A ativação do receptor beta 2 adrenérgico (β2-AR), pelos mediadores químicos do estresse, pode induzir efeitos estimuladores ou inibidores na migração e invasão celular, dependendo do tipo de tumor maligno. A importância deste receptor na evolução do câncer de boca não está totalmente esclarecida. O objetivo deste estudo foi verificar a expressão do β2-AR em linhagens de carcinomas espinocelular de boca (SCC-9 e SCC-25), e investigar o papel da ativação deste receptor pela norepinefrina e de seu bloqueio por um antagonista na migração e invasão destas células neoplásicas. As células SCC-9 e SCC-25 foram investigadas quanto à expressão gênica e proteica do β2-AR, respectivamente, pelo RT-qPCR e pelo Western blot. A migração e a invasão celular foram analisadas pelo ensaio de cicatrização de feridas e pelo sistema de câmeras de invasão Transwell, respectivamente. Diferentes concentrações (0,1; 1 e 10μM) de norepinefrina foram utilizadas para estimular e 1μM de propranolol foi empregado para bloquear os receptores beta adrenérgicos nas células neoplásicas. As diferenças das médias obtidas nos experimentos de invasão e migração de SCC-9 e SCC-25 e da expressão proteica do β2-AR, foram comparadas pelo teste t de Student com nível de significância de 5%. Os resultados mostraram que a expressão gênica e proteica do β2-AR foi verificada em ambas as linhagens de câncer de boca. A concentração de 10μM de norepinefrina inibiu, significativamente (p≤0,05), a migração e invasão celular de SCC-9 e SCC-25, sendo este efeito mais acentuado nas células SCC-25. Além disso, houve uma redução significativa (p≤0,05) do efeito da norepinefrina na migração celular quando os β2-AR foram inibidos pelo propranolol. Adicionalmente, o bloqueio dos β-ARs pelo propranolol reverteu parcialmente o efeito da norepinefrina na capacidade invasiva de SCC-9 e SCC-25. Estes resultados comprovam que a norepinefrina, via ativação do β2-AR, reduziu a migração e a invasão das células do carcinoma espinocelular de boca e, portanto, o uso de agonistas dos receptores beta-adrenérgicos poderia se tornar um alvo terapêutico adjuvante no tratamento desta neoplasia maligna. / The activation of beta 2 adrenergic receptor (β2-AR), by chemical mediators of stress, can induce stimulatory or inhibitory effects on cell migration and invasion, depending on the type of malignancy. The importance of this receptor in the oral cancer outcome is not fully understood. The aim of this study was to verify β2- AR expression in oral squamous cell carcinoma cell lines (SCC-9 and SCC-25), and to investigate the role of activation of this receptor by norepinephrine and its blockade by an antagonist in migration and invasion of these neoplastic cells. SCC-9 and SCC-25 cells were investigated for gene and protein expression of β2-AR, respectively, by RT-qPCR and Western blot. The cell migration and invasion were analyzed by wound healing assay and Transwell invasion camera system, respectively. Different concentrations (0.1, 1 and 10μM) of norepinephrine were used to stimulate and 1μM propranolol was used to block the beta adrenergic receptors on cancer cells. Differences in mean values of the invasion and migration assays of SCC-9 and SCC-25 and β2-AR protein expression were compared by the Student t test with 5% significance level. The results showed that β2-AR gene and protein expression was verified in both oral cancer cell lines. The concentration of 10μM of norepinephrine inhibited significantly (p≤0.05), cell migration and invasion of SCC-9 and SCC-25, being the most pronounced effect in SCC-25 cells. Furthermore, there was a significant reduction (p≤0.05) of norepinephrine effect on cell migration when the β2-AR was inhibited by propranolol. In addition, blockade of β-ARs by propranolol partially reversed the effect of norepinephrine on the invasiveness of SCC-9 and SCC-25. These results show that norepinephrine via β2-AR activation, reduced the migration and invasion of oral squamous cell carcinoma cells and, therefore, the use of beta-adrenergic receptors agonists could become an adjuvant therapeutic target in the treatment of this malignancy.

A carcinogênese oral é um processo multifásico, onde componentes genéticos levam a desregulação de vias de sinalização celular que controlam funções celulares básicas, como divisão, diferenciação e morte celular. Uma das maneiras de compreender a natureza biológica dos cânceres, além do curso clínico, é através do entendimento do processo de progressão e metástase destas neoplasias. Este estudo teve como objetivo avaliar a participação da proteína Twist no desenvolvimento e progressão dos carcinomas epidermóides orais. Com tal proposta, também foi avaliada a participação das proteínas caderina-E e p-Akt, e sua possível interação com Twist no processo de carcinogênese oral. O trabalho em questão analisou a expressão imuno-histoquímica destas proteínas em 30 espécimes de displasia oral, 20 de carcinoma epidermóide oral e 10 de mucosa oral normal, e avaliou também a possível inter-relação dessas proteínas em linhagens derivadas de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço por meio dos ensaios de Western Blotting e imunofluorescência. Os resultados deste estudo demonstraram uma relação inversamente proporcional entre Twist e caderina-E desde os estágios mais precoces da carcinogênese oral. Tal afirmação baseou-se na presença de diferenças significantes entre a expressão imuno-histoquímica de Twist e Caderina-E na amostras de epitélio oral, epitélio displásico e nos espécimes de carcinoma epidermóide oral. Adicionalmente, foi observada a relação inversa entre Twist e a Caderina-E nas linhagens de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço, sendo este evento constatado pelo decréscimo nos níveis protéicos da Caderina-E frente a uma elevação de Twist. Estes resultados sugerem um importante papel de Twist na progressão do carcinoma epidermóide oral, e juntamente com a Caderina-E, pode representar um relevante marcador biológico do câncer oral. / The oral carcinogenesis is a multi-stage process, where genetic components leads to deregulation of cell signaling pathways that control basic cellular functions such as division, differentiation and cell death. One way to understand the biological nature of cancers, besides the clinical course, is through understanding the process of progression and metastasis of these neoplasms. This study aimed to evaluate the role of Twist protein in the development and progression of oral squamous cell carcinomas. With this proposal, was also evaluated the involvement of E-cadherin and p-Akt proteins, and its possible interaction with Twist in the process of oral carcinogenesis. The work in question examined the immunohistochemical expression of these proteins in 30 specimens of oral dysplasia, 20 oral squamous cell carcinoma and 10 normal oral mucosa, and also evaluated the possible interrelationship of these proteins in lines derived from squamous cell carcinoma of head and neck by means of Western blotting assays and immunofluorescence. The results of this study showed an inverse relationship between Twist and E-cadherin since the earliest stages of oral carcinogenesis. These results were based on the presence of significant differences between the immunohistochemical expression of Twist and ECadherin in samples of oral epithelium, dysplastic epithelium and in specimens of oral squamous cell carcinoma. In addition, we observed the inverse relationship between Twist and E-Cadherin in the lines of squamous cell carcinoma of head and neck; this event was evidenced by the decrease in protein levels of E-Cadherin forward to a high of Twist. These results suggest an important role of Twist in the progression of oral squamous cell carcinoma, and along with E-cadherin may represent a relevant biomarker of oral cancer.

O presente estudo realizou teste de campo para uma versão em Português do questionário de qualidade de vida da Universidade de Washington (UW-QOL, quarta versão), com o intuito de avaliar a capacidade do questionário em descrever padrões diferenciais de qualidade de vida de pacientes com câncer de boca no contexto brasileiro, e incentivar avaliações dessa natureza em diferentes contextos culturais. Foram entrevistados 143 pacientes com carcinoma epidermóide de boca e orofaringe atendidos no Complexo Hospitalar Heliópolis, usando um questionário especificamente desenvolvido para esta finalidade. Dados colhidos do prontuário do paciente informaram características sócio-demográficas desses pacientes, sua condição clínica e os tratamentos efetuados. A auto-avaliação de qualidade de vida foi estratificada segundo categorias sócio-demográficas e clínicas, como estratégia para apreciar a capacidade do questionário em discriminar os domínios mais afetados em diferentes quadros de qualidade de vida. Os pacientes com tumores maiores, os que tinham tumores localizados na orofaringe ou na porção posterior da boca, os que apresentaram metástases regionais e os que foram submetidos a radioterapia apresentaram indicações significantemente menos elevadas (p < 0,05) de qualidade de vida. Mastigar, ansiedade, engolir e saliva foram os domínios de pior pontuação; dor, engolir, mastigar e saliva foram as queixas mais freqüentes na semana que antecedeu a entrevista. O questionário foi bem aceito e facilmente respondido pelos pacientes, permitindo a identificação de relevantes contrastes e similaridades entre os grupos de respondentes. Seu uso regular em ambiente hospitalar pode contribuir para antecipar intervenções voltadas à redução de impacto das aplicações terapêuticas e à gestão dos tratamentos. / This study performed a field trial of a Portuguese version of the University of Washington quality of life questionnaire (UW-QOL, fourth version), aiming at fostering these studies in cross-cultural contexts, and at appraising the questionnaire’s ability in identifying differential patterns of health-related quality of life of patients with cancer of mouth and oropharynx in the Brazilian context. We interviewed 143 patients undergoing treatment for oral squamous cell carcinoma at a large Brazilian hospital (Complexo Hospitalar Heliópolis), using a questionnaire specifically developed for this purpose. Hospital records informed socio-demographic characteristics of these patients, their clinical status, and treatments already performed. The self-report of quality of life was stratified by categories of socio-demographic and clinical characteristics of patients, as a strategy for assessing the ability of the questionnaire in discriminating the most affected domains for patients presenting different conditions. Patients presenting larger tumours, neoplasm in the oropharynx or in posterior parts of the mouth, those affected by regional metastasis and those already treated with radiotherapy presented significantly (p < 0.05) poorer scores of quality of life. Chewing, anxiety, swallowing and saliva were the poorest rated domain; pain, swallowing, chewing and saliva were the most frequent complaints during the week preceding the interview. The questionnaire was well accepted and easily answered by patients, and allowed the identification of relevant contrasts and similarities among subsets of respondents. Its regular use in hospital settings can contribute for anticipating interventions aimed at reducing the impact of therapeutic applications and at subsequent patient management.

INTRODUÇÃO: O carcinoma espinocelular de origem bucal (CEC) apresenta uma alta taxa de mortalidade devido à invasividade das células tumorais. A migração celular, principal evento da invasão e metástase, pode ser regulada tanto por fatores intrínsecos, como adesão e contratilidade celular, quanto extrínsecos, como composição, densidade e remodelagem da matriz extracelular (MEC). OBJETIVO: Avaliar o papel de elementos intrínsecos e extrínsecos sobre o processo invasivo do carcinoma espinocelular de origem bucal. MÉTODOS: Foi realizada imuno-histoquímica para as proteínas: Miosina II (isoformas A, B e C), metaloproteinases de matriz (1, 2, 9 e 14); imunofluorescência as proteínas: e-caderina, n-caderina, FAK, paxilina, vinculina e fibronectina em amostras de CEC oral. Foi realizado ensaio de migração nas seguintes condições: 1 – matriz 2D com o substrato de fibronectina, ou laminina ou matrigel; 2 – matriz 3D com colágeno na presença ou não de fibronectina ou laminina; 3 – matriz 3D com diferentes concentrações de colágeno (0,6; 1,2 e 1,8 mg/ml) + fibronectina na presença ou não de um inibidor de MMP. Foi realizado análise de adesão celular utilizando-se o microscópio TIRF e o microscópio confocal, tanto em matrizes 2D quanto 3D. Foram realizados esferoides celulares para avaliar a contratilidade celular, através do plaqueamento das células em gel de agarose e a utilização de drogas que inibem ou que induzem a contratilidade, bem como a partir de células transfectadas com versões fosfomiméticas para a cadeia leve de miosina. Foi realizado ainda western blotting para proteínas: e-caderina, FAK, vinculina, paxilina, N-caderina, integrinas e as isoformas de miosina II, bem como foi avaliado os níveis de ativação das proteínas da família RhoGTPase, as quais estão envolvidas no controle da migração celular. RESULTADOS: A expressão das MMPs analisadas e das isoformas de miosinas foi maior nas zonas de invasão tumoral, sendo que o CEC oral também apresenta uma maior expressão de proteínas associadas à adesão com a MEC. A migração celular foi afetada pela densidade e a composição da MEC, bem como pela atividade das MMPs. Adicionalmente, a modulação das proteínas de adesão célula-matriz altera a velocidade de migração, a direcionalidade dessa migração e também a forma de migração, mudando de uma migração coletiva para uma migração individual. O aumento na contratilidade células resulta numa dispersão celular enquanto que a diminuição da contratilidade resulta numa melhor adesão célula – célula. CONCLUSÕES: O comportamento das células tumorais pode ser modulado através de fatores extrínsecos como, por exemplo, a alteração no microambiente tumoral, seja ela por mudança no substrato ou na densidade da matriz, e também dos fatores intrínsecos como a alteração nos níveis de miosina. / INTRODUCTION: Oral squamous cell carcinoma (OSCC) presents high mortality index due to the invasive phenotype of tumor cells. Cell migration is the main event in cell invasion and metastasis and it can be regulated by intrinsic factor, such as adhesion and cell contractility, and extrinsic factors, such as density and extracellular matrix (EMC) remodeling. OBJECTIVE: Analyze the role of intrinsic and extrinsic factor during the invasive process of oral squamous cell carcinoma. METHODS: We performed immunostaining in OSCC samples for the following proteins: myosin II (isoforms A, B and C), matrix metalloproteinase (1, 2, 9 and 14) e-cadherin, n-cadherin, FAK, paxillin, vinculin and fibronectin. We also performed migration assays with OSCC cell line in the following conditions 1 – 2D matrix with fibronectin or laminin or matrigel; 2 – 3D matrix with collagen in the presence or not of fibronectin or laminin; 3 – 3D matrix with different collagen concentration (0,6; 1,2 e 1,8 mg/ml) with fibronectin in the presence or not of the MMP inhibitor. In order to analyze cell adhesion, it was performed Total Internal Reflectance Fluorescence and Confocal microscopy, in 2D and 3D matrix. To analyze cell contractility, cells were plated in agarose gel in order to produce spheroids, which were treated with drugs that inhibit or induce cell contractility or cells were previously transfected with Myosin Light Chain phosphomimetics mutants. It was also performed western blotting to: e-cadherin, n-cadherin, FAK, paxillin, vinculin and myosin II isoforms, as well as it was analyze the levels in RhoGTPase family, which are involved in cell migration control. RESULTS: The expression to MMPs and myosin II isoforms were higher at invasion zone of the tumor, and the OSCC presented higher expression of proteins associated to adhesion to ECM. Cell migration was affected by the EMC composition and density and by MMP activity. Also, the modulation of cell-matrix adhesion proteins altered migration speed, cell directionality as well as influenced the switch between collective and single cell migration. The increase in cell contractility resulted in cell dispersion while the decrease in cell contractility resulted in a better cell-cell adhesion. CONCLUSIONS: The behavior of cell tumor can be modulate by extrinsic factors, for example, the change in tumor microenvironment, by the change in the EMC substrate or density and by intrinsic factors such as the alteration in myosin levels.

O carcinoma espinocelular de boca (CEB) é a neoplasia maligna mais comum da cavidade oral, correspondendo à aproximadamente 94% dos casos dessa região. Apesar dos diversos estudos moleculares e celulares do CEB, a taxa de sobrevida dos pacientes é de aproximadamente 50%, devido principalmente ao tamanho do tumor, metástase em linfonodos regionais, grau de diferenciação das células e sítio anatômico. O microambiente tumoral do CEB, é extremamente complexo e diversificado, tendo como característica principal um estado inflamatório crônico imunossupressivo. Este microambiente é sustentado pela liberação de diferentes citocinas inflamatórias, como IL-6, TNF- - atividades exercidas tanto pelas células tumorais quanto pelas estromais. Dentre essas atividades, tem sido relatado na literatura que as citocinas inflamatórias são capazes de aumentar a migração e a capacidade de invasão das células tumorais. Entre as células estromais, os macrófagos são as mais abundantes e participam da manutenção do microambiente tumoral. De acordo com o estímulo, podem ser polarizados M1, com papel pró-inflamatório e antitumoral, e M2, com papel anti-inflamatório e pró-tumoral. O objetivo desta tese foi compreender o papel dos macrófagos no prognóstico de CEB e das citocinas inflamatórias IL-6, TNF- - linhagens celulares de CEB. Para verificar o papel dos macrófagos no prognóstico, foi realizada uma revisão sistemática na qual foram incluídos apenas os estudos que utilizavam amostra de pacientes com CEB e avaliavam o prognóstico com marcadores para macrófagos. Foi observado que maiores concentrações de macrófagos CD68+ e CD163+ estavam relacionados com pior prognóstico de pacientes com CEB, embora não tenha sido possível concluir qual região tumoral a presença destas células seja mais importante 7 para o desfecho. Para analisar o papel das citocinas inflamatórias IL-6, TNFILensaios in vitro utilizando duas linhagens celulares, SCC25 e Cal27, em condições promotoras de migração sob a influência dessas citocinas. Foi observado que a citocina IL-6 foi capaz de aumentar a velocidade de migração e a direcionalidade tanto da SCC25 quanto da Cal 27 e que esta melhora na capacidade migratória ocorreu através de um crosstalk entre a via de sinalização relacionada a IL6 (STAT3) e a via reguladora de migração celular, Rho GTPase Rac1. Estes dados reforçam o papel do microambiente tumoral no processo de progressão tumoral e sugerem potenciais alvos terapêuticos como a modulação do perfil da população de macrófagos e o papel de interleucinas no controle de invasão tecidual e metástase. / Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is the most common malignant neoplasm of the oral cavity, corresponding to approximately 94% of the cases in this region. Despite the diverse molecular and cellular studies of OSCC, the patient survival rate is approximately 50%, mainly due to tumor size, regional lymph node metastasis, cell differentiation and anatomic site. The OSCC tumor microenvironment is extremely complex and diverse, with the main characteristic being an immunosuppressive chronic inflammatory state. This microenvironment is supported by the release of different inflammatory cytokines, such as IL-6, TNF- - and enhance the activities of both tumor and stromal cells. Among these activities, it has been reported in the literature that inflammatory cytokines are capable of increasing migration and invasiveness of tumor cells. Among stromal cells, macrophages are the most abundant and participate in the maintenance of the tumor microenvironment. According to the stimulus, macrophages can be polarized in M1, with pro-inflammatory and anti-tumoral role, and M2, with antiinflammatory and pro-tumoral role. Thus, the aim of this thesis was to evaluate the role of macrophages in the prognosis of OSCC and the influence of inflammatory cytokines IL-6, TNF- - OSCC cell lines. To assess the role of macrophages in the prognosis, a systematic review was conducted in which only studies using a sample of OSCC patients were evaluated and the prognosis was evaluated with macrophage markers. It was observed that higher concentrations of CD68 + and CD163 + macrophages were related to worse prognosis in patients with OSCC, although it was not possible to conclude which tumor region the presence of these cells is more important for the outcome. In order to analyze the role of the inflammatory cytokines IL-6, TNF- - atory 9 behavior of OSCC cells, in vitro assays using two cell lines, SCC25 and Cal27, were performed in migration-promoting conditions under the influence of these cytokines. It was observed that IL-6 was able to increase the speed migration and directionality of both SCC25 and Cal 27 and that this improvement in migratory capacity occurred through a crosstalk between the IL6-related signaling pathway (STAT3) and cell migration-related pathway, RhoGTPase Rac1. These data reinforce the role of the tumor microenvironment in the tumor progression process and suggest potential therapeutic targets such as the modulation of the profile of the macrophages population and the role of interleukins in the control of tissue invasion and metastasis.

Proposição: Avaliar a associação entre as condições de saúde bucal, fatores comportamentais e sociodemográficos e o padrão citopatológico da mucosa bucal de homens adultos. Correlacionando o padrão citopatológico quantitativo e qualitativo com as variáveis bucais e sociodemográficas. Materiais e Métodos: A partir de dois esfregaços, um da borda da língua e outro do assoalho bucal de 117 homens com mais de 25 anos, foram quantificadas cem células de cada. As células foram coradas pelo método Papanicolaou modificado e classificadas em: Escamas, células superficiais com núcleo, células intermediárias e células parabasais. Variáveis sociodemográficas e comportamentais foram coletadas a partir de um questionário estruturado. Índice CPO-D e uso de próteses foram registradas a partir de um exame clínico intra-oral.As análises foram conduzidas utilizando o pacote estatístico Stata versão 10. O indivíduo foi considerado a unidade analítica. O nível de significância foi estabelecido em 5%. Resultados: No total das células na borda da língua, 75% eram intermediárias, 20% superficiais com núcleo e 5% escamas, sendo que células parabasais foram raramente observadas. Não foram observadas diferenças significativas para todas as variáveis em estudo em todos os tipos celulares, com exceção da ingestão de bebidas alcoólicas.Observou-se percentual significativamente maior de escamas e células superficiais com núcleo nos indivíduos que ingeriam de álcool comparados aos que não ingerem. Para as células intermediárias, o percentual foi significativamente menor nos indivíduos que bebem comparados aos que não bebem. Um padrão semelhante de distribuição celular foi observado no assoalho de boca. O consumo de álcool foi o único fator comportamental que influenciou significativamente no padrão citológico da mucosa bucal dos indivíduos analisados nos modelos multivariados. Conclusões: Foi encontrada associação entre um dos fatores comportamentais (o álcool) e o padrão citopatológico da mucosa bucal de homens adultos. As demais variáveis estudadas não apresentaram associação significativa com o padrão de descamação da mucosa bucal normal com a técnica utilizada. / Proposition: To evaluate the association between oral health status, socio- demographic and behavioral factors and standard cytology of the oral mucosa of adult men. Correlating the standard cytopathology quantitative and qualitative with oral and sociodemographic variables. Materials and Methods: From two smears, one edge of the tongue and other oral floor of 117 men over 25 years old, were quantified hundred cells each. Cells were stained with modified Papanicolaou method and classified into: Scales, superficial cells with nuclei, intermediate and parabasal cells. Sociodemographic and behavioral variables were collected from a structured questionnaire. DMFT index and use of prostheses were recorded from a clinical intra - oral.As analyzes were conducted using Stata version 10. The individual was considered the analytical unit. The level of significance was set at 5 %. Results: In total cells at the edge of the tongue 75% were intermediate, 20% core surface scales and 5%, and parabasal cells were rarely observed. No significant differences were observed for all study variables in all cell types, with the exception of beverage intake alcoólicas.Observou is significantly greater percentage of scales and superficial cells in the core subjects ingestores alcohol compared to those who do not drink. For intermediate cells, the percentage was significantly lower in individuals who drink compared to those who do not drink. A similar pattern of cell distribution was observed in the floor of mouth. Alcohol consumption was the only factor that significantly influenced the behavioral cytology of the oral mucosa of individuals analyzed in the multivariate models. Conclusions: An association between a behavioral factor (alcohol) and standard cytology of the oral mucosa of adult men. The other variables were not significantly associated with the default scaling of normal oral mucosa with the technique used.

Ampliar nosso conhecimento sobre a biologia do carcinoma espinocelular bucal é fundamental para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas e para melhorar a sobrevida dos pacientes acometidos por essa patologia. Para tanto, compreender as contribuições do microambiente tumoral à carcinogênese é muito importante. Um característica importante a ser avaliada do microambiente tumoral é a acidificação do meio extracelular. Considerando que o pH ácido tumoral está relacionado à maior agressividade da lesão, o objetivo deste projeto é estudar os efeitos de um microambiente ácido na biologia de células de carcinoma espinocelular bucal. Para tanto, foram realizadas duas revisões da literatura, nas quais foram avaliados os seguintes temas: influência da acidez extracelular na invasão e migração; e os mecanismos moleculares envolvidos na resistência ao tratamento quimioterápico, induzida pela acidez do microambiente tumoral. Tais revisões embasaram a construção do terceiro artigo desta tese, o qual se propôs a comparar o comportamento de células linhagens de carcinoma espinocelular bucal (SCC-4 e SCC-9) e queratinócitos (HaCat) cultivadas em meio de cultura de pH 6.8 com células mantidas em meio neutro pH 7.4. As células foram expostas de forma contínua ou intermitente ao pH 6.8 e a adaptação das células foi avaliada pelo ensaio clonogênico. Além disso, as células foram avaliadas quanto à sua capacidade migratória pelo ensaio de cicatrização de feridas e de time lapse. A expressão gênica relacionada à indiferenciação e pluripotência foi investigada por PCR em tempo real com os marcadores Bmi-1 e CD44, assim como pelo ensaio de orosferas. A resistência desses grupos de células ao tratamento anti-câncer foi avaliada pelo ensaio de viabilidade celular da sulforodamina B após o tratamento com Cisplatina. Para a análise estatística, inicialmente foi realizada a distribuição dos dados, seguido da comparação estatística dos grupos utilizando, para distribuição normal, os testes ANOVA e ANOVA de duas vias. Toda a análise foi realizada no programa GraphPad Prism 5.0 e o nível de significância considerado foi de p< 0.05.Observamos que ambas as linhagens mudaram sua morfologia para um aspecto mesenquimal. Ao avaliar o perfil migratório observou-se que as células SCC-9 apresentaram maior capacidade de migração após a exposição ao pH6.8. O aumento da migração celular pode ser causado pela indução da transição epitélio-mesênquima, visto que observamos o aumento da expressão de N-caderina (SCC-4:p<0.05) concomitante à diminuição de E-caderina (SCC-4: p<0.05). A exposição à acidez também provocou, em ambas as linhagens, aumento da capacidade de formar orosferas em placa de baixa aderência, denotando um fenótipo pluripotente (SCC-4: p=0.007/ SCC-9: p= 0.1202). Tal resultado foi reforçado com aumento da expressão gênica do marcador de célula-tronco tumoral CD44 (p= 0.0325). na linhagem SCC-4. No entanto, observamos diminuição da expressão de Bmi-1(p=0.0572) em relação ao controle. A resistência à Cisplatina aumentou nos casos de exposição contínua à acidez (SCC-4: p<0,05). O recondicionamento em meio neutro reverteu a sensibilidade celular (SCC-4: p>0,05). Concluímos que a acidez extracelular no carcinoma espinocelular bucal aumenta a capacidade de migração, induz o fenótipo de células tronco-tumorais e aumenta a resistência a quimioterápicos. / To expand our knowledge about the biology of oral squamous cell carcinoma is crucial for the development of new therapeutic strategies and to improve the survival of the patients affected by this pathology. Therefore, understanding the contributions of the tumor microenvironment to carcinogenesis is very important. An important feature to be evaluated of the tumor microenvironment is the acidification of the extracellular medium. Considering that acidic pH is related to the greater aggressiveness of the tumor, the aim of this study is to analyze the effects of an acidic microenvironment on the biology of oral squamous cell carcinoma cells. We realized two reviews of the literature, in which the following themes were evaluated: the influence of extracellular acidity on the invasion and migration; and the molecular mechanisms involved in the resistance to chemotherapeutic treatment, induced by the acidity of the tumor microenvironment. These revisions helped to construct the third article of this thesis, which proposed to compare the behavior of squamous cell carcinoma lines (SCC-4 and SCC-9) and keratinocytes (HaCat), cultured under pH 6.8 was compared to cells maintained at pH 7.4. For the statistical analysis, the data distribution was initially performed, followed by the statistical comparison of the groups using, for normal distribution, ANOVA and ANOVA two-way tests. All analysis was performed in the GraphPad Prism 5.0 program and the level of significance considered was p <0.05.After continuous or intermittent exposure to pH 6.8, cell adaptation was assessed by the clonogenic assay. In addition, the migratory capacity of the cells was evaluated by the wound healing and time-lapse assays. The gene expression related to undifferentiation and pluripotency was assessed by real-time PCR analysis of the Bmi-1 and CD44 markers, as well as by the orosphere assay. The resistance of these cell groups to anti-cancer treatment was assessed by the sulforhodamine B cell viability assay after treatment with Cisplatin. We observed that both cell lines changed their morphology to a mesenchymal aspect. When assessed the migratory profile, it was observed that SCC-9 cells showed higher migration capacity after exposure to pH6.8. Increased cell migration may be caused by the induction of the epithelial-mesenchymal transition, as we observed increased N-cadherin (SCC-4:p<0.05) expression concomitant with decreased E-cadherin (SCC-4: p<0.05). Exposure to acidity also led to increased ability to form orospheres on low-attachment dishes, denoting a pluripotent phenotype in both strains (SCC-4: p=0.007/ SCC-9: p= 0.1202). This result was reinforced by increased expression of the CD44 (p= 0.0325) tumor cell marker in the SCC- 4 cells. However, we observed a decrease in the expression of Bmi-1(p=0.0572) in relation to the control. Resistance to Cisplatin increased when cells were continuously exposed to acidity(SCC-4: p<0,05). Neutral reconditioning reversed cell sensitivity (SCC-4: p>0,05). We conclude that extracellular acidity in oral squamous cell carcinoma increases the migration capacity, induces the cancer stem cell phenotype and increases resistance to chemotherapy.

A ocorrência frequente e a alta morbidade e mortalidade do câncer de boca nos cães conferem grande importância ao problema que se configura como relevante questão não só para o monitoramento, mas também para permitir caracterizar populações de risco e otimizar parâmetros que visem a prevenção, proteção e assistência ao paciente. Avaliar o perfil epidemiológico de uma amostra de conveniência de cães diagnosticados com câncer de boca de dois diferentes centros odontológicos e dois diferentes serviços oncológicos, no município de São Paulo entre janeiro de 2010 e dezembro de 2013. Estudo epidemiológico observacional ecológico, retrospectivo e prospectivo, multicêntrico de cães com neoplasia oral, avaliando as variáveis gênero, estado reprodutivo, idade, faixa etária, raça, peso, porte, localização e tamanho da neoformação oral e tipos histológicos mais frequentes e estadiamento clínico. Analisou-se 330 prontuários e os resultados apontam para a maior ocorrência das neoplasias malignas (67%), sendo mais frequente o melanoma (MM), seguida por neoplasias benignas (20%), sendo mais frequente o ameloblastoma (AMB), as demais lesões foram não-neoplásicas. Não houve predileção racial ou sexual, mas os animais intactos tiveram maior chance de acometimento por neoplasia maligna. A média de idade dos cães com neoplasia maligna foi de 11,22 anos e nas benignas 9,53 anos, sendo os animais geriátricos mais afetados. A média de peso para o câncer maligno foi de 17,13kg, tendendo para pequeno e médio porte, e benigno 22,4kg, tendendo para médio e grande porte, e os cães de pequeno porte apresentam maior chance de ocorrência de neoplasias malignas. A localização mais frequente foi a maxila (35,5%), e o tamanho médio das neoformações malignas foi de 3,52cm e as benignas 1,53cm. Dos pacientes com neoplasia maligna os geriátricos apresentam maior chance de morte e o estágio clínico IV foi o mais frequente. O tipo histológico que prevaleceu foi o MM para as neoplasias malignas, nos animais de pequeno e médio porte, e o AMB para as benignas, em médio e grande porte, os pacientes senis e geriátricos são mais acometidos por neoplasia maligna, assim como de pequeno porte e fêmeas castradas, sendo os pacientes geriátricos com maior chance de morte por neoplasia maligna e o estágio IV é o mais comum / The frequent occurrence and high morbidity and lethality of oral cancer in dogs attach great importance to the problem, which constitutes a relevant issue not only for monitoring, but also to allow characterize risk populations and optimize parameters for the prevention, protection and patient care. The aim of this study was to evaluate the epidemiological of a survey convenience sample of dogs diagnosed with oral cancer in two different dental centers and two different cancer services in the city of São Paulo between January 2010 and December 2013. Observational epidemiological ecological, retrospective and prospective and multicenter study with oral cancer dogs, assessing the variables gender, reproductive status, age, life stage, breed, weight, dog size, location and size of the oral tumor and more frequent histological types and clinical staging. Three hundred and third medical records were analyzed and the results point to a higher frequency of malignant neoplasms (67%), the most frequent malignant melanoma (MM), followed by benign neoplasms (20%), the most frequent ameloblastoma (AMB) other injuries were non-neoplastic. There was no breed or gender preference, but the unneutered dogs were more likely to involvement by malignancy. The average age of dogs with malignant neoplasm was 11.22 years and 9.53 years in benign, geriatric animals were the most affected. Mean weight for malignant cancer was 17,13kg, tending to small and medium size dog, and benign 22,4kg, tending to medium and large, and small dogs have higher odds of occurrence of malignant tumor. The most frequent site is the jaw (35.5%) and the average size of neoformation was 3,52cm malignant and benign 1,53cm. Of patients with malignant neoplasm, geriatric have higher odds of death and the clinical stage IV was the most frequent. The histological type that prevailed was the MM for malignant neoplasms in small and medium-sized animals, and the AMB for benign in medium and large, and the senile and geriatric patients are more affected by malignant tumor, as well as small and spayed females, geriatric patients at higher risk of death from malignant tumor and stage IV is the most common

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Os carcinomas espinocelulares sÃo responsÃveis por mais de 90% das neoplasias malignas que ocorrem na mucosa bucal e tÃm como principal fator de risco o uso crÃnico do tabaco sob suas diversas formas. Comprovadamente o tabaco industrializado contÃm inÃmeros carcinÃgenos capazes de causar dano cromossÃmico. Para detectar o dano inicial na mucosa bucal de fumantes foi utilizado o ensaio do MicronÃcleo (MN) em cÃlulas esfoliadas por ser um teste simples, rÃpido, de baixo custo e que utiliza tÃcnica nÃo invasiva. Com o objetivo de estabelecer um teste de triagem para monitorar pacientes fumantes sob risco de desenvolver carcinoma bucal foram avaliadas as freqÃÃncias dos micronÃcleos e de outras alteraÃÃes nucleares em esfregaÃos de mucosa bucal, utilizando o protocolo adaptado ao de Tolbert et al. (1991). Foram analisados os micronÃcleos (MNs), as binucleaÃÃes e outras alteraÃÃes nucleares indicativas de citotoxicidade e genotoxicidade como cariorrÃxis, cariÃlise, cromatina condensada, picnose, falso micronÃcleo, broken-eggs e vacÃolos nucleares. Foi realizada uma comparaÃÃo intra-individual da regiÃo perifÃrica ao tumor (L) e da mucosa do lado oposto (LOL) dos pacientes com carcinoma e outra comparaÃÃo caracterizada como interindividual, pois comparou indivÃduos sadios (controle) e pacientes portadores de carcinomas bucais. Observou-se que a mucosa do lado oposto à lesÃo (LOL) possui alteraÃÃes nucleares que a caracterizam como mucosa nÃo sadia e que a alteraÃÃo tipo cariorrÃxis demonstrou ser melhor biomarcador para o LOL. AtravÃs da curva âROCâ foram verificados os valores de prediÃÃo das alteraÃÃes nucleares estatisticamente significativas resultantes da comparaÃÃo entre sadios e portadores de cÃncer bucal. A alteraÃÃo nuclear cariorrÃxis foi a que obteve maior sensibilidade (80%) e especificidade (80%). A associaÃÃo entre as alteraÃÃes nucleares preditoras de lesÃo maligna e fatores de risco demonstrou resultados mais fortemente significativos para o tabagismo (p<0,001). Neste estudo os micronÃcleos e as alteraÃÃes nucleares cariorrÃxis, cariÃlise, binucleaÃÃes e vacÃolos nucleares foram vÃlidas como preditoras para carcinoma bucal. / Squamous cells carcinomas are responsible for more than 90% of all cancer in the mucosa membranes of the mouth and the principal risk factor responsible is tobacco use. Certainly industrialized tobacco contains a lot of carcinogens able to cause chromosome breakage. The Micronucleus Assay in exfoliated cells was used to detect this initial breakage. It is simple, practical, inexpensive and non invasive technique. The objective of this study is to establish a trial text to monitoring smokers with risk to develop oral carcinoma. Epithelial smears was examined following the criteria described by Tolbert et al. (1991), micronucleus, binucleation and the cells presenting degenerative phenomena, indicative of cytotoxicity and genotoxicity sush as karyorrhexis, karyolysis, pycnosis, condensed cromatin, buds, broken-eggs, and nuclear vacuoles were analyzed. An intra-individual comparison was realized in patients with cancer (periphery of malign lesion and opposite side of lesion) another comparison characterized as interidividual compared healthy people (control group) and patients with oral carcinomas. The study showed that the side opposite of lesion (LOL) is non health mucosa and karyorrhexis is the best biomarker in this side. The specificity and sensibility of nuclear alterations was analyzed using ROC curve. The results show that karyorrhexis is the better specificity (80%) and sensibility (80%) all of them. The association between the nuclear alterations and risk factors show a higher significant statistical for tobacco use (p<0,001). In this study micronucleus, karyorrhexis, karyolysis, binucleation and nuclear vacuoles are valid to predict oral carcinoma.

A carcinogênese oral é um processo multifásico, onde componentes genéticos levam a desregulação de vias de sinalização celular que controlam funções celulares básicas, como divisão, diferenciação e morte celular. Uma das maneiras de compreender a natureza biológica dos cânceres, além do curso clínico, é através do entendimento do processo de progressão e metástase destas neoplasias. Este estudo teve como objetivo avaliar a participação da proteína Twist no desenvolvimento e progressão dos carcinomas epidermóides orais. Com tal proposta, também foi avaliada a participação das proteínas caderina-E e p-Akt, e sua possível interação com Twist no processo de carcinogênese oral. O trabalho em questão analisou a expressão imuno-histoquímica destas proteínas em 30 espécimes de displasia oral, 20 de carcinoma epidermóide oral e 10 de mucosa oral normal, e avaliou também a possível inter-relação dessas proteínas em linhagens derivadas de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço por meio dos ensaios de Western Blotting e imunofluorescência. Os resultados deste estudo demonstraram uma relação inversamente proporcional entre Twist e caderina-E desde os estágios mais precoces da carcinogênese oral. Tal afirmação baseou-se na presença de diferenças significantes entre a expressão imuno-histoquímica de Twist e Caderina-E na amostras de epitélio oral, epitélio displásico e nos espécimes de carcinoma epidermóide oral. Adicionalmente, foi observada a relação inversa entre Twist e a Caderina-E nas linhagens de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço, sendo este evento constatado pelo decréscimo nos níveis protéicos da Caderina-E frente a uma elevação de Twist. Estes resultados sugerem um importante papel de Twist na progressão do carcinoma epidermóide oral, e juntamente com a Caderina-E, pode representar um relevante marcador biológico do câncer oral. / The oral carcinogenesis is a multi-stage process, where genetic components leads to deregulation of cell signaling pathways that control basic cellular functions such as division, differentiation and cell death. One way to understand the biological nature of cancers, besides the clinical course, is through understanding the process of progression and metastasis of these neoplasms. This study aimed to evaluate the role of Twist protein in the development and progression of oral squamous cell carcinomas. With this proposal, was also evaluated the involvement of E-cadherin and p-Akt proteins, and its possible interaction with Twist in the process of oral carcinogenesis. The work in question examined the immunohistochemical expression of these proteins in 30 specimens of oral dysplasia, 20 oral squamous cell carcinoma and 10 normal oral mucosa, and also evaluated the possible interrelationship of these proteins in lines derived from squamous cell carcinoma of head and neck by means of Western blotting assays and immunofluorescence. The results of this study showed an inverse relationship between Twist and E-cadherin since the earliest stages of oral carcinogenesis. These results were based on the presence of significant differences between the immunohistochemical expression of Twist and ECadherin in samples of oral epithelium, dysplastic epithelium and in specimens of oral squamous cell carcinoma. In addition, we observed the inverse relationship between Twist and E-Cadherin in the lines of squamous cell carcinoma of head and neck; this event was evidenced by the decrease in protein levels of E-Cadherin forward to a high of Twist. These results suggest an important role of Twist in the progression of oral squamous cell carcinoma, and along with E-cadherin may represent a relevant biomarker of oral cancer.