Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2012. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-09-14T00:53:09Z No. of bitstreams: 1 2012_KleniaRodriguesPacheco.pdf: 2182418 bytes, checksum: 30aa13c050c27588ce64e0710d842f13 (MD5) / Approved for entry into archive by Leandro Silva Borges(leandroborges@bce.unb.br) on 2012-09-14T20:00:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_KleniaRodriguesPacheco.pdf: 2182418 bytes, checksum: 30aa13c050c27588ce64e0710d842f13 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-14T20:00:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_KleniaRodriguesPacheco.pdf: 2182418 bytes, checksum: 30aa13c050c27588ce64e0710d842f13 (MD5) / O feijoeiro (Phaseolus vulgaris) é suscetível a muitas doenças, entre elas, se encontra a murcha-de-esclerócio (podridão do colo) causada por Sclerotium rolfsii. O controle do S. rolfsii ocorre com o auxílio de práticas preventivas e por controle biológico ou químico. O estudo teve como objetivo selecionar e testar isolados de Trichoderma oriundos de solos do DF, avaliar e comparar os Trichoderma spp. selecionados e fosfitos (Cu, Ca, Mg e K) aos fungicidas no controle da murcha-de-esclerócio. Nos ensaios realizados foram utilizados dois isolados de S. rolfsii (UB 193 e UB 228). Dos 65 isolados de Trichoderma testados in vitro selecionaram-se os seguintes: 5, 11, 12, 15, 102, 103, 127, 136, 137, 1525, 1637, 1642, 1643, 1649, 1700 e EST 5. Esses isolados de Trichoderma, bem como os fosfitos [Fosfito: Cu (25% P2O5 + 5% Cu); K1 (40% P2O5 + 20% K2O); Mg1 (30% P2O5 + 4% Mg); Ca1 (30% P2O5 + 7% Ca); Ca2 (10% P2O5 + 6% Ca); K2 (40% P2O5 + 20% K2O); K3 (20% P2O5 + 20% K2O); K4 (30% P2O5 + 20% K2O); K5 (27% P2O5 + 27% K2O)] e fungicidas [Tebuconazol (250 g/L); Tiofanato-Metílico (500 g/L); Procimidona (500 g/kg); Carbendazim (500 g/kg)] foram avaliados quanto ao efeito sobre a germinação de esclerócios do patógeno em laboratório e sobre a doença em casa de vegetação. Os isolados de Trichoderma 1649, 1525 e 1637 foram os mais eficientes na inibição da germinação de esclerócios de S. rolfsii em laboratório. Além disso, os isolados 5, 12, 102, 103, 1525 e 1649 foram eficientes na melhoria do número de plantas sadias de feijoeiro em casa de vegetação. Dos testes realizados com fosfitos, as formulações com Potássio (K2) e Cálcio (Ca1) controlaram o patógeno no teste em casa de vegetação. Dos agentes químicos testados, o produto que reduziu significativamente a doença foi o Tebuconazol. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Phaseolus vulgaris (Common bean) is susceptible to several diseases, among them there is the sclerotium wilt, also known as stem rot caused by Sclerotium rolfsii. The control of the disease could be throughout preventive practices or by biological or chemical control. This study was carried out to evaluate the effects of Trichoderma spp., phosphites (Cu, Ca, Mg, and K) and traditional fungicides to control sclerotium wilt of common bean. The experiments were performed with two isolates of S. rolfsii (UB 193 and UB 228). Sixty-five Trichoderma isolates were tested in vitro for inhibition of S. rolfsii, and the following ones were selected: 5, 11, 12, 15, 102, 103, 127, 136, 137, 1525, 1637, 1642, 1643, 1649, 1700 and EST 5. These selected Trichoderma, phosphites [Phosphite: Cu (25% P2O5 + 5% Cu); K1 (40% P2O5 + 20% K2O); Mg1 (30% P2O5 + 4% Mg); Ca1 (30% P2O5 + 7% Ca); Ca2 (10% P2O5 + 6% Ca); K2 (40% P2O5 + 20% K2O); K3 (20% P2O5 + 20% K2O); K4 (30% P2O5 + 20% K2O); K5 (27% P2O5 + 27% K2O)] and fungicides [Tebuconazole (250 g/L); Methyl Thiophanate (500 g/L); Procymidone (500 g/kg); Carbendazim ( 500 g/kg)] were tested for evaluation of sclerotial germination under laboratory conditions, and to evaluate the effects on disease of bean plants under greenhouse conditions. The Trichoderma isolates 1649, 1525 and 1637 were more efficient in reducing sclerotial germination. In addition, the isolates 5, 12, 102, 103, 1525 e 1649 significantly improved the number of non-diseased plants under greenhouse conditions. Phosphites of K (K2) and Ca (Ca1) inhibited sclerotial germination in laboratory and reduced disease in plants grown in greenhouse. Tebuconazole was the product that significantly reduced disease severity on bean under greenhouse condition.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-graduação em Fitopatologia, 2011. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-09-14T20:54:47Z No. of bitstreams: 1 2011_LeonardoMinareBrauna.pdf: 2346526 bytes, checksum: 9843339909a8bb2b743cdb1c02f58697 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2012-09-18T10:29:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_LeonardoMinareBrauna.pdf: 2346526 bytes, checksum: 9843339909a8bb2b743cdb1c02f58697 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-18T10:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_LeonardoMinareBrauna.pdf: 2346526 bytes, checksum: 9843339909a8bb2b743cdb1c02f58697 (MD5) / O mofo branco, doença causada pelo fungo Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary possui em seu ciclo de hospedeiros 408 espécies dentro de 278 gêneros, distribuídas em 75 famílias botânicas e é responsável por perdas de rendimento que podem chegar a 100% em culturas agronômicas. As medidas de controle na maioria das vezes são ineficazes. O uso de defensivos químicos é muito oneroso, tornando-se inviável. Quanto ao controle biológico, vários estudos têm sido realizados com fungos antagonistas e, dentre eles, espécies do gênero Trichoderma tem demonstrado atividade antagônica contra S. sclerotiorum, em testes conduzidos tanto em laboratório, quanto em condições de campo. Neste trabalho, 20 isolados de Trichoderma foram testados em laboratório e em casa de vegetação. Em campo, três desses isolados foram avaliados em termos de redução do impacto do patógeno sobre o desenvolvimento das culturas de feijão comum e soja. Nestes ensaios, utilizou-se além da microbiolização de sementes, aplicação no sulco de plantio com jato direto e aplicação na parte aérea por barra traçada, cuja concentração de propágulos na suspensão de inóculo para aplicação dos isolados foi de 1x109 conídios – mL-1. Nos testes de laboratório, quatro isolados apresentaram grau máximo de antagonismo (classe 1), 10 isolados alocaram-se na classe 2 e quatro na classe 3, estas duas consideradas com potencial médio e moderado de biocontrole, respectivamente. Dois isolados exerceram baixa atividade antagônica contra S. sclerotiorum (classe 4). Quanto à germinação de escleródios, 10 isolados de Trichoderma inibiram pelo menos em 90%; quatro apresentaram índices de inibição entre 80% e 65%; dois apresentaram índices de 35% e 25% e os quatro restantes não apresentaram atividade inibitória sobre os escleródios. Já nos testes com metabólitos não voláteis, verificou-se diferença significativa na inibição do crescimento de S. sclerotiorum, com os valores médios da porcentagem de inibição micelial variando desde zero (ausência de inibição) até 100%. Dentre os 20 isolados, seis apresentaram os melhores níveis de controle de doença. Os ensaios conduzidos em campo indicaram maior eficiência dos isolados quando o inoculo foi aplicado via barra, juntamente com as sementes microbiolizadas, seguindo-se a aplicação por meio de aspersão da suspensão de esporos e, por fim, onde só houve aplicação pela microbiolização das sementes, quanto ao desenvolvimento das plantas. Os resultados obtidos indicam que esses isolados são promissores para o desenvolvimento de um programa de controle biológico. Assim, foi avaliada a produção de esporos em laboratório, utilizando dois substratos preparados com diferentes teores de água e tempo de embebição. As maiores taxas de esporulação foram observadas com os CEN162 e CEN238, em arroz parboilizado. Adição de água na proporção de 80%, e períodos de embebição superiores a 15 horas favoreceram a esporulação, independentemente do substrato. Nestas condições, os isolados apresentaram diferentes picos de esporulação no decorrer de 30 dias. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / White mold disease caused by the fungus Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary has its cycle of hosts 408 species in 278 genera, distributed in 75 botanic families and is responsible for loss of income that can reach 100 % in agronomic crops. Control measures are most often ineffective. The use of pesticides is very expensive, making it unfeasible. As for biological control, several studies have been conducted on fungi and antagonists, among them species of the genus Trichoderma have demonstrated antagonistic activity against S. sclerotiorum in trials conducted both in laboratory and in field conditions. In this study, 20 isolates of Trichoderma were tested in laboratory and greenhouse. In the field, three of these isolates were evaluated in terms of reducing the impact of the pathogen on the development of crops of beans and soybeans. In these tests, we used beyond microbiolization seed, application in furrow application with jet direct and shoot with a slash drawn, where the concentration of propagules in the inoculum suspension for application of the isolates was 1x109 conidia - mL-1. In laboratory tests, four isolates showed maximum degree of antagonism (class 1), 10 isolates allocated to the Class 2 and four in Class 3, these two considered potential biocontrol medium and moderate, respectively. Two isolates have had low antagonistic activity against S. sclerotiorum (class 4). As for the germination of sclerotia, 10 strains of Trichoderma inhibited at least 90%, four showed inhibition rates between 80% and 65% had two rates of 35% and 25% and the remaining four showed no inhibitory activity on the sclerotia. Already in the tests with non-volatile metabolites, there was significant difference in growth inhibition of S. sclerotiorum, with the mean percentage inhibition of mycelial ranging from zero (no inhibition) to 100%. Among the 20 isolates, six showed the highest levels of disease control. Tests conducted in the field suggest greater efficiency of the isolates when the inoculum was applied by bar, along with microbiolization seeds, followed by the application by spraying the spore suspension and, finally, where there was only applied by microbiolization seeds, for the development of plants. The results indicate that these isolates are promising for developing a biological control program. Thus, we evaluated the production of spores in the laboratory using two substrates prepared with different amounts of water and soaking time. The highest rates of spore production were observed with CEN162 and CEN238 in parboiled rice. Addition of water at a ratio of 80%, and soaking periods exceeding 15 hours favored sporulation, regardless of the substrate. Under these conditions, the isolates showed different peaks for spore collecting in the course of 30 days.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2005. / Submitted by Alexandre Marinho Pimenta (alexmpsin@hotmail.com) on 2009-11-06T21:57:39Z No. of bitstreams: 1 dissertacao RAILENE DE AZEVEDO PEREIRA.pdf: 2038438 bytes, checksum: 2a881ae8945df3475524a3521b0ed467 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-10-27T14:33:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dissertacao RAILENE DE AZEVEDO PEREIRA.pdf: 2038438 bytes, checksum: 2a881ae8945df3475524a3521b0ed467 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-27T14:33:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao RAILENE DE AZEVEDO PEREIRA.pdf: 2038438 bytes, checksum: 2a881ae8945df3475524a3521b0ed467 (MD5) Previous issue date: 2005 / Os inibidores de α-amilase e de proteinases vegetais tem sido amplamente estudados, devido ao papel destes fatores de resistência contra insetos-praga. Este trabalho tem como objetivo identificar inibidores de α-amilase e de proteinases, presentes em sementes de Phaseolus coccineus e sementes de algaroba (Prosopis juliflora), com potencial inseticida no controle da broca-do-café (Hypothenemus hampei) e de pragas de grãos armazenados de feijão Acanthoscelides obtectus e Callosobruchus maculatus. Um gene que codifica para o inibidor de α-amilase de 223 resíduos de aminoácidos, denominado AI-Pc1 foi clonado de sementes de Phaseolus coccineus, acesso 35590. AI-Pc1 tem 70 a 98% de identidade de aminoácidos com outros inibidores de α-amilases de feijão, já descritos. Uma construção contendo o gene AI-Pc1, regulado pelo promoter da fitohemaglutinina PHA-L, foi introduzida em plantas de fumo, via Agrobacterium tumefasciens. A presença e expressão do gene AI-Pc1 em plantas transformadas (parental T0 e geração T1) foi confirmada por reação de cadeia da polimerase (PCR), Western blot e ELISA. Extrato protéico das sementes de plantas transformadas reagiram positivamente com o anticorpo policlonal contra o anticorpo αAI-1, enquanto que nenhuma reação foi observada em plantas não transformadas. Ensaios imunológicos mostraram que AI-Pc1 representa cerca de 0,05% da proteína solúvel total de sementes de plantas (T0). A proteína recombinante expressa em plantas de fumo foi biologicamente ativa onde 125 ng de inibidor AI-Pc1 inibe 65% da atividade da α-amilase de H. hampei. Utilizando semente de P. coccineus, acesso 35619, um inibidor de proteinase serínica pertencente à classe Bowman-Birk foi purificado utilizando técnicas cromatográficas que incluem coluna de troca iônica DEAE-Cellulose, coluna de filtração molecular Superdex 75, coluna fase-reversa líquida de alta pressão Vydac C-18 e Source 5RPC. O inibidor, denominado de PcBBI1, é uma proteína rica em cisteína e estável ao calor em pH alcalino. Análises por MALDI-TOF/MS mostraram que o inibidor PcBBI1 esta presente em semente de P. coccineus na forma de um monômero de 8.689 Da ou de um dímero de 17.378 Da. O efeito inibitório de PcBBI1 foi analisado por ensaio in vitro para tripsina e quimotripsina pancreática bovina e para proteinases digestivas de larvas de H. hampei. O inibidor foi fortemente ativo contra as enzimas semelhantes à tripsina de H. hampei, inibindo 80% da atividade proteolítica. Adicionalmente, um inibidor de proteinase cisteínica foi isolado das sementes de algaroba (Prosopis juliflora). Este inibidor, denominado de Pj, foi purificado usando uma coluna de filtração molecular Sephacryl S-200 seguido por uma coluna de fase-reversa líquida de alta pressão Vydac 18 TP. O inibidor Pj mostrou uma massa molecular de 20.000 Da por eletroforese em gel de poliacrilamida com SDS e massa molecular de 19.276 Da por espectrometria de massa. A inibição da papaína pelo inibidor Pj foi do tipo não-competitivo, com um valor de Ki de 0.59 x 10-9. A atividade gelatinásica da papaína também foi fortemente inibida pelo inibidor Pj. A seqüência de aminoácidos da extremidade N-terminal do inibidor Pj mostrou homologia com a seqüência de aminoácidos da extremidade N-terminal de inibidores de proteinase da família Kunitz. Pj foi fortemente efetivo contra proteinases digestivas do gorgulho do feijão Acanthoscelides obtectus e do gorgulho de caupi Callosobruchus maculatus e foi moderadamente ativo contra proteinases digestivas do gorgulho da vagem Mimosestes mimosae e do gorgulho do feijão comum Zabrotes subfasciatus. Estes resultados sugerem que o inibidor AI-Pc1 e PcBBI1 isolados de P. coccineus e o inibidor Pj purificado de sementes de P. juliflora são candidatos promissores para obter cultivares de plantas resistentes ao ataque destes insetos-praga. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Plant α-amylase and proteinases inhibitors are extensively studied, in part due to their role as defense factors against insect pests. In this works, we have identified α-amylase and proteinase inhibitors, found in of Phaseolus coccineus bean and algaroba (Prosopis juliflora) seeds. Those molecules exhibit an insecticidal potential in the control of coffee berry borer (Hypothenemus hampei) and pests from stored grains of beans Acanthoscelides obtectus and Callosobruchus maculatus A gene encoding an α-amylase inhibitor protein of 223 amino acids residues, named aAI-Pc1, was isolated from an wild bean P. coccineus, acess 35590. aAI-Pc1 has 70-98% amino acid identity with other known bean α-amylase inhibitors. A construction with aAI-Pc1 gene driven by the PHA-L phytohemaglutinin promoter was introduced into tobacco plants by Agrobacterium-mediated transformation. The presence and expression of the aAI-Pc1 gene in regenerated (T0) and progeny (T1) transformant plants were determined by PCR amplification, enzyme-liked immuno sorbent assay (ELISA) and immunoblot analysis. Seed protein extracts from selected transformant reacted positively with polyclonal antibody raised against αAI-1, while no reaction was observed with untransformed plants. Immunological assays showed that aAI-Pc1 represented up to 0.05% of the total soluble proteins in seeds of T0 plants. The recombinant inhibitor expressed in tobacco plants was biologically active and 125 ng aAI-Pc1 inhibited 65% of the H. hampei α-amylase activity. A serine proteinase inhibitor belonging to the Bowman-Birk class was purified from P. coccineus seeds, acess 35619, using chromatographic techniques that include DEAE-Cellulose ionic exchange column, Superdex 75 gel filtration column and reverse phase high performance liquid chromatography column (Vydac C-18 and Source 5RPC). The inhibitor, nominated PcBBI1, is a protein cystein-rich and heat stable at alkaline pH MALDI-TOF/MS analysis showed that the inhibitor is present in the seeds from P. coccineus as a monomer of 8.689 Da or a dimmer of 17.378 Da. The inhibitory effect of PcBBI1 towards trypsin and chymotrypsin from bovine pancreas and digestive proteinases from H. hampei larvae was analyzed in vitro assay. The inhibitor was highly active against trypsin-like enzymes from H. hampei, inhibiting 80% of proteolytic activity. Additionally, a proteinaceous inhibitor with high activity against papain was found in seeds of the xerophytic algaroba tree (Prosopis juliflora). The proteinase inhibitor Pj was purified using Sephacryl S-200 gel filtration followed by reverse-phase high-performance liquid chromatography on a Vidac 18 TP. Inhibitor Pj showed a Mr of 20.000 on sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis an a Mr of 19.276 Da by mass spectrometry. The inhibitor of papain by the Pj inhibitor was the noncompetitive type, with a Ki value of 0.59 x 10-9 M. The gelatinase activity of papain was strongly inhibited by Pj too. The N-terminal amino acid sequence of the Pj inhibitor showed homology with the N-terminal amino acid sequence of the Kunitz-proteinase inhibitor family. Pj was strongly effective against digestive proteinases from bean weevil Acanthoscelides obtectus and cowpea weevil Callosobruchus maculatus and Mexican bean weevil Zabrotes subfasciatus. The data shown here suggest that the protein present in algaroba seeds is involved with defense responses to insects and may be an important tool to be used in engineering plants resistant to bean weevils.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2006. / Submitted by Érika Rayanne Carvalho (carvalho.erika@ymail.com) on 2009-12-01T02:37:43Z No. of bitstreams: 1 2006_JanderdaSilvaNeves.pdf: 5657161 bytes, checksum: f46bab6723ba3c1245bf77c9be7f7a2a (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-01-12T23:51:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_JanderdaSilvaNeves.pdf: 5657161 bytes, checksum: f46bab6723ba3c1245bf77c9be7f7a2a (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-12T23:51:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_JanderdaSilvaNeves.pdf: 5657161 bytes, checksum: f46bab6723ba3c1245bf77c9be7f7a2a (MD5) Previous issue date: 2006-10 / A ferrugem asiática (Phakopsora pachyrhizi) da soja é uma das doenças mais agressivas que incidem na cultura. Dependendo do clima e da cultivar de soja, perdas severas de rendimento podem ocorrer. O objetivo principal deste estudo foi avaliar o efeito de aplicações de fosfito e dos fungicidas na severidade da doença (porcentagem da área foliar afetada), na produtividade (kg/ha), e na massa (g) de 1000 grãos. Os experimentos de campo foram conduzidos de dezembro 2005 a abril 2006 em Cristalina, Goiás, Brasil. Utilizou-se delineamento de blocos ao acaso com nove tratamentos e cinco repetições. Os tratamentos foram os seguintes: (1) testemunha; (2) uma aplicação do fosfito (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + (0,5% v/v) óleo vegetal; (3) duas aplicações do fosfito (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + (0,5% v/v) óleo vegetal; (4) duas aplicações do pyraclostrobin + epoxiconazole (66,5+25 g.i.a/ha); (5) uma aplicação do pyraclostrobin + epoxiconazole (66,5+25 g.i.a/ha)+ fosfito (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) e uma aplicação do fosfito (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + (0,5% v/v) óleo vegetal; (6) duas aplicações do tiofanato metílico+flutriafol (300+60g.i.a/ha); (7) uma aplicação do tiofanato metílico+flutriafol (300+60gi.a/ha)+fosfito (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) e uma aplicação do fosfito (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + (0,5% v/v) óleo vegetal; (8) duas aplicações do tebuconazole (100 g.i.a/ha); (9) uma aplicação do tebuconazole (100 g.i.a/ha) + fosfito (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) e uma aplicação do fosfito (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + (0,5% v/v) óleo vegetal. As aplicações foram feitas no inicio do aparecimento das primeiras lesões na cultivar Emgopa 313(ciclo tardio) nos estágios de crescimento da soja V8 e reaplicado em R2, no outro com a cultivar Coodetec 219RR (ciclo médio) nos estágios R1 e R5. As avaliações da severidade da doença foram feitas a cada sete dias após a aplicação dos produtos. Em ambos, após a primeira aplicação dos produtos todos os tratamentos reduziram significativamente a severidade da doença do sétimo ao trigésimo quinto dia da avaliação. Entretanto, após a segunda aplicação dos produtos, a doença apenas foi reduzida significativamente do sétimo ao vigésimo segundo dia da avaliação. Na avaliação final dos tratamentos somente os fungicidas tradicionais (pyraclostrobin + epoxiconazole, tiofanato metílico + flutriafol e tebuconazole) reduziu significativamente a severidade da doença. A produtividade e a massa de 1000 grãos foram significativamente mais elevados para tratamentos com pyraclostrobin + epoxiconazole, tiofanato metílico + flutriafol e tebuconazole. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Asian rust (Phakopsora pachyrhizi) of soybean is one of the most destructive diseases. Depending on the soybean cultivar and on the climate severe yield losses might occur. The main goal of this study was to evaluate de effects of phosphite and fungicides applications on disease severity (percentage of foliar area affected), on yield of seeds (kg/ha), and on mass (g) of 1000 seeds. For these purposes, two field experiments were conduced from December 2005 to April 2006 in Cristalina, Goias, Brazil. Both experiments were conduced in a complete randomized design with nine treatments and five replications. The treatments were the following: (1) no treatment; (2) one application of phosphite (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + vegetable oil (0.5% v/v); (3) two applications of phosphite (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + vegetable oil (0.5% v/v); (4) two applications of pyraclostrobin + epoxyconazole (66,5+25 g.i.a/ha); (5) one application of pyraclostrobin + epoxyconazole (66,5+25 g.i.a/ha)+ phosphite (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) and one application of phosphite (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + vegetable oil (0.5% v/v); (6) two applications of methyl thiophanate + flutriafol (300+60 g.i.a/ha); (7) one application of methyl thiophanate + flutriafol (300+60 g.i.a/ha) + phosphite (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) and one application of phosphite (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + vegetable oil (0.5% v/v); (8) two application of tebuconazole (100 g.i.a/ha); (9) one application of tebuconazole (100 g.i.a/ha) + phosphite (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) and one application of phosphite (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + vegetable oil (0.5% v/v). In one of the experiments the applications were made on V8 and R2 soybean growth stage, while in the other at the R1 and R5 stages. Evaluations of disease severity were made every seven days after the application of the products. In both experiments, after the first application of the products all treatments significantly reduced disease severity from the seventh through the thirty-fifth day of evaluation. Nevertheless, after the second application of the products the disease was reduced significantly from the seventh through the twenty-second day of evaluation. At the end of evaluations only treatments with traditional fungicides (pyraclostrobin + epoxyconazole, methyl thiophanate + flutriafol, and tebuconazole) significantly reduced disease severity. Yield and mass of 1000 seeds were significantly higher for treatments with pyraclostrobin + epoxyconazole, methyl thiophanate + flutriafol and tebuconazole.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2011. / Submitted by Max Lee da Silva (bruce1415@hotmail.com) on 2011-06-28T14:32:38Z No. of bitstreams: 1 2011_LucianaRamalhoDeFarias.pdf: 2230097 bytes, checksum: ad0589346d3e4e161f07d665eb227f60 (MD5) / Approved for entry into archive by Elna Araújo(elna@bce.unb.br) on 2011-07-04T19:52:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_LucianaRamalhoDeFarias.pdf: 2230097 bytes, checksum: ad0589346d3e4e161f07d665eb227f60 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-04T19:52:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_LucianaRamalhoDeFarias.pdf: 2230097 bytes, checksum: ad0589346d3e4e161f07d665eb227f60 (MD5) / O percevejo-marrom Euschistus heros é uma praga que reduz consideravelmente a produtividade nacional de culturas agrícolas de grande importância econômica, dentre elas a soja. Visando subsidiar o desenvolvimento de ferramentas biotecnológicas alternativas para auxílio no controle dessa praga, o presente trabalho realizou o estudo da expressão de genes relacionados à olfação e análise do perfil e sítios de expressão utilizando as técnicas de qPCR em Tempo Real e hibridização in situ, respectivamente. A prospecção foi realizada através da construção de uma biblioteca de cDNA a partir do RNA total extraído das antenas utilizando o kit Smart cDNA Library Construction (Clontech®). Mil clones foram sequenciados e, através de bioinformática, foram identificadas duas sequências de 477 e 294 pares bases pertencentes a genes da família das proteínas ligantes de odorantes (Odorant Binding Protein - OBP) que foram denominados EherOBP1 e EherOBP2, respectivamente. O EherOBP1 possui sequência deduzida de aminoácidos de 16 kDa e pI 5,18, peptídio sinal na extremidade N-terminal, domínio de ligação a feromônio (Pheromone Binding Protein – PBP) e seis resíduos de cisteína em posições conservadas, todas características esperadas para proteínas integrantes da família OBP. Embora parcial, a sequência deduzida de aminoácidos de EherOBP2 já pode também ser atribuída a função hipotética de proteína ligante a odor devido a presença do domínio PBP e cinco resíduos de cisteína em posições conservadas. A análise da expressão diferencial através de RT-PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR) indicou que as antenas representam o principal sítio de produção da EherOBP1 em ambos os sexos, sendo a expressão nas antenas de macho cerca de três vezes maior que nas antenas de fêmeas. Em relação a EherOBP2, foi observada uma predominância da expressão nas antenas e abdômen de machos, sendo esta cerca de cinco vezes maior em relação à expressão observada nas antenas de fêmeas. A partir dos resultados obtidos com a localização da hibridização in situ nas antenas foi possível inferir que os mRNAs das EherOBPs são localizados especificamente na base dos órgãos olfativos (sensilas), havendo diferenças na expressão ao longo da antena entre machos e fêmeas. Neste trabalho foram identificados dois transcritos gênicos relacionados à olfação que codificam duas proteínas com provável função de ligação a odorantes. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / In Brazil, the stink bug Euschistus heros represents an important agricultural plague responsible for economic damages on several cultures, including the soy. Aiming the development of alternatives biotechnological tools, the present work conducted the study of the expression of genes related to olfaction through the construction of a cDNA library from transcripts (mRNA) isolated from the antennae and analysis of the profile and sites of expression using the techniques of real-time qPCR and in situ hybridization, respectively. cDNA library was successfully constructed from total RNA extract from adults antenna using the Smart cDNA Library Construction Kit (Clontech®). A total of 1000 cDNA clones were randomly selected and submitted to sequencing. Two transcripts encoding OBPs were identified by bioinformatics approaches. The E. heros OBPs nucleotide sequences showed 477 and 294 pb and were named as EherOBP1 and EherOBP2, respectively. The deduced amino acid sequence of EherOBP1 has16kDa and pI 5.18, signal peptide at the N-terminal, PBP domain and six cysteine residues in conserved positions, all the expected features for members of OBP protein family. Although partial, the deduced amino acid sequence of EherOBP2 can be assigned as a hypothetical Odorant Binding Protein due the presence of PBP domain and five cysteine residues in conserved positions. Analysis of differential expression by quantitative real time PCR indicated that antenna are the main production site of EherOBP1 in both sexes, and the expression in male antennae is about three times higher than in female antennae. Regarding to EherOBP2, there was a predominance of expression in the antennae and abdomen of males, which is about six times greater than the expression observed in the antennae of females. In situ hybridization results showed that EherOBPs mRNAs are specifically expressed on the base of the antenna olfactory organs (sensilas) with differences in the localization of the expression along the antenna of male and female. In this work were identified two transcripts related to olfaction encoding proteins with hypothetical function odorant binding.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, 2011. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-09-05T14:28:18Z No. of bitstreams: 1 2011_MichelyFerreiraSantosdeAquino.pdf: 8914441 bytes, checksum: 101e518f6bb5c891e0294318ebcae578 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-09-05T14:28:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_MichelyFerreiraSantosdeAquino.pdf: 8914441 bytes, checksum: 101e518f6bb5c891e0294318ebcae578 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-09-05T14:28:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_MichelyFerreiraSantosdeAquino.pdf: 8914441 bytes, checksum: 101e518f6bb5c891e0294318ebcae578 (MD5) / Os parasitóides são importantes componentes dos ecossistemas terrestres atuando como controladores de populações de insetos herbívoros. A busca e seleção de hospedeiros constituem etapas decisivas do ciclo vital destes insetos já que asseguram seu sucesso reprodutivo. O forrageamento das fêmeas dos parasitóides inclui uma série de passos comportamentais seqüenciais intermediados por estímulos de natureza física (visuais ou mecânicas), química (semioquímicos) ou bioquímica. O objetivo deste trabalho foi estudar a influência de características físicas e químicas do hospedeiro nos comportamentos de busca e seleção dos parasitóides de ovos Telenomus podisi e Trissolcus basalis, importantes agentes de mortalidade de percevejos praga da soja. Foram realizados experimentos utilizando substratos coloridos para estudar sua influência no comportamento de busca de hospedeiros. Os parasitóides mostraram preferência inata por substratos de cor amarelo e secundariamente verde. Esta resposta não foi modificada após experiência de oviposição em substratos de diferentes cores, indicando ausência de aprendizado associativo em relação à cor de substrato. Os resultados sugerem que a resposta a cores de substratos observada estaria relacionada com a orientação para a folhagem de plantas durante a busca de hospedeiros. Em outra etapa do trabalho foram estudados os comportamentos de reconhecimento e aceitação de hospedeiros quando os parasitóides utilizaram ovos de quatro espécies de percevejos (Euschistus heros, Nezara viridula, Piezodorus guidlinii e Chinavia ubica). Neste caso foram analisadas a influência de características físicas do hospedeiro. Os parasitóides mostraram uma clara discriminação de hospedeiros parasitando somente ovos daquelas espécies de percevejos que maximizam seu sucesso reprodutivo. Embora os comportamentos de reconhecimento e aceitação de hospedeiros se apresentaram bem estereotipados, foi observado que diferenças morfológicas como tamanho e forma das posturas e cor e ornamentação dos ovos são importantes para diferenciação dos hospedeiros. A última etapa do trabalho foi dedicada ao estudo de estímulos químicos relacionados ao reconhecimento de hospedeiros. Extrações químicas de ovos de E. heros em diferentes solventes (acetona, metanol e diclorometano) e tempos de extração (1, 4 e 24 h) revelaram que o solvente de maior polaridade utilizado, metanol, foi o mais eficiente, extraindo maior quantidade de compostos que os obtidos nos outros solventes. Adicionalmente os extratos metanólicos induziram no parasitóide T. podisi os comportamentos de reconhecimento e tentativa de oviposição, quando os mesmos foram aplicados em posturas artificiais, formadas com pérolas de vidro. A resposta observada no parasitóide resultou significativamente superior à observada frente a extratos obtidos com outros solventes ou solventes aplicados individualmente nas pérolas de vidro. Os resultados obtidos representam novas contribuições para o avanço do conhecimento do comportamento de forrageamento de parasitóides da família Scelionidae. Trabalhos futuros devem orientar-se principalmente à identificação precisa dos compostos químicos com ação cairomonal, ao estudo das interações entre estímulos físicos e químicos e a estabelecer a importância dos mesmos tanto para estimular comportamentos específicos quanto para identificar aqueles envolvidos na seleção de hospedeiros que maximizam o potencial reprodutivo dos parasitóides. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Insect parasitoids are main components of terrestrial ecosystems functionin as regulators of insect herbivores populations. Search and selection of host are decisive steps in the vital cycle because ensure the reproductive success. Parasitoids females foraging include some behavioral steps mediated by physical (visual or mechanics), chemical (semiochemicals) or biochemical. The egg parasitoids Telenomus podisi and Trisssolcus basalis are important as mortality agents of stink bugs that are pest on soybean and some aspects of their behavior are unknown. The objective of this work was study the influence of physical and chemical characteristic of the host in the search and selection behaviors of the egg parasitoids, Telenomus podisi and Trissolcus, two important mortality agents of stink bugs that are pest on soybean. There were conducted experiments using colored substrates to study their influence in the host searching behavior. The parasitoids showed innate preference by yellow substrates and, secondarily, by green substrates. This response was not modified after oviposition experience on substrates of different colors, indicating absence of associative learning in relation to the colors of the substrate. The results suggest that the response to colour of substrate observed could be related to the orientation to plants foliages when search for hosts. In other step of the work the host identification and acceptation behaviors when the parasitoids used egg of four species of stink bugs (Euschistus heros, Nezara viridula, Piezodorus guidlinii e Chinavia ubica) were studied. In this case were analyzed the physical characteristics of hosts. The parasitoids showed a clear discrimination of host parasitizing eggs of stink bugs species that maximize their reproductive success. Although the host identification and acceptation behaviors were stereotyped it was observed that, morphological differences as size and shape of the egg masses and egg color and ornamentation are important to host differentiation. The last stage of the work was dedicated to the study of chemical stimuli related to the recognition of host. Chemical extractions of eggs of the brown stink bug, E. heros, in different solvents (acetone, methanol and dichloromethane) and extraction times (1,4 and 24 h) showed that the more polar solvent, methanol, was more efficient, extracting higher quantities of the compounds obtained when compared with the others solvents used. Besides methanolic extracts induced, in the parasitoid T. podisi, the recognition behavior and oviposition attempt, when they were applied on artificial egg mass, formed with glass beads. The parasitoid response was significantly higher than the observed when the glass beads were treated with extracts obtained in others solvents or solvents alone. The results obtained represent new contributions to the advance of knoweldge of foraging behavior of Scelionidae wasps. Future works should be oriented, principally, to accurate identification of the chemical compounds with kairomonal action, to the study of the interactions of chemical and physical stimuli and establish both their relevance to induce specific behaviors and to identify which are related to the selection of hosts that maximize the reproductive success of these parasitoids.

Dissertação (mestrado)–Universidade de Brasília, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2011. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2011-10-21T15:27:46Z No. of bitstreams: 1 2011_MonicaAlvesMacedo.pdf: 2014920 bytes, checksum: ac713dc35d768784883d99373bfcd251 (MD5) / Approved for entry into archive by Elzi Bittencourt(elzi@bce.unb.br) on 2011-10-24T13:49:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_MonicaAlvesMacedo.pdf: 2014920 bytes, checksum: ac713dc35d768784883d99373bfcd251 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-24T13:49:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_MonicaAlvesMacedo.pdf: 2014920 bytes, checksum: ac713dc35d768784883d99373bfcd251 (MD5) / O tomateiro é uma das principais hortaliças cultivadas no país, sendo também uma das culturas que mais sofre danos pelo ataque de diversos patógenos. Dentre os patógenos de origem viral que infectam o tomateiro as principais espécies são Tomato sereve rugose virus – ToSRV e Tomato golden vein virus – TGVV (Begomovirus); Tomato spotted wilt virus – TSWV e Grounut ringspot virus - GRSV (Tospovirus); Cucumber mosaic virus – CMV (Cucumovirus); Peper yellow mosaic virus - PepYMV e Potato virus Y - PVY (Potyvirus) e; Tomato mosaic virus – ToMV (Tobamovirus); e mais recentemente Tomato chlorosis virus - ToCV (Crinivirus). Os begomovírus se destacam, na atualidade, devido à diversidade de espécies e pela maior incidência na cultura. Esses vírus pertencem à família Geminiviridae, podem apresentar um ou dois (DNA-A e DNA-B) componentes genômicos e são transmitidos por moscas-brancas, insetos sugadores de seiva. O objetivo deste trabalho foi avaliar o grau de susceptibilidade de materiais de tomate plantados no país a oito dos principais vírus que afetam a cultura; determinar as espécies de begomovírus predominantes no país nos anos de 2009-2010, e estudar os fatores que influenciam na predominância de ToSRV nas regiões produtoras de tomate do Brasil. Inicialmente, foi feita uma avaliação da resistência de materiais de tomate comumente plantados no país a oito dos principais vírus que afetam a cultura. A avaliação da resistência dos materiais de tomate foi determinada a partir da inoculação de isolados de CMV, PVY, PepYMV, TSWV, GRSV e ToMV (inoculação mecânica) e de ToSRV e TGVV (inoculação por mosca-branca). Como resultado, não foi verificado materiais com resistência do tipo imunidade para cinco das oito espécies de vírus avaliadas. Foram verificados materiais resistentes apenas para isolados das espécies TSWV, ToMV e PVY, sendo que para os demais vírus todas as cultivares apresentaram-se como susceptíveis. Apenas algumas cultivares (somente para o segmento mesa) mostraram níveis diferentes de resistência para o isolado de begomovírus ToSRV avaliado. A partir de então, os estudos foram direcionados para os begomovírus visando determinar as espécies atualmente predominantes no país (coletas nos anos 2009-2010) e estudar os fatores que influenciam na predominância de ToSRV nas regiões produtoras de tomate do Brasil. Para o estudo de prevalência das espécies de begomovírus, as amostras isoladas de tomateiro foram coletadas nas principais regiões produtoras de tomate do país. O DNA total foi extraído e os begomovírus foram detectados por PCR. As amostras positivas foram selecionadas e essas foram amplificadas por RCA (amplificação por círculo rolante) seguido pela caracterização a partir da digestão com enzima de corte freqüente MspI. A análise da diversidade foi realizada por eletroforese com a separação em padrões de migração de fragmentos de DNA. Ao todo foram analisadas 600 amostras positivas e 36 padrões de digestão foram selecionados. Uma amostra de cada padrão foi selecionada aleatoriamente e o DNA-A dos begomovírus presentes nas amostras foram seqüenciados parcialmente (sequenciamento direto do RCA) e apenas as espécies distintas estão sendo clonadas e seqüenciadas completamente. Como resultado houve predominância de ToSRV, seguido de Tomato mottle leaf curl virus (TMoLCV). Em paralelo, isolados de ToSRV e TGVV, espécies mais relatadas como predominantes no país, sendo que TGVV vem aparentemente reduzindo sua incidência, foram selecionados para a avaliação do processo de infecção e o estudo de transmissão por moscas-brancas. O círculo de hospedeiras de plantas cultivadas e daninhas para os vírus TGVV e ToSRV foi determinado, indicando um círculo de hospedeiros semelhante entre eles. Adicionalmente, a cinética de infecção foi avaliada em agroinoculação com TGVV e ToSRV em infecção simples e mista. O monitoramento consistiu na observação de sintomas e coleta de amostras foliares para posterior detecção por PCR a cada três dias, para determinar a velocidade de infecção e a porcentagem de plantas infectadas com cada vírus. Para os ensaios de transmissão, inicialmente foram aperfeiçoados os protocolos de inoculação por mosca-branca, avaliando a forma de aquisição, inoculação, a quantidade de insetos por planta e a cultivar de tomate utilizada como planta-teste. Como metodologia-padrão foi adotado o uso da cultivar Viradoro, a aquisição a partir de folhas destacadas de tomateiro infectado em tubos de polietileno e três insetos/planta confinados em copos plásticos para a inoculação. Os períodos de aquisição e inoculação do inseto-vetor foram padronizados em 48h. Para a determinação da eficiência de transmissão foram realizados ensaios com infecção simples e mista. Foi determinada também a porcentagem de aquisição dos vírus pelo inseto-vetor após 48h de inoculação em insetos alimentados em folhas com infecção simples e mista. Como resultado, não houve diferença significativa entre as taxa de aquisição de ToSRV e TGVV em insetos alimentados em folhas com infecção simples e mista. Mas, a porcentagem de infecção por ToSRV em plantas inoculadas por vetor e por agroinoculação (inoculação simples ou mista) foi invariavelmente superior à taxa de infecção por TGVV em todos os ensaios realizados. Verificou-se que a infecção de tomateiro pelo isolado de ToSRV é mais eficiente quando comparado com a infecção por TGVV. Em infecções simples e mistas, a taxa de plantas infectadas com ToSRV foi maior em todos os ensaios. Em conclusão, muito provavelmente a predominância de ToSRV em campo está relacionada com a maior eficiência de colonização e infecção do ToSRV em tomateiro e também com a maior eficiência de transmissão pela mosca-branca de ToSRV, sugerindo a excelente adaptação dessa espécie em tomateiro em condições de cultivo no Brasil. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The tomato plant is one of the major vegetable grown in the country and is also the crop most damaged by numerous pathogens. Among the main viral diseases that affect this crop, the following viruses are specially important: Tomato severe rugose virus - ToSRV and Tomato golden vein virus (Begomovirus), Tomato spotted wild virus - TSWV and Groundnut ringspot virus - GRSV (Tospovirus), Cucumber mosaic virus - CMV (Cucumovirus); Pepper yellow mosaic virus - PepYMV and Potato virus Y - PVY (Potyvirus), and Tomato mosaic virus - ToMV (Tobamovirus), and more recently Tomato chlorosis virus - ToCV (Crinivirus). At present, begomoviruses are considered the most important viruses, given the species diversity and high incidence. These viruses belong to the family Geminiviridae, have one or two (DNA-A and DNA-B) genomic components, and are transmitted by sap-sucking whiteflies. The main objective of the present work was to evaluate the susceptibility of tomato materials cultivated in the country to the eight major viruses affecting the crop, to determine the begomovirus species prevalence in the country within 2009-2010, and to study the factors that influence the prevalence of ToSRV in tomato producing areas of Brazil. Initially, the resistance of tomato materials commonly planted in the country was evaluated to eight of the major viruses affecting this crop. Resistance was evaluated against inoculation of CMV, PVY, PepYMV, TSWV, ToMV and GRSV (mechanical inoculation), and ToSRV and TGVV (inoculation by whitefly). As a result, no immune-like resistance was observed against five out of eight tested virus species. Resistant materials were only found for TSWV, ToMV and PVY, whereas for the other viruses all cultivars were classified as susceptible. Only for begomoviruses, some cultivars (only for fresh market) showed different levels of resistance to isolates of begomoviroses. Then, the studies were focused on begomoviruses, and aimed to determine the current prevalent species in the country (collected within years 2009-2010) and to study the factors that influence the prevalence of ToSRV on tomatoes in Brazil. For the study on the prevalent begomovirus species, tomato isolates were sampled in the main growing regions of the country. Total DNA was extracted and the begomoviruses were detected using PCR. The positive samples were selected and they were amplified by RCA (rolling circle amplification) followed by genotyping by digestion with the frequent cutting enzyme, MspI. The diversity analysis was performed by comparison of migration patterns of digested DNA fragments in an agarose gel. A total of 600 positive samples were analyzed and 36 migration patterns were detected. One sample from each pattern was randomly selected, the DNA-A of each begomovirus present in the sample was partially sequenced (direct sequencing of RCA), and only the different species are being cloned and sequenced completely. As a result ToSRV was the predominant species, followed by Tomato mottle leaf curl virus (TMoLCV). In parallel, isolates of ToSRV and TGVV, species reported as more prevalent in the country, being TGVV apparently reducing in its incidence, were selected for the studies on the infection process and transmission by whiteflies. TGVV and ToSRV host range, including weeds and crops, was determined. Additionally, the infection kinetics was evaluated by agroinoculation of TGVV and ToSRV in single and mixed infections. Infection was monitored by symptom observation and virus detection by PCR from leaf samples collected every three days to determine the infection rate and percentage of plants infected with each virus. For the transmission tests, the whitefly inoculation protocols were initially optimized, by evaluating the procedure of acquisition, of inoculation, the number of insects per plant and the tomato cultivar used as the test plant. The standard methodology was defined by using the Viradoro cultivar, acquisition from infected detached tomato leaves in polyethylene tubes, and three insects per plant confined in plastic cups for inoculation. The acquisition and inoculation access periods were standardized in 48 hours. The transmission efficiency tests were performed with single and mixed infections. Additionally, the percentage of whiteflies that had acquired the virus 48h after inoculation was determined in single and mixed infections. As a result, no significant difference was found between the acquisition rate of ToSRV and TGVV in insects fed on leaves with single and mixed infections. However, the infection percentage of plants agro or vector-inoculated with ToSRV (single or mixed inoculation) was invariably higher than the rate of infection of TGVV in all tests. Infection of tomato plants by the ToSRV isolate was more efficient than infection with TGVV. In single and mixed infections, the rate of infected plants by ToSRV was higher in all tests. In conclusion, most probably the predominance of ToSRV in the field is related to the efficiency of colonization and infection of ToSRV in tomato plants and also to the higher efficiency of whitefly transmission, suggesting the excellent adaptation of this species in tomato under growing conditions in Brazil.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-08-13T15:19:40Z No. of bitstreams: 1 2013_LeydyLorenaMendozaTobar.pdf: 2616918 bytes, checksum: 6590982254752b2aa82977414720ad55 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-08-15T14:04:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_LeydyLorenaMendozaTobar.pdf: 2616918 bytes, checksum: 6590982254752b2aa82977414720ad55 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-15T14:04:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_LeydyLorenaMendozaTobar.pdf: 2616918 bytes, checksum: 6590982254752b2aa82977414720ad55 (MD5) / A cultura de tomate no Brasil é uma das mais importantes do ponto de vista econômico e social. Estudos publicados pela FAO em 2011 posicionam o Brasil no oitavo lugar do ranking mundial de produção. O cultivo de tomateiro no Brasil é feito em diferentes estados e durante grande parte dos meses do ano, favorecendo a ocorrência de diferentes doenças de importância econômica, dentre elas, destacam-se aquelas causadas por espécies do gênero Begomovirus. O gênero Begomovirus encontra-se composto por espécies com partículas geminadas formadas por dois icosaedros incompletos e ácido nucleico do tipo ssDNA encapsidado em um componente ou dois componentes genômicos (DNA A e B), denominadas de monopartidas ou bipartidas, respectivamente. Até o presente momento no Brasil, em tomateiro, não foram relatadas espécies de begomovírus de genoma monopartido. Espécies de Begomovirus são transmitidas com grande eficiência pelo vetor Bemisia tabaci. Para controle das doenças causadas por espécies de Begomovirus esforços vêm sendo concentrados no desenvolvimento de materiais elite através da introgressão de genes de resistência, muitas vezes, provenientes de acessos selvagens do gênero Solanum. Um exemplo é a linhagem LAM 144R que contém o gene dominante Ty-1 caracterizado por conferir resistência a diferentes espécies de Begomovirus. Neste trabalho a linhagem LAM 144R foi avaliada com o objetivo de elucidar os mecanismos virais da resistência conferida pelo Ty-1 e a amplitude da resistência deste gene frente às espécies de Begomovirus bipartidos encontrados no Brasil: Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV), Tomato rugose mosaic virus (ToRMV), Tomato severe rugose virus (ToSRV) e Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV). A avaliação da replicação viral foi realizada mediante experimentos de agroinfiltação do componente A de ToCMoV na linhagem resistente LAM 144R e na isolinha suscetível LAM 144S. A quantificação da carga viral foi realizada por PCR quantitativa em tempo real (qPCR), usando primers específicos para capa proteica (CP1). Os dados foram analisados pelo teste não paramétrico Kruskal-Wallis. O título viral foi significativamente menor nas plantas da isolinha LAM 144R em comparação com LAM 144S, mostrando uma quantidade duas vezes menor de carga viral na linhagem resistente no décimo dia após a infiltração. Para avaliar o efeito deste gene no movimento a longa distância de Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV) na linhagem LAM 144R duplas enxertias foram realizadas. Plantas LAM 144S (suscetível) foram inoculadas com ToCMoV. Duplas enxertias foram realizadas utilizando como enxerto segmentos de LAM 144R ou LAM144S e como sobre-enxerto, LAM 144S. Amostras foram coletadas em diferentes tempos após as enxertias e a detecção de ToCMoV por PCR e Southern blot mostraram uma restrição no movimento viral a longa distância quando foram usadas as plantas LAM 144R contendo o gene Ty-1 como enxerto Para o estudo da amplitude da resistência conferida pelo gene Ty-1 na linhagem LAM 144R, plantas foram inoculadas via biobalística com DNA das quatro espécies de Begomovirus mencionadas acima. Como controle positivo utilizou-se plantas de LAM 144S. As avaliações de sintomas foram realizadas aos 21 e 40 dias após inoculação (dai) e a acumulação viral foi avaliada aos 30 (dai) mediante Southern Blot usando sondas para o componente A de Begomovirus. Como resultado as plantas de LAM 144R inoculadas com ToCMoV apresentaram sintomas leves e baixa acumulação viral. Para ToSRV observou-se ausência de sintomas ou sintomas leves e baixa acumulação viral. Para ToRMV poucas plantas apresentaram sintomas leves e não foi detectada acumulação viral. Para ToYVSV observou-se sintomas leves em algumas plantas, um baixa acumulação viral em cinco delas e uma forte acumulação em duas amostras. Os resultados encontrados neste estudo demonstram que LAM 144R pode ser considerada promissora para uso em programas de melhoramento no desenvolvimento de diferentes cultivares comerciais. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The tomato crop in Brazil is important economically and socially. FAO placed, Brazil in the 8th position in the world rank of tomato production. Tomatoes in Brazil are grown in different states and during most months of the year, what favors the appearance of different diseases of economic importance, such as those caused by begomoviruses. Begomoviruses are transmitted very efficiently by the vector Bemisia tabaci. The genome can be either monopartite or bipartite (DNA A and DNA B). So far, only bipartite tomato begomoviruses have been reported in Brazil. To control diseases caused by begomovirus include the development of elite materials through introgression of resistance genes from wild Solanum accessions. An example is the line LAM 144R that contains the dominant gene Ty-1 which confer resistance to different Begomovirus species. This line LAM 144R was here evaluated in order to elucidate the mechanisms of viral resistance conferred by Ty-1. The breadth of this resistance was tested by inoculation with four bipartite Begomovirus-especies found in Brazil: Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV), Tomato rugose mosaic virus (ToRMV), Tomato severe rugose virus (ToSRV), and Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV). As positive control LAM 144S were used plants. Symptoms were scored at 21 and 40 days after inoculation (dai) and viral accumulation was evaluated at 30 (dai) by Southern blot. As a result LAM 144R mild symptoms and low or no viral accumulation was observed with ToCMoV, ToSRV, ToRMV and ToYVSV. The evaluation of virus replication was carried out by agronfiltration experiments of ToCMoV DNA-A in the resistance LAM 144R and susceptible LAM 144S isolines. Quantification of the viral load was performed by quantitative polymerase chain reaction (qPCR) using primers specific for coat protein (CP1). Data were analyzed by nonparametric Kruskal-Wallis test. The viral titer was significantly lower in plants LAM 144R compared to the isoline LAM 144S, showing 2 times lower viral load in the resistant lineage ten days after agroinfiltration. To avaluate the effect of this gene on the long-distance movement of Tomato chlorotic mottel virus , in near isogening lines LAM 144R and LAM 144S, double grafts were performed. Plants LAM 144S (susceptible) were inoculated with ToCMoV. Double grafts were performed using graft segments of LAM 144R and LAM 144S and as overgraft, LAM 144S plants. Samples were collected at different times after grafting and ToCMoV was detected by PCR, Southern blot, and tissue blott showing a restriction in long-distance viral movement when plants LAM 144R containing the Ty-1 gene was used as graft. The results of this study demonstrate that LAM 144R can be considered promising for the use in breeding programs for the development of new resistent cultivars. The evaluation of virus replication was carried out by agronfiltration of ToCMoV DNA-A in the resistant LAM 144R and susceptible LAM 144S isolines. Quantification of viral load was performed by quantitative polymerase chain reaction (qPCR) using primers specific for the coat protein (CP1). Data was analyzed by nonparametric Kruskal-Wallis test. The viral titer was significantly lower in plants LAM 144R compared to the LAM 144S, showing 2 times lower viral load in the resistant line at tenth day after agroinfiltration. To evaluate the effect of this gene on the long-distance movement of Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV) in the near isogenig lines LAM 144R and LAM 144S, double grafts were performed. Plants LAM 144S (susceptible) were inoculated with ToCMoV. Double grafts were performed using as grafts LAM 144R or LAM 144S segments and as overgrafts, LAM 144S plants. Samples were collected at different times ToCMoV was detected by PCR and Southern blot showing a restriction in long-distance viral movement when plants LAM 144R containing the Ty-1 gene was used as grafts. The results of this study demonstrate that LAM 144-R can be considered promising for the use in breeding programs for the development of new resistent cultivars to different Begomovirus species.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2014-04-03T11:36:04Z No. of bitstreams: 1 2012_ FabriciodaSilvaMorgado.pdf: 4901007 bytes, checksum: 8b12854ca2ed846876f2f45f52dfc5db (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-04-03T16:40:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_ FabriciodaSilvaMorgado.pdf: 4901007 bytes, checksum: 8b12854ca2ed846876f2f45f52dfc5db (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-03T16:40:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_ FabriciodaSilvaMorgado.pdf: 4901007 bytes, checksum: 8b12854ca2ed846876f2f45f52dfc5db (MD5) / O baculovírus Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) é um dos melhores exemplos do uso de um vírus para controlar a população de um inseto-praga. Este baculovírus infecta larvas da mariposa Anticarsia gemmatalis (Lepidoptera), uma peste do cultivo de soja, e tem sido utilizado como agente de controle biológico no Brasil por mais de duas décadas. Isto depende da habilidade deste vírus gerar dois fenótipos virais, um responsável pela sobrevivência no ambiente fora do hospedeiro, o corpo de oclusão (OB), que é usado como bioinseticida, o outro fenótipo é responsável pela infecção sistêmica, o budded virus (BV), que é uma partícula viral envelopada por membrana da célula hospedeira. Estes dois fenótipos ocorrem em momentos distintos da infecção celular, os BVs na fase tardia e os OBs na fase muito tardia. A regulação temporal e quantitativa da expressão gênica em baculovírus é baseada em transcrição, isto é, a expressão dos genes virais é determinada pela sequência dos promotores que regulam os genes. Neste trabalho, foram isolados os promotores dos genes ie1, gp64, vp39, p6.9, polh, p10 e hel, do baculovírus AgMNPV, e o promotor CMVie1 do Herpesvírus humano CMV, estas sequências reguladoras foram clonadas a montante do gene luciferase de vaga-lume e, a partir disto, baculovírus AgMNPV recombinantes foram construídos por recombinação homóloga. Isto permitiu avaliar a atividade de cada promotor durante a infecção de células de inseto permissivas e não-permissivas, além de quantificar a atividade dos promotores durante a infecção de larvas Anticarsia gemmatalis e Spodoptera frugiperda. Os promotores vp39, p6.9 e polh foram os mais produtivos nos ensaios de expressão em células de inseto e lagartas. Também foi possível confirmar que o AgMNPV é capaz de transduzir células de mamíferos cultivadas in vitro. Este trabalho serve como uma demonstração do uso do baculovírus AgMNPV como vetor de expressão de proteínas heterólogas. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) is one of the best examples of the use of a virus to control an insect pest in agriculture worldwide. This baculovirus infects larvae of Anticarsia gemmatalis moth (Lepidoptera), a soy bean pest, and has been used as a successful biocontrol agent in Brazil for over two decades. This depends on the unique ability to generate two viral phenotypes, one responsible for the viral survival in the environment outside the host and the agent of primary infection, which consists of viral particles encapsulated into a polyhedral shaped protein crystal, the occlusion body (OB), which is used as a bioinsecticide, and a second phenotype, the budded virus (BV), which is a single membrane-containing viral particle. The temporal and quantitative regulation of gene expression in baculoviruses is transcription based, that is, the expression is determined by the sequence of the gene regulating promoters. In this work, the promoters of the AgMNPV ie1, gp64, vp39, p6.9, polh, p10 and hel genes and the Herpesvirus CMVie1 promoter, have been isolated and cloned upstream of the firefly luciferase gene, and recombinant AgMNPV baculoviruses were constructed by homologous recombination. The activity of each promoter was analysed during permissible and non-permissible insect cell infections, and during the infection of the Anticarsia gemmatalis and Spodoptera frugiperda larvae. The vp39, p6.9 and polh promoters were the most efficient in the protein expression assays conducted in insect cells and larvae. It was also possible to confirm that the AgMNPV baculovirus is capable of transducing mammalian cells grown in vitro. This work is a demonstration of the biotecnological potential of the AgMNPV baculovirus as a vector for the expression of heterologous proteins.

Orientador : Alvaro Santos Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T04:55:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gaspar_JoseOsmar_M.pdf: 5774831 bytes, checksum: 158c3f0cc650e4c53956150c44870a22 (MD5) Previous issue date: 1980 / Resumo: Partículas longas e curtas do vírus do anel do pimentão ? VAP ? (?Brazilian tobacco rattle vírus?) foram visualizadas em tecidos foliares e de anteras de tomateiros (Lycopersicon esculentum Mill.) infectados. De modo característico, o VAP apareceu formando agregados de partículas sempre associados externamente a mitocôndrias, com exceção para micrósporos e grãos de pólen maduros, onde também foram encontrados agregados de partículas não associados com essa organela celular e partículas livres no citoplasma. Algumas vezes, partículas longas e curtas do VAP aparecem associadas numa extremidade a uma mitocôndria e na outra ao tonoplasto. O VAP foi localizado em todos os estágios de maior duração da mitocrosporogênese de tomateiros infectados, ou seja, estágio pré-meiótico, estágio meiótico, estágio de micrósporo pré-mitótico e estágio de grão de pólen maduro. Em grãos de pólen maduros partículas longas e curtas do VAP foram encontradas tanto nas células vegetativas como nas generativas. Em nenhum caso foram identificados vírions do VAP no núcleo celular, nem associação das partículas virais com paredes celulósicas, paredes de calose ou parede envolvente dos grãos de pólen. A quantidade relativamente pequena do vírus em células-mães dos grãos de pólen e micrósporos pré-mitóticos e o acúmulo de partículas longas e curtas em grãos de pólen maduros, levam-nos a acreditar que ocorre síntese do VAP durante o período de amadurecimento dos grãos de pólen... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Long and short particles of the Brazilian tobacco rattle virus (BTRV) were visualized in leaf cells and in cells of the various anther tissues of infected tomato plants. The BTRV appeared mostly as aggregates of parallel particles associated on both ends to mitochondria, though isolated aggregates and individual particles were seen in microspores and mature pollen grains. In a few cases particle aggregates were observed associated with a mitochondria on one end and to the tonoplast of a vacuole on the other end. The BTRV particles could be seen in the cytoplasm of infected cells during the various phases of microsporogenesis from the stage of pre-meiotic cells until mature pollen grains. ln these the short and long particles could be seen in the cytoplasm of both the vegetative and generative cells. No virus particle was ever seen in the nuclei of infected cells; neither associated with the cellulose or callose walls, nor on the outside wall of pollen grains. The small number of virus particles present in the pollen mother cells and pre-mitotic microspores on one side, and the great number of short and long particle aggregates in the mature pollen grains on the other, indicate that virus increase must occur during pollen grain maturation and is not the result of only distribution... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas