Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T03:22:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 297619.pdf: 2619671 bytes, checksum: 25f4a713b2be158829ff851b6eefd645 (MD5) / Objetivo: Avaliar a resistência de união (µTBS) à dentina e a nanoinfiltração na interface adesiva de dentes restaurados pelas técnicas adesivas da dentina saturada com água ou com etanol sob pressão pulpar simulada. Métodos: Quarenta e oito terceiros molares hígidos foram selecionados e processados para o teste de µTBS da dentina. Os dentes selecionados foram divididos em 8 grupos experimentais, de acordo com o sistema adesivo utilizado [Adper Single Bond Plus, 3M ESPE (SB); Adper Scotchbond Multi-Purpose, 3M ESPE (MP); All-Bond 2, BISCO (AB) e One-Step Plus, BISCO (OS)]: 4 grupos restaurados pela técnica da dentina saturada com água e os demais pela técnica da dentina saturada com etanol (A). Todos os dentes foram restaurados com uma resina composta micro-híbrida (Z250, 3M ESPE) sob 20 cm de pressão pulpar simulada. Após 24 h ou envelhecimento (E) artificial (20.000 ciclos térmicos seguidos por 600.000 ciclos de carga mecânica), as amostras foram seccionadas nas direções X/Y para se obterem filetes com 0,6±0,2 mm² de área de adesão. Todos os espécimes foram fraturados por tensão a uma velocidade de 1,0 mm/min. Os dados foram submetidos aos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney (a=0,05). Além disso, 2 dentes por grupo foram processados para avaliar a nanoinfiltração por meio da microscopia eletrônica de transmissão (TEM) e microscopia confocal de varredura laser (CLSM). Resultados: O grupo SBA apresentou os maiores valores de µTBS (38,4 MPa), e o grupo OS(E), os menores valores (2,5 MPa). Após o envelhecimento artificial, os grupos SBA e MPA apresentaram os melhores resultados de µTBS, 35,63 Mpa e 30,80 MPa respectivamente. As imagens de CLSM e TEM mostram nanoinfiltração dentro da camada híbrida de todos os sistemas adesivos, independentemente da técnica adesiva utilizada. Conclusão: A técnica da dentina saturada com etanol aumentou a resistência de união dos adesivos à base de álcool e água (SBA e MPA), contudo a nanoinfiltração não foi eliminada. / Objectives: To study long-term microtensile bond strengths (ìTBS) and nanoleakage into dentin under simulated pulpal pressure using water- or ethanol-wet bonding techniques. Methods: 48 recently extracted molars were selected and processed for dentin ìTBS. The selected teeth were randomly assigned to 8 experimental groups [Adper Single Bond Plus, 3M ESPE (SB); Adper Scotchbond MP, 3M ESPE (MP); All Bond 2, BISCO (AB); and One- Step Plus, BISCO (OS)], where 4 groups were restored using water-wet bonding and the other half restored using ethanol-wet bonding technique (A). The specimens were restored with a microhybrid resin composite (Z250, 3M ESPE). All restorative procedures were performed under 20cm of simulated pulp pressure. The specimens were tested after hours and after artificial aging (E) by 20,000 thermal cycles, and 600,000 mechanical load cycles. Teeth were sectioned in X/Y directions to obtain sticks with a cross section of 0.6±0.2 mm². All sticks were fractured by tension at a crosshead speed of 1.0 mm/min. The data were submitted to Kruskal-Wallis and Mann-Whitney Tests (á=0.05). In addition, two specimens per group were processed for nanoleakage using TEM and CLSM. Results: Group SBA presented the highest ìTBS values (38.4 MPa) while the group OS(E) lowest ìTBS values (2.5 MPa). After the artificial aging groups SBA and MPA presented the best ìTBS values, 35.63 MPa and 30.80 MPa respectively. CLSM and TEM images showed intense nanoleakage within the hybrid layer for all adhesives, irrespective of the used technique. Conclusions: Ethanol-wet bonding technique improved bond strengths of ethanol- and water-based adhesives (SBA and MPA); however, nanoleakage was not eliminated.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2013-02-19T17:12:31Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO COMPLETA Final-2011.pdf: 13824393 bytes, checksum: c510c0328a108faa0f62ed4228a0215f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-02-19T17:12:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO COMPLETA Final-2011.pdf: 13824393 bytes, checksum: c510c0328a108faa0f62ed4228a0215f (MD5) Previous issue date: 2011 / A esquistossomose é uma das parasitoses mais prevalentes no mundo e o Schistosoma mansoni Sambon, 1907 é o trematódeo agente da esquistossomose intestinal, endêmica em países da América do Sul, África, Oriente Médio e Caribe. Em Angola, os primeiros dados da esquistossomose foram registrados em 1897 na província do Bengo, mas a prevalência do S. mansoni é, no entanto pouco notificada. No âmbito da cooperação internacional Fiocruz (Brasil)-Fesa (Angola) que visa capacitar no Brasil profissionais da área de Saúde de Angola, este trabalho está voltado para estudos sobre a caracterização ultraestrutural e diagnóstico laboratorial do S. mansoni. Os objetivos incluíram: estudar a topografia de adultos de S. mansoni; caracterizar os tubérculos do tegumento do macho por microscopia eletrônica de varredura, de transmissão e por microscopia a laser confocal; descrever um método alternativo para exame de fezes, baseado no princípio de Kato-Katz, utilizando o fixador SAF e comparar o método Kato-Katz utilizado para o diagnóstico da esquistossomose com o método alternativo. A topografia dos machos evidenciou a presença de tubérculos na superfície dorsal do corpo que em cortes ultrafinos aparecem como evaginações tegumentares que abrem espaço entre as fibras musculares elevando as membranas basal e apical. Entre estas membranas que revestem os tubérculos, há vesículas eletrondensas, eletronlúcidas e corpos alongados. As vesículas formadas na região interna do tegumento, próximo ao núcleo das células são encontradas nos canais citoplasmáticos que chegam à superfície externa do sincício. Os espinhos dos tubérculos aparecem sobre a membrana basal, próximos às vesículas eletrondensas. No tegumento há organelas sensoriais contendo bulbo basal e projeção apical com cílio e corpos basais. O canal ginecóforo apresenta espinhos pequenos, uniformes e organelas sensoriais uniciliadas. A camada entre a membrana basal e a apical é mais homogênea e os espinhos aparecem de forma uniforme no tegumento sem a formação de tubérculos. Utilizando o diagnóstico laboratorial pelo Kato-Katz não foi possível visualizar os ovos no momento da montagem da lâmina (0h), mas a incidência de visualização aumentou em 24h. Na técnica modificada do SAF, os ovos foram identificados imediatamente e a visualização diminuiu ao longo do tempo. Comparando em função do tempo, as médias da análise de ovos por grama de fezes (OPG) das três infecções nas duas técnicas, observou-se que o número de ovos encontrados com a técnica de SAF (0h) foi maior em 7,7% do que com Kato-Katz (24 h). Não houve diferença significativa entre os resultados obtidos com SAF (0h) e Kato-Katz (24 h). O mesmo resultado foi verificado com 12 horas para as duas técnicas. No segundo experimento o OPG pelo SAF (1h) foi 13,1% maior do que Kato-Katz (24h) de leitura. Comparando os resultados obtidos nas duas técnicas com 24 h de leitura, o OPG foi 32,5% maior na técnica de Kato-Katz do que SAF. O método experimental baseado no fixador SAF é eficiente para diagnóstico laboratorial alternativo, simples, rápido, de baixo custo e eficiente para o diagnóstico de esquistossomose mansônica. Este estudo trará novos avanços no diagnóstico desta doença em Angola. / Schistosomiasis is one of the most prevalent parasitic diseases in the world and the trematode Schistosoma mansoni Sambon, 1907 is the agent of intestinal schistosomiasis, endemic in countries of South America, Africa, Middle East and the Caribbean. In Angola, the infection was first recorded in 1897 in the Bengo province, however the prevalence of S. mansoni remains underestimated. In the framework of an international cooperation between Fiocruz (Brazil)-Fesa (Angola), which aims to train health professionals from Angola in Brazil, this work is focused on ultrastructural studies and laboratory diagnosis of S. mansoni. The objectives included: to study the topography of adult S. mansoni; to characterize the tubercles of the tegument of the male by scanning and transmission electron microscopy and laser confocal microscopy; to describe an alternative method for stool examination, based on the principle of Kato-Katz method, using the SAF fixative, and compare the Kato- Katz method used for the diagnosis of schistosomiasis with the alternative method. The topography of the males showed the presence of tubercles on the dorsal surface of the body that in ultrathin cuts appear like tegumentary evaginations that interweave between the muscle fibers raising the basal and apical membranes. Between these membranes that cover the tubercles, there are electrondense and electronlucid vesicles, and elongated bodies. The vesicles formed in the inner region of the integument near the cell nucleus are found inside the cytoplasmic channels reaching the outer surface of the syncytium. The spines of the tubercles emerge over the basal membrane, near the electrondense vesicles. The integument has sensory organelles containing a basal bulb and apical projection with cilium and basal bodies. The ginecoforous channel presents uniform small spines, and uniciliate sensory organelles. The layer between the basal and apical membrane is more homogeneous with spines appearing evenly, without forming tubercles. The laboratory diagnosis using the Kato-Katz method was not successful to show the eggs at time (0h), but the display increased at 24h after the sampling. The modified technique of the SAF, showed the eggs immediately and display decreased over time. Comparing both methods by time, the mean number of eggs per gram of feces (EPG) by two techniques of the three infections, we found that the number of eggs found with the technique of SAF (0h) was higher by 7.7% than with Kato-Katz (24 h). There was no significant difference between the results obtained with SAF (0h) and Kato-Katz (24 h). The same result was observed for 12 hours with both techniques. In the second experiment, the EPG by SAF (1h) was 13.1% higher than Kato-Katz (24h). Comparing the results of the two techniques with 24 hours of sampling, the EPG was 32.5% higher in the Kato-Katz technique than SAF. The experimental method based on the SAF fixative is an efficient alternative for laboratory diagnosis, being simple, fast, inexpensive and efficient for the diagnosis of schistosomiasis. This study will bring new advances in the diagnosis of this disease in Angola.

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-10. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:48Z : No. of bitstreams: 1 000831222_20160531.pdf: 1099173 bytes, checksum: 4a45a0351ffd871fce7287d849abb3bf (MD5) Bitstreams deleted on 2016-06-02T14:22:29Z: 000831222_20160531.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-02T14:23:09Z : No. of bitstreams: 1 000831222.pdf: 2560916 bytes, checksum: c639d16c837c4a7b0bc077a069a9fa68 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / Paracocciodioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, causada por fungo dimórfico do gênero Paracoccidioides (Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides lutzii), sendo endêmica na América Latina. Nos últimos anos, estudos têm enfocado o papel dos neutrófilos (PMNs) na imunidade, uma vez que a literatura enfatiza o dinâmico envolvimento dessas células durante a defesa do hospedeiro contra diversos micro-organismos. Recentemente, foi demonstrado que neutrófilos podem utilizar uma nova estratégia para destruir patógenos chamada NETose, um tipo de morte celular diferente dos bem elucidados mecanismos de apoptose e necrose. Essa via envolve a liberação de redes extracelulares constituídas de conteúdo nuclear e granular por PMNs ativados. É proposto que as NETs destruam micro-organismos que não sejam fagocitados pelos neutrófilos, por possuírem tamanho ou morfologia maiores que as células, o que pode ocorrer com o Pb, uma vez que esse fungo assume essas características. Nesse contexto, os objetivos desse estudo foram identificar a presença das NETs tanto in vivo como in vitro, analisando lesões tegumentares de pacientes com PCM e culturas de PMNs do sangue periférico de pacientes e indivíduos saudáveis desafiados com diferentes cepas de P. brasiliensis. Fragmentos de biópsias foram marcados com anticorpos anti-histona (Texas-Red), anti-elastase (FITC), e corados com DAPI para avaliação por microscopia confocal, e com H&E para análise histopatológica. PMNs do sangue periférico de pacientes e indivíduos saudáveis foram isolados e desafiados com P. brasiliensis (Pb18 e Pb265) para avaliação de NETs por microscopia de varredura, microscopia confocal e quantificação dessas estruturas por Picogreen dsDNA kit. As imagens de microscopia confocal das biópsias revelaram a presença de constituintes das NETs, localização de DNA extracelular corado com DAPI, com ... / Paracoccidiodomycosis (PCM), an endemic systemic mycosis in Latin America, is caused by the thermodimorphic fungus of Paracoccidioides genus (Paracoccidioides brasiliensis (Pb) and Paracoccidoides lutzii). Recently, works in PCM have focused the role of neutrophils (PMNs), since literature has demonstrated the dynamic involvement of these cells in host defense against microorganisms. Studies have shown that PMNs could use a novel strategy to destroy microorganisms (NETosis), a type of neutrophil death distinct from apoptosis and necrosis. This mechanism involves the release of extracellular traps by activated neutrophils, known as neutrophil extracellular traps (NETs). It has been proposed that NETs may destroy microorganisms that were not phagocytosed by neutrophils, and this could be proposed for Pb, since the fungus yeast can present different sizes. In this context, the objectives of this study were identify the presence of NETs in vivo and in vitro, analyzing samples of patients with PCM by different methodologies. Tissue sections from formalin-fixed biopsies were stained with DAPI, anti-elastase (FITC) and anti-histone (Texas-Red) for confocal immunofluorescence microscopy analysis, and with Hematoxylin-Eosin (H&E) for histopathology. Neutrophil cultures were challenged with two isolates of Pb (Pb18 and Pb265), analyzed by scanning electron microscopy and NETs were quantified by the Picogreen dsDNA kit. The images revealed the presence of NETs constituents, nuclear and extracellular localization of DNA, co-localization of elastase and histone, confirmed by the overlay of the three stains. Histopathology showed the presence of Pb and inflammatory infiltrate with high number of neutrophils on the site of the lesion and extracellular DNA (hematoxylin positive) indicating NETs. Both isolates were able to induce NET release in vitro in similar levels. Thus, P. brasiliensis (Pb18 and Pb265) is able to induce NETs formation by ... / CNPq: 480486/2011-5 / FAPESP: 2011/18855-7 / FUNDUNESP: 006637/11-DFP

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:24:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-10. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:48:10Z : No. of bitstreams: 1 000845702_20180120.pdf: 420550 bytes, checksum: c8157ced2528f61f2d07a208c18d603f (MD5) Bitstreams deleted on 2018-01-29T11:44:58Z: 000845702_20180120.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-01-29T11:45:45Z : No. of bitstreams: 1 000845702.pdf: 26123214 bytes, checksum: f7fe9f4bcbb4d061d089a48d81ecacc7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Peptídeos bioativos são de grande interesse como substitutos de antibióticos e quimioterápicos convencionais já que, alguns deles apresentam atividades antimicrobiana, antifúngica e/ou anticâncer. Eles são predominantemente catiônicos e sua atividade tem se mostrado ser modulada por interações eletrostáticas, contribuições hidrofóbicas e por características elásticas da membrana, o seu alvo. O peptídeo mastoparano Polybia MP1 (MP1) possui dois resíduos ácidos (D2 e D8) e três resíduos básicos (K4, K5 and K11), que somados ao C terminal amidado conferem a ele uma carga elétrica líquida relativamente baixa, Q= +2. Nesta tese, foi analisada a importância da sequência de aminoácidos do MP1, da sua carga elétrica líquida e da sua hidrofobicidade média na interação com distintas membranas modelo, já que a presença de resíduos ácidos é rara dentre os peptídeos bioativos e além disto, o MP1 apresenta elevadas atividades antimicrobiana e anticâncer sem ser hemolítico. Para entender a sua especificidade e o seu mecanismo de ação em células bacterianas e de câncer, a atividade e a afinidade do MP1 foi acessada através de espectroscopia de fluorescência e de dicroísmo circular, medidas de potencial eletrocinético e de espalhamento de luz dinâmico e microscopia confocal. Estas técnicas permitiram a observação da estruturação do peptídeo, da sua partição da água para a interface de membranas modelo, da sua atividade lítica e da agregação dos lipossomos devido a sua adição. Assim, foi possível estimar as contribuições energéticas envolvidas no sistema além das dimensões dos danos causados pelo MP1 na superfície da membrana. MP1 mostrou que sua baixa carga elétrica líquida e a presença de dois resíduos ácidos na sua sequência de aminoácidos apresentam um papel importante em modular a sua estruturação e a sua atividade em uma ampla gama de composições lipídicas. Isso é atribuído... / Bioactive peptides are of high interest as substitutes of conventional drugs since some of them present antimicrobial, antifungal and/or anticancer action. They are predominantly cationic and it has been shown that their activity is modulated by electrostatic interactions, hydrophobic contributions and the elastic features of the membranes their target. The mastoparan peptide Polybia MP1 (MP1) possesses two acidic residues (D2 and D8) and three basic ones (K4, K5 and K11), which together with the amidation of the C-terminal confers to it a relatively low net charge Q=+2. In this thesis, we analyzed the importance of the MP1 amino acid sequence, charge and hidrophobicity to the interaction with distinct model membranes, since the presence of acidic residues is a rare characteristic among the bioactive peptides and, beyond this, MP1 presents high antimicrobial and anticancer activities without being hemolytic. In search of understand its specificity and mechanism of action for bacteria and cancer cells, the activity and affinity of MP1 was assessed through circular dichroism and fluorescence spectroscopy, electrophoretic and dynamic light scattering measurements, and confocal microscopy. These techniques allowed the observation of the peptide structuration, the peptide partitioning from water to the model membranes interface, the peptide lytic activity, and the liposome aggregation due to peptide addition. From this, it was possible estimate the energetic contributions involved in the system, besides the dimension of the damages caused by MP1 on the membranes surface. MP1 showed that its low net charge and the presence of two acidic residues play an important role in modulating its structuration and activity in a wide range of lipid compositions, by equilibrating electrostatic and non-electrostatic contributions giving basis to understand its action as bioactive...

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-26Bitstream added on 2014-12-02T11:21:11Z : No. of bitstreams: 1 000738257_20160326.pdf: 483238 bytes, checksum: 55b8baebdfcf5e968a88fb759b4e6be6 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-03-28T13:37:45Z: 000738257_20160326.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-28T13:38:48Z : No. of bitstreams: 1 000738257.pdf: 2384428 bytes, checksum: 2f5315a3ccb28b42496282478231b8fd (MD5) / Este estudo tem como objetivo avaliar o efeito de laser de Er: YAG (L) e ponta diamantada (B) sobre a força de resistência ao microcisalhamento (MPa) e o efeito sobre a interface adesiva de adesivos condiciona e lava (CL) – Adper Scotchbond Multiuso e autocondicionante (CS) – Adper EasyOne, ambos da 3M ESPE. Foram constituídos 4 grupos segundo instrumentos e adesivos: B_CL (controle); B_CS; L_CL e L_CS. 60 incisivos bovinos foram randomicamente divididos nos experimentos e grupos: 40 para força de resistência ao microcisalhamento (n=10) e 20 para morfologia da interface adesiva (6 para mensuração da espessura da camada hibrida (CH) e comprimento de tags (t) por MLCF (n=3); 12 para morfologia da interface adesiva por MEV (n=3) e 2 para ilustração o efeito dos instrumentos sobre dentina por MEV (n=1). Para o ensaio de microcisalhamento foram confeccionados 4 cilindros de resina composta Filtek Z350 XT – 3M ESPE (0,7 mm de diâmetro por 1 mm de altura e área de adesão de 0,38 mm2) sobre cada superfície de dentina tratada pelos instrumentos e adesivos. O ensaio de resistência de união ao microcisalhamento foi realizado em máquina de ensaio universal EMIC 2000, com célula de carga de 500 Kgf e velocidade de 0,5 mm/min. A interface adesiva foi caracterizada pela espessura da camada hibrida (CH) e comprimento de tags (t) em μm, com o software UTHSCSA Imagetool. Os valores de resistência adesiva ao microcisalhamento foram L_CL 34,10 ± 19,07 MPa, B_CL 24,26 ± 9,35 MPa, L_CN 33,18 ± 12,46 MPa, B_CN 21,24 ± 13,96 MPa. Anova two-way resultou em diferença estatisticamente significativa somente para instrumentos (p=0,047). Teste de Mann-Whitney identificou os instrumentos determinam diferenças significativas para de espessura de CH e comprimento de (t). Para adesivos estas diferenças só foram observadas para (t). Pode-se concluir que 1) Laser de Er:YAG resulta em maiores valores de... / This study aims to evaluate the effect of Er: YAG (L) and bur (B) on the strength of resistance microshear (MPa) and the effect on the interface adhesive stickers and wash conditions (CL) - Adper Scotchbond Multipurpose and self (CS) - Adper EasyOne, both from 3M ESPE. Were formed 4 groups according tools and adhesives: B_CL (control); B_CS; L_CL and L_CS. 60 bovine incisors were randomly divided into experimental and groups: 40 to force microshear resistance (n = 10) and 20 for the adhesive interface morphology (6 to measure the thickness of the hybrid layer (CH) and length of tags (t) by MLCF (n = 3); 12 to the adhesive interface morphology by SEM (n = 3) and 2 to illustrate the effect of the instruments on dentine by SEM (n = 1). Microshear For testing four cylinders were fabricated composite Filtek Z350 XT - 3M ESPE (0.7 mm in diameter and 1 mm in height and area of adhesion of 0.38 mm) on each dentin surface treated by tools and adhesives. Testing of bond strength was performed in microshear FDMS universal testing machine 2000 with a load cell of 500 kgf and a speed of 0.5 mm / min. Adhesive interface was characterized by layer thickness hybrid (HC) and length of tags (t) in nm, with software UTHSCSA ImageTool. Values of bond strength to microshear L_CL were 34.10 ± 19.07, 24.26 ± 9.35 B_CL, L_CN 33.18 ± 12.46, 21.24 ± 13.96 B_CN. Anova two- way resulted in statistically significant only for instruments (p = 0.047). Mann-Whitney identified instruments to determine significant differences CH thickness and length (t). adhesives for these differences were only observed for (t). It can be concluded that 1) Laser Er: YAG results in higher bond strength to the microshear, regardless of the adhesive system (CL and CS). 2) The tags have no significant effect on bond strength to microshear. 3) The adhesive interface is affected by both instruments for cavity preparation and the type of adhesive system...

Orientador: Osmir Batista de Oliveira Junior / Banca: Mirian Lacalle Turbino / Banca: Edson Alves de Campos / Resumo: Este estudo tem como objetivo avaliar o efeito de laser de Er: YAG (L) e ponta diamantada (B) sobre a força de resistência ao microcisalhamento (MPa) e o efeito sobre a interface adesiva de adesivos condiciona e lava (CL) - Adper Scotchbond Multiuso e autocondicionante (CS) - Adper EasyOne, ambos da 3M ESPE. Foram constituídos 4 grupos segundo instrumentos e adesivos: B_CL (controle); B_CS; L_CL e L_CS. 60 incisivos bovinos foram randomicamente divididos nos experimentos e grupos: 40 para força de resistência ao microcisalhamento (n=10) e 20 para morfologia da interface adesiva (6 para mensuração da espessura da camada hibrida (CH) e comprimento de tags (t) por MLCF (n=3); 12 para morfologia da interface adesiva por MEV (n=3) e 2 para ilustração o efeito dos instrumentos sobre dentina por MEV (n=1). Para o ensaio de microcisalhamento foram confeccionados 4 cilindros de resina composta Filtek Z350 XT - 3M ESPE (0,7 mm de diâmetro por 1 mm de altura e área de adesão de 0,38 mm2) sobre cada superfície de dentina tratada pelos instrumentos e adesivos. O ensaio de resistência de união ao microcisalhamento foi realizado em máquina de ensaio universal EMIC 2000, com célula de carga de 500 Kgf e velocidade de 0,5 mm/min. A interface adesiva foi caracterizada pela espessura da camada hibrida (CH) e comprimento de tags (t) em μm, com o software UTHSCSA Imagetool. Os valores de resistência adesiva ao microcisalhamento foram L_CL 34,10 ± 19,07 MPa, B_CL 24,26 ± 9,35 MPa, L_CN 33,18 ± 12,46 MPa, B_CN 21,24 ± 13,96 MPa. Anova two-way resultou em diferença estatisticamente significativa somente para instrumentos (p=0,047). Teste de Mann-Whitney identificou os instrumentos determinam diferenças significativas para de espessura de CH e comprimento de (t). Para adesivos estas diferenças só foram observadas para (t). Pode-se concluir que 1) Laser de Er:YAG resulta em maiores valores de... / Abstract: This study aims to evaluate the effect of Er: YAG (L) and bur (B) on the strength of resistance microshear (MPa) and the effect on the interface adhesive stickers and wash conditions (CL) - Adper Scotchbond Multipurpose and self (CS) - Adper EasyOne, both from 3M ESPE. Were formed 4 groups according tools and adhesives: B_CL (control); B_CS; L_CL and L_CS. 60 bovine incisors were randomly divided into experimental and groups: 40 to force microshear resistance (n = 10) and 20 for the adhesive interface morphology (6 to measure the thickness of the hybrid layer (CH) and length of tags (t) by MLCF (n = 3); 12 to the adhesive interface morphology by SEM (n = 3) and 2 to illustrate the effect of the instruments on dentine by SEM (n = 1). Microshear For testing four cylinders were fabricated composite Filtek Z350 XT - 3M ESPE (0.7 mm in diameter and 1 mm in height and area of adhesion of 0.38 mm) on each dentin surface treated by tools and adhesives. Testing of bond strength was performed in microshear FDMS universal testing machine 2000 with a load cell of 500 kgf and a speed of 0.5 mm / min. Adhesive interface was characterized by layer thickness hybrid (HC) and length of tags (t) in nm, with software UTHSCSA ImageTool. Values of bond strength to microshear L_CL were 34.10 ± 19.07, 24.26 ± 9.35 B_CL, L_CN 33.18 ± 12.46, 21.24 ± 13.96 B_CN. Anova two- way resulted in statistically significant only for instruments (p = 0.047). Mann-Whitney identified instruments to determine significant differences CH thickness and length (t). adhesives for these differences were only observed for (t). It can be concluded that 1) Laser Er: YAG results in higher bond strength to the microshear, regardless of the adhesive system (CL and CS). 2) The tags have no significant effect on bond strength to microshear. 3) The adhesive interface is affected by both instruments for cavity preparation and the type of adhesive system... / Mestre

Orientador: Luciana Alarcão Dias-Melicio / Banca: Angela Maria Victoriano de Campos Soares / Banca: Ronel Luciano Mamoni / Resumo: Paracocciodioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, causada por fungo dimórfico do gênero Paracoccidioides (Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides lutzii), sendo endêmica na América Latina. Nos últimos anos, estudos têm enfocado o papel dos neutrófilos (PMNs) na imunidade, uma vez que a literatura enfatiza o dinâmico envolvimento dessas células durante a defesa do hospedeiro contra diversos micro-organismos. Recentemente, foi demonstrado que neutrófilos podem utilizar uma nova estratégia para destruir patógenos chamada NETose, um tipo de morte celular diferente dos bem elucidados mecanismos de apoptose e necrose. Essa via envolve a liberação de redes extracelulares constituídas de conteúdo nuclear e granular por PMNs ativados. É proposto que as NETs destruam micro-organismos que não sejam fagocitados pelos neutrófilos, por possuírem tamanho ou morfologia maiores que as células, o que pode ocorrer com o Pb, uma vez que esse fungo assume essas características. Nesse contexto, os objetivos desse estudo foram identificar a presença das NETs tanto in vivo como in vitro, analisando lesões tegumentares de pacientes com PCM e culturas de PMNs do sangue periférico de pacientes e indivíduos saudáveis desafiados com diferentes cepas de P. brasiliensis. Fragmentos de biópsias foram marcados com anticorpos anti-histona (Texas-Red), anti-elastase (FITC), e corados com DAPI para avaliação por microscopia confocal, e com H&E para análise histopatológica. PMNs do sangue periférico de pacientes e indivíduos saudáveis foram isolados e desafiados com P. brasiliensis (Pb18 e Pb265) para avaliação de NETs por microscopia de varredura, microscopia confocal e quantificação dessas estruturas por Picogreen dsDNA kit. As imagens de microscopia confocal das biópsias revelaram a presença de constituintes das NETs, localização de DNA extracelular corado com DAPI, com ... / Abstract: Paracoccidiodomycosis (PCM), an endemic systemic mycosis in Latin America, is caused by the thermodimorphic fungus of Paracoccidioides genus (Paracoccidioides brasiliensis (Pb) and Paracoccidoides lutzii). Recently, works in PCM have focused the role of neutrophils (PMNs), since literature has demonstrated the dynamic involvement of these cells in host defense against microorganisms. Studies have shown that PMNs could use a novel strategy to destroy microorganisms (NETosis), a type of neutrophil death distinct from apoptosis and necrosis. This mechanism involves the release of extracellular traps by activated neutrophils, known as neutrophil extracellular traps (NETs). It has been proposed that NETs may destroy microorganisms that were not phagocytosed by neutrophils, and this could be proposed for Pb, since the fungus yeast can present different sizes. In this context, the objectives of this study were identify the presence of NETs in vivo and in vitro, analyzing samples of patients with PCM by different methodologies. Tissue sections from formalin-fixed biopsies were stained with DAPI, anti-elastase (FITC) and anti-histone (Texas-Red) for confocal immunofluorescence microscopy analysis, and with Hematoxylin-Eosin (H&E) for histopathology. Neutrophil cultures were challenged with two isolates of Pb (Pb18 and Pb265), analyzed by scanning electron microscopy and NETs were quantified by the Picogreen dsDNA kit. The images revealed the presence of NETs constituents, nuclear and extracellular localization of DNA, co-localization of elastase and histone, confirmed by the overlay of the three stains. Histopathology showed the presence of Pb and inflammatory infiltrate with high number of neutrophils on the site of the lesion and extracellular DNA (hematoxylin positive) indicating NETs. Both isolates were able to induce NET release in vitro in similar levels. Thus, P. brasiliensis (Pb18 and Pb265) is able to induce NETs formation by ... / Mestre

A espectroscopia de correlação de fluorescência (FCS) é uma das diferentes técnicas de análise por imagens de alta resolução espacial e temporal de biomoléculas em concentrações extremamente baixas. Ela se tornou uma técnica extremamente poderosa e sensível em áreas como bioquímica e biofísica. Como uma técnica bem estabelecida, ela é utilizada para medir concentrações locais de biomoléculas, através da marcação com moléculas fluorescentes. Coeficientes de difusão e constantes cinéticas também podem ser medidos através de FCS assim como detecção de molécula única. Ela também pode dar informação precisa sobre interações de antígeno-anticorpo, ácidos nucleicos e proteínas. Através de uma combinação de marcadores de alto rendimento quântico, fontes de luz estável (lasers), detecção ultrassensível e microscopia confocal, é possível realizar medidas de FCS em volumes de fentolitros (fL) e em concentrações de nanomolar (nM) em soluções aquosas ou em células vivas. Em contraste com outras técnicas de fluorescência, a sensibilidade da FCS aumenta com a diminuição da concentração do fluoróforo marcador, porque o parâmetro de interesse não é a intensidade de emissão de fluorescência, mas sim as flutuações espontâneas da fluorescência. Durante o tempo em que a partícula ou molécula atravessa o volume de medida pode ocorrer mudanças conformacionais e reações químicas e fotofísicas que alteram as características de emissão do fluoróforo e causam flutuações no sinal detectado. Estas flutuações são então monitoradas e transformadas em uma curva de autocorrelação, por intermédio de um software comercial que emprega um modelo físico apropriado para FCS. Em nosso estudo, utilizamos um marcador comercial (ALEXA 488®) para marcar proteínas. Primeiramente utilizamos a técnica de FCS para medir concentrações extremamente baixas de marcadores fluorescentes. Também realizamos um experimento testando a influência da viscosidade do meio na difusão livre do fluoróforo, assim como as melhores condições em que temos um melhor sinal de FCS. Por fim, estudamos a difusão de proteínas marcadas (PUC II e IV) em meio aquoso (PBS) e no interior de células. / Fluorescence correlation spectroscopy (FCS) is one of the many different modes of high-resolution spatial and temporal analysis of extremely low concentrated biomolecules. It has become a powerful and sensitive tool in fields like biochemistry and biophysics. As a well established technique, it is used to measure local concentrations of fluorescently labeled biomolecules, diffusion coefficients, kinetic constants and single molecule studies. Through a combination of high quantum yield fluorescent dyes, stable light sources (lasers), ultrasensitive detection and confocal microscopy is possible to perform FCS measurements in femtoliters volumes and nanomolar concentrations in aquous solution or in live cells. Unlike with other fluorescence technics, its sensibility increases with the decrease of dye concentrarion, because the main factor is not the emission intensity itself. Instead this, spontaneous statistical fluctuation of fluorescence becomes the main factor in FCS analisys. During the time that the conjugated-dye cross the volume detection can occur conformational changes, chemical reaction and photophysical processes that can change the emission properties of the dye and, then, change the detected sinal. This fluctuations are tracked and changed into a autocorrelation curve, by a specific software, appropriate to perform FCS analisys. In our study, we use comercial dye (Alexa 488) to label proteins. Firstly, we applied FCS to measure extremally diluted concentrations of dyes (~1 nM). We have performed experiments testing the influence of the viscosity medium in the free difusion of the dyes and the optical apparatus and conditions that result in the best FCS signal. We also have studied protein diffusion (PUC II e IV) in aquous medium (PBS) and toward the inner of the cells.

Imagens multiespectrais são utilizadas em diferentes aplicações, que vão desde sensoriamento remoto a processos médicos. No caso de imagens multiespectrais oriundas de microscopia confocal de varredura à laser (Confocal Laser Scanning Microscopy-CLSM), a extração da informação se inicia pela conversão das assinaturas espectrais, em uma imagem RGB. Esta imagem é a referência para a seleção da região de interesse, da qual se obtém a assinatura espectral média, originada do arquivo multiespectral (LSM). Mesmo utilizando um padrão muito bem estabelecido de conversão, alguns pontos devem ser considerados: i) o processo de conversão reduz a informação, a uma ordem de 10-145%; ii) a cor é uma experiência sensorial, subjetiva e pessoal, interferindo na seleção da região de interesse e; iii) a assinatura é obtida pela média espectral, da região de interesse, selecionada manualmente.Assim, esta tese de doutorado propõem um método de mapeamento e visualização das informações de imagens multiespectrais, combinando um algoritmo de agrupamento não supervisionado(kmeans) e um algoritmo que define uma paleta de cores coerentes com a informação espectral das regiões mapeadas. Aplicou-se o método em três casos de estudos de tecidos vegetais: i) no pré-tratamento de paredes celulares da cana-de-açúcar; ii) na plasticidade foliar do Jacaranda caroba e; iii) no uso de assinaturas espectrais na classificação de plantas do Cerrado. Os resultados demonstraram que o método é bastante robusto, permitindo de forma inovadora a: visualização, análise e comparação de imagens multiespectrais qualitativa e quantitativamente, e que seu uso é viável em qualquer área de pesquisa que utilize imagens multiespectrais. / Multispectral images are used in different applications, ranging from remote sensing images to medical images. In the case of multispectral images derived from confocal laser scanning microscopy (CLSM), the extraction of information begins with the conversion of spectral signatures in an RGB image. This is the reference for selecting the region of interest, from which it gets the average spectral signature, originated from multispectral file (LSM). Even using a very well established pattern of conversion, some points should be considered: i) the conversion process reduces the information on the order of 10-145%; ii) the color is a sensory experience, subjective and personal, interfering in the selection of the interest region and; the signature is obtained by the spectral average, from interest region which is selected manually. Thus, this doctoral thesis proposes a method of mapping and visualization of multispectral imaging information, combining an unsupervised clustering algorithm (kmeans) and an algorithm that defines a consistent color palette with the spectral information of mapped regions. The proposed method was applied in three cases plant tissue studies: i) in the pre-treating the cell walls of sugarcane; ii) in the leaf plasticity of Jacaranda caroba; iii) in the use of spectral signatures in the Cerrado plant classification. The results showed that the proposed method is quite robust. It presents innovation to the visualization and analysis of multispectral images and makes possible a qualitative and quantitative comparison of a group of multispectral images. Besides that, its use is feasible in any area of research, which are using multispectral images.

Avaliou-se a adaptação da obturação às paredes do canal, a penetrabilidade dos cimentos nos túbulos dentinários, a qualidade da obturação e a capacidade seladora utilizando-se quatro cimentos obturadores a base de resina epóxi (AH Plus, AcroSeal, AdSeal e Sealer 26), quando submetidos a agitação ultrassônica no momento da inserção do cimento. Foram utilizados 84 caninos humanos recém extraídos, unirradiculados e que foram divididos em dois grupos A e B (n=40), sendo que cada grupo foi dividido em quatro subgrupos de 10 dentes cada, conforme o cimento empregado: A1 e B1 - AH Plus, A2 e B2 Acroseal, A3 e B3 Adseal e A4 e B4 Sealer 26. O preparo biomecânico foi efetuado utilizando-se de instrumentação rotatória com sistema ProTaper, determinando um batente apical com o instrumento F5 (50.05) no comprimento real de trabalho. Foi realizada, em todos os dentes, a padronização do forame até o instrumento Protaper F3. Em seguida, os cimentos foram corados com a Rodamina B. Os canais foram então obturados por meio da técnica da condensação lateral, sendo os canais do grupo A previamente preenchidos pelos cimentos obturadores e submetidos à agitação ultrassônica enquanto que os do grupo B foram considerados como controle e não foram submetidos a agitação. Os dentes então foram submetidos ao teste de infiltração de fluídos após 7 e 30 dias de realizada a obturação. Após esse período, foram realizadas três secções transversais a 2, 4 e 6 mm do ápice e as imagens das secções foram obtidas em estereomicroscópio e microscopia a laser confocal. Para análise entre grupos, no período de 7 e 30 dias em relação ao teste de infiltração apical, foi selecionado o teste não-paramétrico de Kruskall-Wallis e Dunn (p<0.05). Para as demais análises, foi utilizado o teste não-paramétrico Mann Whitney e Wilcoxon. Os resultados indicaram que a agitação ultrassônica aumentou a infiltração apical de forma significante para o cimento AH Plus no período de 7 dias. No que diz respeito à penetração de cimento na dentina, houve um aumento significante para os cimentos AHPus, Acrosela e Sealer 26 no terço médio, e para o AH Plus e Sealer no terço cervical. Com relação às fendas, a agitação ultrassônica favoreceu menor presença desta para o AH Plus na porção apical, e para todos os cimentos na região média e cervical. Concluiu-se que a agitação ultrassônica não proporcionou melhorias no selamento apical e favoreceu maior penetração de cimento na dentina e menor presença de fendas na região média e cervical. / The aim of this study was to evaluate the adaptation of the filling of the canal walls, the penetration of cements in the dentinal tubules, the quality of the filling and sealing capacity utilizing four different epóxic based sealers (AH Plus, Acroseal, AdSeal and Sealer 26), when submitted to ultrasonic agitation at the time of the obturation. Eighty four extracted uniradicular human canines were utilized, and they were divided into two experimental groups A and B (n = 40), and each group was divided into four groups of 10 teeth each, in accordance with the cement used: A1 and B1 - AH Plus, A2 and B2 - Acroseal, A3 and B3-Adseal and A4 and B4 - Sealer 26. The biomechanical preparation was performed utilizing rotary instrumentation with theProTaper system, determining an apical stop with a F5 instrument (50.05) in the real working length. The standardization of the foramen was performed on all teeth until the Protaper F3 instrument. The cements were stained with Rhodamine B. Next the canals were filled by the lateral condensation technique. The canals of group A were previously filled by the sealers and submitted to ultrasonic agitation while those in Group B were considered as the controls and were not subjected to agitation. The teeth were then submitted to testing for leakage of fluids 7 and 30 days after the obturation. After this period, three transverse cross sections were performed at 2, 4 and 6 mm from the apex and the images of the sections were obtained in a stereomicroscope and confocal laser microscopy. For the analysis between the groups, in the period of 7 and 30 days, in relation to the apical leakage test, was selected the nonparametric Kruskal-Wallis and Dunn tests (p <0.05). For the other analyzes, the nonparametric Mann Whitney and Wilcoxon tests was used. The results indicated that the ultrasonic agitation significantly increased apical leakage for the AH Plus in the period of 7 days. With regard to the penetration of the cement into the dentin, there was a significant increase for the AHPus, Acroseal and Sealer 26 cements in the middle third, and the AH Plus and Sealer 26 in the cervical third when the ultrasonic agitation was performed. Regarding the cracks, the ultrasonic agitation favored a smaller presence for the AH Plus in the apical portion, and for all cements in the middle region and cervical. It was concluded that the ultrasonic agitation did not improve the apical seal and favored greater penetration of cement into the dentin and less presence of cracks in the middle and cervical region.