Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / El circovirus porcino tipo 2 (PCV2, del Inglés Porcine Circovirus Type 2) pertenece a la familia circoviridae, la cual está constituida por virus pequeños y sin envoltura, con un genoma de ADN circular de hebra simple. El genoma de PCV2 codifica en forma divergente para dos marcos de lectura abiertos (ORFs, del Inglés Open Reading Frames) involucrados en la formación de la cápside (cap) y el complejo de replicación viral. Este virus es considerado el agente etiológico principal de una enfermedad emergente en nuestro país, denominada Síndrome del Desmedro Multisistémico Postdestete (PMWS, del Inglés Postweaning Multisystemic Wasting Sindrome) en cerdos, el cual se caracteriza por generar una inmunosupresión severa, con pérdida progresiva de peso y deterioro general de la condición corpórea, lo que acompañado por una serie de infecciones concomitantes, llevan a la muerte prematura del animal, con las consecuentes pérdidas económicas en los países productores. Si bien es un síndrome ampliamente distribuido en el mundo y muy común en todos los planteles productores de cerdos, la presencia de PCV2 en Chile no ha sido del todo demostrada. El objetivo de esta memoria de título fue detectar la presencia de circovirus porcino tipo 2 en Chile y caracterizar su genotipo. La detección del virus se realizó por medio de PCR desde muestras de linfonodos inguinales superficiales de cerdos con signología PMWS, pertenecientes a 3 planteles porcinos de la zona central de Chile, analizándose al menos 5 casos por plantel. El gen orf2 del virus fue detectado en el 100 % de las muestras analizadas, tanto por PCR simple como por PCR semi-cuantitativo. Por otra parte, con el fin de realizar una caracterización genotípica del virus, el gen orf2 fue sometido a un análisis de la longitud de los polimorfismos de los fragmentos de restricción (RFLP, del inglés restriction fragment length polymorphism), no encontrándose diversidad genética, intrae inter-planteles, entre las muestras analizadas, las cuales presentaron un patrón RFLP igual a un clon europeo usado como control. 5 Posteriormente se realizó la secuenciación nucleotídica en ambos sentidos, tras el clonamiento, de cuatro secuencias aisladas de los diferentes predios. Las secuencias presentaron un 94% de identidad nucleotídica entre si y su análisis filogenético las agrupó en un clado específico, junto con aislados suecos y algunos aislados chinos. Además, este análisis junto a revisión bibliográfica reciente, permitió diferenciar las secuencias en dos subgrupos o subgenotipos del virus, 1 y 2. De esta manera fue posible concluir que el circovirus porcino tipo 2 esta presente en nuestro país y que las cepas analizadas corresponden al subgrupo 1, presentando una estrecha relación con genotipos de origen Europeo / Bicentenario Banco Mundial-Conicyt PSD2; Iniciación en Investigación de la Vicerrectoría de Investigación y Desarrollo de la Universidad de Chile VID I07/15-2 y el Fondo de Investigación Veterinaria FIV 2007 de la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias de la Universidad de Chile

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La producción porcina en Chile aporta un importante porcentaje al total de toneladas de carne producidas anualmente en el país. Es por esta razón que se debe resguardar la calidad sanitaria de los cerdos y evitar enfermedades como la circovirosis la cual ha mostrado generar un gran impacto en la industria porcina mundial. El agente causal de la enfermedad es Circovirus porcino tipo II (PCV-2), el cual genera un estado de inmunosupresión severo en los animales y consecuentemente, la manifestación de patologías secundarias que terminan por afectar el crecimiento del cerdo. Además de mejorar la gestión y las prácticas de manejo (mejor higiene, menor hacinamiento y mejor ventilación), la disponibilidad de vacunas contra PCV-2 ha representado una opción inmunológica eficaz para paliar el impacto de estas enfermedades. Existen diferentes vacunas contra PCV-2, muchas de ellas probadas en otros países, pero con pocos referentes de su acción y eficacia en Chile. Además, la presencia de variantes genéticas de PCV-2 en el país, sugiere la importancia de evaluar la eficacia de formulaciones importadas actualmente usadas en la industria porcina nacional, con el fin de obtener información de relevancia para mejorar los protocolos de prevención y control de la enfermedad. En el presente estudio y con la finalidad de evaluar el efecto de una vacuna comercial contra PCV-2 en Chile, se midió la carga viral de dicho virus en cerdos de un plantel nacional de producción porcina bajo un programa de vacunación contra PCV-2. Para esto, se implementó y estandarizó un ensayo de PCR tiempo real usando SYBR® Green y se utilizó una cohorte de 30 animales (15 vacunados vs 15 no vacunados) muestreados a distintos periodos de tiempo: 30, 50, 70, 90, 110 y 130 días, como grupo de estudio. Los resultados obtenidos permitieron concluir que en los primeros 90 días de la medición, la carga viral se mantiene en un nivel basal no existiendo diferencias estadísticamente significativas entre el grupo control no vacunado y aquellos animales en los cuales si se administró el producto. Posteriormente, se evidenció una significativa alza de carga viral en ambos grupos en el día 110 del estudio, sin embargo en los animales vacunados, este aumento en el parámetro es ligeramente más tardío (día 130 del muestreo). Por esto se dedujo que la vacuna tiene un factor protectivo sobre los animales al retardar el peak de carga viral en los cerdos vacunados / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 11110135

A utilização e o desenvolvimento de biomateriais para a regeneração tecidual são de grande importância, principalmente para a área médica e odontológica. Matrizes de colágeno derivadas de tecidos de origem animal são utilizadas devido o colágeno apresentar características como biodegradabilidade e biocompatibilidade. Essas matrizes podem ser obtidas a partir de várias fontes, sendo uma delas o pericárdio porcino, que apresenta vantagens como grande disponibilidade, baixo custo, fácil obtenção e possibilidade de sofrer modificações químicas. Além disso, tecidos de origem suína são muito similares aos tecidos humanos, podendo ser utilizados para a produção de biomateriais para a regeneração de tecido mole. Este trabalho teve como objetivo a preparação de membranas acelulares derivadas de pericárdio porcino por hidrólise alcalina em diferentes tempos, para posterior utilização em engenharia de tecido. As membranas de colágeno foram obtidas por hidrólise alcalina de pericárdio porcino durante 4, 8, 12 e 24 h e caracterizadas por análise histológica, microscopia eletrônica de varredura (MEV), avaliação da citoxicidade in vitro, estabilidade biológica in vitro (colagenase), titulação potenciométrica, porcentagem de absorção de água, calorimetria exploratória diferencial (DSC), termogravimetria (TG), análise térmica dinâmico-mecânica (DMTA) e ensaios de tração. A análise histológica mostrou que após 4h de hidrólise as células foram removidas das membranas. A avaliação da citotoxicidade in vitro mostrou que as membranas preparadas neste trabalho não são citotóxicas. Os ensaios de estabilidade biológica in vitro por colagenase mostraram que as membranas hidrolisadas degradaram mais rapidamente que a não hidrolisada e, quando comparadas com matrizes derivadas de pericárdio bovino, as derivadas de pericárdio porcino foram mais resistentes à degradação por colagenase. A titulação potenciométrica possibilitou determinar o número de grupos carboxílicos das membranas e o incremento desses grupos por molécula de colágeno. Os resultados mostraram que houve um aumento no número de grupos carboxílicos tituláveis nas membranas hidrolisadas e, consequentemente, houve um aumento do número de cargas negativas incorporadas na molécula de colágeno. As membranas hidrolisadas apresentaram uma maior absorção de água, uma diminuição das temperaturas de desnaturaçãoe e menor estabilidade térmica em função do aumento do tempo de hidrólise. Os ensaios de tração mostraram que após a hidrólise alcalina as membranas apresentaram maiores valores de resistência à tração e que a deformação é dependente do tempo de hidrólise alcalina. Esses resultados mostraram que a preparação de membranas de colágeno derivadas de pericárdio porcino com diferentes tempos de hidrólise alcalina é um procedimento viável para ser utilizado na produção de biomateriais para engenharia de tecido. / The use and development of biomaterials for tissue regeneration are of great importance, especially for medical and dental care. Collagen matrices derived from animal tissues are widely used because collagen has characteristics such as biodegradability and biocompatibility. These matrices can be obtained from various sources, such as porcine pericardium, which is a tissue that can be used due its low cost, wide availability and because it can be chemically modified. Besides, porcine tissues are very similar to human tissue and can be used to produce biomaterials for soft tissue regeneration. The aim of this study was the preparation and characterization acellular membranes by alkaline hydrolysis of porcine pericardium. Membranes were characterized by histological analysis, scanning electron microscopy (SEM), in vitro cytotoxicity evaluation, in vitro biological stability (collagenase), potentiometric titration, water absorption percentage, differential scanning calorimetry (DSC), thermogravimetry (TG), dynamic mechanical thermal analysis (DMTA) and tensile tests. Histological analysis showed that after 4h of hydrolysis, cells were totally removed from matrices. In vitro cytotoxicity showed that all matrices prepared in this work are not cytotoxic. In vitro biological stability tests (collagenase) showed that the hydrolyzed membranes degraded more quickly than the non hydrolized matrix and more resistant to collagenase degradation when compared to matrices derived from bovine pericardium. The potentiometric titration allowed the determination carboxylic groups and the increase of these groups per collagen molecule. Hydrolyzed matrices had an increase in water absorption, a decrease in denaturation temperature and a small decrease in thermal stability with the increase of hydrolysis time. Tensile tests showed that after alkaline hydrolysis matrices showed higher tensile strength and the deformation was independent of the time of alkaline hydrolysis. These results showed that the preparation of collagen biological matrices derived from porcine pericardium with different times of alkaline hydrolysis is a viable procedure to be subsequently used in the production of biomaterials for tissue engineering.

El objetivo de la presente tesis fue estudiar qué factores pueden explicar la variabilidad existente en la congelabilidad espermática entre eyaculados, la integridad del ADN en los espermatozoides descongelados, la posibilidad de adaptar el protocolo de criopreservación a las necesidades cada verraco y, el posible papel del plasma seminal en la congelabilidad espermática. Los resultados revelaron que el verraco es el factor más importante capaz de explicar la diferente susceptibilidad entre eyaculados para soportar el proceso de criopreservación y que la variabilidad dentro de un mismo verraco es baja. El grado de fragmentación del ADN de los espermatozoides porcinos descongelados es relativamente bajo, y ligeros ajustes en la concentración de glicerol y la velocidad de descongelación, permiten mejorar la supervivencia espermática, especialmente de aquellos eyaculados considerados como "malos congeladores. Finalmente, la suplementación del medio de congelación con plasma seminal de individuos con buena congelabilidad tiene un efecto beneficioso sobre la congelabilidad espermática. / The aim of this thesis was to study which factors could explain part of the ejaculate variation in sperm freezability, the incidence of DNA fragmentation in frozen-thawed boar spermatozoa, whether different boars require modifications in the freezing and thawing protocol to enhance sperm cryosurvival and, the possible role of seminal plasma in boar sperm freezability. The results revealed that boar is the most important factor explaining the different susceptibility among ejaculates to sustain cryopreservation and that the intra-boar variability is relatively low. The overall DNA damage in frozen-thawed boar sperm is low and slight adjustment of the glycerol concentration and warming rate provides a better sperm cryosurvival, particularly in those ejaculates which are considered as "bad" freezers. Finally, supplementation of freezing media with seminal plasma from males with "good" freezability, has a beneficial effect on post-thaw sperm cryosurvival

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El uso de micropartículas (MPs) de polímeros naturales ha sido descrito como una innovadora técnica de formulación de adyuvantes para diversas vacunas. Para esta memoria de título se utilizó quitosano (Qo) como polímero natural el cual se funcionalizó con grupos azufrados para preparar quitosano tiolado (QT) y sulfonado (QS). Con estos quitosanos se formularon micropartículas de quitosano tioladas (MPQT) y de quitosano sulfonadas (MPQS) cargadas con el antígeno del circovirus porcino tipo II (PCV2). Las micropartículas de quitosano (MPQ) formuladas y cargadas fueron obtenidas mediante técnicas de gelificación iónica y secado por atomización. Se determinó la presencia de grupos azufrados en las MPQ mediante Espectroscopía infrarroja transformada de Fourier (FTIR) y se caracterizaron en cuanto a morfología, tamaño y cantidad de carga mediante microscopía electrónica de barrido o Scanning Electron Microscope (SEM) y potencial Zeta. Por otro lado, además se evaluaron parámetros de Eficiencia de encapsulación (EE) y Rendimientos de la producción (R), se determinó también la presencia de antígeno mediante Dot Blot y se realizaron estudios in vitro de mucoadhesividad. Los resultados obtenidos por FTIR indicaron la aparición de nuevos picos de absorción que coinciden con los grupos -SH, con enlaces C-O-S y para grupos S=O. Mediante SEM se observó la formación de MPs de Qo con formas más o menos esféricas, bordes definidos, superficie lisa a rugosa, y tamaños que variaron entre 1 y 50 µm. Mediante potencial Zeta las MPQC y MPQT presentaron carga neta positiva mientras que las MPQS presentaron carga neta negativa. Todas las MPs poseen valores de EE superiores a 80%, R sobre 30% para MPs 1X y son positivas a la presencia de antígeno Cap de PCV2 al análisis por Dot Blot. Finalmente, los ensayos de mucoadhesividad mostraron que las MPQT y MPQS presentaron mejor mucoadhesividad respecto a MPQC. En conclusión, se logró preparar y caracterizar Qo funcionalizado con grupos tiol y sulfonato, formular tres tipos de MPs de Qo cargadas con antígeno Cap de PCV2 y caracterizadas en su totalidad. / The use of microparticles (MPs) of natural polymers has been described as an innovative technique of formulating adjuvants for various vaccines. For this title memory chitosan (Qo) was used as the natural polymer which was functionalized with sulfur groups to prepare thiolated (QT) and sulfonated chitosan (QS). With these chitosans, thiolated chitosan microparticles (MPQT) and sulphonated chitosan microparticles (MPQS) loaded with the porcine circovirus type II (PCV2) antigen were formulated. The formulated and loaded chitosan microparticles (MPQ) were obtained by ionic gelation and spray drying techniques. It was determined the presence of sulfur groups in the MPQ by Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR) and these MPs were characterized in terms of morphology, size and amount of charge by means of Scanning Electron Microscope (SEM) and Zeta potential, besides evaluating such parameters such as encapsulation efficiency (EE) and yields of production (R), the presence of antigen was also evaluated by Dot Blot and finally in vitro mucoadhesivity studies were performed. The results obtained by FTIR indicate the occurrence of new absorption peaks that coincide with the groups -SH, with C-O-S bonds and for S = O groups. By SEM the formation of MPs of Qo with more or less spherical shapes, defined edges, smooth to rough surface, and sizes varying between 1 and 50 μm are observed. By means of zeta potential the MPQC and MPQT presented positive net load while the MPQS presented negative net load. All MPs have EE values higher than 80%, R about 30% for 1X MPs and are positive for the presence of PCV2 Cap antigen at Dot Blot analysis. Finally, mucoadhesivity assays show that MPQT and MPQS had better mucoadhesivity with respect to MPQC. In conclusion, it is possible to prepare and characterize Qo functionalized with thiol and sulfonate groups, to formulate three types of Qo MPs loaded with PCV2 Cap antigen and to characterize them in their entirety. / Financiamiento: Proyecto Fondef It13120021 & Fondecyt 1140660

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / El circovirus porcino tipo 2 (PCV2, del Inglés Porcine Circovirus Type 2) pertenece a la familia circoviridae, la cual está constituida por virus pequeños y sin envoltura, con un genoma de ADN circular de hebra simple. El genoma de PCV2 codifica en forma divergente para dos marcos de lectura abiertos (ORFs, del Inglés Open Reading Frames) involucrados en la formación de la cápside (cap) y el complejo de replicación viral. Este virus es considerado el agente etiológico principal de una enfermedad emergente en nuestro país, denominada Síndrome del Desmedro Multisistémico Postdestete (PMWS, del Inglés Postweaning Multisystemic Wasting Sindrome) en cerdos, el cual se caracteriza por generar una inmunosupresión severa, con pérdida progresiva de peso y deterioro general de la condición corpórea, lo que acompañado por una serie de infecciones concomitantes, llevan a la muerte prematura del animal, con las consecuentes pérdidas económicas en los países productores. Si bien es un síndrome ampliamente distribuido en el mundo y muy común en todos los planteles productores de cerdos, la presencia de PCV2 en Chile no ha sido del todo demostrada. El objetivo de esta memoria de título fue detectar la presencia de circovirus porcino tipo 2 en Chile y caracterizar su genotipo. La detección del virus se realizó por medio de PCR desde muestras de linfonodos inguinales superficiales de cerdos con signología PMWS, pertenecientes a 3 planteles porcinos de la zona central de Chile, analizándose al menos 5 casos por plantel. El gen orf2 del virus fue detectado en el 100 % de las muestras analizadas, tanto por PCR simple como por PCR semi-cuantitativo. Por otra parte, con el fin de realizar una caracterización genotípica del virus, el gen orf2 fue sometido a un análisis de la longitud de los polimorfismos de los fragmentos de restricción (RFLP, del inglés restriction fragment length polymorphism), no encontrándose diversidad genética, intrae inter-planteles, entre las muestras analizadas, las cuales presentaron un patrón RFLP igual a un clon europeo usado como control. Posteriormente se realizó la secuenciación nucleotídica en ambos sentidos, tras el clonamiento, de cuatro secuencias aisladas de los diferentes predios. Las secuencias presentaron un 94% de identidad nucleotídica entre si y su análisis filogenético las agrupó en un clado específico, junto con aislados suecos y algunos aislados chinos. Además, este análisis junto a revisión bibliográfica reciente, permitió diferenciar las secuencias en dos subgrupos o subgenotipos del virus, 1 y 2. De esta manera fue posible concluir que el circovirus porcino tipo 2 esta presente en nuestro país y que las cepas analizadas corresponden al subgrupo 1, presentando una estrecha relación con genotipos de origen Europeo. / Porcine Circovirus pig type 2 belong to the family circoviridae, constituted by small virus without envelope, with a simple circular strand DNA genome, which codifies in divergent form for two open reading frames (ORFs) involved in the capsid formation (Cap) and the viral replication complex. This virus is considered the mayor the etiologic agent of an emergent disease in our country, denominated Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome, PMWS, in pigs, which is characterized to generate a severe immunosupression, with a progressive weight loss and general decline in the fitness condition, which is accompanied by a series of concomitant infections, with the premature death of the animal, and the consequent economic losses in the pig-producing countries. Although it is a syndrome wide world distributed and very common in all the pig-producing establishments, the presence of PCV2 in Chile has not absolutely been demonstrated. The goal of this thesis was to detect the presence of porcine circovirus type 2 in Chile and to characterize its genotype. The detection of the virus was performed by PCR from lymph nodes samples of PMWS-pigs, bellowing to 3 pig- producing establishments from the central zone of Chile, analyzing 5 cases per establishment at least. The orf2 gene virus was detected in 100% of the analyzed samples, by simplex PCR and by semi-quantitative PCR. On the other hand, in order to perform the virus genotypic characterization, the orf2 gene amplified was analyzed by RFLP, not founding genetic diversity among the analyzed samples intra- and inter-establishments; which presented the same RFLP pattern than european isolated clone used as ingroup. The nucleotide sequenciation, after cloning, was performed in both strand in four isolated sequences from different pig-producing establishment. The sequences presented a 94% of nucleotidic identity each other. The phylogenetic analysis clustered them in specific clade, near to some swedish and chinese isolated. This analysis, together to recent bibliographical revision, allowed to differentiate the sequences in two sub-groups, 1 and 2. Taken together these results shows that porcine circovirus type 2 is present in our country and that the analyzed isolated correspond to sub-group 1, presenting a near relation with european isolated. / Trabajo financiado por los proyectos: Bicentenario Banco Mundial-Conicyt PSD2; Iniciación en Investigación de la Vicerrectoría de Investigación y Desarrollo de la Universidad de Chile VID I07/15-2 y el Fondo de Investigación Veterinaria FIV 2007 de la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias de la Universidad de Chile.

A utilização e o desenvolvimento de biomateriais para a regeneração tecidual são de grande importância, principalmente para a área médica e odontológica. Matrizes de colágeno derivadas de tecidos de origem animal são utilizadas devido o colágeno apresentar características como biodegradabilidade e biocompatibilidade. Essas matrizes podem ser obtidas a partir de várias fontes, sendo uma delas o pericárdio porcino, que apresenta vantagens como grande disponibilidade, baixo custo, fácil obtenção e possibilidade de sofrer modificações químicas. Além disso, tecidos de origem suína são muito similares aos tecidos humanos, podendo ser utilizados para a produção de biomateriais para a regeneração de tecido mole. Este trabalho teve como objetivo a preparação de membranas acelulares derivadas de pericárdio porcino por hidrólise alcalina em diferentes tempos, para posterior utilização em engenharia de tecido. As membranas de colágeno foram obtidas por hidrólise alcalina de pericárdio porcino durante 4, 8, 12 e 24 h e caracterizadas por análise histológica, microscopia eletrônica de varredura (MEV), avaliação da citoxicidade in vitro, estabilidade biológica in vitro (colagenase), titulação potenciométrica, porcentagem de absorção de água, calorimetria exploratória diferencial (DSC), termogravimetria (TG), análise térmica dinâmico-mecânica (DMTA) e ensaios de tração. A análise histológica mostrou que após 4h de hidrólise as células foram removidas das membranas. A avaliação da citotoxicidade in vitro mostrou que as membranas preparadas neste trabalho não são citotóxicas. Os ensaios de estabilidade biológica in vitro por colagenase mostraram que as membranas hidrolisadas degradaram mais rapidamente que a não hidrolisada e, quando comparadas com matrizes derivadas de pericárdio bovino, as derivadas de pericárdio porcino foram mais resistentes à degradação por colagenase. A titulação potenciométrica possibilitou determinar o número de grupos carboxílicos das membranas e o incremento desses grupos por molécula de colágeno. Os resultados mostraram que houve um aumento no número de grupos carboxílicos tituláveis nas membranas hidrolisadas e, consequentemente, houve um aumento do número de cargas negativas incorporadas na molécula de colágeno. As membranas hidrolisadas apresentaram uma maior absorção de água, uma diminuição das temperaturas de desnaturaçãoe e menor estabilidade térmica em função do aumento do tempo de hidrólise. Os ensaios de tração mostraram que após a hidrólise alcalina as membranas apresentaram maiores valores de resistência à tração e que a deformação é dependente do tempo de hidrólise alcalina. Esses resultados mostraram que a preparação de membranas de colágeno derivadas de pericárdio porcino com diferentes tempos de hidrólise alcalina é um procedimento viável para ser utilizado na produção de biomateriais para engenharia de tecido. / The use and development of biomaterials for tissue regeneration are of great importance, especially for medical and dental care. Collagen matrices derived from animal tissues are widely used because collagen has characteristics such as biodegradability and biocompatibility. These matrices can be obtained from various sources, such as porcine pericardium, which is a tissue that can be used due its low cost, wide availability and because it can be chemically modified. Besides, porcine tissues are very similar to human tissue and can be used to produce biomaterials for soft tissue regeneration. The aim of this study was the preparation and characterization acellular membranes by alkaline hydrolysis of porcine pericardium. Membranes were characterized by histological analysis, scanning electron microscopy (SEM), in vitro cytotoxicity evaluation, in vitro biological stability (collagenase), potentiometric titration, water absorption percentage, differential scanning calorimetry (DSC), thermogravimetry (TG), dynamic mechanical thermal analysis (DMTA) and tensile tests. Histological analysis showed that after 4h of hydrolysis, cells were totally removed from matrices. In vitro cytotoxicity showed that all matrices prepared in this work are not cytotoxic. In vitro biological stability tests (collagenase) showed that the hydrolyzed membranes degraded more quickly than the non hydrolized matrix and more resistant to collagenase degradation when compared to matrices derived from bovine pericardium. The potentiometric titration allowed the determination carboxylic groups and the increase of these groups per collagen molecule. Hydrolyzed matrices had an increase in water absorption, a decrease in denaturation temperature and a small decrease in thermal stability with the increase of hydrolysis time. Tensile tests showed that after alkaline hydrolysis matrices showed higher tensile strength and the deformation was independent of the time of alkaline hydrolysis. These results showed that the preparation of collagen biological matrices derived from porcine pericardium with different times of alkaline hydrolysis is a viable procedure to be subsequently used in the production of biomaterials for tissue engineering.

[EN] Poultry production is one of the main livestock related activities in Spain, being the most consumed fresh meat and the second, behind pork, when looking at total (including processed meat) consumption. On the other hand, pig farming is the most important livestock sector in our country with an annual income over 4.000 million ¿. Moreover, Spain is the second pig meat producer in the European Union. Neither of these two sectors are under the umbrella of the Common Agricultural Policy, thus not receiving any funding from the EU. Both sectors are highly dependent on external production factors such as feeding. Nevertheless, they are very dynamic sectors, constantly adapting to market needs, with constant technological advances. Moreover, due to low profit margins, both sectors are under a continuous technological update of the farms and a continuous professionalization of farmers in order to keep their competitiveness. In addition, farms must adapt to the new European and national regulations concerning animal welfare and environmental protection, which might be leading to a transformation of both sectors. The aim of this study was to obtain wide-ranging and detailed information about chicken and pig farms in the Comunidad Valenciana (Spain) focusing on aspects related to social, management-practices, biosecurity, productive technology and technical results. All these variables were generically described as a function of the production system and province. Almost 500 farms (284 pig farms and 202 poultry farms) were selected for surveying in this work. These farms were randomly selected and all of them were visited from July 2005 and during 18 months. In each farm, the owners or the person in charge of the farm were interviewed. Each survey included more than 500 variables for each sector. After completing the survey campaign, a database was obtained by applying coherence and error correction controls to the original data. This database was used for the statistical analysis aimed to characterize both sectors. The information was analyzed according to the production system, whether they were owner-operated or integrated farms, according to the productive system (pig farms) and according to the three provinces: Castellon, Valencia and Alicante. The statistic analysis was carried out in two steps. First a univariant analysis was used to describe the results obtained. Later, a multiple-correspondence analysis (two step cluster procedure) was conducted to classify farms in homogeneous groups according to their characteristics. The multiple-correspondence analysis allowed to clearly classifying poultry and pig farms of the Comunidad Valenciana according to their characteristics. The age of both, owner and farm buildings were the main driving factors for classification. The effect of both variables was found to be strongly related to other factors such as biosecurity measures and management-practices. / [ES] La cría de aves para producción de carne, es en la actualidad, una ganadería muy importante en nuestro país, ya que es la carne más consumida en fresco y la segunda en consumo total tras la carne de porcino. Por otro lado, el sector porcino es el primer sector de la ganadería de nuestro país con una producción anual que supone más de 4.000 millones de euros al año, lo que le coloca también como segundo productor europeo. Ninguno de estos dos sectores reciben ayudas dentro de la Política Agraria Común, y se caracterizan por ser muy dependientes de factores de producción ajenos a la explotación, fundamentalmente de los piensos compuestos. Son, además, sectores muy dinámicos con avances tecnológicos continuos y márgenes estrechos de ganancia, lo que obliga una renovación tecnológica constante de las explotaciones y una profesionalización continua de los granjeros, para ser competitivos. Actualmente, las explotaciones se tienen que adaptar a las nuevas normativas europeas y estatales de bienestar animal y de ordenación de los sectores, que buscan un mayor confort de los animales y una menor repercusión ambiental de las granjas en el medio. El objetivo de este estudio es caracterizar y tipificar las explotaciones porcinas y de pollos de engorde de la Comunidad Valenciana (C.V.), dos de los sectores ganaderos más importantes en España y que más han evolucionado en los últimos años. Con este fin, desde julio de 2005 y durante un periodo de dieciocho meses fueron visitadas un total de 202 explotaciones de producción de broilers y 284 explotaciones porcinas. En el caso del ganado porcino, se encuestaron explotaciones de ciclo cerrado, explotaciones de producción de lechones, multiplicadoras, cebaderos independientes, transiciones de lechones y explotaciones de producción mixta. En cada una de ellas se realizó una encuesta, a pie de granja, a los titulares de las instalaciones, con más de 500 variables para cada sector. Las explotaciones fueron seleccionadas mediante un muestreo aleatorio estratificado y proporcionado entre todas las existentes de ambos sectores. Los cuestionarios recogen variables de distintas categorías y se han considerado numerosos aspectos relacionados con la localización geográfica, información sobre el titular, características constructivas, instalaciones y equipamientos, control ambiental, manejo y gestión técnico-económica. Las medidas de bioseguridad tienen un apartado importante en ambos cuestionarios. Para llevar a cabo la caracterización y tipificación de las explotaciones, en primer lugar, cada variable fue sometida a un análisis descriptivo univariante estudiando, según tipos, su media y sus parámetros de dispersión y frecuencias. Examinando individualmente cada una de las variables, en función de la provincia, el tipo de explotación y la organización de la crianza. Posteriormente se ha empleado la metodología clúster (análisis multivariante). El análisis multivariante ha permitido caracterizar de forma sencilla las explotaciones avícolas y porcinas de la C.V., agrupándolas según sus características. En general, la antigüedad de las explotaciones y la edad de los titulares, han sido las variables que más peso han tenido a la hora de realizar dichas agrupaciones. El efecto de ambas variables se observa tanto en los aspectos relacionados con las infraestructuras e instalaciones como en las medidas de bioseguridad y manejo. / [CAT] La cria d'aus per a producció de carn és en l'actualitat un sector clau al nostre país, ja que és la carn més consumida en fresc i la segona en consum total després de la carn de porc. Espanya es troba entre els primers productors europeus de carn d'au. D'altra banda, el sector porcí és el primer sector de la ramaderia del nostre país, amb una producció anual que suposa més de 4.000 milions d'euros a l' any, el que el col·loca com a segon productor europeu. Cap d'aquests dos sectors reben ajudes dins de la Política Agrària Comú, i es caracteritzen per ser molt dependents de factors de producció aliens a l'explotació, fonamentalment dels pinsos compostos. Són, a més, sectors molt dinàmics amb continus avanços tecnològics i marges de benefici molt estrets, el que obliga a una constant renovació tecnològica de les explotacions i una contínua professionalització dels ramaders, per tal de ser competitius. Actualment, les explotacions s'han d'adaptar a les noves normatives europees i estatals de benestar animal i d'ordenació dels sectors, que busquen un major confort dels animals i una menor repercussió ambiental de les granges en el medi. L'objectiu d'aquest estudi és caracteritzar i tipificar les explotacions porcines i de pollastres d'engreix de la Comunitat Valenciana (C.V.), dos dels sectors ramaders més importants a Espanya i que més han evolucionat en els últims anys. Amb aquesta finalitat, des de juliol de 2005 i durant un període de divuit mesos, van ser visitades un total de 202 explotacions de producció de broilers i 284 explotacions porcines. En el cas del bestiar porcí, es van enquestar explotacions de cicle tancat, explotacions de producció de garrins, granges multiplicadores, engreixos independents, transicions de garrins i explotacions de producció mixta. En cadascuna d'elles es va realitzar una enquesta, a peu de granja, als titulars de les instal·lacions, amb més de 500 variables per a cada sector. Les explotacions van ser seleccionades mitjançant un mostreig aleatori estratificat i proporcionat entre totes les explotacions existents a la C.V. de tots dos sectors. Els qüestionaris recullen variables de diferents categories (numèriques de tipus continu, discontínues o de classificació i de text obert) i s'han considerat nombrosos aspectes relacionats amb la localització geogràfica, informació sobre el titular, característiques constructives, instal·lacions i equipaments, control ambiental, maneig i gestió tecnico-econòmica. Les mesures de bioseguretat tenen un apartat important en tots dos qüestionaris. Para dur a terme la caracterització i tipificació de les explotacions, en primer lloc, cada variable va ser sotmesa a una anàlisi descriptiva univariant estudiant, segons tipus, la seva mitjana i els seus paràmetres de dispersió i freqüències. Cadascuna de les variables va ser examinada individualment, en funció de la província, el tipus d'explotació i l'organització de la criança. Posteriorment es va emprar la metodologia clúster (anàlisi multivariant). L'anàlisi multivariant ha permès caracteritzar de forma senzilla les explotacions avícoles i porcines de la C.V., agrupant-les segons les seves característiques. En general , l'antiguitat de les explotacions i l'edat dels titulars, han estat les variables que més pes han tingut a l'hora de realitzar aquestes agrupacions. L'efecte de les dues variables s'observa tant en els aspectes relacionats amb les infraestructures e instal·lacions com en les mesures de bioseguretat i maneig. / Martínez Granell, MDM. (2015). Caracterización de las explotaciones porcinas y avícolas de carne de la Comunidad Valenciana [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/58486 / TESIS

En ganado porcino, los resultados de fertilidad (fertilidad y tamaño de camada) obtenidos con semen congelado no son equiparables a los obtenidos con semen refrigerado (a 15-17ºC). Durante los procesos de congelación y de descongelación, los espermatozoides sufren modificaciones que en último término van a provocar una alteración de su funcionalidad. El proceso de crioconservación espermática produce una desestabilización de la membrana en la que se ha observado una pérdida de colesterol. En especies sensibles al choque térmico (incluida la especie porcina), se ha observado una mejora en la calidad del semen post-descongelación, cuando los espermatozoides son incubados con ciclodextrinas saturadas de colesterol (CLC) antes del proceso de crioconservación. El objetivo de esta tesis ha sido determinar cómo afecta este tratamiento pre-congelación con CLC a la funcionalidad in vitro y fertilidad in vivo e in vitro de los espermatozoides congelados-descongelados de la especie porcina. La funcionalidad espermática in vitro se evaluó mediante los siguientes parámetros: resistencia osmótica, movilidad e integridad de la membrana plasmática, estado y dinámica de capacitación, capacidad de adherencia a células epiteliales del oviducto y dinámica de la integridad de la cromatina. Para ello se utilizó un sistema computerizado de movilidad, y se pusieron a punto diferentes técnicas de citometría de flujo y manejo in vitro de cultivos celulares. La fertilidad in vitro se evaluó mediante un test de penetración de ovocitos inmaduros (recuperados de ovarios de cerdas en matadero) y la fertilidad in vivo se evaluó en cerdas que recibieron un tratamiento de sincronización de celo (con PMSG) e inducción de la ovulación (con hCG) tras el destete (se realizó una única inseminación cervical a las 37 ó 30 h de la inyección con hCG). El tratamiento de los espermatozoides de verraco con 1 mg CLC/120 x 106 de espermatozoides, amplió los límites de resistencia osmótica (tanto hipo- 50, 75 y 15 / Tomás Almenar, C. (2012). EFFECT OF THE PRE-FREEZING TREATMENT OF BOAR SPERM WITH CHOLESTEROL-LOADED CYCLODEXTRINS ON THE FUNCTIONALITY AND THE FERTILIZING ABILITY OF THE SPERM AFTER CRYOPRESERVATION [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/18142 / Palancia

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / El circovirus porcino tipo 2 (PCV-2) es un virus muy pequeño (17 nm. de diámetro), de estructura icosaédrica y con ADN circular simple. Se conoce ampliamente por ser el agente causal de una compleja lista de enfermedades multifactoriales denominadas PCVAD (del inglés, Porcine circovirus associated diseases). Entre estas, una de las más importantes en términos económicos y sanitarios para la industria porcina intensiva, es el PMWS (del inglés, Postweaning multisystemic wasting syndrome), que se caracteriza clínicamente por adelgazamiento progresivo, retraso del crecimiento y desmedro. La infección por si sola por PCV-2 es necesaria, pero no suficiente para desencadenar el cuadro clínico, existen otros factores, tanto individuales como prediales, que participan en el desarrollo del síndrome. Por lo tanto, es más común encontrar individuos infectados con una presentación subclínica, inmunocomprometidos y mayormente susceptibles a coinfecciones. En el presente estudio, se caracterizan los perfiles serológicos de 11 granjas de producción porcina, cuya ubicación geográfica es representativa de la producción a nivel nacional. Un perfil serológico es un estudio efectuado a grupos de animales de diferentes edades o etapas productivas, para detectar la presencia de anticuerpos contra algún patógeno en particular y determinar patrones de infección. De cada granja se tomaron 16 muestras de suero en 3 edades (3-4, 10 y 18-20 semanas). Cada muestra fue evaluada mediante una prueba de ELISA para la detección de anticuerpos anti PCV-2. A modo complementario, los títulos de anticuerpos a las 3 semanas fueron transformados a valores de IPMA (técnica de inmunoperoxidasa en monocapa de cultivo celular), a modo de evidenciar posible interferencia materna con la vacunación. Finalmente, se realizó una recopilación de información respecto a las granjas muestreadas y mediante un Análisis de Varianza (ANOVA) en el programa estadístico Infostat, los factores: status PRRS, vacunación, sistema y tamaño fueron analizados, a modo de establecer posibles diferencias significativas entre las granjas al considerar estos factores. Los resultados muestran un comportamiento característico de los perfiles serológicos, con un alto título de anticuerpos a las 3 semanas, los cuales disminuyen drásticamente en el tiempo, lo que sugiere un eficiente traspaso de inmunidad materna, pero se cuestiona la efectividad en la generación de anticuerpos a través de la vacunación. Además, se observa una alta presencia del fenómeno de interferencia de la inmunidad materna con la vacunación. Por último, los resultados del análisis estadístico muestran que todos los factores analizados generan diferencias significativas entre los perfiles serológicos de las granjas. El estudio permite concluir robustamente que existe evidencia serológica de PCV-2 en todas las granjas analizadas y que existen diferencias estadísticamente significativas entre ellas al considerar ciertos factores prediales, aceptándose la hipótesis de este estudio / Porcine circovirus type 2 (PCV-2) is a very small virus (17 nm of diameter), of icosahedral structure and simple circular DNA. PCV-2 is widely known to be the causative agent of several multifactorial diseases named PCVAD (Porcine circovirus asociated diseases). The most economic important disease caused by PCV-2 is the Postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS), which is characterized by progressive emaciation, growth retardation and wasting. PCV-2 infection is necessary but not sufficient to trigger the clinical presentation, there are other factors, individual and predial, that are involved in the development of the syndrome. Therefore, it is more common to find individuals infected with a subclinical presentation, immunocompromised and most susceptible to coinfections. In the present study, the serological profiles of 11 pig farms were characterized, whose geographic location is representative of production at the national level. A serological profile is a study carried out on groups of animals at different ages, to detect the presence of antibodies against PCV-2, and to determine patterns of infection. From each farm, sera was collected in 3-4 weeks; 10 weeks and 18-20 weeks old pigs, obtaining 16 samples per age. Each sample was evaluated by a comercial PCV-2 ELISA test for antibody detection. Additionally, antibody titres at 3 weeks were transformed to IPMA equivalent values (inmunoperoxidase monolayer assay), in order to evidence possible maternal interference with vaccination. Also, information about farms characteristics and management such as; PRRS status, vaccination, type of production system and size, were collected. All variables were statistically analyzed in order to establish if there were significant differences between the farms when considering these factors. The results show a characteristic behavior of the serological profiles, with a high antibody titre in 3 weeks old pigs, which decrease drastically over time, suggesting an efficient transfer of maternal immunity, but the effectiveness of the vaccination to generate antibodies is questioned. In addition, there is a high presence of the phenomenon of interference of maternal immunity with vaccination. Finally, the results of the statistical analysis show that all the analyzed factors generate significant differences between the serological profiles of the farms. The study allows us to conclude robustly that there is serological evidence of PCV-2 in all farms analyzed and that there are statistically significant differences between them when considering certain property factors, accepting the hypothesis of this study / Financiamiento: Proyecto Zoetis-Favet PCV2.