Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:48:40Z : No. of bitstreams: 1 000830242_20160627.pdf: 61065 bytes, checksum: fdcafce30d5addb2d0e1ddf71f1589de (MD5) Bitstreams deleted on 2016-06-27T11:55:31Z: 000830242_20160627.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-27T11:56:11Z : No. of bitstreams: 1 000830242.pdf: 1630719 bytes, checksum: 3bcc71c070b80050d03529c7d3469985 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O hambúrguer é um produto cárneo industrializado e potencial veículo de bactérias produtoras ou não de toxinas nas diversas fases de seu processamento, desde sua origem até as fases de transformação, armazenagem, transporte e distribuição para o consumo. Além disso, seus requisitos de composição são susceptíveis à fraude pelo uso excessivo de extensores protéicos. Estes ingredientes auxiliam na diminuição nos custos de formulação dos produtos finais e maximizam os lucros de indústrias fraudulentas. A fiscalização pelos órgãos de vigilância é dificultada pela carência de metodologias analíticas apropriadas. Dentro deste contexto, tornase necessária a avaliação do aspecto higiênico-sanitário dos hambúrgueres através das análises microbiológicas e a determinação e quantificação da proteína de soja. Foram analisadas 110 amostras de hambúrgueres de carne bovina de 11 marcas comerciais brasileiras através da técnica dos isótopos estáveis de Nitrogênio -15 e Carbono-13 e segundo a metodologia microbiológica descrita pela Instrução Normativa n° 62 de 26 de agosto de 2003. Todas as 11 marcas comerciais brasileiras apresentaram contagem bacteriana dentro do limite (5x103 UFC/g) para Coliformes a 45°C, enquanto os valores para Staphylococcus coagulase positiva estavam acima dos padrões permitidos (5x103 UFC/g) na marca H (amostras 1 e 7). As marcas B (amostra 5), D (amostra 5), E (amostra 5) e G (amostra 4) também apresentaram contagens acima do estipulado (3x103 UFC/g) para Clostridium sulfito redutor a 46°C e a amostra 6 da marca L foi positiva para Salmonella spp. Apenas 3 amostras da marca G encontraram-se dentro dos 4% de adição de proteína não cárnica estipulados pela IN n° 20 de 31/07/2000. Todas as outras 107 amostras das 11 marcas comerciais burlaram a legislação específica em vigor / The burger is a manufactured meat product and potential vehicle of bacteria producers or not of toxins in various stages of processing, from its origin to the stage of transformation, storage, transport and distribution to consumption. Moreover, their composition requirements are susceptible to fraud by excessive use of protein extenders. These ingredients help in reducing the cost of formulation of the final products and maximize profits of fraudulent industries. The supervisory agencies monitoring is hindered by the lack of appropriate analytical methodologies. Within this context, it is necessary to evaluate the hygienic- sanitary aspects of burgers through microbiological analysis and the determination and quantification of soy protein. Were analyzed 110 samples of beef hamburgers of 11 brazilian trademarks by the technique of stable isotopes of Nitrogen-15 and Carbon -13 and second microbiological methodology described by Normative Instruction n° 62 of August 26, 2003. All 11 brazilian trademarks presented bacterial counts within the limit (5x103 CFU/g) for coliforms at 45°C , while the values for Staphylococcus coagulase positive were above the allowed patterns (5x103 CFU/g) in brands H (samples 1 and 7). Brands B (sample 5) , D (sample 5) , E (sample 5) and G (sample 4) also had scores above the stipulated (3x103 CFU/g) for Clostridium sulphite reducing to 46°C and sample 6 of brand L was positive for Salmonella spp. Only 3 samples of G brand were within 4% addition of non-meat protein stipulated by IN 20 07/31/2000. All other 107 samples from 11 trademarks cheated the specific legislation

No Brasil, a procura dos setores agroindustriais pela certificação relacionada à origem geográfica vem aumentando significativamente. Neste estudo é apresentada uma revisão de literatura que versa sobre a qualidade em alimentos, em vinhos e em vinhos com indicação geográfica (IG), além de uma breve abordagem das indicações geográficas no Brasil e no mundo. Como método de trabalho, realizou-se uma survey entre consumidores integrantes de confrarias de vinhos brasileiras a fim de identificar a percepção dos mesmos com relação às indicações geográficas e melhorar a compreensão deste mecanismo como ferramenta estratégica na diferenciação de produtos. Após análise dos resultados obtidos, pode-se constatar, no estudo, que o consumidor confrade percebe a IG em vinhos como um fator de qualidade muito relacionado à tipicidade do produto, à região e ao país de origem, mas não é o fator que mais influencia na decisão de compra. Ainda, na percepção dos confrades brasileiros entrevistados, as IGs estrangeiras são mais confiáveis e mais conhecidas do que as IGs nacionais. Por fim, entende-se que os vinhos de IG devam ser apresentados como uma opção de vinho fino de alta qualidade, que inspire a confiança do consumidor e que traga consigo tipicidade, tradição e história da região produtora. / In Brazil, the search for the certification related to the geographical origin by agribusiness has been increasing significantly. In this paper, we present a revision of the literature which deals with food quality, wine and wine with Geographical Indication (GI), besides a brief approach on the Geographical Indications (GIs) in Brazil and over the world. As a method of work, we conducted a survey among consumers that were members of Brazilian Wine Associations in order to identify their perception towards the Geographical Indications (GIs) for a better comprehension of this device as a strategic tool in distinction of products. We can state in this study that the associate consumer sees the GI in wines as a quality agent very much related to the uniqueness of the product, to the region or country of origin, but not as the agent that will mostly influence in the final purchase decision. Still, according to the interviewed Brazilian associates’ perception, the foreign GIs are more reliable than the national ones and fewer consumers really know about the national GIs when compared to the foreign ones. We understand, after all, that wines with GI have to be presented as an option of high quality fine wine, the one which inspires the consumer’s confidence and brings out the uniqueness, tradition and history of the producing region.

Submitted by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2017-07-31T17:54:02Z No. of bitstreams: 1 DissHSO.pdf: 2714116 bytes, checksum: 7774116b85a8478f74c0bfa83dbb1795 (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2017-07-31T17:54:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissHSO.pdf: 2714116 bytes, checksum: 7774116b85a8478f74c0bfa83dbb1795 (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2017-07-31T17:54:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissHSO.pdf: 2714116 bytes, checksum: 7774116b85a8478f74c0bfa83dbb1795 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-31T17:54:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissHSO.pdf: 2714116 bytes, checksum: 7774116b85a8478f74c0bfa83dbb1795 (MD5) Previous issue date: 2017-03-29 / Não recebi financiamento / The present dissertation aims to analyze the relationship between the organizational structure of the Partido do Socialismo e Liberdade (PSOL) and its characteristics. It starts from the premise that the origin of the party focuses directly on the format and organizational aspects that will build it. It seeks to identify the influence of genetic elements of the PSOL, which is born of a kind of internal rupture of Partido dos Trabalhadores (PT) parliamentarians, both in its development and in its political orientation. The específical hypothesis that there is a concentration of power in the party (parliamentary) and organizational arena of the party, in which the elective parliamentarians decide by the caption. Complements the organizational analysis complements the examination of the performance levels of the PSOL and the identification of ideological elements in its parliamentary action with the objective of exploring aspects originating from the party in its development. / A presente dissertação tem por objetivo analisar a relação entre a estrutura organizacional do Partido do Socialismo e Liberdade (PSOL) e suas características originárias. Parte-se da premissa de que a origem do partido incide diretamente sobre o formato organizativo que esse assumirá. Busca-se identificar a influência dos elementos genéticos do PSOL, que nasce a partir de uma ruptura interna de parlamentares do Partido dos Trabalhadores (PT), no desenvolvimento de sua trajetória e diretriz política. Devido à formação do PSOL, trabalha-se com a hipótese específica de que há uma concentração de poder entre a arena pública (parlamentar) e organizativa do partido, no qual parlamentares com cargos eletivos vigentes também integrariam cargos dirigentes na legenda. Complementa-se a análise organizativa, o exame do desempenho eleitoral do PSOL e a identificação de elementos ideológicos em sua atuação parlamentar com objetivo de explorar aspectos originários do partido em seu desenvolvimento.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-03-29Bitstream added on 2014-06-13T20:31:04Z : No. of bitstreams: 1 smaniotto_ei_me_mar.pdf: 1493077 bytes, checksum: 28d1ef95547a204041c45d7975dbe100 (MD5) / Este trabalho trata do conceito do outro enquanto um termo antropológico. Seu principal objetivo é mostrar a absorção e uso deste conceito na obra O Dr. Benignus de Augusto Emílio Zaluar (1826-1882) num momento em que a repercussão do pensamento europeu era absolvida por escritores e intelectuais brasileiros no século XIX, especialmente a daquele pensamento que trata da ciência das diferenças entre os homens, isto é, do outro, do alienígena. Analisando a obra O Dr. Benignus, observamos as formas distintas com que o conceito do outro foi interpretado pelo escritor brasileiro. Pelo menos três formas diferentes foram encontradas na obra para representar o conceito do outro: a experiência do personagem William River antropólogo que não consegue sair do mundo do outro; a defesa de uma teoria monogenista autoctonista que assimila o nativo americano ao mito do Brasil como país onde a humanidade teve sua origem tornando este outro parte da cultura dominante; e a representação do outro civilizado no personagem do alienígena. Através da revisão da literatura especializada, seja em antropologia, história da ciência ou ficção, apresentamos uma reconstrução histórica do pensamento de Augusto Emílio Zaluar, delimitando seu papel na divulgação da nascente ciência das diferenças entre os homens e dos usos que ele dá ao conceito antropológico do outro . Para além de uma discussão no campo da história da ciência das diferenças entre os homens, nossa análise nos levou a tecer uma linha entre a representação do outro que Zaluar faz na forma com que apresenta o alienígena como personagem de sua ficção, e a forma com que este ainda permanece como um mito cultural na ficção científica brasileira moderna, identificando tanto a continuidade quanto a superação da forma com que o outro é representado na literatura brasileira, sempre pela perspectiva da antropologia. / This paper discusses the concept of other as an anthropological term. Its main objective is to show the assimilation and the use of this concept in O Dr. Benignus by Augusto Emílio Zaluar (1826-1882) in times when the repercussion of European thoughts was absorbed by Brazilian writers and intellectuals in the 19th century, specially the thought about de science of difference between men, i.e. the other, the alien. Analyzing the book O Dr. Benignus, we could observe the distinct forms that the Brazilian writer interpreted the concept of other. At least three different forms were found in the book to represent the concept of other: the experience of William River's character, the anthropologist, who can't leave the other's world; the defense of a autochthonist monogenist theory that assimilates the Native American to the myth of Brazil as a country where humanity had its origin, turning this other a part of the dominating culture; and the representation of the civilized other in the alien character. Through the review of specialized literature, be it in anthropology, science history or fiction, we present a historical reconstruction of the thought of Augusto Emílio Zaluar, delimiting his role in the disclosure of the beginning science of the differences between men and how they use the anthropological concept of other. To go beyond the discussion of the differences between men in the History of Science, our analysis made us draw a line from Zaluar's representation of other as in how he presents the alien as a character in his fiction to the form as it continues to be a cultural myth in modern Brazilian science fiction, identifying the continuity as well as the overcoming of the form the other is represented in the Brazilian literature, always in the anthropology perspective.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 662232 bytes, checksum: af7e8ce650eb7e98bfec292cda8d020b (MD5) Previous issue date: 2008-12-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The quality control in food industries is a global requirement, and in chicken slaughtering is conducted primarily through monitoring of hygiene indicator microorganisms and pathogens in specific processing steps. This need requires the development and application of rapid and reliable methods to be used in quality control. This study evaluated the differences in the microbiological contamination of chicken carcasses obtained at different processing steps from two distinct slaughterhouses (Ab1, classified as large-scale, and Ab2, small-scale). Still, a PCR methodology for detection of Salmonella spp. was compared to the conventional method (CM). Surface samples of chicken carcasses were collected in the following sequential steps: A) immediately before evisceration, B) after evisceration, C) after showering and D) after a cooling tank (chiller). All samples were tested for microbiological hygiene indicators (mesophilic aerobes - MA, total coliforms - TC, thermotolerant coliforms - TTC and Escherichia coli - EC) and Salmonella spp. In addition, Salmonella spp. was detected by PCR directly from the sample (PCR-S), from the pre-enrichment broth immediately after inoculation (PCR-PE) and from pre- enrichment broth after incubation (PCR-PEI). No significant differences were observed between the frequencies of Salmonella spp. obtained at different steps in Ab1 and Ab2 (P > 0.05). Ab2 showed higher levels of microbiological contamination in different steps of processing when compared to Ab1, for MA (in B and D steps), TC and TTC (D step) and EC (all steps) (P < 0.05). Regarding PCR, PCR-PEI showed higher sensitivity when compared to PCR-S and PCR-PE, despite the absence of significant difference when compared to the CM (P > 0.05). The results indicate the significance of different processing steps during slaughter in the microbiological contamination of chicken carcasses, and the necessity of development and evaluation of alternative methods for Salmonella spp. detection. / O controle de qualidade em indústrias alimentícias é uma exigência mundial, e em abatedouros de aves é conduzido basicamente pelo monitoramento de microrganismos indicadores de higiene e patógenos em pontos específicos da linha de processamento. Essa necessidade demanda o desenvolvimento e aplicação de metodologias rápidas e confiáveis a fim de serem utilizadas no controle de qualidade. Neste estudo foram avaliadas as diferenças na contaminação microbiana em carcaças de frangos obtidas em diferentes etapas do processamento em dois abatedouros (Ab1, classificados como de grande porte e Ab2, de pequeno porte). Ainda, uma metodologia de reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção de Salmonella spp. foi comparada com a metodologia convencional (MC). Amostras superficiais de carcaças de frangos foram coletadas nas seguintes etapas: A) imediatamente antes da evisceração, B) após a evisceração, C) após o chuveiro, e D) após o tanque de resfriamento (chiller). Todas as amostras coletadas foram submetidas à pesquisa de bactérias indicadoras de higiene (aeróbios mesófilos - AM, coliformes totais - CT, coliformes termotolerantes - CTT e Escherichia coli - EC) e Salmonella spp. A pesquisa de Salmonella spp. por PCR foi realizada diretamente das amostras (PCR-A), do caldo do pré- enriquecimento recém-semeado (PCR-PE) e do caldo de pré- enriquecimento após incubação (PCR-PEI). Não foram observadas diferenças significativas entre as freqüências de Salmonella spp. obtidas pela MC em diferentes etapas do processamento em Ab1 e Ab2 (P > 0,05). Verificou-se maior contaminação em Ab2 em relação a Ab1 por AM (nas etapas B e D), CT e CTT (etapa D) e EC (todas as etapas) (P < 0,05). Em relação à metodologia de PCR avaliada, verificou-se maior sensibilidade da PCR-PEI em relação às demais variações (PCRA e PCR-PE), porém não se constatou diferença significativa com a MC (P > 0,05). Os resultados obtidos indicam a importância de diferentes etapas do processamento na contaminação microbiana de carcaças de frangos em diferentes sistemas de abate e a necessidade de avaliação de metodologias alternativas a serem utilizadas na pesquisa de Salmonella spp.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 187624 bytes, checksum: 6b72edf1886c01d3b2670897f7291f3a (MD5) Previous issue date: 2004-02-18 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The purpose of this work was to evaluate the contamination of swine carcasses from samples of surfaces swabling and swine tonsils with Yersinia enterocolitica in inspectioned and not inspectioned places of swine slaughter and compare the conventional microbiological analyses and Polymerase Chain Reaction - PCR taking as reference its the effectiveness, quickness, reagents cost, and type of samples used, as subsidy to the HACCP system. In the inspectioned place slaughter the samples were collected in a inspectioned slaughterhouse in Minas Gerais, Brazil, were constituted of surfaces swabbling of 120 carcasses for conventional microbiologic analyses, thirty samples were collected in the following processing collecting point: after scalding/dehairing, immediately before evisceration, after evisceration/splitting and after 24 to 48 hours of refrigeration. In the not inspectioned places the samples were collected in the end of slaughter and were constituted by 30 carcasses and 30 swine tonsils and were destinated to conventional microbiological analyses and PCR. When the conventional microbiologic analyses were used both in inspectioned and not inspectioned places contaminated samples were not found. However, when the PCR techinc was used 73% of the not inspectioned swine showed to be positives to Y. enterocolitica. This contamination was of 40% in the carcasses and 43% in the tonsils; 10% of this animals presented samples contaminated with Y. enterocolitica. Beside its higher apparent sensibility, the PCR showed to be a faster technic and with lower cost than the conventional microbiologic analyses. Both the tonsils and the carcasses swabbling are viable alternatives for samples collection for the Y. enterocolitica determination in the slaughtered swine. Y. enterocolitica can be considered an microbiological hazard that happens in the slaughter process. The application of the GMP and the HACCP with the identification of the Critical Control Points (CCPs) can be a good alternative to the control of Y. enterocolitica in the swine slaughter. / Foi objetivo deste trabalho avaliar a contaminação de carcaças suínas a partir de amostras de swab de superfície e de tonsilas suínas por Yersinia enterocolitica em ambientes de abate de suínos inspecionados e não inspecionados e comparar as técnicas de análise microbiológica convencional e Reação de Polimerase em Cadeia - PCR quanto à eficácia, rapidez, custo dos reagentes e tipo de amostra utilizada. No ambiente de abate inspecionado, as amostras coletadas em um matadouro-frigorífico de Minas Gerais, Brasil, se constituíram de esfregaços superficiais de 120 carcaças para análise microbiológica convencional, sendo 3 0 amostras nos seguintes pontos de coleta: após a depilação, antes da evisceração, após a evisceração/serragem e após 24 a 48 horas de refrigeração. No ambiente não inspecionado as amostras foram coletadas ao final do abate, cosntituindo-se de 30 carcaças e 30 tonsilas de suínos e se destinaram à análise microbiológica convencional e pela PCR. Nenhuma amostra apresentou contaminação por Yersinia quando se empregou a técnica microbiológica convencional nos matadouros inspecionados ou não. Por outro lado, quando se utilizou a técnica de PCR, 73% dos suínos não inspecionados apresentaram-se contaminados com Y. enterocolitica. Esta contaminação foi de 40% nas carcaças e 43% nas tonsilas; sendo que dessas últimas, 10% possuía amostras de Y. enterocolitica patogênica. Além da aparente maior sensibilidade, o PCR ainda mostrou ser uma técnica mais rápida e de menor custo que a análise microbiológica convencional. Tanto as tonsilas quanto os esfregaços de carcaças são alternativas viáveis para a coleta de amostras com vistas à determinação de Y. enterocolitica em suínos abatidos. Y. enterocolitica pode ser considerada um perigo microbiológico que ocorre ao longo do processo de abate. A aplicação das Boas Práticas de Fabricação (BPF) e do APPCC com a identificação de Pontos Críticos de Controle (PCCs) pode ser uma boa alternativa para o controle da Y. enterocolitica no abate de suínos.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2838276 bytes, checksum: ab260e36167467b459860c7472987dd6 (MD5) Previous issue date: 2012-05-29 / The bovine cysticercosis is a zoonotic disease that causes damage both in terms of health and in terms of economy. This research was developed in order to better understand the anatomical and microscopic characteristics related to the implantation of cysticerci and the immune evolution of the disease, and evaluate the performance of the immunoassay ELISA in the diagnosis of nine experimentally infected animals by oral administration of Taenia saginata eggs. Field work with the animals included the monthly collection of blood every 30 days, being that from 120 days post-infection an animal was slaugthered every 30 days to perform the anatomic-pathological examination and proceed with the collection of cysticerci. The samples from naturally infected animals were obtained by collecting in commercial slaughterhouse. Regarding muscular location of cysticercus in Group 1, the sites routinely inspected with predominance of occurrence were the heart (37.7%), head muscles (17.1%) and the tongue (2.3%). In relation to the assessed commercial cuts, 8.2% of cysticerci were found in the sparerib, 6.6% in the shoulder, 6.2% in the tenderloin and 5.8 in the rump. Other not-routinely inspected tissues that presented cysticerci were the diaphragm, the liver and the esophagus with 2.7%, 12.0% and 1.2% of the total cysticerci. Not viable cysticercus was the majority in head muscles (77.3%), followed by 76.3% in heart muscle and 71.0% in the liver and tongue (50%). Concerning viability, liver presented 87.5% of the not viable cysticerci, followed by the tongue 66.7%, and the heart with 63.2%, but the highest frequency of viable cysticerci was found in the head muscles (68.3%). Of the nine animals studied, five had the kinetics of antibody production against the cysticerci in a similar way when measured the production of antibodies of the IgM and IgG classes, once the peak of antibody production occurred in the period of 0-30 days post-infection followed by a natural decline and maintained detectable until the end of the study. However, the other two groups, each containing two animals, showed the kinetics of antibody production different from most animals, being that one group had a delayed response to the presence of cysticerci and the other group showed no immune response against antigens secreted by cysticerci. For the production of IgG1, it was possible to detect increased levels of antibodies from 30 days post-infection, having the production peak at 270 days, and IgG2 at 60 days. Regarding the cellular response observed against the cysticerci, it was possible to observe that in the case of viable cysticerci, inflammatory cells were present in the major part; and in the case of unviable cysticerci, the presence of repairing tissue cells, being also correlated the amount of calcareous corpuscles with the parasite's stage of death. With regard to the performance of the ELISA test against experimentally and naturally infected animals using a cut-off 1 and 2 added with 2 standard-deviation (SD), it was of 12% and 24.4%, respectively; and when using the cut-off 1 and 2 added with 3 SD the test sensitivity was at 1.99% and 14.4%, respectively. As for the samples from experimentally infected animals using the cut point 1 and 2 added with 2 SD the sensitivity was at 55.9% and 92.5%; and adding 3 SD the values found were 31.2% and 86%, respectively; the specificity of the test in all situations tested was at 100%. The combination of these results should be considered for diagnosis of bovine cysticercosis through the ELISA test, suggesting its use in combination with the anatomic-pathological test routinely performed in slaughterhouses. / A cisticercose bovina é uma doença de caráter zoonótico que acarreta prejuízos tanto de ordem sanitária quanto de ordem econômica. Essa pesquisa foi desenvolvida com o objetivo de conhecer melhor as características macroscópicas e microscópicas relacionadas à implantação dos cisticercos e a evolução imunológica da doença, bem como avaliar o desempenho do imunoensaio ELISA no diagnóstico de bovinos com infecção natural e experimental, através da administração oral de ovos de Taenia saginata. Os trabalhos de campo com os nove animais infectados experimentalmente envolveram coleta mensal de sangue nos intervalos de 30 dias, sendo que a partir de 120 dias pós-infecção um animal era abatido a cada 30 dias para realizar o exame anátomo-patológico e proceder com a coleta de cisticercos. As amostras dos animais naturalmente infectados foram obtidas através da coleta em matadouro-frigorífico comercial. Com relação à localização muscular dos cisticercos no grupo 1 (animais experimentalmente infectados), os sítios inspecionados rotineiramente predominantes de ocorrência foram o coração (37,7%), músculos mastigatórios (17,1%) e língua (2,3%). Em relação aos cortes comerciais estudados, foram encontrados os valores de 8,2% de cisticercos no acém, 6,6% na paleta, 6,2% no contra-filé e 5,8% na alcatra. Os outros tecidos não inspecionados rotineiramente que apresentaram cisticercos foram o diafragma, fígado e o esôfago, com 2,7%, 12,0% e 1,2% dos cisticercos totais. Houve predominância de cisticercos inviáveis nos músculos mastigatórios (77,3%), seguidos de 76,3% na musculatura do coração e 71,0% do fígado e na língua (50%). Os cisticercos viáveis predominaram na alcatra (80,0%), diafragma (71,4%) e esôfago (66,7%). Nos sítios de predileção dos animais naturalmente infectados, foram encontrados 61,78% dos cisticercos totais no coração, seguido dos músculos mastigatórios (38,21%) e fígado (10,19%). Em relação à viabilidade, o fígado apresentou 87,5% de cisticercos inviáveis, seguidos da língua com 66,7%, coração 63,2%, entretanto nos tecidos mastigatórios foi encontrada a maior frequência de cisticercos viáveis (68,3%). Dos nove animais estudados, cinco apresentaram a cinética de produção de anticorpos contra os cisticercos de forma semelhante quando mensurados a produção de anticorpos da classe IgM e IgG, constituindo-se o grupo 1. O pico de produção de anticorpos do grupo 1 ocorreu no período de 0-30 dias pós-infecção seguido de um declínio natural, mantendo-se detectável até o final do estudo, no entanto os outros dois grupos contendo dois animais cada apresentaram a cinética de produção de anticorpos diferente do grupo 1, sendo que, o grupo 2 não apresentou resposta imunológica contra os antígenos secretados pelos cisticercos e o grupo 3 apresentou resposta tardia à presença dos cisticercos. Em relação à produção média de IgG1 para todos os grupos, foi possível detectar elevação dos níveis de anticorpos a partir de 30 dias pós-infecção, tendo-se o pico de produção aos 270 dias e IgG2 aos 60 dias. Já em relação à resposta celular hospedeiro-parasito, foi possível observar que no caso de cisticercos viáveis estavam presentes em sua maioria células inflamatórias, e no caso de cisticercos inviáveis a presença de células reparadoras de tecido, sendo também correlacionada a quantidade de corpúsculos calcáreos com o estádio de morte do parasito. Com relação ao desempenho do teste ELISA frente a animais infectados naturalmente e experimentalmente utilizando o ponto de corte 1 (calculado a partir de amostras de animais negativos para a cisticercose durante inspeção de rotina em matadouro-frigorífico) e ponto de corte 2 (amostras de animais negativos para a cisticercose criados em isolamento) adicionados de 2 desvios-padrão (SD), a sensibilidade do teste foi de 12% e 24,4%. Ao utilizar o ponto de corte 1 e 2 adicionados de 3 SD a sensibilidade ficou em 1,99% e 14,4%, respectivamente. Já para as amostras de animais experimentalmente infectados utilizando o ponto de corte 1 e 2 adicionados de 2 SD a sensibilidade ficou em 55,9% e 92,5% e, adicionando 3 SD foram encontrados os valores de 31,2% e 86%. A especificidade do teste em todas as situações testadas ficou em 100%. A combinação desses resultados deve ser valorizada no diagnóstico da cisticercose bovina por meio do teste ELISA sugerindo sua utilização em associação com o teste anátomo-patológico realizado rotineiramente em matadouros-frigoríficos.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 859271 bytes, checksum: bc073f10b3e793f3a635f6735a9b85b7 (MD5) Previous issue date: 2012-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The application of refrigeration as a tool to preserve the microbiological quality of goat milk during storage and transportation determined the selection of a microbiota typically psychrotrophic in this product. Psychrotrophic microorganisms are potential producers of proteolytic enzymes, usually characterized by being heat resistant and responsible for the deterioration of milk casein even after heat treatments commonlymused at dairies, such as pasteurization and ultra-high-temperature. Pseudomonas spp. are considered the main psychrotrophic and proteolytic microorganisms present in milk. This study aimed to evaluate the microbiological quality of goat milk, obtain autochthonous Pseudomonas spp. isolates of this product and characterize their proteolytic activity. Twelve farms with activity of dairy goat were selected in regions of Muriaé and Viçosa, Minas Gerais, of which 61 samples of goat milk were collected and subjected to microbiological analysis for mesophilic aerobes counts, enterobacteriaceae, total coliforms, Escherichia coli, and proteolytic psychrotrophs, and estimatives of total and proteolytic Pseudomonas. The mean counts obtained for the samples were: 5.04 log CFU/mL for mesophilic aerobes, 3.34 log CFU/mL for enterobacteriaceae, 2.85 log CFU/mL for total coliforms, 0.22 log CFU/ml for E. coli, 3.62 log CFU/mL for total psychrotrophs, 2.73 log CFU/mL for proteolytic psychrotrophs, 3.87 log CFU/mL for Pseudomonas, and 3.43 log CFU/mL for proteolytic Pseudomonas. Although the average of mesophilic aerobes was below the limit recommended by the present Brazilian legislation (5.70 log CFU/mL), the samples of goat milk showed high counts of hygiene indicator microorganisms, which shows inadequate hygienic procedures during the different stages of production and storage. In 22 samples of raw milk the counts of proteolytic psychrotrophs accounted for over 50% of the counts of psychrotrophic, indicating the proteolytic potential of this group in goat milk. The same relationship was observed concerning the presence of proteolytic activity of Pseudomonas spp. which in 27 samples this ratio was greater than 50% of the estimated total counts of Pseudomonas. Considering the plates used for enumeration of Pseudomonas, 496 colonies that showed proteolytic activity were selected, purified and the cultures obtained were subjected to the following tests for preliminary identification:morphology by Gram staining, oxidase and glucose fermentation. Based on these results, 107 isolates were initially identified as Pseudomonas spp., and subjected to rep-PCR to characterize their genetic profiles. Considering similarity rates between 80 and 85%, 33 different genetic profiles were characterized; 36 isolates showed no genetic profile with the rep-PCR protocol used. The isolates were also subjected to PCR for identification in species level with specific primers for P. aeruginosa (38 isolates identified) and P. fluorescens (4 isolates); 61 isolates showed amplification products for both reactions, and 4 for none, and were considered as Pseudomonas spp. based on the laboratory tests during screening. All isolates were subjected to PCR for detection of the apr gene, responsible for encoding the alkaline metalloprotease enzyme, identifying 41 (38.3%) positives. Even isolates that showed no apr gene were capable of producing proteolytic enzymes at 7, 25 or 35 °C; all isolates were able to produce proteases at 25 °C, 72 at 7° and 85 at 35°C. The results made it possible to determine hygienic shortcomings in the initial stages of the production chain of goat milk, besides the relevant participation of psychrotrophic and proteolytic microorganisms in the microbiota of this product. The proteolytic activity of Pseudomonas spp. isolates of goat milk was characterized due to the presence of the apr gene and the proteolytic activity at different incubation temperatures. / A aplicação da refrigeração como ferramenta para conservação da qualidade microbiológica do leite caprino durante a estocagem e transporte determinou a seleção de uma microbiota tipicamente psicrotrófica nesse produto. Micro-organismos psicrotróficos são potenciais produtores de enzimas proteolíticas, caracterizadas usualmente por serem termo-resistentes, e responsáveis pela deterioração da caseína do leite mesmo após os tratamentos térmicos mais utilizados em laticínios, como a pasteurização e a ultra-alta-temperatura. Pseudomonas spp. são considerados os principais micro-organismos psicrotróficos e proteolíticos presentes em leite. O presente estudo teve como objetivos avaliar a qualidade microbiológica de leite de cabra, obter isolados de Pseudomonas spp. autóctones desse produto e caracterizar sua atividade e potencial proteolítico. Doze propriedades rurais com atividade de caprinocultura leiteira foram selecionadas nas regiões de Viçosa e Muriaé, Minas Gerais, das quais 61 amostras de leite de cabra foram coletadas e submetidas a análises microbiológicas para contagens de aeróbios mesófilos, enterobactérias, coliformes, Escherichia coli, psicrotróficos totais e proteolíticos, e estimativas de Pseudomonas totais e proteolíticos. As médias das contagens obtidas para todas as amostras foram: 5,04 log UFC/mL para aeróbios mesófilos, 3,34 log UFC/mL para enterobactérias, 2,85 log FC/mL para coliformes, 0,22 log UFC/mL para E. coli, 3,62 log UFC/mL para psicrotróficos totais, 2,73 log UFC/mL para psicrotróficos proteolíticos, 3,87 log UFC/mL para Pseudomonas e 3,43 log UFC/mL para Pseudomonas proteolíticos. Embora a média de aeróbios mesófilos tenha sido inferior ao limite recomendado pela legislação brasileira vigente (5,70 log UFC/mL), as amostras de leite de cabra apresentaram altas contagens de micro-organismos indicadores de higiene, o que demonstra deficiências higiênicas durante as diferentes etapas de produção e estocagem desse produto. Em 22 amostras de leite cru as contagens de psicrotróficos proteolíticos representaram mais de 50% das contagens de psicrotróficos, indicando o potencial proteolítico desse grupo em leite de cabra. A mesma relação foi observada em relação à presença de atividade proteolítica de Pseudomonas spp., que em 27 amostras essa proporção foi maior que 50% das contagens totais estimadas de Pseudomonas. Considerando as placas utilizadas para enumeração de Pseudomonas, 496 colônias que apresentaram atividade proteolítica foram selecionadas, purificadas e as culturas obtidas submetidas aos seguintes testes para identificação preliminar: morfologia pela coloração de Gram, oxidase e fermentação de glicose. Baseado nesses resultados, 107 isolados foram inicialmente identificados como Pseudomonas spp., e submetidos a rep-PCR para caracterização de seus perfis genéticos. Considerando taxas de similaridade entre 80 e 85%, 33 perfis genéticos diferentes foram caracterizados; 36 isolados não apresentaram perfil genético com o protocolo de rep-PCR utilizado. Os isolados ainda foram submetidos a PCR para identificação de espécies com primers específicos para P. aeruginosa (38 isolados identificados) e P. fluorescens (4 isolados); 61 isolados apresentaram produtos de amplificação para ambas as reações, e 4 para nenhuma, e foram considerados como Pseudomonas spp. considerando os testes laboratoriais realizados na triagem. Todos os isolados foram submetidos a PCR para detecção do gene apr, responsável pelam codificação da enzima metaloprotease alcalina, sendo identificados 41 (38,3%) positivos. Mesmo isolados que não apresentaram gene apr foram capazes de produzir enzimas proteolíticas a 7, 25 ou 35 °C; todos os isolados foram capazes de produzir proteases a 25 °C, 72 a 7 °C e 85 a 35 °C. Os resultados obtidos permitiram determinar deficiências higiênicas nas etapas iniciais da cadeia produtiva do leite de cabra, além da relevante participação de micro-organismos psicrotróficos e proteolíticos na microbiota desse produto. A atividade proteolítica de isolados de Pseudomonas spp. de leite de cabra foi caracterizada devido a presença do gene apr e pela atividade proteolítica em diferentes temperaturas de incubação.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1370501 bytes, checksum: 64432b0656ba736f2b945a205fa9a8c4 (MD5) Previous issue date: 2012-11-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The genus Staphylococcus is constituted of numerous pathogenic species, including S. aureus, which is often related to food poisoning cases and outbreaks, especially in dairy products. Its pathogenic activity is due to the ability of some strains to produce thermostable enterotoxins (SE). S. aureus detection in foods is often performed using conventional methods, which requires additional tests, such as biochemical and molecular characterization with the purpose of estimating its enterotoxigenic potential. The aim of this study was to characterize the enterotoxigenic potential of Staphylococcus spp. isolates and determine their genetic variability. In a previous study, a Staphylococcus spp. culture collection was obtained, from which 89 isolates were selected and subjected to phenotypical (coagulase and thermonuclease production, biochemical profile and SE production) and molecular analysis (SmaI macrorestriction, SE gene detection by PCR and DNA sequencing). PFGE analysis obtained by SmaI macrorestriction patterns revealed a highly heterogeneous population. Of the 89 isolates, 15.7% were capable of producing classical enterotoxins (SEA-SEE). 21.4% of isolates showed matching results between production of enterotoxins and detection of classical SE genes. 62.9% of isolates showed at least one of the classical SE genes, in association with other non-classical SE genes. SE genes were observed in all isolates and in different combinations, which revealed 59 distinct genotypes. sek was the least frequent observed SE gene, while sei was present in 98.9% of isolates. Partial sequencing of agr locus in 41 isolates showed the ocurrence of agr groups I (68.3%) and II (31.7%). No significant associations were found between agr groups, enterotoxin genes profiles, occurrence of egc cluster, PFGE profiles and/or SE production. Our findings suggest the absence of phenotypic or genotypic markers ideally correlated with the enterotoxigenic production of staphylococci of food origin, which demands further studies for better understanding the occurrence of these associations. / O gênero Staphylococcus é constituído de inúmeras espécies patôgenicas, especialmente S. aureus, que estão frequentemente relacionados a surtos de intoxicação alimentar, principalmente em leite e derivados. Essa atividade patogênica se deve à capacidade de algumas cepas em produzir enterotoxinas termoestáveis. A detecção de S. aureus em alimentos é realizada através de métodos clássicos de cultivo, porém requer testes complementares, que visam a caracterização adequada do potencial patogênico dos isolados. O objetivo deste trabalho foi caracterizar o potencial enterotoxigênico e determinar o grau de variabilidade genética de isolados de Staphylococcus spp.. A partir de uma coleção de microorganismos obtidos de leite cru e queijo frescal em um estudo preliminar, 89 isolados foram selecionados e submetidos à análises fenotípicas (produção de coagulase e termonuclease, perfil bioquímico e produção de enterotoxinas) e moleculares (macrorrestrição por SmaI, PCR para genes de enterotoxinas e sequenciamento de DNA). As análises de PFGE dos perfis de macrorrestrição por SmaI revelaram uma população altamente heterogênea. Dos 89 isolados, 15,7% dos isolados foram produtores de enterotoxinas clássicas. 21,4% dos isolados apresentaram resultados correspondentes entre a presença de genes e a detecção de enterotoxinas. 62,9% dos isolados apresentaram ao menos um dos genes de enterotoxinas clássicas, sempre em associações com os demais genes de enterotoxinas pesquisados. Todos os isolados apresentaram ao menos um dos genes de enterotoxinas pesquisados, em diversas combinações, com a ocorrência de 59 genótipos diferentes. sek foi o gene menos observado, enquanto sei esteve presente em 98,9% dos isolados. O locus egc foi detectado em 5 isolados, porém sua presença foi observada de forma incompleta em diversos isolados. O sequenciamento parcial do locus agr em 41 isolados revelou a ocorrência dos grupos agr I (68,3%) e II (31,7%). Não foram encontradas associações significativas entre grupos agr, perfis de genes de enterotoxinas, ocorrência do egc, perfis obtidos na PFGE e produção de enterotoxinas. As observações do presente estudo sugerem a ausência de marcadores idealmente correlacionados com a capacidade enterotoxigênica de isolados de estafilococos provenientes de amostras de alimentos, o que demanda a realização de outros estudos para compreender melhor a ocorrência dessas associações.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1196324 bytes, checksum: 0760aa5309df096b43864d5ebdabc40a (MD5) Previous issue date: 2013-03-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The bovine cysticercosis, caused by the larval form of Taenia saginata, is a current problem in Brazilian beef cattle, determining economic losses to the meat industry due to the carcass condemnation, also represents risks to public health. The main control measure of this zoonosis is applied after post-mortem examination at meat inspection; however, this method fails in detecting cysticerci in cases of low infections, reinforcing the need for additional research to develop alternatives for diagnosis, such as serological tests. The objectives of this study were: to evaluate different laboratory protocols of ELISA for the diagnosis of bovine cysticercosis using Taenia crassiceps (Tcra) larvae antigens to assess their performance against different categories of control sera from slaughtered cattle and, through immunoblotting, to identify peptides with significant diagnostic potential for bovine cysticercosis. Serum samples of cattle experimentally infected with eggs of T. saginata and negative for cysticercosis were also used in the evaluation of different laboratory protocols of ELISA, which involved six antigens of Tcra: total (T), total sonicated (Ts), total dialysate (Td), membrane (M), vesicular fluid (VF) and sonicated vesicular fluid (sVF). From previously defined protocols, we evaluated the performance of ELISA in a final step with the antigens T, Ts and M against sera of positive bovines (experimental and natural) and negative for cysticercosis, and of bovine with other pathologies. The immunoblotting assays were conducted with the T antigen, using four groups of control sera and then reactive peptides were identified and their frequencies and performance ratios were set. With previous evaluation of the protocols we have defined antigen concentrations of 10 &#956;g/ml for VF and sVF antigens and 40 &#956;g/ml for T, Ts, Td and M antigens; the established conjugate dilutions were 1:1.250 ( T, Ts and M) and 1:2,500 (Td, VF and sVF); the best serum dilution tested was 1:100 and the best blocking substance was 5% skimmed milk powder; and the antigens that best differed positive and negative animals were M and T antigens, followed by Ts and Td. The sensitivity rates obtained by ELISA were, respectively, with 2 and 3 standard deviations, 85 and 81.25% for T antigen, 82.5 and 78.75% for Ts antigen, and 80 and 80% for M antigen; specificity rates, with 2 and 3 standard deviations, were, respectively: 47.5 and 58.75% for T antigen, 65 and 73.75% for Ts antigen, and 58.75 and 62.5% for M antigen. In the immunoblotting, the most important diagnostical peptides, in descending order of accuracy were: 6-8 kDa (90.8%), 129-143 kDa (74.2%), 99-105 kDa (71.7%) and 14-19 kDa (71.1%). The suitable combination of various tested parameters contributed to increase the reliability of the ELISA test, once it facilitates the distinction between positive and negative animals. These protocols provided high sensitivity rates, which enables the practical applicability of the test, because it complements the post-mortem examination that shows high specificity, but low sensitivity in detecting carcasses with discrete infections. The results obtained by immunoblotting showed that the T antigen has peptides with a high diagnostic potential; hence, another serological test is useful in the diagnosis of bovine cysticercosis. / A cisticercose bovina, causada pela forma larvar da Taenia saginata, constitui um problema atual na pecuária de corte brasileira, determinando prejuízos econômicos para a indústria da carne em decorrência da condenação de carcaças parasitadas, além de representar riscos à saúde pública. A principal medida de controle desta zoonose é aplicada após o exame post mortem realizado na rotina de inspeção de carnes, no entanto, este método apresenta falhas na detecção de cisticercos em casos de infecções discretas, reforçando a necessidade de pesquisas adicionais para o desenvolvimento de alternativas para o diagnóstico, como os testes sorológicos. Os objetivos deste estudo foram avaliar diferentes protocolos laboratoriais do ELISA para o diagnóstico da cisticercose bovina utilizando antígenos de larva de Taenia crassiceps (Tcra), avaliar o seu desempenho frente a diferentes categorias de soros-controle de bovinos abatidos e, através do immunoblot, identificar os peptídeos com importante potencial diagnóstico para a cisticercose bovina. Amostras de soro de bovinos experimentalmente infectados com ovos de T. saginata e negativos para a cisticercose também foram utilizadas na avaliação de diferentes protocolos laboratoriais do ELISA, que envolveu seis antígenos de Tcra: total (T), total sonicado (Ts), total dialisado (Td), membrana (M), líquido vesicular (LV) e líquido vesicular sonicado (LVs). A partir de protocolos definidos previamente, foi avaliado o desempenho do ELISA numa etapa final com os antígenos T, Ts e M frente soros de bovinos positivos (experimentais e naturais) e negativos para a cisticercose e de bovinos com outras patologias. Os ensaios de immunoblot foram realizados, com o antígeno T, utilizando os quatro grupos de soros-controle e, em seguida, os peptídeos reativos foram identificados e estabelecidas as suas frequências e taxas de desempenho. Com a avaliação prévia dos protocolos ficaram definidas as concentrações de antígeno de 10 &#956;g/ml para os antígenos LV e LVs e de 40 &#956;g/ml para os antígenos T, Ts, Td e M; as diluições de conjugado estabelecidas foram 1:1.250 (T, Ts e M) e 1:2.500 (Td, LV e LVs); a melhor diluição de soro testada foi 1:100 e a melhor substância bloqueadora, o leite em pó desnatado a 5%; e os antígenos que melhor diferenciaram animais positivos e negativos foram o M e o T, seguidos pelos antígenos Ts e Td. As taxas de sensibilidade obtidas pelo teste ELISA foram respectivamente, com 2 e 3 desvios-padrão, 85 e 81,25% para o antígeno T, 82,5 e 78,75% para o antígeno Ts e 80 e 80% para o antígeno M; as taxas de especificidade, com 2 e 3 desvios-padrão, foram respectivamente: 47,5 e 58,75% para o antígeno T, 65 e 73,75% para o antígeno Ts e 58,75 e 62,5% para o antígeno M. Já no immunoblot os peptídeos de maior importância diagnóstica, em ordem decrescente de acurácia foram: 6-8 kDa (90,8%), 129-143 kDa (74,2%), 99-105 kDa (71,7%) e 14-19 kDa (71,1%). A combinação adequada dos diversos parâmetros testados contribuiu para ampliar a confiabilidade do teste ELISA, uma vez que facilita a diferenciação entre animais positivos e negativos. Estes protocolos proporcionaram altas taxas de sensibilidade o que facilita a aplicabilidade prática do teste, pois complementa o exame post mortem que apresenta alta especificidade, porém baixa sensibilidade em detectar carcaças com infecções discretas. Os resultados obtidos pelo immunoblot mostraram que o antígeno T possui peptídeos com alto potencial diagnóstico, sendo, portanto, outro teste sorológico útil no diagnóstico da cisticercose bovina.