Orientador: Marcelo Fábio Gouveia Nogueira / Co-orientadora: Mariana Fernandes Machado / Banca: Marcelo Marcondes Seneda / Banca: Claudia Lima Verde Leal / Resumo: Em camundongo, estudos recentes demonstraram que o precursor do peptídeo natriurético tipo C (NPPC) e o seu receptor do tipo 2 (NPR2) são essenciais para a manutenção do bloqueio da meiose I no oócito. Além disso, fatores parácrinos secretados pelo oócito, como a proteína morfogenética óssea (BMP15), podem modular esse bloqueio pelo estímulo da expressão do gene NPR2 nas células do cumulus de camundongos. Em recente estudo na espécie bovina, o fluido folicular bovino (FFb), quando adicionado ao meio de maturação, interferiu na maturação nuclear do oócito e, como resultado, melhorou a produção in vitro de embriões. Contudo, não são conhecidos quais os fatores, presentes no FFb, que são responsáveis por esse efeito podendo inclusive haver participação das microvesículas presentes neste. Além de ser um componente do FFb, foi demonstrado que o estradiol pode participar diretamente da estimulação do NPR2. Portanto, os objetivos gerais do presente trabalho envolvem a elucidação do sistema NPPC-NPR2 no ovário bovino e a investigação da influência do NPPC exógeno, do estradiol e das vesículas extracelulares sobre a expressão do gene da PDE3 no oócito bovino e sobre a concentração de nucleotídeos cíclicos nos complexos cumulus-oócito. Foram realizado s quatro experimentos: 1) Ensaio imunoenzimático (ELISA) para investigar a presença e a concentração do NPPC no fluido folicular, no lisado de células da granulosa mural e nas vesículas extracelulares, de acordo com a classe de diâmetro folicular (3 a 6 mm; 6 a 8 mm e >8 mm); 2) Imunolocalização do receptor NPR2 no folículo antral bovino; 3) Expressão do gene da PDE3 no oócito bovino, mediante RT - PCR em tempo real, em CCOs im aturos e maturados in vitro por 6 horas com NPPC exógeno, estradiol e vesículas extracelulares; 4) Mensuração da concentração de AMPc e GMPc, em oócitos e células... / Abstract: In mice, recent studies have demonstrated that the natriuretic peptide precursor C (NPPC) and its type - 2 - receptor (NPR2) are essential for the maintenance of meiosis I arrest in the oocyte. Moreover, paracrine factors secreted by the oocyte such as bone mo rphogenetic protein 15 (BMP15) can modulate this arrest through the expression of the NPR2 gene in cumulus cells of mice. In a recent study in cattle, the bovine follicular fluid (bFF) added to the maturation medium was able to interfere with the oocyte nu clear maturation resulting in higher embryo yield in vitro . However, it is not known what factors present in bFF might be responsible for this effect and one candidate could be the presence of microvesicles in the bFF. Additionally, the estradiol hormone i s component of the bFF and was demonstrated to directly stimulate NPR2 expression. Therefore, the objectives of this work includes the investigation of the NPPC - NPR2 system in the bovine ovary and the assessment of the effects of exogenous NPPC, estradiol and extracellular vesicles on the expression of the PDE3 gene in bovine oocytes and the concentrations of cyclic - nucleotides in cumulus - oocyte complexes. We designed four experiments: 1) enzyme - linked immunosorbent assay (ELISA) for the presence and concen tration of the NPPC in follicular fluid, in the lysate of mural granulosa cells and in the extracellular vesicles, according to follicular diameter (3 to 6 mm, 6 to 8 mm, >8 mm); 2) Immunolocalization of NPR2 receptor in bovine antral follicles; 3) PDE3 ge ne expression in bovine oocyte by RT - PCR in real time, in immature COCs and in COCs in vitro matured for 6 h with exogenous NPPC, estradiol and extracellular vesicles; 4) Measurement of the concentration of cAMP and cGMP in oocytes and cumulus cells, respectively, either immature or matured in vitro for 6 h with exogenous NPPC or extracellular vesicles through specific... / Mestre

Orientadora: Elizabeth Romagosa / Banca: José Augusto Senhorini / Banca: Maria Inês Borella / Resumo: Nos meses de janeiro de 2001 e 2002, as fêmeas de cachara, Pseudoplatystoma fasciatum, de 1ª e 2ª maturação gonadal (2 anos e 7 meses e 3 anos e 7 meses), respectivamente, mantidas em cativeiro, foram selecionadas pela associação da característica externa anatômica, com internas, apresentando distribuições de freqüência porcentual dos diâmetros dos ovócitos com uma única moda de 937,5 μm; 82,5% dos núcleos centrais e 17,5% excêntricos. Histologicamente, pôde-se observar que a maioria dos ovócitos encontravam-se em fase de maturação final. Nove fêmeas de 1ª maturação, receberam 2 doses de extrato de hipófise de carpa (HC), 0,5 mg/Kg e 5,0 mg/Kg (T1); 7, com 2 doses de hCG, 5 e 10 IU/g (T2); 5, com 0,5 mg/Kg HC e 5 IU/g hCG/g (T3); 4 com solução salina 0,9% (T4). As 9 fêmeas do T1 e 7 do T2, no momento da liberação dos ovócitos, apresentaram ovócitos com o mesmo diâmetro; 100% com quebra da vesícula germinativa e taxas de fertilização de: 53,44 + 18,3 e 54,81 + 11,8 %; número de larvas de 165.330 + 94,1 e 158.570 + 20,6, respectivamente. As 5 fêmeas do T3 não responderam ao tratamento hormonal. As fêmeas do T4 pertenciam ao grupo controle. Em janeiro/02, das 15 fêmeas selecionadas, que se encontravam no 2º ciclo, 6 receberam o T1, 5 o T2 e 4 T4, apresentando diâmetros dos ovócitos semelhantes às de 1ª maturação. Nas 3as amostras, as fêmeas do T1 apresentaram deslocamento das modas para à direita, diâmetro modal de 1062,5 μm e as do T2, com diâmetros de 937,5 a 1125,0 μm, taxas de fertilização de 56,08 + 30,9 e 81,90 + 17,3 % e 334.547 + 244 e 633.129 + 190 larvas, respectivamente. Em microscopia de luz, notou-se que os ovócitos eram semelhantes aos da fase anterior. Pôde-se constatar maior eficiência do T2, nas fêmeas de 2ª maturação, quanto às taxas de fertilização e número de larvas obtidos durante o período estudado / Abstract: In the months of January 2001 and January 2002, females of cachara, Pseudoplatystoma fasciatum, were selected during their first and second gonadal maturation (2 years and 7 months old and 3 years and seven months old, respectively) according to the association between the external anatomic characteristics and internal, showing distribution of oocyte diameter frequency with a single mode of 937.5 mm; 82.5 % of central nuclei and 17.5 % of eccentric nuclei. Histologically, it was observed that the majority of oocytes were in final maturation. Nine females in first maturation received 2 doses of carp pituitary extract (CPE), 0.5 mg/kg and 5.0 mg/kg (T1); seven received 2 doses of hCG, 5 and 10 IU/g (T2); five received doses of carp pituitary extract 0.5 mg/kg and hCG 5IU/g (T3); four received 0.9 % saline (T4). Nine females from T1 and seven from T2 presented oocytes with the same diameter at the moment of oocyte release; 100 % with germinal vesicle breakdown and fertilization rate of 53.44 + 18.3 and 54.81 + 11.8 %; larvae number of 165,330 + 94.1 and 158,570 + 20.6, respectively. The five females from T3 didn't respond to the hormonal treatment. The four females from T4 belonged to the control group. In January 2002, 6 of the 15 selected females that were going through the second cycle received T1; 5 received T2; and 4 received T4, showing oocyte diameters similar to the ones in the first maturation. On the third samples, the females from T1 showed mode shift to the right and modal diameter of 1062.5mm; the females from T2 presented diameters ranging from 937.5mm to 1125.0mm; fertilization rates of 56.08 + 30.9 and 81.90 + 17.3 %; 364,547 + 244 and 633,129 + 190 larvae, respectively. Under light microscopy, it was noticed that the oocytes were similar to the ones at the previous stage. A better efficiency of T2 was verified on the second maturation females, considering the fertilization rates ... / Mestre

A maturação in vitro (MIV) de oócitos é uma técnica de Reprodução Assistida (RA) que apresenta inúmeras vantagens e aplicabilidades. No entanto, a qualidade dos gametas imaturos que são destinados a ela é bastante divergente, tornando-se necessário o desenvolvimento de técnicas que auxiliem na seleção dos gametas competentes, ou seja, aptos à MIV. A partir do conhecimento de que oócitos em fase de crescimento apresentam alta atividade específica da enzima glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PDH), e que oócitos que finalizaram seu crescimento apresentam baixa atividade específica dessa enzima, foi proposta a coloração dos gametas com o corante Azul Cresil Brilhante (BCB) como método de seleção dos oócitos competentes. Esse corante é capaz de ser metabolizado pela G6PDH, resultando na coloração dos gametas capacitados (classificados como BCB positivo), mas não dos gametas que ainda estão em fase de crescimento, que permanecem incolores e são classificados como BCB negativo. Em animais, foi demonstrado que essa técnica permite selecionar melhor os gametas e, consequentemente, aumentar não só as taxas de maturação oocitária nuclear e citoplasmática, como também as taxas de fertilização, de formação de blastocisto e de nascidos vivos. No entanto, apenas modelos animais foram utilizados até o presente momento. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência e a segurança da exposição de gametas humanos ao BCB como método de seleção de gametas competentes antes da MIV. Para isso, três diferentes perfis de pacientes tiveram seus oócitos imaturos incluídos no estudo: 6 pacientes cuja ovulação foi induzida e gametas imaturos foram captados (17 oócitos); 3 pacientes ooforectomizadas (20 oócitos recuperados); e 32 gestantes cujos oócitos foram captados durante a cesareana (92 oócitos recuperados). Os oócitos imaturos foram divididos em dois grupos: controle (colocado imediatamente para MIV) e tratado – exposto a 26 μM de BCB por 60 minutos. Após coloração, de acordo com a coloração do citoplasma, o grupo tratado foi classificado em BCB positivo ou negativo e destinado à MIV. Após 24 e 48 horas de MIV, foi avaliado o grau de maturação nuclear. A taxa de MIV dos oócitos recuperados de pacientes estimuladas e ooforectomizadas foi igual entre os grupos após 24 e 48 horas. No entanto, a taxa de MIV foi significativamente superior no grupo BCB positivo quando comparado com o grupo BCB negativo, tanto para os oócitos de todas as pacientes (P = 0,024 e P = 0,015) como quando os oócitos das gestantes (P = 0,004 e P = 0,032) foram avaliados separadamente, após 24 e 48 horas de MIV, respectivamente. O grupo controle foi similar ao grupo BCB positivo. A taxa de retomada de meiose (ausência de vesícula germinativa) após 24 horas foi igual entre os grupos, independente da fonte de recuperação dos gametas. Contudo, ao avaliar todos os gametas após 48 horas de MIV, a taxa de retomada de meiose foi superior no grupo BCB positivo, quando comparado com os demais grupos (P = 0,035). Quando os oócitos foram avaliados em conjunto, o grupo BCB positivo apresentou as menores taxas de degeneração (P = 0,002). Tendo em vista os resultados obtidos, podemos concluir que o BCB pode ser um bom marcador na seleção de oócitos humanos competentes e não é tóxico para o gameta humano. / The in vitro maturation (IVM) is an Assisted Reproduction Technique (ART) that presents many advantages. However, the quality of immature oocytes destined to IVM is very divergent. That’s why pre-selection procedures of developmentally competent oocytes are important. Growing oocytes synthesize glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH), but this enzyme is inactivated in oocytes that have completed their growth phase. Once Brilliant Cresyl Blue (BCB) can be reduced by G6PDH, it is suggested that BCB staining can select fully grown oocytes, when exposed to BCB – the cytoplasm of these eggs will appear blue, being classified as BCB positive, whereas oocytes still in growth phase will not be stained (cytoplasm will appear colourless, being classified as BCB negative). It has been already demonstrated that this selection can improve not only nuclear and cytoplasmic oocyte maturation, but also fertilization and blastocyst rates. However, only animal models were utilized until the present. Consequently, the aim of the experiment was to evaluate the efficiency and safety of BCB staining as a selection of developmentally competent immature human oocytes before IVM. Three kinds of patients were included in the study: 6 hormonal stimulated patients with immature oocytes at retrieval (17 oocytes); 3 ooforectomized patients (20 oocytes recovered); and 32 pregnant patients during cesarean section (92 oocytes recovered). Immature oocytes were divided into groups: control (disposed directly to IVM) and treated - exposed to BCB 26μM during 60 minutes. After staining, treated group was classified as cytoplasm coloration, BCB positive or negative, and then disposed to IVM. After 24 and 48 hours of IVM, nuclear status was checked. The IVM rate of immature oocytes recovered from stimulated and ooforectomized patients was equal among groups either after 24 or 48 hours of IVM. Nevertheless, IVM was higher in BCB positive compared to BCB negative after 24 and 48 hours of IVM analyzing oocytes recovered from all patients (P = 0.024 and P = 0.015), and from cesarean patients (P = 0.004 and P = 0.032). The control group was equal to BCB positive. The meiosis resumption rate (absence of germinal vesicle) after 24 hours of IVM was equal among groups, but higher in BCB positive compared to other groups after 48 hours when all gametes were analyzed jointly (P = 0.035). Degeneration rate was lower in BCB positive compared to their counterparts when oocytes were analyzed jointly (P = 0.002). In conclusion, BCB test can be a good marker in pre-selection procedures of developmentally competent human oocytes and, apparently, it is not toxic to the gamete.

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:02:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-08. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:19:16Z : No. of bitstreams: 1 000849551.pdf: 939514 bytes, checksum: 901efdf4cabd26a394b9aabd01d199d2 (MD5) / A progesterona e seus análogos têm sido utilizados para diversas finalidades na reprodução animal. O objetivo deste estudo foi avaliar a influencia da progesterona injetável no número de oócitos recuperados, na qualidade oocitária e produção embrionária de novilhas Nelore pré-púberes. Foram utilizadas 31 fêmeas com idade entre 18 a 20 meses, não gestantes e não cíclicas. As doadoras de oócitos foram divididas em 3 grupos experimentais em delineamento crossover da seguinte maneira: Grupo P0 (n=11), os animais deste grupo receberam duas aplicações de solução placebo (1 mL), com intervalo de 7 dias iniciando 14 dias (D-14) antes da primeira aspiração (D-0); Grupo P7 (n=10): os animais receberam uma aplicação de solução placebo (1 mL) 14 dias (D-14) e uma de progesterona (P4) injetável (150mg) 7 dias (D-7) antes da aspiração; Grupo P14 (n=10), neste grupo os animais receberam duas aplicações de P4 injetável (150mg) com intervalo de 7 dias, a primeira 14 dias (D-14) e a segunda 7 (D-7) dias antes da aspiração. Realizaram-se um total de três aspirações foliculares em intervalos de 28 dias. Os animais que apresentaram CL durante o experimento foram alocados em um grupo separado para serem analisados e comparados com o grupo sem CL. Os oócitos recuperados foram selecionados e submetidos aos procedimentos da PIVE. Após a confirmação da homocedasticidade (BoxCox) e normalidade (teste de Cramér-von Mises) dos dados, realizou-se a análise de variância (ANOVA). O teste de Tukey foi utilizado para as comparações das médias das variáveis, para as correlações dos dados foi utilizado o teste de correlação de Pearson, e significantes quando p≤ 0,05. Não foram verificadas diferenças significativas (p>0,05) quanto ao número de oócitos recuperados (oócitos totais), oócitos viáveis (G I, II, III), entre os animais tratados (grupos P7 e P14) em relação aos animais que não receberam P4 (grupo P0). As... / Progesterone has been used for various purposes in the animal reproduction. The objective of this study was to evaluate the influence of exogenous progesterone injection in the number of recovered oocyte, oocyte quality and embryo production of prepubertal Nelore heifers. We used 31 females (18 to 20 months) non pregnant and without corpus luteum (CL). Cows were divided in 3 groups in a cross-over design: Group I P0 (n=11), animals received two placebo solution applications (1 mL), 7-day interval and starting 14 days (D-14) before the first aspiration (D-0); Group II P7 (n=10) treated group, the animals received a placebo solution application (1 mL) 14 days (D-14) and injecting progesterone (P4; 150 mg) 7 days (D-7) before aspiration; Group III P14 (n = 10), animals received two injections of P4 (150mμg) with an interval of 7 days, the first 14 days (D-14) and the second 7 days (D-7) before aspiration. We conducted 3 aspiration with 28-day intervals. The animals with CL during the experiment were placed in a separate group to be analyzed and compared with the group without CL. The recovered oocytes were selected and submitted to the procedures of the in vitro embryo production (IVEP). After confirming the homocedasticity (BoxCox) and normality (Cramér-von Mises test) of the data, carried out the analysis of variance (ANOVA). Tukey's test was used to compare the means of the variables and the pearson correlation test was used for correlations of the data, considered significant when p ≤ 0.05. There were no significant differences (p> 0.05) in the number of oocytes retrieved (total oocytes), viable oocytes (GI, II, III), between the animals treated (P7 and P14 groups) and animals that did not receive P4 (P0 group). The animals showed an average of 14.98 ± 10.82 oocytes collected by aspiration session. The mean and standard deviation of rates (%) of viable oocytes and embryos produced did not differ (p> 0.05) between groups. The ...

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-06. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:48:36Z : No. of bitstreams: 1 000849664.pdf: 1189084 bytes, checksum: cbc1fe6d442a04c2f695f228e768b010 (MD5) / Em camundongo, estudos recentes demonstraram que o precursor do peptídeo natriurético tipo C (NPPC) e o seu receptor do tipo 2 (NPR2) são essenciais para a manutenção do bloqueio da meiose I no oócito. Além disso, fatores parácrinos secretados pelo oócito, como a proteína morfogenética óssea (BMP15), podem modular esse bloqueio pelo estímulo da expressão do gene NPR2 nas células do cumulus de camundongos. Em recente estudo na espécie bovina, o fluido folicular bovino (FFb), quando adicionado ao meio de maturação, interferiu na maturação nuclear do oócito e, como resultado, melhorou a produção in vitro de embriões. Contudo, não são conhecidos quais os fatores, presentes no FFb, que são responsáveis por esse efeito podendo inclusive haver participação das microvesículas presentes neste. Além de ser um componente do FFb, foi demonstrado que o estradiol pode participar diretamente da estimulação do NPR2. Portanto, os objetivos gerais do presente trabalho envolvem a elucidação do sistema NPPC-NPR2 no ovário bovino e a investigação da influência do NPPC exógeno, do estradiol e das vesículas extracelulares sobre a expressão do gene da PDE3 no oócito bovino e sobre a concentração de nucleotídeos cíclicos nos complexos cumulus-oócito. Foram realizado s quatro experimentos: 1) Ensaio imunoenzimático (ELISA) para investigar a presença e a concentração do NPPC no fluido folicular, no lisado de células da granulosa mural e nas vesículas extracelulares, de acordo com a classe de diâmetro folicular (3 a 6 mm; 6 a 8 mm e >8 mm); 2) Imunolocalização do receptor NPR2 no folículo antral bovino; 3) Expressão do gene da PDE3 no oócito bovino, mediante RT - PCR em tempo real, em CCOs im aturos e maturados in vitro por 6 horas com NPPC exógeno, estradiol e vesículas extracelulares; 4) Mensuração da concentração de AMPc e GMPc, em oócitos e células... / In mice, recent studies have demonstrated that the natriuretic peptide precursor C (NPPC) and its type - 2 - receptor (NPR2) are essential for the maintenance of meiosis I arrest in the oocyte. Moreover, paracrine factors secreted by the oocyte such as bone mo rphogenetic protein 15 (BMP15) can modulate this arrest through the expression of the NPR2 gene in cumulus cells of mice. In a recent study in cattle, the bovine follicular fluid (bFF) added to the maturation medium was able to interfere with the oocyte nu clear maturation resulting in higher embryo yield in vitro . However, it is not known what factors present in bFF might be responsible for this effect and one candidate could be the presence of microvesicles in the bFF. Additionally, the estradiol hormone i s component of the bFF and was demonstrated to directly stimulate NPR2 expression. Therefore, the objectives of this work includes the investigation of the NPPC - NPR2 system in the bovine ovary and the assessment of the effects of exogenous NPPC, estradiol and extracellular vesicles on the expression of the PDE3 gene in bovine oocytes and the concentrations of cyclic - nucleotides in cumulus - oocyte complexes. We designed four experiments: 1) enzyme - linked immunosorbent assay (ELISA) for the presence and concen tration of the NPPC in follicular fluid, in the lysate of mural granulosa cells and in the extracellular vesicles, according to follicular diameter (3 to 6 mm, 6 to 8 mm, >8 mm); 2) Immunolocalization of NPR2 receptor in bovine antral follicles; 3) PDE3 ge ne expression in bovine oocyte by RT - PCR in real time, in immature COCs and in COCs in vitro matured for 6 h with exogenous NPPC, estradiol and extracellular vesicles; 4) Measurement of the concentration of cAMP and cGMP in oocytes and cumulus cells, respectively, either immature or matured in vitro for 6 h with exogenous NPPC or extracellular vesicles through specific...

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-27. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:09Z : No. of bitstreams: 1 000866550.pdf: 5922764 bytes, checksum: cb9ca6f21002ad65e692a0dd0fe6ec70 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A possibilidade de desovas sucessivas em condições de laboratório permite um incremento qualitativo e quantitativo na produção aquícola. Estudos recentes indicam que o lambari do rabo amarelo (Astyanax altiparanae), apresenta alta plasticidade reprodutiva e que o ciclo reprodutivo pode ser manipulado fora da época de reprodução. Além disso, a manipulação da condição ambiental, pode induzir a desova durante o período de inverno. Por tanto, dado o potencial zootécnico desta espécie e sua crescente procura por parte de produtores, o objetivo deste trabalho foi investigar se a mesma fêmea maturaria novamente em condições laboratoriais, quais seriam as características do processo e o tempo necessário para a realização de uma segunda desova. Os resultados aqui obtidos foram promissores, pois observamos que uma mesma fêmea mantida num sistema de recirculação de água com temperatura controlada (29,24 ± 0,42°C) apresenta ovócitos vitelogênicos completos 6 dias após a desova. A obtenção de ciclos reprodutivos completos em laboratório em curtos períodos inter desovas otimiza o uso do espaço e de água, tornando a produção desta espécie ainda mais adequada aos preceitos de sustentabilidade atrelados à uma aquicultura moderna e competitiva / The possibility of successive spawning in laboratory conditions permits a qualitative and quantitative increase in aquaculture. Recent studies indicate that the yellowtail tetra (Astyanax altiparanae) presents high reproductive plasticity which the reproductive cycle may be manipulated out of breeding season. In addition, the manipulation of enviromental condition, may induce the spawning during winter period. Therefore, given the breeding potential of this species and the increasing demand from fish farmers, the aim of this experiment was to investigate if the same female can prepare for a second induced spawning at laboratory conditions, what are the characteristics of the process and the time required to perform this second spawning. The results obtained were promising, as we observed that the same female maintained in a recirculating water system at a controlled temperature (29.24 ± 0.42°C) presentes vitellogenic oocytes 6 days after spawning. Obtaining complete reproductive cycles in the laboratory at short inter spawning period optimize the use of space and water, making the production of this species appropriate for a modern, sustainable and competitive aquaculture

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2016-02-26. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:13Z : No. of bitstreams: 1 000866921.pdf: 1351747 bytes, checksum: f2cbbe9433b8139712173e032289de64 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Muitos peixes de interesse na aquicultura, dentre eles a garoupa-verdadeira, Epinephelus marginatus, exibem disfunções reprodutivas devido ao confinamento, que por sua vez, afetam o eixo hipotálamo-hipófise-gônadas que controla os processos reprodutivos em vertebrados. O objetivo deste trabalho foi estudar o perfil dos esteroides gonadais e hôrmonio folículo estimulate (FSH) ao longo do ciclo reprodutivo, durante a reprodução induzida e na estimulação da vitelogênese em fêmeas de E. marginatus em cativeiro. Durante o ciclo anual a concentração de andrógenos não se alterou. Por outro lado, o nível plasmático de 17β-estradiol (E2) foi significativamente superior no período final, em comparação com o período inicial de confinamento. Concentrações plasmáticas de 17 α- hidroxiprogesterona (17α-OHP) foram significativamente mais elevadas nos meses de outubro, novembro e janeiro em relação aos meses de maio, junho, julho e agosto, e os níveis de FSH plasmáticos foram superiores em janeiro quando comparados aos meses de junho, julho, agosto e setembro, porém, os ovócitos permaneceram na fase de crescimento primário durante todo o ciclo anual. No primerio experimento de indução hormonal (fêmeas não vitelogênicas) apenas a concentração de 17α-OHP aumentou após a estimulação com gonadotropina coriônica humana (hCG), mas este aumento não se refletiu no diâmetro dos ovócitos e ovulação. No segundo experimento, fêmeas vitelogênicas capturadas no ambiente natural foram induzidas e ovularam no período de 24 a 32 horas após a terceira dose de hCG, apresentando dois padrões diferentes de desova: a desova total ou em pequenos lotes, e os níveis plasmáticos de E2, testosterona (T) e 17α-OHP apresentaram aumento progressivo ao longo dos períodos amostrais. No experimento com implantes de estradiol houve aumento deste estrógeno no plasma, mas sem desencadear a vitelogênese. Por fim, consideramos que... / Many fish of interest in aquaculture, including the dusky grouper, Epinephelus marginatus exhibit reproductive dysfunctions due to confinement, which in turn affect the hypothalamus-pituitary-gonadal axis that controls the reproductive processes in vertebrates. The aim of this study was to evaluate the profile of gonadal steroids and follicle-stimulating hormone (FSH) throughout the reproductive cycle, during the induced spawning and vitellogenesis induction in E. marginatus females in captivity. During the annual cycle, the concentration of androgens did not change. Moreover, the plasma levels of 17β-estradiol (E2) was significantly higher in the end of the period compared with the initial period of confinement. Plasma concentrations of 17 α-hydroxyprogesterone (17α-OHP) were significantly higher in October, November and January than May, June, July and August, and serum FSH levels were higher in January compared to June, July, August and September, however, the oocytes remained at the stage of primary growth throughout the annual cycle. In the first hormonal induction experiment (non vitellogenic females) only 17α-OHP increased after stimulation with human chorionic gonadotropin (hCG), however this increase was not reflected in the diameter of oocytes and ovulation. In the second experiment, vitellogenic females captured in the natural environment were induced to spawning and ovulated within 24 to 32 hours after the third dose of hCG, showing two different patterns of spawning: the total spawning or spawning in small batches, and plasma levels of E2, testosterone (T) and 17α -OHP presented a progressive increase over the sampling periods. In the experiment with estradiol implants, an increase of this estrogen was observed, but vitellogenesis was not triggered. Finally, we consider that the use of hCG is viable to induce the final maturation and ovulation in vitellogenic females and we suggest a period of about 3 years of ... / FAPESP: 2011/24074-8

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-02-14. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:31Z : No. of bitstreams: 1 000196268.pdf: 2385393 bytes, checksum: a6a85c1578a43a75669555574180047f (MD5) / Nos meses de janeiro de 2001 e 2002, as fêmeas de cachara, Pseudoplatystoma fasciatum, de 1ª e 2ª maturação gonadal (2 anos e 7 meses e 3 anos e 7 meses), respectivamente, mantidas em cativeiro, foram selecionadas pela associação da característica externa anatômica, com internas, apresentando distribuições de freqüência porcentual dos diâmetros dos ovócitos com uma única moda de 937,5 μm; 82,5% dos núcleos centrais e 17,5% excêntricos. Histologicamente, pôde-se observar que a maioria dos ovócitos encontravam-se em fase de maturação final. Nove fêmeas de 1ª maturação, receberam 2 doses de extrato de hipófise de carpa (HC), 0,5 mg/Kg e 5,0 mg/Kg (T1); 7, com 2 doses de hCG, 5 e 10 IU/g (T2); 5, com 0,5 mg/Kg HC e 5 IU/g hCG/g (T3); 4 com solução salina 0,9% (T4). As 9 fêmeas do T1 e 7 do T2, no momento da liberação dos ovócitos, apresentaram ovócitos com o mesmo diâmetro; 100% com quebra da vesícula germinativa e taxas de fertilização de: 53,44 + 18,3 e 54,81 + 11,8 %; número de larvas de 165.330 + 94,1 e 158.570 + 20,6, respectivamente. As 5 fêmeas do T3 não responderam ao tratamento hormonal. As fêmeas do T4 pertenciam ao grupo controle. Em janeiro/02, das 15 fêmeas selecionadas, que se encontravam no 2º ciclo, 6 receberam o T1, 5 o T2 e 4 T4, apresentando diâmetros dos ovócitos semelhantes às de 1ª maturação. Nas 3as amostras, as fêmeas do T1 apresentaram deslocamento das modas para à direita, diâmetro modal de 1062,5 μm e as do T2, com diâmetros de 937,5 a 1125,0 μm, taxas de fertilização de 56,08 + 30,9 e 81,90 + 17,3 % e 334.547 + 244 e 633.129 + 190 larvas, respectivamente. Em microscopia de luz, notou-se que os ovócitos eram semelhantes aos da fase anterior. Pôde-se constatar maior eficiência do T2, nas fêmeas de 2ª maturação, quanto às taxas de fertilização e número de larvas obtidos durante o período estudado / In the months of January 2001 and January 2002, females of cachara, Pseudoplatystoma fasciatum, were selected during their first and second gonadal maturation (2 years and 7 months old and 3 years and seven months old, respectively) according to the association between the external anatomic characteristics and internal, showing distribution of oocyte diameter frequency with a single mode of 937.5 mm; 82.5 % of central nuclei and 17.5 % of eccentric nuclei. Histologically, it was observed that the majority of oocytes were in final maturation. Nine females in first maturation received 2 doses of carp pituitary extract (CPE), 0.5 mg/kg and 5.0 mg/kg (T1); seven received 2 doses of hCG, 5 and 10 IU/g (T2); five received doses of carp pituitary extract 0.5 mg/kg and hCG 5IU/g (T3); four received 0.9 % saline (T4). Nine females from T1 and seven from T2 presented oocytes with the same diameter at the moment of oocyte release; 100 % with germinal vesicle breakdown and fertilization rate of 53.44 + 18.3 and 54.81 + 11.8 %; larvae number of 165,330 + 94.1 and 158,570 + 20.6, respectively. The five females from T3 didn't respond to the hormonal treatment. The four females from T4 belonged to the control group. In January 2002, 6 of the 15 selected females that were going through the second cycle received T1; 5 received T2; and 4 received T4, showing oocyte diameters similar to the ones in the first maturation. On the third samples, the females from T1 showed mode shift to the right and modal diameter of 1062.5mm; the females from T2 presented diameters ranging from 937.5mm to 1125.0mm; fertilization rates of 56.08 + 30.9 and 81.90 + 17.3 %; 364,547 + 244 and 633,129 + 190 larvae, respectively. Under light microscopy, it was noticed that the oocytes were similar to the ones at the previous stage. A better efficiency of T2 was verified on the second maturation females, considering the fertilization rates ...

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Cesar Roberto Esper / Banca: Marcos Brandão Dias Ferreira / Resumo: Animais da raça Holandesa, criados nas regiões de clima temperado a quente apresentam baixa eficiência quanto ao número, qualidade e competência oocitária para a produção in vitro de embriões, em comparação às raças Zebuínas. Por outro lado o controle da onda folicular e a estimulação com FSH exógeno pode incrementar o número e melhorar a qualidade e competência oocitária para a produção embrionária. Com o objetivo comparativo sete novilhas, sete vacas não lactantes e sete vacas em lactação foram utilizadas em um delineamento em "crossover" foram submetidas a quatro tratamentos: T1 - Aspiração folicular ao acaso em dia aleatório do ciclo estral; T2 - Aspiração folicular dois dias após a remoção do folículo dominante; T3 - Aspiração folicular 24 horas após remoção do folículo dominante e estimulação com dose única de FSH (100 UI para novilhas e 200 UI para vacas não lactantes ou em lactação) vinte quatro horas antes da aspiração folicular; T4 - Aspiração folicular após estimulação e indução do pico de LH (inserção de implante de progestágeno, aspiração do folículo dominante e estimulação com FSH na dose de 250 UI para novilhas, 500 UI para vacas não lactantes e lactantes, subdividas em 8 doses decrescentes, indução de luteólise e retirada do implante 36 horas antes do GnRH e aspiração folicular 24 horas após a administração de GnRH). Não foi observada diferença estatística entre os tratamentos (P>0,05) quando foi avaliada a recuperação de oócitos, no entanto a categoria de novilhas obteve melhores resultados e apresentou diferença estatística (P<0,05) quando comparada com vacas lactantes e não lactantes, porém não foi observada diferença estatística entre as categorias vacas não lactantes ou vacas lactantes. Quando os oócitos viáveis foram avaliados, a categoria de novilhas apresentou melhor resultado e diferença significativa ... / Abstract: Holstein cows, bred in temperate to hot climate have low efficiency on the number, quality and oocyte competence for in vitro production of embryos, compared to Zebu breeds. On the other hand the control of follicular wave and stimulation with exogenous FSH can increase the number and improve the quality and oocyte competence for embryo production. With the comparative goal seven heifers, seven non-lactating cows and seven lactating cows were used in a complete "crossover" were subjected to four treatments: T1 - Follicular Aspiration randomly at any time of the estrous cycle; T2 - Follicular Aspiration two days after removal of the dominant follicle; T3 - Follicular Aspiration 24 hours after removal of the dominant follicle and stimulation with single dose of FSH (100 IU to 200 IU for heifers and non-lactating cows or lactating) twenty four hours before follicular aspiration; T4 - Follicular Aspiration after stimulation and induction of the LH surge (progestagen implant insertion, aspiration of the dominant follicle and FSH stimulation at a dose of 250 IU to 500 IU for heifers and non-lactating and lactating cows, subdivided in 8 decreasing doses, induce luteolysis and removal of the implant 36 hours before of the GnRH and follicular aspiration 24 hours after GnRH administration). No statistical difference between treatments (P>0.05) was evaluated oocyte retrieval was observed, however category heifers achieved better results and statistical differences (P<0.05) compared with lactating cows and non-lactating, although no statistical difference between the categories of non-lactating cows and lactating cows was observed. When the viable oocytes were evaluated, the grade of heifers showed better results and significant difference (P <0.05) compared with lactating and non-lactating cows, and no significant difference was observed between non-lactating cows and lactating cows (P>0.05). In relation to treatments, treatment 1 (T1) differed ... / Mestre

Orientador: Sérgio Ricardo Batlouni / Coorientador: Rafael Yutaka Kuradomi / Banca: Laura Satico Okada / Banca: George Shigueki Yasui / Resumo: A possibilidade de desovas sucessivas em condições de laboratório permite um incremento qualitativo e quantitativo na produção aquícola. Estudos recentes indicam que o lambari do rabo amarelo (Astyanax altiparanae), apresenta alta plasticidade reprodutiva e que o ciclo reprodutivo pode ser manipulado fora da época de reprodução. Além disso, a manipulação da condição ambiental, pode induzir a desova durante o período de inverno. Por tanto, dado o potencial zootécnico desta espécie e sua crescente procura por parte de produtores, o objetivo deste trabalho foi investigar se a mesma fêmea maturaria novamente em condições laboratoriais, quais seriam as características do processo e o tempo necessário para a realização de uma segunda desova. Os resultados aqui obtidos foram promissores, pois observamos que uma mesma fêmea mantida num sistema de recirculação de água com temperatura controlada (29,24 ± 0,42°C) apresenta ovócitos vitelogênicos completos 6 dias após a desova. A obtenção de ciclos reprodutivos completos em laboratório em curtos períodos inter desovas otimiza o uso do espaço e de água, tornando a produção desta espécie ainda mais adequada aos preceitos de sustentabilidade atrelados à uma aquicultura moderna e competitiva / Abstract: The possibility of successive spawning in laboratory conditions permits a qualitative and quantitative increase in aquaculture. Recent studies indicate that the yellowtail tetra (Astyanax altiparanae) presents high reproductive plasticity which the reproductive cycle may be manipulated out of breeding season. In addition, the manipulation of enviromental condition, may induce the spawning during winter period. Therefore, given the breeding potential of this species and the increasing demand from fish farmers, the aim of this experiment was to investigate if the same female can prepare for a second induced spawning at laboratory conditions, what are the characteristics of the process and the time required to perform this second spawning. The results obtained were promising, as we observed that the same female maintained in a recirculating water system at a controlled temperature (29.24 ± 0.42°C) presentes vitellogenic oocytes 6 days after spawning. Obtaining complete reproductive cycles in the laboratory at short inter spawning period optimize the use of space and water, making the production of this species appropriate for a modern, sustainable and competitive aquaculture / Mestre