Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-09-30. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:06Z : No. of bitstreams: 1 000866586.pdf: 4990052 bytes, checksum: 453830aef438e61065aa803a0cf55713 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O camarão-sete-barbas Xiphopenaeus kroyeri está entre as espécies de crustáceos mais importantes do litoral brasileiro, com destaque social, econômico, ambiental e cultural. Além disso, destaca-se a ampla distribuição geográfica no litoral Atlântico Ocidental (Rio Grande de Sul - BR até a Carolina do Norte - EUA). Também evidencia-se o aumento da captura, com consequente diminuição dos estoques naturais. A falta de conhecimento sobre a biologia das espécies, principalmente aquelas visadas pelas frotas pesqueiras, diminui a eficiência de aplicações de medidas para proteção dos estoques naturais. O conhecimento sobre a dinâmica reprodutiva de uma espécie pode ser considerado importante e eficaz para controlar uma população explorada. Com relação aos crustáceos, o ciclo reprodutivo apresenta ovários em diferentes estágios de maturação e a determinação destes estágios envolve as atividades inerentes ao ovário e ao hepatopâncreas. Estes dois órgãos trabalham de forma sincronizada durante a vitelogênese. Assim, o objetivo deste estudo foi reavaliar alguns pontos referente a dinâmica celular em fêmeas de Xiphopenaeus kroyeri nos diferentes estágios de maturação ovariana. A classificação macroscópica e microscópica da maturação ovariana e o perfil celular dos túbulos hepatopancreáticos foram estudados através de análises histológicas e histoquímicas; a localização da síntese de vitelogenina no ovário e hepatopâncreas foi estudada através da imuno-histoquímica; e os índices gonadossomático (IGS) e hepatossomático (IHS) foram comparados. Deste modo, o ovário de X. kroyeri apresenta seis estágios de maturação: imaturo, pré-maturo, maturação inicial, maturação avançada, maduro e desovado. As células germinativas apresentam seis fases de desenvolvimento: oogônia tipo I, oogônia tipo II, oócitos pré-vitelogênicos, oócitos em vitelogênese inicial, oócitos em... / The shrimp Xiphopenaeus kroyeri is among the most important shellfish species off the Brazilian coast, with several highlights such as social, economic, environmental and cultural. In addition, we highlight the wide geographic distribution in the western Atlantic coast (Rio Grande do Sul - BR to North Carolina - USA) and also the increase in artisanal fisheries with consequent reduction of the natural stocks. The lack of knowledge about the biology of the species, especially those targeted by fishing fleets, decreases the efficiency of strategies for protection of natural stocks. Knowledge about reproductive dynamics of a species is considered important and effective to control an exploited population. Regarding the crustaceans, the reproductive cycle is composed of ovaries at different stages of maturation, and the determination of these stages involves activities related to the ovary and hepatopancreas. These two organs work synchronously during vitellogenesis. The objectives of this study were to reevaluate some points in females in different stages of ovarian maturation. Macroscopic and microscopic classification of ovarian maturation and the cellular profile of hepatopancreatic tubules were studied by histological and histochemical analyzes; the location of vitellogenin synthesis in ovary and hepatopancreas was studied by immunohistochemistry and the gonadosomatic (GSI) and hepatosomatic (IHS) indices were compared. Thus, X. kroyeri ovary features six maturity stages: immature, pre-mature, early maturation, advanced maturation, mature and spawned. The germ cells exhibit six phases of development: oogonia type I, oogonia type II, pre-vitellogenic oocytes, oocytes in early vitellogenesis, oocytes in advanced vitellogenesis and mature oocyte. The hepatopancreatic tubule is lined by a pseudostratified epithelium with five cell types, cell E (undifferentiated) cells F (fibrillar), cell R (resorptive), B cell (vesicular) and cell M ... / CNPq: 140453/2013-0

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Coorientador: Márcia Rita Fernandes Machado / Banca: Leandro Zuccolotto Crivellenti / Banca: Eliandra Antônia Pires Buttler / Banca: Maricy Apparício Ferreira / Resumo: Nos últimos anos, com a escassez de alimentos, o ser humano vem buscando alternativas de possíveis fontes de proteínas para a sua nutrição. A criação de pacas em cativeiro pode ser uma opção viável desde que explorada adequadamente. Fatos como esse favorecem o desenvolvimento de pesquisas científicas relacionadas à biotecnologia da reprodução, onde essas deixam de ser realizadas unicamente devido a uma preocupação com a conservação da espécie, mas também como uma forma de melhorar a sua produção zootécnica. Com a escassez de dados na literatura surgem dúvidas se seria possível obter oócitos viáveis de pacas para maturação in vitro (MIV). Dessa forma, objetivou-se com esse estudo estabelecer técnica viável de aspiração folicular em pacas, testando efeitos de protocolos hormonais sobre taxa de recuperação de oócitos e MIV, além de avaliar os procedimentos cirúrgicos e os aspectos reprodutivos. Para isso oito fêmeas adultas foram submetidas a quatro tratamentos cada, para a coleta de oócitos por meio de aspirações foliculares auxiliada por videolaparoscopia, onde em três desses tratamentos, houve estímulos hormonais utilizando eCG e FSH. Oócitos recuperados em cada tratamento foram classificados qualitativamente e em seguida submetidos à MIV. Posteriormente, os mesmos foram avaliados quanto ao estado de maturação nuclear. Após todas as análises, conclui-se que a administrações de gonadotrofinas não foram eficientes para superestimular os grupos tratados ou aumentar a eficiência ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In recent years, with food shortages, the being human has been seeking possible alternative sources of protein for nutrition. Breeding of spotted pacas in captivity would be one of those alternatives, if exploited properly. Facts as that favor the development of scientific research related to biotechnology of reproduction, where these are no longer held solely because of a concern for conservation of this species, but also as a way to improve their zootechnical production. Due to lack of data in the literature doubts arise whether it would be possible to obtain viable oocytes from spotted pacas for in vitro maturation. Thus, the aim of this study was to establish viable technique of ovum pick-up in spotted pacas, testing effects of hormonal protocols on recovery rate of oocyte and IVM, and to evaluate the surgical and reproductive aspects. For this eight adult females were subjected to four treatments each, to collect oocytes by laparocoic ovum pick-up, which in three of these treatments were used hormonal stimulation with eCG and FSH. Retrieved oocytes in each treatment were classified qualitatively and then submitted to IVM. Subsequently, they were evaluated for nuclear maturation. After all analyzes, we conclude that the gonadotropin treatments were not efficient to hyperstimulate the treated groups or increased the oocyte recovery efficiency. Thus, further studies are needed, especially for new protocols, such as higher doses or frequency of administration as well as accu... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Resumo: O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da suplementação do meio com diferentes fontes de macromoléculas, com bloqueadores da meiose e com antioxidantes durante o transporte de oócitos bovinos por 6 horas sobre: 1) progressão da maturação nuclear; 2) maturação citoplasmática e 3) competência no desenvolvimento e criotolerância dos embriões produzidos. Para tanto, o meio de transporte de oócitos foi suplementado com bloqueadores da meiose (forscolina e IBMX; Experimento 1) ou com diferentes tipos de macromoléculas (SFB ou BSA; Experimento 2), sendo que estes tratamentos ainda receberam ou não a suplementação com antioxidantes (mistura de cisteína, cisteamina e catalase). Os oócitos foram incubados em incubadora portátil (Minitub®) para simulação de transporte. Posteriormente, foram submetidos à maturação in vitro (MIV) em incubadora a 5% de CO2 em ar até completar 24h e, em seguida, foram fecundados e os prováveis zigotos foram cultivados in vitro durante 7 dias. Foi feito um grupo controle adicional no experimento I: MIV em incubadora com 10% de SFB por 24h. No experimento II foram feitos dois grupos controle adicionais MIV em incubadora com 10% de SFB por 24h sem e com antioxidantes (cisteína, cisteamina e catalase). Nos experimentos 1 e 2 foi avaliada a cinética da maturação nuclear e a maturação citoplasmática (através do posicionamento de mitocôndrias, do potencial de membrana mitocondrial e do conteúdo intracelular de espécies reativas do oxigênio) após o transpor... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to evaluate the effects of supplementation of the medium with different sources of macromolecules with blockers of meiosis and antioxidants during transport of bovine oocytes for 6 hours on: 1) progression of nuclear maturation; 2) cytoplasmic maturation and 3) competence in the development and cryotolerance of embryos produced. Therefore, the medium of transport oocytes was supplemented with blocking of meiosis (forskolin and IBMX; Experiment 1) or with different types of macromolecules (FCS or BSA; Experiment 2), and these treatments yet received or not antioxidant supplementation (mixture of cysteine, cysteamine and catalase). Oocytes were incubated in a portable incubator (Minitub®) for transport simulation. Posteriorly were submitted in vitro maturation (IVM) in incubator at 5% CO2 in air until to complete 24 hours and then were fertilized and presumptive zygotes were cultured in vitro for 7 days. Has been made an additional control group in the experiment I: MIV incubator with 10% FCS for 24 hours (Control). In the second experiment were performed two additional control groups: IVM incubator with 10% FCS for 24 hours (Control); and IVM in an incubator with 10% FCS and antioxidants (cysteine, cysteamine and catalase) for 24 hours (Contr+Atx). In Experiments 1 and 2 were evaluated after nuclear maturation kinetics and cytoplasmic maturation (made by positioning mitochondria, the mitochondrial membrane potential and intracellular content of ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Coorientador: Maricy Apparício Ferreira / Banca: Eliandra Antônia Pires Buttler / Banca: Aracélle Elisane Alves / Resumo: O emprego de técnicas de criopreservação de gametas em felinos domésticos são consideradas importantes no aprimoramento de procedimentos na reprodução assistida. A vitrificação se baseia no uso de altas concentrações de crioprotetores com o intuito de inibir a formação de cristais de gelo. É possível que a criopreservação induza a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) ou altere o potencial antioxidante enzimático do oócito, sendo assim, aventa-se que a adição de antioxidantes aos meios de vitrificação poderia reduzir o estresse oxidativo causado pelos crioprotetores. No experimento I comparam-se quatro protocolos de vitrificação utilizando-se como meio base (MB) o TCM199 (Meio de cultura de tecidos 199) com glicose mais antibiótico, acrescido de crioprotetores: G1 (3M etilenoglicol-EG + 2M de dimetilsulfóxido-DMSO), G2 (3M EG + 3M 1,2 propanediol-PrOH), G3 (1,5M EG + 1M DMSO) e G4 (1,5M EG + 1,5M PrOH). Após descongelamento, este material foi avaliado quanto à alteração morfológica e viabilidade (coloração cFDA/trypan blue). Neste, não houve diferença estatística (p=0,2857) entre os oócitos descongelados dos quatro grupos estudados em relação à morfologia, mas em relação a viabilidade oocitária os grupos G1 e G2 obtiveram maior porcentagem de oócitos viáveis, porém não diferiram entre si (35,71% e 36,84%, respectivamente; p=0,018). No experimento II três concentrações de vitamina E (0,4, 0,6 e 0,8mM) foram acrescidas ao protocolo de MB com 3M EG + 3M PrOH, formando os grupos G 0,4mM, G 0,6mM, G 0,8mM e o G 0 (sem adição de vitamina E). A escolha do protocolo base foi de acordo com os resultados obtidos no experimento I. Observamos que houve melhora da porcentagem (p=0,0032) de oócitos que apresentavam morfologia normal, nos grupos G 0,6mM (88,6%) e G 0,8mM (62,5%). Oócitos do experimento II que mantiveram sua morfologia após a descongelamento foram submetidos à ... / Abstract: The use of techniques of cryopreservation of gametes in domestic cats are considered important in enhancing procedures in assisted reproduction. Vitrification is based on the use of high concentrations of cryoprotectants in order to inhibit the formation of ice crystals. It is possible that cryopreservation induces the production of reactive oxygen species (ROS) or change the enzymatic antioxidant potential of the oocyte, so one might speculate that the addition of antioxidants to the means of vitrification could reduce the oxidative stress caused by cryoprotectants. In the first experiment are compared four protocols vitrification using as base medium (MB) the TCM199 (tissue culture medium 199) more antibiotic glucose plus cryoprotectants: G1 (EG + 3M ethylene glycol + 2M dimethyl-DMSO), G2 (3M EG + 3M 1,2 propanediol - PrOH) , G3 (1.5 M EG + 1M DMSO) and G4 (1.5 M EG + 1.5 M PrOH) . After thawing, the material was assessed for viability and morphological changes (staining cFDA / trypan blue). In this , there was no statistical difference (p = 0.2857) among the four groups thawed oocytes studied with respect to morphology, but in relation to oocyte viability G1 and G2 groups had a higher percentage of viable oocytes , but did not differ ( 35.71% and 36.84 %, respectively , p = 0.018). In the second experiment three concentrations of vitamin E (0.4 , 0.6 and 0.8 mM) were added to the protocol MB with 3M EG + 3M PrOH , L forming the groups G 0.4 mM, G 0.6 mM, G 0.8 mM and G 0 (no added vitamin E). The choice of the base protocol was in accordance with the results obtained in experiment I. We observed improvement in percentage (p = 0.0032) of oocytes with normal morphology in groups G 0.6 mM (88.6 %) and G 0.8 mM (62.5 %). Experiment II oocytes that maintained their morphology after thawing were subjected to in vitro maturation for a period of 36 hours. When evaluating the resumption of meiosis, we observed no statistical difference ... / Mestre

Orientador: Irene Bastos Franceschini Vicentini / Banca: Bruno César Schimming / Banca: Fernanda Antunes Alves da Costa / Banca: Luciene Patrici Papa / Banca: Maria Terezinha Siqueira Bombonato / Resumo: O camarão-sete-barbas Xiphopenaeus kroyeri está entre as espécies de crustáceos mais importantes do litoral brasileiro, com destaque social, econômico, ambiental e cultural. Além disso, destaca-se a ampla distribuição geográfica no litoral Atlântico Ocidental (Rio Grande de Sul - BR até a Carolina do Norte - EUA). Também evidencia-se o aumento da captura, com consequente diminuição dos estoques naturais. A falta de conhecimento sobre a biologia das espécies, principalmente aquelas visadas pelas frotas pesqueiras, diminui a eficiência de aplicações de medidas para proteção dos estoques naturais. O conhecimento sobre a dinâmica reprodutiva de uma espécie pode ser considerado importante e eficaz para controlar uma população explorada. Com relação aos crustáceos, o ciclo reprodutivo apresenta ovários em diferentes estágios de maturação e a determinação destes estágios envolve as atividades inerentes ao ovário e ao hepatopâncreas. Estes dois órgãos trabalham de forma sincronizada durante a vitelogênese. Assim, o objetivo deste estudo foi reavaliar alguns pontos referente a dinâmica celular em fêmeas de Xiphopenaeus kroyeri nos diferentes estágios de maturação ovariana. A classificação macroscópica e microscópica da maturação ovariana e o perfil celular dos túbulos hepatopancreáticos foram estudados através de análises histológicas e histoquímicas; a localização da síntese de vitelogenina no ovário e hepatopâncreas foi estudada através da imuno-histoquímica; e os índices gonadossomático (IGS) e hepatossomático (IHS) foram comparados. Deste modo, o ovário de X. kroyeri apresenta seis estágios de maturação: imaturo, pré-maturo, maturação inicial, maturação avançada, maduro e desovado. As células germinativas apresentam seis fases de desenvolvimento: oogônia tipo I, oogônia tipo II, oócitos pré-vitelogênicos, oócitos em vitelogênese inicial, oócitos em... / Abstract: The shrimp Xiphopenaeus kroyeri is among the most important shellfish species off the Brazilian coast, with several highlights such as social, economic, environmental and cultural. In addition, we highlight the wide geographic distribution in the western Atlantic coast (Rio Grande do Sul - BR to North Carolina - USA) and also the increase in artisanal fisheries with consequent reduction of the natural stocks. The lack of knowledge about the biology of the species, especially those targeted by fishing fleets, decreases the efficiency of strategies for protection of natural stocks. Knowledge about reproductive dynamics of a species is considered important and effective to control an exploited population. Regarding the crustaceans, the reproductive cycle is composed of ovaries at different stages of maturation, and the determination of these stages involves activities related to the ovary and hepatopancreas. These two organs work synchronously during vitellogenesis. The objectives of this study were to reevaluate some points in females in different stages of ovarian maturation. Macroscopic and microscopic classification of ovarian maturation and the cellular profile of hepatopancreatic tubules were studied by histological and histochemical analyzes; the location of vitellogenin synthesis in ovary and hepatopancreas was studied by immunohistochemistry and the gonadosomatic (GSI) and hepatosomatic (IHS) indices were compared. Thus, X. kroyeri ovary features six maturity stages: immature, pre-mature, early maturation, advanced maturation, mature and spawned. The germ cells exhibit six phases of development: oogonia type I, oogonia type II, pre-vitellogenic oocytes, oocytes in early vitellogenesis, oocytes in advanced vitellogenesis and mature oocyte. The hepatopancreatic tubule is lined by a pseudostratified epithelium with five cell types, cell E (undifferentiated) cells F (fibrillar), cell R (resorptive), B cell (vesicular) and cell M ... / Doutor

O experimento avaliou o uso do meio TCM-199 suplementado com: SVE, SEE e SFB (meio indefinido); BSA (meio semi-definido) e PVA (meio definido); na presença ou ausência de hormônios (FSH e hCG) na maturação in vitro de oócitos bovinos nas condições do Laboratório de Embriologia e Biotécnicas de Reprodução da UFRGS. Complexos cumuli-oophorus (CCOs), em número total de 1458, foram aleatoriamente distribuídos em doze tratamentos, maturados por 24 h em atmosfera de 5% CO2, em ar e 100% umidade relativa em estufa a 39°C. A fecundação nos doze tratamentos foi realizada mediante exposição dos CCOs maturados aos espermatozóides (1x106/mL), previamente capacitados, durante 20 h. O cultivo foi realizado em fluído sintético de oviduto modificado (SOFaa) acrescido de 10% SVE a 39°C, 100% de umidade relativa do ar e 5% CO2, 5% O2 e 90% N2. Na presença de hormônios os meios indefinidos (SVE: 63,6%, 70/110; SEE: 53,4%, 70/131 e SFB: 56,0%, 75/134) apresentaram maior eficiência em proporcionar suporte à primeira divisão embrionária, em comparação ao meio definido (PVP: 50,6%, 45/89). Os CCOs maturados em meio indefinido suplementado com SVE e hormônios apresentaram maior competência em fecundar e suportar o desenvolvimento embrionário até o estádio de blastocisto após sete dias de cultivo (27,3%, 30/110).

Orientador: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Lindsay Unno Gimenes / Banca: Claudia Lima Verde Leal / Resumo: Este estudo foi desenvolvido com o objetivo de avaliar o efeito do precursor do peptídeo natriurético tipo C (NPPC) durante o cultivo de pré-maturação in vitro (pré-MIV) de oócitos bovinos sobre: 1) a progressão da maturação nuclear; 2) a expressão gênica das células do cumulus e 3) a aquisição da competência do oócito para o desenvolvimento embrionário in vitro. Os complexos cumulus-oócito (CCOs) foram pré-MIV com 100 nM NPPC por 8 horas (grupo NPPC) e, ao final do período, foram lavados para completa remoção do NPPC e submetidos à MIV por 22h. Após 8h de pré-MIV e após 8h de pré-MIV seguidas de 22h de MIV (duração total do cultivo = 30h) foram avaliadas a progressão da maturação nuclear e a expressão relativa de mRNA nas células do cumulus. O grupo controle (C) foi maturado na ausência de NPPC por até 30h, e as mesmas avaliações anteriores foram realizadas imediatamente após a remoção do ambiente folicular (C0), após 8h de cultivo (C8), após 22h de cultivo (C22) e após 30h de cultivo (C30). Em outro experimento, cujos tratamentos foram idênticos aos supramencionados, os oócitos foram fecundados ao término da MIV e foi avaliado o desenvolvimento embrionário até a fase de blastocistos. Após 8h de cultivo de pré-MIV, a análise da progressão da meiose demonstrou que o grupo C0 apresentou 58,9% de estruturas com configuração de GV1, enquanto que o grupo C8 apresentou apenas 13,9% de estruturas nesta configuração (P<0,05). A proporção de GV1 no grupo NPPC foi semelhante a ambos e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of the C-type natriuretic peptide precursor (NPPC) during pre in vitro maturation culture (pre-IVM) of bovine oocytes on: 1) nuclear maturation progress; 2) gene expression in cumulus cells and 3) acquisition of competence for in vitro embryo development. Cumulus oocyte complexes (COCs) were pre-IVM with 100 nM NPPC for 8 hours (NPPC group) and then were washed for the complete removal of NPPC and submitted to IVM for 22h. After 8h pre-IVM followed by 22h IVM (total culture time = 30h) oocytes were evaluated for nuclear maturation progress and cumulus cells for relative mRNA expression. Control group (C) was IVM in the absence of NPPC for up to 30h and the same evaluations were made immediately after follicle removal (C0) and after 8h (C8), 22h (C22) and after 30h of culture (C30). In another experiment with the same treatment, the oocytes were fertilized at the end of IVM and embryo development to the blastocyst stage was evaluated. After 8 hours of pre-IVM culture, meiosis progression analysis showed 58.9% of oocytes in GV1 configuration in C0, while C8 had only 13.9% (P<0.05). The GV1 rates in NPPC did not differ from any group (22.8%; P>0.05). On the other hand, C8 showed higher rates of GV3 in comparison with C0 (53.1% vs. 3.62%; p<0.05) and no differences compared to NPPC (38.7%; P<0.05). At the end of IVM culture, no differences between groups (C22 vs. NPPC vs. C30) were observed in nuclear maturation, however, higher rates of degenerated oocytes were observed in C30 in comparison with C22 (11.4% vs. 2.8%; P<0.05). The relative gene expression analysis in cumulus cells after 8h pre-IVM with NPPC showed an up-regulation in genes related to cumulus cells expansion (GREM1, PTGS2/COX2, PTX3, TNFAIP6 and VCAN), oocyte maturation (BDNF, EGFR, NOS3, PDE5A, PRKCD e STAT3) a... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-06-09T17:14:08Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_TransporteSimuladoOocitos.pdf: 194042 bytes, checksum: e90d60d2b3fb2015816cf5c7755de51a (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-07-01T14:33:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_TransporteSimuladoOocitos.pdf: 194042 bytes, checksum: e90d60d2b3fb2015816cf5c7755de51a (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-01T14:33:46Z (GMT). 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No experimento I, 649 oócitos foram distribuídos em 5 grupos. No grupo controle (0h), os oócitos foram maturados por 24h em meio de maturação, em estufa de CO2 a 38,5°C. Os oócitos foram transportados em uma incubadora portátil sem controle da atmosfera gasosa a 38,5°C, por 3, 6, 9 e 12h. Os oócitos dos grupos experimentais completaram a maturação nas mesmas condições do grupo 0h. No experimento II, 340 oócitos foram distribuídos em 5 grupos. No grupo controle (0h), os oócitos foram maturados nas mesmas condições do grupo 0h do experimento I. Nos grupos experimentais, os oócitos foram transportados nas mesmas condições do experimento I, no entanto o meio de transporte-maturação foi suplementado ou não com hormônios, e o transporte ocorreu por 3h (com e sem hormônios) e 6h (com e sem hormônios). Os oócitos dos grupos experimentais completaram a maturação nas mesmas condições do grupo 0h. A fecundação foi efetuada em meio Talp-Stock por 18 a 22h e o cultivo por 7 dias em meio SOF. No experimento I, as taxas de clivagem foram estatisticamente similares (p>0,05) para os grupos 0h (64,9%) e 3h (56,2%), porém houve uma redução destas taxas nos grupos 6h (45,8%), 9h (47,1%) e 12h (44,0%), que foram semelhantes entre si. A produção de blastocistos no experimento I, não foi estatisticamente diferente (p>0,05) para os grupos 0h (38,0%) e 3h (32,3%), porém houve uma redução nestas taxas nos grupos 6h (27,3%), 9h (24,8%) e 12h (18,9%), no entanto, as taxas de blastocistos assemelham-se entre os grupos 3, 6 e 9h. No experimento II, as taxas de clivagem foram estatisticamente similares (p>0,05) para os grupos 0h (71,4%) e 3h com hormônios (70,3%), porém houve uma redução destas taxas nos grupos 3h sem hormônios (64,8%), 6h com (56,0%) e sem (54,1%) hormônios, que foram diferentes entre si. A produção de blastocistos no experimento II, foi estatisticamente similar (p>0,05) para os grupos 0h (46,1%) e 3h com hormônios (45,8%), porém houve uma redução destas taxas nos grupos 3h sem hormônios (41,1%), 6h com (35,5%) e sem (33,5%) hormônios, que foram diferentes entre si. Esses resultados indicam a possibilidade do transporte de oócitos bovinos, em meio quimicamente definido, utilizando incubadora portátil, sem controle da atmosfera gasosa, a 38,5ºC, pelo período de até 9h, e que a adição de hormônios neste meio pode aumentar os índices de blastocistos. / The transport of the oocytes until the laboratory is a determining factor that has limited the commercial diffusion of the Production in vitro embryo technique (PIVE). For this reason, the use of a means of transport-maturation to provide greater viability to the oocytes during the transport is fundamental. The objective of this study was to evaluate the viability of the simulated transport of the bovine oocytes in chemically defined medium, by different periods of time without the gaseous atmosphere control, and the need for the addition of hormones in this medium. Immature bovine oocytes (n=989) obtained from bovine ovaries of cows slaughtered in a refrigerator, were selected and randomly distributed in 2 experiments. In experiment I, 649 oocytes were distributed into 5 groups. In the control group (0h), the oocytes were borne during 24h by means of maturation, in a CO2 incubator at 38,5ºC. The oocytes were transported in an incubator portable without gaseous atmosphere control at 38,5°C for 3, 6, 9 and 12h. The oocytes of experimental groups completed the maturation under the same conditions of the group 0h. In experiment II, 340 oocytes were distributed into 5 groups. In the control group (0h), the oocytes were matured during the same conditions of the group 0h of the experiment I. The experimental groups, the oocytes were transported under the same conditions of the experiment I, however the means of transport-maturation was supplemented or not with hormones, and the transport occurred in 3h (with and without hormones) and 6h (with and without hormones). The oocytes of experimental groups completed the maturation under the same conditions of the of the group 0h. The fertilization was performed in Talp-Stock by 18 to 22h and growing by 7 days in SOF medium. In experiment I, the rates of cleavage were statistically similar (p>0,05) to the groups 0h (64,9%) and 3h (56,2%), although there was a reduction in these rates in the groups 6h (45,8%), 9h (47,1%) and 12h (44,0%), which were similar among themselves. The production of blastocysts in experiment I, was not statistically different (p>0,05) for the groups 0h (38,0%) and 3h (32,3%), but there was a reduction in these rates in groups 6h (27,3%), 9h (24,8%) and 12h (18,9%), however, the rates of blastocysts are similar among the groups 3h, 6h and 9h. In experiment II, the rates of cleavage were statistically similar (p>0,05) to the groups 0h (71,4%) and 3h with hormones (70,3%), but there was a reduction in these rates in groups 3h without hormones (64,8%), 6h with (56,0%) and without (54,1%) hormones, which were different among themselves. The production of blastocysts in experiment II, was statistically similar (p>0.05) for the groups 0h (46,1%) and 3h with hormones (45,8%), but there was a reduction in these rates in groups 3h without hormones (41,1%), 6h with (35,5%) and without (33,5%) hormones, which were different among themselves. These results indicate the possibility of the transport of bovine oocytes, in chemically defined medium, using incubator portable, without gaseous atmosphere control, at 38,5ºC, for the period of up to 9h, and that the addition of hormones in this medium may increase the rates of blastocysts.

Orientador: Fernanda da Cruz Landim / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Alício martins Júnior / Banca: Edson Guimarães Lo Turco / Resumo: Este trabalho teve como objetivo geral averiguar o efeito da BL-I e da ROS em bloquear temporariamente a retomada da meiose, atuando sobre os fatores que controlam o ciclo celular meiótico de oócitos bovinos e a expansão das células do cumulus oophoros. No Experimento I, os oócitos permaneceram em meio MIV durante 6, 12 e 24 h na presença de duas concentrações de ROS (12,5 μM e 25 μM) ou na presença de BL-I (50 μ e 100 μM) ou na presença da associação de ROS (6,25 μM) + BL-I (25 μM) e em seguida foram cultivados em meio MIV livre de fármacos por 18 h, 12 h ou 24 h. Após esse tempo, os oócitos inibidos por 6 ou 12 h foram fertilizados e cultivados in vitro. O tratamento com ROS e BL-I não resultou em atraso na quebra da vesícula germinativa em relação ao controle. Entretanto, quando utilizados por 24 h, elevadas taxas de degeneração oocitária foram encontradas. Quando estes fármacos foram utilizados por 12 h com reversão por mais 12 h, verificamos uma menor taxa produção de blastocistos em relação ao grupo controle. No entanto, após a retirada do bloqueio por 6 h e maturação por 18 h um maior número de oócitos tratados tanto com ROS, como BL-I encontraram-se em MII. Da mesma forma, ao reduzirmos a dose e o tempo de inibição, os grupos tratados por 6 h de inibição meiótica e reversão por 18 h apresentaram taxas de produção embrionária similares ao grupo controle. No Experimento II, os oócitos permaneceram em meio MIV durante 6h na presença de 12,5 μM de ROS ou na presença de 50 μM de BL-I ou com a associação de ROS (6,25 μM) + BL-I (25 μM) sendo em seguida cultivados em meio MIV livre de fármacos por 18 h. Após esse tempo, os oócitos inibidos foram fertilizados, cultivados in vitro e os embriões produzidos foram submetidos a vitrificação. Os grupos BI-I e ROS + BL-I apresentaram superioridade de produção embrionária, tanto em relação ao grupo ROS como o controle. O grupo ... / Abstract: This work had as main objective to investigate the effect of BL-I and ROS in temporarily blocking the resumption of meiosis, acting on the factors that control the meiotic cell cycle of bovine oocytes and expansion of cumulus oophoros cells. In Experiment I, the oocytes remained in IVM mediafor 6, 12 and 24h in the presence of two concentrations of ROS (12.5 μM and 25 μM) or in the presence of BL-I (50 μ to 100 mM) or the association of ROS (6.25 μM) + BL-I (25 μM) and then cultured in a drug-free IVM media for 18, 12 or 24 h. After this time, the inhibited oocytes by 6 or 12 h were fertilized and cultured in vitro. Treatment with ROS and BL-I did not resulted in delay in germinal vesicle breakdown in relation to control. However, when used for 24 h, higher rates of oocyte degeneration were found. When these drugs were used for 12 h with reversion for more than 12 h, a lower blastocyst production rate compared to the control group was verified. However, after removal of the blockage for 6 h and maturation for 18 h, a higher number of oocytes treated with both ROS and BL-I were found in MII. Similarly, when the dose and duration of inhibition were reduced, the groups treated for 6 h of meiotic inhibition and reversion for 18 h showed similar embryo production rates to the control group. In Experiment II, oocytes remained in IVM mediafor 6 h in the presence of 12.5 μM of ROS or the presence of 50 μM of BL-I or the association of ROS (6.25 μM) + BL-I (25 μM) and then cultured in drug-free IVM media for 18 h. After this time, the inhibited oocytes were fertilized in vitro and the produced embryos were submitted to vitrification. The BI-I and ROS + BL-I groups showed superiority in embryo production, both in relation to the control as ROS group. The ROS + BL-I group showed higher rate of re-expansion after vitrification. Additionally, embryos from BL-I and BL-I + ROS showed lower number of apoptotic cells when compared to ... / Doutor

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-17Bitstream added on 2015-05-14T16:59:09Z : No. of bitstreams: 1 000829407.pdf: 3139564 bytes, checksum: ac15cce43cb3520f922ab5d6b73802ab (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este trabalho teve como objetivo geral averiguar o efeito da BL-I e da ROS em bloquear temporariamente a retomada da meiose, atuando sobre os fatores que controlam o ciclo celular meiótico de oócitos bovinos e a expansão das células do cumulus oophoros. No Experimento I, os oócitos permaneceram em meio MIV durante 6, 12 e 24 h na presença de duas concentrações de ROS (12,5 μM e 25 μM) ou na presença de BL-I (50 μ e 100 μM) ou na presença da associação de ROS (6,25 μM) + BL-I (25 μM) e em seguida foram cultivados em meio MIV livre de fármacos por 18 h, 12 h ou 24 h. Após esse tempo, os oócitos inibidos por 6 ou 12 h foram fertilizados e cultivados in vitro. O tratamento com ROS e BL-I não resultou em atraso na quebra da vesícula germinativa em relação ao controle. Entretanto, quando utilizados por 24 h, elevadas taxas de degeneração oocitária foram encontradas. Quando estes fármacos foram utilizados por 12 h com reversão por mais 12 h, verificamos uma menor taxa produção de blastocistos em relação ao grupo controle. No entanto, após a retirada do bloqueio por 6 h e maturação por 18 h um maior número de oócitos tratados tanto com ROS, como BL-I encontraram-se em MII. Da mesma forma, ao reduzirmos a dose e o tempo de inibição, os grupos tratados por 6 h de inibição meiótica e reversão por 18 h apresentaram taxas de produção embrionária similares ao grupo controle. No Experimento II, os oócitos permaneceram em meio MIV durante 6h na presença de 12,5 μM de ROS ou na presença de 50 μM de BL-I ou com a associação de ROS (6,25 μM) + BL-I (25 μM) sendo em seguida cultivados em meio MIV livre de fármacos por 18 h. Após esse tempo, os oócitos inibidos foram fertilizados, cultivados in vitro e os embriões produzidos foram submetidos a vitrificação. Os grupos BI-I e ROS + BL-I apresentaram superioridade de produção embrionária, tanto em relação ao grupo ROS como o controle. O grupo ... / This work had as main objective to investigate the effect of BL-I and ROS in temporarily blocking the resumption of meiosis, acting on the factors that control the meiotic cell cycle of bovine oocytes and expansion of cumulus oophoros cells. In Experiment I, the oocytes remained in IVM mediafor 6, 12 and 24h in the presence of two concentrations of ROS (12.5 μM and 25 μM) or in the presence of BL-I (50 μ to 100 mM) or the association of ROS (6.25 μM) + BL-I (25 μM) and then cultured in a drug-free IVM media for 18, 12 or 24 h. After this time, the inhibited oocytes by 6 or 12 h were fertilized and cultured in vitro. Treatment with ROS and BL-I did not resulted in delay in germinal vesicle breakdown in relation to control. However, when used for 24 h, higher rates of oocyte degeneration were found. When these drugs were used for 12 h with reversion for more than 12 h, a lower blastocyst production rate compared to the control group was verified. However, after removal of the blockage for 6 h and maturation for 18 h, a higher number of oocytes treated with both ROS and BL-I were found in MII. Similarly, when the dose and duration of inhibition were reduced, the groups treated for 6 h of meiotic inhibition and reversion for 18 h showed similar embryo production rates to the control group. In Experiment II, oocytes remained in IVM mediafor 6 h in the presence of 12.5 μM of ROS or the presence of 50 μM of BL-I or the association of ROS (6.25 μM) + BL-I (25 μM) and then cultured in drug-free IVM media for 18 h. After this time, the inhibited oocytes were fertilized in vitro and the produced embryos were submitted to vitrification. The BI-I and ROS + BL-I groups showed superiority in embryo production, both in relation to the control as ROS group. The ROS + BL-I group showed higher rate of re-expansion after vitrification. Additionally, embryos from BL-I and BL-I + ROS showed lower number of apoptotic cells when compared to ... / FAPESP: 2010/18994-4