BARROS, Adriana Rolim Campos. Efeito pró-erétil de uma fração rica em alcalóides isolada de aspidosperma ulei markgr.: estudo in vivo e in vitro. 2005. 199 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2005. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-05-18T13:17:51Z No. of bitstreams: 1 2005_tese_arcbarros.pdf: 4389941 bytes, checksum: 67b2caf832f33240f6686a349b5d6ca0 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-05-30T14:16:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005_tese_arcbarros.pdf: 4389941 bytes, checksum: 67b2caf832f33240f6686a349b5d6ca0 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-30T14:16:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005_tese_arcbarros.pdf: 4389941 bytes, checksum: 67b2caf832f33240f6686a349b5d6ca0 (MD5) Previous issue date: 2005 / The genus Aspidosperma (Apocyanaceae) is known to be rich in yohimbine type of indol alkaloids. This study was aimed to evaluate the alkaloid rich fraction (SF3-5) obtained from Aspidiosperma ulei Markgr. root bark for its general toxicity, behavioral effects in mice and a possible proerectile activity. Acute toxicity tests were performed to determine the LD50 in mice and LC50 with Artemia sp. Behavioral effects were studied in the tests of open-field, hole-board, plus-maze, rota-rod, forded-swimming, and on barbiturate-induced sleeping time. In vitro studies with the fraction were carried out using mouse vas deferens and the rabbit and human corpus cavernous tissues. The estimated values of i.p. LD50 in mice and LC50 with Artemia sp. were in the order of 400 mg/kg, and 3.94 microg/ml, respectively. Behavioral tests in mice revealed a general stimulant activity of SF3-5 on CNS but demonstrated no motor impairment in rota-rod test. At 25 mg/kg intraperitoneal injection of SF3-5, penile erections were evidenced in 75% of the mice. This effect was completely abolished by pretreatment with clonidine (alfa2 –adrenoceptor agonist) or haloperidol (dopaminergic antagonist) and only partially inhibited by L-NAME (nitric oxide synthase inhibitor) and by methylene blue (soluble guanylate cyclase inhibitor). SF3-5 also abrogated the fluoxetine-induced depression in sexual behavior. In mouse vas deferens, contractile effects induced by electrical field stimulation or noradrenaline but not induced by ATP were inhibited by SF3-5 (1-64 microg/ml). In both human and rabbit isolated corpus cavernosum preparations pre-contracted by phenylephrine, high potassium or PGF2alfa, SF3-5 (1-300 microg/ml) caused concentration-dependent relaxation. Our results indicate that SF3-5 manifests pro-erectile activity possibly involving both central (dopaminergic, adrenergic and nitriergic systems) and peripheral (relaxant effect on corpus cavernosal smooth muscle, probably involving Ca+2 flux) mechanisms. These data also suggest that Aspidiosperma ulei Markgr. can be explored as an alternative for the treatment of erectile dysfunction. The study further warrants the identification and isolation of the active chemical compound present in SF3-5, responsible for the pharmacological activity. / O gênero Aspidosperma (Apocynaceae) é conhecido por ser rico em alcalóides indólicos do tipo ioimbina. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a toxicidade, efeitos sobre o comportamento e um possível pró-erétil de uma fração rica em alcalóides isolada da casca da raiz de Aspidosperma ulei Markgr. (SF3-5). Os testes de toxicidade aguda foram realizados para determinar a DL50 em camundongos e a CL50 em Artemia sp. Os efeitos sobre o comportamento foram estudados nos testes do campo aberto, placa perfurada, labirinto em cruz elevado, “rota-rod”, natação forçada e tempo de sono induzido por barbitúrico. Os estudos in vitro com a fração foram realizados em canal deferente de camundongos e corpos cavernosos de coelhos e humanos. Os valores estimados para a DL50 (i.p.) em camundongos e CL50 em Artemia sp. foram na ordem de 400 mg/Kg e 3,94 microg/mL, respectivamente. Os testes comportamentais em camundongos revelaram uma atividade estimulante de SF3-5 sobre o SNC mas não demonstraram incoordenação motora no teste do “rota-rod”. A injeção intraperitoneal de 25 mg/Kg de SF3-5 induziu a ereção peniana em 75 % dos camundongos. Este efeito foi completamente abolido pelo pré-tratamento com clonidina (agonista receptores adrenérgicos alfa2) ou haloperidol (antagonista dopaminérgico) e somente parcialmente inibido pelo L-NAME (inibidor da óxido nítrico sintase) e pelo azul de metileno (inibidor da guanilato ciclase solúvel). SF3-5 também reverteu a depressão do comportamento sexual induzida por fluoxetina. No canal deferente de camundongos, as contrações induzidas pela estimulação por campo elétrico ou noradrenalina, mas não as induzidas por ATP, foram inibidas por SF3-5 (1 – 64 microg/mL). SF3-5 (1 – 300 microg/mL) promoveu relaxamento concentração-dependente nas preparações de corpos cavernoso humanos e de coelhos pré-contraídas com fenilefrina, potássio ou PGF2alfa. Nossos resultados indicam que SF3-5 manifesta atividade pró-erétil possivelmente envolvendo mecanismos centrais (sistemas dopaminérgico, adrenérgico e nitrérgico) e periférico (efeito relaxante do músculo liso cavernoso aparentemente envolvendo o fluxo de Ca+2). Estes dados também sugerem que Aspidosperma ulei Markgr. pode ser explorada como uma alternativa para o tratamento da disfunção erétil. São necessários estudos futuros para identificar e isolar o composto químico ativo presente em SF3-5 responsável pela atividade farmacológica.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Ingestão alimentar e sono são controlados por diversos mecanismos regulatórios comuns, incluindo fatores metabólicos, autonômicos, endócrinos e ambientais, integrados pelo hipotálamo. A privação de sono paradoxal (SP) resulta em alterações metabólicas, tais como: aumento de consumo de ração, perda de peso e diminuição das concentrações plasmáticas de leptina e de hormônios anabólicos, sugerindo aumento de gasto energético e ativação do eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (HPA), favorecendo catabolismo. O aumento de ingestão é evidenciado pela expressão aumentada de neuropeptídeo Y (NPY), um potente sinal orexígeno hipotalâmico, juntamente com achados de aumento da concentração de grelina, hormônio gástrico que induz a ingestão. Dados recentes mostraram uma grande quantidade de resíduos encontrada no fundo da lata de PSP, sugerindo que os animais privados poderiam estar roendo, mas não necessariamente ingerindo mais ração. A orexina (ORX) ou hipocretina participa tanto do controle do metabolismo energético como do sono, suas maiores concentrações são encontradas na vigília e altos níveis de ORX são encontrados no líquor de ratos durante a PSP. No entanto, tem sido proposto que este peptídeo promove atividade motora preferencialmente à vigília. Baseado nestes dados, o objetivo deste estudo foi analisar a ativação de neurônios hipotalâmicos nos núcleos ARC, PVN e LHA, em animais privados de sono paradoxal, por meio da medida de imunorreatividade para a proteína Fos, um marcador de ativação precoce de genes, e de neuropeptídeos relacionados (NPY, ORX e CRH); estudar alterações no eixo HPA, acompanhando a evolução temporal dos hormônios ACTH e CORT e, determinar a quantidade de ração ingerida durante os 4 dias de privação de SP. A privação de SP promoveu perda de peso, além de promover o achatamento do padrão circadiano de ingestão, devido ao aumento de consumo durante o período diurno; o consumo total diário, no grupo experimental, apresentou-se aumentado apenas no Dia 4. A porcentagem de resíduos em relação ao consumo permaneceu constante durante todo o período experimental, com exceção da Noite 3. Foi observado aumento da atividade do eixo HPA, pela expressão aumentada de Fos e CRH no PVN, além de maiores concentrações plasmáticas de ACTH e CORT nos animais privados de SP. Foi encontrado aumento na expressão de ORX e Fos na LHA ao final do período experimental. Não foram encontradas diferenças na expressão de Fos ou NPY no núcleo ARC. Baseado nos resultados observados sugere-se que a privação de SP promoveu alterações significativas no metabolismo periférico e a ativação de núcleos hipotalâmicos envolvidos no comportamento alimentar e na resposta de estresse. / Food intake and sleep are controlled by overlapping regulatory mechanisms integrated by the hypothalamus. Paradoxical sleep (PS) deprivation leads to loss of body weight, increased metabolic rate and increased hypothalamicpituitary-adrenal (HPA) axis activation. Initially, there were reports of increased food intake during PS deprivation; however, recent studies have reported a large waste of chow in the water chamber, suggesting that PSdeprived rats may be chewing, but not necessarily consuming more food. The present study investigated changes in the immunoreactivity of Fos and of neuropeptides (CRH, NPY, and ORX) in hypothalamic nuclei related to energetic metabolism, to sleep regulation and to stress response. In addition, chow intake and plasma levels of ACTH and corticosterone were determined. PS deprivation resulted in the typical weight loss, in addition there was a blunted circadian pattern of food intake, due to an increase in food consumption during daytime; total daily consumption increased only on Day 4. The percentage of spillage found in the bottom of the chamber was constant throughout the procedure, except on night 3. HPA axis activity was increased as observed by the immunoreactivity of both Fos and CRH in the PVN and also by higher levels of ACTH and CORT in the experimental group. ORX and Fos immunoreactivity in the LHA were markedly increased at the end of PS deprivation. No changes were observed in either Fos or NPY immunoreactivity in the ARC. The present results suggest that metabolic changes induced by PS deprivation involve the activation of ORX neurons in the lateral hypothalamus and of CRH neurons in the paraventricular nucleus of the hypothalamus. / CEPID: 98/14303-3 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Orientadores: Claudio Aparecido Casatti, Roelf Justino Cruz Rizzolo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T07:48:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andrade_JoaoCleberTheodorode_D.pdf: 4798610 bytes, checksum: b8d22ab273e3f97ec7f0b085497c5842 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O hormônio concentrador de melanina (MCH) e a orexina A (OXA) são neuromediadores expressos em neurônios distribuídos no diencéfalo, principalmente na área hipotalâmica lateral, que emitem projeções para inúmeras regiões do neuroeixo. Esses neuropeptídeos exercem potente ação orexigênica, estimulando a ingestão alimentar e o controle do balanço energético. Em vista disso, propusemos analisar esses sistemas neuropeptidérgicos no núcleo motor dorsal do nervo vago, um importante grupamento neuronal pré-motor parassimpático responsável pelas modulações da motilidade e secreção do tubo gastrointestinal, que indiretamente colaboram na ingestão alimentar. Para esses propósitos, foram empregados os métodos de transporte neuronal retrógrado e imunoistoquímica. Os principais dados advindos desse estudo neuroanatômico permite concluir que o núcleo motor dorsal do nervo vago apresenta uma distribuição heterogênea da inervação imunorreativa a OXA (OXA-ir) e ao MCH (MCH-ir), com preponderância da inervação OXA-ir. Os neurônios desse núcleo parassimpático que enviam fibras nervosas para a parte abdominal do esôfago, estômago e segmento proximal do duodeno, recebem inúmeros contatos morfológicos dos terminais nervosos OXA-ir ou ao MCH-ir, sugestivos de contatos sinápticos. Finalmente, as aferências diencefálicas OXA-ir ou ao MCH-ir para o DMV, foram elucidadas, revelando que as partes dorsais e laterais da área hipotalâmica lateral são os principais locais de origem dessa inervação neuropeptidérgica. / Abstarct: Melanin-concentrating hormone (MCH) and orexin-A (OXA) are neuromediators expressed in neurons distributed in the diencephalum, mainly in the lateral hypothalamic area, projecting nerve fibers to several parts of the central nervous system. These neuropeptides exert potent orexigenic activity, increasing feeding and controlling the energetic balance. Consequently, these neuropeptidergic systems were evaluated in the dorsal motor nucleus of the vagus nerve, a fundamental premotor parasympathetic nucleus that modulates the motility and secretion of the gastrointestinal tract, indirectly collaborating in the feeding behaviour. For these purposes retrograde neuronal tracing and immunohistochemistry methods were used. The main results from this neuroanatomical study showed that the dorsal motor nucleus of the vagus nerve exhibits a heterogeneous rostro-caudal MCH- or OXA-innervation patterns, being the latter more significant. Parasympathetic neurons that send nerve fibers to subdiafragmatic esophagus, stomach and proximal duodenum receive MCH- or OXA-immunoreactive nerve endings like synapses. Finally, the MCH or OXA-immunoreactive diencephalic afferents to dorsal motor nucleus of the vagus nerve were elucidated. These afferents are mainly from dorsal and lateral parts of the lateral hypothalamic area. / Doutorado / Anatomia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

As teneurinas (TENs) são de proteínas de transmembrana com significante expressão no sistema nervoso central (SNC). Foi verificado que o último éxon dos genes das TENs codifica um peptídeo com elevada identidade ao fator liberador de corticotropina (CRF) sendo este denominado de peptídeo associado ao terminal carboxila da teneurina (TCAP-1 a 4). Estudos mostram que TCAP-1 controla o comportamento emocional possivelmente por modular as ações mediadas pelo (CRF). A distribuição do TCAP-1 no SNC de primatas poderia subsidiar os seus efeitos funcionais e as possíveis aplicações terapêuticas. O presente trabalho analisou a imunorreatividade e a expressão do RNA mensageiro do TCAP-1 no encéfalo de primatas não-humanos. Cortes frontais do SNC de macacos da espécie Cebus apella (n=3) foram selecionados e utilizados nas técnicas de hibridização in situ e de imuno-histoquímica. Neurônios imunorreativos e que expressam o RNAm para TCAP-1 foram encontrados principalmente em áreas que estão direta ou indiretamente envolvidas na modulação da resposta ao estresse e ansiedade. / Teneurins are transmembrane proteins expressed mainly in the central nervous system (CNS). The last exon of the teneurins exhibits a peptide sequence with high homology to corticotrophin-releasing factor (CRF), named teneurin c-terminal associated peptide (TCAP-1 to 4). TCAP-1 effectively modulates stress induced by CRF. Studies have pointed tha TCAP-1 could have important therapeutic applications in stress disorders. The analysis of TCAP-1 distribution in the primate brain could also give anatomical support to the understanding of its functional effects and possible therapeutic use. Thus, the present study focused on the distribution of neurons exhibiting immunoreactivity and mRNA expression to TCAP-1 in the monkey brain (Cebus apella). Frontal brain sections of three young male Cebus apella monkeys were submitted to immunohistochemistry and in situ hybridization. Immunohistochemistry and in situ hybridization results showed that TCAP-1 is preserved in primate brain, mainly in areas directly or indirectly involved in the modulation of stress and anxiety.

Introdução: A urocortina 3 (UCN 3) é um neuropeptídeo pertencente a família CRF, com seletividade de ligação a receptor CRF2. Em roedores as células UCN 3 se localizam principalmente em hipotálamo e amígdala, mas o mapeamento não foi realizado em modelo de primata não-humano. Objetivo: realizar o mapeamento da distribuição da UCN 3 no sistema nervoso central na espécie Cebus apella. Material e métodos: cortes de encéfalo de animais machos foram submetidos aos métodos de imuno-histoquímica e hibridização in situ para UCN 3. Séries adjacentes foram coradas pelo método de Nissl e hematoxilina-eosina. Resultados: Células UCN 3 se localizam principalmente em regiões hipotalâmicas, amigdalóides e límbicas. Há colocalização de UCN 3/CRF no núcleo paraventricular do hipotálamo e UCN 3/insulina em células <font face=\"Symbol\">b do pâncreas. Conclusão: a distribuição de UCN 3 em primata não-humano é semelhante à de roedores. / Introduction: Urocortin 3 (UCN 3) is a neuropeptide with 38-aa and member of the CRF peptide family, it is a selective agonist for the CRF2 receptor. UCN 3 cells in rodents showed containing- neurons found mainly in hypothalamic and amygdaloid regions. However, such mapping was not done in a non-human primate model. Objective: study the UCN 3 distribution in the brain of a monkey. Material and methods: frontal sections (40<font face=\"Symbol\">mm) were subjected to immunohistochemistry technique and in situ hybridization, Nissl and Hematoxylin-eosin staining. Results: UCN 3 cells were found mainly in the amygdaloid, limbic and hypothalamic regions. Double-labeled cells (CRF/UCN 3) were found in the PaMD and, in <font face=\"Symbol\">b cells (UCN 3/insulin) of pancreas. Conclusion: the distribution of UCN 3 in non-human primate is similar to the rodents distribution.

Os transtornos neuropsiquiátricos incluem-se entre as patologias de alta incidência, difícil identificação e prognósticos variados. Dentre eles se destaca a esquizofrenia, uma doença funcional do cérebro caracterizada essencialmente por uma fragmentação da estrutura básica dos processos de pensamento, acompanhada pela dificuldade em estabelecer a distinção entre experiências internas e externas. O presente estudo visa à investigação do risco cardíaco decorrente do ganho de peso causado pelo uso do antipsicótico olanzapina em pacientes esquizofrênicos, bem como a avaliação dos níveis dos neuropeptídeos relacionados ao balanço energético, a fim de estabelecer o mecanismo de ação responsável por este ganho de peso. Como a identificação conclusiva dos fatores etiológicos ou patogênicos dos transtornos neuropsiquiátricos permanece desconhecida, o trabalho visa ainda à avaliação dos níveis plasmáticos de alguns aminoácidos neurotransmissores, correlacionando-os a estes transtornos. Para a avaliação do risco cardíaco e do possível mecanismo do ganho de peso, um grupo de 30 pacientes com diagnóstico de esquizofrenia em início de terapia com a olanzapina foi submetido a avaliações antropométricas, bioquímicas e determinação plasmática de grelina, leptina, neuropeptídeo NPY e polipeptídeo YY durante 12 meses. A investigação da correlação entre transtornos neuropsiquiátricos e aminoácidos, foi realizada em outros 150 indivíduos subdivididos em cinco grupos de 30 pessoas, pacientes com diagnóstico de esquizofrenia, epilepsia, depressão e transtorno afetivo bipolar, os quais foram comparados a um grupo controle. Os resultados obtidos referentes ao estudo do risco cardíaco foram demonstrados através do aumento significativo do peso, índice de massa corporal e circunferências de cintura e quadril. Em relação aos parâmetros bioquímicos, verificaram-se alterações clinicamente significativas nos níveis de colesterol, triglicérides, LDL-colesterol, glicose, insulina e cortisol. Quanto aos neuropeptídeos, observou-se aumento significativo na grelina e neuropeptídeo NPY. Os níveis plasmáticos dos aminoácidos não essenciais, glutamato, aspartato, serina, glicina e arginina, por sua vez, mostraram-se significativamente alterados nas patologias neuropsiquiátricas quando comparados ao grupo controle, sendo que o glutamato apresentou incremento altamente significante em todas as patologias neuropsiquiátricas estudadas, evidenciando a íntima correlação entre este aminoácido e os transtornos supracitados, bem como a hipótese da hiperfunção glutamatérgica em nível periférico, isto é, valores plasmáticos. Neste contexto, evidenciou-se que a terapia com a olanzapina aumenta o risco cardíaco em decorrência da maior liberação dos hormônios orexígenos, podendo comprometer a qualidade de vida destes pacientes por favorecer a síndrome metabólica. Dessa forma, o estudo contribui para elucidação deste marcante efeito adverso da olanzapina que é o ganho de peso. Evidenciou-se, ainda, que a determinação dos aminoácidos plasmáticos, aliada a outras técnicas de avaliação em desenvolvimento e pesquisa, poderão servir como marcadores biológicos para os trantornos neuropsiquiátricos, bem como de medidas preventivas e no estabelecimento de uma nova perspectiva para alvos de futuros fármacos adjuvantes à terapia neuropsiquiátrica. / Neuropsychiatric disorders are among diseases with high incidence, difficult to identify and with varied predictions. Among them stands out schizophrenia, a brain functional disease essentially characterized by fragmentation of the basic structure of thinking processes, accompanied by difficulty to distinguish between internal and external experiences. The present study aims to investigate cardiac risk in schizophrenic patients due to weight gain caused by the use of antipsychotic olanzapine, as well as evaluating the levels of neuropeptides related to energy balance in order to establish the mechanism of action responsible for such weight gain. As the conclusive identification of etiological or pathogenic factors of neuropsychiatric disorders remains unknown, the work also aims to assess the plasma levels of some neurotransmitter amino acids, correlating them with these disorders. For the evaluation of cardiac risk and the possible mechanism of weight gain, a group of 30 patients diagnosed with schizophrenia and at the start of olanzapine therapy underwent anthropometric evaluations and biochemical quantification of serum ghrelin, leptin, and neuropeptide NPY polypeptide YY 12 months. The investigation of the correlation between neuropsychiatric disorders and amino acids was performed in other 150 individuals divided into five groups of 30 persons, patients with schizophrenia, epilepsy, depression and bipolar disorder, which were compared to a control group. The results obtained for the study of cardiac risk were demonstrated by the significant increase in weight, body mass index and waist and hip circumferences. Regarding biochemical parameters, there were no clinically significant changes in cholesterol, triglycerides, LDL-cholesterol, glucose, insulin and cortisol. Concerning neuropeptides, we could observe a significant increase in ghrelin and neuropeptide NPY. Plasma levels of nonessential amino acids, glutamate, aspartate, serine, glycine and arginine, in turn, were significantly altered in neuropsychiatric disorders. Glutamate showed a highly significant increase in all studied neuropsychiatric disorders, showing the close correlation between this amino acid and the aforementioned disorders, as well as the glutamatergic hyperfunction hypothesis at peripheral level, that is, plasma levels. In this context, it was observed that therapy with olanzapine increases cardiac risk due to augmented release of orexigenic hormones, which can compromise the quality of life of patients by promoting metabolic syndrome. Thus, it contributes to elucidation of this striking side effect of olanzapine which is the weight gain. It was also clear that the determination of plasma amino acids, combined with other evaluation techniques in research and development, may serve as biomarkers for neuropsychiatric disorders, as well as preventive measures and the establishment of a new perspective for future targets adjuvant therapy for neuropsychiatric drugs.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A inflamacao neurogenica (IN) e um dos primeiros eventos da cicatrizacao. Diante de um estimulo nociceptivo na pele, ocorre a liberacao de neuropeptideos (NP´s) cutaneos pro-inflamatorios, que sao substancias produzidas pelos neuronios dos ganglios da raiz dorsal e secretadas de terminacoes nervosas na pele, deflagrando a fase inflamatoria da cicatrizacao. Os anestesicos locais (AL´s) tem amplo uso devido a sua efetividade e seguranca, mas ha evidencias de que eles poderiam bloquear o inicio da inflamacao neurogenica ao inibir a secrecao de NP´s, potencialmente retardando as fases iniciais da cicatrizacao. OBJETIVO: Avaliar o efeito dos AL´s lidocaina, bupivacaina e ropivacaina na secrecao de NP´s CGRP (Calcitonin Gene-Related Peptide) e SP (Substance P) na pele incisada de ratos. METODOS: Foram utilizados 28 ratos Wistar distribuidos igualmente em quatro grupos (n=7): grupo controle (C) com solucao salina 0,9%, grupo (L) (lidocaina 2%), grupo (B) (bupivacaina 0,5%) e grupo (R) (ropivacaina 0,75%). Apos anestesia geral, o farmaco de cada grupo foi injetado ao longo de uma linha reta com dois centimetros no tecido subcutaneo da linha mediana do dorso de cada rato e, apos 30 minutos, foi realizada uma incisao (estimulo nociceptivo) da extensao desse segmento. A seguir, cada rato foi submetido a morte induzida indolor e uma amostra de pele de cada rato, com area e volume padronizados, foi retirada do centro da reta incisada com ajuda de dermatomo eletrico e punch cutaneo de oito milimetros. Essa amostra foi enviada para quantificacao de CGRP e SP por Western blotting e os resultados foram submetidos a analise estatistica. RESULTADOS: em relacao a presenca de NP´s na pele de ratos, no grupo L e no grupo R houve reducao da quantidade de SP nas amostras, sem diferenca entre si; no grupo B nao houve reducao da quantidade de SP; em todos os grupos houve diminuicao da quantidade de pro-CGRP, sem diferenca entre si; e em nenhum grupo houve diminuicao da quantidade de CGRP. CONCLUSAO: a lidocaina e a ropivacaina diminuem os niveis de SP na pele incisada de ratos, enquanto a bupivacaina nao tem influencia sobre os NP´s estudados. Nenhum AL demonstrou influencia sobre a presenca de CGRP na pele incisada de ratos no tempo avaliado / Neurogenic inflammation (NI) is one of the earliest trigger in wound healing. After a nociceptive stimulus in the skin, occurs the release of skin pro-inflammatory neuropeptides (NP's), which are substances produced by the neurons of the dorsal root ganglia and secreted by nerve endings in the skin, triggering the inflammatory phase of wound healing. Local anesthetics (LA's) have widespread use due to its effectiveness and safety, but there is evidence that they could block the onset of neurogenic inflammation by inhibiting the secretion of NP's, potentially delaying the early stages of healing. OBJECTIVE: To evaluate the effect of LA's lidocaine (L), bupivacaine (B) and ropivacaine (R) in the secretion of SP and CGRP in incised rat skin. METHODS: We used 28 Wistar rats divided into 4 groups (n = 7), Group C (control saline 0.9%), L group (lidocaine 2%), group B (bupivacaine 0.5%) and group R (0.75% ropivacaine). After general anesthesia, the LA´s were injected in each group in a straight line in the subcutaneous tissue of the dorsal midline of each rat, and after 30 minutes, an incision was made (nociceptive stimulus) along that segment.Then, each rat was subjected to induced painless death, and a square of skin, with the incised line inside, was taken with the aid of an electric dermatome. Finally, a skin sample from the midpoint of the incised line was removed with a skin punch of 8mm, to achieve standardized area and volume. This sample was submitted to a quantification of CGRP and SP by Western Blotting and followed for statistical analysis. RESULTS: regarding NP's in the skin of rats, group L and group R showed a reduction of SP in the samples; group B showed no reduction in the amount of SP; all groups showed reduction in the amount of pro-CGRP, with no difference between them; and neither group showed a decrease in the amount of Abstract | 72 CGRP. CONCLUSION: The lidocaine and ropivacaine reduced secretion of SP by the nerve endings, the bupivacaine had no effect on secretion of SP; and no local anesthetic inhibited the secretion of CGRP in rat skin incision. / FAPESP: 2012/19163-4. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / A inflamacao neurogenica e um dos primeiros eventos de cura. Apos um estimulo nociceptivo na pele, ocorre a liberacao de neuropeptideos (NP 's) u substancias pro-inflamatorias u que sao produzidas pelos neuronios do ganglio da raiz dorsal e secretadas nas terminacoes nervosas da pele, provocando a fase inflamatoria da cicatrizacao das feridas. A expansao da pele e amplamente utilizada em cirurgia plastica como um recurso para ganho real de pele para rotacao de retalho e, assim, cobrir grandes defeitos decorrentes da perda de pele na remocao de tumores, acidentes de varias origens e reconstrucao de partes do corpo humano; mas nada se sabe sobre a acao dos neuropeptideos CGRP e SP nessas areas de tecido cutaneo expandido. OBJETIVO: Investigar os neuropeptideos SP e CGRP na pele cutanea expandida. METODOS: 28 ratos Wistar, separados em quatro grupos (n = 7): Grupo CO - (expansor vazio); Grupo EN - (expansao normal, 15 dias); Grupo ME - (meia expansao, 11 ml) e o Grupo EI - (expansao instantanea no dia da coleta). Depois de anestesia geral, cada grupo apresentou um expansor de pele de 22 ml de capacidade e o Grupo CO apenas o expansor vazio; o Grupo EN, o expansor inflado com metade da capacidade (11 ml) no implante e uma semana depois, inflado com mais 11 ml; Grupo ME igual ao grupo EN, mas com apenas metade da capacidade do expansor (11 ml) imediatamente apos o implante e o Grupo EI, expansor sendo insuflado com a capacidade total (22 ml) no dia da coleta. Em seguida, cada rato foi submetido a morte induzida, indolor, antes da coleta de amostras, que foram padronizadas quanto ao volume e area, utilizando-se dermatomo eletrico fixado em 500 &#956;m e punch de oito milimetros. Esta amostra foi enviada para a quantificacao de CGRP e SP por Western blotting. RESULTADOS: Em relacao a presenca de NPÆs na pele de ratos, diminuiu a concentracao do neuropeptideo SP, sendo a maior concentracao do grupo CO, e tendo a seguir o grupo ME, o grupo EI e o grupo EN; o neuropeptideo CGRP obteve valores semelhantes na avaliacao de CGRP-5kDa (neuropeptideo efetivo) e a manutencao das concentracoes dos grupos CO, ME e EI. Houve uma queda acentuada na concentracao do grupo EN. CONCLUSAO: A lenta e progressiva expansao da pele inibe a liberacao de neuropeptideos SP, reduzindo a resposta inflamatoria independente do volume observado / The neurogenic inflammation (IN) is one of the first events of healing. Before a nociceptive stimulus in the skin, there is release of neuropeptides (NP's) skin pro-inflammatory substances that are produced by the neurons of the dorsal root ganglia and secreted nerve endings in the skin, triggering the inflammatory phase of wound healing. The expansion skin, widely used in plastic surgery as a resource to gain real skin to skin flap rotation and thus cover large skin defects arising out of the loss is the removal of tumors, accidents of various origins and reconstructions of parts of the human body, but nothing is known about the action of neuropeptides CGRP and SP in these skin areas expanded. OBJECTIVE: To evaluate the effect of expanding the skin secretion of NP's SP and CGRP in the skin of mice. METHODS: 28 Wistar rats divided into 4 groups (n = 7): group C (empty Expander), EN group (Normal Expansion 15days), group (Half Expansion) and group EI (Instant Expansion on the collection day). After general anesthesia, each group has introduced a skin expander of 22ml capacity with the CO group only without the expander breathes it in no time, EM Group expander inflated with half capacity (11ml) after introducing a week later inflated with 11ml more, equal to group ME but with only half the capacity of the expander (11ml) and nothing else, and EI group expander being inflated with total capacity (22ml), waited a minute before the death of the animal and data collection . Next, each mouse was subjected to induced death painless and a skin sample from each mouse with standardized area and volume were taken from the center line incision with the aid of electric dermatome and 8mm dermal punch. This sample was sent for quantification of CGRP and SP by Western Blotting and followed for statistical analysis. RESULTS: In relation to the presence of A b s t r a c t | 64 NP's in the skin of rats in relation to neuropeptide SP was decreasing concentration being the highest concentration of CO Group and so on with the following GE Group ME and EI, as the neuropeptide CGRP have similar values in the evaluation of CGRP-5kDa (actual measure) and maintenance of the concentrations of CO Groups, ME and EI, as a sharp drop in the concentration EN group (normal expansion). CONCLUSION: It was observed that the slower expansion less concentration of neuropeptides soon denervation can be observed. Thus, the slow and progressive cutaneous expansion inhibits the release of neuropeptides reducing the inflammatory response. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Daniele Amaral (daniee_ni@hotmail.com) on 2016-09-13T18:42:57Z No. of bitstreams: 1 DissLAO.pdf: 6690751 bytes, checksum: ad771d53381565a9c810eb4f7a21c348 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-15T13:32:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissLAO.pdf: 6690751 bytes, checksum: ad771d53381565a9c810eb4f7a21c348 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-15T13:33:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissLAO.pdf: 6690751 bytes, checksum: ad771d53381565a9c810eb4f7a21c348 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T13:33:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissLAO.pdf: 6690751 bytes, checksum: ad771d53381565a9c810eb4f7a21c348 (MD5) Previous issue date: 2015-04-10 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / The corticotropin-releasing factor (CRF) is involved in behavioral and physiological responses to emotional stress through its action in several limbic structures, including the bed nucleus of the stria terminalis (BNST). Nevertheless, the role of CRF1 and CRF2 receptors in the BNST in autonomic adjustments during aversive threat is unknown. Therefore, in the present study we investigated the involvement of CRF receptors within the BNST in autonomic responses evoked by the acute restraint stress in rats. For this, we evaluated the effects of bilateral treatment of the BNST with selective agonists and antagonists of either CRF1 or CRF2 receptors in the arterial pressure and heart rate increase and the decrease in tail skin temperature induced by restraint stress. Microinjection of the selective CRF1 receptor antagonist CP376395 into the BNST reduced the pressor and tachycardiac responses caused by restraint. Conversely, BNST treatment with the selective CRF1 receptor agonist CRF increased restraint-evoked arterial pressure and HR responses and reduced the fall in tail skin temperature response. All effects of CRF were inhibited by local BNST pretreatment with CP376395. The selective CRF2 receptor antagonist antisauvagine-30 reduced the arterial pressure increase and the fall in tail skin temperature. The selective CRF2 receptor agonist urocortin-3 increased restraint-evoked pressor and tachycardiac responses and reduced the drop in cutaneous temperature. All effects of urocortin-3 were abolished by local BNST pretreatment with antisauvagine-30. These findings indicate an involvement of both CRF1 and CRF2 receptors in the BNST in autonomic adjustments during emotional stress. / O fator liberador de corticotropina (CRF) está envolvido em respostas comportamentais e fisiológicas ao estresse emocional por meio de sua ação em várias estruturas límbicas, incluindo o núcleo leito da estria terminal (NLET). No entanto, o papel dos receptores CRF1 e CRF2 no NLET nas respostas autonômicas durante situações aversivas é desconhecido. Portanto, no presente estudo nós investigamos o envolvimento de receptores de CRF do NLET nas respostas autonômicas evocadas pelo estresse de restrição agudo em ratos. Para isso, foram avaliados os efeitos do tratamento bilateral do NLET com agonistas e antagonistas seletivos dos receptores CRF1 ou CRF2 nas respostas de aumento da pressão arterial e frequência cardíaca e de diminuição da temperatura cutânea da cauda induzidas pelo estresse por restrição agudo. Microinjeção do antagonista seletivo do receptor CRF1, CP376395, no NLET reduziu as respostas de aumento da pressão arterial e frequência cardíaca evocadas pelo estresse por restrição. Por outro lado, o tratamento do NLET com o agonista seletivo do receptor CRF1, CRF, causou um aumento das respostas pressora e taquicárdica e reduziu a resposta de queda de temperatura cutânea da cauda. Os efeitos do CRF foram inibidos pelo pré-tratamento do NLET com CP376395. O antagonista seletivo do receptor CRF2, antisauvagine-30, reduziu o aumento da pressão arterial e a queda da temperatura cutânea da cauda induzidas pelo estresse por restrição. O agonista seletivo do receptor CRF2, urocortina-3, potenciou as respostas pressora e taquicárdica e reduziu a queda na temperatura cutânea da cauda. Todos os efeitos da urocortina-3 foram abolidos pelo pré-tratamento local no NLET com antisauvagine-30. Esses resultados indicam um envolvimento de ambos os receptores CRF1 e CRF2 no NLET nos ajustes autonômicos durante o estresse emocional.

Constipation is a serious public health problem that afflicts thousands of patients worldwide. It is believed that with the modern lifestyle, followed by constant stress and inadequate eating habits, the incidence of constipation will increase considerably in coming decades. Constipation is caused by abnormal functioning of the digestive tract which is not yet fully elucidated. It is known that the enteric nervous system is responsible for sensory and motor functions of the digestive tract, which makes it work in perfect sync and perform peristalsis, promoting proper transit of the bolus and subsequently fecal mass. The vast majority of pathologies afflicting the gastrointestinal tract are originated from disturb in specific neurons in the enteric nervous system and probably the same happens with constipation. Hence, the objective of this study was, by immunohistochemistry, to characterize and compare the expression of several neuropeptides of the enteric nervous system in patients with constipation and individuals not constipated. The results showed that among the various types of neurons studied, constipated patients have fewer neurons expressing calretinin and choline acetyltransferase, characteristic neuropeptides from afferent neurons and excitatory neurons engines. We believe that these results can help in future treatment techniques and prevention of constipation. / A constipação intestinal é um problema grave de saúde pública que aflige milhares de pacientes em todo o mundo. Acredita-se que, com o estilo de vida moderno, seguido de constante estresse e inadequação dos hábitos alimentares, a incidência da constipação intestinal aumente consideravelmente nas próximas décadas. A constipação é causada por alterações no funcionamento do trato digestório que ainda não estão completamente elucidadas. Sabe-se que o sistema nervoso entérico é responsável pelas funções sensitivas e motoras do trato digestivo, o que confere a este funcionar sob perfeita sincronia e realizar a peristalse, promovendo o trânsito adequado do bolo alimentar e posteriormente do bolo fecal. A grande maioria das patologias que afligem o trato gastrointestinal são originadas de distúrbios em neurônios específicos do sistema nervoso entérico e, provavelmente, o mesmo ocorre com a constipação intestinal. Diante disto, o objetivo deste trabalho foi, através da técnica de imunohistoquímica, caracterizar e comparar a expressão dos diversos neuropeptídios do sistema nervoso entérico em pacientes portadores de constipação intestinal e indivíduos não constipados. Os resultados demonstraram que, dentre os vários tipos de neurônios estudados, os pacientes constipados apresentam uma menor quantidade de neurônios que expressam calretinina e colina-acetiltransferase, neuropeptídios característicos de neurônios aferentes e de neurônios motores excitatórios. Acreditamos que esses resultados possam colaborar com futuras técnicas de tratamento e com a prevenção da constipação intestinal. / Mestre em Ciências da Saúde