxantina circulantes. O segundo capítulo mostrou que as hidrólises de ATP, ADP, AMP e 5’TMP foram aumentadas em membrana renal de ratos tratados com L-NAME, e estiveram acompanhadas por uma elevação significativa na expressão gênica das enzimas NTPDase2, NTPDase3 e NPP3. Os dados preliminares do capítulo III mostram que a hidrólise dos nucleotídeos em soro e sinaptossoma cardíaco de ratos fêmeas permaneceu inalterada nos animais tratados com LNAME (30 ou 50 mg/Kg/dia por 14 dias), sinalizando um possível dimorfismo sexual na resposta à hipertensão no que se refere à sinalização purinérgica. Os dados descritos em anexo no capítulo IV, os quais foram obtidos durante um estágio no exterior, descrevem a participação diferencial da NTPDase1 no controle do vasorelaxamento dependente dos receptores P2Y1 e P2Y2 em aortas de camundongos. O receptor P2Y1 foi facilmente desensibilizado em camundongos deficientes para a enzima, enquanto que o receptor P2Y2 mostrou-se menos suscetível à desensibilização. Finalmente, descrevemos a padronização de uma metodologia para a avaliação da participação dos purinoceptores endoteliais na vasodilatação dependente do conteúdo de plaquetas ativadas. Em conjunto, os dados desta Tese apontam que alguns parâmetros da sinalização purinérgica são alterados pelo modelo de hipertensão arterial induzida por L-NAME. Portanto, concluímos que esta sinalização pode representar mais um fator associado a ser considerado em uma terapia anti-hipertensiva e estudos adicionais são necessários para ratificar a utilização das terapias purinérgicas no contexto da hipertensão arterial. / Hypertension is responsible for more than 7 million deaths around the world. This pathology is influenced by different pressor and depressor systems, and its elevation results from the loss of equilibrium between these factors. The purinergic signaling has been implicated as an important regulator in the cardiovascular (patho)physiology. In the vasculature, ATP, ADP and adenosine may influence the vasomotor responses, platelet activation, cardiac function, among others. In the kidney, they are associated with the modulation of vascular reactivity and the tubuloglomerular feedback process. The nucleotides exert their effects through purinergic P2 receptors, subdivided into P2X and P2Y, and adenosine acts via activation of four subtypes of P1 receptors. The ectonucleotidases, acting as an enzyme cascade, regulate the degradation of nucleotides and the formation of nucleosides. In this study, we evaluated the influence of hypertension induced by chronic inhibition of nitric oxide synthesis on the vascular and renal purinergic system of rats. In the first chapter, we demonstrated that the hydrolysis of ATP, ADP and AMP were decreased in serum and platelets of rats treated with L-NAME (30 mg /Kg/day for 14 days). However, the measurement of purine levels indicated a decrease of circulating ADP, AMP and hypoxanthine. The second chapter has shown that the hydrolysis of ATP, ADP, AMP and 5'TMP were increased in renal membrane of rats treated with L-NAME, which were accompanied by a significant increase in gene expression of the enzymes NTPDase2, NTPDase3 and NPP3. Preliminary data of Chapter III show that the hydrolysis of nucleotides in serum and heart synaptosomes female rats remained unchanged in animals treated with L-NAME (30 or 50 mg / kg / day for 14 days), indicating a possible sexual dimorphism in regard to purinergic signaling in a hypertensive context. The data described in Annex of Chapter IV were obtained during a pre-doctoral training period abroad and describe the differential involvement of NTPDase1 in the control of vasorelaxation dependent of P2Y1 and P2Y2 receptors in mice aortas. The P2Y1 receptor was easily desensitized in mice deficient for the enzyme, whereas the P2Y2 was less susceptible to desensitization. Finally, we describe the standardization of a methodology for assessing the involvement of endothelial purinoceptors in the vasodilation dependent of activated platelets content. Together, the data from this thesis point out that some parameters of purinergic signaling are altered by the model of hypertension induced by L-NAME. Therefore, we conclude that purinergic signaling may represent another associated factor to be considered in an antihypertensive therapy and further studies are needed to confirm the use of purinergic therapies in the context of arterial hypertension.

O Status epilepticus induzido por LiCl-pilocarpina causa uma massiva neurodegeneração em diversas regiões cerebrais, e a maioria dos fármacos antiepilépticos clássicos não são suficientemente eficazes para proteger os neurônios da morte. Antagonistas do receptor N-metil-D-aspartato apresentam ação anticonvulsiva e são atualmente capazes de proporcionar neuroprotecção contra a morte neuronal induzida pelo SE. No entanto, estes compostos demonstraram inúmeros efeitos colaterais. Apesar disso, a memantina, um antagonista NMDA de baixa afinidade, é clinicamente bem tolerada e não induz tantos efeitos indesejados. Portanto, o objetivo do presente estudo foi investigar o efeito neuroprotetor da memantina contra a degeneração neuronal induzida pelo status epilepticus induzido por LiCl-pilocarpina nos períodos iniciais da vida. Filhotes de ratos Wistar receberam memantina (20 mg / kg ip) em diferentes regimes de tratamento. A neurodegeneração foi quantificada por fluoro jade C. Em CA1 a neurodegeneração diminuiu significativamente quando os animais receberam memantina nos regimes de pós-tratamento realizados às 0 e 0,25 horas. Além disso, o pós-tratamento foi capaz de proteger contra a neurodegeneração em uma região da amígdala. O pré-tratamento com memantina mostrou uma redução da morte celular no tálamo. Nossos resultados demonstram o efeito neuroprotetor da memantina na morte neuronal induzida pelo SE no início da vida. Este efeito é dependente do tempo de tratamento e da região cerebral. / Status epilepticus induced by LiCl-pilocarpine is accompanied by neurodegeneration and the classical antiepileptic drugs are not effective in protect neurons from death. Typical N-methyl-D-aspartate receptor antagonists exhibit anticonvulsant action and are currently able to provide neuroprotection against SE-induced neuronal death. However, these compounds have demonstrated undesirable side effects. Despite this, memantine, a low-affinity NMDA antagonist, is clinically well tolerate and does not induce side effects. Therefore, the aim of the present study was to investigate the neuroprotective effect of the memantine against neuronal degeneration induced by early life LiCl-Pilocarpine-induced status epilepticus. Wistar pup rats received memantine (20 mg/kg i.p.) at different treatment regimens before and after SE induction. Neurodegeneration was quantified by fluoro jade C staining. In CA1 subfield neurodegeneration was significantly decreased when animals received memantine at 0h and 0.25h post-treatment regimens. Additionally, post-treatment was able to protect against neurodegeneration in amygdala region. Memantine pre-treatment showed a reduction of cell death in thalamus. Our results demonstrated the neuroprotective effect of memantine on neuronal loss induced by SE early in life. This effect was time- and region-dependent.