A Paracoccidioidomicose (PCM) é uma infecção sistêmica que tem como agente etiológico o P. brasiliensis e afeta os pulmões, áreas mucocutâneas e o sistema mononuclear-fagocitário. Trabalhos anteriores usando camundongos BALB/c atímicos e eutímicos demonstraram que os animais deficientes de células T são mais suscetíveis à infecção pelo P. brasiliensis e indicaram que a imunidade celular e natural são fundamentais para promover a resistência e o controle da doença. Com base nestes dados, nosso trabalho teve por objetivo demonstrar a importância de alguns mediadores da resposta imune natural durante a PCM murina. Utilizamos como abordagem experimental a depleção de IFN-γ, IL-12, leucócitos PMN e células NK em camundongos BALB/c atímicos e eutímicos infectados por via intratraqueal com leveduras de P. brasiliensis. Nossos resultados indicaram que a depleção de leucócitos PMN não alterou a gravidade da doença, entretanto essas células parecem exercer importante papel na modulação da síntese de citocinas em animais atímicos. A IL-12, por sua vez, demonstrou ter ação relevante na resposta ao P. brasiliensis em animais deficientes de células T, pois a sua neutralização levou ao aumento do número de leveduras viáveis recuperadas nos órgãos de disseminação (fígado e baço). Os animais eutímicos que foram tratados com AcM anti IL-12 apresentaram exacerbação da doença pulmonar e esplênica mas em ambas as linhagens não encontramos quaisquer alterações nas reações de HTT e no tempo de sobrevida. Os nossos experimentos confirmaram o papel fundamental do IFN-γ no controle doença tanto nos animais eutímicos que apresentaram redução das reações de HTT e exacerbação da doença, como também nos deficientes de células T que demonstraram, além do aumento da gravidade da doença, a redução do tempo de sobrevida. Analisamos também a participação da célula NK por serem consideradas fontes expressivas da síntese de IFN-γ. Observamos a exacerbação da doença pulmonar e a disseminação do fungo para o fígado e baço nos animais atímicos. A depleção dessas células em animais eutímicos induziu somente o agravamento da infecção pulmonar, sem maior comprometimento de outros órgãos. A reação de HTT e a taxa de mortalidade não sofreram alterações em ambas as linhagens. As células NK demonstraram atuar como moduladoras da síntese de imunoglobulinas em animais atímicos e de citocinas em eutímicos e também participaram da quimiotaxia de leucócitos PMN nos períodos iniciais da PCM. Em conclusão, usando um modelo experimental homogêneo (cepa infectante e linhagens de hospedeiros definidos) pudemos, pela primeira vez, demonstrar que o IFN-γ é o mais importante mediador da imunidade natural na imunoproteção ao P. brasiliensis. Verificamos também a contribuição relativa da IL-12 e dos leucócitos PMN na proteção da PCM pulmonar. Além disso, também pela primeira vez, foi caracterizada in vivo a importância das células NK no controle da infecção pelo P. brasiliensis. / The Paracoccidioidomicose (PCM) is a systemic infection caused by P. brasiliensis and affects the lungs, mucocutaneous areas and the mononuclear-phagocitary system. Previous works using athymics and euthymics BALB/c mice demonstrated that T cells deficient animals are more susceptible to the infection and indicated that the cellular and natural immunity is essential to promote the resistance and the control of disease. Based in these data, the objective of our work was demonstrated the importance of some natural mediators during murine PCM immune response. As experimental protocols we used the systemic depletion of IFN-γ, IL-12, PMN leukocytes and NK cells in athymics and euthymics BALB/c mice infected by intratracheal route with P. brasiliensis yeasts. Our results indicated that PMN leukocytes depletion did not alter the severity of infection; however these cells showed to exert important function in the cytokines synthesis modulation in athymics mice. In turn, the IL-12 demonstrated relevance action in T cells deficient mice response to P. brasiliensis infection, its neutralization induces an increased of viable yeasts numbers recovered in the dissemination organ (liver and spleen). The euthymics animals treated with anti IL-12 MAb presented an exacerbation of pulmonary and spleenic disease but in both species did not finds any alteration in the HTT reaction or survival times. Our experiments confirm the fundamental action of IFN-γ in disease control in both strains that showed decreased in the HTT reaction, disease exacerbation. These depletion in T cells deficient mice it also induced a decreased in survival times. We also analyzed the NK cells participation because are considered important sources of IFN-γ synthesis. We observed in athymics mice an exacerbation of pulmonary disease and fungal dissemination to liver and spleen. This depletion, in euthymics, mice induces only the pulmonary infection aggravation, other organs were not affected. The HTT reaction and mortality alterations were not observed in both strains. We demonstrated that NK cells acting as immunoglobulins synthesis modulators in athymics mice and the cytokines in euthymics mice and also participated of PMN leukocytes attractive in early PCM. In conclusion, using an experimental homogeneous model (infectant agent and strains hosts defined) we demonstrated for the first time that the IFN-γ is the most important mediator of the natural immunity in the immunoprotection to the P. brasiliensis. We also verificated the relative contribution of IL-12 and PMN leukocytes in the PCM pulmonary protection. Moreover, we also characterized, for the first time in vivo, the NK cells importance to the control of P. brasiliensis infection.

Submitted by Samira Prince (prince@ufpa.br) on 2012-10-16T14:35:41Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_InducaoEscleroticasInvitro.pdf: 4920627 bytes, checksum: 52f08a5bbe8c483f745c2bd5ced67a47 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2012-10-16T18:01:59Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_InducaoEscleroticasInvitro.pdf: 4920627 bytes, checksum: 52f08a5bbe8c483f745c2bd5ced67a47 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-16T18:01:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_InducaoEscleroticasInvitro.pdf: 4920627 bytes, checksum: 52f08a5bbe8c483f745c2bd5ced67a47 (MD5) Previous issue date: 2009 / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A cromoblastomicose (CBM) é uma doença fúngica crônica que acomete a pele, caracterizada pelo desenvolvimento de lesões polimórficas, que apresentam infiltrado inflamatório granulomatoso na presença de células escleróticas, patognomônicas desta doença. Um dos objetivos deste estudo foi avaliar a indução de células escleróticas por meios naturais, com biomassas de Bactris gasipaes e de Theobroma grandiflorum, cujas respectivas espécies induziram in vitro células escleróticas similares àquelas encontradas nos tecidos de lesões humanas, em 10 e 2 dias, respectivamente, o que viabilizou a produção de um meio indutor em pó, já disponibilizado a outros grupos que estudam a CBM. Outro objetivo foi avaliar a imunopatologia da CBM nos pacientes, antes e durante a utilização de itraconazol (ITZ). Para isto, foi utilizada a técnica de ELISA para as citocinas TNF-, IL-4 e IL-10 circulantes, e a imunohistoquímica de biópsias das lesões em diferentes tempos de tratamento – que permitiu analisar as alterações quantitativas e qualitativas dos tipos celulares durante 12 meses do tratamento com ITZ na dose de 200 mg/dia – com anticorpos anti-CD20, anti-CD8 e anti-CD68. Quanto as citocinas, a IL-10 circulante não mostrou nenhuma mudança significativa, enquanto IL-4 e TNF-α apresentaram um aumento da titulação ao longo de 12 meses de tratamento. Em relação à imunofenotipagem, houve uma diminuição significativa no processo inflamatório e nos infiltrados celulares durante 3 e 6 meses do tratamento, enquanto que apenas aos 12 meses houve a regressão significativa do número de escleróticas. A Imunofenotipagem revelou que os macrófagos estão localizados principalmente nas áreas centrais do granuloma, enquanto que as células TCD8+ estão na periferia e as células TCD20+ encontram-se homogeneamente distribuídas, com um aumento significativo após 6 meses do tratamento, retornando aos níveis iniciais após um ano. Os macrófagos e linfócitos citotóxicos são recrutados para o sítio de infecção durante o tratamento, apresentando um aumento significativo após 12 meses de tratamento com ITZ. Estes resultados demonstram que a formação do granuloma na CBM é semelhante àqueles observados em outras doenças infecciosas granulomatosas, e que a presença de IL-4 e IL-10 podem estar relacionadas com a persistência do fungo nas lesões e com a dificuldade de cura observada nestes pacientes. / Chromoblastomycosis (CBM) is a chronic fungal disease witch affects the skin, characterized for slowing development of polymorphic skin, that present infiltrated inflammatory granulomatous in the presence of sclerotics cells, characteristic of this illness. One of the objectives of this study was to evaluate the induction of scleroticts cells for natural mediums, with biomasses of Bactris gasipaes and Theobroma grandiflorum, whose respective species had induced in vitro similar sclerotics cells to those found in tissue of patients, in 10 and 2 days, respectively, what it made possible the production of a powder medium inductor, already donated to other groups that study the CBM. Another objective was to evaluate the histopathology of the CBM in the patients, before and during the use of itraconazole (ITZ). For this, the technique of ELISA for the cytokines was used TNF-α, circulating IL-4 and IL-10, and the immunohistochemestry of biópsias in different times of treatment - that it allowed to analyze the quantitative and qualitative alterations of the cellular types during 12 months of the treatment with ITZ in the 200 dose of mg/dia - with antibodies anti- CD20, anti-CD8 and anti-CD68. How much the cytokines, the circulating IL-10 did not show significant change, while IL-4 and TNF-α had presented an increase of the levels throughout 12 months of treatment. In relation to the immunophenotyping, it had a significant reduction in the inflammatory process and the cellular infiltrated during 3 and 6 months of the treatment, whereas only to the 12 months had the significant regression of the number of sclerotics cells. The immunophenotyping disclosed that the macrophages are mainly located in the areas central areas of granuloma, whereas cells TCD8+ are in the periphery and cells TCD20+, which were found throughout the tissues, with a significant increase after 6 months of the treatment, returning to the initial levels after one year. The cytotoxic macrophages and lymphocytes were having presented a significant increase after 12 months of treatment with ITZ. These results demonstrate that the formation of granuloma in the CBM is similar to those observed in other granulomatous infectious disease, and that the presence of IL-4 and IL-10 can be related with the persistence of fungi in the injuries and with the difficulty of cure observed in these patients.

Submitted by MARIANA MALAVAZI DESTRO null (m_destro@hotmail.com) on 2016-07-07T16:27:57Z No. of bitstreams: 1 Dissertação para arquivar Unesp.pdf: 751238 bytes, checksum: ef14aad090e2f5e2974329d58301aef8 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-07-11T14:37:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 destro_mm_me_araca.pdf: 751238 bytes, checksum: ef14aad090e2f5e2974329d58301aef8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-11T14:37:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 destro_mm_me_araca.pdf: 751238 bytes, checksum: ef14aad090e2f5e2974329d58301aef8 (MD5) Previous issue date: 2016-06-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A criptococose é uma infecção fúngica causada por levedura do gênero Cryptococcus. Dentre as principais micoses sistêmicas nas últimas décadas, a criptococose vem assumindo um relevante papel, com altos índices de morbidade e mortalidade principalmente em pacientes imunodeprimidos. O presente trabalho teve por objetivo verificar a ocorrência de Cryptococcus spp. em amostras ambientais na área urbana de Bauru-SP, Brasil, estabelecendo os focos ambientais, com a finalidade de compreender a eco-epidemiologia do microrganismo. Cinquenta amostras ambientais de dez locais representativos foram processadas e semeadas em ágar semente de Níger (NSA) e Sabouraud. As colônias com características macro e micromorfológicas compatíveis com Cryptococcus foram submetidas a provas bioquímicas, sendo que 12/50 (24%) das amostras foram positivas para o gênero Cryptococcus. A partir dos resultados obtidos, pode-se concluir que foram encontradas espécies causadoras de criptococose no município de Bauru, constituindo-se na existência de focos ambientais, com potencial patogênico para o homem e animais. A compreensão da eco-epidemiologia do Cryptococcus constitui em uma importante ferramenta na estratégia de medidas preventivas. / Cryptococcosis is a fungal infection caused by yeasts of the genus Cryptococcus. One of the main systemic mycoses in recent decades, has been assuming an important role, with high rates of morbidity and mortality especially in immunosuppressed patients. The present study aimed to verify the existence of Cryptococcus spp. from environmental samples in the urban area of Bauru-SP, Brazil, establishing the environmental focus, with the purpose of understand the eco-epidemiology of the micro-organism. Fifty environmental samples from ten representative sites were processed and seeded in agar Niger seed (NSA) and Sabouraud. The colonies with macro and micromorphological compatible with Cryptococcus underwent biochemical tests, and 12/50 (24%) of the samples were positive for the genus Cryptococcus. From the results obtained, it can be concluded that species that cause cryptococcosis were found in the city of Bauru-SP, Brazil, constituting the existence of outbreaks with potential environmental pathogenic for human and animals. The eco-epidemiological understanding of the Cryptococcus constitutes an important tool in the strategy of preventive measures.

A Paracoccidioidomicose (PCM) é uma infecção sistêmica que tem como agente etiológico o P. brasiliensis e afeta os pulmões, áreas mucocutâneas e o sistema mononuclear-fagocitário. Trabalhos anteriores usando camundongos BALB/c atímicos e eutímicos demonstraram que os animais deficientes de células T são mais suscetíveis à infecção pelo P. brasiliensis e indicaram que a imunidade celular e natural são fundamentais para promover a resistência e o controle da doença. Com base nestes dados, nosso trabalho teve por objetivo demonstrar a importância de alguns mediadores da resposta imune natural durante a PCM murina. Utilizamos como abordagem experimental a depleção de IFN-γ, IL-12, leucócitos PMN e células NK em camundongos BALB/c atímicos e eutímicos infectados por via intratraqueal com leveduras de P. brasiliensis. Nossos resultados indicaram que a depleção de leucócitos PMN não alterou a gravidade da doença, entretanto essas células parecem exercer importante papel na modulação da síntese de citocinas em animais atímicos. A IL-12, por sua vez, demonstrou ter ação relevante na resposta ao P. brasiliensis em animais deficientes de células T, pois a sua neutralização levou ao aumento do número de leveduras viáveis recuperadas nos órgãos de disseminação (fígado e baço). Os animais eutímicos que foram tratados com AcM anti IL-12 apresentaram exacerbação da doença pulmonar e esplênica mas em ambas as linhagens não encontramos quaisquer alterações nas reações de HTT e no tempo de sobrevida. Os nossos experimentos confirmaram o papel fundamental do IFN-γ no controle doença tanto nos animais eutímicos que apresentaram redução das reações de HTT e exacerbação da doença, como também nos deficientes de células T que demonstraram, além do aumento da gravidade da doença, a redução do tempo de sobrevida. Analisamos também a participação da célula NK por serem consideradas fontes expressivas da síntese de IFN-γ. Observamos a exacerbação da doença pulmonar e a disseminação do fungo para o fígado e baço nos animais atímicos. A depleção dessas células em animais eutímicos induziu somente o agravamento da infecção pulmonar, sem maior comprometimento de outros órgãos. A reação de HTT e a taxa de mortalidade não sofreram alterações em ambas as linhagens. As células NK demonstraram atuar como moduladoras da síntese de imunoglobulinas em animais atímicos e de citocinas em eutímicos e também participaram da quimiotaxia de leucócitos PMN nos períodos iniciais da PCM. Em conclusão, usando um modelo experimental homogêneo (cepa infectante e linhagens de hospedeiros definidos) pudemos, pela primeira vez, demonstrar que o IFN-γ é o mais importante mediador da imunidade natural na imunoproteção ao P. brasiliensis. Verificamos também a contribuição relativa da IL-12 e dos leucócitos PMN na proteção da PCM pulmonar. Além disso, também pela primeira vez, foi caracterizada in vivo a importância das células NK no controle da infecção pelo P. brasiliensis. / The Paracoccidioidomicose (PCM) is a systemic infection caused by P. brasiliensis and affects the lungs, mucocutaneous areas and the mononuclear-phagocitary system. Previous works using athymics and euthymics BALB/c mice demonstrated that T cells deficient animals are more susceptible to the infection and indicated that the cellular and natural immunity is essential to promote the resistance and the control of disease. Based in these data, the objective of our work was demonstrated the importance of some natural mediators during murine PCM immune response. As experimental protocols we used the systemic depletion of IFN-γ, IL-12, PMN leukocytes and NK cells in athymics and euthymics BALB/c mice infected by intratracheal route with P. brasiliensis yeasts. Our results indicated that PMN leukocytes depletion did not alter the severity of infection; however these cells showed to exert important function in the cytokines synthesis modulation in athymics mice. In turn, the IL-12 demonstrated relevance action in T cells deficient mice response to P. brasiliensis infection, its neutralization induces an increased of viable yeasts numbers recovered in the dissemination organ (liver and spleen). The euthymics animals treated with anti IL-12 MAb presented an exacerbation of pulmonary and spleenic disease but in both species did not finds any alteration in the HTT reaction or survival times. Our experiments confirm the fundamental action of IFN-γ in disease control in both strains that showed decreased in the HTT reaction, disease exacerbation. These depletion in T cells deficient mice it also induced a decreased in survival times. We also analyzed the NK cells participation because are considered important sources of IFN-γ synthesis. We observed in athymics mice an exacerbation of pulmonary disease and fungal dissemination to liver and spleen. This depletion, in euthymics, mice induces only the pulmonary infection aggravation, other organs were not affected. The HTT reaction and mortality alterations were not observed in both strains. We demonstrated that NK cells acting as immunoglobulins synthesis modulators in athymics mice and the cytokines in euthymics mice and also participated of PMN leukocytes attractive in early PCM. In conclusion, using an experimental homogeneous model (infectant agent and strains hosts defined) we demonstrated for the first time that the IFN-γ is the most important mediator of the natural immunity in the immunoprotection to the P. brasiliensis. We also verificated the relative contribution of IL-12 and PMN leukocytes in the PCM pulmonary protection. Moreover, we also characterized, for the first time in vivo, the NK cells importance to the control of P. brasiliensis infection.

Introdução: Fungos são alérgenos cuja importância nas doenças alérgicas respiratórias é subestimada por falta de extratos alergênicos adequados para diagnóstico, quer através de testes cutâneos, quer através de dosagem de IgE específica. Botucatu possui características próprias por se localizar numa \"cuesta\" e possuir vegetação variada que cobre grande parte da cidade. A partir das plantas os fungos ganham o ar através da esporulação podendo ser inalados e sensibilizar pacientes com alergias respiratórias. Este trabalho se propõe a estudar quais os fungos mais prevalentes em Botucatu e a taxa de sensibilização dos principais gêneros entre os portadores de asma e rinite procedentes dessa região. Casuística e Métodos: Foi desenvolvido um aparelho caça esporos para a captura dos mesmos em quatro pontos da cidade. Foram feitas cinco coletas/ponto/semana durante um ano para contagem e identificação das UFC (unidades formadoras de colônias). Foram selecionados pacientes de Botucatu e região com asma e rinite, nos quais se aplicou testes de puntura para os principais alérgenos, incluindo onze diferentes fungos. Foram também realizados testes intradérmicos com extratos de fungos nos pacientes cujo teste de puntura ao fungo em questão tenha sido negativo. Resultados: Foram identificados 67 gêneros sendo os mais prevalentes: Cladosporium, Epicoccum, Levedura, Aspergillus, Helminthosporium, Nigrospora, Monilia, Fusarium, Hyalodendrum, Penicillium, Curvularia, Humicola, Alternaria, Trichoderma e Sphaerosporium. Foram selecionados 207 pacientes dos quais 118 (57%) apresentaram pelo menos um teste positivo a fungo. O teste intradérmico foi responsável por 88% do diagnóstico de sensibilização A dosagem de IgE específica mostrou baixa sensibilidade (4%). Os fungos mais sensibilizantes foram: Aspergillus, Neurospora, Candida, Penicillium e Cladosporium. Observou-se maior positividade a fungos no grupo de asma grave, sendo que Aspergillus, Neurospora e Candida foram mais prevalentes nesse grupo. Encontrou-se associação positiva entre pacientes com asma atendidos em Pronto-Socorros durante o ano estudado e o total de UFC nesse período. Conclusões: Os fungos mais prevalentes no planeta são também encontrados em Botucatu, embora haja fungos característicos dessa região; a sensibilização a fungos é expressiva na população estudada e guarda relação com maior gravidade da asma; o teste intradérmico foi o melhor meio diagnóstico para sensibilização a fungos / Purpose: Fungi are allergens whose importance has been underestimated due to the absence of reliable extracts for the diagnosis of sensitization in vivo or in vitro. Botucatu has unique characteristics because of its location on a \"cuesta\" and its varied vegetation which cover a large area of the city. The fungi reach the air from the plants through sporulation and they can be inhaled and sensitize patients with allergic diseases. Here we studied the most prevalent fungi in the air of Botucatu and the rate of sensitization to the main fungi genus among patients with asthma and rhinitis. Methods: We developed a spore trap to catch the spores from the air in four points in the city. Five collections were taken weekly during a whole year. Colony forming units (CFU) were counted and the fungi on Petri dishes were classified. Patients with asthma and rhinitis have been selected and submitted to prick tests with the main allergens including eleven different types of fungi. Intradermal tests with fungi extract were also performed in the patients whose prick test to these fungi had been negative. Results: Sixty-seven genus of fungi have been identified and the more prevalent were: Cladosporium, Epicoccum, yeast, Aspergillus, Helminthosporium, Nigrospora, Monilia, Fusarium, Hyalodendrum, Penicillium, Curvularia, Humicola, Alternaria, Trichoderma and Sphaerosporium. Two hundred and seven patients have been selected and 118 (57%) have been at least one positive test to fungus. Intradermal test made the diagnosis in 88% of all diagnostics of sensitization, whereas \"in vitro\" specific IgE had low sensibility (4%). The more sensitizer fungi were: Aspergillus, Neurospora, Candida, Penicillium and Cladosporium. There was a significant correlation between severe asthma and fungi sensitization and the fungi more prevalent in that group of patient were: Aspergillus, Neurospora and Candida. Moreover, there was a positive correlation between the number of asthmatic patients attended in Emergencies and the total of CFU in the study period. Conclusion: We recognize in the air fungi specific to Botucatu although the most prevalent fungi are the same found in other places in the world; the fungi sensitization among patients with allergic respiratory diseases is meaningful and correlated with asthma severity; the intradermal test was the best mean to diagnose fungi sensitization

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:30:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 442944.pdf: 2331033 bytes, checksum: b130d8539a518de2335d49422e1a70fa (MD5) Previous issue date: 2012-08-31 / The present study aimed at analyzing histomorphometric, immunohistochemical and clinical features of oral lesions of paracoccidioidomycosis. The sample comprised 50 medical charts and 50 paraffinized blocks of biopsed specimens of oral leisons, both from paracoccidioidomycosis patients diagnosed at Stomatology Department of Hospital S?o Lucas, PUCRS from 1977 to 2010. Data regarding disease duration, and size and number of oral lesions, as well as erythrocytes, leukocytes, lymphocytes, hematocrit, hemoglobin and erythrocyte sedimentation rate, were collected from medical charts. Histological cuts were obtained from the paraffinized specimens and subjected to hematoxylin and eosin (H&E), Gomori-Grocott and immunohistochemical staining. The sample was classified according to the density of granulomas, and the variables number and diameter of fungi, number and diameter of buds, and IL-2, TNF-alpha and IFN-gamma expression were analyzed and correlated. Bud diameter was significantly greater in intermediate density granulomas compared to higher density granulomas. The other variables (bud number, number and diameter of fungi, expression of IL-2, TNF-alpha and IFN-gamma, and clinical and hematological features) did not significantly change with the density of granulomas. There was a positive correlation between bud number and fungal cell number (r=0.834), bud diameter and fungal cell diameter (r=0.496), erythrocytes and number of fungi (r=0.420), erythrocytes and bud number (r=0.408), and leukocytes and bud number (r=0.396). Negative correlation occurred between number and diameter of fungal cells (r=-0.419), bud diameter and granuloma density (r=-0.367), TNF-alpha expression and number of fungal cells (r=-0.372), TNF-alpha expression and bud number (r=-0.300). Histological, immunological and clinical characteristics of oral lesions of chronic paracoccidioidomycosis did not differ significantly between patients in our sample. TNF-alpha levels in oral lesions were inversely correlated with intensity of infection. / O presente estudo teve por objetivo analisar caracter?sticas histomorfom?tricas, imunoistoqu?micas e cl?nicas de les?es orais da paracoccidioidomicose. A amostra foi composta por 50 prontu?rios e 50 blocos de parafina contendo esp?cimes biopsiados de les?es orais, ambos provenientes de pacientes portadores de paracoccidioidomicose diagnosticados no Servi?o de Estomatologia do Hospital S?o Lucas da PUCRS no per?odo compreendido entre os anos de 1977 e 2010. Informa??es sobre tempo de evolu??o da doen?a, n?mero e tamanho das les?es orais, bem como contagem de eritr?citos, leuc?citos, linf?citos, hemat?crito, hemoglobina e eritrossedimenta??o foram coletadas dos prontu?rios dos pacientes. Cortes histol?gicos obtidos a partir dos esp?cimes em parafina foram submetidos ?s colora??es de hematoxilina e eosina (H&E), Gomori-Grocott e processamento imunoistoqu?mico. As amostras foram agrupadas de acordo com a intensidade de compacta??o do granuloma, e as vari?veis n?mero de fungos, n?mero de brotamentos, di?metro dos fungos, di?metro dos brotamentos, express?o imunoistoqu?mica de IL-2, TNF-alfa e IFN-gama foram avaliadas e correlacionadas. O di?metro dos brotamentos foi significativamente maior nos granulomas de compacta??o intermedi?ria quando comparados aos granulomas de maior compacta??o. As demais vari?veis (n?mero de brotamentos, n?mero e di?metro dos fungos, express?o de IL-2, TNF-alfa e IFN-gama, caracter?sticas cl?nicas e hematol?gicas) n?o exibiram altera??o significativa de acordo com o grau de compacta??o dos granulomas. Foi observada correla??o positiva entre n?mero de brotamentos e n?mero de fungos (r=0.834); di?metro dos brotamentos e di?metro do fungo (r=0.496); eritr?citos e n?mero de fungos (r=0.420); eritr?citos e n?mero de brotamentos (r=0.408); leuc?citos e n?mero de brotamentos (r=0.396). A correla??o negativa ocorreu entre di?metro e n?mero de fungos (r=-0.419); di?metro dos brotamentos e compacta??o do granuloma (r=-0.367); express?o de TNF-alfa e n?mero de fungos (r=-0.372); express?o de TNF-alfa e n?mero de brotamentos (r=-0.300). As caracter?sticas histol?gicas, imunol?gicas e cl?nicas das les?es orais da paracoccidioidomicose cr?nica n?o diferiram significativamente entre os pacientes da amostra avaliada. Os n?veis de TNF-alfa nas les?es orais est?o inversamente relacionados ? intensidade da infec??o.

Introdução: A micose fungóide foliculotrópica (MFF) é subtipo de linfoma cutâneo de células T que atinge especialmente o folículo piloso e parece ter prognóstico mais reservado. Informações clínicas sobre a população acometida por linfomas cutâneos no Brasil são escassas. O fenômeno de imunoprivilégio (IP) diz respeito à habilidade de alguns órgãos em permanecer protegidos contra reações inflamatórias. Tem sido sugerido que o folículo piloso normal represente um local de IP. Nesse estudo aventou-se a possibilidade de haver uma quebra no equilíbrio desse fenômeno na MFF, com alteração na expressão de moléculas do complexo maior de histocompatibilidade (MHC) e na expressão de MHC não-clássicos (HLA-G), com algum papel no mecanismo do foliculotropismo. Os objetivos foram: descrever o perfil clínico-epidemiológico de paciente com MFF, descrever a histologia e imunofenótipo dos casos de MFF e investigar os mecanismos envolvidos na predileção dos linfócitos atípicos pelo folículo piloso. Metodologia: Os prontuários de pacientes com diagnóstico de MFF provenientes do ambulatório de Linfomas Cutâneos da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (FMUSP) foram revisados (n=33). O material histológico de biópsias de pele dos pacientes com MFF provenientes dos ambulatórios de Linfomas Cutâneos da FMUSP e da Northwestern University foi analisado por meio de escala semi-quantitativa (n=43). Na coloração de hematoxilina-eosina foram avaliados os seguintes parâmetros: infiltrado neoplásico epidérmico, infiltrado neoplásico dérmico, presença de acantose/espongiose, de mucinose folicular, de fibroplasia do tecido conjuntivo, de eosinófilos, de plasmócitos, o tamanho celular e o grau de dano folicular. Analisou-se a positividade do infiltrado neoplásico para os seguintes marcadores celulares: CD1a, CD56, TIA-1 e CD117. As expressões do complexo de histocompatibilidade HLA-G e do MHCII no infiltrado celular e no epitélio folicular foram investigadas no grupo de pacientes com MFF e comparadas com o grupo de pacientes com micose fungóide clássica (MFC) e pele normal. A expressão do complexo de histocompatibilidade MHCII também foi investigada na epiderme. Resultados: A mediana das idades ao diagnóstico foi de 46 anos com 61% dos pacientes classificados como portadores de estágio avançado. A proporção entre homens e mulheres foi de 1,54 e a mediana de duração de doença antes do diagnóstico foi de três anos. Ao final de três anos de acompanhamento, 67% dos casos estavam vivos com a doença. O prurido foi relatado em 82% dos casos. Histologicamente, encontrou-se associação entre a presença de eosinófilos e de plasmócitos com fibroplasia do tecido conjuntivo. Observou-se diminuição da expressão do HLA-G no epitélio folicular nos grupos MFF e MFC em relação à pele normal. Observou-se aumento da expressão do MHCII no epitélio folicular na MFF em comparação à pele normal e na epiderme na MFC quando comparada à MFF. Conclusões: Dados clínicos da população estudada assemelharam-se aos dados da literatura como estágio avançado ao diagnóstico e prognóstico reservado. Cerca de metade dos casos de MFF foi positiva para o marcador citotóxico TIA-1. Demonstrou-se haver um provável colapso do imunoprivilégio folicular nos linfomas cutâneos com expressão diminuída de moléculas HLA-G em comparação à pele normal. O aumento da expressão do MHCII poderia relaciona-se com o foliculotropismo na MFF e com o epidermotropismo na MFC / Introduction: Folliculotropic mycosis fungoides (FMF) is a subtype of cutaneous T cells lymphoma affecting mainly the hair follicle and seems to have a less favorable prognosis. Clinical information on the population affected by cutaneous lymphomas in Brazil is scarce. The immune privilege (IP) phenomenon involves the ability of some body sites remaining protected from inflammatory reactions. It has been suggested that normal hair follicle represents an IP location. We hypothesized that a collapse of this phenomenon would occur in FMF, with changes in the expression of classical major histocompatibility molecules (MHC) and in the expression of nonclassical MHC molecules (HLA-G) with a role in folliculotropism mechanism. The objectives of this study were to describe the clinical and epidemiological profile of patients with MFF, describe the histology and immunophenotype of cases of MFF and investigate the expression of MHC molecules. Methods: The medical records of patients from the outpatient Cutaneous Lymphoma Clinic of the University of Sao Paulo Medical School (FMUSP) diagnosed with MFF were reviewed (n = 33). The histological material from skin biopsies of patients with MFF from the Cutaneous Lymphomas Clinic of FMUSP and Northwestern University was stained and evaluated by semi-quantitative scale. In hematoxylin-eosin staining the following parameters were evaluated: epidermal neoplastic infiltrate, dermal neoplastic infiltrate, acanthosis/spongiosis, follicular mucinosis, connective tissue fibroplasia, presence of eosinophils and plasma cells, cell size and degree of follicular damage. We analyzed the positivity of the neoplastic infiltrate for the following cellular markers: CD1a, CD56, TIA-1, and CD117. Finally, the expression of histocompatibility complex HLA-G and MHC II in the neoplastic infiltrate and the follicular epithelium was investigated in MFF group and compared to patients with classical mycosis fungoides (CMF) and to normal skin. MHCII expression in the epidermis was also investigated. Results: The median age at diagnosis was 46 years, with 61% classified as advanced stage disease. The ratio between men and women was 1.54, the median disease duration before diagnosis was three years. After a median time of follow-up of three years, 67% of the cases were alive with disease. Pruritus was reported in 82% of the cases. Histologically, an association between the presence of eosinophils and plasma cells with fibroplasia of collagen was found. There was a decrease of HLA-G expression in the follicular epithelium in MFF and CMF groups compared to normal skin. There was an increase of MHCII expression in the follicular epithelium in FMF group compared to normal skin. There was an increased MHCII expression in the epidermis in CMF compared to FMF. Conclusions: Clinical data from the studied population were similar to the previous literature in relation to advanced stage at diagnosis and prognosis. There was a relationship between the presence of eosinophils and plasma cells in neoplastic infiltrate and the connective tissue fibrosis. Near half of the cases of FMF was positive for the cytotoxic marker TIA-1. A possible hair follicle immune privilege collapse was suggested by a decreased expression of HLA-G molecules in FMF and CMF compared to normal skin. Increased MHCII expression appears to be involved in the folliculotropism of FMF and epidermotropism of CMF

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Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-07T14:19:40Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_InqueritoParacoccidiodinaCinco.pdf: 1133779 bytes, checksum: 9199e67b1a7eb4a05373218168c984ce (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-02-11T12:11:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_InqueritoParacoccidiodinaCinco.pdf: 1133779 bytes, checksum: 9199e67b1a7eb4a05373218168c984ce (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-11T12:11:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_InqueritoParacoccidiodinaCinco.pdf: 1133779 bytes, checksum: 9199e67b1a7eb4a05373218168c984ce (MD5) Previous issue date: 2011 / A paracoccidioidomicose constitui um importante problema de saúde pública na América Latina. No Brasil, essa doença é menos freqüente nas regiões Norte e Nordeste, predominando as áreas endêmicas na região Sudeste. Apesar das condições fisiográficas da região Norte favorecerem o desenvolvimento do Paracoccidioides brasiliensis, mesmo assim, os relatos de casos são escassos. Talvez, isto deva-se ao fato da pouca consideração sobre as micoses profundas entre os diagnósticos diferenciais das condições clínicas crônicas, justificadas no fato de que a região não é considerada endêmica. Com o objetivo de descrever a prevalência da paracoccidioidomicose em cinco cidades do Estado do Acre, foi realizado estudo transversal em base populacional, por meio de inquérito com a intradermorreação à paracoccidioidina. A leitura do teste intradérmico foi realizada com 24 e 48 horas, sendo considerados reatores as pessoas com endurações de 5 ou mais milímetros de diâmetro. Foram estudadas 439 pessoas e os índices de paracoccidioidomicose-infecção na leitura de 48 horas foi de 41,2%. Os achados deste estudo indicam que o P. brasiliensis causa infecção em considerável número de pessoas na área estudada e, portanto, futuros estudos clínico-epidemiológicos e micológicos devem melhor esclarecer a história natural da micose nessa região. / Paracoccidioidomycosis constitutes an important public health problem in Latin America. In Brazil, this disease is less frequent in North and Northeast regions, predominating the endemic areas in the Southeast. Despite the physiographic conditions of the North region favoring the development of Paracoccidioides brasiliensis, even so, the case reports are scarce. Perhaps this is due to the little consideration of deep mycoses about the differential diagnosis of chronic medical conditions, justified by the fact that the region is not considered endemic. With the objective of describing the prevalence of paracoccidioidomycosis in five cities of Acre, a cross-sectional population-based study was conducted, through a survey with the paracoccidioidin intradermal. The reading of the intradermal test was performed within 24 and 48 hours, being considered reactors the people with hardened areas of 5mm or more in diameter. Four hundred thirty-nine (439) people were studied and paracoccidiodomycosis-infection in the 48-hour reading was 41.2%. The findings of this study indicate that P. brasiliensis infection causes a considerable number of people in the study area to get infected, and therefore future clinical-epidemiological and mycological studies should better clarify the natural history of mycosis in this region.

Made available in DSpace on 2011-03-23T21:19:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Item created via OAI harvest from source: http://www.bdtd.ufpa.br/tde_oai/oai2.php on 2011-03-23T21:19:38Z (GMT). Item's OAI Record identifier: oai:bdtd.ufpa.br:275 / Chromoblastomycosis is a subcutaneous mycosis caused by deployment transcutaneous of several species of dematiaceous fungi, that is, melanized fungi. Considering the incidence of this disease in the state of Pará and the resulting morbidity of patients affected, with economic and social repercussions, it was made to the optimization of therapeutic schemes adopted, to the best knowledge of the relation dose x response. The itraconazole is one of the few drugs available for treatment, which has marked variability kinetic intra and inter individual, which compromises the establishment of the relation dose and response, as well as tissue and plasma concentrations achieved. In this sense, this work aimed at validation of analytical methodology by High Performance Liquid Chromatography and subsequent determination of itraconazole in samples of plasma and tissue in 20 patients with chromoblastomycosis, assisted in the laboratory of dermatoimmunology Dr. Marcello Candia, Marituba, Pará, who used the drug in doses of 200mg/day and 400mg/day. The technique employed was validated and proved adequate results in accordance with applicable law. Concentrations of plasma and tissue of itraconazole in the dose of 200mg/day were 121.3 87.9 ng/mL and 5.36 5.9 μg/g. The average plasma concentration of itraconazole in patients using 400mg/day was 290 234 ng/mL, and the plasma and tissue mean concentrations of itraconazole in patients who showed no clinical favourable, at doses of 200mg, making it necessary to increase to 400mg were 217 216 and 304 173 ng/mL; 14.87 12.94 e 21.80 6.62 μg/g. The average of relation between tissue and plasma concentrations in patients who had positive developments in clinical in the doses of 200mg/day was 44.29 67.12 and those that did not show positive developments in clinical in the doses of 200mg/day, making necessary to increase to 400mg/day were 68.52 59.90 and 71.71 38.26 respectively. / Cromoblastomicose é micose subcutânea causada pela implantação transcutânea de diversas espécies de fungos demáceos, isto é, fungos melanizados. Considerando a incidência desta doença no estado do Pará e a conseqüente morbidade dos pacientes afetados, com repercussões sociais e econômicas, fez-se necessário a otimização dos esquemas terapêuticos adotados, objetivando o melhor conhecimento da relação dose x resposta. O itraconazol é um dos poucos fármacos disponíveis para o tratamento, que apresenta marcada variabilidade cinética intra e inter individual, que compromete o estabelecimento da relação dose e resposta, bem como as concentrações plasmáticas e teciduais alcançadas. Neste sentido, este trabalho objetivou a validação da metodologia analítica por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência e posterior determinação de itraconazol em amostras de plasma e tecido em 20 pacientes com cromoblastomicose, atendidos no laboratório de Dermato-Imunologia Dr. Marcello Candia, Marituba, Pará, que utilizaram o medicamento nas doses de 200mg/dia e 400mg/dia. A técnica validada demonstrou resultados adequados de acordo com a legislação vigente. As concentrações plasmáticas e teciduais de itraconazol na dose de 200mg/dia foram 121.3 87.9 ng/mL e 5.36 5.9 μg/g a concentração plasmática média de itraconazol em pacientes usando 400mg/dia foi de 290 234 ng/mL, e as concentrações plasmáticas e teciduais médias de itraconazol nos pacientes que não apresentaram evolução clínica favorável, nas doses de 200mg, tornando-se necessário o aumento para 400mg foram 217 216 e 304 173 ng/mL ; 14.87 12.94 e 21.80 6.62 μg/g. A média das relações entre as concentrações teciduais e plasmáticas nos pacientes que apresentaram evolução clínica favorável nas doses de 200mg/dia foi 44.29 67.12 e as que não apresentaram evolução clínica favorável nas doses de 200mg/dia, sendo necessário o aumento para 400mg/dia foram 68.52 59.90 ; 71.71 38.26 respectivamente.