GOMES, Patrícia Xavier Lima. Estudo da influência do gênero e idade nas alterações comportamentais e neuroquímicas induzidas pelo abrasamento por nicotina em ratos. 2011. 82 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-07-25T14:14:44Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_pxlgomes.pdf: 566478 bytes, checksum: 5f90b7e3f0974aa164903b5deb480864 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-08-06T11:55:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_pxlgomes.pdf: 566478 bytes, checksum: 5f90b7e3f0974aa164903b5deb480864 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-06T11:55:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_pxlgomes.pdf: 566478 bytes, checksum: 5f90b7e3f0974aa164903b5deb480864 (MD5) Previous issue date: 2011 / Kindling is a well-known experimental model of progressive epilepsy induced by electrical or chemical subthreshold stimulation. Only recently nicotine-induced kindling was pharmacologicaly and histologicaly characterized. Furthermore is known sex and age differences in seizure susceptibility are one of the unresolved issues in epilepsy. Based on this, the present study aimed to investigate gender and age influences in behavioral and neurochemical changes nicotine-induced kindling in rats. Male and Female periadolescent (35-37 days old, n= 8/group) and adult (73-75 days old, n=8/group) Wistar rats were used. During 4 weeks, kindling seizures were induced by repeated administration of NIC 2.0 mg/kg, intraperitoneally, from Monday to Friday. Convulsant activity was evaluated according Racine scale. Thirty minutes after the last administration of NIC, animals were euthanized, prefrontal cortex (PFC), striatum (ST) and hippocampus (HC) dissected and homogenates to 10% prepared with potassium phosphate buffer (pH 7.4). Finally, homogenates were used to evaluate Superoxide Dismutase (SOD) activity, levels Glutathione Reduced (GSH) quantifying, nitrite/nitrate levels (as an indirect way to determine nitric oxide) and lipid peroxides formation by measuring the thiobarbituric-acid reacting substances (TBARS). Female periadolescent and adult and male adult presented same susceptibility to kindling development whem compared to male periadolescent, presented stage 5 seizures after 19 days NIC treatment, whereas male periadolescent rats presented stage 5 only after 24 days of administration. Regarding to deaths female periadolescente were more susceptible to toxic effects of NIC with 75% deaths in this group. Male periadolescent presented an increase in the GSH levels in CPF e CE and no change in SOD acitivity, nitrite content and lipid peroxidation. Unlike, other groups decreased GSH levels and SOD activitiy with membrane damage detected by an increase in lipid peroxidation in male adult and female periadolescent, but not in female adult animals. In conclusion, our results demonstrate that NIC-induced kindling is influenced by gender and age and oxidative stress parameters, are related, at least in part, to the animal’s susceptibility/resistance to the kindling induced by this drug. / O abrasamento é um modelo experimental bem conhecido de epilepsia progressiva, induzida por estimulação sublimiar elétrica ou química. Apenas recentemente o abrasamento induzido por nicotina (NIC) foi caracterizado farmacologicamente e histologicamente. Além disso, é sabido que diferenças de gênero e de idade na susceptibilidade à convulsão são uma das questões mal resolvidas na epilepsia. Baseado nestes fatos, o presente estudo objetivou investigar a influência do gênero e idade nas alterações comportamentais e neuroquímicas induzidas pelo abrasamento por nicotina em ratos. Ratos Wistar machos e fêmeas periadolescente (35-37 dias; n=8 por grupo) e adultos (73-75 dias; n=8 por grupo) foram usados. Durante 4 semanas foi realizada a administração repetida de NIC 2,0 mg/kg, intraperitonealmente, de segunda à sexta-feira e as convulsões avaliadas de acordo com a escala de Racine. Trinta minutos após a última administração de NIC (25º dia), os animais foram eutanasiados, córtex pré-frontal (CPF), corpo estriado (CE) e hipocampo (HC) dissecados e homogenatos a 10% preparados com tampão fosfato de potássio (pH 7,4). Os homogenatos foram usados para avaliar a atividade da SOD, quantificação dos níveis de GSH, de nitrito/nitrato (como maneira indireta de determinar o óxido nítrico) e a formação de peróxidos lipídicos pela mensuração das substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Fêmeas periadolescentes e adultas e machos adultos apresentaram a mesma susceptibilidade ao desenvolvimento do abrasamento quando comparado aos ratos machos periadolescentes, apresentando estágio 5 de convulsões após 19 dias de tratamento de NIC, enquanto os ratos machos periadolescentes apresentaram estágio 5 apenas após 24 dias de administração. Com relação às mortes as fêmeas periadolescentes foram mais susceptíveis aos efeitos tóxicos da NIC com 75% de mortes neste grupo. Os machos periadolescentes apresentaram um aumento dos níveis de GSH no CPF e CE e nenhuma alteração na atividade da SOD, conteúdo de nitrito e peroxidação lipídica. Ao contrário, os outros grupos diminuíram os níveis de GSH e a atividade da SOD, com dano na membrana detectado pela elevação na peroxidação lipídica em machos adultos e fêmeas periadolescentes, mas não em fêmeas adultas. Em conclusão, nossos resultados demonstram que o abrasamento induzido por NIC é influenciado pelo gênero e idade do animal e que parâmetros de estresse oxidativo, estão relacionados, pelo menos em parte, à susceptibilidade/resistência do animal às convulsões induzidas por esta droga.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2012. / Made available in DSpace on 2013-06-26T00:49:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 314868.pdf: 2594825 bytes, checksum: b1cb053f3b698fb9d8ace1d9db600642 (MD5) / No presente trabalho foi desenvolvida uma metodologia para a determinação de nitrato e nicotina utilizando a eletroforese capilar de zona. A proposta foi utilizar a injeção da amostra em lados opostos do capilar de forma sequencial promovendo uma análise rápida e simultânea de ambos os analitos em diferentes matrizes, com tempos de análise inferiores à 2 minutos. Esta estratégia de injeção favorece a migração dos analitos para os eletrodos de carga oposta durante a aplicação de voltagem e até que alcancem o detector. Para esta análise, o eletrólito de corrida foi composto de 25 mmol L-1 de Tris-(hidroximetil)-aminometano - TRIS e 5 mmol L-1 de H2SO4, com pH ajustado até 8,1 com H2SO4. O pré-condicionamento do capilar foi otimizado em 5 minutos de NaOH 1 mol L-1, 10 minutos de água desionizada e 20 minutos de eletrólito de corrida. A avaliação da metodologia desenvolvida apresentou parâmetros que confirmam sua seletividade em relação a outros compostos de interesse e/ou impurezas. Os limites de detecção e quantificação do nitrato em padrões foram de respectivamente 0,2 mg L-1 e 0,6 mg L-1 e enquanto que para as amostras chegaram a 2,3 mg L-1 e 7,8 mg L-1. Para a nicotina os limites de detecção e quantificação em padrões foram de respectivamente 0,8 mg L-1 e 2,6 mg L-1 e enquanto que para as amostras chegaram a 9,5 mg L-1 e 31,8 mg L-1. O método mostrou boa precisão instrumental e repetibilidade com coeficiente de variação inferiore a 5% para os valores de área relativa de padrão/padrão interno e inferiores a 1% para os valores de tempo de migração. A extração dos analitos foi procedida em solução aquosa acidificada com 5% (v/v) de H2SO4, seguida de centrifugação em centrífuga Eppendorf, modelo MiniSpin® Plus á 10.000 rpm por 5 minutos. Por fim o sobrenadante foi coletado e diluído em diferentes proporções para análise de nitrato e nicotina de acordo com os níveis dos analitos em cada conjunto de amostras. Para as amostras de fumo e cigarro a determinação de nitrato, nicotina e seus respectivos padrões internos os ensaios de extração apresentaram concentrações independentes do volume de solução extratora para diferentes massas de amostra seca, porém com tempos de extração elevados para a nicotina. A avaliação estatística dos dados proporcionou o entendimento prévio da distribuição dos teores de nitrato e nicotina no conjunto de amostras.<br> / Abstract : In this work was developed a methodology for the determination of nitrate and nicotine using capillary zone electrophoresis. The purpose was to use the injection of sample on opposite sides of the capillary sequentially promoting a rapid and simultaneous analysis of both analytes in different samples with analysis times less than 2 minutes. This injection strategy facilitates migration of the analyte to the electrode of opposite charge during the application voltage until they reach the detector. For this analysis, the background electrolyte was composed of 25 mmol L-1 Tris-(hydroxymethyl) aminomethane - TRIS and 5 mmol L-1 H2SO4, with pH adjusted to 8.1 with H2SO4. The preconditioning of the capillary was optimized at 5 minutes of NaOH 1 mol L-1, 10 minutes of deionized water and 20 minutes of running electrolyte. The assessment methodology presented parameters that confirm its selectivity over other compounds of interest and / or impurities. The limits of detection and quantification standards nitrate were respectively 0.2 mg L-1 and 0.6 mg L-1 and as for the samples reached 2.3 mg L-1 and 7.8 mg L-1. Nicotine to the limits of detection and quantification standards were respectively 0.8 mg L-1 and 2.6 mg L-1 and as for the samples reached 9.5 mg L-1 and 31.8 mg L - 1. The instrumental method showed good accuracy and repeatability with a coefficient of less variation 5% for values of relative area of standard / internal standard and less than 1% for values of migration time. The extraction was performed for analytes in aqueous solution acidified with 5% (v / v) of H2SO4, followed by centrifugation in Eppendorf centrifuge, model MiniSpin® Plus at 10,000 rpm for 5 minutes. Finally the supernatant was collected and diluted in various proportions to analyze nitrate and nicotine in accordance with the levels of analytes in each set of samples. For the samples of cigarette smoke and the determination of nitrate, nicotine and their internal standards extraction tests had concentrations independent of the volume of extraction solution to different mass of dry sample, but with high extraction times for nicotine. Statistical evaluation of data provided prior knowledge of the distribution of levels of nitrate and nicotine in all samples.

Objetivos: Conocer la prevalencia y analizar los hábitos, actitudes y factores asociados al consumo de tabaco en médicos de un Hospital de referencia nacional de Perú. Materiales y métodos: Estudio transversal analítico; población conformada por médicos de un Hospital de la Seguridad Social. Se realizó una encuesta auto-administrada, la cual evaluó conocimientos y hábitos sobre el tabaquismo. Para el análisis univariado se utilizó distribución de frecuencias absolutas y relativas y mediana con rangos intercuartílicos. Se usó la prueba Chi cuadrado para variables categóricas y regresión de Poisson para el análisis de múltiples variables. Resultados: Se realizaron 318 encuestas, 209 fueron hombres (65,72%) y 109 mujeres (34,28%); la edad media fue 46,43 años con DS ±12,42. La prevalencia del consumo de tabaco al menos una vez en la vida fue 37,11%, la cual se asoció al sexo masculino (p<0,001) y la especialidad quirúrgica (p=0,001). En el análisis de regresión, se confirman las asociaciones. Conclusiones: La prevalencia del consumo de tabaco al menos una vez en la vida fue similar a la encontrada en algunos países de Latinoamérica. La especialidad quirúrgica y el sexo masculino estuvieron asociados a mayor consumo de tabaco. Una limitación del estudio fue la falta de evaluación de factores asociados como depresión, ansiedad o consumo de otras drogas. Los resultados encontrados dan a conocer el estado actual del consumo de tabaco en nuestros médicos y pueden servir como referencia para la realización de estudios más amplios. / Objectives: To know the prevalence and to analyze the habits, attitudes and associated factors to tobacco use in physicians of a Peruvian Hospital. Materials and methods: Cross-sectional analytic study. A self-administered survey was conducted to evaluated knowledge about tobacco consumption and habits of the participants. For univariate analysis, absolute and relative frequencies and median and interquartile ranges distribution were used. Chi square test was used to evaluate categorical variables and Poisson regression for the multivariate analysis. Results: 318 surveys were conducted, 209 were men (65.72 %) and 109 women (34.28%); the average age was 46.43 with a SD ±12.42. Prevalence of tobacco use at least once in life was 37.11 %, which was associated with male sex (p <0.001) and surgical specialty (p = 0.001). In the regression analysis, the associations were confirmed. Conclusion: Prevalence of tobacco use at least once in life was similar to other countries in Latin America. Surgical specialty and male sex were associated with higher consumption. A limitation of the study was the lack of evaluation of other associated factors such as depression, anxiety or other drug use. The results show the current status of tobacco use on Peruvian physicians and can serve as a reference for conducting further studies. / Tesis

Os dispositivos transdérmicos de liberação controlada apresentam diversas vantagens em relação à administração oral ou parenteral de fármacos, principalmente no controle prolongado da ação de fármacos. Nesse contexto, as formulações baseadas em quitosana, um polímero natural, têm apresentado grande potencial devido principalmente às suas características de atoxicidade, efeito promotor de absorção cutânea e propriedade de controle da liberação de fármacos. Os hidrogéis de quitosana são sistemas que permitem a difusão de água e moléculas através das cadeias poliméricas promovendo um controle na liberação de fármacos. A nicotina é um fármaco que possui a maioria das características físicoquímicas favoráveis para administração através da pele, no entanto existe a dificuldade na obtenção de sistemas que controlem a liberação transdérmica da nicotina por mais de 24 horas. Neste trabalho, hidrogéis de quitosana reticulados ou não, hidratados ou parcialmente secos, foram desenvolvidos e avaliados como sistemas para controlar a liberação transdérmica de nicotina. Todos os hidrogéis avaliados foram capazes de controlar a permeação cutânea in vitro da nicotina através da pele de orelha de porco por um período de 48 horas, seguindo cinética de ordem zero. O hidrogel de quitosana não reticulado e parcialmente seco liberou quantidades maiores de nicotina para a pele. Estudos de intumescimento dos géis parcialmente secos demonstraram que a reticulação diminuiu o grau de intumescimento e a difusão da água no sistema e desta forma o gel não reticulado foi capaz de absorver uma maior quantidade de água, favorecendo a difusão da nicotina para a pele. Através das análises térmicas foi possível prever a estabilidade térmica dos hidrogéis. Os géis também foram caracterizados por espectroscopia no Infravermelho que foi capaz de demonstrar a reticulação do gel de quitosana com o glutaraldeído. Foi possível concluir que os hidrogéis de quitosana não reticulados e parcialmente secos são promissores no controle da permeação cutânea in vitro da nicotina, apresentando grande potencial como sistemas para liberação transdérmica de nicotina. / The transdermal delivery systems present several advantages over oral or parenteral drug administration mainly at extend control of drug action. In this context, the formulations chitosan-based, a natural polymer, have shown great potential mainly due to its characteristics of low toxicity, on permeation enhancing properties and control of drug release. Nicotine is a drug that has the most favorable physicochemical characteristics for transdermal administration; however there is the difficulty in obtaining systems that control the transdermal delivery of nicotine over 24 hours. In the present work, chitosan hydrogels crosslinked or uncrosslinked, hydrated or partially dried, were developed and evaluated as transdermal delivery systems of nicotine. All hydrogels evaluated were able to control the in vitro skin permeation of nicotine through pig ear skin for a period of 48 hours following zero order kinetics. The chitosan hydrogel uncrosslinked partially dried released higher amounts of nicotine to the skin. Swelling studies of the partially dried gels showed that the crosslinking decreased the degree of swelling and the diffusion of water into the system and therefore the uncrosslinked gel was able to absorb a larger amount of water, favoring the diffusion of nicotine to the skin. By the thermal analysis was possible to provide for the thermal stability of the hydrogels. The gels were also characterized by infrared spectroscopy that was able to demonstrate the crosslinking of chitosan gel with glutaraldehyde. It was concluded that the partially dried chitosan hydrogels are promising in the control of nicotine permeation in vitro skin, showing great potential as systems for transdermal delivery of nicotine. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Submitted by FERNANDA DA SILVA VON PORSTER (fdsvporster@univates.br) on 2016-07-28T18:50:36Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 2016PricilaGirardi.pdf: 1029142 bytes, checksum: cabbf24ec1d0aa04a64b1668a8ac20cb (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Lisboa Monteiro (monteiro@univates.br) on 2016-08-30T11:53:59Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 2016PricilaGirardi.pdf: 1029142 bytes, checksum: cabbf24ec1d0aa04a64b1668a8ac20cb (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-30T11:53:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 2016PricilaGirardi.pdf: 1029142 bytes, checksum: cabbf24ec1d0aa04a64b1668a8ac20cb (MD5) Previous issue date: 2016-07 / Introdução: O transtorno de déficit de atenção e hiperatividade (TDAH) é uma desordem comportamental comum em crianças e que pode persistir na idade adulta. Ele caracteriza-se por sintomas persistentes de desatenção, hiperatividade e impulsividade. Além disso, uma proporção significativa dos pacientes com TDAH também apresenta outras comorbidades envolvidas, especialmente os transtorno por uso de álcool e nicotina. Diversos estudos moleculares têm sido realizados na busca pelos genes envolvidos com o TDAH e alguns estudos têm apontando que fatores genéticos de susceptibilidade ao TDAH são também importantes na dependência de álcool e no uso de nicotina. Objetivo: O objetivo deste estudo é investigar a influência da interação dos polimorfismos rs1799990, no gene PRNP, e rs965560, no gene NCAM1, no TDAH e nas dependências de álcool e nicotina. Metodologia: As amostras foram compostas por pacientes com TDAH, 431 crianças e 535 adultos, 130 homens dependentes de álcool, 639 indivíduos adultos da população geral e 77 crianças controles. Os polimorfismos foram genotipadas através do sistema de discriminação alélica TaqMan. As análises estatísticas envolveram o teste do qui- quadrado, ANOVA e, para o teste da interação gene-gene sobre a susceptibilidade aos transtornos, foram utilizados modelos lineares gerais. Resultados: Não foram detectadas interações significativas entre os polimorfismos investigados sobre a susceptibilidade ao TDAH e às dependências de álcool e nicotina. Foi observada uma associação entre o alelo A do polimorfismo rs1799990 com o TDAH na infância (p=0,04). Em adultos com TDAH, indivíduos heterozigotos AG apresentaram uma maior frequência de transtorno opositor desafiante (TOD) (p=0,017), assim como escores médios dos sintomas de TOD significativamente maiores (p=0,012), em comparação aos indivíduos homozigotos GG. Não foram detectadas associações significativas para o polimorfismo rs965560 com nenhuma das variáveis investigadas. Conclusão: Nossos resultados indicam que o polimorfismo rs1799990 pode estar associado com o TDAH na infância e com a presença de TOD em adultos com TDAH. Esses resultados, no entanto, são preliminares e não foram testados para múltiplos testes. / Introduction: Attention deficit hyperactivity disorder (ADHD) is a common behavioral disorder in children that can persist into adulthood. It characterized by persistent symptoms of inattention, hyperactivity and impulsivity. Moreover, a significant proportion of patients with ADHD present other comorbidities, especially alcohol dependence and nicotine use. Several molecular studies have been employed in the search for the genes involved in ADHD and some studies have pointed that susceptibility genetic factors of ADHD are also important in alcohol dependence and nicotine use. Objective: The objective of this study is to investigate the influence of the interaction between the polymorphisms rs1799990, in the PRNP gene, and rs965560, in the NCAM1 gene, on the susceptibility to ADHD and alcohol and nicotine dependence. Methods: Samples were composed by patients with ADHD, 431 children and 535 adults, 130 alcohol dependent men, 639 adults from the general population and 77 children controls. The polymorphisms were genotyped by the TaqMan allelic discrimination system. The statistical analysis involved the chi- square test, ANOVA and, for the gene-gene interaction tests, general linear models were used. Results: There were no significant interactions between the polymorphisms investigated on the susceptibility to ADHD and to alcohol and nicotine dependences. An association between the A allele of rs1799990 polymorphism and ADHD in childhood (p=0.04) was observed. In adults with ADHD, individuals heterozygous AG had a higher frequency of oppositional defiant disorder (ODD) (p=0.017) and higher mean scores of symptoms of ODD (p=0.012), when compared to homozygous GG. No significant associations were found for the rs965560 polymorphism with the investigated variables. Conclusion: Our results indicate that the polymorphism rs1799990 may be associated with ADHD in childhood and with the presence of ODD in adults with ADHD. These results, however, are preliminary and were not tested for multiple testing.

Tese de mestrado. Engenharia Biomédica. Universidade do Porto. Faculdade de Engenharia. 2011

Orientador: Juliano Milanezi de Almeida / Banca: Edilson Ervolino / Banca: Estevam Augusto Bonfante / Resumo: Objetivo: avaliar a influência da nicotina e dos agentes antineoplásicos Cisplatina (CIS) e 5-fluorouracil (5-FU) sobre os tecidos peri-implantares, bem como os efeitos desses agentes antineoplásicos sobre os tecidos peri-implantares em animais previamente expostos à nicotina. Material e métodos: 180 ratos machos (Wistar) foram randomizados para dois grandes grupos (n=90), NIC e SS, em seguida, para três subgrupos (n=30) de acordo com os agentes antineoplásicos. Receberam 0,5ml de solução de cloreto de sódio 0,9% (SS) ou 3 mg/kg de hemissulfato de nicotina (NIC), de acordo com cada grupo, 30 dias antes e 30 dias após a cirurgia. No dia 0, todos os animais receberam os implantes de titânio (DSP Biomedical®, 4 mm x 2,2 mm) nas tíbias direita e esquerda. Aos 30 dias após a cirurgia, as aplicações de SS e NIC foram interrompidas por 5 dias e, aos 35 e 37 dias, foram administrados os agentes antineoplásicos CIS, 5-FU ou 0,5 ml de SS, via intraperitoneal, respeitando intervalo de 48 h entre as aplicações. Para CIS, 5 mg/kg e 2,5 mg/kg, e para 5-FU, 60 mg/kg e 40 mg/kg, respetivamente. SS-SS: receberam SS via subcutânea e intraperitoneal. SS-CIS: receberam SS via subcutânea e CIS via intraperitoneal. SS-5FU: receberam SS via subcutânea e 5-FU via intraperitoneal. NIC-SS: receberam NIC via subcutânea e SS via intraperitoneal. NIC-CIS: receberam NIC via subcutânea e CIS via intraperitoneal. NIC-5FU: receberam NIC via subcutânea e 5-FU via intraperitoneal. Dez animais por grupo/período... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Objective: to evaluate the influence of nicotine and the antineoplastic agents Cisplatin (CIS) and 5-fluorouracil (5-FU) over the peri-implant tissues, as well as the effects of these agents over peri-implant tissues in animals previously exposed to nicotine. Material and Methods: 180 male rats (Wistar) were initially randomized to two groups (n=90), NIC and SS. Then, to three subgroups (n=30) according to the protocol of antineoplastic agents. Received 0.5 ml of sodium chloride 0.9% (SS) or 3 mg/kg of nicotine hemissulfate (NIC) according to each group, subcutaneously, 30 days before and after surgical procedure for implants placement. At day 0, all animals received the titanium implants (DSP Biomedical®, 4 mm x 2.2 mm) in both right and left tibiae. At 30 days after surgery SS and NIC was interrupted, and at 35 and 37 days were intraperitoneally administered the antineoplastic agents CIS, 5FU or 0.5 ml SS, with 48 h interval between applications. For CIS, 5 mg/kg and 2,5 mg/kg, and 5-FU, 60 mg/kg and 40 mg/kg, respectively. SS-SS: received SS subcutaneously and intraperitoneally. SS-CIS: received SS subcutaneously and CIS intraperitoneally. SS-5FU: received SS subcutaneously and 5-FU intraperitoneally. NIC-SS: received NIC subcutaneously and SS intraperitoneally. NIC-CIS: received NIC subcutaneously and CIS intraperitoneally. NIC-5FU: received NIC subcutaneously and 5-FU intraperitoneally. Ten animals per group and period were euthanized at 50, 65 and 95 days after implants placement. The collected specimens were fixed in buffered formaldehyde solution 4% for 48h and assigned to ground section processing for analysis of bone/implant contact (BIC), or conventional histologic processing with demineralization and paraffin embedding for histometric analysis of percentage of newly-formed bone (PNFB) (Complete abstract electronic access below) / Mestre

Transtornos por uso de álcool e nicotina apresentam alta prevalência e estão entre os principais problemas de saúde pública. Na presente dissertação foram estudadas possíveis associações envolvendo os polimorfismos C-1291G do gene do receptor α2A-adrenérgico (ADRA2A) e C825T do gene da subunidade β3 da proteína G (GNB3) em amostras de indivíduos com (i) dependências de álcool e nicotina, (NADRA2A= 110; NGNB3= 109), dependência específica de nicotina (NADRA2A= 121; NGNB3= 117) e (iii) controles (NADRA2A= 114; NGNB3= 108). Na amostra de indivíduos com dependência de álcool também foram investigadas possíveis associações destes polimorfismos com outros transtornos mentais comórbidos. O DNA dos indivíduos foi amplificado através de reação em cadeia de polimerase, e os produtos clivados com enzimas de restrição específicas. A genotipagem foi realizada por eletroforese em géis de agarose ou poliacrilamida. Foi verificada uma associação entre o alelo G do polimorfismo C-1291G do gene ADRA2A com a dependência de nicotina (χ2= 7,18; p= 0,007). Não foram detectadas diferenças nas freqüências alélicas e genotípicas quanto ao polimorfismo C825T do gene GNB3 nos indivíduos com ou sem dependência. No entanto, os indivíduos com dependência de álcool e transtorno depressivo maior associado apresentaram maior freqüência do genótipo heterozigoto (χ2= 12,34; p= 0,002). Ambos os resultados positivos são consistentes com evidências obtidas em estudos prévios. / Alcohol and nicotine use disorders have high prevalence and are among the most important health problems in the world. In the present study we studied possible associations between the C-1291G polymorphism of the α2A-adrenergic receptor gene (ADRA2A) and C825T polymorphism of the G-protein β3 subunit gene (GNB3) in samples of individuals with (i) alcohol and nicotine dependencies (NADRA2A= 110; NGNB3= 109), (ii) nicotine dependence only (NADRA2A= 121; NGNB3= 117) and (iii) non-dependent controls (NADRA2A= 114; NGNB3= 108). In the sample of individuals with alcohol dependence, we also investigated possible associations of these polymorphisms with other comorbid mental disorders. The subjects’ DNA was amplified by the polymerase chain reaction. Products were digested with the specific restriction enzymes and genotyped by electrophoresis in polyacrylamide or agarose gels. The results showed an association between the G allele of the ADRA2A C-1291G polymorphism and nicotine dependence (χ2= 7.18; p= 0.007). No differences were found in allele and genotype frequencies of the GNB3 C825T polymorphism between subjects with or without dependencies. However, individuals with alcohol dependence and comorbid major depressive disorder presented a higher frequency of the heterozygous genotype (χ2= 12.34; p= 0.002). Both positive results are consistent with evidences obtained in previous studies.

Agricultores envolvidos no cultivo do tabaco estão constantemente expostos a uma grande variedade de químicos. O uso de agrotóxicos em larga escala tem provocado danos à saúde destes trabalhadores assim como a manipulação das folhas de fumo úmidas, pois além de substâncias antropogênicas persistentes outros compostos orgânicos com potencial pesticida estão presentes nas folhas do tabaco. A nicotina, através do contato dermal com as folhas do fumo, tem causado um envenenamento agudo nos trabalhadores da lavoura. O conjunto de sintomas desta exposição é conhecido como doença da folha verde. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito genotóxico em fumicultores expostos ocupacionalmente a agroquímicos e nicotina. A instabilidade genômica, a morte celular, a dosagem de colinesterase, cotinina e marcadores de estresse oxidativo bem como o conteúdo de elementos traço foram analisados nas células destes trabalhadores. Para verificar a possível modulação de genes de suscetibilidade com os resultados dos biomarcadores, os polimorfismos dos genes GSTT1, GSTM1, GSTP1, CYP2A6, PON, OGG1, RAD51, XRCC1 e XRCC4 foram avaliados. No primeiro momento, amostras de sangue periférico foram coletadas de 30 indivíduos expostos e de 30 indivíduos não expostos com o intuito de investigar o risco ocupacional em três diferentes períodos da safra de fumo (entresafra, aplicação intensa de pesticidas e na colheita da folha). Neste estudo foi observado aumento significativo de dano ao DNA, avaliado pelo ensaio Cometa, em fumicultores comparados ao grupo não exposto em todos os períodos da safra e, um significante aumento nas frequência de células micronucleadas na entresafra. Correlação entre idade e tempo de exposição em relação aos resultados do ensaio Cometa e do teste de MN não foi encontrado. O dano ao DNA foi maior em homens comparado a mulheres, mas diferença significativa foi observada apenas na entresafra. Não houve diferença na atividade da colinesterase entre os grupos estudados. Elevado nível de cotinina foi observado na colheita da folha de fumo, demonstrando exposição à nicotina. Em um segundo momento, amostras de sangue periférico e de mucosa oral foram coletadas de aproximadamente 111 agricultores em dois períodos da safra (na aplicação intensa de pesticidas e na colheita) e de 56 indivíduos não expostos. Os resultados destes testes demonstraram anomalias nucleares nas células de fumicultores expostas a misturas de substâncias com potencial genotóxico e citotóxico. Diferença nos resultados foi percebida entre os dois momentos da safra de fumo investigados. Modulação no dano ao DNA e na morte celular em células da mucosa oral foi observada nos genes PON1 e CYP2A6. Diferença entre gênero e tempo de exposição não foi encontrada nos diferentes parâmetros analisados. Houve correlação entre idade e os resultados obtidos no teste de MN em linfócitos no grupo não exposto e no momento da aplicação de pesticidas. Em relação ao uso do equipamento de proteção individual, diferença na frequência de MN no momento da aplicação de pesticidas foi observada. Dos nove marcadores de suscetibilidade estudados, somente GSTM1 nulo e CYP2A6*9, demonstraram associação com os resultados obtidos pelo teste de MN em linfócitos. Diferença na atividade da colinesterase e nos níveis de cotinina não foi observada em relação aos diferentes genótipos de PON1 e de CYP2A6, respectivamente. Aumento de cromo, magnésio, alumínio, cloro, zinco e potássio foram percebidos no momento da aplicação de pesticidas em relação ao grupo não exposto e à colheita. Maior atividade da superóxido dismutase no grupo exposto em relação ao grupo não exposto foi observada. Atividade da catalase e a medida de TBARS apresentaram aumento significativo na colheita da folha de fumo em relação ao grupo não exposto e ao momento da aplicação de pesticidas. Finalmente, esta investigação sugere níveis maiores de dano ao DNA avaliados pelo ensaio Cometa e pelo teste de MN em linfócito e em mucosa oral, nos diferentes momentos da safra do fumo (aplicação de pesticides e colheita), chamando a atenção o significativo aumento de dano ao DNA no momento da entresafra. Modulação dos genes de metabolismo foi observada, onde GSTM1 nulo e PON1 Gln/Gln tiveram maiores níveis de dano ao DNA, em linfócitos e em células da mucosa oral respectivamente, no momento da aplicação de pesticidas e CYP2A6*1/*1 e CYP2A6*9/- tiveram maiores níveis de dano ao DNA (em linfócitos) e de morte celular (em células da mucosa oral) na colheita. Não houve influência dos genes envolvidos no reparo em relação aos diferentes biomarcadores no grupo exposto. Os resultados indicam que exposição crônica a pesticidas, tanto químicos sintéticos como natural, pode ativar o sistema de enzimas antioxidantes. Por fim, nosso estudo chama a atenção à necessidade de formação profissional e informação sobre práticas seguras no uso de pesticidas e, além disso, na fumicultura, na manipulação das folhas fumo. / Agricultural workers engaged in tobacco cultivation are constantly exposed to large amounts of pesticides as well as to the nicotine present in raw tobacco leaves. Pesticides have been considered potential chemical mutagens. Studies have assumed that nicotine absorbed through the skin results in the characteristic green tobacco sickness (GTS), an occupational illness reported by tobacco workers. This study sought to determine genotoxic effects in farm workers occupationally exposed to agrochemicals and nicotine. The genomic instability, cell death as well as cholinesterase and cotinine levels in the blood of tobacco farmers were investigated. In order to verify relation of genetic susceptibility with biomarkers results, GSTT1, GSTM1, GSTP1, CYP2A6, PON, OGG1, RAD51, XRCC1 and XRCC4 genes polymorphisms was evaluated. Determination of oxidative stress markers and trace elements content was accomplished. In the first moment, peripheral blood samples were collected from 30 agricultural workers and 30 non-exposed subjects to investigate occupational exposure in three different crop times (off-season, during pesticides application and leaf harvest). In this study a significant increase in DNA damage, assessed by Comet assay, was observed in tobacco farmers compared to the nonexposed group, for all different crop times, and a significant increase in micronucleated cells was detected in the off-season group. No correlation was found between age and exposure time in relation to biomarker tests. The DNA damage was greater in males than in females, but with a significant difference only in off-season group. No difference, in cholinesterase activity, was seen among the group of farmers and non-exposed group. Increased level of cotinine was observed in leaf harvest group. In the second moment, peripheral blood and buccal cells samples were collected about from 111 agricultural workers, at two different crop times (during pesticides application and leaf harvest), and 56 non-exposed individuals. Results showed nuclear anomalies in the blood and buccal cells in tobacco farmers exposed to mixture of the substances with genotoxic and cytotoxic potential. Difference in blood and buccal micronucleus cytome assay results was found among two different times in the tobacco crop. Effects of PON1 and CYP2A6 genetic polymorphisms on the modulation of DNA damage induced by pesticides and cell death were observed in buccal micronucleus cytome (BMNcyt) assay. No statistically significant difference was found between genders and exposure time for all parameters analyzed. No difference was observed in hematocrit values between the groups. Correlation was observed in age and cytokinesis-blocked micronuclei (CBMN) assay results in nonexposed and pesticide application group. In relation to personal protective equipment (PPE) use, increased MN frequency in pesticide application was observed. From the nine markers of individual susceptibility studied in the CBMN assay, only GSTM1 null and CYP2A6*9, showed significant associations with results in farmers cells. Increase in cotinine level was observed in leaf harvest, when compared to non-exposed group. Cholinesterase (BChe) level was similar in the farmer and non-exposed group. No significant effect on the BChe activity and cotinine level was observed in exposed group with reference to different PON1 and CYP2A6 genotypes, respectively. In pesticide application was found increase in chromiun, magnesium, aluminum, chloride, zinc and potassium, when compared to non-exposed and leaf harvest group. Superoxide dismutase (SOD) activity presented a significant increase in exposed groups (pesticide application and leaf harvest) in relation to non-exposed group, and pesticide application presented higher values than leaf harvest group. The catalase (CAT) activity and TBARS presented a significant increase in leaf harvest than non-exposed group and pesticide application. Finally, this investigation suggests that DNA damage increases, analyzed by Comet, CBMN and BMNcyt assays, at different tobacco crop stages (pesticides application and tobacco leaf harvest), calling attention to the significant increase in the DNA damage during the off-season. Effect of individual genotype of the metabolism genes on the level of different biomarkers evaluated in exposed group demonstrated an influence on increase in damage of GSTM1 null (blood cells) and PON1 Gln/Gln (buccal cells) on pesticides application group, and a influence of CYP2A6*1/*1 (blood cells) and CYP2A6*9/- (buccal cells) on tobacco leaf harvest group. Individual genotype of the DNA repair genes of exposed groups did not show influence on the different biomarkers in this study. In pesticide application was found increase of trace elements content. The results also indicated that chronic exposure to pesticides, synthetic and natural, can influence antioxidant enzymes activity. Our study drives the attention once more to the need for occupational training on safe working practices and safe work environment for farm workers. Developing countries should use such data to establish safety occupational rules during the use of pesticides and mainly during tobacco leaf harvest.

Introdução: O adenocarcinoma de pâncreas é uma doença com prognóstico reservado e tem como um dos fatores de risco mais importantes o tabagismo. Dentre os componentes do cigarro a nicotina é o que apresenta maior concentração, sendo considerada a principal substância envolvida na carcinogênese pancreática. Visando o diagnóstico precoce e buscando novos tratamentos, os modelos XX experimentais se tornam úteis, à medida que possibilitam a compreensão do comportamento biológico tumoral e dos fatores indutores e promotores da doença. Para o desenvolvimento experimental do câncer de pâncreas em ratos e camundongos, o 7,12-dimetilbenzantraceno (DMBA) é um dos indutores químicos mais utilizados. Objetivos: Avaliar o efeito da nicotina injetável e da fumaça do cigarro sobre o pâncreas de camundongos submetidos à carcinogênese pelo DMBA, aplicando, para os achados histológicos, a nova classificação das neoplasias intra-epiteliais pancreáticas (NIPan) proposta em 2001 por Hruban e colaboradores. Materiais e Métodos: 114 camundongos machos foram alocados em 3 grupos. O grupo denominado DMBA-n recebeu 2mg/kg/dose de nicotina ([3-(1- methiyl-2-pyrrolidinyl)pyridine]) subcutânea durante 45 dias. Após o décimo quinto dia de nicotina, foi operado sendo implantado 1 mg de cristais de DMBA na cabeça pancreática, mediante sutura em bolsa. O grupo DMBA-f foi exposto à fumaça de cigarro na concentração de 100mg/m3 de nicotina também por 45 dias, e submetido à cirurgia com o implante de DMBA em seu pâncreas no 16° dia. O grupo denominado Sham, considerado como controle da cirurgia, permaneceu no alojamento pelo mesmo período de tempo e no 16° dia foi operado sendo confeccionada a bolsa sem o implante de DMBA. Este grupo não foi exposto à fumaça e não recebeu a nicotina. Transcorridos 30 dias de pósoperatório, todos os animais foram mortos e seus pâncreas foram preparados para avaliação histológica através da coloração com hematoxilina e eosina. Dois patologistas e dois dos autores procederam a avaliação histológica. Os diagnósticos considerados foram: pâncreas normal, hiperplasia reacional, NIPan 1a, NIPan 1b, NIPan 2, NIPan 3 e carcinoma. Os resultados foram comparados a um quarto grupo de camundongos (controle histórico) designado com DMBA-exclusivo, para fins de análise estatística. Resultados: A comparação entre os quatro grupos demonstrou que a freqüência geral de NIPan foi praticamente a mesma entre todos os animais expostos ao DMBA, sendo de 16 (66,7%) no DMBA-exclusivo, 20 (66,7%) no DMBA-f e 12 (44,4 %) no DMBA-n, quando consideradas as lesões de maior gravidade. O grupo Sham não apresentou NIPan. A freqüência do adenocarcinoma pancreático, entretanto foi maior no grupo DMBA-n (14 ou 51,9%) do que no DMBAexclusivo (4 ou 16,7%) e no DMBA-f (4 ou 13,3%). Igualmente o grupo Sham não apresentou carcinoma. A diferença entre os grupos apresentou significância estatística (p = 0,05 – teste Exato de Fisher). Conclusão: A nicotina, associada ao modelo experimental de carcinogênese pancreática induzida pelo DMBA em camundongos, promove o desenvolvimento do adenocarcinoma pancreático invasor, semelhante ao humano. A exposição à fumaça não atuou como promotora do adenocarcinoma pancreático invasivo, mas proporcionou o maior aparecimento de NIPan 3 ou carcinoma “in situ” quando comparado com o grupo DMBA-exclusivo. / Background: Pancreatic adenocarcinoma has a bad prognosis. There are some risk factors involved in this disease, but cigarette smoking and the nicotine, which is the greatest element in the cigarette, are the most important ones. Experimental models can provide us the study of new technology in early diagnosis and treatment, improving this situation. Besides this, can give us the comprehension of the tumoral biological behavior and its relationship with inductors and promoters elements. The 7,12-dimethylbenzanthracene (DMBA) is one of the best chemical agent applied to induce pancreatic cancer in rats and mice Objetive: To evaluate the effects of the nicotine and the effects of cigarette smoke exposure in mice with pancreatic DMBA implantation for carcinogenesis using Pancreatic Intraepithelial Neoplasia (PanIN) classification system described by Hruban in 2001. Materials and Methods: 114 male mice were divided in 3 groups. To the DMBA-n group were given subcutaneous 2 mg/kg/dose nicotine ([3-(1-methiyl-2-pyrrolidinyl)pyridine]) 2 times daily for 45 days. During this period and at the day 16, all the animals were operated and received 1mg of DMBA crystals in their pancreatic head in a purse-string suture. The DMBA-f group was exposed to 100mg/m3 of nicotine cigarette smoke 3 times a day also for 45 days and was operated at the sixteen day like the DMBA-n group. The Sham group (surgery control group) did not received nicotine nor was exposed to cigarette smoke, but was also operated at the sixteen day of the reclusion with a purse-string suture in pancreatic head without the DMBA crystals Euthanasia for all was performed after 30 days of the surgery. The entire pancreas was removed during the necropsy, and than prepared and stained with hematoxylin and eosin to the histological examination. The specimens were evaluated by two pathologists and two of the authors, using the following criteria: normal ducts, reactive hyperplasia, PanIN 1A, PanIN 1B, PanIN 2, PanIN 3 and carcinoma. To complete the statistical analysis, another group was associated to the study called the DMBA-exclusive group (historical control group). Results: The frequency of the PanIN in the 3 groups exposed to the DMBA was almost the same, when is considered the higher grade lesion (DMBA-exclusive= 16 or 66,7 %, DMBA-f=20 or 66,7% and DMBA-n= 12 or 44,4 %). Any PanIN was seen in the Sham group. The frequency of pancreatic adenocarcinoma was higher in the DMBA-n group (14 or 51,9%) than in the DMBA-exclusive (4 or 16,7%) and DMBA-f (4 or 13,3%). The Sham group did not shown carcinoma. The differences among groups were statistically significant (p = 0,05 – Fisher Test). Cconclusions: The association of the nicotine to the experimental model of pancreatic carcinogenesis induced by the DMBA in mice promotes the development of the same type of the human pancreatic adenocarcinoma. The cigarette smoke exposure in this study did not contribute to the cancer formation, but the development of the PaIN 3 in this group is higher than in the DMBA-exclusive group.