Dentre os vários compostos utilizados na pesquisa e na terapia de doenças osteo-degenerativas, a fototerapia com laseres de baixa potência (LLLT) e os diodos emissores de luz (LEDs) vem sendo investigada com o intuito de avaliar seus efeitos no metabolismo ósseo. Estes, que possuem comprimentos de ondas específicos, atuam na biomodulação das células, funcionando como um agente terapêutico, reequilibrando e normalizando a sua atividade. No entanto, pouco se sabe sobre o efeito dos diferentes espectros na proliferação e diferenciação de osteoblastos humanos, bem como seus efeitos no metabolismo celular como a síntese e a ativação de proteínas sinalizadoras envolvidas nesses processos. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi avaliar, comparativamente, a influência da fototerapia com LLLT e LED na proliferação e diferenciação de osteoblastos humanos. Além disso, investigamos o envolvimento da ativação da via de sinalização ERK1,2 nestas respostas, utilizando o seu inibidor específico e/ou avaliando a sua ativação durante a proliferação e após fototerapia. Para esse estudo, osteoblastos humanos (HOAL) foram cultivados em meio de cultura DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB) e incubados em estufa de CO2. As células foram irradiadas pontualmente com os laseres vermelho (660nm), infravermelho (780nm) e LED (637nm), nas doses de 10, 20 e 50 J/cm2 na potência de 40mW, após adesão celular. Após 24, 48, e 72 horas foram realizados os ensaios de redução do MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5- difeniltetrazólio) e cristal violeta (CV) para avaliar a viabilidade das células e após 72 horas foi realizada a análise da proliferação por citometria de fluxo nos quais os resultados sugerem aumento de células viáveis ou proliferação quando estimuladas pelos diferentes espectros. Após a verificação do efeito positivo dos laseres e LED na viabilidade e/ou proliferação, foi realizada a análise da ativação da proteína intracelular ERK por western blotting usando anticorpo específico após 10 minutos da irradiação pontual. Mostramos que a irradiação das células HOAL com LLLT, na dose de 10 J/cm2, aumentou significativamente a fosforilação da ERK1/2 em relação ao controle. Para os ensaios de diferenciação, as células receberam pontualmente o estimulo a cada 6 dias e após os períodos de 07, 14, 21 e 28 dias foram realizados os ensaios da atividade de fosfatase alcalina (ALP), expressão gênica do colágeno I (COL1A1) e SPARC (osteonectina) por RT-PCR em tempo real e ensaio de mineralização com vermelho de alizarina. De um modo geral, não foram observados diferenças na atividade da ALP entre os grupos tratados em relação ao controle. A expressão gênica do COL1A1 e SPARC foi aumentada, no qual o LED em ambas doses apresentou maior eficácia em aumentar a expressão desses genes. No que se refere à mineralização, foram observadas pequenas diferenças quanto a deposição de cálcio. Dessa forma, a LLLT e LED, nesse regime de aplicação modulou positivamente o metabolismo dos osteoblastos humanos em relação à viabilidade, porém, no processo de mineralização foram observadas poucas diferenças. / Among the various compounds used in research and bone degenerative diseases therapy, phototherapy with low level laser (LLLT) and light emitting diodes (LEDs) has been investigated in order to evaluate its effects on bone metabolism. Those, who have specific wavelengths, act in biomodulation cells functioning as a therapeutic agent, rebalancing and normalizing their activity. However, little is known about the effect of the different spectra in the proliferation and differentiation of human osteoblasts and their effects on cellular metabolism as well as the synthesis and activation of signaling proteins involved in these processes. Therefore, the aim of this study was to compare the influence of LLLT and LED phototherapy in the proliferation and differentiation of human osteoblasts. In addition, we investigated the involvement of activation of ERK1,2 signaling pathway these responses using its specific inhibitor and/or evaluating their activation during the proliferation and after phototherapy. For this study, human osteoblasts (HOAL) were cultured in DMEM culture medium supplemented with 10 % fetal bovine serum (FBS) and incubated in CO2 incubator . Cells were irradiated with punctual red lasers (660nm), infrared (780nm) and LED (637nm) at doses of 10, 20 and 50 J/cm2 in power 40mW, after cell adhesion. After 24, 48, and 72 hours, MTT assay (- (4,5- dimethylthiazol-2- yl) -2,5 - diphenyltetrazolium bromide 3 ) and violet crystal (CV) were performed to assess the viability of cells and after 72 hours, was performed of proliferation analysis by flow cytometry. The results suggest an increase in viable and proliferation of cells when stimulated by different spectra. After checking the positive effect of lasers and LED viability and/or proliferation, analysis of ERK activation of intracellular protein by western blotting using a specific antibody was performed 10 minutes after the spot irradiation. We show that irradiation of HOAL cells with LLLT at a dose of 10 J/cm2, significantly increased the phosphorylation of ERK1/2 compared to control. For differentiation assays, cells promptly received stimulation every 6 days and after periods of 07, 14, 21 and 28 days testing the activity of alkaline phosphatase (ALP), gene expression of type I collagen (COL1A1) and SPARC (osteonectin) were performed by Real Time RT-PCR and mineralization experiment with alizarine red. In general, no differences in the activity of ALP between the treated groups compared to the control were observed. The gene expression was increased, and SPARC COL1A1, where in the LED in both doses showed greater effectiveness in increasing the expression of these genes. With respect to mineralization, small differences in the deposition of calcium were observed. Thus, LLLT and LED, this enforcement regime, positively modulated the metabolism of human osteoblasts during the cell viability, but in the process of mineralization few differences were observed.

Tese de doutoramento. Ciências de Engenharia. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto, Université Victor Segalen Bordeaux 2. 2008

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-07Bitstream added on 2015-03-03T12:06:10Z : No. of bitstreams: 1 000799295.pdf: 1434919 bytes, checksum: 36275b6266ae49abeed7a7bba084d604 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Células-tronco mesenquimais (CTMs) obtidas a partir da medula óssea são capazes de se diferenciarem, sobretudo, em condrócitos, adipócitos e osteoblastos. Durante a osteogênese in vitro, alguns parâmetros são utilizados para caracterizar este processo, tais como atividade da fosfatase alcalina (FAL), mineralização e expressão de proteínas associadas à osteoblastos. Ratos espontaneamente hipertensos (SHR) são um modelo animal de hipertensão essencial humana e desenvolvem hipertensão após 4 semanas de idade. Esta linhagem apresenta alterações significativas no metabolismo ósseo. O objetivo do presente estudo foi investigar se, o genótipo hipertensivo poderia interferir na diferenciação osteoblástica das CTMs de ratos SHR e qual mecanismo está alterado quando comparadas com a linhagem progenitora, ratos Wistar. Para isso, nós obtivemos CTMs da medula óssea de ratos Wistar e SHR com 4 semanas de idade, sem a hipertensão estabelecida, afim de avaliar somente o possível efeito do genótipo hipertensivo na diferenciação osteogênica in vitro. Nós induzimos, ou não, a diferenciação osteogênica in vitro por meio da utilização dos indutores osteogênicos: ácido ascórbico, ?-glicerofosfato e dexametasona. Os resultados demonstraram que, CTMs indiferenciadas de SHR (SHRC) demonstraram taxa de proliferação aumentada em comparação a CTMs, na mesma condição, de Wistar (WC), e após a indução da osteogênica, a taxa de proliferação apresentou uma diminuição acentuada no grupo SHR (SHRMO) do que no grupo Wistar na mesma condição (WMO). Embora não fora observada diferença significativa na atividade da FAL entre SHRMO e WOM no 7° dia, a mineralização e a diferenciação osteoblástica foram menores no grupo SHRMO no mesmo período experimental. Os fatores de transcrição Osterix e ?-catenina parecem estar envolvidos na diferenciação reduzida no grupo SHRMO... / Mesenchymal stem cells (MSCs) from bone marrow are able to differentiate mainly into chondrocytes, adipocytes and osteoblasts. During in vitro osteogenesis, some parameters are used to characterize this process, such as the activity of alkaline phosphatase (ALP), mineralization and osteoblast-associated proteins expression. Spontaneously hypertensive rats (SHR) is an animal model of human essential hypertension. This animals developing hypertension after 4 weeks of age. This strain shows significant changes in bone metabolism. The aim of this study was to investigate whether the hypertensive genotype could influence the osteoblastic differentiation of MSCs from SHR and which mechanism are altered when compared to the parental strain, Wistar rats. For that, we have obtained bone marrow MSCs from Wistar and SHR rats at 4 weeks of age, without hypertension established in order to evaluate only the possible effect of hypertensive genotype on osteogenic differentiation in vitro. We induced or non-osteogenic differentiation in vitro using osteogenic inducers: ascorbic acid, dexamethasone and ?-glycerophosphate. The results demonstrate that undifferentiated MSCs SHR (SHRC) showed increased proliferation rate compared to MSCs, in the same condition Wistar (WC) and after osteogenic induction, proliferation rate showed a marked decrease in SHR (SHRMO) than in Wistar group in the same condition (WMO). Although it was not observed significant difference in ALP activity between WMO and SHRMO on day 7, mineralization and osteoblast differentiation were lower on group SHRMO in the same experimental period. The transcription factors Osterix and ?-catenin appear to be involved in reduced differentiation in SHRMO group because they showed lower expression in this experimental group. Furthermore, the decreased... / FAPESP: 12/01924-9 / FAPESP: 11/06070-5 / FAPESP: 11/19458-1

Orientador: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Banca: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Sandra Giacomin Schneider / Resumo: O objetivo neste estudo foi avaliar in vitro a influência da liga Ti-35Nb-7Zr e de seus elementos básicos, submetidos ou não ao processo de oxidação, na atividade de osteoblastos e na formação de biofilmes monotípicos. As amostras foram confeccionadas com diferentes materiais: a) titânio puro (Ti - controle); b) liga Ti-35Nb-7Zr (L); c) Nb (nióbio); d) Zr (zircônio); e) Ti oxidado (TiO); f) liga Ti-35Nb-7Zr oxidada (LO); g) Nb oxidado (NbO); h) Zr oxidado(ZrO). Previamente ao estudo in vitro, todas as amostras foram caracterizadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e espectroscopia de dispersão de energia (EDS) para observar a topografia de superfície e a presença dos elementos básicos. Células mesenquimais obtidas de fêmures de rato, após diferenciação em osteoblastos foram cultivadas sobre as amostras. Após períodos pré-determinados, foram realizados os testes de citotoxicidade, atividade de fosfatase alcalina, produção de proteína total, formação e quantificação dos nódulos de mineralização adesão e proliferação celular. Para análise da formação dos biofilmes monotípicos, suspensões padronizadas (106 céls/mL) com micro-organismos de S. aureus, S. mutans, P. aeruginosa e C. albicans foram cultivados por 24 h sobre as amostras e submetidos ao teste de MTT. Todas as amostras permitiram o espraiamento celular. O Nb e Zr exibiram uma adesão celular mais madura com prolongamentos celulares evidenciados. O Ti e a L apresentaram maior viabilidade celular sendo estatísti... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to evaluate in vitro the influence of the Ti-35Nb- 7Zr alloy and its basic elements, whether or not subjected to the oxidation process, on the osteoblast activity and on the formation of monotypic biofilms. The samples were made with different materials: a) pure titanium (Ti - control); B) Ti-35Nb-7Zr (A) alloy; C) Nb (niobium); D) Zr (zirconium); E) Oxidized Ti (TiO); F) oxidized Ti-35Nb-7Zr (AO); G) Nb oxidized (NbO); H) Oxidized Zr (ZrO). Prior to the in vitro study, all samples were characterized by scanning electron microscopy (SEM) and energy dispersive spectroscopy (EDS) to observe the surface topography and the presence of the basic elements. Mesenchymal cells obtained from mouse femurs after differentiation into osteoblasts were cultured in the samples. After pre-determined periods, cytotoxicity tests, alkaline phosphatase activity, total protein production, formation and quantification of the mineralization nodules, adhesion and cell proliferation were performed. To analyze the formation of monotypic biofilms, standardized suspensions (106 cells / ml) with S. aureus, S. mutans, P. aeruginosa and C. albicans microorganisms were cultured for 24 h on the samples and submitted to the MTT test. All samples allowed for cell spreading. Nb and Zr exhibited more mature cell adhesion with evidenced cell extensions. The Ti and A presented greater cell viability being statistically different from the others (p <0.05). ZrO presented lower viability exhibiting statistical difference with Ti and A. The NbO expressed the highest amount of total protein with a statistical difference of L, Zr, and AO (p <0.05) while Zr showed the lowest result with a statistical difference of Ti, Nb, TiO, NbO, and ZrO. In the quantification of the alkaline phosphatase activity, the Zr presented the best result and was statistically different from all the others ..... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Orientador: Célia Regina Nogueira / Resumo: O sistema esquelético é um sistema complexo com intenso metabolismo composto de células, proteínas e minerais. Os osteoblastos, são células fundamentais para o tecido, desempenhando duas funções principais: formação óssea e regulação da reabsorção por meio da modulação da osteoclastogênese. Sendo assim, essas células desempenham funções primordiais para o desenvolvimento e manutenção óssea. Diversas moléculas sistêmicas atuam no tecido, sendo os hormônios tireoidianos um destes. Eles são fundamentais para o metabolismo ósseo já que alterações hormonais culminam em desordens ósseas. Osteoblastos possuem receptores nucleares para T3 e apesar de pouco compreendido, ele afeta diversos aspectos do desenvolvimento da célula, assim como vias modulatórias da remodelação óssea. Diversas linhagens celulares têm sido utilizadas para estudos de osteoblastos, sendo as células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo humano (hA-CTMs) um modelo promissor para osteoindução. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi verificar a influência do T3 suprafisiológico (T3S) na expressão gênica diferencial em osteoblastos diferenciados a partir de hA-CTMs. As células obtidas de 3 doadores foram submetidas a osteoindução por 16 dias com coquetel de diferenciação (dexametasona, ácido ascórbico e β-glicerofosfato) e caracterizadas pela presença de osteocalcina, fosfatase alcalina e matriz mineralizada. O tratamento com T3 (10-8M) foi realizado por 72h e o RNA foi extraído para preparação das bib... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The skeletal system is complex and have an intense metabolism compound with cells, proteins and minerals. The osteoblasts are fundamental cells to the tissue, executing two mainly functions: bone formation and regulation of reabsorption through osteoclastogenesis modulation. Therefore, these cells perform primordial functions to the bone development and maintenance. Several systemic molecules act in the tissue and the thyroid hormones are one of them. They are fundamental to the bone metabolism, once hormone alterations result in bone disorders. Osteoblasts have T3 nuclear receptors, and although not well elucidated it affects many aspects of the cell development so as pathways that modulates the bone remodeling. Several cells lineages have been used in osteoblasts studies, and human adipose-derived Mesenchymal stem-cells (hA-MSCs) are a promising model to osteoinduction. Thus, the aim of this study was to investigate the supraphysiological T3 (T3S) influence in the gene differential expression in osteoblasts differentiated from hA-MSCs. The cells obtained from three donators were submitted to osteoinduction for 16 days with a differentiation cocktail (dexamethasone, ascorbic acid, β-glycerophosphate) and characterized by the presence of osteocalcin, alkaline phosphate and mineralized matrix. The cells were treated with T3 (10-8M) for 72h and the RNA was extracted to mRNA library prepare and sequenced by Illumina platform. The bioinformatic analysis included the software: Fas... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Resumo: Objetivos: Avaliar a interferência da ovariectomia (OVX) e seu tratamento com estrógeno (E2) ou com raloxifeno (RLX) no balanço entre RANKL/OPG na cronologia do processo de reparo alveolar em diferentes períodos (7, 14, 21 e 42 dias) através da imunofluorescência por co-localização e análise histomorfométrica. Materiais e Métodos: Os grupos estudados foram: sham, OVX, OVX+E2, OVX+RLX. Após obtenção dos cortes histológicos corados em hematoxilina e eosina e as reações de co-localização por imunofluorescência de RANKL/OPG, os resultados foram avaliados quantitativamente. Resultados:Aos 7 dias: menor neoformação de trabéculas ósseas,o grupo OVX+RLX apresentou menor valor médio. O grupo OVX apresentou o maior turnover ósseo representado pelas co-localizações de OPG e RANKL. Aos 14 dias o grupo OVX+RLX apresentou menor formação óssea. O grupo sham apresentou intensa atividade celular representada pela alta imunorreatividade à OPG e RANKL observada nas células. Aos 21 dias os grupos experimentais apresentaram maiores níveis de ossificação; não apresentaram diferença estatística. O grupo OVX apresentou o menor turnover ósseo. Aos 42 dias houve diferença estatística na quantidade de formação óssea entre o grupo sham comparado aos demais grupos (p<0,05) e o grupo OVX apresentou o maior turnover ósseo. Conclusão: A ovariectomia atrasou o processo de reparo alveolar e alterou o turnover ósseo. A reposição do estrógeno e o tratamento com raloxifeno melhoraram as respostas, mas não restabeleceram completamente os valores da histometria e da colocalização do grupo sham. / Abstract: Objectives: To evaluate the influence of the ovariectomy (OVX), and its treatments with estrogen (E2) or with raloxifene (RLX) on the RANKL/OPG balance during the periods in the chronology of the alveolar wound healing process (7, 14, 21 end 42 pos operative days) in female rats by means of immunocolocalization and histomorphometric analysis. Methods: The studied groups were: sham, OVX, OVX with E2 replacement, OVX with (RLX) treatment. After obtaining the histological tissue pieces colored in hematoxilin and eosin and the immunocolocalization reaction for RANKL and OPG, the results were quantitatively evaluated. Results: At 7 days, was observed lesser neoformed trabeculae bone, the smaller medium value was observed to the OVX+RLX group. The OPG and RANKL immunocolocalization showed larger bone tunover to OVX group. At 14 days there was a larger quantity of neoformed trabeculae bone, the smaller medium value was observed to the OVX+RLX group, the sham group presented an intense cellular activity. At 21 days the experimental groups had a greater ossification levels; no statistical significance was observed. The OVX group had the lowest bone turnover. At 42 days there were statistically differences on the quantity of ossification within sham group compared to the other groups (p<0.05). The OVX group showed the largest bone turnover. Conclusions: Ovariectomy delays the alveolar wound healing process and interferes with the bone turnover. The E2 replacement and the RLX treatment improved the healing but not enough to reach histomorphometric and immunocolocalization valours of the sham group. / Orientador: Roberta Okamoto / Coorientador: Rita Cássia Menegati Dornelles / Banca: Wilson roberto Poi / Banca: Teresa Lucia Lamano Carvalho / Mestre

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia. / Made available in DSpace on 2012-10-22T12:59:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 235619.pdf: 1858735 bytes, checksum: e921f3c8d190616791843cc396b0737b (MD5) / O objetivo deste trabalho foi avaliar o crescimento quantitativo de linhagens celulares osteoblásticas oriundas da calvária de rato sobre 3 diferentes superfícies de implantes testando uma metodologia inédita de cultura de células diretamente sobre a superfícies dos implantes : Grupo I, implantes usinados, Grupo II, implantes com textura produzida por ataque ácido e Grupo III, implantes especialmente produzidos para este estudo com superfície jateada por partículas seguida de banhos ácidos. Os implantes (n=27) foram imobilizados através de um dispositivo especialmente criado, cultivadas com 1 x 10 4 células, tripsinizados e submetidos a contagem na câmera de Neubauer após 24, 48 e 72 h. A análise estatística demonstrou não existirem diferenças entre os tipos de implantes com relação ao número de células e o tempo. Os resultados permitem concluir que a superfície proposta neste estudo, grupo III, apresentou comportamento semelhante ao das outras duas tradicionalmente utilizadas, grupos I e II e sugere sua utilização sem riscos. A metodologia tornou possível a contagem do numero de células aderidas diretamente sobre os implantes com micro e macro topografias, aproximando a situação da realidade clinica.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A reducao ou minimizacao das consequencias das fraturas osseas e a regeneracao tecidual e objetivo de recursos clinicos e terapeuticos. O tecido osseo tem funcao mecanica, de deposito mineral e hematopoietica sendo composto por tres tipos celulares, osteoblastos, osteocitos e osteoclastos. Diversas substancias sao secretadas pelos osteoblastos, entre elas o calcio, que tem papel fundamental na homeostase celular e na producao do tecido osseo mineralizado e em cujo fluxo estao envolvidos os genes S100A6, PMCA1b e a osteocalcina ligados ao processo transporte e de mineralizacao. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do laser de baixa intensidade, no que concerne a sinalizacao de calcio e mineralizacao ossea, na expressao dos genes S100A6, PMCA1b e osteocalcina em celulas osteoblasticas adultas. Trinta fragmentos mediais de femures com aproximadamente 5mm foram coletados cirurgicamente de ratos Wistar e distribuidos em dois grupos A (n=15, laser) e B (n=15, sem laser). Os fragmentos foram digeridos mecanica e enzimaticamente com colageno tipo II. Apos sete dias de cultura o grupo A foi irradiado com laser de baixa intensidade de Arseneto de Galio e Aluminio &#955;=808nm, 250mW de potencia nominal, densidade de potencia de 200mW/cm2, densidade de energia de 2000mJ/cm2, dose de energia de 2J/cm2, diametro de feixe de 0,02mm, tempo de 5s em 1 ponto de aplicacao durante 6 dias. Em seguida, o RNA foi extraido, quantificado, submetido a sintese de cDNA e realizada quantificacao de Ct comparativo pela Reacao em Cadeia da Polimerase em Tempo Real. Os valores foram submetidos a analise estatistica de teste Mann-Whitney com p<0,05. A analise em relacao a quantidade de RNA dos grupos A (mediana 3,80) e B (mediana 3,80) e os valores das medianas de &#916;Ct dos tres genes, S100A6 (A=2,22 e B=2,89), osteocalcina (A=4,06 e B=3,45) e PMCA1b (A=1,85 e B=4,16) nao mostraram diferencas significativas. O laser de baixa intensidade em osteoblastos adultos nao alterou a expressao dos genes S100A6, PMCA1b e osteocalcina descartando a relacao, no periodo estudado, destes genes com a mineralizacao e regeneracao ossea / The aim of clinical and therapeutic features is to reduce or minimize the consequences of fractures and bone regeneration. The bone has mechanical, mineral deposit and hematopoietic functions due to three types of cells, osteoblasts, osteocytes and osteoclasts. Several substances are secreted by osteoblasts, including calcium, which plays a fundamental role in cellular homeostasis and production of mineralized bone tissue and in whose flow are involved the S100A6, PMCA1b and osteocalcin genes related to the transport and mineralization process. This study was designed to evaluate the effects of low-level laser, when it comes to calcium signaling and bone mineralization, in S100A6, PMCA1b and osteocalcin genes expression in adult osteoblast cells. Thirty medial femoral fragments with approximately 5mm were surgically collected from Wistar rats and distributed into two groups A (n=15, laser) and B (n=15 without laser). The fragments were digested mechanical and enzymatically with type II collagen. After seven days of culture group A was irradiated with low intensity Gallium-Aluminum-Arsenide laser λ=808nm, 250mW nominal power, power density 200mW/cm2, energy density 2000mJ/cm2 dose of energy 2J/cm2 beam diameter 0,02 mm, length of 5s in one application point for 6 days. Then, RNA was extracted, quantified, underwent to cDNA synthesis and quantification performed by the comparative Ct by Real Time Polymerase Chain Reaction. The values were underwent to statistical analysis by Mann-Whitney test with p<0,05. The analysis for the amount of RNA of group A (median 3,80) and B (median 3,80) and ΔCt median values of the three genes, S100A6 (A=2.22 and B=2.89), osteocalcin (A=4.06 and B=3.45) and PMCA1b (A=1.85 and B=4.16) showed no significant differences. Low-level laser irradiation in adult osteoblasts did not modify the expression of S100A6, PMCA1b and osteocalcin genes discarding the relationship of these genes with the mineralization and bone regeneration in the studied period. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-01Bitstream added on 2014-06-13T19:32:54Z : No. of bitstreams: 1 000741963.pdf: 5921432 bytes, checksum: cf0edc6477dead4660210bf04328bcb5 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito da doença periodontal (DP) induzida por ligadura nos mecanismos envolvidos na atividade osteoblástica e mineralização da matriz óssea a partir de células-tronco derivadas da medula óssea do fêmur de ratos normotensos e espontaneamente hipertensos (SHR). As linhagens (180-220 g) foram divididas em dois grupos cada: Wistar Controle [WC] e SHR Controle [SC], Wistar com DP [WDP] e SHR com DP [SDP]. Foi realizada na área de furca a análise imunoistoquímica da expressão de receptor ativador nuclear kappa-B ligante (RANKL), osteoprotegerina (OPG), fosfatase alcalina específica do osso (BALP), osteocalcina (OC), metaloproteinases de matriz (MMP)-2, e MMP-9, e fosfatase ácida tartarato resistente (TRAP) da região de furca 15 dias após a indução da DP. Célulastronco mesenquimais derivadas da medula óssea (CTMs) foram coletadas para diferenciação osteogênica. Taxa de proliferação celular, conteúdo de proteína total e atividade específica da enzima fosfatase alcalina (FAL) foram analisadas nos dias 3, 7, 10 e 14. A mineralização da matriz foi analisada no dia 17. Os dados foram expressos como média ± erro padrão da média (EPM), analisados por one- ou two-way ANOVA, seguido pelo teste de Tukey ou Bonferroni, quando apropriado. RANKL foi fracamente expresso em ambas as linhagens, mas foi moderadamente expresso em animais SDP. OPG foi moderadamente expressa em animais sem PD, mas... / This study aimed to evaluate the effect of experimentally induced periodontitis in the mechanisms involved in osteoblastic activity and bone matrix mineralization from femoral bone marrow-derived stem cells in normotensive and hypertensive rats. Wistar and SHR rats (180–220 g) were divided into 2 groups each: Wistar control [WC] and SHR control [SC], and Wistar with PD [WPD] and SHR with PD [SPD] groups. Immunohistochemical analysis of receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand (RANKL), osteoprotegerin (OPG), bone alkaline phosphatase (BALP), osteocalcin (OC), matrix metalloproteinase (MMP)-2, MMP-9, and tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) of the furcation region were assessed 15 days after PD. Bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) were collected and assessed for osteogenic differentiation. Proliferation rate, total protein content, and ALP activity were analyzed at 3, 7, 10, and 14 days. Mineralization of matrix was analyzed at 17 days. RANKL was weakly expressed in both strains, but was moderately expressed in SPD animals. OPG was moderately expressed in animals without PD, but strongly expressed in those with PD. The expression of BALP was higher in SPD than in WPD animals. Immunolabeling for OC was absent or weak in both strains and exhibited a tendency to increase in the presence of PD. MMP-2 expression was absent or weak in animals without PD, but it increased slightly in WPD animals. MMP-9 was moderately... / FAPESP: 10/14590-6 / FAPESP: 11/06070-5

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-05Bitstream added on 2015-03-03T12:07:39Z : No. of bitstreams: 1 000798816.pdf: 2368369 bytes, checksum: 4eddcaa3ea68fd87ba08aadc29999c26 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Células tronco mesenquimais (CTMs) derivadas do estroma da medula óssea possuem potencial para se diferenciar in vivo e in vitro, em vários tipos celulares, incluindo osteoblastos e adipócitos. Durante o envelhecimento, há o maior número de células que se diferenciam espontaneamente em adipócitos, comprometendo a qualidade óssea, bem como perda da massa óssea decorrente do estilo de vida sedentário. Dentre fatores capazes de modular a diferenciação de CTMs em prol a formação óssea, sinais mecânicos estão sendo estudados como alternativa para o tratamento da osteoporose. Neste estudo, analisamos como o treinamento de força (TF) influencia a remodelação óssea durante o envelhecimento. Para isso, analisamos o potencial osteogênico de diferenciação de CTMs isoladas da medula óssea de ratas adultas (09 meses) e idosas (21 meses) que realizaram ou não o exercício físico com sobrecarga. Os resultados mostraram que o TF aumentou a expressão da proteína óssea morfogênica 2 (BMP2), regulando a diferenciação dos osteoblastos e formação óssea por promover up-regulation do fator de transcrição relacionado com o Runt 2 (Runx2) e down-regulation do fator de transcrição de adipócitos, receptor ativado por proliferadores de peroxissoma ? (Ppar?) em CTMs diferenciadas de doadoras idosas. Além disso, os valores de densidade mineral óssea areal e os parâmetros biomecânicos na tíbia das ratas idosas foram otimizados após a realização do TF. Estes resultados sugerem que o aumento dos fatores de transcrição e proteínas de matriz, bem como o decréscimo de Ppar?, desencadeado pelo TF, contribui para a melhoria da qualidade do osso de ratas idosas treinadas / In vivo and in vitro studies indicate that a subpopulation of bone marrow stromal cells derived mesenchymal stem cells (MSCs) has potential to differentiate into multiple cell types, including osteoblasts and adipocytes. During the aging, greater number of cells is able to differentiate spontaneously into adipocytes, committing bone quality, well as loss of bone mass due to the sedentary lifestyle. Among the factors capable of modulating differentiation of MSCs to promote bone formation mechanical signals are being studied as an alternative for the treatment of osteoporosis. In this study, we analyzed how the strength training (ST) participates in the bone remodeling during the aging. For this purpose, we analyzed the osteogenic potential of differentiation of MSCs isolated from the bone marrow of adult (09 months) and elderly (21 months) female rats that performed or not physical activity with overcharge. The results showed that the ST increased the bone morphogenic protein 2 (BMP2), regulated the osteoblast differentiation and bone formation for up-regulation of the osteogenic master transcription factor, Runt-related transcription factor 2 (Runx2) and the down-regulation of the adipocytes master transcription factor, peroxisome proliferator-activated receptor ? (Ppar?) in differentiated MSCs of the elderly donors. In addition, the values of areal bone mineral density and biomechanical parameters in the tibia of elderly rats were optimized after the realization of ST. These results suggest that increase of transcription factors and matrix proteins as well as the decrease of Ppar?, triggered by ST, contributes to better bone quality of trained elderly / FAPESP: 11/15501-0