Orientador: Andrigo Barboza De Nardi / Coorientador: Paola Castro Moraes / Banca: Rafael Ricardo Huppes / Banca: Jorge Luiz Costa Castro / Banca: Bruno Watanabe Minto / Banca: Pamela Rodrigues Reina Moreira / Resumo: Enxertos cutâneos são segmentos da epiderme e derme completamente removido da região doadora e transferidos para o local receptor, sem a presença de pedículo vascular. O curativo compressivo é recomendado por otimizar o contato do enxerto com o leito da ferida. O sucesso da cicatrização dos enxertos depende de adequada angiogênese, e por serem desprovidos de pedículo vascular o procedimento cirúrgico pode ser comprometido. Assim, para evitar complicações o plasma rico em plaquetas (PRP) é uma substância que estimula a angiogênese e auxilia na reparação tecidual. Sendo assim, delineou-se um estudo a fim de avaliar a eficácia do gel de PRP associado com esponjas cirúrgicas favorecerem a integração do enxerto ao leito receptor nos modelos de enxertos em camada e malha. Foi realizado no Hospital Veterinário da UNESP, câmpus de Jaboticabal - SP, um estudo com 64 coelhos, separados em oito grupos, com oito animais, todos submetidos à técnica de cirurgia reconstrutiva para confecção de enxerto. Os grupos foram compreendidos em: Gprpc (gel de PRP sem associação da esponja cirúrgica no enxerto de camada), Gprpce (gel de PRP associado com esponja cirúrgica como forma de curativo no enxerto de camada), Gcc (solução fisiológica 0,9% sem associação da esponja cirúrgica no enxerto de camada), Gcce (solução fisiológica 0,9% associada com esponjas cirúrgicas no enxerto de camada), Gprpm (gel de plasma PRP sem associação da esponja cirúrgica no enxerto de malha), Gprpme (gel de PRP associado ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Skin grafts are segments of the epidermis and dermis completely removed from the donor region and transferred to the receptor site without the presence of vascular pedicle. Pressure dressing after surgery is recommended to optimize the contact of the graft to the wound bed, and allow proper angiogenesis. The success of the healing of the grafts depends on proper angiogenesis, and being devoid of vascular pedicle the surgical procedure may be compromised. Thus, to avoid complications platelet rich plasma (PRP) is a substance that has been investigated for having angiogenesis factors which stimulate and aid in tissue repair. Thus, it outlined a study to assess the efficacy of PRP gel employment associated with surgical sponges to improve the integration of the graft in the recipient bed models grafts mesh and tier. It was held at the Veterinary Hospital UNESP, campus of Jaboticabal - SP, a study of 64 rabbits, divided into eight groups with eight animals, all underwent reconstructive surgery technique for making graft. The groups were comprised of: Gprpc received PRP gel unassociated surgical sponge in the tier graft, Gprpce received PRP gel associated with surgical sponge as a way of dressing in tier graft, Gcc received 0.9% saline without association surgical sponge in tier graft, Gcce received 0.9% saline solution associated with surgical sponges in the tier graft, Gprpm received plasma PRP gel unassociated surgical sponge in mesh graft, Gprpme received PRP gel associated with surgical sponge as way of dressing in mesh graft, Gcm receive 0.9% saline solution without associated surgical sponge in mesh graft and Gcce receive 0.9% saline solution associated with surgical sponges in mesh graft. Evaluations were performed macroscopic lesions after three, seven, and 14 days of surgery. To evaluate the wound healing took place microscopic ev... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Marcia Rita Fernandes Machado / Banca: Carlos Roberto Daleck / Banca: Flávia Thomaz Verechia Pereira / Resumo: Neste estudo, implantou-se biomembrana de látex natural isolada e em conjunto com o extrato da pele de rã em feridas cutâneas (2,0 X 2,0 cm) na região dorsal de ratos com o intuito de se avaliar o processo de reparação tecidual no que se refere à biocompatibilidade, capacidade de reparação e possíveis complicações. Utilizou-se 60 ratos da linhagem Wistar, adultos, machos inteiros, divididos em grupos experimentais: grupo controle (GC), membrana de látex (GM), grupo óleo de rã (GO) e grupo membrana de látex e óleo de rã (GMO), cada um com 15 animais. Aos três, cinco, sete, 14 e 21 dias de pós-operatório, os animais foram eutanasiados mediante o emprego de uma dose elevada de tiopental sódico para avaliações macroscópicas, histológicas e histomorfométricas da região da lesão. No terceiro dia pós-operatório, em todos os grupos, as lesões apresentavam-se hiperemicas e não edematosas. No grupo controle havia inicio da presença de crostas e de tecido de granulação. Observou-se a presença de exudato amarelado e tecido de granulação nas lesões referentes aos grupos óleo e membrana + óleo, neste último, em menor quantidade. No quinto dia pósoperatório as lesões, de todos os grupos, apresentaram-se com as margens retraídas; no GC as crostas cobriram toda a lesão; no GM observou-se a presença de tecido de granulação nas margens da ferida; no GO verificou-se a presença de algumas crostas e aspecto hiperêmico com tecido de granulação, no grupo membrana + óleo o tecido de granulação foi intenso No sétimo dia de pósoperatório, verificou-se que a retração progrediu nas margens das lesões, além da presença de granulação vermelho brilhante e crostas, principalmente nos grupos GC, GM e GO Após este período houve espessamento das crostas e retração contínua, ainda com presença de tecido de granulação. / Abstract: In this study of the biomembrane of the natural latex and extract of the skin frog, isolated and together, where implanted utilized to replace a cutaneous rats in the dorsal region of the mice, with purpose of evaluation of the tissue repair process in regard of its biocompatility, scar formation ability and possible complication. Sixty Wistar mices adult and entire males were divided in four experimental groups: control group (GC), membrane of the latex group (GM), oil of the frog group (GO) and group membrane of latex with oil of the frog group (GMO), each one with 15 animals. The animals were euthanized at three, five, seven, 14 and 21 days of post operative, by use of an elevated dosage of sodium tiopental, followed by macroscopic, microscopic and stereologic evaluations of the area of the lesion. Macroscopically, in the third post operative day, in all of the groups, the lesions were hiperemic but were not edematous. In the control group there were present crusts and of granulation tissue. It was observed the presence of yellowish exudato and granulation tissue in the lesions to the groups oil and membrane with oil, in this last one, in smaller amount. In the 5th post operative day the lesions, of all the groups, came with the reserved margins; in GC the crusts covered the whole lesion; in GM the presence of granulation tissue was observed in the margins of the wound; in GO it verified the presence of some crusts and hiperemic aspect with tissue granulation. In the group membrane with the oil the granulation tissue was intense. In the 7 th day of post operative, it was verified that the retraction progressed in the margins of the lesions, besides the brilliant red granulation presence and crusts, mainly in the groups GC, GM and GO After this period there was thickening of the crusts and continuous retraction, still with the presence of granulation fabric. / Mestre

Orientador: César Tadeu Spadella / Banca: Érika Veruska Paiva Ortolan / Banca: Maurício Ferraz de Arruda / Banca: Mariãngela Esther A. Marques / Banca: Carlos Eduardo Brossi Polissari / Resumo: Bases científicas: Um grande número de alterações associadas ao processo de cicatrização das feridas cirúrgicas em indivíduos diabéticos tem sido descrito. Entretanto, os mecanismos exatos responsáveis por estas alterações e como elas estão inter-relacionadas, ainda não são completamente conhecidos. Por conta disto, a busca por um tratamento efetivo, capaz de melhorar a cicatrização das feridas em pacientes com diabetes mellitus continua sendo um campo aberto à pesquisa. Objetivo: Avaliar os efeitos da corrente elétrica contínua isolada (CEC) e da administração de sulfato de zinco, através da iontoforese transdérmica (ITD+Zn), sobre as alterações morfológicas e ultraestruturais do processo de cicatrização da pele de ratos diabéticos induzidos pela aloxana, e estabelecer a correlação existente entre os baixos valores da força de ruptura encontrados nas incisões destes animais com as alterações histopatológicas observadas. Material e Métodos: Cento e vinte ratos machos Wistar, pesando aproximadamente 250g, foram submetidos à incisão cirúrgica na parede anterior do abdome e distribuídos, por sorteio, em 6 grupos experimentais, com 20 animais cada um: GN/NT e GD/NT - ratos controles não-diabéticos e diabéticos hiperglicêmicos, induzidos pela aloxana, sem qualquer tratamento das incisões abdominais; GN/CEC e GD/CEC - ratos controles não-diabéticos e diabéticos hiperglicêmicos, induzidos pela aloxana, com incisões tratadas com corrente elétrica contínua; GN/ITD+Zn e GD/ITD+Zn - ratos controles não-diabéticos e diabéticos hiperglicêmicos, induzidos pela aloxana, com incisões tratadas com sulfato de zinco administrado através da iontoforese transdérmica. Cada grupo experimental foi posteriormente dividido em 4 subgrupos, com 5 ratos cada um, para serem avaliados e sacrificados no 4º, 7º, 14º e 21º dia de pós-operatório (PO). Em cada um destes períodos foram ... / Abstract: Not available / Doutor

Orientador: Cláudia Helena Pellizzon / Resumo: A dificuldade de cicatrização de feridas é uma das principais complicações decorrentes do Diabetes mellitus (DM), que torna o processo cicatricial mais lento e o tratamento mais dispendioso. O presente estudo teve como objetivo investigar o efeito e os mecanismos do lupeol envolvidos no processo de cicatrização de feridas cutâneas experimentais in vitro e em ratos normoglicêmicos (RN) e hiperglicêmicos (RH). Foi investigado o efeito do lupeol (0,1, 1, 10 e 20 μg/mL) em ensaios in vitro de cicatrização de feridas utilizando queratinócitos e fibroblastos de prepúcio neonatal humano. Para os estudos in vivo, ratos Wistar machos (n=8) foram randomicamente divididos nos seguintes grupos experimentais usando RN: creme base, colagenase 1.2 U/g, creme à base de lupeol 0,1%, 0,2% e 0,4% tratados durante 3, 7 e 14 dias. O estudo realizado em RH, os grupos foram divididos em: creme base, insulina 0.5 U/g e creme à base de lupeol 0.2% (menor dose efetiva em RN) em RH tratados durante 14 dias. A indução experimental de feridas cutâneas foi realizada na região dorsal dos ratos com o auxílio de um punch de 2 cm de diâmetro. Foram investigados parâmetros macroscópicos, histológicos, imunohistoquímicos, imunoenzimáticos e moleculares. Os resultados in vitro mostraram que, baixas concentrações do lupeol foi capaz de estimular a migração e proliferação celular de queratinócitos, efeito contrátil em fibroblastos dérmicos embebidos em um solução gel de colágeno, possivelmente através das vias PI3... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The difficulty of wound healing is one of the main complications due to Diabetes mellitus (DM), which makes the healing process slower and the treatment more expensive. The present study aimed to investigate the effect of lupeol and mechanisms involved in the healing process of experimental skin wounds in vitro as well as in normoglycemic (NR) and hyperglycemic rats (HR). The effect of lupeol (0.1, 1, 10 and 20 μg/mL) on in vitro wound healing assays using keratinocytes and human neonatal foreskin fibroblasts was investigated. For in vivo studies, male Wistar rats (n=8) were randomly divided into the following experimental groups using NR: lanette, collagenase 1.2 U/g and lupeol 0.1%, 0.2% or 0.4% treated for 3, 7 and 14 days. In the study performed in HR, the groups were divided into: lanette, insulin 0.5 U/g and lupeol 0.2% cream (lowest effective dose in NR) in HR treated for 14 days. Experimental induction of cutaneous wounds was performed on dorsal region of the rats using a punch 2 cm in diameter. Macroscopic, histological, immunohistochemical, immunoenzymatic and molecular parameters were investigated. The in vitro results showed that low concentrations of lupeol were able to stimulate cell migration and proliferation of keratinocytes, a contractile effect on dermal fibroblasts embedded in a collagen gel solution, possibly through PI3k/Akt, and MAPK/p38 signaling pathways involved in cell proliferation/migration, angiogenesis and tissue repair. Our in vivo results show... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O RNA de interferência (RNAi) é um processo envolvido com o silenciamento pós-transcricional de genes, sendo elucidado por moléculas de RNAs de dupla fita de 21-25 nucleotídeos, os small interfering RNA (siRNA), que ocorre naturalmente em uma ampla variedade de animais, plantas e microrganismos. Esse processo têm demonstrado potencial utilização para o tratamento de doenças em que se observa a super-expressão de genes, pois apresentam diversas vantagens como possibilidade de se utilizar esse mecanismo regulatório apenas pelo conhecimento da sequência do gene terapêutico, menores efeitos tóxicos e alta especificidade. Contudo, o principal desafio consiste no desenvolvimento de vetores seguros e eficazes que permitem a utilização do siRNA como terapia, visto que permitem a proteção do siRNA contra degradação enzimática, apresentam meia-vida prolongada na corrente sanguínea e propiciam um efetivo escape endossomal. Nesse sentido, nanopartículas de cristais líquidos associados ao polímero catiônico polietilenoimina (PEI) foram avaliadas como potenciais vetores não-virais para o siRNA específico para a proteína-1 relacionada à tirosinase (TRP-1), como alternativa para o tratamento tópico do vitiligo. Para isso, os cristais líquidos contendo o PEI foram complexados ao siRNA e avaliados quanto à estrutura líquido cristalina por microscopia de luz polarizada e por difração de raios-X a baixo ângulo (SAXS), tamanho de partícula/polidispersividade, potencial zeta e eficiência de complexação. A citotoxicidade dos sistemas foi avaliada em melanócitos melan-A pelo ensaio do MTT e por citometria de fluxo e, a avaliação da transfecção celular foi realizada por microscopia de fluorescência e por citometria de fluxo. Os diferentes sistemas contendo o polímero PEI apresentaram estruturas líquido cristalinas de fase hexagonal e de fase lamelar pela análise por SAXS, no entanto, a análise sob microscopia de luz polarizada, demonstrou estruturas de fase hexagonal, lamelar e isotrópica. A análise do tamanho de partícula mostrou a presença de sistemas nanoestruturados que foram capazes de se complexar ao siRNA na concentração de 10 ?M. Os estudos em cultura de célula demonstraram a maior viabilidade das células melan-A após tratamento com as nanodispersões líquido cristalinas formadas por monoleína (MO), ácido oleico (AO) e PEI, em relação ao polímero catiônico PEI em sua forma livre. Em relação à transfecção celular por microscopia de fluorescência e por citometria de fluxo foi possível observar a elevada eficiência de transfecção das nanodispersões líquido cristalinas formadas pelo sistema MO:AO:PEI. Resultados de inibição da expressão da proteína TRP-1 foram observadas em células melan-A por Western Blotting, após administração das nanodispersões líquido cristalinas associadas ao siRNA-TRP-1 específico. As nanodispersões liquido cristalinas estudas também proporcionaram maior liberação de siRNA na pele em modelo animal. Esses resultados, demonstram a potencial utilização desses sistemas para a terapia anti-sense de doenças cutâneas como o vitiligo, representando assim, uma importante contribuição para a terapia gênica tópica desta doença / The RNA interference (RNAi) is a process involved with the post-transcriptional gene silencing being elucidated by double-stranded RNA molecules of 21-25 nucleotides, the small interfering RNA (siRNA) that occurs naturally in a wide variety of animals, plants and microorganisms. This process has shown potential use for the treatment of diseases in which there is overexpression of genes, as they offer several advantages such as the possibility of using this regulatory mechanism just by knowing the sequence of the therapeutic gene, lower toxicity and high specificity. However, the main challenge is to develop safe and effective vectors that enable the use of siRNA as a therapy, since they allow the protection of siRNA against enzymatic degradation, have prolonged half-life in the bloodstream and provide an effective endosomal escape. Accordingly, liquid crystal nanoparticles associated with the cationic polymer polyethylenimine (PEI) were evaluated as potential non-viral vectors for specific siRNA for the protein related to tyrosinase-1 (TyRP-1) as an alternative for the topical treatment of vitiligo. For this, the liquid crystals containing PEI were complexed to siRNA and evaluated for liquid crystalline structure by polarized light microscopy and X-ray diffraction (SAXS), particle size / polydispersity index, zeta potential and complexation efficiency. The cytotoxicity of the systems was evaluated by MTT assay and flow cytometry in melan-A melanocytes and the evaluation of cellular uptake was performed by fluorescence microscopy and flow cytometry. The different systems containing the polymer PEI exhibited liquid crystalline structures of hexagonal and lamellar phases by SAXS analysis, however, the analysis under polarized light microscopy showed liquid crystalline structures of hexagonal phase, lamellar and isotropic. The analysis of particle size showed the presence of nanostructured systems that were capable of complexing to the siRNA at concentration of 10 ?M. Studies in cell culture demonstrated a higher viability of melan-A cells after treatment with the liquid crystalline nanodispersions formed by monolein (MO), oleic acid (OA) and PEI in relation to the cationic polymer PEI in its free form. Regarding cellular uptake by fluorescence microscopy and flow cytometry was observed the high efficiency in uptake melan-A cells mediated by liquid crystalline nanodispersions formed by system MO:OA:PEI. Results inhibition of the expression of TyRP-1 protein were observed by Western Blotting in melan-A cells, after administration of liquid crystalline nanodispersions associated with specific siRNA-TyRP-1. The liquid crystalline nanodispersions evaluated also provided greater release of siRNA in the skin in an animal model. These results demonstrate the potential use of these systems for antisense therapy of skin diseases such as vitiligo, thus representing, an important contribution to the topical gene therapy for this disease

O câncer de pele é uma doença com grande incidência mundial. O tratamento tópico do câncer de pele é uma estratégia desejada uma vez que pode diminuir os efeitos adversos graves causados pelo tratamento cirúrgico e quimioterapia sistêmica. No entanto, os tratamentos tópicos atuais são limitados pela baixa efetividade das formulações em carrear o fármaco até as camadas mais profundas da pele. Desta forma, o ultrassom de baixa frequência (LFU) apresenta-se como um método atrativo, mas ainda pouco estudado, para aumentar a permeabilidade da pele. Portanto, o objetivo desse trabalho foi estudar modificações na composição dos meios de acoplamento do LFU visando aumentar as regiões de transporte localizadas (LTRs) da pele e a permeabilidade do quimioterápico doxorrubicina (DOX) para o tratamento tópico do câncer de pele. Para isso, um hidrogel de Poloxamer (nanogel) enriquecido com nanopartículas lipídicas sólidas (NLS) contendo DOX foi preparado e caracterizado; diferentes meios de acoplamento, dentre eles os tradicionais, contendo tensoativo, e os inovadores, contendo as NLS ou hidrogéis com diferentes potenciais zeta e viscosidades semelhantes, foram avaliados associados ao LFU para verificar sua influência na formação das LTRs e penetração cutânea de dois fármacos, calceína e DOX; a penetração cutânea da DOX livre e encapsulada em NLS foi quantificada nas diferentes camadas da pele pré-tratada com LFU; e, finalmente, o pré-tratamento mais promissor, LFU associado ao nanogel, seguido da aplicação passiva da DOX incorporada no nanogel foi avaliada in vivo em tumores cutâneos induzidos em camundongos imunossuprimidos. As NLS apresentaram tamanho e PdI de aproximadamente 200 nm e 0,3 respectivamente, com alto potencial zeta catiônico e pH de 3. A incorporação das NLS no nanogel não alterou o tamanho e PdI, no entanto, diminuiu o potencial zeta da formulação e elevou o pH para 5,5. Verificou-se por difração de raios X a baixo ângulo que as NLS continham fases cristalinas lamelares, enquanto o nanogel, fases cristalinas cúbicas, que foram mantidas quando as formulações foram associadas. O uso das NLS e dos hidrogéis, incluindo o nanogel, como meio de acoplamento do LFU modificou consideravelmente a distribuição e número de LTRs na pele em relação aos meios tradicionais. Tanto o número de LTRs quanto a sua distribuição parecem estar relacionados à tensão interfacial e a viscosidade do meio hidrofílico, sendo que a maior viscosidade dos géis gerou maior área de LTRs. O uso do nanogel originou LTRs em 50% da área da pele tratada, área esta 24 vezes maior do que a área de LTRs formada quando o meio de acoplamento convencional, com lauril sulfato de sódio, foi utilizado. Observou-se que a influência das LTRs na penetração de fármacos aniônicos (calceína) e catiônicos (DOX) depende do potencial zeta do hidrogel usado como meio de acoplamento e da dissociação do fármaco. Desta forma, a permeação cutânea da calceína foi menor quando gel aniônico foi utilizado como meio de acoplamento e o inverso ocorreu para a DOX. A penetração da DOX através do estrato córneo da pele pré-tratada com LFU/nanogel aumentou mais de 4 vezes, mas a encapsulação da DOX nas NLS dificultou a passagem da DOX para as camadas mais profundas da pele após o pré-tratamento da mesma com LFU, sugerindo um recuperação da pele desestruturada pelas partículas lipídicas administradas após o pré-tratamento. Nos estudos in vivo, o pré-tratamento da pele com LFU/nanogel seguido da aplicação diárias do nanogel contendo DOX resultou em diminuição de 6 vezes do volume do tumor após 21 dias de tratamento e apenas 5 aplicações do LFU/nanogel. No entanto, a diminuição do volume do tumor só ocorreu quando a sonda do LFU foi posicionada a 10 mm da superfície do tumor. O posicionamento da sonda a uma distância mais próxima do tumor (5 mm) não diminuiu o tamanho do tumor. Conclui-se que a aplicação de LFU com hidrogéis como meio de acoplamento é uma alternativa simples e efetiva para aumentar a penetração de fármacos na pele. Esta penetração pode ser modulada em função do potencial zeta do meio de acoplamento e da posição da sonda do ultrassom em relação à superfície do tumor. Desta forma, o tratamento tópico do câncer de pele usando LFU/nanogel como pré-tratamento é uma estratégia promissora para o tratamento tópico do câncer de pele. / Skin cancer is a disease with high worldwide incidence. Topical treatment of skin cancer is a desired strategy since it can reduce the serious adverse effects caused by surgery and systemic chemotherapy. However, current topical treatments are limited by low effectiveness of the formulations delivery drug to the deeper layers of the skin. Thus, the low frequency ultrasound (LFU) presents itself as an attractive method, but still little studied, to increase skin permeability. Therefore, the objective of this work was to study changes in the LFU coupling medium composition to increase the transport localized region (LTRs) in the skin and the permeability of chemotherapeutic doxorubicin (DOX) for the topical skin cancer treatment. For this, a Poloxamer hydrogel (nanogel) supplemented with solid lipid nanoparticles (SLN) containing DOX was prepared and characterized; different coupling medium, including traditional, containing surfactant, and innovative, containing the NLS or hydrogels with different viscosities and zeta potential similar, were evaluated associated with the LFU to verify its influence in LTRs formation and skin penetration of two drugs, calcein and DOX; skin penetration of free and encapsulated DOX was quantified in the different layers of the LFU pretreated skin; and finally, the most promising pretreatment, LFU associated with nanogel, followed by the passive application of DOX incorporated into the nanogel was evaluated in vivo, in skin tumors induced in immunosuppressed mice. The NLS showed size and PDI of approximately 200 nm and 0.3, respectively, with high cationic zeta potential and pH 3 value. The incorporation of the NLS into the nanogel did not change the size and PDI, however, decreased the zeta potential of the formulation and increased pH value to 5.5. It was found by low angle X-ray diffraction that NLS-containing lamellar crystalline phase while the nanogel, cubic crystalline phases, which were maintained when the formulations were associated. The use of NLS and hydrogels, including nanogel, as coupling medium of LFU substantially modify the distribution and number of the LTRs in the skin compared to traditional medium. Both, LTRs number and distribution may be related to the interfacial tension and viscosity of the hydrophilic medium, hydrogel with higher viscosity produced greater LTRs area. The use of nanogel as coupling medium resulted in LTRs formation in 50% of treated skin area, this area is 24 times larger than the LTR area LTRs formed when conventional coupling medium sodium lauryl sulfate was used. It was observed that the influence of the LTRs in the penetration of anionic drugs (calcein) and cationic (DOX) depends on the zeta potential of the hydrogel used as coupling medium and drug. Thus, the permeation of calcein was lower when anionic gel was used as the coupling medium and the opposite occurred for DOX. DOX penetration through the stratum corneum of the skin pretreated with LFU / nanogel increased more than 4 times but the encapsulation of DOX in the NLS difficult the passage of DOX to the deeper layers of the skin after pre-treatment with LFU, suggesting the recovery of the skin by lipid particles administered after pretreatment. In the in vivo study, pretreatment of the skin with LFU / nanogel followed by the daily application of nanogel containing DOX resulted in a 6-fold decrease in tumor volume after 21 days of treatment with only 5 applications LFU / nanogel. However, the reduction of tumor volume occurred only when the LFU probe was positioned 10 mm from the tumor surface. The positioning of the probe at distance closer tumor (5 mm) has not decreased tumor size. It is concluded that the application of coupling medium hydrogels with LFU is a simple and effective alternative to enhance drug penetration into the skin. This penetration can be adjusted depending on the zeta potential of the coupling means and ultrasound probe position on the tumor surface. Therefore, topical treatment of skin cancer using LFU / nanogel as pre-treatment is a promising strategy for the topical treatment of skin cancer.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-05-19T19:42:39Z No. of bitstreams: 1 TES_PAULA_JULIANA_BRIZUELA_DE_SEADI_PEREIRA_COMPLETO.pdf: 4958315 bytes, checksum: 38858f11b57077cc60813c0fa01390dd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-19T19:42:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_PAULA_JULIANA_BRIZUELA_DE_SEADI_PEREIRA_COMPLETO.pdf: 4958315 bytes, checksum: 38858f11b57077cc60813c0fa01390dd (MD5) Previous issue date: 2016-01-20 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The gastrin-releasing peptide (GRP) and its receptor (GRPR) were recently identified as specific components of pruritus, suggesting an important pharmacological potential for this system; however, the mechanisms underlying GRP/GRPR activity remain undefined. Herein, we evaluated GRPR localization and downstream signaling pathways. Our data show that GRP directly activates small-size capsaicin-sensitive DRG neurons, an effect that translates into transient calcium flux and membrane depolarization. Expression profile revealed that PI3K? is downstream of the GRP/GRPR axis, observed by GRP-induced Akt phosphorylation in ex vivo naive mouse spinal cords and in GRPR transiently expressing HEK293 cells. However, ex vivo mouse spinal cord stimulation by GRP failed to induce the activation of MAP-kinases, namely ERK 1/2 and p38. Intrathecal GRP administration led to intense scratching behavior, an effect significantly reduced by either GRPR antagonism or the PI3K? inhibition. We assessed whether the GRP/GRPR system is involved in chronic itching using the dry skin model and found that GRPR blockade or PI3K? inhibition reversed the scratching. We also found that p-Akt and GRPR are co-expressed in the spinal cord and in DRG neurons from dry skin mice, and that p-Akt levels are increased in these animals, an effect prevented by GRPR blockade. The intradermal injection of GRP also triggers scratching behavior, which was significantly decreased after treatment with PI3K? inhibitor. The itching response was also induced by the intrathecal injection of an Akt activator. Altogether, these findings are highly suggestive that GRPR is expressed by the peripheral and central terminals of DRG nociceptive afferents, which transmit itch via the PI3K?/Akt pathway. / O pept?deo liberador de gastrina (GRP) e seu receptor (GRPR) foram recentemente identificados como componentes espec?ficos do prurido, com importante potencial farmacol?gico; no entanto, os mecanismos intracelulares que medeiam a atividade do sistema GRP/GRPR permanecem desconhecidos. O presente estudo avaliou a localiza??o do GRPR e as vias de sinaliza??o downstream ativadas por este receptor. Os dados obtidos mostram que o GRP ativa diretamente neur?nios de pequeno di?metro do DRG, sens?veis a capsaicina, um efeito demonstrado pelo fluxo transit?rio de c?lcio e pela despolariza??o da membrana. O perfil de express?o observado sugere que a PI3K? ? ativada downstream ao sistema GRP/GRPR, como indicado pela fosforila??o de Akt (marcador de atividade de PI3K?) induzida por GRP, em medulas de camundongos ex vivo e, em c?lulas HEK293 transfectadas com GRPR. Contudo, a aplica??o de GRP em medulas de camundongos, ex vivo, n?o parece depender da ativa??o das MAP-quinases, ERK1/2 ou p38. A inje??o intratecal de GRP leva a um comportamento de co?ar intenso, que ? significativamente reduzido por antagonistas de GRPR ou pela inibi??o farmacol?gica de PI3K?. Para avaliar se o sistema GRP/GRPR estaria envolvido no prurido cr?nico, foi empregado o modelo de pele seca em camundongos. Neste paradigma experimental, o bloqueio de GRPR ou de PI3K? reverteu o comportamento de co?ar. Os dados obtidos tamb?m mostram que p-Akt e GRPR est?o co-localizados na medula espinhal e em neur?nios do DRG de animais com pele seca e, que os n?veis de p-Akt est?o aumentados nesses animais, um efeito que foi prevenido pelo bloqueio de GRPR. A inje??o intrad?rmica de GRP tamb?m induziu o comportamento de co?ar, que foi significativamente reduzido ap?s o tratamento com inibidor de PI3K?. Finalmente, foi demonstrado que a inje??o intratecal de um ativador de Akt foi capaz de induzir coceira em camundongos. O conjunto de resultados obtidos sugere que o GRPR ? expresso por terminais perif?ricos e centrais de neur?nios nociceptivos do DRG, transmitindo o prurido atrav?s da ativa??o da via PI3K?/Akt.

Orientador: Jean Leandro dos Santos / Banca: Cleverton Roberto de Andrade / Banca: Marcos Antonio Correa / Resumo: A acne é uma doença autolimitada de componente multifatorial, caracterizada pela presença de inflamação e colonização bacteriana pelo microrganismo Propionibacterium acnes. Atualmente, o tratamento tópico e/ou oral, inclui fármacos com propriedades anti-inflamatórias, antimicrobianas e queratolíticas. Apesar dos efeitos benéficos no tratamento da acne, a terapia atual apresenta limitações que justificam a busca de novos fármacos. Furoxanos e benzofuroxanos são compostos heterocíclicos contendo a função N-óxido e que apresentam uma grande diversidade de propriedades farmacológicas, incluindo antimicrobiana. Neste trabalho investigouse o efeito antimicrobiano de compostos furoxanos e benzofuroxanos pertencentes à biblioteca de moléculas do laboratório de Química Farmacêutica e Medicinal da Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Para fins de caracterização do espectro de ação, além do P. acnes foi realizado screening do perfil de atividade antimicrobiana frente às cepas fúngicas, bactérias Gram positivas e Gram negativas usando as técnicas de microdiluição. Os furoxanos e benzofuroxanos foram testados em concentrações que variaram de 0.03 a 100 μg/mL. Foram usados controles como a cefazolina (0.39 μg/mL) para P. acnes, o imipenen (<0.39 μg/mL) para as bactérias Gram positivas, aztreonan (<0.39 μg/mL) para as Gram-negativas, anfotericinaB (0.25 μg/mL) e o fluconazol (65 μg/mL) para as espécies de Candida e Cryptococcus, respectivamente. Após incubação, foram realizadas leituras vis... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Acne is a self-limiting disease of multifactorial component characterized by the presence of inflammation and bacterial colonization by Propionibacterium acnes. Currently, topical and oral treatments include drugs presenting anti-inflammatory, antimicrobial, exfoliating and keratolytics properties. The current treatment has shown adverse effects that justify the search for new anti-acne drugs.Furoxan and benzofuroxan are heterocyclic compounds containing the N-oxide function that exhibit a wide range of pharmacological properties, including antimicrobial. Here, we investigated the antimicrobial effect of furoxans and benzofuroxans derivatives from a library of compounds belonging to the Medicinal Chemistry Laboratory on the School of Pharmaceutical Sciences - UNESP. In order to characterize the spectrum of action not only P. acnes, but also fungal, Gram positive and Gram negative strains of bacteria were used. Minimum Inhibitory Concentration (MIC) was determinate by microdilution technique. Benzofuroxan and furoxans were tested at concentrations ranging from 0.03 to 100 μg/mL. It was used as controls:cefazolin (0.39 μg/mL) for P. acnes; imipenem (<0.39 μg/mL) for Gram positive bacteria; aztreonan (<0.39 μg/mL) to Gram-negative; amphotericin B (0.25 μg/ml) and fluconazole (>65 μg/mL) for species of Candida and Cryptococcus, respectively. After incubation, visual readings... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Paola Castro Moraes / Coorientador: Andressa de Souza-Pollo / Banca: Alessandra Aparecida Medeiros-Ronchi / Banca: Janete Apparecida Desidério / Banca: José Geraldo Meirelles Palma Isola / Banca: Annelise Carla Camplesi dos Santos / Resumo: Lesões na pele podem resultar em feridas que, dependendo do tempo de reparação tissular podem ser classificadas como agudas ou crônicas, sendo crônicas aquelas que não apresentaram cicatrização dentro do período de quatro semanas. A ferida é contaminada por diferentes espécies bacterianas, sendo o sistema imunológico da pele o responsável por impedir que tais contaminações evoluam para infecções. No entanto, muitas vezes o quadro infeccioso é instalado, havendo necessidade de tratamento com antimicrobianos. Tendo em vista que o mau uso de antimicrobianos provoca resistência a multidrogas em estirpes bacterianas potencialmente patogênicas, este trabalho teve como objetivo identificar as bactérias prevalentes em feridas agudas e crônicas de cães por meio de sequenciamento da região 16S rRNA e testar a sensibilidade dos isolados a diferentes antimicrobianos. Para tanto, foram amostradas 20 feridas, sendo cada uma de um cão atendido no Hospital Veterinário da UNESP, Câmpus de Jaboticabal. De cada ferida foram obtidos dez isolados, os quais foram selecionados para o sequenciamento de DNA por meio de comparação entre os perfis genéticos obtidos pelo emprego de marcador molecular randômico. Foram sequenciados 74 isolados identificados como pertencentes a oito gêneros de bactérias gram-negativas, Proteus mirabilis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp., Acinetobacter baumannii, Klebsiella spp., Kluyvera georgiana e Providencia stuartii, e três de gram-positivas,... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Skin lesions can result in cutaneous wounds that may be classified as acute or chronic depending on the period of time spent in tissue repairment. Wounds that have not healed within four weeks are generally classified as chronic. The wound is contaminated by different bacterial species and the immune system of the skin is responsible for preventing infections. Nonetheless, the infectious process is often developed and antimicrobial treatment become necessary. Considering that the misuse of antimicrobials provokes multidrug resistance in potentially pathogenic bacterial strains, this work aimed to identify prevalent bacteria in acute and chronic wounds of dogs by 16S rRNA sequencing and to test the sensitivity of the isolates to different antimicrobials. For that, 20 wounds were sampled, each one from a dog admitted at the Veterinary Hospital of UNESP, Jaboticabal, São Paulo, Brazil. From each wound ten isolates were obtained, which were selected for DNA sequencing through genetic profiles comparison by applying a random molecular marker. Seventy-five isolates were identified as belonging to eight Gram-negative bacteria genera, Proteus mirabilis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp., Acinetobacter baumannii, Klebsiella spp., Kluyvera georgiana and Providencia stuartii, and to three gram-positive bacteria genera, Enterococcus sp., Staphylococcus spp. and Bacillus spp. Cases of dogs with acute or chronic wounds associated to more than one bacterial genus w... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Uma série de porfirinas meso-substituídas tetracatiônicas foi sintetizada e caracterizada, com o objetivo de estudar o papel da anfifilicidade e a presença de zinco em propriedades que podem influenciar na eficácia dos mesmos como FSs na terapia fotodinâmica. Observamos que as propriedades fotofísicas dos compostos são semelhantes (máximos de absorção na mesma região, red. quantico fl0,02; rend. quantico ox. singlete ~0.8). O aumento na lipofilicidade e a presença de zinco no centro do anel porfirínico aumentam a incorporação dos FSs em vesículas e células, uma vez que a presença de zinco possibilita a coordenação pelos grupos fosfato dos fosfolipídeos (os resultados os estudos das monocamadas de Langmuir e dos filmes de Langmuir-Blodgett corroboram com esta afirmação). A incorporação em mitocôndrias é também dependente da lipofilicidade do FS e é influenciada pelo potencial eletroquímico de membrana. A presença do zinco mostrou diminuir a incorporação em mitocôndrias isoladas e em mitocôndrias nas células HeLa, devido às características particulares da membrana mitocondrial interna. A fototoxicidade aumenta proporcionalmente ao aumento da eficiência da incorporação em membranas, que é atribuída às interações favoráveis entre os FSs e as membranas, permitindo a fotooxidação mais eficiente das mesmas. Para esta série de compostos, a eficiência fotodinâmica é diretamente proporcional à ligação em membranas e incorporação em células, mas não está totalmente relacionada ao acúmulo seletivo em mitocôndrias. Os resultados preliminares de permeação e retenção cutâneos mostram que apesar destes FSs apresentarem baixa penetração e retenção na pele, quando adequadamente formuladas passam a apresentar penetração e retenção cutâneas adequadas de maneira que poderiam ser utilizados na TFD tópica no tratamento de câncer de pele. / A series of photosensitizers (PS), which are meso-substituted tetra-cationic porphyrins, was synthesized and characterized in order to study the role of amphiphilicity and zinc insertion in PDT efficacy. The photophysical properties of all compounds are quite similar (absorption maxima in the same region of the spectra, f 0.02; ~0.8). An increase in lipophilicity and the presence of zinc in the porphyrin ring result in higher vesicle and cell uptake, because zinc can be complexed by the phosphate groups of the phospholipids. The results from the study of Langmuir monolayers and Langmuir-Blodgett mixed films corroborate this affirmation. Binding in mitochondria is dependent on the PS lipophilicity and on the electrochemical membrane potential. Zinc insertion was also shown to decrease the interaction with isolated mitochondria and with the mitochondria of HeLa cells, an effect that has been explained by the particular characteristics of the mitochondrial internal membrane. Phototoxicity was shown to increase proportionally with membrane binding efficiency, which is attributed to favorable membrane interactions between FSs and membranes, which allow for more efficient membrane photooxidation. For this series of compounds, photodynamic efficiency is directly proportional to membrane binding and cell uptake, but it is not totally related to mitochondrial targeting. Preliminary results of skin permeation and retention show that besides presenting low permeation and retention when suitably formulated, FSs can cross the EC barrier and accumulate in deeper regions, thus being applicable to topical PDT in the treatment of skin cancer.