O objetivo deste trabalho foi avaliar a intensidade das reações inflamatórias do tecido conjuntivo subcutâneo de ratos, ao implante dos cimentos Sealer 26 e óxido de zinco e eugenol protegidos ou não com 2 diferentes tipos de própolis. Foram utilizados 39 ratos, nos quais, após anestesia geral e tricotomia da região dorsal foram realizadas duas incisões longitudinais. Após divulsão do tecido subcutâneo , foram implantados 3 tubos de polietileno, sendo 2 na região anterior 1 na região posterior, com uma distância de 5 cm entre eles. Cinquenta e quatro tubos foram preenchidos com cimento de óxido de zinco e eugenol consistente. Desses 54 tubos, 36 sofreram aplicação de própolis em suas extremidades recobrindo a área do cimento. Em 18, foi aplicada a própolis BRP1 e nos restantes a própolis MAR.Os demais tubos não sofreram tratamento nas extremidades. Outros 54 tubos foram preenchidos com Sealer 26, também consistente. Identicamente aos do grupo anterior, 36 deles tiveram as extremidades recobertas com própolis sendo metade com a própolis BRP1 e a outra com a própolis MAR. Os outros 18 não receberam aplicação da própolis. Os períodos experimentais foram de 7, 30 e 60 dias com 13 animais em cada período, sendo 12 com 3 tubos com os materiaisexperimentais e um que foi usado como controle, a que recebeu 4 tubos, 2 com guta-percha e 2 vazios. Após a morte dos animais, preparo das peças e obtenção dos cortes foram analisados os eventos microscópicos estipulando escores a cadasituação apresentada. A aplicação das própolis recobrindo os cimentos não alterou o comportamento dos mesmos, a própolis tipo MAR mostrou resultados mais favoráveis do que a BRP1, porém, sem diferença estatística significante entre elas, o óxido de zinco e eugenol apresentou melhor comportamento biológico do que o Sealer 26. Os cimentos quando permaneceram nos tubos comportaram se melhor do que quando extravasados. / This research aims to evaluate the intensity of inflammatory reaction in conjunctive subcutaneous tissue of rats to the sealer 26 and zinc-oxide-eugenol either sheltered or not with two different sorts of propolis. Two incisions were performed in 39 rats after anesthesia and trichotomy of the dorsal region. Three polyethylene tubes were implanted within five centimeters from each other. Fifty-four tubes were filled with zinc-oxide-eugenol sealer consistently. Thirty-six out of these fifty-four tubes were also spread with propolis in their borders sheltering the sealer area. The BRP1 propolis was sheltered in eighteen of them and MAR propolis was spread on the remaining tubes. The other tubes were not spread on their borders. Other fifty-four tubes were also filled with Sealer 26 consistently. Like the other group, thirty-six tubes were covered with propolis in their borders where half BRP1 propolis was used and the remaining tubes were covered with MAR propolis. The other eighteen tubes were not spread on their borders. The experimental periods were 7, 30 and 60 days with thirteen animals in each period which twelve animals had three tubes with experimental materials and one animal had four tubes which two tubes were filled with gutta-percha and two empty tubes considered as a control group. After the animals\' death, biopsy was performed removing the tubes. The tissues were prepared histologically and after obtaining the cut off, these were analyzed to the microscopic events specifying score. The application of propolis covering the sealers did not change their behavior. MAR propolis showed better results than the BRP1 propolis, notwithstanding they showed no statistic significant difference. Zinc-oxide-eugenol showed a better biologic behavior than Sealer 26. Both sealers behaved better when kept in the tubes than then they spilled out.

Úlceras crônicas são algumas das principais causas de morbi-mortalidade, devido a sua alta probabilidade de infecção e sepse; por esse motivo, elas tem um impacto significativo na saúde pública e no dispêndio de recursos com assistência médica. Úlceras (ou feridas) são caracterizadas por uma perda de substância tecidual, provocando a descontinuidade do tecido cutâneo e adjacentes, alterando a estrutura anatômica e fisiológica das regiões afetadas. As mais comuns são: cirúrgicas, venosas (de estase, varicosa), arteriais, neurotróficas (hanseníase, diabetes, alcoolismo), por pressão ou mistas. A membrana de celulose bacteriana (CB) é utilizada como curativo temporário para tratamento dessas úlceras de pele de diversas origens, devido à excelente conformação no corpo, manutenção da umidade local, redução da dor e aceleração da regeneração do epitélio. A própolis tem mostrado possuir efeitos antibacteriano, antifúngico, antiviral, anti-inflamatório, hepatoprotetor, antioxidante, antitumoral e imunomodulatórios. Outro tratamento para úlceras muito utilizado é a laserterapia de baixa intensidade (LBI), cujos efeitos regenerativos são comprovados; além de promover a cicatrização de úlceras, promove o alívio da dor, melhora da circulação local e diminuição da inflamação. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia da aplicação de curativos temporários de CB pura ou com própolis associados ou não a aplicação de LBI em indivíduos que apresentavam úlceras crônicas. A amostra conteve 8 pacientes, num total de 12 úlceras, divididos aleatoriamente em 05 grupos: Grupo Membrana de CB Pura (G1), Grupo Membrana de CB com Própolis (G2), Grupo Laser (G3), Grupo Membrana de CB Pura + Laser (G4), Grupo de Membrana de CB com própolis + Laser (G5). Sessenta e sete por cento das úlceras tratadas evoluíram para cicatrização total, apresentando aumento da velocidade de cicatrização em comparação com o tempo de existência da úlcera. Do restante das úlceras tratadas, somente uma teve sua área final aumentada devido a fatores como diabetes descompensada e infecção bacteriana; as outras tiveram uma grande evolução e chegaram próximas da reepitelização total. Todos os tratamentos se mostraram efetivos no tratamento de úlceras crônicas, porém o diferencial na cura foi a utilização de membranas de CB pura e com própolis. / Chronic skin ulcers are a major source of morbidity-mortality due to their high probability of infection and sepsis; for this reason, they have a significant impact on public health and the expenditure of healthcare resources. Skin ulcers (or wounds) are characterized by a loss of tecidual substance, interrupting cutaneous tissue and changing their anatomic and physiologic structures. The most commom ulcers are: cirurgical, venous, arterials, neurotrophics, pressure ulcers or mixed factors. Bacterial cellulose (BC) membrane is used as a temporary curative for the treatment of several types of skin ulcers due to its amazing body conformation, keeping the humidity, reducing the pain and accelerating the ephitelium healing process. Propolis have shown antimicrobial, antifungal, antiviral, anti-inflammatory, hepatoprotective, antioxidant, antitumor and immunity modulation effects. Another treatment for skin ulcers is low-level laser therapy (LLLT), who have regenerative effects, and it also promoves the ulcer cicatrization, pain relief, better local circulation and reduces the inflammation. The aim of this study was to evaluate the effectiveness of pure BC and propolis BC membrane curative application, associated or not to LLLT in individuals who had chronic ulcers. The sample contained 8 patients and 12 ulcers, randomly divided in 5 groups: Pure BC Membrane Group (G1), Propolis BC Membrane Group (G2), Laser Group (G3), Pure BC Membrane + Laser Group (G4) and Propolis BC Membrane + Laser (G5). Sixty seven per cent of the treated ulcers progressed to full cicatrization, increasing the speed of cicatrization when compared to the existent period of the ulcer. The resto of treated ulcers had a great evolution and got close to the total reepithelization, except for one that had increased its final area because of decompensated diabetes and bacterial infection. All treatments had shown effectiveness for the treatment of chronic skin ulcers, however the differential on healing process was the use of pure BC membranes and propolis BC membranes.

A própolis vermelha brasileira tem atraído interesses científicos e econômicos devido às suas variadas atividades biológicas. Este produto natural possui composição química diferente de acordo com a região na qual é encontrado, sendo necessária uma completa caracterização química para cada tipo de própolis, a fim de se elucidar os compostos presentes e possivelmente responsáveis por estas atividades. Dentre as atividades biológicas mais investigadas, destacam-se as atividades antioxidante e antitumoral. Neste trabalho, buscou-se caracterizar quimicamente o extrato hidroalcoólico da própolis vermelha brasileira, avaliar as atividades antioxidantes e antitumorais, além de investigar o padrão proteico de células tumorais de laringe tratadas e não tratadas com extratos da própolis vermelha através da análise proteômica comparativa. A caracterização química realizada através de espectrometria de massas com ionização por electrospray mostrou que a própolis apresenta moléculas complexas, principalmente isoflavonoides, compostos com importantes atividades biológicas. Os extratos hidroalcoólicos obtidos a partir da própolis vermelha revelaram um significante conteúdo de polifenóis associados a uma habilidade de sequestrar radicais livres DPPH·. Os extratos também apresentaram atividades superóxido-dismutase-/ike e catalase-/ike, indicando que podem exercer um papel fundamental na manutenção fisiológica do equilíbrio redox quando em um organismo. A atividade citotóxica dos extratos da própolis foi avaliada nas linhagens tumorais Hep-2, HeLa e não tumoral Hek-293, sendo que os valores de IC50 foram menores para a linhagens tumorais em relação a não tumoral. Desta forma, sugere-se uma seletividade da própolis vermelha quanto às linhagens tumorais. A análise proteômica, usando eletroforese bidimensional associada à cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrômetro de massa, permitiu a comparação dos mapas proteicos da linhagem Hep-2, na ausência ou presença de extratos da própolis vermelha, nas concentrações 6 f.1g/mL (não citotóxica) e 120 f.lg/mL (IC50). A excisão manual de 325 spots foi efetuada nos géis 2D- SDS-PAGE, em que 177 proteínas foram identificadas. Estas proteínas foram relacionadas com diversos processos metabólicos e estruturais como produção e conversão de energia, transporte e metabolismo de carboidratos, modificação pós-traducional, reciclagem de proteínas e chaperonas, proteínas do citoesqueleto, proteínas de reparo, entre outros. Das proteínas identificadas com expressão diferencial, cinco apresentaram expressão reduzida na presença do extrato da própolis, este em sua maior concentração (120 f.lg/mL). Apenas duas proteínas identificadas neste estudo mostraram expressão aumentada na concentração não citotóxica (6 f.lg/mL) do extrato da própolis vermelha. Os resultados da proteômica comparativa mostram que a própolis interfere em um conjunto de eventos intracelulares e, assim, passa a ser uma candidata promissora para inibir o crescimento celular e contribuir para os diferentes passos relacionados com o processo de carcinogênese. Embora os mecanismos moleculares pelos quais a própolis vermelha interaja com o metabolismo das células permaneçam ainda desconhecidos, estudos adicionais servirão para melhor elucidar as atividades antioxidantes e antitumorais aqui observadas. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Brazilian red propolis has attracted scientific and economic interests because of its varied biological activities. This natural product has different chemical compositions according to the region in which it is found, requiring a robust chemical characterization to elucidate the compounds responsible for the activities in each type of propolis investigated. So far antioxidant and antitumor properties are amongst the most studied biological activities. This study aimed to characterize chemically the hydroalcoholic extract of Brazilian propolis from the state of Sergipe, evaluate the antitumor and antioxidant activities, and to investigate the pattern o f proteins in tumor cells o f the larynx treated o r not with extracts of propolis through comparative proteomic analysis. The chemical characterization by mass spectrometry with electrospray ionization showed that propolis presents complex molecules, especially isoflavones, which has important biological and antioxidant capacity. The hydroalcoholic extracts obtained from propolis revealed a significant content of polyphenols associated with the ability to scavenge DPPH. radicais. The extracts also showed significant activities for superoxide dismutase-like and catalase-like, indicating an important role in maintaining physiological redox equilibrium, decreasing oxidative stress. Cytotoxic activity was assessed for tumor cell !ines Hep-2, HeLa and non-tumor cell line Hek-293, showing IC50 values greater for Hek-293 compared to Hep-2 and HeLa cells, which suggests a selectivity of propolis for the tumor !ines. The proteomic analysis using two-dimensional electrophoresis associated with high performance liquid chromatography coupled with mass spectrometer allowed the comparison of the protein maps of Hep-2 cell line in the absence or presence of propolis extracts in concentrations of 6 f.lg/mL (not cytotoxic) and 120 f.lg/mL (IC50). 325 spots were manually excised from the gels 2D SDS-PAGE and 177 proteins were identified. These proteins have been linked to various structural and metabolic processes, such as production and energy conversion, transport and carbohydrate metabolism, post-translational modification, protein tumover and chaperones, cytoskeletal proteins, repair proteins, among others. From the identified proteins that showed differential expression five were downregulated in the presence of propolis extract in the highest concentration (120 J.lg/mL). Only . two proteins identified in this study showed increased expression in the no cytotoxic concentration (6 J.tg/mL) ofthe red propolis extract. The results of comparative proteomic showed that the propolis interacts with a series of intracellular events and hence becomes a promising candidate to inhibit cellular growth and contribute to the different steps related to the process of carcinogenesis. Although the molecular mechanisms by which propolis interacts with the metabolism of the cells remain unknown, additional studies will better elucidate the antitumor and antioxidant activities here observed.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:46:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:56:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 07966.pdf: 4481327 bytes, checksum: ae11c93769fa67fceb5ed128248bcacb (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP / FAPESP:00/00516-7

Orientador: Yong Kun Park / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-08T04:20:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moraes_CleberSilveira_M.pdf: 1307304 bytes, checksum: bcd25bcdff7cb297e4b623a9f7e51872 (MD5) Previous issue date: 2007 / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

O objetivo deste trabalho foi produzir hidroxiapatita (HA) contendo diferentes tipos de própolis de origem brasileira e avaliar a possível atividade antimicrobiana dos materiais. Os extratos etanólicos de própolis (EEP) vermelha, verde e marrom foram obtidos em solução alcoólica 80%. EEP verde e vermelha (8 mg/mL e 20 mg/mL) foram incorporados ao material a 10% (m/v) via atomização (spray drying), obtendo-se HA-GP8, HA-GP20, HA-RP8 e HA-RP20. Os EEP e os materiais foram caracterizados quanto ao conteúdo de compostos fenólicos e flavonoides totais. A atividade antimicrobiana dos EEP foi avaliada por difusão em ágar, concentração inibitória mínima (CIM) e bactericida mínima (CBM) frente à Staphylococcus aureus (S. aureus), Staphylococcus epidermidis (S. epidermidis) e Escherichia coli (E. coli). Os pós de HA incorporados com própolis foram avaliados frente à S. aureus por contagem de colônias bacterianas em placa, CIM e CBM. A caracterização dos materiais foi realizada por difração de raios X (DRX), espectroscopia na região do infravermelho com transformada de Fourier (FTIR) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). A citotoxicidade foi determinada pelo cálculo da viabilidade celular, realizada pelo método de incorporação do vermelho neutro. Para os extratos, o conteúdo de fenólicos variou entre 278,3 e 325,6 mg EAG/g ES. EEP vermelha mostrou maior conteúdo de flavonoides (112,4 mg EQ/g ES) em relação aos outros EEP (48,4 e 52,3 mg EQ/g ES), apresentando maior atividade inibitória (CIM) frente à S. aureus e S. Epidermidis (12,5 µg/mL), comparado ao EEP verde (100 e 200 µg/mL) e marrom (200 µg/mL). Para CBM, os EEP vermelha e verde foram mais efetivos (800 µg/mL) comparado ao EEP marrom (1600 µg/mL), frente às mesmas bactérias. Entretanto, não foi observada atividade frente à E coli. A caracterização dos pós incorporados ou não com própolis apresentou estrutura cristalina e morfologia aparentemente esférica, indicando diminuição no grau de aglomeração com a adição de própolis. FTIR indicou a presença de grupos funcionais característicos para HA e própolis. Os materiais apresentaram alta liberação de fenólicos (228,3 a 327,6 mg EAG/g ES) e menores quantidades de flavonoides (14,0 a 35,8 mg EQ/g ES), sendo as maiores quantidades de flavonoides atribuída à HA contendo própolis vermelha. Foi verificado efeito bactericida a partir de 0,5 h (HA-RP20 e HA-GP20) e 1 h (HA-RP8 e HA-GP8) e menor atividade inibitória (CIM) para HA-GP20 e HA-GP8 (175,4 e 182,0 µg/mL) e para HA-RP20 e HA-RP8 (51,7 e 66,8 µg/mL), comparado aos EEP. Entretanto, observou-se maior atividade bactericida (CBM) para HA-GP20 e HA-GP8 (701,5 e 728,0 µg/mL) e para HA-RP20 e HA-RP8 (206,5 e 267,0 µg/mL), em relação aos EEP. O ensaio de citotoxicidade mostrou valores para IC50 (concentração que reflete 50% da viabilidade celular) de 387,1 e 84,8 µg/mL para as amostras HA-GP8 e HA-RP8, respectivamente. Considerando os resultados obtidos neste trabalho, sugere-se que a HA incorporada com própolis (HA-GP8 e HA-RP8) pode ser utilizada como possível agente antimicrobiano, inibindo o crescimento de S. aureus, respeitando-se os valores máximos para IC50. Entretanto, não poderia ser utilizada como agente bactericida, uma vez que nestas condições os materiais apresentaram efeito citotóxico. / The aim of this study was to produce hydroxyapatite (HA) containing different types of propolis of Brazilian origin and to evaluate the possible antimicrobial activity materials. The ethanolic extracts of red, green and brown propolis (EEP) were obtained in alcoholic solution 80%. Green and red EEP (8 mg / mL and 20 mg / mL) were incorporated into the 10% (m/v) via atomization (spray drying), obtaining HA-GP8, HA-GP20, HA-RP8 and HA -RP20. EEP and materials were characterized regarding the content of phenolic compounds and total flavonoids. The antimicrobial activity of the EPS was evaluated by diffusion in agar, minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal (MBC) against Staphylococcus aureus (S. aureus), Staphylococcus epidermidis (S. epidermidis) and Escherichia coli (E. coli). The HA powders incorporated with propolis were evaluated against S. aureus by plate colony counting , CIM and CBM. Materials characterization was made by X-ray diffraction (XRD), Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR) and Scanning Electron Microscopy (SEM). The cytotoxicity of the materials was determined by cell viability calculation, which was made by the neutral red incorporation method. For extracts, phenolic content ranged from 278.3 to 325.6 mg EAG/g ES. The red EEP showed a higher flavonoid content (112.4 mg EQ/g ES) than the other EEP (48.4 and 52.3 mg EQ/g ES), showing a higher inhibitory activity (MIC) against S. aureus and S. epidermidis (12.5 µg/mL) compared to green EEP (100 and 200 µg/mL) and brown (200 µg/mL). For CBM, red and green EEP were more effective (800 µg/mL) compared to brown EEP (1600 µg/mL) against the same bacteria. However, no activity was observed against E coli. The characterization of the powders incorporated or not with propolis presented crystalline structure and apparently spherical morphology, indicating a decrease in the degree of agglomeration with the addition of propolis. FTIR indicated the presence of functional groups characteristic for HA and propolis. The materials presented high phenolic release (228.3 to 327.6 mg EAG/g ES) and lower amounts of flavonoids (14.0 to 35.8 mg EQ/g ES), with the highest amounts of flavonoids attributed to HA containing red propolis. The bactericidal effect for all materials was observed within the interval of 0.5 (HA-RP20 and HA-GP20) to 1 hour (HA-RP8 and HA-GP8). The materials showed lower inhibitory activity (MIC) for HA-GP20 and HA-GP8 (175, 4 and 182.0 µg/mL) and for HA-RP20 and HA-RP8 (51.7 and 66.8 µg/mL) compared to EEP. However, higher bactericidal activity (MBC) was observed for HA-GP20 and HA-GP8 (701.5 and 728.0 µg/mL) and for HA-RP20 and HA-RP8 (206.5 and 267.0 µg/mL) when compared to the EEP. The cytotoxicity assay showed values for IC50 (concentration that reflects 50% of cellular viability) of 387.1 and 84.8 µg/mL for HA-GP8 and HA-RP8 samples, respectively. Considering the results obtained in this work, it is suggested that HA incorporated with propolis (HA-GP8 and HA-RP8) can be used as a possible antimicrobial agent, inhibiting the growth of S. aureus, respecting the maximum values for IC50. However, it could not be used as a bactericidal agent, since under these conditions the materials had a cytotoxic effect.

Orientador: Sérgio Roberto Peres Line / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-23T22:35:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mofatto_LucianaSouto_D.pdf: 2939657 bytes, checksum: 161ea0e68091cc76485826424b41aab0 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Os G-quadruplexes são estruturas secundárias de DNA altamente organizadas, constituídas por sequências ricas em guaninas capazes de formar tétrades ligadas por pontes de hidrogênio. Essas sequências são capazes de modular a transcrição gênica e o splicing alternativo de éxons. Além disso, estudos também mostraram que os G-quadruplexes estão presentes na região promotora de oncogenes (como c-MYC) e nas regiões terminais dos telômeros, indicando que o G-quadruplex pode ser um possível alvo terapêutico contra o câncer. A metilação do DNA é uma modificação bioquímica que frequentemente aparece na posição C5 de citosinas da sequência do dinucleotídeo 5'- citosina guanina - 3' (CpG) em células eucarióticas. As alterações no padrão normal de metilação do DNA estão associadas a situações patológicas, como inflamação e câncer. Assim, a metilação anormal de citosinas pode ser responsável pela indução de câncer através de mutações pontuais em genes supressores de tumor presentes em células somáticas e germinativas. Este trabalho propôs estudar a estrutura e estabilidade de Gquadruplexes de DNA e sua influência na metilação do DNA. Neste intuito foram realizadas análises para verificar se a formação de G-quadruplex no DNA dupla fita poderia influenciar no padrão de metilação de citosinas, utilizando oligonucleotídeos (ricos em guaninas e com sítio para metilação) que mimetizam a fita dupla de DNA. Também foi estudado: (1) a estabilidade de G-quadruplexes contendo mais de quatro tríades de G e a possível formação de G-quadruplexes em DNA fita dupla em ensaio "in vitro"; (2) a interação entre extratos de própolis e G-quadruplexes de DNA e (3) o efeito de estabilizadores de G-quadruplex (TMPyP4 e 360A) no padrão de metilação do DNA em cultura de linhagens de células normais e tumorais / Abstract: G-quadruplexes are highly organized secondary structures of DNA, consisting of guanine rich sequences that form tetrads linked by hydrogen bonds. These sequences can modulate gene transcription and the alternative splicing of exons. Studies also showed that G-quadruplexes are present in the promoter of oncogenes (such as c-MYC) and terminal telomere regions, suggesting that the Gquadruplex can be a therapeutic target in cancer. DNA methylation is a frequent biochemical modification that appears in C5 position of cytosine in the dinucleotide sequence 5' - cytosine guanine - 3' (CpG) in eukaryotic cells. Changes in the normal patterns of DNA methylation are frequently associated with patologic situations, such as inflammation and cancer. Abnormal methylated cytosine may be responsible for induction of cancer due to mutations in tumor suppressor genes of somatic and germline cells. The aim of this study was to analyze the structure and stability of Gquadruplexes of DNA and its influence on DNA methylation. It was verified if Gquadruplex formation of double-stranded DNA could influence the pattern of cytosine methylation, using oligonucleotides (sequences with methylation site and rich in guanine) that simulated double-stranded DNA. We also evaluated: (1) the stability of G-quadruplexes containing more than four triads of guanine and the possible formation of G-quadruplexes in double-stranded DNA by "in vitro" test; (2) the interaction between propolis ethanolic extracts and DNA G-quadruplexes and (3) the effect of G-quadruplex ligands (TMPyP4 and 360A) for DNA methylation in normal and tumor cell lines / Doutorado / Histologia e Embriologia / Doutora em Biologia Buco-Dental

Orientadores: Pedro Luiz Rosalen, Cínthia Pereira Machado Tabchoury / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-26T11:28:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paula-Eduardo_LailaFacinde_M.pdf: 1396217 bytes, checksum: ee32ae3fccb5fc73fe047b8152a78b6e (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Os produtos naturais, comprovadamente, têm sido uma fonte promissora para descoberta de novos compostos bioativos. Dentre eles, a própolis coletada por abelhas Apis mellifera possui atividades biológicas descritas na literatura como anticárie, antibacteriana, anti-inflamatória, entre outras. Entretanto, a maioria dos estudos sobre própolis se refere àquelas coletadas por A. mellifera e pouco se tem conhecimento de outras, como a geoprópolis, produzida por abelhas sem ferrão do gênero Melipona. Em estudos recentes, a geoprópolis apresentou promissoras atividades antimicrobiana e anti-inflamatória, porém estas pesquisas ainda não evidenciaram quais as substâncias responsáveis por tais ações biológicas, especialmente contra o biofilme oral cariogênico. Portanto, o objetivo desse trabalho foi isolar e identificar o composto ativo da geoprópolis de Melipona scutellaris com atividade contra biofilme formado por Streptococcus mutans. Este objetivo foi alcançado por meio das seguintes metodologias: 1- fracionamento bioguiado do extrato etanólico da geoprópolis (EEGP); 2- isolamento e identificação do composto ativo; 3- avaliação do potencial anticárie do composto ativo utilizando modelo in vitro de inibição de biofilme oral monoespécie. Como resultado do fracionamento bioguiado foi isolado e identificado o composto nemorosona (C33H42O4, MM= 502 g/mol), uma benzofenona prenilada. A concentração inibitória mínima da nemorosona foi de 6,25 ¿ 12,5 ?g/mL e na concentração de 100 ?g/mL foi capaz de inibir em 95% a aderência do S. mutans em biofilme formado em microplacas de fundo côncavo. Em biofilme formado em discos de hidroxiapatita, a nemorosona na concentração 250 ?g/mL (0,50 mM) reduziu 65 % do peso seco, mais de 70% dos polissacarídeos e 48% da quantidade proteica além de diminuir a viabilidade bacteriana, quando comparada com o controle negativo (veículo, p<0,05). Estes resultados não diferiram estatisticamente da clorexidina a 0,12% (1,33 mM) (p>0,05). Portanto, concluímos que a nemorosona é um composto ativo isolado e identificado da geoprópolis com atividade antibiofilme de S. mutans com capacidade de alterar a composição bioquímica da matriz do biofilme de S. mutans, o que torna este composto promissor agente químico para o controle do biofilme oral / Abstract: Natural products have been demonstrated a promising source to discover new bioactive compounds. Among then, the propolis collected by Apis mellifera bees has biological activity described in the literature as anticairies, antimicrobial, anti-inflammatory, besides other activities. However, most of the studies on propolis refer to those collected by A. mellifera and little is known about others as geopropolis, which is collected by stingless bees of the genus Melipona. In recent studies, geopropolis presented promising antimicrobial and anti-inflammatory activities, but these studies have not revealed which is (are) the substance(s) responsible(s) for such biological activities, especially against the cariogenic oral biofilms. Therefore, the objective of this study was to isolate and identify the active compound from Melipona scutellaris geopropolis, which has activity against the biofilm formation by Streptococcus mutans. This goal was achieved by the following methodologies: 1- bioassay-guided fractionation of the goeporpolis ethanolic extract (EEGP); 2- isolation and identification of the active compound; 3- anticarie potential assessment of the active compound using an in vitro model of inhibition of the oral mono-species biofilm. As result of the bioassay-guided fractionation, the poliprenil benzophenone compound named nemorosone (C33H42O4, MW=502 g/mol) was isolated and identified. The nemorosone¿s minimum inhibitory concentration (MIC) was 6.25 ¿ 12.5 ?g/mL and the concentration of 100 ?g/mL was capable to inhibit by 95% the adherence of S. mutans¿s biofilm formed in U-bottom microtiter plates. In biofilm formed in hydroxyapatite disks, the nemorosone concentration of 250 ?g/mL (0.5 mM) reduced 65% of the dry weight, more than 70% of the polysaccharides and 48% of the protein content. In addition, it reduced the bacterial viability when compared to negative control (vehicle, p<0.05). These results did not differ statistically from chlorhexidine 0.12% (1.33 mM) (p> 0.05). Therefore, the conclusion is that nemorosone is the active compound isolated and identified from geopropolis with antibiofilm activity that is able to alter the biochemical composition of the S. mutans biofilm matrix, it makes this chemical compound promising to oral biofilm control / Mestrado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Mestra em Odontologia

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES.

Yes / Caffeic acid phenethyl ester (CAPE) is a polyphenolic active compound present in popular apiproduct, ‘propolis’ obtained from beehives. Though it has broad therapeutic capability, the bioavailability of CAPE is limited due to poor solubility. In this study, we report novel cocrystals of CAPE engineered using coformers such as caffeine (CAF), isonicotinamide (INIC), nicotinamide (NIC) with enhanced solubility and bioavailability of CAPE. The cocrystals were prepared by microwave-assisted cocrystallization and characterized using PXRD, DSC and Raman spectroscopy. PXRD and DSC confirm the successful formation and phase purity of CAPE-CAF, CAPE-INIC and CAPE-NIC cocrystals. Raman spectra of CAPE cocrystals complement these results in confirming the formation of novel crystalline phases. CAPE-NIC cocrystal was further subjected to X-ray crystallography to understand its molecular arrangement and hydrogen bonding in the crystal structure. The CAPE-NIC cocrystal structure is found to be stabilized by a rare 1,2-benzenediol-amide heterosynthon. Cocrystallization of CAPE with NIC improved its aqueous solubility and pharmacokinetic profile thereby demonstrating 2.76 folds escalation in bioavailability. / We thank UKIERI: UK-India Education and Research Initiative (TPR26) and EPSRC (EP/J003360/1, EP/L027011/1) for providing financial support during this study.