Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2011. / Submitted by Max Lee da Silva (bruce1415@hotmail.com) on 2011-06-28T14:32:38Z No. of bitstreams: 1 2011_LucianaRamalhoDeFarias.pdf: 2230097 bytes, checksum: ad0589346d3e4e161f07d665eb227f60 (MD5) / Approved for entry into archive by Elna Araújo(elna@bce.unb.br) on 2011-07-04T19:52:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_LucianaRamalhoDeFarias.pdf: 2230097 bytes, checksum: ad0589346d3e4e161f07d665eb227f60 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-04T19:52:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_LucianaRamalhoDeFarias.pdf: 2230097 bytes, checksum: ad0589346d3e4e161f07d665eb227f60 (MD5) / O percevejo-marrom Euschistus heros é uma praga que reduz consideravelmente a produtividade nacional de culturas agrícolas de grande importância econômica, dentre elas a soja. Visando subsidiar o desenvolvimento de ferramentas biotecnológicas alternativas para auxílio no controle dessa praga, o presente trabalho realizou o estudo da expressão de genes relacionados à olfação e análise do perfil e sítios de expressão utilizando as técnicas de qPCR em Tempo Real e hibridização in situ, respectivamente. A prospecção foi realizada através da construção de uma biblioteca de cDNA a partir do RNA total extraído das antenas utilizando o kit Smart cDNA Library Construction (Clontech®). Mil clones foram sequenciados e, através de bioinformática, foram identificadas duas sequências de 477 e 294 pares bases pertencentes a genes da família das proteínas ligantes de odorantes (Odorant Binding Protein - OBP) que foram denominados EherOBP1 e EherOBP2, respectivamente. O EherOBP1 possui sequência deduzida de aminoácidos de 16 kDa e pI 5,18, peptídio sinal na extremidade N-terminal, domínio de ligação a feromônio (Pheromone Binding Protein – PBP) e seis resíduos de cisteína em posições conservadas, todas características esperadas para proteínas integrantes da família OBP. Embora parcial, a sequência deduzida de aminoácidos de EherOBP2 já pode também ser atribuída a função hipotética de proteína ligante a odor devido a presença do domínio PBP e cinco resíduos de cisteína em posições conservadas. A análise da expressão diferencial através de RT-PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR) indicou que as antenas representam o principal sítio de produção da EherOBP1 em ambos os sexos, sendo a expressão nas antenas de macho cerca de três vezes maior que nas antenas de fêmeas. Em relação a EherOBP2, foi observada uma predominância da expressão nas antenas e abdômen de machos, sendo esta cerca de cinco vezes maior em relação à expressão observada nas antenas de fêmeas. A partir dos resultados obtidos com a localização da hibridização in situ nas antenas foi possível inferir que os mRNAs das EherOBPs são localizados especificamente na base dos órgãos olfativos (sensilas), havendo diferenças na expressão ao longo da antena entre machos e fêmeas. Neste trabalho foram identificados dois transcritos gênicos relacionados à olfação que codificam duas proteínas com provável função de ligação a odorantes. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / In Brazil, the stink bug Euschistus heros represents an important agricultural plague responsible for economic damages on several cultures, including the soy. Aiming the development of alternatives biotechnological tools, the present work conducted the study of the expression of genes related to olfaction through the construction of a cDNA library from transcripts (mRNA) isolated from the antennae and analysis of the profile and sites of expression using the techniques of real-time qPCR and in situ hybridization, respectively. cDNA library was successfully constructed from total RNA extract from adults antenna using the Smart cDNA Library Construction Kit (Clontech®). A total of 1000 cDNA clones were randomly selected and submitted to sequencing. Two transcripts encoding OBPs were identified by bioinformatics approaches. The E. heros OBPs nucleotide sequences showed 477 and 294 pb and were named as EherOBP1 and EherOBP2, respectively. The deduced amino acid sequence of EherOBP1 has16kDa and pI 5.18, signal peptide at the N-terminal, PBP domain and six cysteine residues in conserved positions, all the expected features for members of OBP protein family. Although partial, the deduced amino acid sequence of EherOBP2 can be assigned as a hypothetical Odorant Binding Protein due the presence of PBP domain and five cysteine residues in conserved positions. Analysis of differential expression by quantitative real time PCR indicated that antenna are the main production site of EherOBP1 in both sexes, and the expression in male antennae is about three times higher than in female antennae. Regarding to EherOBP2, there was a predominance of expression in the antennae and abdomen of males, which is about six times greater than the expression observed in the antennae of females. In situ hybridization results showed that EherOBPs mRNAs are specifically expressed on the base of the antenna olfactory organs (sensilas) with differences in the localization of the expression along the antenna of male and female. In this work were identified two transcripts related to olfaction encoding proteins with hypothetical function odorant binding.

Dissertação (mestrado)–Universidade de Brasília, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2011. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2011-10-21T15:27:46Z No. of bitstreams: 1 2011_MonicaAlvesMacedo.pdf: 2014920 bytes, checksum: ac713dc35d768784883d99373bfcd251 (MD5) / Approved for entry into archive by Elzi Bittencourt(elzi@bce.unb.br) on 2011-10-24T13:49:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_MonicaAlvesMacedo.pdf: 2014920 bytes, checksum: ac713dc35d768784883d99373bfcd251 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-24T13:49:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_MonicaAlvesMacedo.pdf: 2014920 bytes, checksum: ac713dc35d768784883d99373bfcd251 (MD5) / O tomateiro é uma das principais hortaliças cultivadas no país, sendo também uma das culturas que mais sofre danos pelo ataque de diversos patógenos. Dentre os patógenos de origem viral que infectam o tomateiro as principais espécies são Tomato sereve rugose virus – ToSRV e Tomato golden vein virus – TGVV (Begomovirus); Tomato spotted wilt virus – TSWV e Grounut ringspot virus - GRSV (Tospovirus); Cucumber mosaic virus – CMV (Cucumovirus); Peper yellow mosaic virus - PepYMV e Potato virus Y - PVY (Potyvirus) e; Tomato mosaic virus – ToMV (Tobamovirus); e mais recentemente Tomato chlorosis virus - ToCV (Crinivirus). Os begomovírus se destacam, na atualidade, devido à diversidade de espécies e pela maior incidência na cultura. Esses vírus pertencem à família Geminiviridae, podem apresentar um ou dois (DNA-A e DNA-B) componentes genômicos e são transmitidos por moscas-brancas, insetos sugadores de seiva. O objetivo deste trabalho foi avaliar o grau de susceptibilidade de materiais de tomate plantados no país a oito dos principais vírus que afetam a cultura; determinar as espécies de begomovírus predominantes no país nos anos de 2009-2010, e estudar os fatores que influenciam na predominância de ToSRV nas regiões produtoras de tomate do Brasil. Inicialmente, foi feita uma avaliação da resistência de materiais de tomate comumente plantados no país a oito dos principais vírus que afetam a cultura. A avaliação da resistência dos materiais de tomate foi determinada a partir da inoculação de isolados de CMV, PVY, PepYMV, TSWV, GRSV e ToMV (inoculação mecânica) e de ToSRV e TGVV (inoculação por mosca-branca). Como resultado, não foi verificado materiais com resistência do tipo imunidade para cinco das oito espécies de vírus avaliadas. Foram verificados materiais resistentes apenas para isolados das espécies TSWV, ToMV e PVY, sendo que para os demais vírus todas as cultivares apresentaram-se como susceptíveis. Apenas algumas cultivares (somente para o segmento mesa) mostraram níveis diferentes de resistência para o isolado de begomovírus ToSRV avaliado. A partir de então, os estudos foram direcionados para os begomovírus visando determinar as espécies atualmente predominantes no país (coletas nos anos 2009-2010) e estudar os fatores que influenciam na predominância de ToSRV nas regiões produtoras de tomate do Brasil. Para o estudo de prevalência das espécies de begomovírus, as amostras isoladas de tomateiro foram coletadas nas principais regiões produtoras de tomate do país. O DNA total foi extraído e os begomovírus foram detectados por PCR. As amostras positivas foram selecionadas e essas foram amplificadas por RCA (amplificação por círculo rolante) seguido pela caracterização a partir da digestão com enzima de corte freqüente MspI. A análise da diversidade foi realizada por eletroforese com a separação em padrões de migração de fragmentos de DNA. Ao todo foram analisadas 600 amostras positivas e 36 padrões de digestão foram selecionados. Uma amostra de cada padrão foi selecionada aleatoriamente e o DNA-A dos begomovírus presentes nas amostras foram seqüenciados parcialmente (sequenciamento direto do RCA) e apenas as espécies distintas estão sendo clonadas e seqüenciadas completamente. Como resultado houve predominância de ToSRV, seguido de Tomato mottle leaf curl virus (TMoLCV). Em paralelo, isolados de ToSRV e TGVV, espécies mais relatadas como predominantes no país, sendo que TGVV vem aparentemente reduzindo sua incidência, foram selecionados para a avaliação do processo de infecção e o estudo de transmissão por moscas-brancas. O círculo de hospedeiras de plantas cultivadas e daninhas para os vírus TGVV e ToSRV foi determinado, indicando um círculo de hospedeiros semelhante entre eles. Adicionalmente, a cinética de infecção foi avaliada em agroinoculação com TGVV e ToSRV em infecção simples e mista. O monitoramento consistiu na observação de sintomas e coleta de amostras foliares para posterior detecção por PCR a cada três dias, para determinar a velocidade de infecção e a porcentagem de plantas infectadas com cada vírus. Para os ensaios de transmissão, inicialmente foram aperfeiçoados os protocolos de inoculação por mosca-branca, avaliando a forma de aquisição, inoculação, a quantidade de insetos por planta e a cultivar de tomate utilizada como planta-teste. Como metodologia-padrão foi adotado o uso da cultivar Viradoro, a aquisição a partir de folhas destacadas de tomateiro infectado em tubos de polietileno e três insetos/planta confinados em copos plásticos para a inoculação. Os períodos de aquisição e inoculação do inseto-vetor foram padronizados em 48h. Para a determinação da eficiência de transmissão foram realizados ensaios com infecção simples e mista. Foi determinada também a porcentagem de aquisição dos vírus pelo inseto-vetor após 48h de inoculação em insetos alimentados em folhas com infecção simples e mista. Como resultado, não houve diferença significativa entre as taxa de aquisição de ToSRV e TGVV em insetos alimentados em folhas com infecção simples e mista. Mas, a porcentagem de infecção por ToSRV em plantas inoculadas por vetor e por agroinoculação (inoculação simples ou mista) foi invariavelmente superior à taxa de infecção por TGVV em todos os ensaios realizados. Verificou-se que a infecção de tomateiro pelo isolado de ToSRV é mais eficiente quando comparado com a infecção por TGVV. Em infecções simples e mistas, a taxa de plantas infectadas com ToSRV foi maior em todos os ensaios. Em conclusão, muito provavelmente a predominância de ToSRV em campo está relacionada com a maior eficiência de colonização e infecção do ToSRV em tomateiro e também com a maior eficiência de transmissão pela mosca-branca de ToSRV, sugerindo a excelente adaptação dessa espécie em tomateiro em condições de cultivo no Brasil. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The tomato plant is one of the major vegetable grown in the country and is also the crop most damaged by numerous pathogens. Among the main viral diseases that affect this crop, the following viruses are specially important: Tomato severe rugose virus - ToSRV and Tomato golden vein virus (Begomovirus), Tomato spotted wild virus - TSWV and Groundnut ringspot virus - GRSV (Tospovirus), Cucumber mosaic virus - CMV (Cucumovirus); Pepper yellow mosaic virus - PepYMV and Potato virus Y - PVY (Potyvirus), and Tomato mosaic virus - ToMV (Tobamovirus), and more recently Tomato chlorosis virus - ToCV (Crinivirus). At present, begomoviruses are considered the most important viruses, given the species diversity and high incidence. These viruses belong to the family Geminiviridae, have one or two (DNA-A and DNA-B) genomic components, and are transmitted by sap-sucking whiteflies. The main objective of the present work was to evaluate the susceptibility of tomato materials cultivated in the country to the eight major viruses affecting the crop, to determine the begomovirus species prevalence in the country within 2009-2010, and to study the factors that influence the prevalence of ToSRV in tomato producing areas of Brazil. Initially, the resistance of tomato materials commonly planted in the country was evaluated to eight of the major viruses affecting this crop. Resistance was evaluated against inoculation of CMV, PVY, PepYMV, TSWV, ToMV and GRSV (mechanical inoculation), and ToSRV and TGVV (inoculation by whitefly). As a result, no immune-like resistance was observed against five out of eight tested virus species. Resistant materials were only found for TSWV, ToMV and PVY, whereas for the other viruses all cultivars were classified as susceptible. Only for begomoviruses, some cultivars (only for fresh market) showed different levels of resistance to isolates of begomoviroses. Then, the studies were focused on begomoviruses, and aimed to determine the current prevalent species in the country (collected within years 2009-2010) and to study the factors that influence the prevalence of ToSRV on tomatoes in Brazil. For the study on the prevalent begomovirus species, tomato isolates were sampled in the main growing regions of the country. Total DNA was extracted and the begomoviruses were detected using PCR. The positive samples were selected and they were amplified by RCA (rolling circle amplification) followed by genotyping by digestion with the frequent cutting enzyme, MspI. The diversity analysis was performed by comparison of migration patterns of digested DNA fragments in an agarose gel. A total of 600 positive samples were analyzed and 36 migration patterns were detected. One sample from each pattern was randomly selected, the DNA-A of each begomovirus present in the sample was partially sequenced (direct sequencing of RCA), and only the different species are being cloned and sequenced completely. As a result ToSRV was the predominant species, followed by Tomato mottle leaf curl virus (TMoLCV). In parallel, isolates of ToSRV and TGVV, species reported as more prevalent in the country, being TGVV apparently reducing in its incidence, were selected for the studies on the infection process and transmission by whiteflies. TGVV and ToSRV host range, including weeds and crops, was determined. Additionally, the infection kinetics was evaluated by agroinoculation of TGVV and ToSRV in single and mixed infections. Infection was monitored by symptom observation and virus detection by PCR from leaf samples collected every three days to determine the infection rate and percentage of plants infected with each virus. For the transmission tests, the whitefly inoculation protocols were initially optimized, by evaluating the procedure of acquisition, of inoculation, the number of insects per plant and the tomato cultivar used as the test plant. The standard methodology was defined by using the Viradoro cultivar, acquisition from infected detached tomato leaves in polyethylene tubes, and three insects per plant confined in plastic cups for inoculation. The acquisition and inoculation access periods were standardized in 48 hours. The transmission efficiency tests were performed with single and mixed infections. Additionally, the percentage of whiteflies that had acquired the virus 48h after inoculation was determined in single and mixed infections. As a result, no significant difference was found between the acquisition rate of ToSRV and TGVV in insects fed on leaves with single and mixed infections. However, the infection percentage of plants agro or vector-inoculated with ToSRV (single or mixed inoculation) was invariably higher than the rate of infection of TGVV in all tests. Infection of tomato plants by the ToSRV isolate was more efficient than infection with TGVV. In single and mixed infections, the rate of infected plants by ToSRV was higher in all tests. In conclusion, most probably the predominance of ToSRV in the field is related to the efficiency of colonization and infection of ToSRV in tomato plants and also to the higher efficiency of whitefly transmission, suggesting the excellent adaptation of this species in tomato under growing conditions in Brazil.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-08-13T15:19:40Z No. of bitstreams: 1 2013_LeydyLorenaMendozaTobar.pdf: 2616918 bytes, checksum: 6590982254752b2aa82977414720ad55 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-08-15T14:04:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_LeydyLorenaMendozaTobar.pdf: 2616918 bytes, checksum: 6590982254752b2aa82977414720ad55 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-15T14:04:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_LeydyLorenaMendozaTobar.pdf: 2616918 bytes, checksum: 6590982254752b2aa82977414720ad55 (MD5) / A cultura de tomate no Brasil é uma das mais importantes do ponto de vista econômico e social. Estudos publicados pela FAO em 2011 posicionam o Brasil no oitavo lugar do ranking mundial de produção. O cultivo de tomateiro no Brasil é feito em diferentes estados e durante grande parte dos meses do ano, favorecendo a ocorrência de diferentes doenças de importância econômica, dentre elas, destacam-se aquelas causadas por espécies do gênero Begomovirus. O gênero Begomovirus encontra-se composto por espécies com partículas geminadas formadas por dois icosaedros incompletos e ácido nucleico do tipo ssDNA encapsidado em um componente ou dois componentes genômicos (DNA A e B), denominadas de monopartidas ou bipartidas, respectivamente. Até o presente momento no Brasil, em tomateiro, não foram relatadas espécies de begomovírus de genoma monopartido. Espécies de Begomovirus são transmitidas com grande eficiência pelo vetor Bemisia tabaci. Para controle das doenças causadas por espécies de Begomovirus esforços vêm sendo concentrados no desenvolvimento de materiais elite através da introgressão de genes de resistência, muitas vezes, provenientes de acessos selvagens do gênero Solanum. Um exemplo é a linhagem LAM 144R que contém o gene dominante Ty-1 caracterizado por conferir resistência a diferentes espécies de Begomovirus. Neste trabalho a linhagem LAM 144R foi avaliada com o objetivo de elucidar os mecanismos virais da resistência conferida pelo Ty-1 e a amplitude da resistência deste gene frente às espécies de Begomovirus bipartidos encontrados no Brasil: Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV), Tomato rugose mosaic virus (ToRMV), Tomato severe rugose virus (ToSRV) e Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV). A avaliação da replicação viral foi realizada mediante experimentos de agroinfiltação do componente A de ToCMoV na linhagem resistente LAM 144R e na isolinha suscetível LAM 144S. A quantificação da carga viral foi realizada por PCR quantitativa em tempo real (qPCR), usando primers específicos para capa proteica (CP1). Os dados foram analisados pelo teste não paramétrico Kruskal-Wallis. O título viral foi significativamente menor nas plantas da isolinha LAM 144R em comparação com LAM 144S, mostrando uma quantidade duas vezes menor de carga viral na linhagem resistente no décimo dia após a infiltração. Para avaliar o efeito deste gene no movimento a longa distância de Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV) na linhagem LAM 144R duplas enxertias foram realizadas. Plantas LAM 144S (suscetível) foram inoculadas com ToCMoV. Duplas enxertias foram realizadas utilizando como enxerto segmentos de LAM 144R ou LAM144S e como sobre-enxerto, LAM 144S. Amostras foram coletadas em diferentes tempos após as enxertias e a detecção de ToCMoV por PCR e Southern blot mostraram uma restrição no movimento viral a longa distância quando foram usadas as plantas LAM 144R contendo o gene Ty-1 como enxerto Para o estudo da amplitude da resistência conferida pelo gene Ty-1 na linhagem LAM 144R, plantas foram inoculadas via biobalística com DNA das quatro espécies de Begomovirus mencionadas acima. Como controle positivo utilizou-se plantas de LAM 144S. As avaliações de sintomas foram realizadas aos 21 e 40 dias após inoculação (dai) e a acumulação viral foi avaliada aos 30 (dai) mediante Southern Blot usando sondas para o componente A de Begomovirus. Como resultado as plantas de LAM 144R inoculadas com ToCMoV apresentaram sintomas leves e baixa acumulação viral. Para ToSRV observou-se ausência de sintomas ou sintomas leves e baixa acumulação viral. Para ToRMV poucas plantas apresentaram sintomas leves e não foi detectada acumulação viral. Para ToYVSV observou-se sintomas leves em algumas plantas, um baixa acumulação viral em cinco delas e uma forte acumulação em duas amostras. Os resultados encontrados neste estudo demonstram que LAM 144R pode ser considerada promissora para uso em programas de melhoramento no desenvolvimento de diferentes cultivares comerciais. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The tomato crop in Brazil is important economically and socially. FAO placed, Brazil in the 8th position in the world rank of tomato production. Tomatoes in Brazil are grown in different states and during most months of the year, what favors the appearance of different diseases of economic importance, such as those caused by begomoviruses. Begomoviruses are transmitted very efficiently by the vector Bemisia tabaci. The genome can be either monopartite or bipartite (DNA A and DNA B). So far, only bipartite tomato begomoviruses have been reported in Brazil. To control diseases caused by begomovirus include the development of elite materials through introgression of resistance genes from wild Solanum accessions. An example is the line LAM 144R that contains the dominant gene Ty-1 which confer resistance to different Begomovirus species. This line LAM 144R was here evaluated in order to elucidate the mechanisms of viral resistance conferred by Ty-1. The breadth of this resistance was tested by inoculation with four bipartite Begomovirus-especies found in Brazil: Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV), Tomato rugose mosaic virus (ToRMV), Tomato severe rugose virus (ToSRV), and Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV). As positive control LAM 144S were used plants. Symptoms were scored at 21 and 40 days after inoculation (dai) and viral accumulation was evaluated at 30 (dai) by Southern blot. As a result LAM 144R mild symptoms and low or no viral accumulation was observed with ToCMoV, ToSRV, ToRMV and ToYVSV. The evaluation of virus replication was carried out by agronfiltration experiments of ToCMoV DNA-A in the resistance LAM 144R and susceptible LAM 144S isolines. Quantification of the viral load was performed by quantitative polymerase chain reaction (qPCR) using primers specific for coat protein (CP1). Data were analyzed by nonparametric Kruskal-Wallis test. The viral titer was significantly lower in plants LAM 144R compared to the isoline LAM 144S, showing 2 times lower viral load in the resistant lineage ten days after agroinfiltration. To avaluate the effect of this gene on the long-distance movement of Tomato chlorotic mottel virus , in near isogening lines LAM 144R and LAM 144S, double grafts were performed. Plants LAM 144S (susceptible) were inoculated with ToCMoV. Double grafts were performed using graft segments of LAM 144R and LAM 144S and as overgraft, LAM 144S plants. Samples were collected at different times after grafting and ToCMoV was detected by PCR, Southern blot, and tissue blott showing a restriction in long-distance viral movement when plants LAM 144R containing the Ty-1 gene was used as graft. The results of this study demonstrate that LAM 144R can be considered promising for the use in breeding programs for the development of new resistent cultivars. The evaluation of virus replication was carried out by agronfiltration of ToCMoV DNA-A in the resistant LAM 144R and susceptible LAM 144S isolines. Quantification of viral load was performed by quantitative polymerase chain reaction (qPCR) using primers specific for the coat protein (CP1). Data was analyzed by nonparametric Kruskal-Wallis test. The viral titer was significantly lower in plants LAM 144R compared to the LAM 144S, showing 2 times lower viral load in the resistant line at tenth day after agroinfiltration. To evaluate the effect of this gene on the long-distance movement of Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV) in the near isogenig lines LAM 144R and LAM 144S, double grafts were performed. Plants LAM 144S (susceptible) were inoculated with ToCMoV. Double grafts were performed using as grafts LAM 144R or LAM 144S segments and as overgrafts, LAM 144S plants. Samples were collected at different times ToCMoV was detected by PCR and Southern blot showing a restriction in long-distance viral movement when plants LAM 144R containing the Ty-1 gene was used as grafts. The results of this study demonstrate that LAM 144-R can be considered promising for the use in breeding programs for the development of new resistent cultivars to different Begomovirus species.

A cultura da maçã tem se tornado uma das principais bases da economia dos estados de Santa Catarina e Rio Grande do Sul, sendo o primeiro o maior produtor da fruta no Brasil. A ampliação da demanda nas últimas décadas tem como principal motivo o aumento da exportação. Para isso, é necessário manter a qualidade da fruta desde o plantio até a chegada no mercado consumidor. As doenças pós-colheita são responsáveis por perdas significativas na produção, principalmente as causadas pelos fungos Alternaria sp., Botrytis sp. e Penicillium sp.. Com a finalidade de combater infecções, fungicidas químicos são muito utilizados, mas os riscos de contaminação humana, ambiental e a seleção de linhagens resistentes de fitopatógenos têm levado ao desenvolvimento e emprego de novas alternativas. Entre elas, o controle biológico tem merecido destaque devido à descoberta de vários micro-organismos capazes de inibir o crescimento de fungos fitopatogênicos, entre os quais, algumas bactérias do gênero Bacillus. A produção de metabólitos com atividade antifúngica e a capacidade de resistência a vários tipos de estresses, são características que fazem deste tipo de micro-organismo um promissor agente de controle biológico. Com base no que foi exposto, o presente estudo teve como objetivo principal fazer uma avaliação do potencial antagonista de isolados de Bacillus spp., obtidos de amostras de solo, contra fungos causadores de podridão no período pós-colheita da maçã. Os fungos foram isolados de maçãs recém-colhidas. Com a finalidade de selecionar isolados com melhor atividade antagonista, realizaram-se testes de antagonismo in vitro, com destaque para dois isolados de Bacillus F62 e FR2B2, que inibiram o crescimento micelial dos três fungos avaliados Alternaria sp., Botrytis sp. e Penicillium sp.. Também foi avaliada a estabilidade térmica dos metabólitos produzidos por estes isolados, no qual somente o(s) metabólito(s) do isolado F62 manteram a sua atividade, inibindo o crescimento micelial dos três fungos. A avaliação do antagonismo in vivo demonstrou que somente o caldo de cultura foi capaz de inibir o desenvolvimento de lesões, além de confirmar que o armazenamento das frutas a 0°C retarda o crescimento fúngico. A análise das proteínas por SDS-PAGE revelou a presença de proteínas somente no caldo de cultura não autoclavado, indicando que a inibição do desenvolvimento dos fungos pode ter ocorrido por moléculas protéicas e não protéicas, visto que os dois tipos de caldo foram eficientes na inibição dos fungos alvo. / The apple crop has become one of the main basis of the economy of the states of Santa Catarina and Rio Grande do Sul, the first being the largest producer of fruit in Brazil. Increased demand in recent decades is the main reason of the increase in exports. Therefore, it is necessary to maintain the quality of fruit from planting to arriving to the consumer. The post-harvest diseases are responsible for significant losses in production, mainly caused by the fungus Alternaria sp., Botrytis sp. and Penicillium sp.. In order to fight infections, fungicides are widely used, but the risks for of humans and environment and selection of resistant strains of pathogens have led to the development and use of new alternatives. Among them, biological control has been highlighted by the discovery of several microorganisms capable of inhibiting the growth of pathogenic fungi, including some bacteria of the genus Bacillus. The production of metabolites with antifungal activity and resistance to various types of stresses are features that make this type of micro-organism a promising biological control agent. Based on the foregoing, the present study aimed to make an assessment of the antagonist potential of 60 isolates of Bacillus spp., obtained from samples of soil of Rio Grande do Sul and Santa Catarina, against fungi that cause rot in the post-harvest apple. The fungi were isolated from freshly harvested apples. In order to select strains with improved antagonistic activity, tests were antagonistic in vitro, with emphasis on two strains of Bacillus - FR2B2 and F62, which inhibited the mycelial growth of three fungi evaluated Alternaria sp., Botrytis sp. and Penicillium sp.. The thermal stability of the metabolites produced by these isolates was also analyzed. Evaluation of antagonism in vivo showed that only the culture medium was able to inhibit the development of lesions, and confirm that the storage of fruit at 0° C retards fungal growth. The analysis of proteins by SDS-PAGE revealed the presence of proteins only in the non-autoclaved culture medium, indicating that the inhibition of fungi may be due to protein and non-protein molecules, since the two types of broth were effective in inhibiting target fungi.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-13T14:38:18Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 977977 bytes, checksum: 5bc34ca996c2d5f549156130af1ded39 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-13T14:38:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 977977 bytes, checksum: 5bc34ca996c2d5f549156130af1ded39 (MD5) Previous issue date: 2013-10-10 / Spiroplasma citri Saglio et. al é o agente causal de Citrus Stubborn Disease - CSD, doença observada primeiramente em pomares cítricos na Califórnia, EUA, em 1915. A doença tem provocado reduções significativas de produtividade em muitos países produtores de citros e, não ocorrendo no Brasil, representa um risco potencial à citricultura nacional, devido à ampla gama de hospedeiros e à eficiência da transmissão pelas cigarrinhas vetoras. São vetores de S. citri: Circulifer tenellus, Circulifer haematoceps e Scaphytopius nitridus. Os principais hospedeiros de expressão econômica são espécies cítricas, como toranja, limão siciliano, tangerina, laranja doce, laranja azeda, pomelo, lima-da-pérsia, C. limonia, C. madurensis, limoeiro rugoso, satsumas e tangelos, Fortunella spp. e porta-enxertos híbridos, como citranges. Muitas outras plantas nativas ou cultivadas são consideradas hospedeiras na região sudoeste dos Estados Unidos, e provavelmente há muitos outros hospedeiros deste organismo. A ocorrência de S. citri já foi relatada em países do continente europeu, na Ásia, África, América do Norte e Oceania. No estado da Califórnia, EUA, estima-se que de 5 a 10% das árvores estejam infectadas pela bactéria. Devido à grande importância que o setor citrícola tem para a economia brasileira, e considerando ainda os impactos econômicos que a introdução desta praga pode acarretar, S. citri está listada como praga quarentenária ausente para o Brasil e foi escolhida como objeto de elaboração de um plano de contingência, visando a execução de ações de contenção, supressão e erradicação. / Spiroplasma citri is the causal agent of Citrus Stubborn Disease-CSD, first observed in citrus orchards in California, USA, in 1915. The disease has caused significant reductions in productivity in many citrus producing countries and represents a potential risk to Brazilian citrus orchards, due to the wide range of hosts and transmission efficiency by leafhoppers. The vectors of S. citri are: Circulifer tenellus, Circulifer haematoceps (synonym of Neoaliturus haematoceps) and Scaphytopius nitridus. The main economic expression hosts are citrus species, such as grapefruit, lemon, tangerine, sweet orange, sour orange, pomelo, Citrus limettioides, C. limonia, C. madurensis, rough lemons, satsumas and tangelos, Fortunella spp. and hybrid rootstocks as citranges. Many other native or cultivated plants are considered hostesses in the southwestern region of the United States, and probably many other hosts of this organism. The occurrence of S. citri has already been reported in countries of Europe, Asia, Africa, North America and Oceania. In the State of California, USA, it is estimated that 5 to 10% of the trees are infected by the bacteria. Because of the great importance that the citrus fruit sector represents for Brazilian economy, and also considering the economic impacts that the introduction of this pest may cause, S. citri is listed as a quarantine pest and was chosen in order to develop a contingency plan. / Não foi encontrado a URL do currículo lattes do autor e nem documento de identificação.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-10-02T14:34:32Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 406117 bytes, checksum: 08528272553326a585dffb346bc942e6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-02T14:34:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 406117 bytes, checksum: 08528272553326a585dffb346bc942e6 (MD5) Previous issue date: 2016-07-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A redução dos prejuízos causados por insetos-praga é fundamental para o aumento da produtividade agrícola e florestal. O controle biológico de pragas emprega inimigos naturais para a redução de populações de pragas. Parasitoides são inimigos naturais que se desenvolvem em hospedeiros, levando-os à morte. Hospedeiros alternativos são usados para criação massal de parasitoides em laboratório e a escolha do hospedeiro adequado é essencial para aumentar a eficiência dos parasitoides em programas de controle biológico. A vespa Palmistichus elaeisis Delvare & LaSalle, 1993 (Hymenoptera: Eulophidae) parasita espécies de importância agrícola e florestal. Neste trabalho, aspectos da biologia reprodutiva desse parasitoide foram avaliados com os hospedeiros Diaphania hyalinata (Linnaeus, 1767) (Lepidoptera: Crambidae) e Tenebrio molitor Linnaeus, 1758 (Coleoptera: Tenebrionidae). No primeiro capítulo, o parasitismo, a emergência e parâmetros reprodutivos de P. elaeisis foram comparados entre hospedeiros. Ambos hospedeiros foram parasitados e promoveram a emergência do parasitoide. Indivíduos de P. elaeisis, emergidos de T. molitor, foram maiores que aqueles de D. hyalinata, com ciclo biológico menor. O tamanho da prole, a razão sexual e a longevidade dos adultos do parasitoide foram semelhantes entre hospedeiros. No segundo capítulo, a estrutura do aparelho reprodutor feminino e o desenvolvimento de ovos de P. elaeisis criado nos diferentes hospedeiros foram avaliados. A anatomia do aparelho reprodutor desse parasitoide foi semelhante em indivíduos criados em ambos os hospedeiros. O desenvolvimento dos ovos do parasitoide foi mais rápido para fêmeas emergidas de T. molitor, completamente formados 24 horas após a emergência. Este trabalho contribui para aumentar o conhecimento da reprodução de P. elaeisis em hospedeiros alternativos para a criação massal e fornece informações sobre o desenvolvimento dos ovos, que auxiliam na produção e liberação desse parasitoide em programas de controle biológico. / The reduction of losses caused by insect pests is essential for increasing agricultural and forest productivity. Biological pest control uses natural enemies to reduce pest populations. Parasitoids are natural enemies that develop in hosts, causing them to death. Alternative hosts are used for mass rearing of parasitoids in the laboratory and the choice of suitable host is essential to increase the efficiency of parasitoids in biological control programs. The wasp Palmistichus elaeisis Delvare & LaSalle, 1993 (Hymenoptera: Eulophidae) parasites species of agricultural and forestry importance. In this work, aspects of reproductive biology of this parasitoid were evaluated with the hosts Diaphania hyalinata (Linnaeus, 1767) (Lepidoptera: Crambidae) and Tenebrio molitor Linnaeus, 1758 (Coleoptera: Tenebrionidae). In the first chapter, the parasitism, emergence and reproductive parameters of P. elaeisis were compared between hosts. Both hosts were parasitized and promoted the emergence of the parasitoid. Individuals of P. elaeisis, emerged from T. molitor, were higher than those of D. hyalinata with lower life cycle. The size of the offspring, sex ratio and longevity of parasitoid adults were similar between hosts. In the second chapter, the ultrastructure of the female reproductive system and the development of P. elaeisis eggs reared in different hosts were evaluated. The anatomy of the reproductive system of this parasitoid was similar in adults raised in both hosts. The development of the parasitoid eggs was faster for females emerged from T. molitor, completely formed 24 hours after emergence. This work contributes to increase knowledge of P. elaeisis reproduction in alternative hosts for mass rearing and provides information on the eggs development, which help in production and release of this parasitoid in biological control programs.

This work was performed to test the effect of aqueous extract of Cabralea canjerana subsp. polytricha (Meliaceae) in the control of Brevycorine brassicae (Hemiptera: Aphididae) and Ascia monuste orseis (Lepidoptera: Pieridae). Extract of leaves, fruits and seeds of 3, 5 and 10% were obtained through infusion of dry and triturated material in distilled water filtered after 24 hours. The effect of the extracts was tested in the survival of B. brassicae and the viability, larval and pupal weight and repellent/antifeedant activity of A. monuste orseis. Extract of 3 and 5% did not demonstrated insecticide action on B. brassicae. However, extract of 10% of concentration was able to control this insect in laboratory conditions. The larvae of A. monuste orseis demonstrated low viability when treated with leaves immersed in the extracts, dying before completing four days of age, on average. The evaluation of the repellent/antifeedant effect of the extract indicates that, in tests with choice, the individuals tend to avoid leaves treated with seeds extracts. Differences in consumed area were only demonstrated in the tests using extract of 10%. However, cabbage leaves immersed in fruits and seeds extracts presented a lower consumed area. Tests without choice indicate that when extract of 5 and 10% were used, cabbage leaves consumption was reduced. / Este trabalho teve como objetivo testar o efeito de extratos aquosos de Cabralea canjerana subsp. polytricha (Meliaceae) no controle de Brevicoryne brassicae (Hemiptera: Aphididae) e Ascia monuste orseis (Lepidoptera: Pieridae). Extratos de folhas, frutos e sementes a 3, 5 e 10% foram obtidos por infusão de material seco triturado em água destilada, filtrados após 24h. O efeito dos extratos foi testado na sobrevivência de B. brassicae e viabilidade, peso larval e pupal e atividade repelente/deterrente em A. monuste orseis. Extratos a 3 e 5% não demonstraram ação inseticida sobre B. brassicae. Todavia, extratos a 10% de concentração realizaram controle deste inseto em condições de laboratório. As larvas de A. monuste orseis demonstraram baixa viabilidade, quando alimentadas com porções foliares tratadas, não ultrapassando os quatro dias de idade, em média. A avaliação do efeito repelente/deterrente dos extratos indicou que, em testes com chance de escolha, os indivíduos tenderam a evitar folhas tratadas com extratos de sementes. Diferenças na área consumida só foram demonstradas em testes com extratos a 10%. Todavia, folhas de couve imersas em extratos de frutos e sementes apresentaram uma menor área consumida. Testes sem chance de escolha indicaram que quando extratos a 5 e 10% foram usados, o consumo das folhas foi reduzido. / Mestre em Ecologia e Conservação de Recursos Naturais

Submitted by Gustavo Caixeta (gucaixeta@gmail.com) on 2017-02-13T17:44:52Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 965210 bytes, checksum: 3965d630ff1a50b64dd6d29bfc1e6b78 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-13T17:44:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 965210 bytes, checksum: 3965d630ff1a50b64dd6d29bfc1e6b78 (MD5) Previous issue date: 2015-03-31 / O Brasil é o maior produtor mundial de frutos de mamão e terceiro maior exportador, sendo que apenas 2% da produção é destinada ao mercado exterior. A produção de frutas no Ceará se apresenta como importante alternativa de desenvolvimento e tem elevada perspectiva de crescimento. Neste sentido, o setor produtivo cearense sinaliza e demonstra interesse no cultivo de variedades direcionadas ao mercado externo, em especial o japonês. Para isso, faz­-se necessário conhecer o status fitossanitário da cultura do mamoeiro (Carica papaya L.) no estado do Ceará, através da identificação das pragas associadas à commodity. Neste trabalho, foi realizado um levantamento bibliográfico dos organismos associados à cultura do mamoeiro no estado do Ceará. As 108 espécies levantadas foram categorizadas quanto ao seu status num potencial mercado de destino (Japão) e ao seu potencial de dispersão através do trânsito internacional de frutos para consumo. 12 espécies para as quais foram encontrados registros de presença no Ceará, não foram encontrados registros no Japão e que foram consideradas como potencialmente associadas a frutos maduros foram consideradas como de potencial importância quarentenária: Anastrepha obliqua (Macquart), Anastrepha fraterculus (Wiedemann), Ceratitis capitata (Wiedemann), Enterobacter cloacae (Jordan), Ovulariopsis papayae Van der Byl, Colletotrichum magna Jenkins & Winstead, Aonidiella aurantii (Coquillett), Aonidiella orientalis (Newstead), Nipaecoccus nipae (Maskell), Phytophthora tropicalis Aragaki & Uchida, Papaya lethal yellowing vírus (PLYV), Papaya sticky disease vírus (PSDV). Para estas espécies, foram elaboradas fichas contendo informações necessárias para subsidiar as autoridades competentes no estabelecimento de medidas fitossanitárias a serem atendidas pelos produtores cearenses candidatos a exportar para o Japão. / Brazil is the main papaya growing country worldwide and occupies the third place in fresh papaya fruits exports. Only 2% of total yield is exported. In Ceará, the production of fruits is a promising actvity with a positive perspective of growth in the near future. Looking for new markets, growers from Ceará target to export fresh papaya fruits to countries such as Japan. To achive this goal, it is necessary to have a thorough knowledge of the culture’s sanitary status. The present work brings a bibliographic survey of pests associated with Carica papaya L. in the state of Ceará. 108 species were surveyed and categorized for their status in Japan and likelihood of entry in Japan in infested fruits. 12 species were detected as potentially important from the phytosanitary standpoint as they occur in Ceará, are not known to occur in Japan and may follow fresh fruits. They are: Anastrepha obliqua (Macquart),Anastrepha fraterculus (Wiedemann), Ceratitis capitata (Wiedemann), Enterobacter cloacae (Jordan), Ovulariopsis papayae Van der Byl, Colletotrichum magna Jenkins & Winstead, Aonidiella aurantii (Coquillett), Aonidiella orientalis (Newstead), Nipaecoccus nipae (Maskell), Phytophthora tropicalis Aragaki & Uchida, Papaya lethal yellowing virus (PLYV), Papaya sticky disease virus (PSDV). Pest fact sheets were prepared for these species so as to provide subsides for competent authorities in the establishment of sanitary measures to be followed by growers when aiming to export fresh papaya fruits to Japan

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-02-14T16:40:14Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 497659 bytes, checksum: 2c99a8ab10eb6c5a75f20d8df5487dd7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-14T16:40:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 497659 bytes, checksum: 2c99a8ab10eb6c5a75f20d8df5487dd7 (MD5) Previous issue date: 2016-03-31 / Entender o movimento das pragas entre fronteiras, identificar os padrões de dispersão e tendências neste movimento são desafios em serviços de inteligência quarentenária. As espécies que foram introduzidas na América do Sul e Trindade e Tobago, em muitos casos, causam grande dano à agricultura e à economia local. O Brasil, por sua vez, sendo o país com maior produção agrícola nesta região, enfrenta grandes desafios para impedir a entrada de novas pragas e controlar aquelas já introduzidas em seu território. Com o intuito de identificar o padrão atual de distribuição geográfica e incentivar o uso de novas tecnologias na área de pesquisa em defesa vegetal, o presente trabalho trata da identificação de ameaças fitossanitárias utilizando ferramentas computacionais de mineração de dados. Essas ferramentas permitiram identificar dezessete espécies de pragas quarentenárias ausentes para o Brasil com presença confirmada para os países da América do Sul e Trindade e Tobago, as quais foram submetidas a uma avaliação de risco de pragas. Os hemípteros Perkinsiella saccharicida e Pseudococcus calceolariae, os fungos Boeremia foveata, Botrytis fabae, Phoma andigena, Tilletia laevis, Urocystis agropyri, Phytophthora erythroseptica e o coleóptero Prostephanus truncatus são espécies de pragas quarentenárias ausentes para o Brasil com alta probabilidade de entrada a partir da América do Sul e com alto potencial de risco para o país. / Understanding pest movement across international borders, identifying standards of their dispersal and trends are challenges to quarantine intelligence services. Often, exotic species that have become introduced in South America and Trinidad and Tobago cause severe damages to local agriculture and economy. In turn, Brazil, given its regional prominence in agriculture faces challenges to prevent the entry of new pests as well as to control the ones that have already become introduced. Aiming to identify patterns of geographic distribution and to encourage the use of new technological tools in quarantine intelligence, this work deals with the use of data mining and big data analysis tools. 17 pest species of quarantine species have been identified as highly likely to be introduced through the terrestrial borders of Brazil and were submitted to a pest assessment analysis. The hemipterans Perkinsiella saccharicida and Pseudococcus calceolariae, fungi Boeremia foveata, Botrytis fabae, Phoma andigena, Tilletia laevis, Urocystis agropyri, Phytophthora erythrosepticaand the beetle Prostephanus truncatus were qualified as the most risky species to Brazil.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-02-17T16:48:12Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 402690 bytes, checksum: fc02e830bf569c6d8fc27807afce9259 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-17T16:48:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 402690 bytes, checksum: fc02e830bf569c6d8fc27807afce9259 (MD5) Previous issue date: 2016-03-28 / Helm do Brasil Mercantil Ltda / A mosca branca Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae) é uma importante praga que ataca mais de 500 espécies de plantas. As principais culturas atacadas pertencem as famílias Malvaceae (algodão), Fabaceae (soja e feijão), Solanaceae (batata e tomate), Brassicaceae (brócolis, canola, couve-flor e couve), Cucurbitaceae (abóbora, melancia e melão) e Asteraceae (alface e crisântemo). O controle químico é o principal método usado no controle de B. tabaci. Apesar da grande quantidade de inseticidas registrados para o controle e do intensivo uso destes produtos tem-se verificado grandes surtos populacionais nos cultivos. Este fato indica que possivelmente os inseticidas usados no controle de mosca branca não têm sido eficientes. Assim este trabalho teve como objetivo, selecionar inseticidas eficientes no controle de adultos de B. tabaci. Para tanto foram estudados 17 inseticidas: acefato, acetamiprido, alfa-cipermetrina, beta-ciflutrina, beta-cipermetrina, bifentrina, cipermetrina, clorfenapir, cartape, clorpirifós, deltametrina, esfenvalerato, fenpropatrina, gama-cialotrina, imidacloprido, lambda-cialotrina e tiametoxam. Destes produtos apenas o cartape, clorpirifós, bifentrina e clorfenapir foram eficientes no controle da mosca branca. Estes inseticidas tiveram ação rápida de controle sobre a mosca branca (<24h) e eles causaram 91,74; 85,27; 81,45 e 76,79% de mortalidade à praga, respectivamente. O cartape, clorpirifós, bifentrina e clorfenapir possuem baixo efeito residual de controle sobre a mosca branca (< 1 semana) e não são seletivos ao predador Orius tristicolor (Hemiptera: Anthocoridae). / The whitefly Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae) is an important pest that attacks more than 500 species of plants. The main crops attacked belong to the Malvaceae family (cotton), Fabaceae (soybean and beans), Solanaceae (potatoes and tomatoes), Brassicaceae (broccoli, canola, cauliflower and cabbage), Cucurbitaceae (pumpkin, watermelon and melon) and Asteraceae (lettuce and chrysanthemum). Chemical control is the main method used to control B. tabaci. Despite the large amount of insecticides registered for the control and the intensive use of these products there have been large population outbreaks in crops. This indicates that possibly the insecticides used in whitefly control have not been effective. So this study aimed to select efficient insecticides to control adults of B. tabaci. Therefore, we studied 17 insecticides: acephate, acetamiprid, alpha-cypermethrin, beta-cyfluthrin, beta-cypermethrin, bifenthrin, cypermethrin, esfenvalerate, chlorfenapyr, cartap, fenpropathrin, chlorpyrifos, deltamethrin, gamma-cyhalothrin, imidacloprid, lambda- cyhalothrin and thiamethoxam. These products only cartap, chlorpyrifos, bifenthrin and chlorfenapyr were efficient in controlling whitefly. These insecticides have fast acting control of whiteflies (<24 hours) and they caused 91.74; 85.27; 81.45 and 76.79% mortality to the pest, respectively. The cartap, chlorpyrifos, bifenthrin and chlorfenapyr have low residual control of whiteflies (<1 week) and they are not selective to Orius tristicolor (Hemiptera: Anthocoridae).