Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-19T13:51:31Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 481806 bytes, checksum: 719ba3466811da8459b6597dd508ae83 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-19T13:51:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 481806 bytes, checksum: 719ba3466811da8459b6597dd508ae83 (MD5) Previous issue date: 2001-11-24 / Avaliou-se a eficiência de diferentes indutores de resistência nas espécies de tomateiro Lycopersicon esculentum cv. Miller (suscetível) e L. hirsutum v. glabratum introdução CNPH 417 (resistente) ao agente etiológico da “pinta preta” do tomateiro, Alternaria solani. Os indutores de resistência testados foram quitosana, ácido salicílico, benzotiadiazol e ácido acetil salicílico tamponado. Verificou-se que somente o ácido salicílico e o benzotiadiazol foram capazes de induzir resistência. Em todos os ensaios, a espécie resistente apresentou um número médio de lesões por folíolos inferior ao da espécie suscetível, tratada ou não tratada. O número médio de lesões por folíolos apresentados pela espécie resistente não foi, em nenhum dos ensaios, afetado por quaisquer tipos de indutores de resistência. Realizou-se a histopatologia comparativa da interação hospedeiro suscetível x A. solani, tratado ou não com os indutores de resistência ácido salicílico, benzotiadiazol e ácido acetil salicílico tamponado e da interação hospedeiro resistente x A. solani, não induzido. Coletaram-se os materiais para exame 24, 48 e 72 horas após a inoculação. Este estudo foi realizado com o material diafanizado em cloral hidratado saturado. Verificou-se que as substâncias indutoras de resistência interferiram na adesão foliolar dos esporos e, ou, tubos germinativos, reduzindo o número médio de lesões de esporos nas primeiras 48 horas. Em CNPH 417, observou-se que o número médio de lesões era menor até o último intervalo estudado, de 72 horas. As barreiras morfológicas observadas por contraste diferencial de interferência Nomarski, como modificações de paredes, modificações citoplasmáticas e modificações morfológicas observadas em pontos distantes aos do sítio de penetração, de modo geral, foram as mesmas observadas na testemunha. Entretanto, o contraste diferencial não fornece nenhum indicativo sobre a composição química das barreiras. Portanto, é possível afirmar que, apenas como estruturas físicas, as modificações estruturais da parede e do citoplasma não foram eficientes para reduzir a penetração do fungo e não diferiram entre plantas induzidas e testemunha, embora pudessem apresentar efeito de retardamento da penetração e da colonização. / The synthetic chemicals chitosan, salicylic acid, benzothiadiazol and buffered acetyl salicylic acid were evaluated as inducers of resistance to Alternaria solani in Lycopersicon esculentum cv. Miller (susceptible) and L. hirsutum var. glabratum CNPH 417 (resistant). The treatments with salicylic acid and benzothiadiazol reduced lesion numbers in susceptible tomato. There was no addititional effect of the chemical treatments in reducing lesion numbers in the resistant species. Chitosan and buffered acetylsalicylic acid were ineffective as resistance inducers. For histological study, leaflets of susceptible tomato L. esculentum cv. Miller were treated with salicylic acid, buffered acetylsalicylic acid or benzothiadiazol, and sample tissues were cleared in chloral hydrate and examined by differential interference contrast microscopy. The chemical treatments reduced numbers of spore and of germtubes attached to the cell epidermis. Cytoplasmic aggregation, changes in the cell wall and other modifications of the host cell were also observed. These modifications might contribute as structural defense mechanisms impeding host cell penetration and retarding fungal growth. No differences in frequency were found in treated and nontreated tomato tissues. However, these structural modifications as inducing mechanisms of resistance cannot be discarded yet since further clarifications are needed, such as those provided by cytological and biochemical studies. / Tese importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-05-03T18:50:01Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 128394 bytes, checksum: eade9f83480bcb6c288ec63ffe339c8e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-03T18:50:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 128394 bytes, checksum: eade9f83480bcb6c288ec63ffe339c8e (MD5) Previous issue date: 2005-02-22 / Esporulação de Alternaria solani é normalmente escassa e facilmente paralisada quando em cultivos in vitro. Foi obtido e validado um protocolo para induzir esporulação em A. solani baseado em fragmentação e desidratação de micélio. Para tal, quatro isolados oriundos de três municípios foram usados em ensaios de efeito da umidade, injúria do micélio, luz, fotoperíodo e meio de cultura, na esporulação. Maior esporulação ocorreu quando se cresceram culturas de A. solani em meio V8 sob agitação e triturou-se o micélio o qual foi vertido em placas com meio BDA (pH=6,5). As placas sem tampa, para permitir a desidratação, foram mantidas a 25 ± 2 o C, sob fotoperíodo de 12 h de luz negra por 60 horas. O protocolo foi validado com 20 isolados de A. solani de diferentes hospedeiros, localidades, idades e modo de armazenamento. Quantificaram-se a esporulação, germinação de conídios e infectividade do inóculo em tomateiro e batateira. Todos os isolados esporularam, e a germinabilidade dos conídios foi superior a 96%. Maiores valores de frequência de infecção ocorreram em folíolos do terço médio de batateira. Para avaliar o efeito das repicagens sucessivas na esporulação, efetuaram-se 24 repicagem periódicas, a cada 7 dias. Em cada repicagem, empregou-se o protocolo para induzir a esporulação e se quantificou a produção de conídios. Pelo menos uma das colônias de cada isolado esporulou até a 10a repicagem. / Sporulation of Alternaria solani is scarse and commonly reduced when the fungus is cultivated in vitro. A procedure to induce sporulation based on mycelial fragmentation and dehydration was developed and validated. Four isolates of A. solani were used in experiments to assess the effects of moisture, mycelial wounding, light quality and photoperiod, and culture media on conidia production. Sporulation was higher when the fungus was grown on V8 medium at 25 o C in darkness with agitation, followed be mycelium grinding and pouring to Petri dishes containing PDA (pH 6.5). In addition, colonies were incubated at 25 ± 2 o C under near ultraviolet light and 12-hour photoperiod. The procedure was validated with 20 isolates of A. solani from different hosts, places, ages, and storage conditions. Conidia production, germination, and infectivity were quantified. All isolates sporulated and minimum conidia germination was 96%. Inoculations with conidia suspension of all isolates resulted in lesions. Infection frequency was highest when leaflets of the middle third of tomato plants were inoculated. The effect of subculturing on A. solani sporulation was also assessed. After 24 subcultures, at every 7 days. / Dissertação importada do Alexandria

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-05Bitstream added on 2014-06-13T19:58:04Z : No. of bitstreams: 1 motta_rr_me_jabo.pdf: 906417 bytes, checksum: 313df4fc7f074ff43b3f9ee2d69280ca (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este trabalho teve como objetivos monitorar a quantidade de resíduo existente em frutos de laranjeira ‘Valência’ dos fungicidas oxicloreto de cobre, tiofanato metílico e pyraclostrobin, como também determinar a capacidade protetora e fungistática (oxicloreto de cobre) e a capacidade preventiva e curativa (tiofanato metílico e pyraclostrobin) no controle da mancha preta dos frutos cítricos (MPC). No primeiro experimento, aproximadamente 1000 frutos, previamente ensacados, foram primeiramente imersos nas caldas fungicidas e posteriormente inoculados com conídios de Guignardia citricarpa em intervalos regulares de 1, 7, 14, 21, 28 e 35 dias após a aplicação do fungicida, para o oxicloreto de cobre e de 1, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 e 56 dias após a aplicação do fungicida, para o tiofanato metílico e pyraclostrobin. No segundo experimento, aproximadamente 1000 frutos, previamente ensacados, foram primeiramente inoculados e posteriormente tratados por imersão com os respectivos fungicidas nos mesmos intervalos regulares. Foram utilizados 16 frutos por período de inoculações e oito frutos por período de aplicação do fungicida. Para o primeiro experimento, oito frutos foram utilizados para a realização das análises de resíduo e outros oito frutos deixados na planta até a época da colheita. Para o segundo experimento, somente avaliou-se a incidência da doença e severidade na colheita. As análises de resíduos foram realizadas por técnicas de Espectrofotometria de Absorção Atômica na superfície dos frutos, para o oxicloreto de cobre e de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada ao detector de massas/massas (CLAE - EM/EM) na superfície e casca dos frutos, para o tiofanato metílico e na superfície, casca e polpa dos frutos para o pyraclostrobin. Na época da colheita, os frutos foram avaliados quanto à incidência, severidade... / The objectives of this study were: (i) measure the amount of residues of copper oxychloride, methyl thiophanate and pyraclostrobin in 'Valencia’ sweet orange fruits after their application; (ii) to evaluate the protective and fungistatic capacity of copper oxychloride and (iii) to evaluate the preventive and curative capacity of systemic fungicides methyl thiophanate and pyraclostrobin for the control of citrus black spot (CBS). Two experiments were carried out, in the first on 1.000 fruits were first immersed in the fungicides and then inoculated with conidia of Guignardia citricarpa at regular intervals of 1, 7, 14, 21, 28 and 35 days, for the copper oxychloride and 1, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 and 56 days for methyl thiophanate and pyraclostrobin. In the second experiment, on 1.000 fruits were first inoculated with conidia of G. citricarpa and then treated by immersion with the fungicides in the same regular intervals as described. Sixteen fruits were used for each period of inoculations and eight fruits per application. For the first experiment, eight fruits were used for analysis of residues and eight fruits were left in the plant until harvesting to evaluate disease incidence and severity. For the second experiment it was evaluate only disease incidence and severity in the harvest. Analysis of residues were performed by Atomic Absorption Spectrometry on the fruits surface, for copper oxychloride and High Performance Liquid Chromatography coupled to the detector mass/mass (HPLC - MS / MS) on the fruits surface and peel for the methyl thiophanate, and on the fruits surface, peel and pulp for the fungicide pyraclostrobin. Under conditions of high inoculum pressure, copper oxychloride showed limited protective capacity and no fungistatic capacity. Residues found on the fruits surface were directly related to the fruits growth. Methyl thiophanate was converted on its metabolite... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-11-28T13:13:21Z No. of bitstreams: 1 Celma Cardoso Peixoto.pdf: 1809049 bytes, checksum: 2c1b8859bd46d99b602026bcba5684c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-28T13:13:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Celma Cardoso Peixoto.pdf: 1809049 bytes, checksum: 2c1b8859bd46d99b602026bcba5684c1 (MD5) Previous issue date: 2015-02-26 / Early blight caused by species from Alternaria genus affects several solanaceous of economic importance. Previous studies have shown that the species A. tomatophila and A. grandis prevail as causal agents of disease on tomato and potato, respectively. The control of this disease is based on the use of protective and systemic fungicides. However, there are reports of the existence of other species of Alternaria causing early blight in plants of the Solanácea family. This study aimed to perform molecular, morphological and biological characterization of Alternaria isolates from cultivated and wild solanaceous from different regions of Brazil. Molecular characterization of the isolates was done by sequencing and phylogenetic analysis of the genes Alt a1, GPD and Calmodulin. Morphological characterization was performed by measurement of dimensions of the conidia and quantification of the number of septa and rostrums. Biological characterization of Alternaria isolates was done by evaluation of host range and by the in vitro sensitivity to tebuconazole. Phylogenetic analysis of the genes Alt a1, GPD and Calmodulin allowed the identification of the species A. tomatophila, A. mimicula and A. dauci from tomato, and the species A. grandis and A. solani from potato and from lobeira, respectively. Morphologic caracteristics of most isolates corroborate the molecular characterization. The isolate EH1642-BA, identified as A. solani, was able to cause early blight on all solanaceous hosts evaluated except the sweet pepper. EH1823-CE of the specie A. tomatophila and EH1548-DF of A. grandis isolates from tomato and potato, respectively, had not specificity for their original host plants. However, the isolates EH1143-RS of the specie A.dauci and EH1377-CE of A. mimicula showed specificity for original host causing typical symptoms of early blight only on tomato. Alternaria isolates from tomato and eggplant caused disease on wild invasive solanaceous Datura stramonium and Physalis pubescens and isolates from D. stramonium and Nicandra physaloides caused symptoms of early blight on tomato, potato and jiló. In the sensitivity tests to the fungicide tebuconazole in general the isolates showed high sensitivity under in vitro conditions. The results obtained in this study confirmed the occurrence of A. tomatophila and A. grandis as causal agents of early blight on tomato and potato, respectively, and in this work were detected for the first time in Brazil the presence of A. dauci and A. mimicula associated with the disease on tomato. It has been found that some wild solanaceous can act as pathogen inoculum sources and the tebuconazole was efficient in the in vitro control for the isolates evaluated. / A pinta-preta, causada por fungos do gênero Alternaria, afeta diversas solanáceas importantes economicamente e as espécies A. tomatophila e A. grandis prevalecem como agentes causais da doença em batateira e tomateiro, respectivamente. O controle se baseia no uso de fungicidas protetores e sistêmicos. Todavia, existem relatos da existência de outras espécies de Alternaria causando pinta-preta em plantas da família Solanácea. O presente trabalho teve como objetivos realizar a caracterização molecular, morfológica e biológica de isolados de Alternaria oriundos de solanáceas cultiváveis e silvestres de diferentes regiões do Brasil. A caracterização molecular foi feita mediante sequenciamento e análises filogenéticas das regiões Alt a 1, GPD e Calmodulina. A caracterização morfológica foi conduzida por meio da mensuração das dimensões dos conídios e quantificação do número de septos e rostros. Na caracterização biológica realizou-se a avaliação da gama de hospedeiras solanáceas e testes in vitro de sensibilidade ao fungicida tebuconazole. As análises filogenéticas dos genes Alt a 1, GPD e Calmodulina possibilitaram a identificação das espécies A. tomatophila, A. mimicula e A. dauci oriundos de tomateiro, e também das espécies A. grandis e A. solani provenientes de batateira e lobeira. As características morfológicas da maioria dos isolados concordaram com a caracterização molecular. O isolado EH1642-BA identificado como A. solani foi capaz de causar pinta-preta em todos os hospedeiros exceto o pimentão. Já o EH1823-CE da espécie A. tomatophila e o EH1548-DF de A. grandis provenientes de tomateiro e batateira não apresentaram especificidade para as duas plantas hospedeiras originais. Contudo, os isolados EH1143-RS da espécie A.dauci e EH1377-CE de A. mimicula mostraram especificidade por hospedeira de origem ocasionando sintomas típicos da pinta-preta apenas em tomateiro. Isolados obtidos de tomateiro e berinjela causaram doença nas invasoras silvestres Datura stramonium e Physalis pubescens e isolados originários de D. stramonium e Nicandra physaloides provocaram sintomas em tomateiro, batateira e jiló. Em relação à sensibilidade ao tebuconazole verificou-se que em termos gerais os isolados apresentaram alta sensibilidade ao produto sob condições in vitro. Os resultados obtidos no presente estudo confirmaram a ocorrência de A. tomatophila e A. grandis como agentes causais da pinta-preta em tomateiro e batateira e foram detectadas pela primeira vez no Brasil a presença das espécies A. dauci e A. mimicula associadas à doença em tomateiro. Verificou-se ainda que solanáceas invasoras podem atuar como fontes de inóculo do patógeno e que o tebuconazole apresentou eficiência no controle in vitro para todos os isolados avaliados.

A requeima, causada pelo oomiceto Phytophthora infestans e a pinta preta, causada pelo fungo Alternaria solani, estão entre as doenças mais importantes e destrutivas da cultura da batata no Brasil e no mundo. Considerando a importância do controle químico em sistemas integrados e a necessidade de se conhecer detalhadamente o desempenho de fungicidas e indutores de resistência visando à sustentabilidade da produção, o presente estudo objetivou caracterizar e comparar a ação preventiva, residual, curativa, anti-esporulante e resistência à chuva de fungicidas em condições controladas, bem como, avaliar em campo o potencial de controle de fungicidas e indutores de resistência e seus reflexos sobre a produtividade total e comercial de tubérculos. Todos os fungicidas promoveram elevada ação preventiva contra a requeima e a pinta preta. Os fungicidas sistêmicos ou com alta tenacidade proporcionaram controle das duas doenças até os 12 DAP, enquanto que os fungicidas translaminares até os 9 DAP. Quanto à ação curativa e anti-esporulante destacaram-se principalmente os fungicidas sistêmicos aplicados até as 24 horas após a inoculação (HAI). Os fungicidas translaminares foram capazes de inibir a requeima quando aplicados até 12 HAI e os de contato destacaram-se apenas para ação preventiva. Semelhantemente, os fungicidas sistêmicos, translaminares ou com alta tenacidade foram os menos afetados pela chuva simulada. O aumento do tempo de secagem promoveu uma maior retenção ou absorção dos produtos reduzindo o impacto negativo da precipitação. Os melhores níveis de controle, produtividade e qualidade de tubérculos foram obtidos com os fungicidas mandipropamida+clorotalonil, fluopicolida+propamocarbe, dimetomorfe+ametoctradina, mandipropamida, fenamidona+propamocarbe, bentiavalicarbe+ fluazinam, seguidos de dimetomorfe+clorotalonil mefenoxam+clorotalonil e famoxadona+ cimoxanil+mancozebe para requeima e azoxistrobina+difenoconazol, picoxistrobina, piraclostrobina+metconazol, trifloxistrobina+tebuconazol, azoxistrobina, boscalida+ piraclostrobina, iprodiona+pirimetanil e ciprodinil para pinta preta. Acibenzolar-s-metílico (ASM) reduziu a severidade da requeima e da pinta preta, porém, promoveu aumento da produtividade, apenas no campo de requeima. O fosfito de potássio (FP) também reduziu a severidade da requeima, no entanto, não influenciou na produtividade. Com exceção de mandipropamida, a adição de ASM à mefenoxam+mancozebe, cimoxanil+mancozebe e mancozebe promoveu aumento do controle da requeima, no entanto, apenas quando em mistura com mancozebe proporcionou aumento na produtividade. A adição de FP à mandipropamida, mefenoxam+mancozebe, cimoxanil+mancozebe, mancozebe e de ASM à azoxistrobina e difenoconazol não refletiu no controle da requeima, da pinta preta e na produtividade, respectivamente. Mancozebe e ASM não diferiram quanto severidade, progresso da pinta preta e produtividade, porém mancozebe+ASM foi superior ao ASM. A adição de ASM a programas de aplicação reduziu a requeima e a pinta preta e incrementou a produtividade apenas quando adicionados a programas onde prevaleceram fungicidas translaminares e de contato. O FP não influenciou nenhum dos programas testados para requeima. / Late blight, caused by the oomycete Phytophthora infestans and early blight, caused by the fungus Alternaria solani, are among the most destructive diseases of potato crops in Brazil and worldwide. Considering the importance of the chemical control on integrated systems and the need for detailed knowledge of the performance of resistance inducers and fungicides targeting the sustainability of production, the present study aimed to:1- characterize and compare the preemptive, residual, curative, antisporulative action and rain resistance of fungicides under controlled conditions; 2-: evaluate, under field conditions, the control potential of fungicides and resistance inductors and their effects on the total and commercial yield of potato tubers. All fungicides tested provided a high pre-emptive action against late and early blight. The systemic fungicides or high tenacity ones provided control of both diseases until 12 days after application, while translaminar ones until 9 days after application. As for the curative and anti-sporulative action, the systemic fungicides stand out when applied until 24 hours postinoculation, while the translaminar ones inhibited late blight when applied until 12 hours postinoculation. The contact fungicides stand out concerning pre-emptive action only. Similarly, systemic, translaminar and high tenacity fungicides were less affected by the simulated rain. An increase in drying time promoted higher retention and absorption of the products, so decreasing the negative precipitation impact. The better levels of control, yield and tubers quality were reached with the use of the following fungicides in the control of late blight: mandipropamid+chlorothalonil, fluopicolide+propamocarb, dimetomorph+ametoctradin, mandipropamid, fenamidone+ propamocarb, bentiavalicarb+fluazinam, followed by dimetomorph+chlorothalonil, mefenoxam+ chlorothalonil and famoxadone+cymoxanil+mancozeb. In the control of early blight the most efficient were: azoxystrobin+difenoconazole, pycoxystrobin, pyraclostrobin+metconazole, trifloxystrobin+tebuconazole, azoxystrobin, boscalid+pyraclostrobin, iprodione+pyrimethanil and cyprodinil. Acibenzolar-s-methyl (ASM) reduced the severity of late and early blight, but promoted an increase in the tuber yield only in late blight affected field. Potassium phosphite (Pp) also reduced the severity of late blight, although it did not have influenced the yield. Except for mandipropamid, the addition of ASM to mefenoxam+mancozebe, cymoxanil+mancozeb or mancozeb led to a better control of late blight, but only when mixed with mancozeb it promoted increase in the yield. Addition of Pp to mandipropamid, mefenoxam+mancozeb, cymoxanil+mancozeb, mancozeb and ASM to azoxystrobin, difenoconazole did not result either in the control of late and early blight or in an increase of yield. Mancozeb and ASM did not differ as for severity, progress of late blight and increasing yield, but however, mancozeb+ASM had a superior efficiency than ASM. Addition of ASM to application programs reduced late and early blight and increased yield only when added to programs in which prevailed translaminar and contact fungicides. Pp did not influenced any of the tested programs against late blight.

A citricultura brasileira concentra-se principalmente no Estado de São Paulo que contribui com 80,4 % da produção nacional, sendo o Brasil um dos maiores produtores mundiais de citros. Um dos problemas enfrentados pela citricultura é a sua vulnerabilidade a pragas e doenças, devido principalmente a baixa diversidade genética nas variedades comerciais utilizadas, associada ao sistema de plantio em áreas extensas. Uma das doenças que vem causando crescentes prejuízos para a citricultura brasileira é a pinta preta ou mancha preta dos citros causada pelo fungo Guignardia citricarpa Kiely. O uso de conhecimentos de biologia molecular e métodos biotecnológicos devem ser considerados como importante alternativa para a produção de plantas geneticamente modificadas expressando genes de resistência. Para se obter plantas de citros resistentes a doenças, se faz necessário identificar genes que estejam relacionados com os mecanismos de defesa da planta. Na tentativa de identificar estes genes, o objetivo geral deste trabalho foi a identificação de genes in silico no banco de dados do Projeto Millenium CitEST e a análise de expressão diferencial de genes envolvidos na defesa. Mais de 7600 sequencias foram identificadas nas buscas no CitEST com similaridade aos genes R e genes envolvidos na HR e defesa, MAPKs e SNF1. Destes, foram selecionados 273 sequencias para experimentos de macroarranjo para análise da interação Citrus sinensis-Guignardia citricarpa. A análise estatística revelou que 171 genes (62,63%) apresentaram expressão diferencial significativa ao nível de 5% de probabilidade. Destes, 80 apresentaram expressão diferencial significativa maior do que duas vezes, dos quais 38 genes foram induzidos e 42 foram reprimidos no tecido infectado. Entre os genes induzidos estão MAPKs, genes de resistência (R), genes envolvidos na resposta de hipersensibilidade (HR) e na defesa da planta. Entre os transcritos reprimidos, há quatro similares a peroxidases e cinco similares a catalases, o que era esperado já que catalases e algumas peroxidases são capazes de remover H2O2, e assim a planta produz espécies reativa de oxigênio capaz de desencadear a ativação de genes de defesa. Os dados do macroarranjo foram validados via transcrição reversa seguida de PCR quantitativo em tempo real (RT-PCRq) de 9 genes. As análises confirmaram a expressão diferencial de 8 deles sendo que somente um apresentou resultado contrastante ao macroarranjo, o que demonstra a eficiência da metodologia de macroarranjos para estudo de muitos genes simultaneamente. Os genes diferencialmente expressos identificados na interação C. sinensis-G. citricarpa são de grande importância, pois são fortes candidatos para serem utilizados na transformação genética de plantas com o objetivo de obter novas variedades de plantas com resistência a patógenos. / The Brazilian citrus industry is concentrated mainly in the State of Sao Paulo which contributes with 80.4% of national production, with Brazil being a leading world producer of citrus. One of the problems facing the citrus industry is its vulnerability to pests and diseases, mainly due to low genetic diversity of the commercial varieties used, linked to the system of planting in extensive areas. A disease that is causing increasing damage to the brazilian citrus industry is the black spot of citrus caused by the fungus Guignardia citricarpa Kiely. The use of knowledge of molecular biology and biotechnological methods should be considered as an important alternative for the production of genetically modified plants expressing genes for resistance. In order to obtain citrus plants resistant to diseases it is necessary to identify genes that are related to the defense mechanisms of the plant. In an attempt to identify these genes, the general aim of this study was to identify genes in silico in the database of the Millennium CitEST Project and to perform differential expression analysis of genes involved in the defense mechanisms. More than 7600 reads were identified in the CitEST search with similarity to R genes, genes involved in HR and defense, MAPKs and SNF1. It was selected 273 reads for macroarray experiments to analysis of Citrus sinensis-Guignardia citricarpa interaction. Statistical analysis revealed that 171 genes (62.63%) showed significant differential expression at the level of 5% probability. From these, 80 showed significant differential expression higher than two fold, in which 38 genes were induced and 42 were repressed in infected tissue. Among the induced genes are MAPKs, resistance (R) genes, genes involved in hypersensitivity response (HR) and plant defense. Among the suppressed transcripts, there are four similar to peroxidases and five similar to catalases, which is expected because catalases and some peroxidases are able to remove H2O2, and so the plant produces reactive oxygen species capable of triggering the activation of defense genes. The macroarray data were validated by reverse transcription followed by quantitative real-time PCR (RT-PCRq) of 9 genes. The analysis confirmed the differential expression of 8 of them, and only one presented different result of macroarray which demonstrate the efficiency of the macroarray methodology to analyze several genes simultaneously. The genes differentially expressed in the interaction of C. sinensis x Guignardia citricarpa identified are of great importance because they are strong candidates for use in genetic transformation of plants with the objective of obtaining new varieties of plants resistant to pathogens.

A mancha preta dos citros (MPC), causada por Phyllosticta citricarpa, é uma doença de importância econômica devido à redução na produtividade ocasionada pela queda prematura dos frutos e ao aumento dos custos da produção devido ao uso intensivo de fungicidas. As lesões restringem-se praticamente ao flavedo dos frutos, depreciando-os para a comercialização e restringindo a exportação de frutas in natura. A MPC causa danos em todas as espécies cítricas de valor comercial, com exceção da Citrus aurantium (laranja azeda) e do Citrus latifólia (lima ácida Tahiti). Phyllosticta citricarpa causa infecções latentes e diferentes tipos de sintomas nos frutos. Essas características podem estar relacionadas com o estádio fenológico do fruto no momento da infecção. Os objetivos desse trabalho foram avaliar a influência da idade dos frutos de laranja doce na germinação dos conídios e no período de incubação de P. citricarpa e identificar compostos fenólicos pré ou pós-formados no flavedo de frutos de laranja doce inoculados com P. citricarpa. Frutos de laranjeira das variedades Hamlin, Valência e Pêra com 1,5, 3,0, 5,0 e 7,0 cm de diâmetros foram inoculados com suspensão de conídios de P. citricarpa na concentração de 103 e 105 conídios.mL-1 e avaliados mensalmente. O primeiro sintoma observado foi o da falsa melanose e não foram observadas diferenças no período de incubação entre as variedades. O período de incubação da falsa melanose foi afetado pela concentração de inóculo e pelo diâmetro dos frutos. Frutos de 1,5 e 3,0 cm de diâmetro inoculados com suspensão de conídios de P. citricarpa, na concentração de 103 conídios.mL-1, apresentaram sintomas entre 70 e 116 dias respectivamente, enquanto que os frutos de 1,5, 3,0 e 5,0 cm de diâmetro, inoculados com suspensão de 105 conídios.mL-1, expressaram sintomas entre 40, 65 e 156 dias respectivamente. A expressão dos sintomas de mancha dura não diferiu entre as concentrações de inóculo, mas diferiu entre os diâmetros e entre as variedades avaliadas. A variedade Valência apresentou os menores tempos para o aparecimento dos sintomas quando comparado com as variedades Hamlin e Pêra. Os tempos médios para a expressão da mancha dura nos frutos (todas as variedades) inoculados com 1,5, 3,0, 5,0 e 7,0 cm de diâmetro foram 240, 217, 176 e 197 dias respectivamente. Sintomas de falsa melanose e mancha dura se expressaram independente um do outro. Não foi observado diferenças nas quantidades dos compostos fenólicos entre os frutos inoculados e não inoculados após 48 h de câmara úmida. As maiores quantidades de compostos fenólicos foram encontradas nos frutos menores e à medida que estes aumentaram de tamanho, observou-se a diminuição nas quantidades destes compostos. Não foram observadas diferenças no padrão de germinação do fungo em relação aos diferentes diâmetros inoculados, porém foram observadas placas de cera na superfície dos frutos de 7,0 cm de diâmetro. Os sintomas de falsa melanose parecem estar relacionados com a defesa da planta, e os sintomas de mancha dura estão relacionados com o estádio fenológico dos frutos. / Citrus black spot (CBS), caused by Phyllosticta citricarpa, is a disease of economic importance due to the reduction in yield, caused by premature fruit drop, and high production costs, due to the intensive fungicide spraying. The lesions are restricted to the fruit flavedo, decreasing market prices and restricting exports of fresh fruits. CBS causes damage in all commercial citrus species with exception of Citrus aurantium (sour orange) and Citrus latifolia (Tahiti acid lime). Phyllosticta citricarpa causes latent infections and different types of symptoms on fruit. These characteristics may be related to the phenological stage of the fruit at the time of infection. The objectives of this study were to evaluate the influence of fruit age of sweet orange on conidia germination and on the incubation period of P. citricarpa and identify phenolics pre or post-formed in the flavedo of sweet orange inoculated with P. citricarpa. Orange fruits of varieties Hamlin, Valencia and Pera with 1.5, 3.0, 5.0 and 7.0 cm of diameters were inoculated with a conidia suspension of P. citricarpa at the concentration of 103 and 105 conidia.mL-1 and were evaluated monthly. The first symptom observed was false melanose and no differences were found in the incubation period among the varieties. The incubation period of false melanose was affected by the inoculum concentration and fruit diameters. Fruits with 1.5 and 3.0 cm of diameter inoculated with a conidia suspension of P. citricarpa, at a concentration of 103 conidia.mL-1, showed symptoms between 70 and 116 days, respectively. On the other hand, fruits with 1.5, 3.0 and 5.0 cm in diameter, inoculated with suspension of 105 conidia.mL-1, expressed symptoms between 40, 65 and 156 days, respectively. The period for symptom expression of hard spot did not differ between inoculum concentrations. The incubation period differed between the diameters and varieties evaluated. The Valencia variety presented symptoms in a shorter time than Hamlin and Pera. The average times for hard spot expression in fruits (all varieties together) inoculated with 1.5, 3.0, 5.0 and 7.0 cm of diameter were 240, 217, 176 and 197 days, respectively. Symptoms of false melanose and hard spot were expressed independently from each other. No differences were observed in the amounts of phenolic compounds between inoculated and non-inoculated fruits after 48 h of incubation in a humid chamber. The highest amounts of phenolic compounds were found in smaller fruits and, as fruits increased size, there was a decrease in the amounts of these compounds. No differences were found in the germination pattern of fungus on the inoculated fruits, but wax plates were observed on the surface of fruits with 7.0 cm in diameter. Symptoms of false melanose seem to be related to the plant defense mechanism, and symptoms of hard spot appeared to be related with phenological stages of the fruits.

A requeima, causada pelo oomiceto Phytophthora infestans e a pinta preta, causada pelo fungo Alternaria solani, estão entre as doenças mais importantes e destrutivas da cultura da batata no Brasil e no mundo. Considerando a importância do controle químico em sistemas integrados e a necessidade de se conhecer detalhadamente o desempenho de fungicidas e indutores de resistência visando à sustentabilidade da produção, o presente estudo objetivou caracterizar e comparar a ação preventiva, residual, curativa, anti-esporulante e resistência à chuva de fungicidas em condições controladas, bem como, avaliar em campo o potencial de controle de fungicidas e indutores de resistência e seus reflexos sobre a produtividade total e comercial de tubérculos. Todos os fungicidas promoveram elevada ação preventiva contra a requeima e a pinta preta. Os fungicidas sistêmicos ou com alta tenacidade proporcionaram controle das duas doenças até os 12 DAP, enquanto que os fungicidas translaminares até os 9 DAP. Quanto à ação curativa e anti-esporulante destacaram-se principalmente os fungicidas sistêmicos aplicados até as 24 horas após a inoculação (HAI). Os fungicidas translaminares foram capazes de inibir a requeima quando aplicados até 12 HAI e os de contato destacaram-se apenas para ação preventiva. Semelhantemente, os fungicidas sistêmicos, translaminares ou com alta tenacidade foram os menos afetados pela chuva simulada. O aumento do tempo de secagem promoveu uma maior retenção ou absorção dos produtos reduzindo o impacto negativo da precipitação. Os melhores níveis de controle, produtividade e qualidade de tubérculos foram obtidos com os fungicidas mandipropamida+clorotalonil, fluopicolida+propamocarbe, dimetomorfe+ametoctradina, mandipropamida, fenamidona+propamocarbe, bentiavalicarbe+ fluazinam, seguidos de dimetomorfe+clorotalonil mefenoxam+clorotalonil e famoxadona+ cimoxanil+mancozebe para requeima e azoxistrobina+difenoconazol, picoxistrobina, piraclostrobina+metconazol, trifloxistrobina+tebuconazol, azoxistrobina, boscalida+ piraclostrobina, iprodiona+pirimetanil e ciprodinil para pinta preta. Acibenzolar-s-metílico (ASM) reduziu a severidade da requeima e da pinta preta, porém, promoveu aumento da produtividade, apenas no campo de requeima. O fosfito de potássio (FP) também reduziu a severidade da requeima, no entanto, não influenciou na produtividade. Com exceção de mandipropamida, a adição de ASM à mefenoxam+mancozebe, cimoxanil+mancozebe e mancozebe promoveu aumento do controle da requeima, no entanto, apenas quando em mistura com mancozebe proporcionou aumento na produtividade. A adição de FP à mandipropamida, mefenoxam+mancozebe, cimoxanil+mancozebe, mancozebe e de ASM à azoxistrobina e difenoconazol não refletiu no controle da requeima, da pinta preta e na produtividade, respectivamente. Mancozebe e ASM não diferiram quanto severidade, progresso da pinta preta e produtividade, porém mancozebe+ASM foi superior ao ASM. A adição de ASM a programas de aplicação reduziu a requeima e a pinta preta e incrementou a produtividade apenas quando adicionados a programas onde prevaleceram fungicidas translaminares e de contato. O FP não influenciou nenhum dos programas testados para requeima. / Late blight, caused by the oomycete Phytophthora infestans and early blight, caused by the fungus Alternaria solani, are among the most destructive diseases of potato crops in Brazil and worldwide. Considering the importance of the chemical control on integrated systems and the need for detailed knowledge of the performance of resistance inducers and fungicides targeting the sustainability of production, the present study aimed to:1- characterize and compare the preemptive, residual, curative, antisporulative action and rain resistance of fungicides under controlled conditions; 2-: evaluate, under field conditions, the control potential of fungicides and resistance inductors and their effects on the total and commercial yield of potato tubers. All fungicides tested provided a high pre-emptive action against late and early blight. The systemic fungicides or high tenacity ones provided control of both diseases until 12 days after application, while translaminar ones until 9 days after application. As for the curative and anti-sporulative action, the systemic fungicides stand out when applied until 24 hours postinoculation, while the translaminar ones inhibited late blight when applied until 12 hours postinoculation. The contact fungicides stand out concerning pre-emptive action only. Similarly, systemic, translaminar and high tenacity fungicides were less affected by the simulated rain. An increase in drying time promoted higher retention and absorption of the products, so decreasing the negative precipitation impact. The better levels of control, yield and tubers quality were reached with the use of the following fungicides in the control of late blight: mandipropamid+chlorothalonil, fluopicolide+propamocarb, dimetomorph+ametoctradin, mandipropamid, fenamidone+ propamocarb, bentiavalicarb+fluazinam, followed by dimetomorph+chlorothalonil, mefenoxam+ chlorothalonil and famoxadone+cymoxanil+mancozeb. In the control of early blight the most efficient were: azoxystrobin+difenoconazole, pycoxystrobin, pyraclostrobin+metconazole, trifloxystrobin+tebuconazole, azoxystrobin, boscalid+pyraclostrobin, iprodione+pyrimethanil and cyprodinil. Acibenzolar-s-methyl (ASM) reduced the severity of late and early blight, but promoted an increase in the tuber yield only in late blight affected field. Potassium phosphite (Pp) also reduced the severity of late blight, although it did not have influenced the yield. Except for mandipropamid, the addition of ASM to mefenoxam+mancozebe, cymoxanil+mancozeb or mancozeb led to a better control of late blight, but only when mixed with mancozeb it promoted increase in the yield. Addition of Pp to mandipropamid, mefenoxam+mancozeb, cymoxanil+mancozeb, mancozeb and ASM to azoxystrobin, difenoconazole did not result either in the control of late and early blight or in an increase of yield. Mancozeb and ASM did not differ as for severity, progress of late blight and increasing yield, but however, mancozeb+ASM had a superior efficiency than ASM. Addition of ASM to application programs reduced late and early blight and increased yield only when added to programs in which prevailed translaminar and contact fungicides. Pp did not influenced any of the tested programs against late blight.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:37:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Isabel Balbi-Pena.pdf: 402140 bytes, checksum: 2e4a3baf75444b18009c52bff4d2c3f7 (MD5) Previous issue date: 2005-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Early blight, caused by Alternaria solani, is one of the most important diseases of tomato in Brazil. This disease affects leaves, stems, petioles and fruits causing important economicaI losses. New alternatives to fungicides have been evaluated to control the diseases with low environmental impact and low toxicity to living beings. The discovery of vegetal secondary compounds with antimicrobiotic activity or secondary compounds that induce disease resistance shows to be very promissory. Turmeric, Curcuma longa, has compounds in its rhizomes with proved antimicrobiotic activity. The objectives of this study were to evaluate the in vitro fungitoxic activity of turmeric extracts and curcumin against A. solani and to determinate their potential in the control of tomato early blight. Four different concentrations (1, 5, 10 and 20%) of aqueous extracts of turmeric rhizomes (sterilized by autoclavation) and four curcumin solutions (50, 100, 200 and 400 mg L-1) were incorporated into potato dextrose agar medium in order to evaluate fungal micelial growth and esporulation. To evaluate the effect of autoclavation, 10% and 15% turmeric extracts were sterilized by filtration. The effects of autoclavated and non autoclavated turmeric extracts and curcumin on in vitro spore germination were tested. The concentrations of 10 and 15% non autoclavated turmeric extracts inhibited the micelial growth by 38,2% and 23,2%, respectively, and the fungal sporulation by 71,7% and 87% respectively. When the turmeric extracts were autoclavated, neither micelial growth nor spore germination was inhibited and the effect on the sporulation was reduced, suggesting the presence of thermolabile antimicrobiotic compounds. The non autoclavated 5% extract inhibited by 15% the spore germination. At the highest concentration, the curcumin solution inhibited the micelial growth by 29,5%. Neither in vitro esporulation nor spore germination was affected by curcumin. At a greenhouse experiment, desease severity, fruit production and classification were evaluated. The treatments were: 1 and 10% turmeric extracts, 50 e 100 mg L-1 curcumin solutions, acibenzolar-S-metil (ASM) (2,5 g 100 L-1 of a.i.), copper oxychloride (110 g L-1 of a.i.), azoxystrobin (40 g L-1 of a.i.) and control (water). The disease control showed by turmeric extracts and curcumin solutions was similar to cuprous fungicide, but inferior to azoxystrobin control. There was no statistical difference in comercial fruit production between treatments. Only 50 mg L-1 curcumin treatment had higher porcentage of bigger fruits compared to the control. Another experiment with tomato plants growing in vases was performed with the subject of veryfing resistance induction. After 26 days of transplanting, the 7th. leaf was sprayed with turmeric extract (1 and 10%), curcumin (50 e 100 mg L-1), ASM (2,5 g a.i. 100 L-1) and water. Seventy two hours later, 7th. treated leaf and 8th. untreated leaf were inoculated with A. solani. At 7th. leaf, 10% turmeric extract and 100 mg L-1 curcumin treatments showed an statistically inferior area under disease progress curve, compared to the control, what could suggest induction of local resistance or direct antimicrobiotic activity. At 8th. leaf, only 10% turmeric extract shows significant difference compared with the control, what could mean a systemic resistance induced by turmeric extract. These results show the potential of turmeric and curcumin in the control in tomato early blight. / A pinta preta, causada por Alternaria solani, é uma das mais importantes doenças da cultura do tomateiro no Brasil. A doença ocorre em folhas, hastes, pecíolos e frutos, ocasionando elevados prejuízos econômicos. Várias alternativas aos fungicidas têm sido avaliadas nos últimos anos na busca de produtos que controlem satisfatoriamente as doenças, tenham pequeno impacto ambiental e baixa toxicidade aos seres vivos. A descoberta de muitos compostos secundários de plantas com atividade antimicrobiana e/ou indutores de resistência, mostra-se promissora. A cúrcuma, Curcuma longa, apresenta compostos em seus rizomas com comprovada atividade antimicrobiana. Dessa forma, os objetivos deste trabalho foram avaliar a atividade fungitóxica in vitro dos extratos brutos de cúrcuma e da curcumina contra A. solani e determinar o potencial dos mesmos no controle da pinta preta em tomateiro. Foram utilizados extratos brutos aquosos de rizomas de cúrcuma (esterilizados por autoclavagem) nas concentrações de 1, 5, 10 e 20% e curcumina nas concentrações de 50, 100, 200 e 400 mg L-1, os quais foram incorporados em meio de cultura batata-dextrose-ágar para avaliação de crescimento micelial e esporulação do fungo. Para avaliar o efeito da autoclavagem, foram testados extratos de cúrcuma a 10 e 15% esterilizados por filtração. Foi testado também o efeito dos extratos de cúrcuma autoclavados e não autoclavados e da curcumina na germinação de esporos in vitro. Os extratos de cúrcuma a 10 e 15% sem autoclavar, inibiram em 38,2% e 23,2% respectivamente o crescimento micelial e 71,7% e 87%, respectivamente, a esporulação do fungo. Quando autoclavados, não apresentaram inibição do crescimento micelial nem da germinação de esporos e a inibição da esporulação foi menor, indicando a presença de compostos antimicrobianos termolábeis. O extrato não autoclavado na concentração de 5%, inibiu um máximo de 15% a germinação dos esporos. A curcumina inibiu o crescimento micelial em 29,5% na maior concentração. Não foi verificado efeito da curcumina sobre a esporulação e a germinação de esporos in vitro. No ensaio in vivo, conduzido em casa de vegetação, foi avaliada a severidade da doença e a produção e classificação de frutos. Os tratamentos utilizados foram: extrato de cúrcuma (1 e 10%), curcumina (50 e 100 mg L-1), acibenzolar-S-metil (ASM) (2,5 g 100 L-1 de i.a.), oxicloreto de cobre (110 g L-1 de i.a.), azoxystrobin (40 g L-1 de i.a.) e testemunha (água). A curcumina e os extratos brutos de cúrcuma apresentaram níveis de controle de pinta preta, no campo, similares ao tratamento com fungicida cúprico, mas inferior ao azoxystrobin. Não houve diferenças estatísticas na produção comercial de frutos entre tratamentos. Somente o tratamento de curcumina 50 mg L-1 apresentou maior porcentagem de frutos grandes em relação à testemunha. Outro ensaio foi conduzido com o objetivo de verificar a indução de resistência em plantas cultivadas em vasos. Aos 26 dias após o transplante, a 7ª folha da planta recebeu extrato de cúrcuma (1 e 10%), curcumina (50 e 100 mg L-1), ASM (2,5 g 100 L-1 de i.a.) ou água, por aspersão. Após 72 h, a 7a folha tratada e a 8a folha (não tratada) foram inoculadas com A. solani. Na 7ª folha, os tratamentos com extrato de cúrcuma 10% e curcumina 100 mg L-1 apresentaram um valor de área abaixo da curva de progresso da doença estatisticamente menor à testemunha, o que poderia indicar indução de resistência local ou atividade antimicrobiana direta. Na 8ª folha, somente o extrato de cúrcuma 10% apresentou diferença significativa com a testemunha o que poderia indicar uma indução de resistência sistêmica pelo extrato bruto de cúrcuma. Esses resultados indicam o potencial de cúrcuma e curcumina para o controle de pinta preta no tomateiro.

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