A hipermetioninemia ocorre em muitas doenças metabólicas, dentre elas, na deficiência da enzima metionina adenosiltransferase e na homocistinúria. Pacientes afetados por essas doenças podem apresentar alterações neurológicas e hepáticas; entretanto, os mecanismos responsáveis por essas manifestações não estão totalmente elucidados. No presente trabalho inicialmente avaliamos o efeito in vitro da metionina sobre a atividade da Na+,K+-ATPase e sobre alguns parâmetros de estresse oxidativo em hipocampo de ratos. Resultados mostraram que a pré-incubação de homogeneizados de hipocampo com metionina diminuiu a atividade da Na+,K+-ATPase e que antioxidantes (glutationa e trolox) preveniram esse efeito. Verificou-se também que a metionina diminuiu o potencial antioxidante total não enzimático (TRAP), aumentou a lipoperoxidação (medida pela quantidade de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico – TBARS e pela quimiluminescência) e não alterou a atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT), glutationa peroxidase (GSH-Px) e superóxido dismutase (SOD). A seguir, desenvolvemos um modelo químico experimental de hipermetioninemia em ratos, a fim de estudar e melhor compreender os mecanismos fisiopatológicos dessa doença. Utilizando esse modelo, verificamos diversos parâmetros bioquímicos cerebrais, como a atividade da Na+,K+-ATPase e da acetilcolinesterase, alguns parâmetros de estresse oxidativo, o conteúdo lipídico total, bem como o aprendizado e a memória em ratos submetidos à tarefa do labirinto aquático de Morris. Também avaliamos parâmetros de estresse oxidativo em fígado de ratos hipermetioninêmicos. O modelo crônico de hipermetioninemia foi realizado do 6o ao 28o dia de vida e as doses de metionina administradas variaram de 1,34 a 2,68 mmol/g de peso corporal. Os ratos controles receberam solução salina no mesmo volume. As concentrações plasmáticas obtidas foram de 2 mmol/L, similares àquelas encontradas no plasma de pacientes hipermetioninêmicos. Os níveis cerebrais de metionina foram de aproximadamente 1 mmol/g de tecido. No tratamento agudo, ratos de 29 dias receberam uma injeção de metionina, na dose VIII de 2,68 mmol/g de peso corporal. Os resultados mostraram que a hipermetioninemia aguda e crônica aumentou o TBARS e reduziu a Na+,K+- ATPase em cérebro de ratos. A hipermetioninemia crônica reduziu o conteúdo total de gangliosídios, fosfolipídios e colesterol, e não alterou a CAT e o conteúdo tiólico total em cérebro de ratos. Também observamos que a administração crônica de metionina provocou um déficit na memória de trabalho e um aumento na atividade da acetilcolinesterase cerebral. Por outro lado, a administração aguda de metionina não alterou a atividade dessa enzima em cérebro de ratos. Por fim, demonstramos que a hipermetioninemia crônica aumentou a quimiluminescência, o conteúdo de carbonilas e a atividade da GSH-Px, e diminuiu o TRAP e a atividade da CAT em fígados de ratos. Em contraste, não houve alteração nos níveis de TBARS, TAR, conteúdo tiólico total e na atividade da SOD em fígado de ratos. Nossos achados, em conjunto, poderão auxiliar na compreensão das alterações neurológicas e hepáticas observadas em pacientes hipermetioninêmicos. / Hypermethioninemia is the biochemical hallmark of many metabolic disorders, such as methionine adenosyltransferase activity deficiency and homocystinuria. Affected patients can present neurological and hepatic alterations, whose underlying mechanisms are not yet fully established. In the present work, we evaluated the in vitro effect of methionine on Na+,K+-ATPase activity and some parameters of oxidative stress in hippocampus of rats. Results showed that incubation of homogenates of hippocampus with methionine diminished Na+,K+- ATPase activity and that simultaneous incubation with some antioxidants, such as glutathione and trolox prevented this effect. We also demonstrated that methionine decreased total radical antioxidant potential (TRAP), increased thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) e chemiluminescence (both are markers of lipid peroxidation), but did not alter the activities of antioxidant enzymes catalase (CAT), glutathione peroxidase (GSH-Px) and superoxide dismutase (SOD) in hippocampus of rats. Afterwards, considering that animal models are useful to better understand the physiopathology of human diseases, we developed a chemically induced experimental model of hypermethioninemia in rats. By using this model, we verified many biochemical parameters, as Na+,K+-ATPase and acetylcholinesterase activities, some oxidative stress parameters, total lipid content, as well as learning and memory in rats on Morris water maze task. We also determined the effect chronic hypermethioninemia on some parameters of oxidative stress in liver of rats. Chronic hypermethioninemia was performed from the 6th to the 28th day of life and methionine doses administered (1.34–2.68 mmol/g of body weight) were chosen in order to induce plasma levels similar to those described in hypermethioninemic patients (around to 2 mmol/L). By this treatment, we also produced high levels of methionine (approximately 1 mmol/g wet tissue) in brain of rats. Control rats received saline in the same volumes. In acute treatment, 29-day-old rats received one single injection of methionine (2.68 mmol/g of body weight). Results showed that acute and chronic administration of methionine X enhanced TBARS levels and decreased Na+,K+-ATPase activity in brain of rats. Chronic hypermethioninemia reduced total content of gangliosides, phospholipids and cholesterol, but did not change CAT activity and total thiol content brain of rats. We also observed that methionine-treated rats presented impaired performance on working memory task and an increase in brain acetylcholinesterase activity. On the other hand, acute administration did not alter this enzyme activity. Finally, we demonstrated that chronic hypermethioninemia increased chemiluminescence, protein carbonyl content and GSH-Px activity, and decreased TRAP and CAT activity in liver of rats. In contrast, TBARS, TAR, total thiol content and SOD activity were not affected by methionine administration in liver of rats. Altogether, our findings may be helpful in the understanding of the neurological and hepatic alterations observed in hypermethioninemic patients.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-04T18:29:30Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 373150 bytes, checksum: 5bfb0cd00551905e3ef1b3fb7ed73f96 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-04T18:29:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 373150 bytes, checksum: 5bfb0cd00551905e3ef1b3fb7ed73f96 (MD5) Previous issue date: 2000-11-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Experimentos foram conduzidos para estudar níveis de metionina + cistina e de lisina em dietas de matrizes pesadas de 40 a 60 semanas de idade. As dietas basais foram formuladas para atender, no mínimo, às recomendações nutricionais para matrizes pesadas preconizadas pelo NRC (1994) para todos os nutrientes exceto, para metionina+cistina ou para lisina. Na determinação das exigências de metionina+cistina, os tratamentos consistiram de rações isocalóricas e isoprotéicas (2.850 kcal EM/kg e 12,58% PB), contendo diferentes níveis de metionina+cistina, obtidos a partir da ração basal, suplementada com DL-metionina (98%), resultando em um total de 0,390, 0,470, 0,550, 0,630, 0,710 e 0,790% de metionina+cistina nas dietas. Na determinação das exigências em lisina, os tratamentos consistiram de rações isocalóricas e isoprotéicas (2.850 kcal EM/kg e 14,44% PB), contendo diferentes níveis de lisina, obtidos a partir da ração basal, suplementada com seis níveis de L-lisina.HCL (78%), resultando em um total de 0,400, 0,494, xix0,588, 0,682, 0,776 e 0,870% de lisina nas dietas. Foi fornecida diariamente uma quantidade fixa de ração (155 g por ave). A água foi fornecida ad libitum. As exigências para metionina+cistina totais foram estimadas em 0,521% (808 mg/ave/dia), para porcentagem de ovos produzidos e número de ovos por ave no período e em 0,515% (799 mg/ave/dia), para número de ovos por ave alojada. Para o período total estudado, as exigências em lisina foram estimadas em 0,607% (941 mg/ave/dia), para porcentagem de ovos produzidos e para número médio de ovos por ave no período, sendo o valor estimado de 0,677% (1.050 mg/ave/dia) para número médio de ovos por ave alojada. Os parâmetros de eclosão foram mais sensíveis aos níveis de lisina utilizados nas rações das matrizes pesadas do que aos níveis de metionina+cistina, sendo as exigências nutricionais por lisina total estimadas em 964 mg/ave/dia (0,622%), para o parâmetro peso dos pintos eclodidos, e 1.059 mg/ave/dia (0,683%), para o porcentual de eclodibilidade. A exigência em lisina para maximizar o peso dos pintos eclodidos foi superior às exigências para os parâmetros de produção de ovos. Os níveis de metionina+cistina e de lisina utilizados para matrizes pesadas podem interferir nos parâmetros de desempenho da progênie aos 21 dias de idade. Foram estimados os níveis de 0,610 e 0,645% de metionina+cistina como adequados para rações das matrizes, considerando, respectivamente, os pesos vivos de frangos machos e fêmeas aos 21 dias de idade. Estimaram-se como adequados os níveis de lisina nas rações das matrizes de 0,640% e 0,756%, respectivamente, para maior ganho de peso de frangos machos e fêmeas aos 21 dias de idade, e o nível de 0,641% de lisina, considerando a conversão alimentar dos frangos machos. Em rações de matrizes pesadas, com níveis protéicos de 12,58 e 14,44% de proteína bruta, os incrementos no conteúdo de metionina+cistina e lisina na dieta resultaram em aumento na retenção do nitrogênio. Os níveis de proteínas totais e albumina plasmáticas foram alterados pelos níveis de metionina+cistina e lisina utilizados, entretanto os valores de ácido úrico, globulinas e relação albumina/globulina foram alterados somente pelas variações impostas nos níveis de lisina. / Experiments have been conducted to determine the methionine+cystines and lysine requirements for broiler breeder hens from 40 to 60 weeks of age. Basal diets were formulated to take care of, at least, the NRC (1994) nutritional recommendations for broiler breeder hens of all nutrients except methionine+cystine or lysine. When determining the methionine+cystine requirements, the treatments involved the use of isocaloric and isoprotein diets (2,850 kcal EM/kg and 12.58% PB), with different methionine+cystine levels, taken from the basal ration and supplemented with DL-Methionine (98%). This resulted in dietary methionine+cystine levels of 0.390, 0.470, 0.550, 0.630, 0.710, and 0.790%. When determining the lysine requirements, the treatments involved the use of isocaloric and isoprotein diets (2850kcal EM/kg and 14,44% PB), with different lysine levels, taken from the basal ration and supplemented with L-Lysine.HCL (78%). This resulted in dietary lysine levels of 0.400, 0.494, 0.588, 0.682, 0.776, and 0.870%. A fixed xxiamount of 155 g per bird was given daily. Water was supplied ad libitum. The total methionine+cystine requirement was estimated at 0.521% (808 mg/hen/day) for both egg production percentage and number of eggs per bird in a period, and at 0.515% (799 mg/hen/day) for number of eggs per lodged hen. The lysine requirements, for the total studied period, were estimated at 0.607% (941 mg/hen/day) for both egg production percentage and average number of eggs per hen during a period, and at 0.677% (1,050 mg/hen/day) for the average number of eggs per lodged hen. The hatchability parameters were found to be more sensible with respect to the lysine level requirements of broiler breeder hens compared to the methionine+cystine levels requirements. The daily lysine nutritional requirement was estimated at 964 mg per hen (0.622%) for a specified chicken weight and 1,059 mg per hen (0.683%) for hatchability percentage. The lysine requirement to maximize a chicks weight was higher than that required for egg production. The methionine+cystine and lysine levels for broiler breeder hens can intervene with the offspring performance parameters at 21 days of age. Methionine+cystine levels of 0.610% and 0.645% were estimated, adjusting the hens rations when considering, respectively, male and female chicken body weights at 21 days of age. The lysine levels in the hens rations were estimated as adequate at 0.640% and 0.756%, respectively, for the bigger female and male chickens weight increase at 21 days of age, and a lysine level of 0.641% when considering the male chicken feed conversion. In broiler breeder hens diets, with crude protein levels between 12.58% and 14.44%, the increasing lysine and methionine+cystine content of the diet, resulted in increased nitrogen retention. The total plasmatic proteins and albumin levels were found to be modified by the methionine+cystine and lysine levels, however, the uric acid, globulins and albumin/globulin ratio values were found to be modified only by the variations imposed in the lysine levels.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-06T13:54:23Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1465057 bytes, checksum: f4df75f66e05c671f3b3544cdf83a565 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-06T13:54:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1465057 bytes, checksum: f4df75f66e05c671f3b3544cdf83a565 (MD5) Previous issue date: 2002-06-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Nove experimentos foram realizados no Departamento de Zootecnia da UFV, a fim de avaliar as exigências de metionina + cistina digestível, treonina digestível e arginina digestível e calcular a relação destes aminoácidos com a lisina nas fases de 1 a 20, 24 a 38 e 44 a 56 dias de idade. Cinco níveis de cada aminoácido foram utilizados para cada fase. No estudo de metionina + cistina digestível, as concentrações foram 0,731-0,916% (incremento de 0,046), 0,712- 0,881% (incremento de 0,042) e 0,631-0,781% (incremento de 0,037) para as fases de 1-20, 24-38 e 44-56 dias de idade, respectivamente. Os níveis para a treonina digestível foram de 0,684-0,870% (incremento de 0,047), 0,637-0,807% (incremento de 0,043) e 0,565-0,715 (incremento de 0,037) para os mesmos períodos, (incremento respectivamente, de 0,061), enquanto 1,083-1,296 para arginina (incremento digestível, de 0,053) de 1,10-1,34 e 0,96-1,148 (incremento de 0,047), como realizado nos experimentos anteriores. No estudo de metionina + cistina, houve efeito linear positivo para ganho de peso e quadrático para conversão alimentar, na fase de 1 a 20 dias de idade. O nível de metionina + cistina digestível (total), estimado na fase de 1 a 20 dias de idade, foi de 0,808% (0,907% total), correspondente a uma relação metionina + cistina:lisina digestível de 70%, de acordo com os resultados de conversão alimentar e utilização do modelo descontínuo. Houve efeito quadrático para ganho de peso, conversão alimentar e peso absoluto da perna, na fase de 24 a 38 dias de idade, para o estudo de metionina + cistina. O nível de metionina + cistina digestível (total) estimado na fase de 24 a 38 foi de 0,767% (0,844% total), correspondente a uma relação metionina + cistina:lisina de 72%, de acordo com os resultados de ganho de peso e o modelo descontínuo. Não houve efeito dos níveis de metionina + cistina, na fase de 44 a 56 dias de idade, sobre as características de desempenho, entretanto o peso absoluto do file teve efeito quadrático. O valor de exigência de metionina + cistina digestível (total), estimado para a fase de 44 a 56 dias de idade, foi de 0,668% (0,738% total), correspondente a uma relação de 71%, de acordo com a melhor resposta biológica e zootécnica. No estudo de treonina, houve efeito quadrático para consumo de ração e ganho de peso na fase de 1 a 20 dias de idade. A exigência de treonina digestível (total) na fase de 1 a 20 dias de idade foi de 0,777% (0,890% total), correspondente a uma relação treonina:lisina de 67%, de acordo com os resultados de ganho de peso e modelo descontínuo. Não houve efeito dos níveis de treonina sobre as características de desempenho, sugerindo que o nível de treonina digestível (total) de 0,637 (0,731% total), correspondente a uma relação de 60%, foi suficiente para maximizar o desempenho na fase de 24 a 38 dias de idade. Observaram-se efeitos quadrático e linear dos níveis de treonina digestível sobre o peso absoluto do file e o peso absoluto da perna, respectivamente, na fase de 24 a 38 dias de idade. Não houve efeito dos níveis de treonina sobre as características de desempenho e cortes nobres na fase de 44 a 56 dias de idade, sugerindo que o nível de treonina digestível (total) de 0,565% (0,650% total), correspondente a uma relação de 60%, foi suficiente para maximizar o desempenho na fase de 44 a 56 dias. No estudo de arginina, houve efeito quadrático para ganho de peso e conversão alimentar na fase de 1 a 20 dias de idade. O valor de exigências de arginina digestível (total), estimado na fase de 1 a 20 dias de idade, foi de 1,22% (1,31% total), correspondendo a uma relação arginina:lisina digestível de 105%, de acordo com os resultados de ganho de peso e o modelo descontínuo. Não houve efeito dos níveis de arginina sobre as características de desempenho e cortes nobres, sugerindo que o nível de arginina digestível (total) de 1,083 (1,155% total), correspondente a uma relação de 102%, foi suficiente para maximizar o desempenho na fase de 24 a 38 dias. No período de 44 a 56 dias, não houve efeito dos níveis de arginina digestível sobre as características de desempenho e cortes nobres, sugerindo que o nível de treonina digestível (total) de 0,960% (1,026% total), correspondente a uma relação de 102%, foi suficiente para maximizar o desempenho. / Nine experiments were conducted at the Department of Animal Science of UFV, to evaluate the digestible methionine + cystine, threonine and arginine requirement from 1 to 20, 24 to 38 and 44 to 56 days old. Five levels of each amino acid were used per phase. In the study of digestible methionine + cystine, the concentrations were 0.731-0.916% (increase of 0.046); 0.712-0.881% (increase of 0.042) and 0.631-0.781% (increase of 0.037) for 1-20, 24-38 and 44- 56 days old respectively. Those for digestible threonine were 0.684-0.870% (increase of 0.047); 0.637-0.807% (increase of 0.043); and 0.565-0.715 (increase of 0.037) for the same respective phases. Those for digestible arginine were 1.10- 1.34 (increase of 0.061); 1.083-1.296 (increase of 0.053); and 0.96-1.148 (increase of 0.047) as performed in the previous experiments. Weight gain and feed conversion responded linearly and quadratically, respectively, to increase levels of digestible methionine. Using the broken line model, the requirement of digestible methionine + cystine (total) and the ratio of digestible methionine + cystine:lysine for the phase 1-20 days old are 0.808 (0.907% total) and 70%, respectively, according to the results of feed conversion. For the phase 24-38 xviidays old, weight gain, feed conversion rate and absolute leg quarter weight responded quadratically to increasing levels of digestible methionine. Using the broken line model, the requirement of digestible methionine + cystine (total) and the ratio of digestible methionine + cystine:lysine for the phase 24-38 days old were 0.767 (0.844% total) and 72%, respectively, according to the results of body weight gain. The absence of significant response for body weight gain and feed conversion in the third phase (44-56 days) shows that the lowest level of methionine + cystine met the birds requirement. Nevertheless, according to the best biological response the digestible (total) methionine + cystine requirement and ratio were .668% (.738% total) and 71%, respectively. The methionine + cystine quadratically affected breast fillet absolute weight. The absence of statistical difference in the second and third In the study of threonine (phase 1-20), feed consumption and body weight gain responded quadratically to increasing levels of digestible threonine. Using the broken line model, the digestible (total) threonine requirement and the digestible threonine:lisine ratio were .777 (.890 total) and 67%, respectively, according to the results of body weight gain. The absence of significant response for body weight gain and feed conversion in the second phase (24-38 days) shows that the lowest level of threonine met the birds requirement, therefore the digestible (total) threonine requirement and ratio were .637% (.731% total) and 60%, respectively. Breast meat fillet absolute weight and leg quarter absolute weight responded quadratically and linearly, respectively with the increase of the threonine level in second phase (24-38). The absence of significant response for body weight gain, feed conversion and the absolute weight of the breast meat, fillet and leg quarter in the third phase (44-56 days) shows that the lowest level of methionine + cystine met the birds requirement, therefore the digestible (total) threonine requirement and ratio to maximize the performance were .565 (.650% total) and 60%, respectively. In the study of arginine, body weight gain and feed conversion responded quadratically to increasing levels of digestible arginine in the first phase. Using the broken line model, the requirement of digestible arginine (total) and the ratio of digestible xviiiarginine:lysine for the first phase were 1.22% (1.31% total) and 105%, respectively, according to the results of body weight gain. The absence of statistical difference in the second and third phases (24-38 days old and 44-56 days old, respectively), showed that the lowest level of digestible (total) arginine of 1.083% (1.155% total) and .960% (1.026) met the birds requirement. These levels corresponded to a ratio of 102% in both phases.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-07T18:10:26Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 490335 bytes, checksum: e278c6621a56cc52fd41ef122a90a895 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-07T18:10:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 490335 bytes, checksum: e278c6621a56cc52fd41ef122a90a895 (MD5) Previous issue date: 2003-07-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Foram utilizados 1280 frangos de corte machos Avian Farms em quatro experimentos montados em delineamento inteiramente casualisado (experimento 1 – 400 pintinhos no período de 1 a 21 dias de idade, mantidos em ambiente termoneutro; experimento 2 - 400 pintinhos no período de 1 a 21 dias de idade, mantidos em estresse por calor; experimento 3 – 240 frangos de corte no período de 22 a 42 dias de idade, mantidos em ambiente termoneutro; experimento 4 – 240 frangos de corte no período de 22 a 42 dias de idade, mantidos em estresse por calor). As rações experimentais foram formuladas à base de milho e farelo de soja, suplementadas com vitaminas e minerais. Os experimentos 1 e 2 tiveram cinco tratamentos (0,756; 0,810; 0,866; 0,920; 0,976% de met + cis), oito repetições e dez aves por unidade experimental, com peso inicial médio de 47,8 e 48,5 g, respectivamente. No experimento 1, o aumento do nível de met + cis influenciou positivamente o ganho de peso (GP), a conversão alimentar (CA), o consumo de met + cis, a deposição de proteína, o peso absoluto do fígado, da moela, dos pulmões e o peso relativo dos pulmões. Não foi verificado efeito dos níveis de met + cis sobre o consumo de ração (CR), sobre o peso absoluto do coração e do intestino, nem sobre o peso relativo do coração, do fígado, da moela, do proventrículo e do intestino. O nível de 0,866% de met + cis total (0,790% de met + cis digestível calculado), correspondente à relação met + cis/lis total de 69% (72% para digestível), proporcionou o melhor GP; enquanto o nível de 0,894% de met + cis total (0,822% digestível calculado), correspondente a relação met + cis/lis total de 72% (74% para digestível), proporcionou maior deposição de proteína (DP) na carcaça de pintos de corte mantidos em ambiente termoneutro. No experimento 2 não foi verificado efeito do nível de aminoácidos sulfurados na ração sobre o GP, CR, DP e gordura (DG) na carcaça, peso absoluto dos órgãos avaliados e sobre o peso relativo do coração, fígado e moela. O nível de 0,866% de met + cis total (0,792% met + cis digestível calculado), correspondente à relação met + cis/lis total de 69% (72% para digestível), proporcionou a melhor CA dos pintos de corte mantidos em estresse de calor. Os experimentos 3 e 4 tiveram cinco tratamentos (0,659; 0,704; 0,750; 0,796; 0,841% de met + cis), seis repetições e oito aves por unidade experimental, com peso inicial médio de 826 g nos dois ambientes térmicos. No experimento 3, o aumento do nível de met + cis influenciou positivamente a CA, o consumo de met + cis, o peso absoluto da coxa e o peso relativo da sobrecoxa. Não foi verificado efeito dos níveis de met + cis sobre o peso final, GP, CR, peso absoluto e relativo do peito, da carcaça, gordura abdominal, peso absoluto da sobrecoxa, e peso relativo da coxa, assim como para o peso absoluto e relativo dos órgãos avaliados. O nível de 0,727% de met + cis total (0,661% met + cis digestível calculado), correspondente a relação met + cis/lis total de 70% (72% para digestível), proporcionou melhor CA frangos de corte mantidos em ambiente de alta temperatura. No experimento 4, o nível de met + cis n i fluenciou positivamente a CA, o consumo de met + cis, o peso absoluto de peito, coxa e sobrecoxa e o peso relativo de peito e sobrecoxa. Não foi verificado efeito dos níveis de met + cis sobre o GP, CR, peso absoluto e relativo de carcaça e gordura abdominal e peso relativo da coxa; assim como para o peso absoluto e relativo dos órgãos avaliados. O nível de 0,774% de met + cis total (0,708% met + cis digestível calculado), correspondente à relação met + cis/lis total de 74% (78% para digestível), proporcionou a melhor CA; enquanto o nível de 0,841% de met + cis total (0,775% digestível calculado), correspondente à relação met + cis/lis total de 81% (85% para relação met + cis/lis digestível), proporcionou o maior peso absoluto e relativo de peito dos frangos de corte mantidos em estresse por calor. / Four experiments with 1280 male broilers Avian Farms were conducted in a randomized experimental design (experiment 1 – 400 broilers chicks from 1 to 21 day old kept in thermoneutral environment; experiment 2 – 400 male broilers from 1 to 21 day old kept in heat stress; experiment 3 – 240 broilers chicks from 22 to 42 day old, kept in thermoneutral environment; experiment 4– 240 broilers chicks from 22 to 42 day old kept in heat stress. The experimental diets were formulated in base of corn and wheat meal supplemented with vitamins and minerals. The experiment 1 and 2 had five treatments (0.756; 0.810; 0.866; 0.920; 0.976% of met + cys), eight repetitions and ten birds per experimental unit, with an average initial weight of 47.8 and 48.5 g, respectively. In the experiment 1 the increase of met + cys level influenced positively weight gain (WG), feed:gain ratio (F/G), met + cys intake, protein deposition, liver, gizzard and lung absolute weight, and lung relative weight. No effect of met + cys levels was verified on feed intake (FI), heart and intestine absolute weight, or relative weight of heart, liver, gizzard, proventriculus, lung and intestines. The level of 0.866% of total met + cys (0.790% digestible met + cys calculated), corresponding to the ratio met + cys/total lys of 69% (72% for digestible) xishowed the best WG, whereas the level 0.894% total met + cys (0.822% digestible calculated), corresponding to the ratio met + cys/ digestible lys total of 72% (74% for the digestible met + cys/ lys ratio), showed the highest carcass protein deposition for broiler chicks kept in thermoneutral environment. In the experiment 2 was not verified effect of the levels of sulphur amino acids in the diets on the WG, F/G, PD and fat in the carcass, absolute weight of the evaluated organs and on relative weight of heart, liver and gizzard. The level 0.866% total met + cys (0.792% digestible met + cys calculated), corresponding to the total met + cys/ lys ratio of 69% (72% for digestible) gave the best F/G for broiler chicks kept under heat stress. The experiments 3 and 4 had five treatments (0.659; 0.704; 0.750; 0.796; 0.841% of met+cys) six repetitions and eight birds per experimental unit, with an average initial weight of 826 g in both thermal environments. In the experiment 3 the increase of the level of met + cys influenced positively the F/G, the met + cys intake, the absolute weight of drum stick and the relative weight of thigh. No effect of met + cys levels was verified on the final weight, weight gain, feed intake, breast, carcass and abdominal fat absolute . No effect of treatments was verified on relative weight, thigh absolute weight, and drumstick relative weight, or for relative and absolute weight of the evaluated organs (heart, liver, gizzard, proventriculus, lung and intestines). The level 0.727% met + total cys (0.661% met + digestible cys calculated) corresponding to the total met + cys/lys ratio of 70% (72% for digestible) showed the best F/G for broilers kept in thermoneutral environment. In the experiment 4 met + cys levels influenced positively F/G, met + cys intake, breast, drumstick and thigh absolute weigh, and breast and thigh relative weight. No effect of met + cys levels was verified on the weight gain, feed intake, carcass and abdominal fat absolute and relative weight, thigh relative weight, or for relative and absolute weight of the evaluated organs (heart, liver, gizzard, pro ventriculus, lung and intestines). The level 0.774% met + total cys (0.708% digestible met + cys calculated), corresponding to the total met + cys/ lys ratio of 74% (78% for digestible) gave the best F/G, whereas the level 0.841 total met + cys (0.775% digestible calculated), corresponding to the ratio met + cys/ digestible lys total of 81% (85% for the digestible met + cys/ lys xiiratio), showed the highest breast absolute and relative weight for broilers kept under heat stress.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-18T12:49:32Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 250173 bytes, checksum: 221e873bfb54b56bb74c4f61ac85343a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-18T12:49:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 250173 bytes, checksum: 221e873bfb54b56bb74c4f61ac85343a (MD5) Previous issue date: 2004-02-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Três experimentos foram conduzidos no setor de Avicultura do Departamento de Zootecnia, da UFV, com o objetivo de determinar as exigências nutricionais de lisina, de metionina+cistina e de treonina para poedeiras leves e semipesadas no período de 34 a 50 semanas de idade. Foram utilizadas 600 poedeiras Lohmann e 600 poedeiras Lohmann Brown, submetidas a diferentes rações basais suplementadas com cinco níveis crescentes dos aminoácidos em estudo. Foi utilizado um esquema fatorial 5 x 2, sendo cinco níveis de aminoácidos e duas linhagens de aves, com seis repetições por tratamento e seis aves por unidade experimental; com exceção do teste com treonina em que foram utilizadas oito repetições; num delineamento experimental inteiramente casualizado. Foram avaliados a produção de ovos (%), a massa e peso médio dos ovos (g), o consumo de ração (g/ave/dia), a conversão alimentar (kg de ração/dúzia de ovos), a mudança de peso corporal (g) e a qualidade interna dos ovos (unidade Haugh e índices de gema e albúmen). No experimento 1, a exigência em lisina digestível estimada pelo modelo quadrático foi para as aves leves de 0,732% na ração, a qual corresponde ao consumo diário por ave de 823 mg de lisina. Para as poedeiras semipesadas foi de 0,715% na ração, o equivalente ao consumo de 804 mg de lisina/ave/dia. No experimento 2, a exigência em metionina+cistina digestível estimada pelo modelo quadrático, para as poedeiras leves foi de 0,693% na ração, a qual corresponde ao consumo diário por ave de 825 mg de aminoácidos sulfurosos. Para as aves semipesadas foi de 0,692% na ração, o equivalente ao consumo de 793 mg de metionina+cistina/ave/dia. No experimento 3, a exigência em treonina digestível determinada pelo modelo quadrático para as poedeiras leves foi de 0,510% na ração, a qual corresponde ao consumo diário por ave de 583 mg de treonina. Para as poedeiras semipesadas foi de 0,517% na ração, o equivalente ao consumo de 575 mg de treonina/ave/dia. / Tree experiments were carried out in the Animal Science Department at the Federal University of Viçosa. The objective was to determine the nutritional demand of lysine, methionine+cistine and threonine for light and semi-heavy weight laying hens, during a period of 34 to 50 weeks of age. It was used 600 Lohmann and 600 Lohmann Brown laying hens which were subjected to a different basal diets supplemented with five levels of the digestible aminoacids on trail. The test was arranged in completely randomized design in a factorial experiment (5 x 2) with the treatments consisting of two egg laying strains and five aminoacids supplementation levels, six replications and six hens per experimental unit, except for the threonine test witch has eight replications. The following parameters were evaluated: egg production (%), egg mass yield and egg weight (g), feed intake (g/hen/day), feed conversion (kg feed /egg dozen), weight gain (g) and egg quality (Haugh Units, albumen and yolk Indices). The digestible lysine requirement estimated by the quadratic model was 0.732 and 0.715% in the diet, corresponding to intake per hen per day of 823 and 804 mg of lysine/day, for the light and the semi-heavy laying hens, respectively. The digestible methionine+cistine requirement estimated by the quadratic model was 0.693 and 0.692% in the diet, corresponding to intake per hen per day of 825 and 793 mg of xmethionine+cistine/day, for the light and the semi-heavy laying hens, respectively. For the light hens, the threonine requirement estimated by the quadratic model was 0.510% in the diet, corresponding to intake per hen per day of 583 mg of threonine. The digestible threonine requirement for the semi-heavy laying hens estimated by the quadratic model 0.517% in the diet, corresponding to intake per hen per day of 575 mg of threonine/day.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-19T12:54:32Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 675290 bytes, checksum: 126665e12812a3a2d4e27fda7e5615ac (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-19T12:54:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 675290 bytes, checksum: 126665e12812a3a2d4e27fda7e5615ac (MD5) Previous issue date: 2005-01-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Desenvolveu-se três experimentos durante toda a fase de crescimento (1 a 18 semanas de idade) para determinar a exigência nutricional de metionina + cistina (met cis) para aves poedeiras leves e semipesadas, utilizando os resultados de desempenho, de produção de ovos e de qualidade dos ovos. No primeiro experimento foram utilizadas 720 aves, no período de 1 a 6 semanas de idade. No segundo experimento foram utilizadas 640 aves, durante o período de 7 a 12 semanas de idade e no terceiro experimento foram utilizadas, durante a fase de 13 a 17 semanas de idade, 560 frangas. Nos três experimentos utilizaram-se aves Lhomann, sendo 50% Lhomann LSL (leves) e 50% Lhomann Brown (semipesadas), em delineamento inteiramente casualizado, e alimentadas com ração basal suplementada com DL-Metionina para os níveis de 0,536; 0,616; 0,696; 0,776; e 0,856% de met + cis total (experimento 1); 0,471; 0,541; 0,611; 0,681 e 0,751% de met + cis, no experimento 2; e 0,399; 0,469; 0,539; 0,609 e 0,679% de met + cis, para o experimento 3. Com base nas variáveis analisadas, a exigência de met + cis total para o período de 1 a 6 semanas de idade foi 0,778% (0,700% de met cis digestivel) para aves leves e de 0,739% ou 0,665% de met + cis digestível para aves semipesadas. Para o período de 7 a 12 semanas de idade a exigência de metionina cistina total foram de 0,710% (0,639% de met + cis digestivel) para aves leves e de 0,706% (0,635% de met + cis digestível) para aves semipesadas. No período de 13 a 18 semanas de idade as exigências de met + cis totais foram de 0,679% (0,611% de met cis digestível) para aves leves e de 0,646% (0,581% de met + cis digestível) para aves semipesadas. Durante a fase de crescimento, as aves 1eves foram mais exigentes em met cis quando comparados as semipesadas. Nos três experimentos foram avaliados os efeitos residuais dos tratamentos na fase de postura (22 a 33 semanas de idade Os resultados nesta fase indicam que não houve efeito nos parâmetros de produção, bem como na qualidade dos ovos das aves, nos três experimentos estudados para aves semipesadas. Nas aves leves foi verificado efeito linear, no experimento 1, para produção e porcentagem de albúmen. No experimento 2 verificou-se, nas aves leves, efeito quadrático para a variável peso dos ovos, sendo o nivel estimado de 0,550% de met + cis foi abaixo do observado na fase de 7 a 12 semanas de idade (0,710%). No experimento 3, não foi verificado efeito nos parâmetros de produção e qualidade dos ovos nas aves leves. / Tree experiment were carried out to determine the nutritional requirement of methionine + cystine (met + cys) for white-egg and brown-egg laying hens in growing using the performance and egg production. At the first experiment, 720 birds were used at the period of 1 to 6 weeks of age. In the second experiment, 640 birds were used for the period of 7 to 12 weeks of age. In the third experiment, 560 pullets were used from 13 to 18 weeks of age. In all experiments, the commercial Lhomann birds were used; 50% Lhomann LSL (white) and 50% Lhomann brown, in a completely randomized design. The levels were used 0,536; 0,616; 0,696; 0,776; e 0,856% met + cys, 1 experiment; 0,471; 0,541; 0,611; 0,681; e 0,751% met + cys, 2 experiment; and 0,399; 0,469; 0,539; 0,609; e 0,679% de met + cys, experiment 3. Based on the characteristics analyzed the total met + cys requirement for the period of 1 to 6 weeks of age was 0,778% (0,700% digestible met + cis) for white birds, and 0,739% (0,665% digestible met + cys) for brown birds. For the period of 7 to 12 weeks of age the met + cys requirement was 0,710% (0,639% digestible met + cys) for white birds and 0,706% (0,635% digestible met + cys) for brown. At the period of 13 to 18 weeks of age the met cys requirement was 0,679% (0,611% digestible met + cys) for white birds and 0,646% (0,581% digestible met + cys) for brown birds. During the growing phase the experiments they were availed the residual effects of the treatments in the posture phase (22 to 33 weeks of age). The results in this phase indicated that there was not effect in the production parameters, as well as in the quality of the eggs of the birds, in the three experiments studied for brown-egg pullets. In the experiment 1 the effect was verified, and the white-egg pullets presented lineal effect in the production and albumen percentage. In the experiment 2 quadratic effect was verified for the variable eggs weight, being the esteemed level of 0,550% of met + cys was below observed him in the phase of 7 to 12 weeks of age (O,7lO%). In the experiment of 13 to 18 weeks of age effect was not observed in all the parameters studied in the production phase in the white-egg pullets.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-06-18T21:33:03Z No. of bitstreams: 1 Caroline de Carvalho Urpia. Estudo dos polimorfismos 677CT e 1298 AC do gene da Metilenotetrahidrofolato redutase...pdf: 552380 bytes, checksum: 91d6ebe69a0ed7ae7a359552eb75e555 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-18T21:33:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Caroline de Carvalho Urpia. Estudo dos polimorfismos 677CT e 1298 AC do gene da Metilenotetrahidrofolato redutase...pdf: 552380 bytes, checksum: 91d6ebe69a0ed7ae7a359552eb75e555 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A Síndrome de Down (SD) é a mais freqüente anormalidade cromossômica em nativivos e é causada pela presença de um cromossomo 21 extra. A prevalência é de aproximadamente 1/600 nascidos vivos. Polimorfismos nos genes da Metilenetetrahidrofolato Redutase (MTHFR) e da Metionina Sintase Redutase (MTRR), enzimas centrais do metabolismo do folato que afetam a metilação e síntese do DNA, podem ser fatores de risco para a ocorrência da SD. Detectar as freqüências dos polimorfismos 677C >T e 1298A>C do gene da MTHFR e 66A>G do gene da MTRR e associar com a ocorrência de SD. Para o estudo de caso-controle, DNA genômico foi isolado a partir de sangue periférico de 61 mães de crianças com SD, 56 afetados, 28 pais e 102 mulheres controles. Para estudo de corte transversal, 300 amostras de DNA pertencentes de indivíduos da população geral de Salvador foram analisadas. Para análise dos polimorfismos, foram utilizadas as técnicas de PCR e RFLP. Resultados: No estudo de caso-controle, a freqüência do alelo T, da mutação 677C>T da MTHFR, foi de 0,24 entre as crianças com SD; 0,3 entre as mães e 0,25 entre os pais. A freqüência do alelo C, da mutação 1298A>C da MTHFR, foi de 0,2 entre as crianças com SD; 0,16 entre as mães e 0,16 entre os pais. A freqüência do alelo G, da mutação MTRR 66A>G foi de 0,33 entre as crianças com SD; 0,35 entre as mães e 0,46 entre os pais. Entre as mulheres controles, as freqüências dos alelos T, C e G dos genes da MTHFR 677C>T, MTHFR 1298A>C e MTRR66A>G foram de 0,25; 0,15 e 0,25, respectivamente. Comparando as freqüências alélicas das mães de crianças com SD e com as controles, não foi observada diferença estatisticamente significante, sugerindo que neste estudo os polimorfismos investigados não influenciam na ocorrência da SD, bem como a idade materna não sugere ser fator de risco aumentado para a SD, uma vez que a maioria dos filhos com SD eram provenientes de mães com idade materna inferior a 35 anos. No estudo de corte transversal, as freqüências dos alelos T, C e G dos genes da MTHFR 677C>T, MTHFR 1298A>C e MTRR66A>G foram de 0,21; 0,26 e 0,28, respectivamente. Observou-se que ao separar os pacientes por sexo, houve uma tendência das mulheres controle possuírem o genótipo mutante para os polimorfismos MTHFR 1298A>C e MTRR 66A>G e quando comparados os grupos das mães observou-se risco aumentado para SD em 4,9 vezes em mães caso para o genótipo mutante MTRR 66GG.

COSTA, D. M. Relação entre helicobacter pylori, metilação gênica e polimorfismos genéticos do hospedeiro no câncer gástrico. 2016. 99 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-04-28T15:54:45Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_dmcosta.pdf: 2577776 bytes, checksum: d5e8be753e783e37ff1175316f97eac4 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-04-28T15:54:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_dmcosta.pdf: 2577776 bytes, checksum: d5e8be753e783e37ff1175316f97eac4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T15:54:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_dmcosta.pdf: 2577776 bytes, checksum: d5e8be753e783e37ff1175316f97eac4 (MD5) Previous issue date: 2016-02-16 / Gastric cancer is a serious health problem. Several risk factors have been identified to contribute to its development, such as virulence genes of H. pylori, SNPs in host’s key genes and epigenetic events. The aim of this study was to investigate the relationship between genes methylation in gastric cancer, its association with H. pylori virulence genes, and verify the influence of CDH1 and MLH1 SNPs in the methylation status and correlate methylation of the promoter of miR-34b/c expression of MET protein in those cases. The promoter genes methylation was assessed by MS-PCR and HRM (for miR-34b/c) techniques. H.pylori genes were detected by PCR and SNPs, by PCR-RFLP. H.pylori genes were detected by PCR and SNPs, by PCR-RFLP. The genes of higher and lower methylation frequency were MSH2 and MLH1, respectively. Patients aged ≥ 50 had CDH1 more frequently methylated than those younger. The MLH1 gene was significantly less methylated in cardia tumors. As for the TNM, the CDH1-M gene was associated with advanced tumor extension, even when subdivided by subtype, since same association has been shown in tumors of intestinal subtype. Already the combination CDKN2A-M/MLH1-U was associated with absence of distant metastases. Taking into account the virulence genes of H. pylori, it was seen that patients infected vacAm1+ or cagG+ strains had a higher frequency of CDKN2A-U vacAs1 + was associated with COX-2-U and CDH1-U, while hopQII with MLH1-U. Patients infected with cagE+ and virB11+ strains had higher frequency of MSH2-M. It was also observed that less virulent strains tended to non-methylation for CDH1 and MLH1 genes. The classification trees made according to the histological subtype, showed that in tumors of diffuse subtype cagE+ and virB11 + strains (separately or together) were also attached to a methylator character of some of the analyzed genes. Already strains virB11+cagA+ did not lead to methylation in two genes. In intestinal subtype tumors was not observed a pattern having a variation in the combinations of H. pylori genes leading to the methylation. CDH1 SNPs presented no relation to the methylation of this gene, while the GA genotype of MLH1 SNP showed a tendency to not methylation of the gene. As regards the promoter methylation of miR-34b/c, the distribution percentage of the cases showed that the majority of cases presented methylation above 50%. The larger frequency among tumors of the intestinal subtype was in the methylation range of 50-75%, and to diffuse subtype from 75%. Already c-MET expression was positive in 86.36% of cases were not found differences among the different locations and subtypes. There was no correlation between the methylation percentage of miR-34b/c and c-MET expression. Observing each case, it was seen that in most cases whose c-MET expression was negative (H-score 0) had a high percentage of methylation of miR-34b/c. In conclusion, the methylation status of the studied genes appear to be dependent on the tumor location and is also related to the TNM staging and tumor subtype. In addition, more virulent H. pylori strains may be involved in this process by increasing inflammatory response leading to methylation of these genes. Already c-MET is overexpressed in cases of gastric cancer and the promoter region of miR-34b/c hipermethylated, indicating a possible involvement of these factors in carcinogenesis of the stomach, although it was not found a direct relationship between the two variables. / O câncer gástrico constitui um sério problema de saúde pública. Diversos fatores de risco parecem estar envolvidos na contribuição para o seu desenvolvimento, tais como: genes de virulência de H. pylori, SNPs em genes-chave no hospedeiro e eventos epigenéticos. Assim, o objetivo desse estudo foi investigar a relação entre a metilação de genes em casos de câncer gástrico, sua associação com genes de virulência de H. pylori, verificar a influência dos SNPs de CDH1 e MLH1 em seu status de metilação, bem como correlacionar a metilação do promotor de miR-34b/c e a expressão da proteína MET nesses mesmos casos. A metilação dos genes foi obtida através da realização da técnica MS-PCR e HRM (para miR-34b/c). Os genes de H. pylori foram detectados por PCR e os SNPs, por PCR-RFLP. Os genes de maior e menor frequência de metilação foram MSH2 e MLH1, respectivamente. O corte de idade mostrou que pacientes com idade ≥ 50 anos tiveram CDH1 mais frequentemente metilado que aqueles mais jovens. O gene MLH1 foi significativamente menos metilado em tumores da cárdia. Quanto ao TNM, o gene CDH1-M foi associado à extensão tumoral avançada, inclusive quando subdividido por subtipo, já que mesma associação foi mostrada em tumores do subtipo intestinal. Já a combinação CDKN2A-M/MLH1-U foi associada à ausência de metástase à distância. Levando em consideração os genes de virulência de H. pylori, foi visto que pacientes infectados por cepas vacAm1+ ou cagG+ tiveram uma maior frequência de CDKN2A-U, vacAs1+ foi associado com COX-2-U e CDH1-U, enquanto hopQII, com MLH1-U. Pacientes infectados por cepas cagE+ e virB11+ tiveram maior frequência de MSH2-M. Foi observado também que cepas menos virulentas apresentaram uma tendência à não-metilação para os genes MLH1 e CDH1. As árvores de classificação, feitas de acordo com o subtipo histológico, mostraram que em tumores do subtipo difuso, cepas cagE+ e virB11+ (separados ou em concomitância) também estavam associadas a um caráter metilador em alguns dos genes analisados. Já cepas virB11+cagA+ não levavam à metilação em dois genes. Nos tumores do subtipo intestinal, não foi observado um padrão, havendo uma variação nas combinações dos genes de H. pylori que levavam à metilação. Os SNPs de CDH1 e não apresentaram relação com a metilação desses gene, enquanto o genótipo GA de MLH1 apresentou uma tendência à não metilação do gene. Quanto à metilação do promotor de miR-34b/c, a distribuição dos casos por percentual mostrou que a maioria dos casos apresentou metilação acima de 50%. A maior frequência de casos entre os tumores do subtipo intestinal estava na faixa de metilação de 50-75%, e para os do subtipo difuso, a partir de 75%. Já a expressão de c-MET foi positiva em 86,36% dos casos, não sendo encontradas diferenças entres as diferentes localizações e subtipos. Não foi encontrada uma correlação entre o percentual de metilação de miR-34b/c e a expressão da proteína c-MET. Observando caso a caso, foi visto que na maioria dos casos cuja expressão de c-MET era negativa (H-score 0) possuia um elevado percentual de metilação de miR-34b/c. Assim, pode-se concluir que os status de metilação dos genes estudados parecem ser dependentes da localização tumoral e está relacionado também ao estadiamento TNM e ao subtipo tumoral. Além disso, cepas de H. pylori mais virulentas podem estar envolvidas nesse processo, aumentando a resposta inflamatória e levando à metilação desses genes. Já a proteína c-MET está superexpressa em casos de câncer gástrico e a região promotora de miR-34b/c, hipermetilada, indicando um possível envolvimento desses fatores na carcinogênese do estômago, embora não tenha sido encontrada uma relação direta entre as duas variáveis.

A hipermetioninemia ocorre em muitas doenças metabólicas, dentre elas, na deficiência da enzima metionina adenosiltransferase e na homocistinúria. Pacientes afetados por essas doenças podem apresentar alterações neurológicas e hepáticas; entretanto, os mecanismos responsáveis por essas manifestações não estão totalmente elucidados. No presente trabalho inicialmente avaliamos o efeito in vitro da metionina sobre a atividade da Na+,K+-ATPase e sobre alguns parâmetros de estresse oxidativo em hipocampo de ratos. Resultados mostraram que a pré-incubação de homogeneizados de hipocampo com metionina diminuiu a atividade da Na+,K+-ATPase e que antioxidantes (glutationa e trolox) preveniram esse efeito. Verificou-se também que a metionina diminuiu o potencial antioxidante total não enzimático (TRAP), aumentou a lipoperoxidação (medida pela quantidade de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico – TBARS e pela quimiluminescência) e não alterou a atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT), glutationa peroxidase (GSH-Px) e superóxido dismutase (SOD). A seguir, desenvolvemos um modelo químico experimental de hipermetioninemia em ratos, a fim de estudar e melhor compreender os mecanismos fisiopatológicos dessa doença. Utilizando esse modelo, verificamos diversos parâmetros bioquímicos cerebrais, como a atividade da Na+,K+-ATPase e da acetilcolinesterase, alguns parâmetros de estresse oxidativo, o conteúdo lipídico total, bem como o aprendizado e a memória em ratos submetidos à tarefa do labirinto aquático de Morris. Também avaliamos parâmetros de estresse oxidativo em fígado de ratos hipermetioninêmicos. O modelo crônico de hipermetioninemia foi realizado do 6o ao 28o dia de vida e as doses de metionina administradas variaram de 1,34 a 2,68 mmol/g de peso corporal. Os ratos controles receberam solução salina no mesmo volume. As concentrações plasmáticas obtidas foram de 2 mmol/L, similares àquelas encontradas no plasma de pacientes hipermetioninêmicos. Os níveis cerebrais de metionina foram de aproximadamente 1 mmol/g de tecido. No tratamento agudo, ratos de 29 dias receberam uma injeção de metionina, na dose VIII de 2,68 mmol/g de peso corporal. Os resultados mostraram que a hipermetioninemia aguda e crônica aumentou o TBARS e reduziu a Na+,K+- ATPase em cérebro de ratos. A hipermetioninemia crônica reduziu o conteúdo total de gangliosídios, fosfolipídios e colesterol, e não alterou a CAT e o conteúdo tiólico total em cérebro de ratos. Também observamos que a administração crônica de metionina provocou um déficit na memória de trabalho e um aumento na atividade da acetilcolinesterase cerebral. Por outro lado, a administração aguda de metionina não alterou a atividade dessa enzima em cérebro de ratos. Por fim, demonstramos que a hipermetioninemia crônica aumentou a quimiluminescência, o conteúdo de carbonilas e a atividade da GSH-Px, e diminuiu o TRAP e a atividade da CAT em fígados de ratos. Em contraste, não houve alteração nos níveis de TBARS, TAR, conteúdo tiólico total e na atividade da SOD em fígado de ratos. Nossos achados, em conjunto, poderão auxiliar na compreensão das alterações neurológicas e hepáticas observadas em pacientes hipermetioninêmicos. / Hypermethioninemia is the biochemical hallmark of many metabolic disorders, such as methionine adenosyltransferase activity deficiency and homocystinuria. Affected patients can present neurological and hepatic alterations, whose underlying mechanisms are not yet fully established. In the present work, we evaluated the in vitro effect of methionine on Na+,K+-ATPase activity and some parameters of oxidative stress in hippocampus of rats. Results showed that incubation of homogenates of hippocampus with methionine diminished Na+,K+- ATPase activity and that simultaneous incubation with some antioxidants, such as glutathione and trolox prevented this effect. We also demonstrated that methionine decreased total radical antioxidant potential (TRAP), increased thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) e chemiluminescence (both are markers of lipid peroxidation), but did not alter the activities of antioxidant enzymes catalase (CAT), glutathione peroxidase (GSH-Px) and superoxide dismutase (SOD) in hippocampus of rats. Afterwards, considering that animal models are useful to better understand the physiopathology of human diseases, we developed a chemically induced experimental model of hypermethioninemia in rats. By using this model, we verified many biochemical parameters, as Na+,K+-ATPase and acetylcholinesterase activities, some oxidative stress parameters, total lipid content, as well as learning and memory in rats on Morris water maze task. We also determined the effect chronic hypermethioninemia on some parameters of oxidative stress in liver of rats. Chronic hypermethioninemia was performed from the 6th to the 28th day of life and methionine doses administered (1.34–2.68 mmol/g of body weight) were chosen in order to induce plasma levels similar to those described in hypermethioninemic patients (around to 2 mmol/L). By this treatment, we also produced high levels of methionine (approximately 1 mmol/g wet tissue) in brain of rats. Control rats received saline in the same volumes. In acute treatment, 29-day-old rats received one single injection of methionine (2.68 mmol/g of body weight). Results showed that acute and chronic administration of methionine X enhanced TBARS levels and decreased Na+,K+-ATPase activity in brain of rats. Chronic hypermethioninemia reduced total content of gangliosides, phospholipids and cholesterol, but did not change CAT activity and total thiol content brain of rats. We also observed that methionine-treated rats presented impaired performance on working memory task and an increase in brain acetylcholinesterase activity. On the other hand, acute administration did not alter this enzyme activity. Finally, we demonstrated that chronic hypermethioninemia increased chemiluminescence, protein carbonyl content and GSH-Px activity, and decreased TRAP and CAT activity in liver of rats. In contrast, TBARS, TAR, total thiol content and SOD activity were not affected by methionine administration in liver of rats. Altogether, our findings may be helpful in the understanding of the neurological and hepatic alterations observed in hypermethioninemic patients.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-17Bitstream added on 2014-06-13T19:57:42Z : No. of bitstreams: 1 bonato_ma_me_jabo.pdf: 1088423 bytes, checksum: 706ba8eb71da0975d385cc318b0b96c2 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A mantença pode ser definida como o estado em que o animal se encontra em equilíbrio de nitrogênio, no qual a ingestão de N é igual à soma das perdas, permanecendo constante o conteúdo de N do corpo. E esta pode ser definida com base em estudos de metabolismo com aves adultas improdutivas, pelo fato das exigências totais de aminoácidos dessas aves estarem associadas apenas às perdas inevitáveis (mantença), não incluindo necessidades específicas de aminoácidos para o crescimento e/ou produção. Porém, há alguns problemas na determinação da exigência de mantença: primeiro é como comparar a mantença entre genótipos de diferentes tamanhos à maturidade, o segundo é como comparar a mantença entre animais de um mesmo genótipo em diferentes estágios de crescimento, e o terceiro é como lidar com a variação no conteúdo de gordura corporal, uma vez que não existe demanda de aminoácidos para a manutenção das reservas lipídicas. Assim, as diferenças de valores entre níveis de exigências para mantença de aminoácidos encontrados na literatura, tem sido a diretriz para o desenvolvimento de novos estudos, visando à obtenção de metodologias padronizadas e estimativas de valores condizentes com as necessidades das aves. Este estudo teve como objetivo estimar as exigências de metionina+cistina e treonina digestíveis para a mantença de aves adultas utilizando e comparando galos de diferentes pesos e composições corporais / The maintenance can be defined as the state where the animal is in nitrogen balance, in which the intake of N is equal to the sum of the losses, stabilizing the N content in the body. And this can be defined based on studies of metabolism in adult birds unproductive, because the total amino acid requirements of these birds are associated only to the inevitable losses (maintenance), not including the specific amino acids for growth and/or production. However, there are some problems in determining the requirement for maintenance: first is to compare the maintenance among genotypes of different sizes at maturity, the second is like comparing the maintenance of animals of the same genotype at different stages of growth, and the third is how to deal with the variation in body fat content, since there is no demand for amino acids for the maintenance of lipid reserves. Thus, differences in values between levels of requirements for maintenance of amino acids found in the literature has been the guideline for the development of new studies aiming to produce standardized methodologies and estimates of amounts consistent with the needs of birds. This study aimed to estimate the methionine+cystine and threonine digestible for the maintenance of adult birds using and comparing roosters of different weights and body composition