Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Nutrição, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:08:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 321641.pdf: 1204977 bytes, checksum: 837a840ff8cd329282755f3d0fe3061c (MD5) / Neoplasias hematológicas são cânceres que se iniciam em tecidos produtores de células sanguíneas e no sistema linfático. São principalmente representadas por leucemias e linfomas, sendo que as primeiras podem ser divididas em aguda e crônica dependendo do tempo do desenvolvimento da doença e os segundos por linfoma de Hodgkin e Não-Hodgkin. Ambos os diagnósticos são caracterizados por células sanguíneas anormais que podem desempenhar funções alteradas. Algumas dessas funções celulares desempenham papéis importantes na defesa do organismo contra infecções e podem ser implicadas na investigação de intervenções que busquem melhorar a resposta desses indivíduos ao tratamento. Esse estudo teve como objetivo avaliar parâmetros de funcionalidade de células mononucleares de indivíduos portadores de neoplasias hematológicas (adesão, capacidade fagocítica, volume de vesículas catiônicas, produção de ânion superóxido), atividade da enzima catalase e peroxidação lipídica no plasma, proteínas de fase aguda e indicadores do estado nutricional. Amostras de sangue, dados clínicos e antropométricos foram coletados de dezesseis indivíduos com dezesseis anos ou mais portadores de neoplasias hematológicas atendidos no Hospital Universitário da Universidade Federal de Santa Catarina, sem terem iniciado o tratamento quimioterápico. Ensaios espectrofotométricos de adesão, capacidade fagocítica, volume de vesículas catiônicas e produção de ânion superóxido, foram realizados com as células mononucleares do sangue periférico dos participantes, atividade da catalase e peroxidação lipídica com o plasma, albumina e proteína C-reativa (pCr) foram avaliados pelos métodos de vermelho de bromocresol e nefelometria, respectivamente e indicadores do estado nutricional por antropometria. O principal diagnóstico foi leucemia aguda (n=9). A mediana de IMC dos indivíduos indicou excesso de peso (25,6 kg/m2), os valores de albumina (3,20 g/dL), hematócrito (25,40%), hemoglobina (8,30 g/dL), hemácias (2,50 106/mm3) e plaquetas (58000 unidades/mm3), também na mediana, foram menores que os valores de referência. A mediana da proteína C-reativa encontrou-se elevada (37,45 mg/L), também quando comparada aos valores de referência. Albumina sérica foi correlacionada inversamente com o IMC (r=-0.53), referente aos parâmetros de funcionalidade das mononucleares, a adesão celular e a produção de ânion superóxido foram maiores nas leucemias do que nos linfomas, enquanto a capacidade fagocítica e o volume de vesículas catiônicas foi menor, porém essas diferenças não foram significativas (p>0,05). A produção de ânion superóxido em neoplasias hematológicas não teve correlação com a peroxidação lipídica (r=0,26) e atividade da enzima catalase no plasma(r-0,13), entretanto foi encontrada forte correlação positiva entre essas duas últimas variáveis (r=0,75), volume de vesículas catiônicas também foi correlacionado positivamente com a capacidade fagocítica (r=0,42). Esses resultados indicam mudanças nas funcionalidade celulares dos indivíduos com neoplasias hematológicas e em variáveis do estresse oxidativo, com distinção entre os diagnósticos principais e conferem subsídios para realização de estudos futuros que visem avaliar a influência de intervenções nesses parâmetros <br> / Hematological malignancies are cancers that begin in blood-forming tissues and in the lymphatic system. They are mainly represented by leukemias and lymphomas, whereas the first can be divided into acute and chronic depending on disease development and the latter into Hodgkin's lymphoma and Non-Hodgkin's lymphoma. Both diagnoses are characterized by abnormal blood cells that may have altered functions. Some of these cellular functions play important roles in host defense against infection and may be involved in the investigation of interventions that seek to improve the response to treatment of these individuals. This study aimed to evaluate functionality parameters of mononuclear cells from patients with hematological malignancies (adhesion, phagocytic capacity, volume of cationic vesicles, superoxide anion production), lipid peroxidation and catalase activity in the plasma of these individuals, acute phase proteins and indicators of nutritional status. Blood samples, anthropometric and clinical data were collected from sixteen individuals with sixteen or more years of age with hematologic malignancies treated at the University Hospital of Federal University of Santa Catarina, without having initiated chemotherapy. Spectrophotometric adhesion, phagocytic capacity, volume of cationic vesicles and superoxide anion production assays were performed with peripheral blood mononuclear cells of participants, lipid peroxidation and catalase activity with the plasma, albumin and C-reactive protein (CRP) were assessed by bromocresol red and nephelometry, respectively and indicators of nutritional status by anthropometry. The main diagnosis was acute leukemia (n = 9), median body mass index (BMI) indicated excess body weight (25.6 kg/m2) among the individuals, the median values of albumin (3.20 g/dL), hematocrit (25.40%), hemoglobin (8.30 g/dL), red blood cells (2.50 106/mm3) and platelets (58000 units/mm3) were lower than the reference values, median Creactive protein was high (37.45 mg/L), also when compared to the reference value. Serum albumin was inversely correlated with BMI (r=- 0.53); regarding functionality parameters of mononuclear cells, adhesion and superoxide anion production was higher in leukemias than in lymphomas, whereas phagocytic capacity and the volume of cationic vesicles was lower, but these differences were not significant (p>0.05). The production of superoxide anion in hematological malignancies had no correlation with lipid peroxidation (r=0.26) and catalase activity in plasma (r-0.13), however we found a strong positive correlation between these two variables (r=0.75), volume of cationic vesicles was also positively correlated with phagocytic capacity (r=0.42). These results indicate changes in cell function and oxidative stress variables in individuals with hematological malignancies, distinguishing between the main diagnoses and providing subsidies for future studies aiming to evaluate the influence of interventions on these parameters.

Evidências acumuladas em diversos estudos tem demonstrado que as Espécies Ativas do Oxigênio (EAO) contribuem para o dano celular decorrente da isquemia e reperfusão de órgãos, principalmernte, em função da propriedade oxidativa das mesmas sobre os constituintes lipídicos das membranas celulares. O alopurinol tem sido sugerido como droga capaz de interferir beneficamente diminuindo o dano celular decorrente da reperfusão de órgãos previamente isquêmicos, tendo em vista o seu potencial de inibir a enzima xantina-oxidase, a mais frequentemente referida como geradora de EAO. Este estudo foi desenvolvido como o objetivo de avaliar os efeitos da isquemia e reperfusão hepática em ratos e também os efeitos do prétratamento com o alopurinol, sobre a função deste órgão, lipoperoxidação das membranas celulares dos hepatócitos e, características histopatológicas decorrentes. Para tanto, ratos Wistar, pesando entre 250 e 300 gramas foram utilizados e divididos em 6 experimentos interdependentes. Experimento 1: realizado para avaliar os efeitos de diferentes procedimentos sobre a função hepática. Os animais foram divididos em 4 grupos de 1 O animais cada: Grupo 1- ratos controle; Grupo 2- ratos submetidos a isquemia troncular total e intermitente durante um tempo de 45 minutos, tendo sido permitida a reperfusão durànte 5 minutos após os dois primeiros intervalos de 15 minutos; Grupo 3- ratos submetidos a hepatectomia parcial (lobo médio e esquerdo); Grupo 4- ratos submetidos a isquemia conforme descrito e, no final do período, a hepatectomia parcial como no grupo anterior. Colheitas de sangue 12, 24, 48, 72, 96, 120 horas e no 14, 21 e 28 dias foram obtidas para determinação da atividade das transaminases oxalo-pirúvicas (AL T), oxaloacética (AST) e fosfatase alcalina (FA). Experimento 2: realizado para avaliar o grau de lipoperoxidação das membranas celulares dos hepatócitos, através dos métodos de Substâncias Reativas ao Ácido Tiobarbitúrico (TBARS) e da Quimiluminescência (QL), em diferentes tempos de reperfusão sanguínea. Para tanto, 40 ratos foram utilizados e divididos em 4 grupos de 1 O animais cada: Grupo 1: ratos controle (submetidos a laparotomia); Grupo 2- ratos submetidos a isquemia total durante 60 minutos não tendo sido permitida a reperfusão; Grupo 3- lsquemia total de 60 minutos e reperfusão por 30 minutos; Grupo 4- lsquemia total de 60 minutos e reperfusão por igual tempo. A ressecção do lobo médio, ao final de cada tempo operatório, foi realizada e, o tecido removido utilizado para medidas do grau de lipoperoxidação pelos métodos do TBARS e QL. Experimento 3: realizado para avaliar os efeitos do alopurinol sobre a função hepática em situações de isquemia e reperfusão. Para tanto 30 ratos foram utilizados, e divididos em 3 grupos de 1 O animais cada: Grupo 1- ratos controle, submetidos ao pré-tratamento com 50 mg/ Kg de peso da suspensão de alopurinol 5 e 1 hora antes da laparatomia, sem nenhum procedimento adicional; Grupo 2- lsquemia seletiva do lobo médio e esquerdo durante 45 minutos, porém em ratos pré-tratados com suspensão de alopurinol nas doses descritas anteriormente; Grupo 3- ratos submetidos a isquemia seletiva conforme descrito anteriormente. Medidas da ALT, AST e FA foram realizadas 12, 24, 48 e 72 horas após os procedimentos. Experimento 4: avaliar o efeito do alopurinol sobre o grau de lipoperoxidação das membranas celulares dos hepatócitos. Para tanto, 30 ratos foram utilizados e divididos em 3 grupos com 1 O animais cada: Grupo 1- ratos controle, submetidosum período de anestesia e laparotomia de 1 hora e 45 minutos; Grupo 2- ratos submetidos a isquemia de 45 minutos e reperfusão de 1 hora porém, pré-tratados com suspensão de alopurinol conforme descrição prévia. Grupo 3- ratos submetidos a isquemia de 45 minutos e reperfusão de 1 hora. Após os respectivos tempos operatórios,os animais foram submetidos a ressecção do lobo médio, utilizado para as medidas da lipoperoxidação pelos métodos do TBARS e QL. Experimento 5: avaliar os efeitos do alopurinol sobre a mortalidade pósoperatória em ratos submetidos a isquemia e reperfusão. Para tanto, 30 ratos foram utilizados e divididos em 3 grupos: Grupo 1- ratos controle, submetidos ao pré-tratamento com 50 mg/ Kg de peso da suspensão de alopurinol 5 e 1 hora antes da laparatomia, sem nenhum procedimento adicional; Grupo 2- ratos submetidos a isquemia seletiva do lobo médio e esquerdo durante 45 minutos, porém com pré-t r~tamento com suspensão de alopurinol nas doses descritas anteriormente. Grupo 3- lsquemia seletiva conforme descrito anteriormente. Experimento 6: avaliar as alterações histopatológicas da isquemia hepática em ratos pré-tratados e não com alopurinol. Para tanto, 60 ratos foram utilizados e divididos em 3 grupos de 20 animais: Grupo 1- ratos controle, submetidos ao pré-tratamento com 50 mg/ Kg de peso da suspensão de alopurinol 5 e 1 hora antes da laparatomia, sem nenhum procedimento adicional; Grupo 2- ratos submetidos a isquemia seletiva do lobo médio e esquerdo, durante 45 minutos, porém em ratos pré-tratados com suspensão de alopurinol nas doses descritas anteriormente. Grupo 3- lsquemia seletiva conforme descrito anteriormente. A cada 24 horas durante 4 dias, 5 animais de cada grupo eram sacrificados e, os lobos médio e esquerdo foram removidos para estudo histopatológico. Experimento 1- Significativa elevação nas concentrações séricas, nas medidas das 12 e 24 horas após o procedimento, das enzimas AL T e AST foram observadas nos Grupos 2 e 3 em relação ao grupo controle (Grupo 1) (p<O.OS). Além disso, naqueles animais do Grupo 4 elevações mais pronunciadas foram eveifenciadas em relação aos demais grupos nas determinações efetuadas 12, 24 e 48 após a cirurgia (p<O.OS). A soma dos valores das medidas individuais dos Grupo 2 e 3 não se distinguiram daquelas obtidas no Grupo 4 (p>O.OS). A concentração sérica da FA foi mais elevada em todas as determinações efetuadas naqueles animais submetidos a hepatectomia (G.3 e 4) em relação aos grupos de animais nos quais este procedimento não foi efetuado (Grupos 1 e 2) (p<O.OS). Experimento 2- Foi observado uma maior formação de malondialdeído (TBARS) nos tecidos hepáticos dos Grupos 3 e 4 em relação aos Grupos 1 e 2 (p<O.OS) e, além disso, ausência de diferença entre os Grupos 3 e 4 e entre os Grupos 1 e 2 (p>O.OS). Resultados semelhantes foram obtidos pelo método da QL. Experimento 3- A concentração sérica da AL Te AST foi superior (p<O.OS) nos Grupos 2 e 3 em relação ao grupo controle (Grupo 1) nas medidas efetuadas 12 e 24 horas após o procedimento e, nas determinações das 48 horas do Grupo 3 em relação aos demais (p<O.OS). A FA foi semelhante em todos os grupos de animais (p>O.OS). Experimento 4- A formação de malondialdeído foi maior nos animais do Grupo 3 em relação aos Grupo 1 e 2 (p<O.OS). Entre estes dois últimos grupos não houve diferença estatisticamente detectável (p>O.OS). Além disso, a QL demonstrou uma maior emissão de energia luminosa no Grupo 3 em relação aos demais (p<0.05) e, entre estes dois últimos os resultados foram semelhantes (p>0.05). Experimento 5- A taxa de mortalidade no grupo de animais submetidos a isquemia sem pré-tratamento como alopurinol (Grupo 3) foi de 40% nas primeiras 24h após o procedimento, estatisticamente distinta quando comparado ao Grupo 1 (cbntrole)(p<0.05). Entretanto, entre os animais do Grupo 2, ou seja, submetidos a isquemia e pré-tratamento com alopurinol, 13.3% foram ao óbito e este valor não se distingue dos animais do Grupo 1 (p>0.05). A avaliação entre os Grupos 2 e 3 não demonstrou diferença estatística (p>0.05). A mortalidade na avaliação das 48 horas foi igual entre os dois grupos (6.6% e 6.6%) (2 e 3) e não distintas, estatisticamente (p>0.05). Os demais animais sobreviveram durante o período de observação. Experimento 6- Congestão vascular hepática e necrose hepatocitária foram significativamente mais pronuncidas nos animais dos Grupos 2 e 3 em relação aos animais do grupo controle na avaliação efetuada 24 e 48 horas após a isquemia (p<0.05) e, além disso, a necrose foi maior nos animais do Grupo 3 em relação aos do Grupo 2 (p<0.05) apenas na avaliação das primeiras 24 horas após o procedimento cirúrgico. Não se observaram diferenças estatisticamente demonstráveis nas avaliações realizadas 72 e 96 horas após a cirurgia(p>0.05). Estes resultados sugerem que a via da xantina oxidase é uma das mais importantes rotas metabólicas envolvidas na geraçãode EAO, elementos quimicamente reativos e com potencial lesivo ao nível das membranas celulares dos hepatócitos e, que pelo menos em parte, são responsáveis pelos danos funcionais do fígado na síndrome da isquemia e reperfusão. Além disso, o alopurinol demonstrou efeitos protetores contra a lipoperoxidação decorrente da injúria reperfusional, embora a análise histopatológica não tenha demonstrado uma diferença estatisticamente significativa, o que pode ser justificado pelo fato das alterações provocadas nesta síndrome ocorram a nível de biomembranas celulares e de organelas não adequadamente visualizáveis pela microscopia óptica. / lt has been demonstrated that the oxygen free radical (EAO) contributes to the cellular damage induced by ischemia/reperfusion, probably mainly due to its lipid-oxidative characteristics. lt has been suggested that allopurinol has beneficiai effects in reducing the injury due to the reperfusion of previously ischemic organs, in this syndrome, as a result of its property of inhibiting the enzyme xanthine oxidase, most frequently referred as responsible for the EAO generation. This study was carried out with the purpose of elucidating the effects of hepatic ischemia-reperfusion in rats, the effects of allopurinol in this syndrome, the development of the assay for lipid peroxidation of hepatocyte membranes and the histopathologic features. To achieve this goal, the functional repercussion and the histopathologic features (analized 24 hours and eight days after surgery) were evaluated in wistar rats weighing 250-300 g. Experíment 1: performed for evaluating the way in which different procedures reflected upon the hepatic function. The animais were divided into 4 groups of 1 O rats each. Group 1- Contrais (sham operation); Group 2- rats submitted to total intermittent hepatic ischemia for 45 minutes: the first two 15-minute periods of ischemia were intercalated with 5 minutes of reperfusion; Group 3- rats which underwent partia! hepatectomy (mediai and left lobes). Group 4- lschemia as described above and at the end of partia! hepatectomy. Blood samples were obtained at 12, 24, 48, 72, 96 and 120 hours and 4, 21 and 28 days after the procedure to determine the leveis of the enzymes oxalopiruvic transaminase (AL T), oxaloacetic transaminase (AST) and alkaline phosphatase (AF). Experiment 2: performed for evaluating the lipoperoxidation of hepatocyte membranes by the methods of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and Chemoluminescence (QL) at different times of reperfusion. The animais were divided into 4 groups of 10 rats each: Group 1- Contrais (sham operation); Group 2- rats submitted to total hepatic ischemia for 60 minutes ; Group 3- total hepatic ischemia for 60 minutes and reperfusion for 30 minutes; Group 4- total hepatic ischemia for 60 minutes and reperfusion for 60 minutes. At the end of each operation time, a resection of the mediai lobe was performed, and hepatic tissue was removed and used for measuring lipid peroxidation by the methods described above. Experiment 3: performed for evaluating the effects of allopurinol on hepatic function in the setting of ischemia-reperfusion. The animais were divided into 3 groups of 1 O rats each: Group 1- Contrais (sham operation) treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 2- rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes and treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 3- rats submitted to 45 minutes of selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia followed by 5 minutes of reperfusion 22,5 minutes later. Blood samples were obtained 12, 24, 48 and 72 hours after the procedure to determine the activities of the AL T, AST and AF enzymes. Experiment 4: performed for evaluating the effects of allopurinol on hepatocyte membrane lipoperoxidation by the methods of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and Chemoluminescence (QL). The animais were divided into 3 groups of 1 O rats each: Group 1- Contrais (sham operation) treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 2- rats submitted to 45 minutes of selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia followed by 60 minutes of reperfusion and treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 3- rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes and reperfusion during 60 minutes. After the respective surgical times, the left and mediai lobes were removed and used for the lipoperoxidation assay by the TBARS and QL methods. Experiment 5: performed for evaluating the effects of allopurinol on mortality after the ischemia-reperfusion procedure. Forty animais were used and divided into 3 groups: Group 1- 10 control rats (sham operation) treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 2- 15 rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes and treated 5 hours and 1 hour before the procedure wíth two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 3: 15 rats submitted to 45 minutes of selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia followed by 5 minutes of reperfusion 22,5 minutes later. The animais were observed for 7 days after the procedure. Experiment 6: performed for analyzing the hepatic histopathologic features and the effects of the pre-treatment wíth allopurinol in the rats submitted to ischemia-reperfusion. Sixty animais were used and divided into three groups of twenty animais each: Group 1- Contrai rats (sham operation) treated 5 hours and 1 hour before the procedure wíth two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 2- rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes and treated 5 hours and 1 hour before the procedure wíth two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 3- rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes. Twenty-four, 48, 72 and 96 hours after the procedure, 5 rats of each group were sacrificed, and their left and right lobes were removed for histopathologic study (vascular congestion, necrosis and steatosis). Experiment 1: The determination of the AL T and AST leveis, after the procedure, demonstrated that these leveis were significantly higher in the groups 2 and 3 than in group 1 (p<0,05). Besides, among the animais of ali groups, those of group 4 had the highest leveis 12, 24 and 48 hours after the surgery. When the values of group 3 were added to the values of group 2, the results were not different from the values of group 4 (p>0,05). AF was higher in ali determinations, in the animais which underwent hepatectomy (groups 3 and 4) compared to those which were not submitted to this procedure (groups 1 and 2) (p< 0,05). Experiment 2: Malondialdehyde (TBARS) formation was higher in the groups 3 and 4 than in the groups 1 and 2 (p<0,05); besides, no difference was observed between the groups 3 and 4 and between the groups 1 and 2 (p>0,05). Similar results were observed with the QL method. These results suggest that the enzyme xanthine oxidase is one of the most important pathways involved in the generation of the EAbs, chemical reactive elements with injury potential at the levei of the hepatocyte membranes in the ischemia-reperfusion syndrome. At last, the results showed that allopurinol had beneficiai effects on hepatic function and lipid peroxidation and protective effects against hepatic ischemia-reperfusion injury. The histopathologic findings can be explained by the fact that the changes induced by this mechanism occur in organelles and biomembranes which are not visualized by light microscopy.

Orientador: Antônio Fernando Monteiro Camargo / Banca: Rogério Falleiros Carvalho / Banca: Irineu Bianchini Junior / Resumo: O estresse oxidativo causado pela produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) é uma das respostas que as plantas apresentam frente a um estresse ambiental. Nosso objetivo foi avaliar o estresse oxidativo das macrófitas aquáticas Crinum americanum e Spartina alterniflora em duas condições: salinidade e nutrientes que ocorrem no estuário do rio Itanhaém (SP). Raízes e folhas (5 plantas) de C. americanum foram coletadas em cada área (5 amostras/área). O material vegetal para análises de clorofila (a+b), carotenóides, peróxido de hidrogênio (H2O2), malonaldeído (MDA) e enzimas antioxidantes SOD e CAT foram acondicionado em N2 líquido no campo e posteriormente armazenado em freezer a -80 °C. Também foram coletados em cada réplica material vegetal para avaliar o teor de N e P totais da planta e do sedimento Os dados obtidos foram submetidos à Análise de Variância (ANOVA) e comparados pelo teste de Tukey (p < 0,05). Os resultados obtidos mostraram que: C. americanum e S. alterniflora sofreram maior estresse oxidativo em alto e médio estuário, respectivamente; Os indivíduos de S. alterniflora sofreram maior estresse na área de lançamento de esgoto. / Abstract: The oxidative stress caused by the production of reactive oxygen species (ROS) is one of the responses that plants exhibit facing environmental stress. Our objective was to evaluate the oxidative stress of the aquatic macrophytes Crinum americanum and Spartina alterniflora under two conditions: salinity and nutrients that occur in the estuary of the Itanhaém river (SP). Roots and leaves (5 plants) of C. americanum were collected in each area (5 samples / area). The plant material for analysis of chlorophyll (a + b), carotenoids, H2O2, MDA and antioxidant enzymes SOD and CAT with platform in N2 without field and liquid in freezer at -80 ° C. Vegetable material was also collected in each replicate to evaluate the total N and P content of the plant and of the sediment. The data were submitted to Analysis of Variance (ANOVA) and compared by the Tukey test (p <0.05). The results showed that: C. americanum and S. alterniflora suffered higher oxidative stress in upper and middle estuary, respectively; The State of São Paulo changes have suffered greater stress in the area of sewage / Mestre

Orientador: Durvalina Maria Mathias dos Santos / Coorientador: Rana Munns / Banca: Jose Antonio Proença Vieira de Moraes / Banca: Priscila Lupino Gratão / Banca: Raffaella Rossetto / Banca: Arthur Bernardes Cecílio Filho / Resumo: A cana-de-açúcar é uma cultura mundialmente importante. O Brasil é o maior produtor mundial de cana-de-açúcar e se destaca na comercialização e exportação de açúcar e etanol originados a partir desta cultura. Os diferentes estresses abióticos alteram negativamente o desenvolvimento das plantas e, entre os estresses, a salinidade de solos se apresenta pela grave redução de produtividade, sendo o principal fator estressante em regiões de clima árido e semiárido. Este trabalho objetivou verificar os efeitos do NaCl sobre o desenvolvimento de plantas jovens de cana-de-açúcar, cultivares SP 81-3250 e IAC 87-3396, mediante o estudo de variáveis fisiológicas-bioquímicas: (I) os osmoprotetores prolina, glicina betaína e sacarose, (II) a ocorrência de alterações nutricionais pela relação Na+/K+, (III) a peroxidação lipídica (IV) a influência do NaCl na atividade da enzima redutase do nitrato; (V) o efeito do estresse salino nas trocas gasosas; (VI) o crescimento de parte aérea e raízes das diferentes cultivares de cana-de-açúcar sob estresse salino. Para tanto, foram utilizadas quatro concentrações de NaCl (0, 40, 80 e 160 mM) e realizadas as seguintes avaliações: teores de Na+ e K+ nas folhas e raízes, os osmólitos compatíveis prolina, glicina betaína e sacarose, potencial hídrico, a peroxidação lipídica, atividade da enzima redutase do nitrato, trocas gasosas, clorofilas totais, rendimento quântico do FSII e crescimento de parte aérea e raiz aos 15 e 30 dias de desenvolvimento após aplicação do estresse. A partir dos resultados, observou-se maior suscetibilidade das plantas da cv. IAC 87-3396 pelo maior acúmulo de Na+ e relação Na+/K+, maior peroxidação lipídica pelo acúmulo de MDA e maior efeito negativo sobre as trocas gasosas. Ambas as cultivares apresentaram acúmulo de prolina sob estresse, porém, plantas da cv. SP 81-3250 apresentaram, além de mais rápido acúmulo deste aminoácido... / Abstract: Sugarcane is a globally important crop. Brazil is the largest producer of sugarcane and stands out in the marketing and exportation of sugar and ethanol derived from this culture. The various abiotic stresses adversely change plant growth and between the stresses, soil salinity is presented by the severe reduction in productivity, it is the main stressor in arid and semi-arid climates. This study aimed to verify the effects of NaCl on the development of sugarcane young plants, SP 81- 3250 and IAC 87-3396 cultivars, through the study of physiological-biochemical variables: (I) the osmoprotectors proline, glycine betaine and sucrose, (II) the occurrence of nutritional changes the ratio Na+/K+ (III) lipid peroxidation (IV) effect of NaCl in the activity of nitrate reductase enzyme; (V) the effect of salt stress on gas exchange; (VI) the growth of shoots and roots of the sugarcane cultivars under salt stress. Thus, it was used four concentrations of NaCl (0, 40, 80 and 160 mM) and made the following assessments: Na+ and K+ accumulation in the leaves and roots, compatible osmolytes: proline, glycine betaine and sucrose, water potential, peroxidation lipid, activity of nitrate reductase enzyme, gas exchange, total chlorophyll, quantum yield of PSII and shoot and root growth at 15 and 30 days of development after stress application. The results showed higher susceptibility of the cv. IAC 87-3396 by higher accumulation of Na+ and Na+/K+ ratio, increase in lipid peroxidation by MDA accumulation and greater negative effect on gas exchange. Both cultivars showed proline accumulation under stress, however, the cv. SP 81- 3250 showed in addition faster accumulation of this amino acid, reduced lipid peroxidation and higher growth. Under severe salt stress cv. IAC 87-3396 is more susceptible / Doutor

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:44:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 323044.pdf: 1588311 bytes, checksum: 54a13b3ef879f8695757fbf3505d572c (MD5) Previous issue date: 2013 / O trauma cranioencefálico (TCE) é uma patologia de grande impacto social e econômico. O TCE é a principal causa de mortalidade em pessoas com menos de 40 anos de idade. Desde os anos noventa do século 20, houve poucos avanços no tratamento e diagnóstico do TCE. Sabe-se que uma cadeia de eventos danosos, incluindo neuroinflamação, excitotoxicidade, disfunção do metabolismo mitocondrial e estresse oxidativo contribuem para a morte celular no TCE. O entendimento destes processos é essencial para projetarmos novas perspectivas de abordagem diagnóstica e terapêutica. Esta revisão tem por objetivo revisar a literatura e esclarecer qual é a correlação entre os dados envolvendo o estresse oxidativo e o traumatismo cranioencefálico, visando contribuir com novas perspectivas para a área. Esta revisão visa responder as seguintes perguntas: a) O estresse oxidativo está relacionado com o TCE? b) Marcadores de peroxidação lipídica são efetivos na avaliação e prognose no TCE? c) Quais estratégias antioxidantes estão sendo investigadas no TCE e qual é sua eficácia? e d) Quais as perspectivas para o uso de marcadores relacionados ao estresse oxidativo e de antioxidantes na prognose e tratamento do TCE? Desta forma, analisou-se a validade de se usar marcadores de peroxidação lipídica, enzimas antioxidantes, entre outros, na prognose do TCE. Também avaliamos estratégias antioxidantes testadas em estudos pré-clínicos e clínicos, apontando para novas perspectivas clínicas. Foi realizada revisão sistemática de publicações indexadas no Pubmed cruzando ?traumatic brain injury or head injury? com oxidative stress, Nrf2, antioxidant, glutathione e flavonoid. A base dedados foi filtrada focada nos objetivos e os principais resultados foram analisados. Há dados inequívocos da participação da peroxidação lipídica no dano induzido por TCE. A correlação dos marcadores de peroxidação lipídica com o prognóstico porém, não pode ser estabelecida. Um desses marcadores de estresse oxidativo, 8-iso-prostaglandina-F2a (8-iso-PGF2a), entretanto, apresentou grande correlação com o nível de severidade do trauma, e merece atenção em futuras pesquisas. As estratégias antioxidantes avaliadas até então, apesar de mostrarem algum sucesso pré-clínico, não foram bem sucedidas em ensaios clínicos. Perspectivas para futuros estudos podem incluir novos marcadores que poderão aumentar o poder preditivo de desfecho. Ativadores da via Nrf2/ARE, como é o caso de flavonóides, são uma estratégia neuroprotetora com boa perspectiva de sucesso. Isto baseado no fato de que estudos pré-clínicos foram bem sucedidos em demonstrar que a ativação desta via confere neuroproteção. <br> / Abstract : Traumatic brain injury (TBI) is a pathology of great social and economic impact. The TBI is the main cause of death in people under 40 years of age. Since the nineties of 20th century, there have been few advances in the treatment and diagnosis of TBI. It is known that a chain of damaging events, including neuroinflammation, excitotoxicity, mitochondrial metabolism dysfunction and oxidative stress contribute to cell death in the TBI. The understanding of these processes is essential for projecting new perspectives of diagnostic and therapeutic approach. This review aims to analyse data from to determine what is the correlation between the oxidative stress and traumatic brain injury, to contribute with new perspectives for the area. This review aims to answer the following questions: a) The oxidative stress is related to the TBI? b) The lipid peroxidation markers are effective in the evaluation and prognosis in TBI? c) What antioxidant strategies are being investigated in TBI and what is its effectiveness? and d) What are the perspectives for the use of markers related to oxidative stress and antioxidants on prognosis and treatment of TBI? We conducted systematic review of publications indexed in Pubmed including the terms "traumatic brain injury or head injury" and oxidative stress, antioxidant, glutathione, Nrf2 and flavonoids. The database was filtered focused on the objectives and the main results were analyzed. There is clear evidence of the involvement of lipid peroxidation in TCE-induced damage. The correlation of markers of lipid peroxidation with the prognosis, however, cannot be established. One of these markers, 8-iso-prostaglandin-F2 a (8-iso PGF2-a), however, showed high correlationwith the level of severity of the trauma, and deserves attention in future research. Antioxidants strategies assessed thus far, despite showing some pre-clinical success, have not been successfull in clinical trials. Prospects for future studies may include new markers that may increase the predictive power of outcome. Activators of via Nrf2ARE, as is the case of flavonoids, are neuroprotective strategy with good prospects of success. This based on the fact that pre-clinical studies have been successfull in demonstrating that the activation of this pathway confers neuroprotection.

Evidências acumuladas em diversos estudos tem demonstrado que as Espécies Ativas do Oxigênio (EAO) contribuem para o dano celular decorrente da isquemia e reperfusão de órgãos, principalmernte, em função da propriedade oxidativa das mesmas sobre os constituintes lipídicos das membranas celulares. O alopurinol tem sido sugerido como droga capaz de interferir beneficamente diminuindo o dano celular decorrente da reperfusão de órgãos previamente isquêmicos, tendo em vista o seu potencial de inibir a enzima xantina-oxidase, a mais frequentemente referida como geradora de EAO. Este estudo foi desenvolvido como o objetivo de avaliar os efeitos da isquemia e reperfusão hepática em ratos e também os efeitos do prétratamento com o alopurinol, sobre a função deste órgão, lipoperoxidação das membranas celulares dos hepatócitos e, características histopatológicas decorrentes. Para tanto, ratos Wistar, pesando entre 250 e 300 gramas foram utilizados e divididos em 6 experimentos interdependentes. Experimento 1: realizado para avaliar os efeitos de diferentes procedimentos sobre a função hepática. Os animais foram divididos em 4 grupos de 1 O animais cada: Grupo 1- ratos controle; Grupo 2- ratos submetidos a isquemia troncular total e intermitente durante um tempo de 45 minutos, tendo sido permitida a reperfusão durànte 5 minutos após os dois primeiros intervalos de 15 minutos; Grupo 3- ratos submetidos a hepatectomia parcial (lobo médio e esquerdo); Grupo 4- ratos submetidos a isquemia conforme descrito e, no final do período, a hepatectomia parcial como no grupo anterior. Colheitas de sangue 12, 24, 48, 72, 96, 120 horas e no 14, 21 e 28 dias foram obtidas para determinação da atividade das transaminases oxalo-pirúvicas (AL T), oxaloacética (AST) e fosfatase alcalina (FA). Experimento 2: realizado para avaliar o grau de lipoperoxidação das membranas celulares dos hepatócitos, através dos métodos de Substâncias Reativas ao Ácido Tiobarbitúrico (TBARS) e da Quimiluminescência (QL), em diferentes tempos de reperfusão sanguínea. Para tanto, 40 ratos foram utilizados e divididos em 4 grupos de 1 O animais cada: Grupo 1: ratos controle (submetidos a laparotomia); Grupo 2- ratos submetidos a isquemia total durante 60 minutos não tendo sido permitida a reperfusão; Grupo 3- lsquemia total de 60 minutos e reperfusão por 30 minutos; Grupo 4- lsquemia total de 60 minutos e reperfusão por igual tempo. A ressecção do lobo médio, ao final de cada tempo operatório, foi realizada e, o tecido removido utilizado para medidas do grau de lipoperoxidação pelos métodos do TBARS e QL. Experimento 3: realizado para avaliar os efeitos do alopurinol sobre a função hepática em situações de isquemia e reperfusão. Para tanto 30 ratos foram utilizados, e divididos em 3 grupos de 1 O animais cada: Grupo 1- ratos controle, submetidos ao pré-tratamento com 50 mg/ Kg de peso da suspensão de alopurinol 5 e 1 hora antes da laparatomia, sem nenhum procedimento adicional; Grupo 2- lsquemia seletiva do lobo médio e esquerdo durante 45 minutos, porém em ratos pré-tratados com suspensão de alopurinol nas doses descritas anteriormente; Grupo 3- ratos submetidos a isquemia seletiva conforme descrito anteriormente. Medidas da ALT, AST e FA foram realizadas 12, 24, 48 e 72 horas após os procedimentos. Experimento 4: avaliar o efeito do alopurinol sobre o grau de lipoperoxidação das membranas celulares dos hepatócitos. Para tanto, 30 ratos foram utilizados e divididos em 3 grupos com 1 O animais cada: Grupo 1- ratos controle, submetidosum período de anestesia e laparotomia de 1 hora e 45 minutos; Grupo 2- ratos submetidos a isquemia de 45 minutos e reperfusão de 1 hora porém, pré-tratados com suspensão de alopurinol conforme descrição prévia. Grupo 3- ratos submetidos a isquemia de 45 minutos e reperfusão de 1 hora. Após os respectivos tempos operatórios,os animais foram submetidos a ressecção do lobo médio, utilizado para as medidas da lipoperoxidação pelos métodos do TBARS e QL. Experimento 5: avaliar os efeitos do alopurinol sobre a mortalidade pósoperatória em ratos submetidos a isquemia e reperfusão. Para tanto, 30 ratos foram utilizados e divididos em 3 grupos: Grupo 1- ratos controle, submetidos ao pré-tratamento com 50 mg/ Kg de peso da suspensão de alopurinol 5 e 1 hora antes da laparatomia, sem nenhum procedimento adicional; Grupo 2- ratos submetidos a isquemia seletiva do lobo médio e esquerdo durante 45 minutos, porém com pré-t r~tamento com suspensão de alopurinol nas doses descritas anteriormente. Grupo 3- lsquemia seletiva conforme descrito anteriormente. Experimento 6: avaliar as alterações histopatológicas da isquemia hepática em ratos pré-tratados e não com alopurinol. Para tanto, 60 ratos foram utilizados e divididos em 3 grupos de 20 animais: Grupo 1- ratos controle, submetidos ao pré-tratamento com 50 mg/ Kg de peso da suspensão de alopurinol 5 e 1 hora antes da laparatomia, sem nenhum procedimento adicional; Grupo 2- ratos submetidos a isquemia seletiva do lobo médio e esquerdo, durante 45 minutos, porém em ratos pré-tratados com suspensão de alopurinol nas doses descritas anteriormente. Grupo 3- lsquemia seletiva conforme descrito anteriormente. A cada 24 horas durante 4 dias, 5 animais de cada grupo eram sacrificados e, os lobos médio e esquerdo foram removidos para estudo histopatológico. Experimento 1- Significativa elevação nas concentrações séricas, nas medidas das 12 e 24 horas após o procedimento, das enzimas AL T e AST foram observadas nos Grupos 2 e 3 em relação ao grupo controle (Grupo 1) (p<O.OS). Além disso, naqueles animais do Grupo 4 elevações mais pronunciadas foram eveifenciadas em relação aos demais grupos nas determinações efetuadas 12, 24 e 48 após a cirurgia (p<O.OS). A soma dos valores das medidas individuais dos Grupo 2 e 3 não se distinguiram daquelas obtidas no Grupo 4 (p>O.OS). A concentração sérica da FA foi mais elevada em todas as determinações efetuadas naqueles animais submetidos a hepatectomia (G.3 e 4) em relação aos grupos de animais nos quais este procedimento não foi efetuado (Grupos 1 e 2) (p<O.OS). Experimento 2- Foi observado uma maior formação de malondialdeído (TBARS) nos tecidos hepáticos dos Grupos 3 e 4 em relação aos Grupos 1 e 2 (p<O.OS) e, além disso, ausência de diferença entre os Grupos 3 e 4 e entre os Grupos 1 e 2 (p>O.OS). Resultados semelhantes foram obtidos pelo método da QL. Experimento 3- A concentração sérica da AL Te AST foi superior (p<O.OS) nos Grupos 2 e 3 em relação ao grupo controle (Grupo 1) nas medidas efetuadas 12 e 24 horas após o procedimento e, nas determinações das 48 horas do Grupo 3 em relação aos demais (p<O.OS). A FA foi semelhante em todos os grupos de animais (p>O.OS). Experimento 4- A formação de malondialdeído foi maior nos animais do Grupo 3 em relação aos Grupo 1 e 2 (p<O.OS). Entre estes dois últimos grupos não houve diferença estatisticamente detectável (p>O.OS). Além disso, a QL demonstrou uma maior emissão de energia luminosa no Grupo 3 em relação aos demais (p<0.05) e, entre estes dois últimos os resultados foram semelhantes (p>0.05). Experimento 5- A taxa de mortalidade no grupo de animais submetidos a isquemia sem pré-tratamento como alopurinol (Grupo 3) foi de 40% nas primeiras 24h após o procedimento, estatisticamente distinta quando comparado ao Grupo 1 (cbntrole)(p<0.05). Entretanto, entre os animais do Grupo 2, ou seja, submetidos a isquemia e pré-tratamento com alopurinol, 13.3% foram ao óbito e este valor não se distingue dos animais do Grupo 1 (p>0.05). A avaliação entre os Grupos 2 e 3 não demonstrou diferença estatística (p>0.05). A mortalidade na avaliação das 48 horas foi igual entre os dois grupos (6.6% e 6.6%) (2 e 3) e não distintas, estatisticamente (p>0.05). Os demais animais sobreviveram durante o período de observação. Experimento 6- Congestão vascular hepática e necrose hepatocitária foram significativamente mais pronuncidas nos animais dos Grupos 2 e 3 em relação aos animais do grupo controle na avaliação efetuada 24 e 48 horas após a isquemia (p<0.05) e, além disso, a necrose foi maior nos animais do Grupo 3 em relação aos do Grupo 2 (p<0.05) apenas na avaliação das primeiras 24 horas após o procedimento cirúrgico. Não se observaram diferenças estatisticamente demonstráveis nas avaliações realizadas 72 e 96 horas após a cirurgia(p>0.05). Estes resultados sugerem que a via da xantina oxidase é uma das mais importantes rotas metabólicas envolvidas na geraçãode EAO, elementos quimicamente reativos e com potencial lesivo ao nível das membranas celulares dos hepatócitos e, que pelo menos em parte, são responsáveis pelos danos funcionais do fígado na síndrome da isquemia e reperfusão. Além disso, o alopurinol demonstrou efeitos protetores contra a lipoperoxidação decorrente da injúria reperfusional, embora a análise histopatológica não tenha demonstrado uma diferença estatisticamente significativa, o que pode ser justificado pelo fato das alterações provocadas nesta síndrome ocorram a nível de biomembranas celulares e de organelas não adequadamente visualizáveis pela microscopia óptica. / lt has been demonstrated that the oxygen free radical (EAO) contributes to the cellular damage induced by ischemia/reperfusion, probably mainly due to its lipid-oxidative characteristics. lt has been suggested that allopurinol has beneficiai effects in reducing the injury due to the reperfusion of previously ischemic organs, in this syndrome, as a result of its property of inhibiting the enzyme xanthine oxidase, most frequently referred as responsible for the EAO generation. This study was carried out with the purpose of elucidating the effects of hepatic ischemia-reperfusion in rats, the effects of allopurinol in this syndrome, the development of the assay for lipid peroxidation of hepatocyte membranes and the histopathologic features. To achieve this goal, the functional repercussion and the histopathologic features (analized 24 hours and eight days after surgery) were evaluated in wistar rats weighing 250-300 g. Experíment 1: performed for evaluating the way in which different procedures reflected upon the hepatic function. The animais were divided into 4 groups of 1 O rats each. Group 1- Contrais (sham operation); Group 2- rats submitted to total intermittent hepatic ischemia for 45 minutes: the first two 15-minute periods of ischemia were intercalated with 5 minutes of reperfusion; Group 3- rats which underwent partia! hepatectomy (mediai and left lobes). Group 4- lschemia as described above and at the end of partia! hepatectomy. Blood samples were obtained at 12, 24, 48, 72, 96 and 120 hours and 4, 21 and 28 days after the procedure to determine the leveis of the enzymes oxalopiruvic transaminase (AL T), oxaloacetic transaminase (AST) and alkaline phosphatase (AF). Experiment 2: performed for evaluating the lipoperoxidation of hepatocyte membranes by the methods of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and Chemoluminescence (QL) at different times of reperfusion. The animais were divided into 4 groups of 10 rats each: Group 1- Contrais (sham operation); Group 2- rats submitted to total hepatic ischemia for 60 minutes ; Group 3- total hepatic ischemia for 60 minutes and reperfusion for 30 minutes; Group 4- total hepatic ischemia for 60 minutes and reperfusion for 60 minutes. At the end of each operation time, a resection of the mediai lobe was performed, and hepatic tissue was removed and used for measuring lipid peroxidation by the methods described above. Experiment 3: performed for evaluating the effects of allopurinol on hepatic function in the setting of ischemia-reperfusion. The animais were divided into 3 groups of 1 O rats each: Group 1- Contrais (sham operation) treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 2- rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes and treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 3- rats submitted to 45 minutes of selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia followed by 5 minutes of reperfusion 22,5 minutes later. Blood samples were obtained 12, 24, 48 and 72 hours after the procedure to determine the activities of the AL T, AST and AF enzymes. Experiment 4: performed for evaluating the effects of allopurinol on hepatocyte membrane lipoperoxidation by the methods of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and Chemoluminescence (QL). The animais were divided into 3 groups of 1 O rats each: Group 1- Contrais (sham operation) treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 2- rats submitted to 45 minutes of selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia followed by 60 minutes of reperfusion and treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 3- rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes and reperfusion during 60 minutes. After the respective surgical times, the left and mediai lobes were removed and used for the lipoperoxidation assay by the TBARS and QL methods. Experiment 5: performed for evaluating the effects of allopurinol on mortality after the ischemia-reperfusion procedure. Forty animais were used and divided into 3 groups: Group 1- 10 control rats (sham operation) treated 5 hours and 1 hour before the procedure with two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 2- 15 rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes and treated 5 hours and 1 hour before the procedure wíth two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 3: 15 rats submitted to 45 minutes of selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia followed by 5 minutes of reperfusion 22,5 minutes later. The animais were observed for 7 days after the procedure. Experiment 6: performed for analyzing the hepatic histopathologic features and the effects of the pre-treatment wíth allopurinol in the rats submitted to ischemia-reperfusion. Sixty animais were used and divided into three groups of twenty animais each: Group 1- Contrai rats (sham operation) treated 5 hours and 1 hour before the procedure wíth two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 2- rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes and treated 5 hours and 1 hour before the procedure wíth two doses of 50 mg/kg of allopurinol suspension administered intraperitoneally; Group 3- rats submitted to selective (mediai and left lobes) hepatic ischemia during 45 minutes. Twenty-four, 48, 72 and 96 hours after the procedure, 5 rats of each group were sacrificed, and their left and right lobes were removed for histopathologic study (vascular congestion, necrosis and steatosis). Experiment 1: The determination of the AL T and AST leveis, after the procedure, demonstrated that these leveis were significantly higher in the groups 2 and 3 than in group 1 (p<0,05). Besides, among the animais of ali groups, those of group 4 had the highest leveis 12, 24 and 48 hours after the surgery. When the values of group 3 were added to the values of group 2, the results were not different from the values of group 4 (p>0,05). AF was higher in ali determinations, in the animais which underwent hepatectomy (groups 3 and 4) compared to those which were not submitted to this procedure (groups 1 and 2) (p< 0,05). Experiment 2: Malondialdehyde (TBARS) formation was higher in the groups 3 and 4 than in the groups 1 and 2 (p<0,05); besides, no difference was observed between the groups 3 and 4 and between the groups 1 and 2 (p>0,05). Similar results were observed with the QL method. These results suggest that the enzyme xanthine oxidase is one of the most important pathways involved in the generation of the EAbs, chemical reactive elements with injury potential at the levei of the hepatocyte membranes in the ischemia-reperfusion syndrome. At last, the results showed that allopurinol had beneficiai effects on hepatic function and lipid peroxidation and protective effects against hepatic ischemia-reperfusion injury. The histopathologic findings can be explained by the fact that the changes induced by this mechanism occur in organelles and biomembranes which are not visualized by light microscopy.

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-04. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:48:57Z : No. of bitstreams: 1 000831234.pdf: 626479 bytes, checksum: fc33748b7fab005e12ea3d5bcc46bad2 (MD5) / Eritrócitos têm sido utilizados para investigar dano oxidativo e possíveis intervenções com antioxidantes no envelhecimento. O chá mate (CM) ou Ilex paraguariensis reduz o dano oxidativo, porém sua ação em fêmeas velhas ainda não foi elucidada. Neste trabalho foi investigado pela primeira vez, em ratas velhas na perimenopausa, o efeito tempo-dependente do tratamento com CM sobre o dano oxidativo e a defesa antioxidante. Os animais foram divididos em Adulta-controle (5 meses de idade), Velha-Basal (17 meses de idade), Velha tratada e não tratada. Os grupos tratados receberam CM diariamente (20 mg/kg m.c., gavagem) durante duas, quatro e seis semanas, e não tratados receberam água. A capacidade antioxidante plasmática (FRAP), malonaldeído (MDA) e as atividades da superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GPx) foram avaliadas nos eritrócitos. No grupo Velha-basal houve redução de FRAP e das enzimas antioxidantes, e aumento de MDA em comparação ao Adulta-controle. O CM aumentou FRAP, SOD e GPx, e reduziu MDA, após quatro e seis semanas, mas não alterou CAT. Os resultados indicam que o CM é um tratamento promissor para reduzir o acúmulo de dano oxidativo associado à idade em eritrócitos de fêmeas na perimenopausa e que o efeito na FRAP é cumulativo / Erythrocytes have been used to investigate oxidative damage and possible intervention with antioxidant in aging. Mate tea (MT) or Ilex paraguariensis reduces oxidative damage, but its action on aged females has not yet been elucidated. It was investigate, for the first time, in natural aged rats in perimenopause the time-dependent effect of MT treatment on oxidative damage and antioxidant defenses. Animals were divided into Adult-control (5 months old), Aged-baseline, Aged treated and Aged untreated. Treated groups received MT daily (20 mg/kg body weight, gavage) for two, four or six weeks, aged untreated group received water by gavage. Plasma antioxidant capacity, determined by ferric reducing antioxidant power (FRAP) assay, malondialdehyde levels (MDA) and the activities of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GPx) enzymes were evaluated in erythrocytes. Aged-baseline animals (17 months) had decreased FRAP and enzymatic antioxidant defenses and increased MDA when compared to Adult-control (5 months). MT treatment increased FRAP, SOD, GPx, and decreased MDA after four weeks, but did not change CAT. MT is a promising treatment to reduce the accumulation of age-related oxidative damage in erythrocytes in aged rats in perimenopause and the effect is cumulative in FRAP

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-15. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:50Z : No. of bitstreams: 1 000840924.pdf: 281597 bytes, checksum: 09f286c23a8bb920c8b7c0ce71f73d05 (MD5) / Há algumas poucas evidências de que danos teciduais causados por parasitas gastrintestinais em ovinos promovem estresse oxidativo, porém os mecanismos que causam o desequilíbrio entre os oxidantes e antioxidantes não estão bem estabelecidos. O presente trabalho objetivou comprovar a hipótese de que o estresse oxidativo ocorre em ovinos infectados por Haemonchus contortus e que este varia com a resistência racial. Para tanto foram investigadas as relações entre o estresse oxidativo causado pela infecção por H. contortus, a carga parasitária, a anemia e a hipoalbuminemia. Para tal, ovinos da raça Suffolk (n=15) e Santa Inês (n=22) foram desverminados e após confirmado a ausência de ovos nas fezes (dia 0), todos animais foram infectados por via oral com 5000 larvas de terceiro estágio (L3) de H. contortus. A quantidade de ovos por grama de fezes (OPG) e a concentração de diferentes marcadores plasmático de estresse oxidativo (peroxidação lipídica, albumina, ácido úrico, bilirrubina total, capacidade antioxidante total, concentração de oxidante total e o índice de estresse oxidativo) foram quantificadas antes (dia 0) e com 28, 32 e 42 dias da infecção experimental, em ambas as raças. As alterações dos biomarcadores de estresses oxidativo pós-infecção variaram com a raça, tendo em comum ovinos Suffolk e Santa Inês um aumento de TOC no dia 28, seguido de um aumento de TAC no dia 42. Ovinos da raça Suffolk apresentaram maior carga parasitária em todos os momentos pós-infecção, sendo que nesta raça o OPG correlacionou-se com a concentração de oxidante total (TOC) (r=58; p<0,02) e na raça Santa Inês o OPG se correlacionou com a bilirrubina (r=0,49; p<0,02). As alterações dos marcadores de estresse oxidativo pós-infecção não foram associados à anemia e à hipoalbuminemia. Durante os primeiros 42 dias pós-infecção o... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico Abaixo) / There are some little evidence that tissue damage caused by gastrointestinal parasites in sheep promote oxidative stress, but the mechanisms that cause the imbalance between oxidants and antioxidants are not well established. This study aimed to prove the hypothesis that oxidative stress occurs in sheep infected with Haemonchus contortus and that this varies with racial resistance. Therefore, we investigated the relationship between oxidative stress caused by infection with H. contortus, the parasite load, anemia and hypoalbuminemia. To this end, Suffolk sheep breed (n = 15) and Santa Inês (n = 22) were wormed and after confirmed the absence of eggs in the feces (day 0), all animals were infected orally with 5000 third-stage larvae (L3) from H. contortus. The number of eggs per gram of feces (EPG) and the concentration of different plasma markers of oxidative stress (lipid peroxidation, albumin, uric acid, total bilirubin, total antioxidant capacity, total oxidant concentration and oxidative stress index) were quantified before (day 0) and 28, 32 and 42 days of experimental infection in both breeds. The amendments to the post-infection oxidative stress biomarkers varied with the race, having in common Suffolk and Santa Inês sheep the total oxidant concentration (TOC) increase on the 28th, followed by an increase of TAC on day 42. Breed Sheep Suffolk had higher parasite burden in all post-infection times, and this race the OPG correlated with the TOC (r = 58; p <0.02) and Santa Ines the OPG correlated with bilirubin (r = 0.49; p <0.02). The amendments to the post-infection oxidative stress markers were not associated with anemia and hypoalbuminemia. During the first 42 days post-infection with H. contortus, oxidative stress index varied according to race, in part due to increased oxidant production probably caused by tissue injury and also because of a probable compensatory ... (Complete abstract electronic access below)

Resumo: Há algumas poucas evidências de que danos teciduais causados por parasitas gastrintestinais em ovinos promovem estresse oxidativo, porém os mecanismos que causam o desequilíbrio entre os oxidantes e antioxidantes não estão bem estabelecidos. O presente trabalho objetivou comprovar a hipótese de que o estresse oxidativo ocorre em ovinos infectados por Haemonchus contortus e que este varia com a resistência racial. Para tanto foram investigadas as relações entre o estresse oxidativo causado pela infecção por H. contortus, a carga parasitária, a anemia e a hipoalbuminemia. Para tal, ovinos da raça Suffolk (n=15) e Santa Inês (n=22) foram desverminados e após confirmado a ausência de ovos nas fezes (dia 0), todos animais foram infectados por via oral com 5000 larvas de terceiro estágio (L3) de H. contortus. A quantidade de ovos por grama de fezes (OPG) e a concentração de diferentes marcadores plasmático de estresse oxidativo (peroxidação lipídica, albumina, ácido úrico, bilirrubina total, capacidade antioxidante total, concentração de oxidante total e o índice de estresse oxidativo) foram quantificadas antes (dia 0) e com 28, 32 e 42 dias da infecção experimental, em ambas as raças. As alterações dos biomarcadores de estresses oxidativo pós-infecção variaram com a raça, tendo em comum ovinos Suffolk e Santa Inês um aumento de TOC no dia 28, seguido de um aumento de TAC no dia 42. Ovinos da raça Suffolk apresentaram maior carga parasitária em todos os momentos pós-infecção, sendo que nesta raça o OPG correlacionou-se com a concentração de oxidante total (TOC) (r=58; p<0,02) e na raça Santa Inês o OPG se correlacionou com a bilirrubina (r=0,49; p<0,02). As alterações dos marcadores de estresse oxidativo pós-infecção não foram associados à anemia e à hipoalbuminemia. Durante os primeiros 42 dias pós-infecção o... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico Abaixo) / Abstract: There are some little evidence that tissue damage caused by gastrointestinal parasites in sheep promote oxidative stress, but the mechanisms that cause the imbalance between oxidants and antioxidants are not well established. This study aimed to prove the hypothesis that oxidative stress occurs in sheep infected with Haemonchus contortus and that this varies with racial resistance. Therefore, we investigated the relationship between oxidative stress caused by infection with H. contortus, the parasite load, anemia and hypoalbuminemia. To this end, Suffolk sheep breed (n = 15) and Santa Inês (n = 22) were wormed and after confirmed the absence of eggs in the feces (day 0), all animals were infected orally with 5000 third-stage larvae (L3) from H. contortus. The number of eggs per gram of feces (EPG) and the concentration of different plasma markers of oxidative stress (lipid peroxidation, albumin, uric acid, total bilirubin, total antioxidant capacity, total oxidant concentration and oxidative stress index) were quantified before (day 0) and 28, 32 and 42 days of experimental infection in both breeds. The amendments to the post-infection oxidative stress biomarkers varied with the race, having in common Suffolk and Santa Inês sheep the total oxidant concentration (TOC) increase on the 28th, followed by an increase of TAC on day 42. Breed Sheep Suffolk had higher parasite burden in all post-infection times, and this race the OPG correlated with the TOC (r = 58; p <0.02) and Santa Ines the OPG correlated with bilirubin (r = 0.49; p <0.02). The amendments to the post-infection oxidative stress markers were not associated with anemia and hypoalbuminemia. During the first 42 days post-infection with H. contortus, oxidative stress index varied according to race, in part due to increased oxidant production probably caused by tissue injury and also because of a probable compensatory ... (Complete abstract electronic access below) / Orientador: Paulo César Ciarlini / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Banca: Raimundo Souza Lopes / Mestre

Orientador: Ana Cláudia de Melo Stevanato Nakamune / Coorientador: Adriane Belló-Klein / Banca: Fábio Erminio Mingatto / Banca: Ana Lúcia dos Anjos Ferreira / Resumo: Eritrócitos têm sido utilizados para investigar dano oxidativo e possíveis intervenções com antioxidantes no envelhecimento. O chá mate (CM) ou Ilex paraguariensis reduz o dano oxidativo, porém sua ação em fêmeas velhas ainda não foi elucidada. Neste trabalho foi investigado pela primeira vez, em ratas velhas na perimenopausa, o efeito tempo-dependente do tratamento com CM sobre o dano oxidativo e a defesa antioxidante. Os animais foram divididos em Adulta-controle (5 meses de idade), Velha-Basal (17 meses de idade), Velha tratada e não tratada. Os grupos tratados receberam CM diariamente (20 mg/kg m.c., gavagem) durante duas, quatro e seis semanas, e não tratados receberam água. A capacidade antioxidante plasmática (FRAP), malonaldeído (MDA) e as atividades da superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GPx) foram avaliadas nos eritrócitos. No grupo Velha-basal houve redução de FRAP e das enzimas antioxidantes, e aumento de MDA em comparação ao Adulta-controle. O CM aumentou FRAP, SOD e GPx, e reduziu MDA, após quatro e seis semanas, mas não alterou CAT. Os resultados indicam que o CM é um tratamento promissor para reduzir o acúmulo de dano oxidativo associado à idade em eritrócitos de fêmeas na perimenopausa e que o efeito na FRAP é cumulativo / Abstract: Erythrocytes have been used to investigate oxidative damage and possible intervention with antioxidant in aging. Mate tea (MT) or Ilex paraguariensis reduces oxidative damage, but its action on aged females has not yet been elucidated. It was investigate, for the first time, in natural aged rats in perimenopause the time-dependent effect of MT treatment on oxidative damage and antioxidant defenses. Animals were divided into Adult-control (5 months old), Aged-baseline, Aged treated and Aged untreated. Treated groups received MT daily (20 mg/kg body weight, gavage) for two, four or six weeks, aged untreated group received water by gavage. Plasma antioxidant capacity, determined by ferric reducing antioxidant power (FRAP) assay, malondialdehyde levels (MDA) and the activities of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GPx) enzymes were evaluated in erythrocytes. Aged-baseline animals (17 months) had decreased FRAP and enzymatic antioxidant defenses and increased MDA when compared to Adult-control (5 months). MT treatment increased FRAP, SOD, GPx, and decreased MDA after four weeks, but did not change CAT. MT is a promising treatment to reduce the accumulation of age-related oxidative damage in erythrocytes in aged rats in perimenopause and the effect is cumulative in FRAP / Mestre