Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:46:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 341078.pdf: 2463228 bytes, checksum: 1e4341868ecc0794afd3283d35f6268e (MD5) Previous issue date: 2016 / Introdução: O gênero Calea pertence à família Asteraceae e contém cerca de 125 espécies, distribuídas mundialmente em áreas tropicais e subtropicais, sendo que o maior número dessas espécies é registrado no Brasil. Espécies do gênero Calea são popularmente utilizadas para o tratamento de reumatismo, doenças respiratórias e, problemas digestivos. A Calea pinnatifida (C. pinnatifida), popularmente conhecida como ?aruca? e ?cipó-cruz?, é uma planta perene e subarbustiva encontrada principalmente nos estados do sul e sudeste do Brasil, utilizada na medicina popular para o tratamento de dores estomacais, giardíase e amebíase. Embora já existam trabalhos que demonstrem a atividade antiproliferatica e leishmanicida da C. pinnatifida, ainda não existem estudos farmacológicos descritos que tenham avaliado sua atividade anti-inflamatória. Objetivos: Investigar a atividade anti-inflamatória do extrato bruto, frações e compostos isolados das folhas da C. pinnatifida, utilizando um modelo murino de pleurisia induzida pela carragenina. Metodologia: As folhas da C. pinnatifida foram submetidas a um processo de maceração com etanol 92%, para obtenção do extrato bruto etanólico (EB). O EB foi submetido a uma partição líquido/líquido sob agitação manual de forma exaustiva e sucessiva, utilizando os solventes: hexano, clorofórmio e acetato de etila, respectivamente, para obter as frações hexano (Hex), diclorometano (DCM), e acetato de etila (AcOEt), bem como a fração aquosa remanescente, pelo qual foi obtido a fração metanólica (MeOH), a partir de uma cromatografia em coluna, utilizando da resina Amberlite XAD-4 como fase estacionária e metanol como fase móvel. Os compostos foram isolados a partir da fração acetato por métodos cromatográficos e identificados por meio de dados espectroscópicos de infra-vermelho (IV) e ressonância magnética nuclear de hidrogênio e carbono treze. A pleurisia foi induzida segundo metodologia descrita por SALEH et al., 1996 e os parâmetros inflamatórios como: migração de leucócitos, exsudação, atividade das enzimas mieloperoxidase (MPO) e adenosina-desaminase (ADA), concentrações dos metabólitos do óxido nítrico (NOx) e das citocinas pró-inflamatórias, fator de necrose tumoral alpha (TNF-a), interleucina- 1 beta (IL-1ß) e interleucina- 17A (IL-17A), foram avaliados 4 h após a indução da inflamação. Além disso, também avaliou-se a capacidade dos compostos isolados, ácido 3,5-di-O-E-cafeoil quínico (3,5-diACQ) e ácido 4,5-di-O-E-cafeoil quínico (4,5-diACQ), em inibir a fosforilação da subunidade p65 do NF-?B e p38 MAPK. Para isso, diferentes grupos deanimais foram tratados com EB (25-100 mg/kg), Hex (5-25 mg/kg), DCM (5-25 mg/kg), MeOH (5-25 mg/kg), AcOEt (2,5-25 mg/kg), 3,5-diACQ (1-5 mg/kg) ou 4,5-diACQ (1-5 mg/kg) administrados por via intraperitoneal (i.p.) 0,5 h antes da carragenina (1%) administrada por via intrapleural (i.pl.). Para avaliar a exsudação, os animais foram tratados previamente com solução de Azul de Evans (25 mg/kg) por via intra-venosa (i.v.), 10 min antes da administração de EB, frações e compostos isolados da C. pinnatifida. Ensaios colorimétricos foram utilizados para analisar a atividade das enzimas MPO e ADA, bem como NOx. Testes imunoenzimaticos (ELISA) foram realizados, para determinar as concentrações das citocinas TNF-a, IL-1ß e IL-17A e também para avaliar a fosforilação de p65 (NF-?B) e p38 MAPK. Diferenças estatísticas entre os grupos foram determinados utilizando análise de variância (ANOVA), complementados pelo teste post-hoc de Newman-Keuls, valores de p < 0,05 foram considerados significativos. Resultados: EB (50-100 mg/kg), Hex (10-25 mg/kg), MeOH (10-25 mg/kg), AcOEt (5-25 mg/kg), 3,5-diACQ (2,5-5 mg/kg) e 4,5-diACQ (5 mg/kg) inibiram: leucócitos, neutrófilos e exsudação (p < 0,05). EB (50 mg/kg), Hex (10 mg/kg), MeOH (10 mg/kg), AcOEt (5 mg/kg), 3,5-diACQ (2,5 mg/kg) e 4,5-diACQ (5 mg/kg) inibiram as atividades das enzimas MPO e ADA, as concentrações de NOx e as citocinas IL-1ß e IL-17A (p < 0,05). EB, AcOEt, 3,5-diACQ e 4,5-diACQ, nas doses citadas acima, diminuiram as concentrações de TNF-a (p < 0,05). Os compostos 3,5-diACQ e 4,5-diACQ, também inibiram a fosforilação da p65 e p38 (p < 0,05). Conclusão: Este estudo demonstrou que a C. pinnatifida possui importante atividade anti-inflamatória, inibindo a migração de leucócitos do tipo neutrófilos, bem como a diminuição da exsudação. Esse efeito provavelmente foi devido a diminuição da concentração de mediadores pró-inflamatórios (TNF-a, IL-1ß e IL-17A e NOx) no lavado pleural e esses efeitos parecem estar relacionados em parte, pela capacidade dos compostos isolados em inibir vias intracelulares importantes envolvidas no processo inflamatório, como o NF-?B e p38 MAPK.<br> / Abstract : Introduction: Calea genus belongs to the Asteraceae family and contains about 125 species, distributed worldwide in tropical and subtropical areas, with the largest number of these species is registered in Brazil. Calea species of the genus are commonly used to treat rheumatism, respiratory diseases, and digestive problems. The Calea pinnatifida (C. pinnatifida), popularly known as "aruca" and "cipó-cruz", is a perennial and subshrub plant found mainly in the southern and southeastern Brazil states, used in folk medicine to treat stomach aches, giardiasis and amebiasis. Although there are studies that demonstrate the antiproliferative and leishmanicidal activities of C. pinnatifida, there are no pharmacological studies to describe its anti-inflammatory activity. Objectives: To evaluate the anti-inflammatory activity of crude extract, fractions and isolated compounds from C. pinnatifida leaves using a murine model of pleurisy induced by carrageenan. Methodology: C. pinnatifida leaves were subjected to a maceration process with ethanol 92% to obtain a crude hydroalcoholic extract (CE). CE was subjected to a liquid/liquid partition under manual exhaustive and successively stirring using hexane, chloroform and ethyl acetate eluents, respectively, to obtain the hexane fractions (Hex), dichloromethane (DCM) and ethyl acetate (EtOAc) as well as the remaining aqueous fraction from which was obtained the methanolic fraction (MeOH), from the use of XAD-4 resin. The compounds were isolated from the EtOAc fraction by chromatographic methods and identified by spectroscopic data of infrared (IR) and nuclear magnetic resonance of hydrogen and carbon thirteen. Pleurisy was induced according to the methodology described by Saleh et al, 1996 and inflammatory parameters such as: Leukocyte migration, exudation, activity of myeloperoxidase (MPO) and adenosine-deaminase (ADA), concentrations of nitric oxide metabolites (NOx) and pro-inflammatory cytokines, tumor necrosis factor-alpha (TNF-a), interleukin-1 beta (IL-1ß) and interleukin-17A (IL-17A) were evaluated 4 hours after inflammation induction. In addition, we also evaluated the ability of the isolated compounds, 3,5-di-O-E-caffeoylquinic acid (3,5-diCQA) and 4,5-di-O-E-caffeoylquinic (4,5-diCQA) acid to inhibit the phosphorylation of the NF-?B p65 subunit and p38 MAPK. For this, different groups of animals were treated with CE (25-100 mg/kg) Hex (5-25 mg/kg), DCM (5-25 mg/kg), MeOH (5-25 mg/kg), EtOAc (2.5-25 mg/kg), 3,5-diCQA (1-5 mg/kg) and 4,5-diCQA (1-5 mg/kg) administered by intraperitoneally route (i.p.) 0.5 h before carrageenan (1%) administered by intrapleural route (i.pl.). To evaluate the exudation, the animals were pretreated with Evans blue solution (25 mg/kg) administred by intravenous (i.v.) route. Colorimetric assays were used to analyze the MPO and ADA activities, as well as NOx and immunoenzymatic assays (ELISA) to determine the TNF-a, IL-1ß and IL-17A concentrations and also to evaluate the phosphorylation of p65 (NF-?B) and p38 MAPK. The significant differences between groups were determined using analysis of variance (ANOVA) followed by Newman?Keuls post hoc test and the values of p < 0.05 were considered significant. Results: CE (50-100 mg/kg), Hex (10-25 mg/kg), MeOH (10-25 mg/kg), EtOAc (5-25 mg/kg), 3,5-diCQA (2,5- 5 mg/kg) and 4,5-diCQA (5 mg/kg) inhibited: leukocytes, neutrophils, and exudation (p < 0.05). CE (50 mg/kg), Hex (10 mg/kg), MeOH (10 mg/kg), EtOAc (5 mg/kg), 3,5-diCQA (2.5 mg/kg) and 4,5-diCQA (5 mg/kg) inhibited the MPO and ADA activities, NOx, IL-1ß and IL-17A concentrations (p < 0.05). At the same dose, only CE, EtOAc, 3,5-diCQA and 4,5-diCQA were able to decrease TNF-a concentrations (p < 0.05). The compounds 3,5-diCQA and 4,5-diACQ also inhibited phosphorylation of p65 and p38 (p < 0.05). Conclusion: This study demonstrated that C. pinnatifida has an important anti-inflammatory activity by inhibiting leukocyte migration, neutrophils and decreased exudation. This effect may be occurred by decrease of the concentration of pro-inflammatory mediators (NOx, TNF-a, IL-1ß and IL-17A) in pleural leakage and these effects appear to be related in part to the ability of the isolated compounds to inhibit important cellular pathways involved in inflammatory process, such NF-?B and p38 MAPK.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-20T20:09:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 196227.pdf: 40880152 bytes, checksum: 6d6ef93d1123e0dcd91db2ade4069f20 (MD5)

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:03:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339587.pdf: 2960841 bytes, checksum: 861acbfb6832b7e0cf06c4aa64087e26 (MD5) Previous issue date: 2016 / Introdução: O atual e crescente número de compostos derivados de plantas nos mais variados estágios de desenvolvimento, principalmente em estudos clínicos, indica que a investigação científica de produtos naturais é uma fonte viável na pesquisa de novos candidatos a fármacos. Neste contexto, a Ilex paraguariensis A. St. Hil. (Aquifoliaceae), conhecida popularmente como erva-mate, é a principal representante do gênero Ilex e uma espécie nativa da América do Sul, distribuída nas regiões subtropicais e temperadas da Argentina, Paraguai, Uruguai e Brasil. É amplamente usada na medicina popular para tratar artrite, obesidade, fadiga e acometimentos hepáticos e intestinais. Por este motivo, acreditamos que o seu estudo farmacológico merece destaque. Objetivos: Avaliar o efeito anti-inflamatório e imunomodulador do extrato bruto padronizado, frações e compostos majoritários da I. paraguariensis, administrados por via oral, no modelo de pleurisia induzida pela carragenina (Cg) em camundongos. Método: Folhas secas e trituradas de I. paraguariensis foram submetidas à turbolização com etanol 20° GL para obtenção do extrato bruto (EB) liofilizado. As frações butanólica (BuOH) e residual aquosa (RAq) foram obtidas por partição com n-butanol. O perfil químico do extrato bruto foi determinado por cromatografia líquida de ultra eficiência (CLUE) e espectrometria de massas (EM). No modelo da pleurisia, foram utilizados camundongos albinos Swiss fêmeas, 1 mês, 18-25g (PP00965/CEUA/2015). A pleurisia foi induzida de acordo com a metodologia descrita por Saleh e colaboradores (1996). Após 4 horas de pleurisia, o lavado pleural obtido dos animais pré-tratados com EB, BuOH, RAq, cafeína (Caf), rutina (Rut) ou ácido clorogênico (AcCl) foi utilizado para avaliar a migração de leucócitos totais, neutrófilos e quantificação da concentração de exsudato. Em seguida, procedeu-se a avaliação das atividades das enzimas mieloperoxidase (MPO), adenosina desaminase (ADA), quantificação da concentração dos metabólitos do óxido nítrico (NOx), concentração de citocinas pró e anti-inflamatórias (IL-6, IL-17A, IFN-?, TNF-a, IL-2, IL-4 e IL-10). O tecido pulmonar também foi coletado e utilizado para avaliação histológica e para avaliar a ação dos compostos majoritários sobre a fosforilação da subunidade p65 do NF-?B (p-p65 NF-?B). Diferenças estatísticas foram determinadas por ANOVA complementada por Newman-Keuls onde P<0,05 foram considerados significativos. Resultados: Nas doses estudadas, EB, BuOH, RAq, Caf, Rut e AcCl inibiram de maneira significativa a migração de leucócitos, às custas de neutrófilos, bem como a exsudação (P<0,05). As doses selecionadas de EB, frações e compostos majoritários apresentaram efeito inibitório significativo sobre MPO, ADA e NOx, além de, inibir as principais citocinas pró inflamatórias relacionadas a polarização do sistema imune para a resposta Th1/Th17 (P<0,05). EB, RAq e AcCl demonstraram causar aumento significativo sobre a concentração de IL-10 (P<0,05). A lesão pulmonar causada pela Cg foi atenuada pelo pré-tratamento dos animais em todos os grupos estudados (P<0,05). Finalmente, os compostos majoritários Caf, Rut e AcCl inibiram significativamente a fosforilação da subunidade p65 do NF-?B quando comparados ao grupo Cg (P<0,01). Conclusão: Os resultados do presente estudo demonstraram que a atividade anti-inflamatória da I. paraguariensis no modelo da pleurisia induzida pela carragenina é decorrente, dentre outros fatores, da sua capacidade imunomoduladora sobre o microambiente inflamatório sendo esse efeito, em parte, consequência da ação de seus compostos majoritários sobre via de sinalização do NF-?B.<br> / Abstract : Introduction: The current and growing number of plant-derived compounds in various stages of development, particularly in clinical trials, indicates that scientific research of natural products is a viable source in the search for new drug candidates. In this context, Ilex paraguariensis A. St. Hil. (Aquifoliaceae), popularly known as yerba mate, is a representative of the Ilex genus and a native species of South America, distributed in subtropical and temperate regions of Argentina, Paraguay, Uruguay and Brazil. It is widely used in folk medicine to treat arthritis, obesity, fatigue and liver and intestinal affections. For this reason, we believe that its pharmacological study must be highlighted.Objectives: Evaluate the anti-inflammatory and immunomodulatory effects of I. paraguariensis standardized crude extract, fractions and major compounds, orally administered, in the carrageenan (Cg)-induced murine model of pleurisy.Methodology: Dried and crushed leaves were subjected to turbolization process with 20° GL ethanol to obtain freeze-dried crude extract (EB). The butanolic fraction (BuOH) and aqueous residual fraction (RAq) were obtained by partitioning with n-butanol. The chemical profile of extract was determined by ultra performance liquid chromatography (UPLC) and mass spectrometry (MS). The pleurisy model employed female Swiss mice with 1 month, weighing 18-21g (this project was approved by the Ethics Committee on Animal Use of UFSC - PP00965 / CEUA / 2015). Pleurisy was induced according to the method described by Saleh and coworkers (1996). Four hours after pleurisy, pleural fluids leakage obtained from pretreated animals with EB, BuOH, RAq, caffeine (Caf), rutin (Rut) or chlorogenic acid (AcCl) were used to evaluate the inflammatory parameters: total leukocytes and neutrophils migration, and quantification of exudate concentration. Then, proceeded to the evaluation of myeloperoxidase (MPO) and adenosine deaminase (ADA) activities, measurement of nitric oxide metabolites (NOx) concentration, quantification of pro-and anti-inflammatorycytokines (IL-6, IL-17A IFN-?, TNF-a, IL-2, IL-4 and IL-10). The lung tissues of all groups were collected and used for histologic evaluation of leukocyte infiltration and edema, and lung tissues obtained from groups treated only with major compounds were used to evaluate the p65 NF-?B phosphorylation (p-p65 NF-kB). Statistical differences were determined by ANOVA followed by Newman-Keuls post-hoc test. P<0.05 values were considered significant.Results: BE, BuOH, RAq, Caf, Rut and AcCl significantly reduced the leukocyte content, due to inhibition of neutrophil migration, as well as exudation (P<0.05). The selected doses of EB fractions and major compounds showed significant effect upon MPO, ADA and NOx, and, in general, inhibited the release of pro-inflammatory cytokines related to Th1/Th17 polarization (P<0.05). EB, RAq and AcCl showed a significant increase of IL-10 concentration (P<0.05). The lung injury caused by Cg was attenuated by animals pretreatment in all groups (P<0.05). Finally, the major compounds Caf, Rut and AcCl significantly inhibited p65 NF-?B phosphorylation when compared to the Cg group (P<0.01).Conclusion: The results of this study showed that anti-inflammatory activity of I. paraguariensis in the carrageenan-induced pleurisy model is due, among other factors, to its immunomodulatory capacity at inflammatory microenvironment and this effect is partly result of the action of its major compounds on signaling pathway of NF-?B.

Tese (Doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. / Made available in DSpace on 2012-10-17T19:06:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T17:36:40Z : No. of bitstreams: 1 161166.pdf: 4638682 bytes, checksum: 832a7a110cc6be14d75f0cbb94e38a71 (MD5) / O modelo da [pleurisia] induzida pela [carragenina] (1%), apresenta resposta inflamatória bifásica (4 e 48 h) na cavidade pleural de [camundongos]. A L-NOARG, o HOE 140, o NPC 17731, a diacereína, a indometacina, o meloxicam, a nabumetona e a dexametasona administrados 30 min antes da [carragenina], inibiram a migração celular e os níveis da [mieloperoxidase] na primeira fase (4 h) desta resposta inflamatória. Todas as drogas, com exceção da diacereína, inibiram a exsudação. Além disso, a diacereína, a nabumetona, a L-NOARG e a L-NAME inibiram também os níveis de [nitrito/nitrato]. Em relação à segunda fase (48 h), observou-se que a dexametasona e a diacereína, inibiram os leucócitos, enquanto que a terfenadina reduziu apenas a exsudação. Nenhuma das drogas estudadas reduziu os níveis da [mieloperoxidase] ou do [nitrito/nitrato]. O NPC 17731, o HOE 140 e o NPC 18884 inibiram tanto a exsudação como a migração celular induzida pela [carragenina], 4 h. Neste modelo experimental observa-se a participação de [citocinas] com efeitos pró-inflamatórios (TNFa, IL-1b, IL-8) e antiinflamatórios (IL-6, IL-10), com base nos resultados de que tanto anticorpos-policlonais como citocinas-recombinantes, administrados diretamente na cavidade pleural juntamente com a [carragenina], reproduziram parcialmente seus efeitos pró-inflamatórios ou antiinflamatórios. Neste modelo de inflamação, o PDTC e a sulfasalazina (inibidores do fator de transcrição nuclear [NF-kB]), foram eficazes em inibir a resposta inflamatória induzida pela [carragenina] (4 h). Além disso, a associação de doses subliminares de drogas antiinflamatórias e dos inibidores (PDTC ou sulfasalazina) que isoladamente não foram eficazes, quando associados, mostraram efeito antiinflamatório sinergístico, inibindo tanto a migração celular como a exsudação na [pleurisia] induzida pela [carragenina] (4 h). Nestes experimentos observou-se também aumento da expressão de células [CD18] positivas, na cavidade pleural e no pulmão, na primeira fase (4 h) da resposta inflamatória induzida pela [carragenina]. Além disso, no modelo experimental estudado, não se observou resposta inflamatória sistêmica caracterizada por aumento da permeabilidade vascular nos pulmões e no baço, em que se pese o aumento da molécula de adesão [CD18] em células pulmonares.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T09:56:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 278465.pdf: 1284585 bytes, checksum: 802bf6271db6f3ee2f1d0eb4ac863d25 (MD5) / A Rosmarinus officinalis L. (Laminaceae), conhecida como alecrim, é uma planta nativa da região mediterrânea, que atualmente é cultivada em várias partes do mundo, inclusive no Brasil. Esta planta é utilizada na medicina popular para o tratamento de doenças inflamatórias como a asma brônquica. Além disso, estudos já demonstraram que seus constituintes possuem atividade anti-inflamatória. Objetivo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito anti-inflamatório do extrato bruto (CE) da Rosmarinus officinalis L., bem como de suas frações: hexano (HEX), acetato de etila (AcOEt) e etanólica (ET), e dos compostos isolados: carnosol (CA), ácido betulínico (BA) e ácido ursólico (UA), no modelo da pleurisia induzida pela carragenina, em camundongos. Metodologia: As partes aéreas da Rosmarinus officinalis L. foram secas à temperatura ambiente e submetidas à maceração com etanol 96% por 15 dias para a obtenção do CE. A seguir, o CE foi submetido a uma filtração em sílica utilizando-se solventes em ordem crescente de polaridade resultando nas frações HEX, AcOEt e ET. A partir das frações AcOEt e HEX foram isolados três compostos: CA, BA e UA. Para a avaliação da atividade anti-inflamatória foi utilizado o modelo da pleurisia induzida pela carragenina, em camundongos, e foram avaliados os seguintes parâmetros inflamatórios: influxo de leucócitos, atividade da mieloperoxidase (MPO), além das concentrações de nitrito/nitrato (NOx), exsudação, interleucina-1 beta (IL-1?) e fator de necrose tumoral-alfa (TNF-?). Nesse protocolo experimental, foram utilizados camundongos albinos suíços, os quais foram inicialmente distribuídos em diferentes grupos e tratados com CE (25 - 100 mg/kg), HEX (10 - 50 mg/kg), AcOEt (5 - 50 mg/kg), ET (10 - 50 mg/kg), CA (1 - 10 mg/kg), BA (1 - 10 mg/kg) ou UA (2,5 - 25 mg/kg), administrados por via intraperitoneal (i.p.), 0,5 h antes da administração da carragenina (1%, i.pl.). Os parâmetros inflamatórios (leucócitos e exsudação) foram avaliados 4 h após. Para avaliar a exsudação, os animais foram tratados previamente (10 min.) com solução Azul de Evans (25 mg/kg, i.v.). Para avaliar a atividade da MPO e as concentrações de NOx, IL-1? e TNF-?, diferentes grupos de animais foram tratados com CE (50 mg/kg, i.p.), HEX (25 mg/kg, i.p.), AcOEt (10 mg/kg, i.p.), ET (50 mg/kg, i.p.), CA (2,5 mg/kg, i.p.), BA (2,5 mg/kg, i.p.) ou UA (25 mg/kg, i.p.) administrados 0,5 h antes da carragenina. A dexametasona e indometacina foram utilizadas como fármacos anti-inflamatórios de referência. Diferenças estatísticas entre os grupos foram determinadas pela análise dos testes de variância (ANOVA) e/ou t de Student. Valores de P < 0,05 foram considerados significativos. Resultados: O extrato bruto da Rosmarinus officinalis L. (50 - 100 mg/kg), as frações (10 - 50 mg/kg), assim como os compostos isolados (2,5 - 25 mg/kg) inibiram: influxo de leucócitos, neutrófilos, atividade da MPO, além das concentrações de NOx, exsudação, IL-1? e TNF-? (P < 0,05). A indometacina e a dexametasona inibiram todos os parâmetros inflamatórios estudados (P < 0,05). Conclusão: O extrato bruto, frações e compostos isolados da Rosmarinus officinalis L. demonstraram importante atividade anti-inflamatória. Os compostos isolados: carnosol, ácido betulínico e ácido ursólico podem ser os responsáveis por este efeito anti-inflamatório.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas. / Made available in DSpace on 2012-10-22T22:46:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 235242.pdf: 663338 bytes, checksum: eeaf08a18f8ac5465bab02755126cfc5 (MD5) / Introdução: O tacrolimus é um agente imunossupressor isolado do Streptomyces tsukubaensis e é utilizado principalmente na prevenção de rejeição de órgãos. Além disso, muitos trabalhos têm demonstrado o uso do tacrolimus em doenças de caráter inflamatório crônico como à asma brônquica e artrite reumatóide.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T05:45:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 287671.pdf: 12192705 bytes, checksum: 05f2ab062b5fcd2b7dc7705721b24271 (MD5) / Introdução: O micofenolato de mofetila (MMF) é um fármaco imunossupressor utilizado atualmente na clínica na rejeição de transplantes de órgãos e em algumas doenças auto-imunes, como na uveite e na glomerulonefrite. Objetivos: Avaliar o efeito anti-inflamatório e antioxidante do MMF administrado por via oral, na primeira (4 h) e segunda (48 h) fases da resposta inflamatória induzida pela carragenina (Cg), no modelo da pleurisia, em camundongos. Materiais e Métodos: Neste protocolo experimental foram utilizados camundongos albinos suíços de 1 mês de idade. O modelo experimental utilizado foi o da pleurisia induzida pela Cg, segundo metodologia descrita por Saleh et al. (1996). A inflamação foi avaliada estudando-se alguns parâmetros da resposta inflamatória segundo metodologias já padronizadas e descritas na literatura (leucócitos e a exsudação), atividade das enzimas: mieloperoxidase (MPO), adenosina deaminase (ADA), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx), e glutationa S-transferase (GST), superóxido dismutase (SOD), as concentrações de: nitrito/nitrato (NOx) e das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Neste protocolo, também foram estudadas a influência do MMF sobre as concentrações das proteínas e sobre a transcrição do mRNA para o fator de necrose tumoral alfa (TNF-?), interleucina-1 beta (IL-1?), fator de crescimento endotelial vascular alfa (VEGF-?), e interleucina 17A (IL-17A), utilizando-se as metodologias de enzima imunoensaio (ELISA) e a reação da transcriptase reversa, seguida de reação em cadeia da polimerase (RT-PCR). Para a pesquisa da enzima óxido nítrico sintase induzida (ONSi) também foi utilizada a técnica de RT-PCR. Os parâmetros inflamatórios foram avaliados 4 h e 48 h após a indução da pleurisia. Como fármacos de referência anti-inflamatória foram utilizados: a dexametasona (Dex, i.p.) e o ibuprofeno (Ibu, v.o.). Em alguns experimentos para avaliar a exsudação, os animais foram tratados 10 minutos antes da aplicação da Cg, com solução de azul de Evans (25 mg/kg, 0,2 mL, i.o.). Para a análise estatística dos resultados foi utilizado o teste paramétrico ANOVA complementado, quando necessário, pelo teste de Dunnett, teste t de Student e teste de correlação de Pearson. Diferençcas com P < 0,05 foram considerados significantes. Resultados: Em ambas as fases (4 h e 48 h) da resposta inflamatória induzida pela Cg, o MMF na dose de 100 mg/kg administrado por via oral (v.o.) inibiu os leucócitos (P < 0,01), a exsudação (P < 0,01), as atividades de: MPO (P < 0,05), ADA (P < 0,01), CAT (P < 0,05), SOD (P < 0,05), GPx (P < 0,01) e GST (P < 0.01), as concentrações de: nitrito/nitrato (ONx) (P < 0,01) e TBARS (P < 0,05). Além disso, o fármaco também inibiu aumento das concentrações e a transcrição do mRNA de: TNF-? (P < 0,01), IL-1? (P < 0,01), VEGF-? (P < 0,01) e IL-17A (P < 0,01), bem como a transcrição da enzima ONSi (P < 0,01). Conclusão: Os resultados demonstraram que o MMF possui importante efeito anti-inflamatório e antioxidante, inibindo mediadores e enzimas que participam da resposta inflamatória no modelo da pleurisia em camundongos. Este efeito parece ocorrer também em nível pré-transcripcional uma vez que o MMF foi capaz de inibir não somente as concentrações de citocinas formadas, mas também a transcrição do mRNA para estas proteínas.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-22T13:07:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 236388.pdf: 465095 bytes, checksum: 91882f2902b8f7142a4c381bb67ab5f9 (MD5) / Introdução: A espécie Solidago chilensis Meyen, nativa da América do Sul e comumente conhecida como "arnica do Brasil", tem demonstrado importante atividade antifúngica, antioxidante e antimicrobiana. No entanto, existem poucos estudos em relação a sua atividade antiinflamatória.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:08:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334652.pdf: 2332207 bytes, checksum: 62dc21cc8905637d24312db23ad9addf (MD5) Previous issue date: 2015 / A planta Polygala sabulosa A.W. Bennett, popularmente conhecida como  timutu-pinheirinho , é uma planta característica da zona de campos do planalto catarinense e é tradicionalmente utilizada para tratar afecções dos rins, intestino e pulmões. O objetivo do presente trabalho foi investigar o efeito anti-inflamatório desta espécie e analisar o provável mecanismo de ação de seu composto majoritário, no modelo de pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. Com este objetivo, o material vegetal foi submetido a extração por maceração com etanol 96% a temperatura ambiente por 7 dias para obtenção do extrato bruto hidroalcoólico (EBH). O EBH foi então submetido a extração sólido-líquido com solventes de diferentes polaridades para obtenção de três diferentes frações, sendo elas: fração hexânica (Hex), fração acetonica (Ac) e fração metanólica (MeOH). O composto 7-preniloxi-6-metoxicumarina (PC) foi isolado da fração Ac, identificado comparando-se dados de RMN H1 e C13 com literatura já publicada e quantificado através de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE-DAD). Para avaliação do efeito anti-inflamatório desta espécie foi realizada a quantificação de leucócitos totais e neutrófilos, além da quantificação de exsudato na cavidade pleural. Além disso, técnicas padronizadas descritas na literatura foram empregadas com intuito de verificar o efeito da P. sabulosa sobre a atividade das enzimas mieloperoxidase (MPO) e adenosina-deaminase (ADA) e sobre as concentrações de metabólitos do óxido nítrico (NOx), e das citocinas pró-inflamatórias: fator necrose tumoral alpha (TNF-a) e interleucina 1 beta (IL-1ß). Com intuito de propor o mecanismo de ação do composto majoritário desta espécie, a atividade da PC foi avaliada sobre a expressão de mRNA das citocinas TNF-a, IL-1ß e da enzima oxido nítrico sintase induzida (iNOS), além de sua capacidade inibitória sobre a fosforilação da subunidade p65 do fator nuclear kappa B (NF-?B) e da proteína quinase induzida por mitógeno p38 (p38 MAPK). Todos os paramêtros inflamatórios foram avaliados 4 horas após a indução da pleurisia. Em todos os experimentos realizados a dexametasona (Dex 0,5 mg/kg, i.p.) foi utilizada como fármaco de referência anti-inflamatória. Para análise estatística dos resultados utilizou-se o teste de análise variância ANOVA, complementados pelo pós teste Newman-Keuls. Valores de p < 0,05 foram considerados significativos. O EBH, as frações Hex, Ac e MeOH e o composto isolado PC foram capazes de reduzir a migração leucocitária para a cavidade pleural às custas da inibição de netrófilos, além da exsudação (p < 0,05). Com exceção do EBH que não foi capaz de inibir a exsudação em nenhuma das doses testadas (p > 0.05). Ainda, o EBH, frações e a PC inibiram de forma significativa as atividades da MPO (p < 0,01) e ADA (p < 0,01), e as concentrações de NOx (p < 0,01), além das citocinas TNF-a (p < 0,01) e IL-1ß (p < 0,01). Já o composto isolado PC foi capaz de reduzir a expressão de mRNA do TNF-a (p < 0,01), IL-1ß (p < 0,01) e iNOS (p < 0,01) quando comparado ao grupo Cg. Finalmente, o composto PC ainda inibiu significativamente a fosforilação da subunidade p65 do NF-?B (p < 0,01) e a fosforilação da p38 MAPK (p < 0,05). Os resultados do presente estudo demonstraram que a P. sabulosa possui atividade anti-inflamatória importante e este efeito pode ser, ao menos em parte, atribuído a seu composto majoritário que demonstrou atividade inibitória sobre duas importantes cascatas de sinalização do processo inflamatório deflagrado pela carragenina, o NF-?B e a p38 MAPK.<br> / Abstract : Polygala sabulosa A.W. Bennett, popularly known as "timutupinheirinho", is a characteristic species of the field area of Santa Catarina plateau and is traditionally used to treat diseases of the kidneys, intestines and lungs. The objective of this study was to investigate the antiinflammatory effect of this species and analyze the likely mechanism of action of its major compound in the pleurisy model induced by carrageenan in mice. To this end, the plant material was subjected to extraction by maceration with 96% ethanol at room temperature for 7 days to obtain the crude hydroalcoholic extract (CE). The CE was then subjected to solid-liquid extraction with solvents of different polarities to obtain three different fractions, namely: hexane fraction (Hex) acetonic fraction (Ac) and methanol fraction (MeOH). The compound 7- prenyloxi-6-methoxycoumarin (PC) was isolated from the Ac fraction, identified by comparing data from NMR H1 and C13 with published literature and quantified by high performance liquid chromatography (HPLC-DAD). To evaluate the anti-inflammatory effect of this species the quantification of total leukocytes and neutrophils, in addition to the quantification of exudate in the pleural cavity were performed. In addition, standard techniques described in the literature were used in order to verify the effect of P. sabulosa upon the activity of the enzymes myeloperoxidase (MPO) and adenosine-deaminase (ADA), upon the nitric oxide metabolites concentrations (NOx), and pro-inflammatory cytokines: tumor necrosis factor alpha (TNF-a) and interleukin 1 beta (IL-1ß). With intention to propose the mechanism of action of the major compound of this species, the PC activity was evaluated upon the mRNA expression of TNF-a, IL-1ß and inducible nitric oxide synthase (iNOS), and its inhibitory ability upon the phosphorylation of the p65 subunit of nuclear factor kappa B (NF-kB) and the protein kinase-induced p38 mitogen (p38 MAPK). All inflammatory parameters were assessed 4 hours after pleurisy induction. In all of these work procedures, dexamethasone (Dex 0.5 mg / kg, ip) was used as anti-inflammatory reference drug. For statistical analysis, we used the analysis of variance (ANOVA) followed by Newman-Keuls post-hoc test. p values <0.05 were considered significant. The CE, Hex, Ac and MeOH fractions and the isolated compound, PC, were capable of reducing leukocyte migration into the pleural cavity due the inhibition of neutrophils, besides the exudation (p <0.05). With the exception of CE that was not able to inhibit exudation in any of the tested doses (p> 0.05). Further, the CE, fractions and PC significantly inhibited MPO (p <0.01) and ADA (p <0.01) activities and NOx concentrations (p <0.01), also the cytokines TNF-a (p <0.01) and IL-1ß (p <0.01). The isolated compound PC was able to inhibit mRNA expression of TNF-a (p <0.01), IL-1ß (p <0.01) and iNOS (p <0.01). Finally, the PC compound significantly inhibited the phosphorylation of the p65 subunit of NF-kB (p <0.01) and p38 MAPK (p <0.05). The results of this study showed that P. sabulosa has important anti-inflammatory activity and this effect may be, at least in part, attributed to its major compound that shown inhibitory activity against two important signaling cascades in the inflammatory process produced by carrageenan, the NF-?B and p38 MAPK.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2012 / Made available in DSpace on 2013-06-26T00:21:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 313319.pdf: 2559033 bytes, checksum: e7f1152cdbe5cf86b55da1feecfe3a6b (MD5) / Introdução: O gênero Esenbeckia (Rutaceae) compreende aproximadamente 30 espécies identificadas, nativas de regiões tropicais, tais como México e Brasil, incluindo principalmente os Estados brasileiros de São Paulo, Bahia, Minas Gerias, Goiás e Mato Grosso do Sul. Estudos in vivo e in vitro demonstraram que plantas deste gênero apresentam propriedades anti-inflamatórias. Objetivos: Avaliar o efeito anti-inflamatório do extrato bruto hidroalcoólico (EBH), frações e compostos isolados da Esenbeckia leiocarpa Engl., administrada por via intraperitoneal (i.p.), no modelo da pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. Metodologia: As cascas secas da E. leiocarpa Engl. foram maceradas e extraídas com etanol para obter o EBH. A partir deste extrato, foram obtidas as frações n-hexano (Hex), acetato de etila (AcOEt), aquosa (Aq) e alcaloídica (Alc), sendo que esta última fração foi extraída com éter etílico originando duas subfrações: uma alcaloídica polar (AlcP) e outra apolar (AlcAp). O composto majoritário, o alcaloide indólico dihidrocorinanteol (DHC), foi isolado da subfração AlcAp. No protocolo para identificar e elucidar a estrutura do composto majoritário presente na E. leiocarpa Engl., foram utilizadas análises de eletroforese capilar, características físicas, infravermelho, ressonância magnética nuclear (RMN de 1H e 13C) e espectrometria de massas. Em outro protocolo, o composto isolado identificado foi modificado por reações de substituição nucleofílica, originando os análogos acetil, p-metil, benzoil, p-metoxi e p-cloro, que foram utilizados em um estudo de relação estrutura-atividade, avaliando-se o efeito destes compostos sobre leucócitos, exsudação e atividade da enzima mieloperoxidase (MPO). No modelo da pleurisia induzida pela carragenina, foram utilizados camundongos albinos Swiss e foram avaliados os seguintes parâmetros inflamatórios no lavado da cavidade pleural: leucócitos, exsudação, atividades das enzimas MPO e adenosina-deaminase (ADA), e as concentrações de nitrito/nitrato (NOx), interleucina 1-beta (IL-1?) e fator de necrose tumoral-alfa (TNF-?). Neste estudo, diferentes grupos de animais foram tratados com EBH (10 - 100 mg/kg), Hex (10 - 50 mg/kg), AcOEt (10 - 50 mg/kg), Aq (2 - 10 mg/kg), Alc (1 - 10 mg/kg), AlcP (0,5 - 5 mg/kg), AclAp (0,1 - 2 mg/kg) ou DHC (0,1 - 0,5 mg/kg), administrados (i.p.) 0,5 h antes da carragenina (1%) administrada por via intrapleural (i.pl.). Os parâmetros inflamatórios foram avaliados 4 h após. Para avaliar a exsudação, os animais foram tratados previamente com solução Azul de Evans (25 mg/kg, i.v.). Diferenças estatísticas entre os grupos foram determinadas pela análise dos testes de variância (ANOVA), Newman-Keuls e/ou t de Student. Valores de P < 0,05 foram considerados significativos. Além disso, realizou-se também o estudo de toxicidade do EBH por meio da análise da curva de sobrevida. Neste estudo, diferentes grupos de animais receberam diferentes doses do EBH (250 mg/kg, 500 mg/kg e 1000 mg/kg, i.p.) e o número de óbitos foi observado diariamente, durante dez dias. Resultados: EBH da E. leiocarpa Engl. (25 - 100 mg/kg), Hex (25 - 50 mg/kg), AcOEt (25 - 50 mg/kg), Aq (5 - 10 mg/kg), Alc (5 - 10 mg/kg), AlcP (1 - 5 mg/kg), AlcAp (0,5 - 2 mg/kg) e DHC (0,25 - 0,5 mg/kg) inibiram: leucócitos, neutrófilos, mononucleares e exsudação (P < 0,05). Da mesma forma, EBH (25 mg/kg), Hex (50 mg/kg), AcOEt (50 mg/kg), Aq (5 ou 10 mg/kg), Alc (10 mg/kg), AlcP (1 ou 2 mg/kg), AlcAp (0,5 mg/kg) e DHC (0,25 mg/kg) inibiram as atividades das enzimas MPO e ADA, além das concentrações de NOx, IL-1? e TNF-? (P < 0,05). Em relação à toxicidade, observou-se que a dose de 250 mg/kg demonstrou-se segura, pois resultou em 100% de sobrevida dos animais após 10 dias de observação, enquanto que nas doses de 500 e 1000 mg/kg todos os animais morreram no primeiro dia. Observou-se também que o composto DHC apresentou melhor efeito anti-inflamatório do que seus análogos: acetil, p-metil, benzoil, p-metoxi e p-cloro, uma vez que somente o DHC inibiu ambos os parâmetros inflamatórios estudados: leucócitos e exsudação (P < 0,01). Além disso, os análogos do DHC inibiram a atividade da MPO (P < 0,01). Conclusões: Os resultados demonstraram que: 1) E. leiocarpa Engl. possui importante atividade anti-inflamatória; 2) este efeito ocorre principalmente em relação à inibição da migração leucocitária e da exsudação; 3) a inibição destes parâmetros inflamatórios está relacionada também à inibição de NOx, IL-1? e TNF-?; 4) a inibição da atividade da MPO e ADA está relacionada a diminuição de leucócitos ativados; 5) as doses utilizadas nos experimentos parecem ser seguras; 6) o DHC foi mais efetivo do que os seus análogos neste modelo de inflamação, e as alterações físico-químicas promovidas no DHC, após a inserção dos substituintes acetil, p-metilbenzoil, benzoil, p-metoxibenzoil e p-clorobenzoil na hidroxila do carbono 17, determinam a efetividade do efeito anti-inflamatório.<br> / Abstract : Introduction: Esenbeckia genus (Rutaceae) includes approximately 30 species native from tropical regions such as Mexico and Brazil, mainly in the Brazilian states of Sao Paulo, Bahia, Minas Gerais, Goias and Mato Grosso do Sul. Studies using in vivo and in vitro models have demonstrated that plants of this genus have anti-inflammatory properties. Objectives: To evaluate the anti-inflammatory effect of the crude hydroalcoholic extract (CHE), fractions and compounds isolated from Esenbeckia leiocarpa Engl., administered intraperitoneally (i.p.) in the carrageenan-induced murine model of pleurisy. Methodology: The dried E. leiocarpa Engl. bark was macerated and extracted with ethanol to obtain the CHE. The n-hexane (Hex), ethyl acetate (AcOEt), aqueous (Aq) and alkaloids (Alk) fractions were obtained from CHE, and two alkaloid subfractions, polar (polar Alk) and nonpolar (nonpolar Alk) were obtained from the Alk fraction using an ethyl ether extraction. The major compound, the indole alkaloid dihydrocorinantheol (DHC) was isolated from nonpolar Alk subfraction. Analysis of capillary electrophoresis, physical characteristics, infrared, nuclear magnetic resonance (1H and 13C NMR) and mass spectrometry were used to identify and elucidate the structure of the major compound present in the E. leiocarpa Engl. In another protocol, the isolated compound was subjected to chemical structural modifications by nucleophilic substitution reactions to develop the acetyl, p-methyl, benzoyl, p-methoxy and p-chloro analogs, which were used in a study of structure-activity relationships to evaluate the effect of these compounds upon leucocytes and exudation concentrations and myeloperoxidase (MPO) activity. Swiss mice were used in the carrageenan-induced murine model of pleurisy and the following inflammatory parameters were evaluated the fluid of the pleural cavity: leukocytes, exudation, MPO and adenosine deaminase (ADA) activities, and the concentrations of nitrite/nitrate (NOx), interleukin-1 beta (IL-1â) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-á). In this study, different groups of animals were pretreated with CHE (10 - 100 mg/kg), Hex (10 - 50 mg/kg), AcOEt (10 - 50 mg/kg), Aq (2 - 10 mg/kg), Alk (1 - 10 mg/kg), polar Alk (0.5 - 5 mg/kg), nonpolar Alk (0.1 - 2 mg/kg) or DHC (0.1 - 0.5 mg/kg) administered (i.p.) 0.5 h before carrageenan (1%) which was administered by intrapleural route (i.pl.). The inflammatory parameters were evaluated after 4 h. To evaluate the exudation, the animals were pretreated with Evans blue dye (25 mg/kg, i.v.). Statistical differences between groups were determined by analysis of variance test (ANOVA), Newman-Keuls and/or Student#s t test. P < 0.05 was considered significant. Further, the toxicity study of CHE we performed by analyzing the survival curve. In this study, different groups of animals received different doses of EBH (250 mg/kg, 500 mg/kg and 1000 mg/kg, i.p.) and the number of deaths was observed daily for 10 days. Results: CHE (25 - 100 mg/kg), Hex (25 - 50 mg/kg), AcOEt (25 - 50 mg/kg), Aq (5 - 10 mg/kg), Alk (5 - 10 mg/kg), polar Alk (1 - 5 mg/kg), nonpolar Alk (0.5 - 2 mg/kg) and DHC (0.25 - 0.5 mg/kg) inhibited leukocytes, neutrophils, mononuclears and exudation (P < 0.05). Also, CHE (25 mg/kg), Hex (50 mg/kg), AcOEt (50 mg/kg), Aq (5 or 10 mg/kg), Alc (10 mg/kg), polar Alk (1 or 2 mg/kg), nonpolar Alk (0.5 mg/kg) and DHC (0.25 mg/kg) inhibited the MPO and ADA activities, and the concentrations of NOx, IL-1â and TNF-á (P < 0.05). In relation to toxicity, it was observed that the dose of 250 mg/kg of CHE was safe because its administration resulted in 100% survival of the animals after 10 days, whereas at the doses of 500 mg/kg and 1000 mg/kg all animals died in the first day of observation. Furthermore, the DHC alkaloid showed better anti-inflammatory effect than its analogs: acetyl, p-methyl, benzoyl, p-methoxy and p-chloro, because only the DHC inhibits both studied inflammatory parameters: leukocytes and exudation concentrations (P < 0.01). Further, the DHC analogs inhibited MPO activity (P < 0.01). Conclusions: The results showed that: 1) E. leiocarpa Engl. has important anti-inflammatory activity; 2) this effect occurs mainly in relation to inhibition of leukocyte migration and exudation concentrations; 3) the Inhibition of these inflammatory parameters is also related to NOx, IL-1â and TNF-á inhibition; 4) the inhibition of MPO and ADA activities are associated with decrease of activated leukocytes; 5) the doses used in the experiments of this study appear to be safe; 6) DHC was more effective than its analogs in this model of inflammation, and the physicochemical modifications in the DHC after insertion of the acetyl, p-methylbenzoyl, benzoyl, p-methoxybenzoyl and p-chlorobenzoyl substituents radicals on the hydroxyl group at carbon 17 determine the effectiveness of the anti-inflammatory action.