Made available in DSpace on 2016-06-02T20:34:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2096.pdf: 2883888 bytes, checksum: 14ee3b8f3f2831e4e82bdcea414da0f8 (MD5) Previous issue date: 2007-08-10 / Universidade Federal de Sao Carlos / This present thesis describes the development of analytical methodologies involving the HPLC-PDA-MS/MS coupling to verify the production of both polar and non-polar metabolites in orange trees produced by grafting Citrus sinensis onto Citrus limonea. By the use of such kind of method, it was possible to verify the production of both polymethoxy and glycosyl flavonoids. This method was then applied to plants with symptoms of two different diseases, Citrus Sudden Death (MSC) and Greening. Regarding this last disease, the methodologies were focused on detection of some analogous of benzoic acid like gentisic acid, orbicularin, salicylic acid and glycosyl salicylic acid. Another part of this work was focused on isolation and characterization of Alternariol (AOL) and Alternariol Monomethyl Ether (AME), mycotoxins produced in vitro by a phytopathogenic strain of Alternaria alternata and the molecule tenuazoic acid. These mycotoxins were also monitored using HPLC-DAD for 30 days in an attempt to find out a possible profile of their production. In addition, an analytical method involving HPLC-MS/MS was developed, validated and applied to quantify the amounts of AOL and AME in different parts of tangerines (i.e., on flavedo and on albedo tissues) with and without symptoms of Alternaria Brown Spot disease. The levels of such substances were about 17.4 ± 1.0 μg/kg of AOH and 3.5 ± 0.2 μg/kg of AME on flavedo. Some inhibition tests against Guinardia citricarpa, related to Black Spot disease, were also done with some isolated compounds. Five of these compounds showed to have 100% of inhibition in this test at concentration of 500 μg/mL: benzoic acid, 3,4,5-trimethoxibenzoic acid, 3,4-dimethoxibenzoic acid, and the glycosyl flavonoids naringin and rutin. / Este trabalho descreve o desenvolvimento de metodologias de análise para metabólitos polares e de polaridade intermediária presentes em laranjeiras provenientes da enxertia de Citrus sinensis sobre Citrus limonea usando HPLC-DAD-MS/MS. Através deste método, foram detectados flavonóides glicosilados e polimetoxilados. O método também foi aplicado na análise de plantas com sintomas da doença Morte Súbita dos Citros (MSC). Neste mesmo contexto foram analisadas plantas sadias e com sintomas da doença Greening com o objetivo de monitorar moléculas derivadas do ácido benzóico como o ácido gentísico, orbicularina, ácido salicílico e ácido salicílico glicosilado (ácido β-O-D glucosilsalicilico). Um outro estudo realizado neste trabalho tratou do isolamento e identificação das micotoxinas alternariol (AOH) e alternariol monometil éter (AME), além do ácido tenuazônio, produzidas in vitro pelo microrganismo fitopatogênico de citros Alternaria alternata. A produção destas micotoxinas foi monitorada através de HPLC-DAD ao longo de trinta dias de cultivo do microrganismo com a finalidade de construir uma curva de produção destas moléculas. Validou-se também um método usando HPLC-MS/MS para quantificar as micotoxinas AOH e AME nas cascas de tangerina (albedo e flavedo) com sintomas de mancha marrom de alternaria (MMA), onde encontrou-se 17.4 ± 1.0 μg/kg de AOH e 3.5 ± 0.2 μg/kg de AME no flavedo de tangerina. Por fim, foram realizados ensaios de inibição do fungo fitopatogênico de citros Guignardia citricarpa, causador da doença pinta preta, através do método de germinação de esporos em placa de poliestireno. As substâncias que apresentaram praticamente 100% de inibição foram dois derivados do ácido benzóico, o ácido 3,4,5-trimetoxibenzóico e o ácido 3,4-dimetoxibenzóico, e os flavonóides glicosilados naringina e rutina. Essas quatro substâncias, na concentração de 500 μg/mL, foram capazes de inibir por completo a germinação dos esporos de G. citricarpa.

A interação entre fungos e metais, utilizada pela biorremediação, pode resultar na remoção do metal de locais ou resíduos contaminados. Os objetivos desse trabalho foram investigar a tolerância e o comportamento de nove espécies de fungos isolados de local contaminado com Cu2+ e avaliar a capacidade de remoção de Cu2+ daquela com resistência diferenciada. A partir da inoculação em meio de cultura batata dextrose ágar acrescido de diferentes concentrações de Cu2+, o crescimento e a macromorfologia foram analisados. P. ochrochloron demonstrou tolerância distinta e foi selecionada para os testes de remoção, com variação da concentração de Cu2+ e do tempo de contato. Tanto a biomassa morta, seca e pulverizada quanto a biomassa em crescimento foram capazes de interagir com o Cu2+, embora a capacidade de remoção e a quantidade de Cu2+ removido tenham sido superiores pela biomassa morta. Ficou evidente que os fungos apresentam potencial a ser explorado, sendo importante o avanço de pesquisas nesse campo para o desenvolvimento de eficientes processos de biorremediação. / The interaction between fungi and metals, used by bioremediation, can result in metal removal from contaminated sites or waste. The aim of this work was to investigate the tolerance and the behaviour of nine fungal species isolated from a Cu2+ contaminated site and to evaluate the Cu2+ removal capacity by species with differentiated resistance. From the inoculation in potato dextrose agar culture medium added with different Cu2+ concentrations, the growth and the macromorphology were analyzed. P. ochrochloron demonstrated distinct tolerance and was selected for the removal tests, with variation of Cu2+ concentration and contact time. The dead, dry and pulverized biomass as well as the growing biomass were able to interact with Cu2+, although the removal capacity and the amount of removed Cu2+ have been higher by the dead biomass. It was evident that the fungi have potential to be explored, being the advancement of researches in this field important for the development of efficient bioremediation processes.

Estudou-se a influencia do inseticida Permetrina, do herbicida Glifosato e do fungicida Mancozeb na atividade respiratória e amilolitica de dois solos de São Paulo (Gley Húmico e Latossolo Vermelho Escuro) através de radiorrespirometria. A Permetrina não apresentou efeito inibidor em ambos os solos estudados. No solo LVE com menor teor de matéria orgânica observou-se aumento da atividade amilolitica. O Glifosfato não apresentou efeito inibidor. No solo LVE a adição do agroquímico resultou em aumento temporário das atividades amiloliticas e respiratória. A adição do Mancozeb no solo GH causou estimulo temporário da atividade respiratória e amilolitica. Em campo a estimulação persistiu. No LVE a respiração foi estimulada, sendo temporária em campo. A atividade amilolitica foi inibida no laboratório, mas não em campo. Analise estatística dos resultados não permitiu determinar correlação entre dados de campo e laboratório. Concluiu-se que os agroquímicos utilizados neste trabalho, quando aplicados individualmente nestes solos, não provocam alterações drásticas na microbiota, e que, o efeito observado depende do tipo de solo / not available

Neste trabalho foi empregada uma metodologia rápida e eficiente para a identificação de metabólitos fitotóxicos produzidos por microrganismos. O isolamento do composto bioativo foi guiado através de bioensaio com Lemna minor. A espectrometria de massas, em especial o LC-MS, foi utilizada para acelerar o processo de identificação do composto ativo. As bactérias estudadas eram simbióticas do fungo fitopatogênico Sclerotium rolfsii. Seus respectivos extratos orgânicos obtidos de culturas em meio BD (batata dextrose) foram submetidos ao ensaio de fitotoxicidade com Lemna minor. Entre cinco bactérias foi selecionada a bactéria Burkholderia sp, a qual apresentou maior atividade no ensaio de fitotoxicidade. O fracionamento por cromatografia em coluna de sílica propiciou a identificação de uma fração ativa. A fitotoxina foi caracterizada como sendo um macropentólido de 20 membros. O composto pertence à classe dos polihidroxibutiratos (PHBs). Sua estrutura foi determinada por RMN 1H, RMN 13C, HMQC, HMBC, IV, ESI-MS/MS e também por comparação com dados da literatura. Esse composto nunca foi isolado de fontes naturais. Foi descrito na literatura uma rota sintética para sua obtenção, porém esta é a primeira vez que sua atividade fitotóxica é relatada. Este trabalho mostra uma nova perspectiva para o emprego de PHBs de baixo peso molecular e apresenta uma proposta de estrutura de composto fitotóxico que pode servir de modelo para a síntese de novos herbicidas. / In this work a quick and efficient methodology was employed for the identification of phytotoxic metabolites produced by microorganisms. The isolation of the bioactive compound was guided by Lemna minor bioassay. Mass spectrometry, especially LC-MS, was used to accelerate the process of identification of the phytotoxin. All bacteria were symbiotic to the phytopatogenic fungi Sclerotium rolfsii.. The bacterium Burkholderia sp was selected among the five bacteria analyzed, due to its greater phytotoxic activity in the bioassay. The phytotoxin was characterized as a 20 member macropentolide. This compound belongs to the polyhidroxybutirates (PHBs) chemical class. Its structure was determined by NMR1H, NMR 13C, HMQC, HMBC, IV, ESI-MS/MS and HRMS. It has never been isolated from natural sources before. Although a synthetic route has been proposed in the literature this is the first time that its phytotoxic activity is reported. This work leads to a new perspective for the application of low molecular weight PHBs and propose a phytotoxic structure that can be used as a model for the synthesis of new herbicide class.

Este estudo consistiu na investigação sobre a interação dos lubrificantes empregados na usinagem de metais com a matéria orgânica natural (substâncias húmicas), a sua mobilidade no solo, a degradação microbiológica e a remoção dos mesmos do solo. Realizou-se, também, um estudo sobre as mudanças nas características dos fluidos após a sua utilização. Para o processo de degradação das amostras de fluido, submetidos aos efeitos de diferentes fatores ambientais, foram utilizados quatro tratamentos : (i) microrganismos nativos, chamada amostra controle; (ii) amostra controle com matéria orgânica proveniente de turfa; (iii) amostra controle acrescida de microrganismos existentes nos efluentes de máquinas de corte; e (iv) amostra controle com adição de microrganismos de compostagem. Para a pesquisa da degradação sem o efeito dos parâmetros climáticos, foram utilizadas amostras de solo contaminadas mantendo-se em estufa, e a inoculação dos microrganismos em meios de cultura com e sem acréscimo de fonte alternativa de carbono. Como técnicas analíticas, foram utilizadas a CG-DIC e a CG-EM. Essas técnicas são indicadas tanto para estudar a composição dos fluidos quanto dos produtos de degradação microbiológica, tendo sido otimizados métodos analíticos para serem empregados no monitoramento ambiental e de estudos de degradação. As análises por IVTF e por EF também foram empregadas na identificação e quantificação dos fluidos. Observou-se uma considerável interação dos fluidos solúveis com a matéria orgânica do solo, embora tenham se apresentado com alta mobilidade para alguns constituintes, bem como um acelerado processo de degradação durante o uso. De outro modo, os fluidos insolúveis se apresentaram mais imóveis, ficando retidos na matéria orgânica do solo, entretanto, foram mais prontamente degradados no ambiente que os solúveis. A adição de matéria orgânica e de microrganismos de compostagem acelerou o processo de degradação para todos os fluidos de corte investigados. / This study is an investigation of the interaction of lubricants employed in metal machining and natural organic matter (humic substances), their mobility in soil, microbial degradation and their removal from the soil. Also, was performed study of changes in characteristic on fluids after their use. On degradation process from fluid samples, contaminated soils submitted to different environment factors, were used four treatments : (i) native microorganisms named control sample; (ii) control sample added by organic matter from peat; (iii) control sample added by microorganisms existing in flowing out from cutting machines; and (iv) control sample with addition of microorganisms from composting. For degradation research by no effect from climate parameters were used sample of contaminated soil been investigated in stove and microorganisms inoculation in culture mean with and without addition of alternative carbon source. As analytical techniques were used GC-FID and GG-MS. These techniques are both indicated for fluid composition studies and microbial degradation product. Analytic methods had been optimized to be employed on environmental monitoring and degradation studies. The FTIR and espectrofluorimetric methods were used for the fluid identification and quantification. Were observed a notable interaction between soluble fluids and soil organic matter, thought it had been verified high mobility for some compounds as well an accelerated process of degradation during their use. Otherwise, insoluble fluids were more immobile been restrained in soil organic matter, nevertheless, were readily degraded in environment than soluble ones. Organic matter and composting microorganisms\' addition accelerated the degradation process for all cutting fluids investigated.

Estudou-se a influencia do inseticida Permetrina, do herbicida Glifosato e do fungicida Mancozeb na atividade respiratória e amilolitica de dois solos de São Paulo (Gley Húmico e Latossolo Vermelho Escuro) através de radiorrespirometria. A Permetrina não apresentou efeito inibidor em ambos os solos estudados. No solo LVE com menor teor de matéria orgânica observou-se aumento da atividade amilolitica. O Glifosfato não apresentou efeito inibidor. No solo LVE a adição do agroquímico resultou em aumento temporário das atividades amiloliticas e respiratória. A adição do Mancozeb no solo GH causou estimulo temporário da atividade respiratória e amilolitica. Em campo a estimulação persistiu. No LVE a respiração foi estimulada, sendo temporária em campo. A atividade amilolitica foi inibida no laboratório, mas não em campo. Analise estatística dos resultados não permitiu determinar correlação entre dados de campo e laboratório. Concluiu-se que os agroquímicos utilizados neste trabalho, quando aplicados individualmente nestes solos, não provocam alterações drásticas na microbiota, e que, o efeito observado depende do tipo de solo / not available

Em 2015, de acordo com a Organização Mundial da Saúde, o total de mortes na população humana foi de 52,5 milhões de pessoas, em que as doenças infecciosas mais especificamente, infecções respiratórias - aparecem em terceiro lugar no ranking de causas de morte. No total foram 3,5 milhões de mortes ou 6,7% do total, demonstrando um aumento significativo quando comparado com a pesquisa anterior, realizada em 2011, na qual as doenças infecciosas foram responsáveis por 3,2 milhões ou 5,9% do total. Das doenças infecciosas, podemos destacar a Malária, HIV/AIDS, Hepatite, Tuberculose - que aparece em 8º lugar neste mesmo ranking, e a Hanseníase - que é uma importante preocupação no Brasil. A tuberculose, causada pelo Mycobacterium tuberculosis sendo uma das principais causas de morte por doenças infecciosas na população humana, já apresenta cepas resistentes ao tratamento denominadas Cepas multirresistentes (MDR) e Cepas extremamente resistentes (XDR). Enquanto que a hanseníase, causada pelo Mycobacterium leprae, apesar de não ser letal, causa a invalidez dos portadores e o Brasil possui o segundo maior número de casos desta doença. Outro patógeno de importância médica é a Pseudomonas aeruginosa que causa sérias doenças em pacientes com baixa imunidade, principalmente aqueles em hospitais em especial, pacientes com queimaduras. A via do Folato tem despertado a atenção das indústrias farmacêuticas para o desenvolvimento de novos fármacos, uma vez que está via oferece seletividade para estes novos inibidores. Isso se deve ao fato de que o tetrahidrofolato é um componente essencial para os organismos procariotos, e apenas eles, precisam realizar a produção de novo desta substância, enquanto que os eucariotos, o adquirem através da alimentação. Entretanto, o surgimento de cepas resistentes não só reforça a necessidade do desenvolvimento de novos fármacos, mas também a compreensão dos mecanismos de resistências destas cepas. O presente trabalho tem como objetivo obter informações biofísicas e estruturais de três enzimas da via do folato, a 7,8 dihidroneopterina aldolase, dihidropteroato sintase e dihidrofolato redutase. Além disso, esse trabalho teve como objetivo a compreensão do mecanismo de resistência através da indução de mutações nos códons 53 e 55 na enzima dihidropteroato sintase (DHPS), caracterização estrutural preliminar da enzima DHNA e estudos estruturais da enzima DHFR em complexo com cicloguanil. Assim, neste trabalho foi realizado a clonagem gênica da região codificando do gene para a enzima DHNA e expressão da proteína recombinante, purificada e utilizada em ensaios biofísicos. Além disso a mutagênese sítio dirigida foi feita com o intuito de se produzir DHPSs mutantes (T70S e P72R), na qual foram utilizadas nos ensaios de ITC, fluorescência, e cristalização, o que possibilitou demonstrar que a resistência de M. leprae às sulfas pode ser devido a troca de uma prolina por uma arginina na posição 72. Por fim, para DHFR, foi possível obter sua estrutura em complexo com cicloguanil que possibilitou avaliar as diferenças estruturais entre a forma aberta e fechada desta enzima. Além disso, confirmamos que o grupo nicotidamida tem essencial importância para a interação com os ligantes. / In 2015, according to the World Health Organization, the total number of deaths in the human population was 52.5 million people, in which infectious diseases - specifically, respiratory infections - appear third in the ranking of causes of death. In total, 3.5 million deaths or 6.7% of the total occurred, showing a significant increase when compared to the previous survey conducted in 2011, in which infectious diseases accounted for 3.2 million or 5.9% of the total total. Of the infectious diseases, we can highlight Malaria, HIV / AIDS, Hepatitis, Tuberculosis - which appears in 8th place in this same ranking, and Leprosy - which is an important concern in Brazil. Tuberculosis, caused by Mycobacterium tuberculosis is one of the main causes of death due to infectious diseases in the human population, and already presents resistant strains to the treatment - denominated multiresistant strains (MDR) and extremely resistant strains (XDR). While leprosy, caused by Mycobacterium leprae, despite not lethal, causes the invalidity of patients and Brazil has the second largest number of cases for this disease. Another pathogen of medical importance is Pseudomonas aeruginosa, which causes serious illness in patients with low immunity, especially those in hospitals - especially patients with burns. The Folate pathway has brought the attention of the pharmaceutical industries to the development of new drugs, since this pathway offers selectivity for these new inhibitors. This is since Tetrahydrofolate is an essential component for prokaryote organisms, and only they, need to perform the new production of this cofactor, while Eukaryotes acquire it through food. However, the emergence of resistant strains, not only reinforces the need for the development of new drugs, but also the understanding of the mechanisms of resistance of these strains. The aim of the present work was to obtain biophysical and structural information of three folate pathway enzymes, 7,8 dihydroneopterin aldolase, Dihydropteroate synthase and Dihydrofolate reductase. In addition, this work aimed to understand the mechanism of resistance through the induction of mutations at the codons 53 and 55 in the enzyme dihydropteroate synthase (DHPS), preliminary structurally characterize the DHNA enzyme and structurally study the enzyme DHFR in complex with cycloguanil. Thus, the cloning of the coding region of the gene for DHNA and the expression of the recombinant protein, purification and biophysical characterization were performed in this work. In addition, site-directed mutagenesis was performed aiming of producing mutant DHPSs (T70S and P72R), which were used in ITC, fluorescence, and crystallization tests to demonstrate that M. lepreae resistance to sulfas may be due to the exchange of a proline to an arginine at position 72. Finally, for DHFR, it was possible to obtain its structure in complex with cycloguanil which made it possible to evaluate the structural differences between the open and closed conformation of this enzyme. In addition, we have confirmed that the nicotidamide group has a crucial importance for interaction with the ligands.

Lentinula edodes é um cogumelo comestível que possui qualidades nutricionais, terapêuticas e medicinais. Além disso, muitos estudos na área médica têm comprovado que o cogumelo possui efeito antibiótico sobre microrganismos patogênicos ao homem. Na área agrícola, alguns trabalhos realizados com o cogumelo demonstraram possíveis efeitos no controle de fitopatógenos. O presente trabalho teve como objetivo demonstrar a produção de substâncias antimicrobianas por L. edodes ativas sobre Colletotrichum sublineolum, agente causal da antracnose em sorgo, Alternaria solani, responsável pela pinta preta do tomateiro, Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae, agente causal da mancha bacteriana em maracujazeiro e Tobacco mosaic virus (TMV), causador de mosaico foliar em fumo. Para os testes com C. sublineolum e A. solani foram utilizados extratos aquosos de L. edodes, obtidos a partir de basidiocarpos desidratados em pó, dos isolados LE JAB-K, LE 96/22, LE 96/17 e LE 95/01. Os resultados evidenciaram que o extrato aquoso de basidiocarpos do isolado LE 96/22 inibiu o crescimento micelial in vitro e a formação de apressórios por C. sublineolum. Já os extratos dos isolados LE JAB-K e LE 95/01 apresentaram efeito inibitório na germinação de conídios e na formação de apressórios do patógeno. Em contrapartida, os extratos aquosos de basidiocarpos dos diferentes isolados de L. edodes não apresentaram efeito inibitório na germinação dos conídios e no crescimento micelial de A. solani. Por sua vez, os extratos aquosos de basidiocarpos a 20% (v/v) e o filtrado do crescimento micelial de L. edodes, misturados à suspensão de X. axonopodis pv. passiflorae, exibiram redução na multiplicação bacteriana. Todos os extratos aquosos de basidiocarpos dos diferentes isolados testados na multiplicação da bactéria mostraram-se termolábeis, quando autoclavados a 121 °C por 20 min. Em experimentos com plantas de fumo, os extratos aquosos de basidiocarpos dos isolados LE 96/17 e LE 96/22 adicionados à suspensão contendo partículas do TMV reduziram significativamente a ocorrência de lesões locais nas folhas. O extrato aquoso do isolado LE 96/22 apresentou compostos antivirais de natureza termoestável. Finalmente, o extrato aquoso de basidiocarpos do isolado LE 96/22, o qual apresentou a maior atividade antimicrobiana, foi purificado parcialmente por cromatografia de troca aniônica (CTA). O pico V apresentou efeito inibitório no crescimento micelial de C. sublineolum. Por sua vez, a multiplicação de X. axonopodis pv. passiflorae foi inibida pelos picos IV, V e VII. Já os picos I, II e III, obtidos em CTA por gradiente linear de NaCl e o pico I obtido em CTA pelo método "step wise", reduziram significativamente a infectividade do TMV em plantas de fumo. Com base nesses resultados, evidencia-se a ação de preparações de L. edodes sobre fitopatógenos, o que demonstra o uso potencial do mesmo no controle de agentes causais de doenças infecciosas em plantas. / Lentinula edodes is an edible mushroom that has nutritious, therapeutical and medicinal qualities. Moreover, many studies in the medical area have shown that the mushroom exhibits antibiotic effects on pathogenic microorganism to the man. In the agricultural area, work carried out with the mushroom has demonstrated its possible effects to control phytopathogens. The objective of the present work was to demonstrate the productionof antimicrobial substances of L. edodes active on Colletotrichum sublineolum, causal agent of anthracnose in sorghum, Alternaria solani, responsible for the black spot of the tomato plants, X. axonopodis pv. passiflorae, causal agent of the bacterial spot in passion fruit plants and on Tobacco mosaic virus, causal agent of the mosaic in tobacco plants. For the test with C. sublineolum and A. solani aqueous extracts were obtained from dehydrated fruiting bodies from the shiitake isolates LE JAB-K, LE 96/22, LE 96/17 and LE 95/01. The results showed that the fruiting body aqueous extract from isolate LE 96/22 inhibited micelial growth and appressorium formation by C. sublineolum. The aqueous extracts of isolates LE JAB-K and LE 95/01 exhibited inhibitory effect on conidium germination and on formation of appressorium by the patogen. On the other hand, the extracts of the different isolates of L. edodes did not exhibit inhibitory effect on conidium germination and micelial growth of A. solani. The aqueous extracts of fruiting bodies at 20% (v/v) concentration and filtrate of the micelial growth of L. edodes, when mixed to the suspension of X. axonopodis pv. passiflorae, exhibited decreased on bacterial multiplication. All the aqueous extracts of fruiting bodies tested from the different isolates in the bacterial multiplication were thermobile, when heated at 121 °C for 20 min. In experiments with tobacco plants, the aqueous extracts of fruiting bodies of isolates LE 96/17 and LE 96/22 when added to the suspension of TMV reduced the amount of local lesions on the leaves. When the aqueous extracts of LE 96/22 were heated the antiviral nature was not lost. Finally, the aqueous extract of fruiting bodies from isolate LE 96/22 that presented major antimicrobial activity was partially purified by anion exchange chromatography (AEC). The peak V exhibited inhibitory effect on micelial growth of C. sublineolum. Multiplication of X. axonopodis pv. passiflorae was inhibited by peaks IV, V and VII. Regarding TMV infectivity, peaks I, II and III, obtained in CTA through linear gradient of NaCl, and peak I also obtained through CTA by the method "step wise", significantly reduced virus infectivity in tobacco plants. Based upon these results, it is shown that preparations of L. edodes can interfere whith phytopathogen multiplication, demonstrating its potential to control plant diseases.

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Levando isto em consideração o objetivo deste trabalho é avaliar a ação antimicrobiana de extrato aquoso e óleo essencial de alecrim (Rosmarinus officinalis) e gengibre (Zingiber officinale) frente a Escherichia coli e Staphylococcus aureus em carne mecanicamente separada de frango (CMS).Realizou-­se as análise da CIM e CBM sendo que para E. coli utilizando o extrato aquoso de alecrim verificou-­se, uma CIM de 5,0 mg/mL e CBM >20 mg/mL, enquanto o extrato aquoso de gengibre uma CIM de 20 mg/mL e CBM >20 mg/mL. Para o óleo essencial de alecrim constatou-­se uma CIM de 1,25 mg/mL e CBM de 2,5 mg/mL, enquanto o óleo de gengibre uma CIM de 1,25 mg/mL e CBM de 5,0 mg/mL. Para S. aureus utilizando o extrato aquoso de alecrim, obteve-­se uma CIM e CBM de 5,0 mg/mL, enquanto o extrato aquoso de gengibre uma CIM e CBM de 20 mg/mL. Para o óleo essencial de alecrim constatou-­ se uma CIM de 0,625 mg/mL e CBM de 1,25 mg/mL, enquanto o óleo de gengibre uma CIM de 1,25 mg/mL e CBM de 2,5 mg/mL. A partir destes resultados pode-­se dizer que os mesmos demonstram-­se promissores em relação a ação bactericida e bacteriostática. Em posse dos resultados da CIM e CBM, descartou-­se o uso dos extratos aquosos, em função da baixa atividade detectada na CIM e CBM, então seguiu-­se os experimentos somente com os óleos essenciais, em seguida, realizou-­ se as análises de contagem de colônias (UFC) das amostras. Para estas análises verificou-­se que o óleo de alecrim e gengibre frente as bactérias Escherichia coli (ATCC 25922) e Staphylococcus aureus (ATCC 6538P), não apresentaram efeito bacteriostático e nem bactericida. Diante de todos os resultados constatou-­se que a CIM e CBM não podem ser utilizados como parâmetro microbiológico para matrizes cárneas, pois o comportamento bactericida e bacteriostáticos não se equivaleram, isso para as condições dos experimentos realizados nesta pesquisa. / The industry of meat products, you need products that have a high demand for sales, however, consumers in search of a healthier life is demanding products with convenience, quality, safety and they are nutritious. One of the ingredients used for the manufacture of meat products is nitrite. This improves the color, enhance flavor, prevent lipid oxidation and is an important bactericidal agent in the food industry. However, the nitrite in high concentrations may be carcinogenic. Taking this into account the objective of this study is to evaluate the antimicrobial activity of aqueous extract and essential oil of rosemary (Rosmarinus officinalis) and ginger (Zingiber officinale) against Escherichia coli and Staphylococcus aureus in mechanically deboned chicken meat (CMS). It was performed the analysis of MIC and MBC where in E. coli using the aqueous extract of rosemary was found a MIC of 5.0 mg/mL and MBC> 20 mg/mL, while the aqueous extract of ginger a 20 MIC mg/mL and MBC> 20 mg/mL. For rosemary essential oil found to be a MIC of 1.25 mg/mL and MBC of 2.5 mg/mL, where as the MIC one ginger oil 1.25 mg/mL and CBM 5.0 mg/mL. For S. aureus using the aqueous extract of rosemary, obtained an MIC and MBC of 5.0 mg/mL while the aqueous extract of ginger one MIC and MBC 20 mg/mL. For rosemary essential oil found to be a MIC of 0.625 mg/mL and MBC of 1.25 mg/mL, where as the MIC one ginger oil 1.25 mg/mL and MBC of 2.5 mg/mL. From these results it can be said that they show promise in relation to bactericidal and bacteriostatic action. In possession of the results of MIC and MBC, was discarded the use of aqueous extracts, due to the low activity detected in MIC and MBC, then the experiments followed only with essential oils, then was held the analyzes of colony counts (CFU) of the samples. For this analysis it was found that rosemary oil and ginger front bacteria Escherichia coli (ATCC 25922) and Staphylococcus aureus (ATCC 6538P), and showed no bacteriostatic or bactericidal effect. Before all the results it was found that the MIC and MBC can not be used as microbiological parameter to cárneas arrays, because the bactericidal and bacteriostatic behavior is not equaled, that for the conditions of the experiments in this study.

O objetivo deste estudo foi avaliar a suplementação de um probiótico composto por cepas de Bacillus subtilis e Bacillus licheniformis, fornecidos via sucedâneo lácteo, no que se refere ao escore e pH fecal, contagem de microrganismos intestinais, parâmetros sanguíneos e desempenho geral dos animais. Foram utilizados 24 animais da raça Holandês que receberam 4L/dia de sucedâneo comercial (15PB:15EE), além de livre acesso a água e concentrado inicial. O desaleitamento ocorreu na 8ª semana de vida. Os animais foram distribuídos em delineamento de blocos casualizados, em dois tratamentos: 1) Controle - sem a suplementação de probiótico; 2) Suplementação de 2g/d (1,6 x 109 UFC) de Bacillus subtilis e Bacillus licheniformis via sucedâneo lácteo. Semanalmente foram realizadas pesagens e aferições de medidas corporais (altura de cernelha, perímetro torácico e largura de garupa); e colheitas de sangue para determinação de glicose, proteína total, ureia e albumina, além de determinação de hematócrito. Foram colhidas amostras semanalmente para contagem de bactérias ácido láticas e enterobactérias e determinação de pH fecal. O monitoramento do consumo de concentrado e do escore fecal foi realizado diariamente. O peso corporal, o ganho de peso médio diário e as medidas corporais não foram alteradas (P>0,05) pela suplementação do probiótico contendo Bacillus subtilis e Bacillus licheniformis; muito embora tenham apresentado efeito significativo de idade dos animais (P<0,001). O escore fecal, pH fecal e consumo de concentrado diário também não foram afetados pela suplementação com probiótico. No entanto, o consumo de concentrado e o pH fecal sofreram influência da idade em resposta ao crescimento natural dos bezerros. A contagem de bactérias ácido láticas foi maior que número de enterobactérias durante todo o período (P<0,05). Apenas as enterobactérias sofreram efeito da idade (P<0,05), enquanto as bactérias ácido láticas permaneceram variando, porém dentro de um padrão constante. Os parâmetros sanguíneos também não foram afetados pela suplementação com probiótico (P>0,05) mas todos, com a exceção da albumina, tiveram influência da idade (P<0,001). A suplementação com o probiótico contendo Bacillus subtilis e Bacillus licheniformis via sucedâneo não apresentou benefícios no desempenho ou no metabolismo de bezerros leiteiros, bem como não reduziu a ocorrência de casos de diarreia. / The objective of this study was to evaluate the supplementation of a probiotic containing strains of Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis, supplied via milk replacer, with regard to fecal score and pH, intestinal microorganisms count, blood parameters and overall performance of the animals. Twenty-four Holstein calves were utilized and received 4L/d of liquid diet consisting of commercial milk replacer (20CP:15EE), and had free access to water and starter concentrate. Weaning occurred at the 8th week of age. Animals were distributed in a randomized block design, in the following treatments: 1) Control - without supplementation with probiotic, 2) Supplementation: 2g/d of Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis (1.6 x 109 CFU), via milk replacer. Every week calves were weighted and body measurements were taken (hip width, withers height and heart girth). Blood samples were drawn weekly for determination of hematocrit, glucose, total protein, urea and albumin. Fecal samples were weekly collected for lactic acid bacteria and enterobacteria couting and fecal pH determination. Concentrate starter intake and fecal scores were monitored daily. Body weight, average daily gain, and corporal measurements were not affected (P>0,05) by the supplementation of probiotic; however, presented a significant age effect (P<0,001). The fecal score, fecal pH and starter intake were not affected by probiotic supplementation (P>0.05). However, starter intake and fecal pH were affected by age due to calves\' natural growth. The acid lactic bacteria count was higher than the count of enterobacteria during the whole evaluation period. Only enterobacteria were affected by the age of animals, while acid lactic bacteria remained constant despite little variations. Blood parameters were also not affect by supplementation of probiotic (P>0.05), but all of them, except albumin concentrations, were influenced by age (P<0,001). The supplementation with probiotic containing Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis via milk replacer presented no benefits in dairy calves performance or metabolism and did not reduced the occurrence of diarrhea.