Tese de mestrado. Engenharia Biomédica. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto, Instituto Nacional de Engenharia Biomédica. Universidade do Porto. 2009

- Introducción:La reparación de los grandes defectos óseos ha resultado un problema de interés clínico para los cirujanos ortopédicos durante siglos, poniéndose en práctica múltiples estrategias terapéuticas, tales como los transportes óseos, o la utilización de peronés vascularizados. La ingeniería tisular abre nuevas alternativas a éste respecto, mediante la utilización de diferentes tipos de armazones, así como de factores de crecimiento, o células en combinación con estos.- Objetivo:El estudio de la adhesividad celular de líneas de osteoblastos SAOS- 2 sobre tantalio, titanio, y colágeno tipo Ia, así como la influencia de la proteína BMP - 2 en la misma.- Material y métodos:Para realizar el estudio, se utilizaron células osteoblásticas de línea celular SAOS -2, y BMP -2, midiendo la adhesividad de éstas mediante un equipo QCM - D.- Conclusiones:La adhesividad de las células SAOS-2 se modificó de manera importante en presencia de BMP -2 en el medio, aumentando ésta, sobre todo al estudiar la superficie de titanio comercialmente puro.La técnica de estudio presentó una limitación en lo referente al estudio de geles colágenos, resultando éstos inestables y complejos de estudiar.

Os esteróides sexuais (andrógenos e estrógenos) são importantes reguladores do metabolismo ósseo em machos e fêmeas, respectivamente. A Testosterona, o hormônio andrógeno natural, predominante no sexo masculino, tem papel fundamental em relação à manutenção da massa óssea, pela sua ação sistêmica. O objetivo deste trabalho foi avaliar histologicamente a ação do Propionato de Testosterona (PT) sobre o tecido ósseo, aplicado de forma tópica na tíbia de ratos machos, observando a regeneração óssea e, se ele promove aceleração nesta regeneração. Defeitos ósseos de 1,5mm de diâmetro, foram realizados nas duas tíbias de 30 ratos, sendo que 15 haviam sido castrados previamente e os outros 15 não. Após randomização, numa das tíbias do grupo experimental foi aplicado esponja de colágeno (Gelfoan®(G))+PT e na outra G+Óleo Mineral (OM). No grupo controle, uma das tíbias recebeu apenas Gelfoan e na outra foi realizado apenas o defeito ósseo. Os animais dos grupos experimentais foram sacrificados aos 15 e 30 dias pósoperatórios, e os dos grupos controle, foram sacrificados aos 15 dias pós-operatórios. Os ratos que foram sacrificados aos 30 dias receberam duas aplicações das substâncias em avaliação. Realizou-se análise macroscópica das peças, além das análises histológicas descritiva/comparativa e descritiva semi-quantitativa. Com relação a formação de osso entre as corticais (cicatrização do defeito ósseo criado), tanto G isolado como G+PT ou G + OM, apresentaram diferentes graus de cicatrização óssea entre os diferentes grupos: castrados e não castrados, sacrificados aos 15 dias pós-operatórios e aos 30 dias. Foi achado que o grupo castrado sacrificado aos 15 dias que recebeu G+PT teve cicatrização óssea, contrariamente ao grupo não castrado que não cicatrizou. Também no grupo castrado sacrificado aos 30 dias pós-operatórios observou-se formação de osso lamelar, estruturado nos animais tratados com G+PT. Pode-se dizer que o PT tópico nestes grupos contribuiu para neoformação óssea. Concluiu-se que: 1°) em dois grupos experimentais o PT teve melhores resultados, mas os dados obtidos não permitem uma conclusão definitiva; 2°) a Testosterona empregada de forma tópica mostrou-se promissora quanto a ativação da regeneração óssea; 3°) o Propionato de Testosterona não parece ser a forma farmacêutica mais apropriada, devido a sua forma de liberação muito lenta do hormônio e conseqüente pouca eficiência, devendose utilizar como alternativas para aplicação da Testosterona, a mesma diluída em outro veículo e introduzida nos defeitos através de cápsulas de lisina tricalcio fosfato calcinado ou através de implantes combinando a Testosterona com partículas de poly(D,L-(lactide-co-glycolide)) conforme verificado na literatura. Estes resultados obtidos merecem ser aprofundados e aperfeiçoados, utilizando curvas dose-resposta, outros preparados de Testosterona e tempos distintos.

Made available in DSpace on 2014-05-29T12:01:46Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 0000014.pdf: 1580298 bytes, checksum: 5b054cb92fe477233b388a0c1a81bd25 (MD5) 0000014.pdf.txt: 169882 bytes, checksum: eea5ec448fdc049d55bc046ebc61480a (MD5) 0000014.pdf.jpg: 1381 bytes, checksum: 8de6ddf0e9e8bf8dd03f0bf32d033a25 (MD5) Previous issue date: 2013 / A exposição de trabalhadores a tório (Th), cério (Ce) e lantânio (La), nas áreas de mineração e extração, é tratada apenas sob o ponto de vista da exposição e incorporação do Th por se tratar de elemento radioativo. No caso específico da exposição humana aos elementos encontrados em minérios, donde se extraem estes metais, as informações disponíveis na literatura sobre a toxicologia química não nos permitem antever, com segurança, o potencial dos mesmos em provocar danos à saúde. A questão do efeito das misturas de Th, Ce e La é um aspecto ainda menos explorado, mas de extrema importância. O tema desta tese foi a pesquisa in vitro dos efeitos de Th, Ce e La sobre modelos de linfócito T (linhagem Jurkat) e osteoblastos (linhagem MG63) humanos, testados sob a forma simples e em combinações. Como indicadores de efeito foram utilizados medidas de viabilidade e proliferação, adesão celular, síntese de fosfatase alcalina e osteocalcina. Foram utilizados métodos colorimétricos e leituras em hematocitômetro, microscopia de fluorescência e espectrofotômetro. Na avaliação da exposição às misturas foi testada a hipótese de não interação entre os metais através da abordagem de Loewe e do modelo matemático de Chou (Compusyn). Observou-se que células Jurkat em presença de Th e Ce, de forma isolada, não sofreram efeitos tóxicos e que o La gerou redução na proliferação celular. Quanto à linhagem MG63 foi observado que a exposição de células aos três metais gerou curvas dose-efeito em forma de sino mostrando que os efeitos sobre a proliferação podem ser de ativação ou inibição de acordo com as doses utilizadas. / Os indicadores de diferenciação celular sugerem que, nas concentrações mais elevadas, os três metais, e mais fortemente Ce e La, foram capazes de estimular a diferenciação de osteoblastos expressa pela síntese aumentada de fosfatase alcalina e osteocalcina. Os lantanídeos também interferiram no processo de adesão dos osteoblastos ao substrato. Tanto para células Jurkat como para células MG63 observou-se a existência de interações químicas entre diferentes combinações testadas. Dependendo da mistura e do desfecho avaliado as interações, quando presentes, variaram entre sinergismo e antagonismo. Com relação à exposição das células Jurkat às misturas, os efeitos mostraram a intensificação do efeito do La em presença de Th, que resultou em uma redução na proliferação celular. Observou-se também que o sinergismo foi mais acentuado em presença das concentrações mais baixas dos metais da mistura. Considerando-se o desfecho proliferação relativamente aos osteoblastos, observou-se sinergismo para as combinações (Th+La) e (Th+Ce). Com relação à síntese de fosfatase alcalina observou-se um antagonismo leve para as misturas (Th+Ce) e (Ce+La) e para síntese de osteocalcina observou-se um forte antagonismo em todas as combinações binárias utilizadas. Futuras pesquisas poderão ser delineadas reunindo diferentes abordagens como estudos in vitro, in vivo, epidemiológicos e de modelagem. Há uma forte indicação de que a densidade óssea possa ser um possível indicador de efeito para exposições desse tipo.

Made available in DSpace on 2016-04-15T12:54:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 536.pdf: 1580298 bytes, checksum: 5b054cb92fe477233b388a0c1a81bd25 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / A exposição de trabalhadores a tório (Th), cério (Ce) e lantânio (La), nas áreas de mineração e extração, é tratada apenas sob o ponto de vista da exposição e incorporação do Th por se tratar de elemento radioativo. No caso específico da exposição humana aos elementos encontrados em minérios, donde se extraem estes metais, as informações disponíveis na literatura sobre a toxicologia química não nos permitem antever, com segurança, o potencial dos mesmos em provocar danos à saúde. A questão do efeito das misturas de Th, Ce e La é um aspecto ainda menos explorado, mas de extrema importância. O tema desta tese foi a pesquisa in vitro dos efeitos de Th, Ce e La sobre modelos de linfócito T (linhagem Jurkat) e osteoblastos (linhagem MG63) humanos, testados sob a forma simples e em combinações. Como indicadores de efeito foram utilizados medidas de viabilidade e proliferação, adesão celular, síntese de fosfatase alcalina e osteocalcina. Foram utilizados métodos colorimétricos e leituras em hematocitômetro, microscopia de fluorescência e espectrofotômetro. Na avaliação da exposição às misturas foi testada a hipótese de não interação entre os metais através da abordagem de Loewe e do modelo matemático de Chou (Compusyn). Observou-se que células Jurkat em presença de Th e Ce, de forma isolada, não sofreram efeitos tóxicos e que o La gerou redução na proliferação celular. Quanto à linhagem MG63 foi observado que a exposição de células aos três metais gerou curvas dose-efeito em forma de sino mostrando que os efeitos sobre a proliferação podem ser de ativação ou inibição de acordo com as doses utilizadas. / Os indicadores de diferenciação celular sugerem que, nas concentrações mais elevadas, os três metais, e mais fortemente Ce e La, foram capazes de estimular a diferenciação de osteoblastos expressa pela síntese aumentada de fosfatase alcalina e osteocalcina. Os lantanídeos também interferiram no processo de adesão dos osteoblastos ao substrato. Tanto para células Jurkat como para células MG63 observou-se a existência de interações químicas entre diferentes combinações testadas. Dependendo da mistura e do desfecho avaliado as interações, quando presentes, variaram entre sinergismo e antagonismo. Com relação à exposição das células Jurkat às misturas, os efeitos mostraram a intensificação do efeito do La em presença de Th, que resultou em uma redução na proliferação celular. Observou-se também que o sinergismo foi mais acentuado em presença das concentrações mais baixas dos metais da mistura. Considerando-se o desfecho proliferação relativamente aos osteoblastos, observou-se sinergismo para as combinações (Th+La) e (Th+Ce). Com relação à síntese de fosfatase alcalina observou-se um antagonismo leve para as misturas (Th+Ce) e (Ce+La) e para síntese de osteocalcina observou-se um forte antagonismo em todas as combinações binárias utilizadas. Futuras pesquisas poderão ser delineadas reunindo diferentes abordagens como estudos in vitro, in vivo, epidemiológicos e de modelagem. Há uma forte indicação de que a densidade óssea possa ser um possível indicador de efeito para exposições desse tipo.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-05-31T14:18:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 345989.pdf: 5016386 bytes, checksum: 6dc8fdf1f963cd3c9f58b948adab349f (MD5) Previous issue date: 2017 / Proposição: O objetivo deste trabalho foi avaliar a densidade dos osteócitos (DO) ao redor de implantes removidos de humanos, e associá-la ao tempo de carga funcional e a variáveis relacionadas aos pacientes e aos implantes. Materiais e Métodos: Ao longo de 17 anos, 221 implantes em forma de platôs (Bicon LLC, Boston, MA, USA) removidos de humanos por razões protéticas foram obtidos. Este estudo avaliou somente implantes unitários, funcionais por no mínimo 4 meses, e com dados relativos aos pacientes - arco (maxila e mandíbula) e região (anterior e posterior) - e aos implantes (superfície, diâmetro e comprimento) presentes. Assim, um total de 99 implantes com dados suficientes foram incluídos e preparados histologicamente de maneira não descalcificada. Análise histomorfométrica da DO foi realizada e relacionada ao tempo de carga funcional e às variáveis independentes referentes aos pacientes e aos implantes. Resultados: Nenhuma característica dos implantes ou pacientes pode ser estatisticamente relacionada à DO; houve uma discreta diminuição na DO ao longo do tempo. Conclusões: Sugere-se que as características únicas dos implantes em forma de platôs foram capazes de suprimir a influência de variáveis relativas aos implantes e pacientes sobre a DO, somado à sua discreta diminuição em função do tempo de carga funcional, demonstrando que um padrão ósseo homogêneo se desenvolve ao redor destes dispositivos.<br> / Abstract : Purpose: The aim of this study was to assess the effect of functional loading time and other clinical/implant design variables on osteocyte density (OD) human retrieved dental implants. Materials and Methods: Due to prosthetic reasons, 221 human plateau root form implant retrievals from the same manufacturer (Bicon LLC, Boston, MA, USA) were obtained over a period of approximately 17 years. This study analyzed single implants that were on functional loading for at least 4 months, presenting data regarding patients - arch (maxilla and mandible) and region (anterior and posterior) - and implants (surface, diameter and length). Then, 99 implants with sufficient data were included and histologically prepared in a non-decalcified protocol. DO histomorphometric analysis was performed and assessed as a function of time of functional loading and multiple patients and implants independent variables. Results: No implant and patient related characteristics were statistically related to OD; there was a slightly decrease in OD overtime. Conclusions: Results suggest that the unique characteristics of plateau root form implants were able to suppress any influence of patient and implant parameters on OD and along with its slight decrease overtime, showing that a homogeneous bone pattern develops around these devices.

Made available in DSpace on 2016-01-13T13:27:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-21. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-13T13:30:50Z : No. of bitstreams: 1 000856329.pdf: 880066 bytes, checksum: 8e0060357db14d763c5033cdc8b4873b (MD5) / O papel da nutrição no desenvolvimento do tecido ósseo tem sido foco de muitos estudos. O Diabetes Mellitus é uma doença que desregula a atividade dos osteoblastos e osteoclastos, podendo desempenhar um papel na osteoporose. O presente estudo teve como objetivo estudar a influência de uma suplementação com boro no metabolismo ósseo de camundongos controles e diabéticos não obesos por um período de 30 dias. Os animais foram suplementados com 40 μg/0,5 ml de solução de boro (boro quelato H 5%). Foram avaliadas as alterações ósseas por análise dos parâmetros bioquímicos de cálcio total, fósforo, magnésio e boro no soro e por análises ósseas (microtomografia computadorizada óssea e ensaio mecânico de flexão em três pontos em tíbia e fêmur). O estudo foi constituído por 28 animais divididos em quatro grupos: Grupo controle água (n=10): receberam 0,5 ml/dia de água destilada, Grupo controle boro (n=8): receberam 0,5 ml de solução de boro, Grupo diabético água (n=5): receberam 0,5 ml de água destilada e Grupo diabético boro (n=5): receberão 0,5 ml de solução de boro. A partir das análises realizadas foi possível observar que o volume ósseo do osso cortical para o grupo DB foi significativamente maior em comparação com os grupos CA e DA. A fração do volume ósseo trabecular foi maior para o grupo CB em comparação com CA e DA. Os valores de superfície óssea específica foram maiores para o grupo DB em comparação com CA e a espessura trabecular e índice de estrutura foram significativamente diferentes para os grupos CA e CB em comparação com DA. As dosagens de boro no soro foram maiores para o grupo DB em comparação com CA e os grupos DA e DB apresentaram concentração de magnésio inferior aos grupos CA e CB. O teste biomecânico revelou manutenção dos parâmetros de força em animais DB em comparação com o grupo DA e controles. Sendo assim, os resultados sugerem que a suplementação com... / The role of nutrition in the development of the bone tissue has been the focus of many studies. Diabetes Mellitus is an illness that deregulates the activity of osteoblasts and osteoclasts, predisposes a higher risk for the development of osteoporosis. Thus, the objective this study was investigates the influence of a boron supplementation on bone metabolism of control and non-obese diabetic mice for 30 days. The animals were supplemented with 40 μg/0,5 ml of boron solution (boron chelate H 5%). We evaluated the possible bone changes during the development of complications caused by diabetes for biochemical parameters, total calcium, inorganic phosphorus, magnesium and boron, bone analysis (bone computed microtomography, and biomechanical assay at three point test in tibia and femur). This study consisted of 28 animals divided in four groups: Group water control (n=10): received 0,5 mL/day of distilled water, Group boron control (n=8): received 0,5 ml/day of boron, Group diabetic water (n=5): received 0,5 mL/day of distilled water and Group diabetic boron (n=5): received 0,5 mL/day of boron. The results showed that bone volume for the DB group was significant higher compared with CA and DA. In relation to trabecular bone, volume fraction was higher for the CB group when compared with CA and DA. The values for specific bone surface were higher for the DB group compared with CA. The trabecular thickness and structure model index were significantly different for the CB, CA when compared with DA group. The boron serum dosages were higher for DB group compared with CA and DA. The magnesium concentration was lower for DA and DB compared with CA and CB group. Biomechanical test revealed maintenance of parameters the bone strength in animals DB compared with the DA group and controls. Thus, the results suggest that boron supplementation can improve parameters related to bone strength and microstructure of cortical and trabecular bone in diabetic ...

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:10:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:25:54Z : No. of bitstreams: 1 000841459_20170325.pdf: 280698 bytes, checksum: ddf6fe87e9e3214412eb46b4c5b5c542 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-03-31T12:19:19Z: 000841459_20170325.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-31T12:20:22Z : No. of bitstreams: 1 000841459.pdf: 1087156 bytes, checksum: 876dbf5e07c145d71a408ab1d097865f (MD5) / A calcificação biológica é um processo muito bem regulado, no qual os diferentes tipos de tecidos, células, organelas e biomoléculas, participam na coordenação e regulação de eventos metabólicos envolvidos na deposição de fosfato de cálcio, sob a forma de cristais de hidroxiapatita. As alterações morfológicas ocorridas nos anuros, durante a metamorfose, são extremamente acentuadas e perceptíveis, sendo uma delas a remodelação do esqueleto. Os eventos relacionados à ossificação em girinos raramente são descritos na literatura. A fosfatase ácida tartarato resistente tem sido amplamente utilizada como um marcador específico de osteoclastos, células que participam do processo de reabsorção e de remodelação do tecido ósseo, enquanto a fosfatase alcalina tem sido usada como marcador de osteoblastos, células responsáveis pela formação do tecido ósseo. Estudos efetuados por vários pesquisadores, com o objetivo de determinar, principalmente, as enzimas presentes nas vesículas extracelulares dos condrócitos, têm revelado a presença de outras enzimas, além da fosfatase alcalina que são importantes para o processo de calcificação biológica. Assim, no presente trabalho foi avaliada a variação na atividade das fosfatases no processo de ossificação no período de desenvolvimento dos membros de Lithobates catesbeianus, a fim de contribuir na compreensão deste processo não somente em anuros, mas também nos demais vertebrados. Os animais foram dessensibilizados em água com gelo, decapitados, os membros foram removidos, em seguida os ossos foram descarnados e homogeneizados, centrifugados, sendo o sobrenadante aliquotado, congelado em nitrogênio líquido e armazenado a -70ºC para posteriores atividades enzimáticas e dosagem de proteína no extrato. As enzimas, fosfatase ácida e fosfatase alcalina, apresentaram estabilidade em todos os pH de armazenamento estudados... / Biological calcification is a tight regulated process in which different types of tissues, cells, organelles, and biomolecules participate in the coordination and regulation of metabolic events involved in accumulating calcium phosphate, in the form of hidroxiapatite crystals. The morphological changes that occur during anuran metamorphosis are extremely accentuated and perceptible, such as the remodeling of the skeleton. The ossification events are rarely described for tadpoles in the literature. The tartarate resistant acid phosphatase has been widely used as a specific marker of osteoclasts, cells that participate in the process of resorption and remodeling of bone tissue, while the alkaline phosphatase has been used as a marker for osteoblasts, cells responsible for bone tissue formation. Studies conducted by many researchers with the aim of determining, mainly, the enzymes in chondrocyte extracellular vesicles have revealed the presence of other enzymes, in addition to alkaline phosphatase, which are important to the process of biological calcification. Thus, in the present study, the changes in the activity of phosphatases in the ossification process during the development of the limbs of Lithobates catesbeianus was evaluated, with the aim to contribute to the understanding of this process not only in anurans, but also in other vertebrates. The animals were desensitized in water with ice, decapitated and limb bones were removed and homogenized, centrifuged, and the supernatant aliquoted, frozen in liquid nitrogen and stored at -70ºC for subsequent enzymatic activities and protein quantification. The enzymes, acid phosphatase and alkaline phosphatase, remained stable in all of the studied storage pH, the apparent pH optimum of hydrolysis of p-nitrophenyl phosphate (PNPP) was of 5.0 and 10.5, respectively, and the enzymes were stable at 45ºC and the t1/2 was 60 minutes at 55ºC for alkaline...

Os esteróides sexuais (andrógenos e estrógenos) são importantes reguladores do metabolismo ósseo em machos e fêmeas, respectivamente. A Testosterona, o hormônio andrógeno natural, predominante no sexo masculino, tem papel fundamental em relação à manutenção da massa óssea, pela sua ação sistêmica. O objetivo deste trabalho foi avaliar histologicamente a ação do Propionato de Testosterona (PT) sobre o tecido ósseo, aplicado de forma tópica na tíbia de ratos machos, observando a regeneração óssea e, se ele promove aceleração nesta regeneração. Defeitos ósseos de 1,5mm de diâmetro, foram realizados nas duas tíbias de 30 ratos, sendo que 15 haviam sido castrados previamente e os outros 15 não. Após randomização, numa das tíbias do grupo experimental foi aplicado esponja de colágeno (Gelfoan®(G))+PT e na outra G+Óleo Mineral (OM). No grupo controle, uma das tíbias recebeu apenas Gelfoan e na outra foi realizado apenas o defeito ósseo. Os animais dos grupos experimentais foram sacrificados aos 15 e 30 dias pósoperatórios, e os dos grupos controle, foram sacrificados aos 15 dias pós-operatórios. Os ratos que foram sacrificados aos 30 dias receberam duas aplicações das substâncias em avaliação. Realizou-se análise macroscópica das peças, além das análises histológicas descritiva/comparativa e descritiva semi-quantitativa. Com relação a formação de osso entre as corticais (cicatrização do defeito ósseo criado), tanto G isolado como G+PT ou G + OM, apresentaram diferentes graus de cicatrização óssea entre os diferentes grupos: castrados e não castrados, sacrificados aos 15 dias pós-operatórios e aos 30 dias. Foi achado que o grupo castrado sacrificado aos 15 dias que recebeu G+PT teve cicatrização óssea, contrariamente ao grupo não castrado que não cicatrizou. Também no grupo castrado sacrificado aos 30 dias pós-operatórios observou-se formação de osso lamelar, estruturado nos animais tratados com G+PT. Pode-se dizer que o PT tópico nestes grupos contribuiu para neoformação óssea. Concluiu-se que: 1°) em dois grupos experimentais o PT teve melhores resultados, mas os dados obtidos não permitem uma conclusão definitiva; 2°) a Testosterona empregada de forma tópica mostrou-se promissora quanto a ativação da regeneração óssea; 3°) o Propionato de Testosterona não parece ser a forma farmacêutica mais apropriada, devido a sua forma de liberação muito lenta do hormônio e conseqüente pouca eficiência, devendose utilizar como alternativas para aplicação da Testosterona, a mesma diluída em outro veículo e introduzida nos defeitos através de cápsulas de lisina tricalcio fosfato calcinado ou através de implantes combinando a Testosterona com partículas de poly(D,L-(lactide-co-glycolide)) conforme verificado na literatura. Estes resultados obtidos merecem ser aprofundados e aperfeiçoados, utilizando curvas dose-resposta, outros preparados de Testosterona e tempos distintos.

Orientador: João Martins Pizauro Junior / Banca: Marta Verardino de Stéfani / Banca: Luis Henrique Souza Guimarães / Resumo: A calcificação biológica é um processo muito bem regulado, no qual os diferentes tipos de tecidos, células, organelas e biomoléculas, participam na coordenação e regulação de eventos metabólicos envolvidos na deposição de fosfato de cálcio, sob a forma de cristais de hidroxiapatita. As alterações morfológicas ocorridas nos anuros, durante a metamorfose, são extremamente acentuadas e perceptíveis, sendo uma delas a remodelação do esqueleto. Os eventos relacionados à ossificação em girinos raramente são descritos na literatura. A fosfatase ácida tartarato resistente tem sido amplamente utilizada como um marcador específico de osteoclastos, células que participam do processo de reabsorção e de remodelação do tecido ósseo, enquanto a fosfatase alcalina tem sido usada como marcador de osteoblastos, células responsáveis pela formação do tecido ósseo. Estudos efetuados por vários pesquisadores, com o objetivo de determinar, principalmente, as enzimas presentes nas vesículas extracelulares dos condrócitos, têm revelado a presença de outras enzimas, além da fosfatase alcalina que são importantes para o processo de calcificação biológica. Assim, no presente trabalho foi avaliada a variação na atividade das fosfatases no processo de ossificação no período de desenvolvimento dos membros de Lithobates catesbeianus, a fim de contribuir na compreensão deste processo não somente em anuros, mas também nos demais vertebrados. Os animais foram dessensibilizados em água com gelo, decapitados, os membros foram removidos, em seguida os ossos foram descarnados e homogeneizados, centrifugados, sendo o sobrenadante aliquotado, congelado em nitrogênio líquido e armazenado a -70ºC para posteriores atividades enzimáticas e dosagem de proteína no extrato. As enzimas, fosfatase ácida e fosfatase alcalina, apresentaram estabilidade em todos os pH de armazenamento estudados... / Abstract: Biological calcification is a tight regulated process in which different types of tissues, cells, organelles, and biomolecules participate in the coordination and regulation of metabolic events involved in accumulating calcium phosphate, in the form of hidroxiapatite crystals. The morphological changes that occur during anuran metamorphosis are extremely accentuated and perceptible, such as the remodeling of the skeleton. The ossification events are rarely described for tadpoles in the literature. The tartarate resistant acid phosphatase has been widely used as a specific marker of osteoclasts, cells that participate in the process of resorption and remodeling of bone tissue, while the alkaline phosphatase has been used as a marker for osteoblasts, cells responsible for bone tissue formation. Studies conducted by many researchers with the aim of determining, mainly, the enzymes in chondrocyte extracellular vesicles have revealed the presence of other enzymes, in addition to alkaline phosphatase, which are important to the process of biological calcification. Thus, in the present study, the changes in the activity of phosphatases in the ossification process during the development of the limbs of Lithobates catesbeianus was evaluated, with the aim to contribute to the understanding of this process not only in anurans, but also in other vertebrates. The animals were desensitized in water with ice, decapitated and limb bones were removed and homogenized, centrifuged, and the supernatant aliquoted, frozen in liquid nitrogen and stored at -70ºC for subsequent enzymatic activities and protein quantification. The enzymes, acid phosphatase and alkaline phosphatase, remained stable in all of the studied storage pH, the apparent pH optimum of hydrolysis of p-nitrophenyl phosphate (PNPP) was of 5.0 and 10.5, respectively, and the enzymes were stable at 45ºC and the t1/2 was 60 minutes at 55ºC for alkaline... / Mestre