Apesar do sucesso do transplante na clínica, os importantes efeitos adversos dos imunossupressores, usados para prevenir e tratar a rejeição, apontam para a necessidade de novas terapias imunorreguladoras. A via oral tem sido efetiva na indução de imunorregulação, em diversos modelos experimentais, principalmente de doenças autoimunes. A Hsp60/65 é uma molécula com grande potencial imunoterapêutico, por sua capacidade de induzir respostas imunes pró-inflamatória e imunorreguladora. Testamos se a terapia oral com o probiótico Lactococcus lactis que expressa a Hsp65, combinada à administração de aloantígenos do doador (AloAg-doador), atua sinergicamente na indução de tolerância ao enxerto de pele semialogeneico murino, ou no aumento de sua sobrevida. Testamos diferentes combinações de terapia oral, assim como a influência da utilização de um anti-inflamatório, inibidor seletivo de COX-2 (celecoxibe). O transplante de pele foi realizado 10 dias após a última administração oral dos probióticos e aloantígenos do doador. Não observamos efeitos benéficos na sobrevida do enxerto no grupo de animais que receberam L.lactis que produz Hsp65, sozinho ou em combinação com AloAg-doador e/ou o anti-inflamatório. Em contraste, a terapia oral combinada com o probiótico L.lactis selvagem e AloAg-doador aumentou significativamente a sobrevida do enxerto (p=0,01), em comparação com o grupo não tratado. Nesse grupo que teve maior sobrevida do aloenxerto (L,lactis selvagem e AloAg-doador), também observamos maior quantidade de epitélio preservado (p=0,02) e maior expressão de TGF-beta (p=0,04), no enxerto, em comparação com o grupo sem tratamento. Não observamos diferenças significativas na expressão, in situ, de FOXP3 e IL-17, que foi baixa em todos os grupos experimentais. Concluímos que a Hsp65 não induziu efeito imunorregulador capaz de prolongar a sobrevida do enxerto. No entanto, a manipulação da microbiota com a terapia combinada com o L.lactis selvagem e a exposição a antígenos do doador, previamente, ao transplante, induz mecanismos imunorreguladores capazes de controlar, mesmo que parcialmente, as respostas inflamatórias dirigidas ao aloenxerto de pele, provavelmente, com a participação de TGF-beta / Despite the success of clinical transplantation, the significant side effects induced by immunosupressants used to prevent and treat rejection, indicate the need for novel immunoregulatory therapies. The oral route has been effective in inducing immunoregulation in several experimental models, mostly in pathological autoimmunity. Heat Shock protein 60/65 (Hsp) displays great immunotherapeutic potential due to its capacity to induce both pro-inflammatory and immunregulatory responses. We tested whether oral therapy with the probiotic Lactococcus lactis that expresses Hsp65, in combination with donor alloantigens (Donor-Allo-Ag), acted synergically, inducing immunotolerance or increasing graft survival, in a murine model of semiallogeneic skin transplantation. We tested different oral therapy combinations, as well as the association with a COX-2 selective nonsteroidal anti-inflammatory drug (celecoxib). Skin transplantation was performed 10 days after the last oral administration of probiotics and Donor-Allo-Ag. We observed no beneficial effect on graft survival in the group that received L.lactis that produce Hsp65, alone or in combination with Donor-Allo-Ag/and/or the anti-inflammatory drug. In contrast, combined oral therapy with wild type L.lactis and Donor-Allo-Ag significantly prolonged graft survival (p=0.01), in comparison to non-treated animals. In this prolonged-survival group (L.lactis and Donor-Allo-Ag), we also found higher extension of preserved epithelium (p=0.02) and higher expression of TGF-beta (p=0.04), within the graft, in comparison to non-treated animals. We found no significant differences in the intragraft expression of FOXP3 and IL-17, which was essentially absent or very low. We conclude that Hsp65 did not induce immunoregulatory effects capable of prolonging graft survival. However, the microbiota manipulation with the combined oral therapy with wild type L.lactis and Donor-Allo-Ag, prior to transplantation, induce immunoregulatory mechanisms capable of partially controlling the inflammatory responses to the graft, most likely involving the participation of TGF-beta

A 24-hour fermentation of the optimized synbiotic composed of B. longum and EPR was performed to give a cell-free fermentation broth (S24). S24 was co-cultured with two colon cancer cell lines (Caco-2 and SW620) and normal colon cells (FHC). S24 significantly inhibited cell proliferation for both colon cancer cells but promoted FHC cell growth by 10-25% as shown by MTT and BrdU arrays. Primary DNA damage analysis by alkaline comet assay showed S24 caused DNA damage to a comparable extent as the positive control of 10 mM H2O2 (treated for 1 hour) for both cancer cells. Dynamic analysis on DNA damage-associated DNA repair showed the two colon cancer cells had different response pattern to S24. Flow cytometric analysis showed that both Caco-2 and SW620 when treated with S24 (IC 50=3.66 mM of acetate) were arrested initially at G2/M and subsequently at S phase accompanied with large sub-G1 peaks. Dual staining with PI/AnnexinV further proved the appearance of apoptosis. Live cell imaging analysis on Caco-2 cells treated with S24 showed the following events: mitochondria were rapidly destroyed within the first two-hour treatment, the cells bubbled and the nucleus condensed after the mitochondrial had shrunken, followed by apoptosis. / Despite active research on synbiotic on anti-carcinogenesis of colon cancer by synbiotics, the underlying mechanism still remains unclear. This study investigated a novel synbiotic composed of non-digestible carbohydrates (NDCs) extracted from mushroom sclerotia as prebiotics and Bifidobacteria as probiotics. Preliminary results on incubation of two probiotics ( Bifidobacterium longum and Lactobacillus brevis) and one pathogenic bacterium (Clostridium celatum) separately with 3 NDCs extracted from mushroom sclerotia [Poria cocos (PC), Polyporus rhinocerus (PR) and Pleurotus tuber-regium (PT)] indicated that the growth of B. longum and L. brevis was stimulated more preferentially than C. celatum after 72-hour fermentation. The short-chain fatty acid (SCFA) profile was dominated by acetate (> 98% of total SCFAs) with very little butyrate (< 2.0% of total SCFAs) and the organic matter disappearance (OMD) during fermentation was consistent with the bacterial growth. Among the synbiotic combinations, NDC from PR and B. longum gave the largest amount of acetate (2.47+/-0.232 mmol/g of organic matter disappearance). / Results obtained from human pathway finder RT2 Profiler(TM) PCR Array indicated that S24 could modulate the proliferation of colon cancer cells mainly by various pathways such as cell cycle and DNA damage repair, apoptosis and cell senescence, etc. In SW620 cells, PCR Array of Human Cell Cycle further revealed that the modulated genes mainly belonged to the gene cluster of S phase and DNA replication as well as G2 and G2/M transition. While for Caco-2 cells, the cell-cycle modulated genes mainly belonged to the cluster of G2 and G2/M transition. Immuno-blotting on the pivotal upstream regulators showed that phosphorylation of ATM at Serine 1981 was significantly increased in both cancer cells. Site-specific phosphorylation of pRB was decreased and phosphorylation of Chk1 was increased in both cancer cells while Chk2 were increased in SW620 cells. Cdc25A was phosphorylated at serine17 in both cancer cells. It can be proposed that the blockage of DNA synthesis or DNA damage was due to the down-regulation of some pivotal DNA replication related proteins such as RPA3, PCNA and MCMs, detected by ATM-Chk1/Chk2-Cdc25A pathway. This would cause the prolonged staying of cells at the G1/S checkpoint which further moved on to S phase arrest for SW620 cells. Moreover the sharply up-regulated p21, an important inhibitor of Cdk2 would further hinder the cells passing the G1/S checkpoint in SW620 cells. / The tumor suppressor p53 was detected phosphorylated at various sites in SW620 but not in Caco-2 cells. In SW620 cells, G2/M arrest was caused by the inhibition of CDK1/CDC2 due to increased expression of GADD45A and p21 and phosphorylation of Cdc25A, while for Caco-2, the G2/M arrest was caused by degradation of Cdc25A due to the absence of p53-activated GADD45A and p21 expression as shown in the pathway finder results. Some apoptosis-related proteins of Bax, Apaf-1 and PARP were modulated as shown by immuno-blotting in both colon cancer cells. (Abstract shortened by UMI.) / Gao, Shane. / Adviser: Peter Chi-Keung Cheung. / Source: Dissertation Abstracts International, Volume: 72-11, Section: B, page: . / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2009. / Includes bibliographical references (leaves 55-94). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Electronic reproduction. [Ann Arbor, MI] : ProQuest Information and Learning, [201-] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Abstract also in Chinese.

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Luis Carlos Spolidorio / Banca: Márcia Antoniazi Michelin / Resumo: No Brasil, o câncer é a segunda principal causa de morte, sendo o câncer de mama o segundo mais frequente entre as mulheres. Um tumor sólido é composto pelo tecido neoplásico, células estromais e o sistema imune. Todas as células envolvidas produzem mediadores de forma local e sistêmica que influenciam no desenvolvimento do tumor. Os macrófagos ativados se polarizam e são capazes de ativar uma resposta imune celular, induzindo as células T para um padrão Th1, eficaz na eliminação de tumores; ou ativar uma resposta imune humoral, induzindo Th2, ineficiente contra o câncer. Na teoria, uma imunoterapia eficiente poderia alterar a ativação das células envolvidas e gerar uma inflamação voltada para um padrão de resposta celular, que gerasse a destruição das células cancerígenas. Dentre as possíveis imunoterapias, encontra-se o consumo de alimentos funcionais. A soja vem sendo estudada como um dos alimentos capazes de prevenir o câncer de mama a longo prazo. Além disso, as bactérias probióticas, parecem ser capazes de prevenir o câncer. Neste trabalho, procuramos observar o potencial do produto de soja fermentado por Enterococcus faecium CRL 183 e Lactobacillus helveticus ssp jugurti 416 enquanto alimento funcional capaz de modular o sistema imune e exercer influência no desenvolvimento de câncer de mama experimental murino. Os animais consumiram diariamente produto não fermentado de soja (PNFS), produto fermentado de soja acrescido (PFSI) ou não (PFS) de isoflavonas por 40 dias, sendo o inóculo tumoral realizado no décimo dia. PNFS, PFS e PFSI elevam a produção de TNF-α, e PFS e PFSI eleva a atividade da enzima arginase de macrófagos peritoneais. PFS gera uma redução na produção de IFN-γ e PNFS, PFS e PFSI reduzem os níveis de IL-5 produzidos por linfócitos esplênicos. O volume tumoral é menor em PFS e PFSI, e o número de células apoptóticas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In Brazil, cancer is the second main cause of death, and breast cancer is the second more frequent neoplasia in women. A solid tumor contains neoplastic tissue, stromal cells and immune cells. All cells present in this microenvironment may produce mediators locally and systemically which can influence tumor development. Activated macrophages polarize and are capable of activating a cellular response, inducing T cells into a Th1 cytokine pattern, which is effective against tumor; or activate a humoral response, leading T cells into Th2, unable to fight cancer properly. In theory, a effective immunotherapy could activate involved cells and trigger a acute inflammation, with a cellular pattern, capable of destroying cancer cells. One of the possible therapies is the use of functional food. Soy has been studied as one of the food capable of preventing breast cancer in a long term diet. Besides, probiotic bacteria seems to be able to prevent cancer as well. In the present work, we intended to observe the potential of a soy product fermented using Enterococcus faecium CRL 183 and Lactobacillus helveticus ssp jugurti 416 as a functional food capable of modulating immune system and influencing on experimental murine mamary tumor growth. Animals were fed daily non-fermented soy product (PNFS), fermented sou product (PFS) or fermented soy product plus isoflavones (PFSI) during 40 days, and tumor implant was performed on 10th day. PNFS, PFS and PFSI showed a higher production of TNF-α, while PFS and PFSI also showed a higher arginase activity by peritoneal macrophages. PFS reduced IFN-γ production, while PNFS, PFS and PFSI reduced IL-5 levels on splenic lymphocytes culture. Final tumor volume is reduced in PFS and PFSI, while number of apoptotic cells is elevated in these two groups. It appears that the product may influence on tumor development in a good way, but it is not clear whether immune system is important. / Mestre

Alterações favoráveis na composição da microbiota intestinal podem ser observadas com o consumo regular de alimentos funcionais contendo probióticos. Os probióticos são micro-organismos vivos que conferem benefícios à saúde do hospedeiro, quando administrados em quantidades adequadas. Tradicionalmente, são incorporados aos leites fermentados e a outros produtos lácteos fermentados. Atualmente, a idéia de redução dos componentes lácteos como veículos para agentes probióticos tem sido promovida, em razão da alta proporção de indivíduos que apresentam intolerância à lactose, além da busca por alternativas vegetarianas. Nesse contexto, a soja aparece como um substituto ideal para o consumo, promovendo a saúde através de características nutricionais intrínsecas. O presente trabalho visou desenvolver um produto semelhante ao queijo petit-suisse, mas à base de soja, com polpa de fruta, e adicionado de micro-organismos probióticos, bem como avaliar a aceitabilidade do produto sob o ponto de vista sensorial e suas características físico-químicas, microbiológicas e de textura instrumental durante o seu armazenamento a 4±1 °C por até 28 dias. Três formulações foram produzidas (com três repetições cada): F1- formulação de queijo petit-suisse probiótico elaborado com massa-base de queijo quark, como controle (produto lácteo); F2 - formulação com \"queijo\" de soja e com creme de leite (produto misto à base de soja e de leite); F3 - formulação com \"queijo\" de soja e com creme de soja (produto de soja). Em todas as formulações, foi empregada a cultura probiótica ABT-4, constituída dos micro-organismos comprovadamente probióticos Bifidobacterium animalis subsp. lactis Bb-12, Lactobacillus acidophilus La-5 e da cultura starter Streptococcus thermophilus. Os produtos foram armazenados a 4±1 °C e avaliados sensorialmente (teste de aceitabilidade, utilizando escala hedônica estruturada), após 7, 14 e 21 dias, por 50 consumidores em cada período. Adicionalmente, foram analisados semanalmente durante o seu armazenamento por até 28 dias quanto à viabilidade dos probióticos e da cultura starter e quanto ao seu pH e o seu perfil instrumental de textura (teste de dupla compressão de amostras, em analisador de textura TA-XT2). Paralelamente, foi realizado um monitoramento microbiológico das amostras quanto à presença de contaminantes e a partir de amostras mantidas congeladas, foi determinada a composição centesimal dos produtos. A viabilidade de La-5 mostrou-se satisfatória até o 28º dia de armazenamento das formulações F1 e F2, com populações variando de 8,29 a 7,56 log ufc/g e de 8,17 a 6,49 log ufc/g, respectivamente. Entretanto, para F3, as populações de La-5 mostraram-se satisfatórias até o 21º dia (8,18 a 6,84 log ufc/g), não atingindo o mínimo recomendado na última semana. Por outro lado, a viabilidade de Bb-12 manteve-se acima de 8 log ufc/g até o 28º dia de armazenamento de F1, F2 e F3. A cultura starter apresentou populações sempre entre 9,73 e 8,86 log ufc/g. O pH manteve-se estável para todas as formulações, mas foi significativamente menor (p<0,05) para F2, em relação a F1 e F3. Nos parâmetros dureza e gomosidade, F1 apresentou comportamento antagônico em relação ao de F2 e F3. Todos os parâmetros de textura de F1 diferiram significativamente de F2 e F3 (p<0,05). Não houve diferença significativa (p>0,05) na análise sensorial de uma mesma formulação entre os períodos de armazenamento. No entanto, na comparação entre as formulações, foram observados escores médios superiores (p<0,05) para F3 aos 21 dias (6,4), quando comparada a F2 (4,6). Os alimentos à base de soja, F2 e F3, mostraram-se bons veículos para os micro-organismos probióticos, com populações adequadas para caracterizá-los como probióticos, sendo que F3 mostrou uma tendência a um melhor desempenho sensorial após 14 e 21 dias de armazenamento. / Favorable changes in the composition of the intestinal microbiota can be observed with the regular consumption of functional foods containing probiotics. Probiotics are live microorganisms which when administered in adequate amounts confer a health benefit on the host. They are traditionally incorporated into fermented milks and other fermented milk products. Currently, the idea of reducing milk components as vehicles for probiotic agents has been promoted due to the high proportion of people who have lactose intolerance, and the search for vegetarian alternatives. In this context, soy appears as an ideal replacement for consumption, promoting health through intrinsic nutritional characteristics. This work aimed to develop a product similar to petit-suisse cheese, but soy based, with fruit pulp, and with probiotic micro-organisms, as well as evaluating the acceptability of the product from the point of view of its sensory and physico-chemical characteristics, microbiological and instrumental texture profile during storage at 4 ± 1 °C for up to 28 days. Three formulations were produced (in triplicates): F1 - formulation of probiotic petit-suisse cheese prepared with quark cheese, as control (milk product) F2 - formulation with soy \"cheese\" and milk cream (mixed product with soy and milk), F3 - formulation with soy \"cheese\" and soy cream (soy product). The three formulations were produced with the probiotic ABT-4 culture, consisting of the probiotic microorganisms Bifidobacterium animalis subsp. lactis Bb-12, Lactobacillus acidophilus La-5 and the starter culture Streptococcus thermophilus. The products were stored at 4 ± 1 °C and subjected to sensory evaluation (acceptability test, using an hedonic scale), after 7, 14, and 21 days, by 50 consumers in each period. Additionally, the products were monitored weekly during storage for up to 28 days regarding the viability of the probiotics and starter culture and their pH profile and the instrumental texture (double compression of samples test, using a TA-XT2 texture analyzer). Also, samples were monitored for the presence of contaminants, and, the chemical composition of the products was determined from samples kept frozen. The viability of the La-5 was satisfactory until the 28th day of storage for F1 and F2, with populations ranging from 8.29 to 7.56 log cfu/g and from 8.17 to 6.49 log cfu/g respectively. However, for F3, the population of La-5 proved to be satisfactory until the 21st day (8.18 to 6.84 log cfu/g), not reaching the minimum recommended in the last week. On the other hand, Bb-12 viability remained above 8 log cfu/g throughout the 28 days of storage for F1, F2, and F3. The starter culture populations were always between 9.73 and 8.86 log cfu/g. The pH remained stable for all formulations, but was significantly lower (p<0.05) for F2, compared to F1 and F3. As for the texture parameters hardness and gumminess, F1 showed antagonistic behavior in relation to F2 and F3. All texture parameters evaluated differed significantly for F1, F2, and F3 (p<0.05). There was no significant difference (p>0.05) in the sensory scores obtained for the same formulation, when different storage periods were compared. However, when the 3 formulations were compared, higher average scores (p<0.05) were obtained on day 21 for F3 (6.4) than for F2 (4.6). The soy-based foods, F2 and F3, proved to be good vehicles for probiotic microorganisms, with appropriate populations to characterize them as probiotics, and F3 showed a trend towards a better performance in sensory evaluation on days 14 and 21 days of storage.

Além das características tecnológicas das bactérias lácticas para o processamento de alimentos fermentados, novas propriedades são requeridas, como a produção de bacteriocinas. Vários desses compostos protéicos possuem atividade antimicrobiana direcionada à patógenos e apresentam potencial de uso como bioconservadores naturais de alimentos. O objetivo desse trabalho foi avaliar a viabilidade de aplicação de cinco culturas lácticas produtoras de bacteriocinas como bioconservantes em alimentos. Avaliaram-se as propriedades de segurança e probióticas dessas culturas e determinaram-se os parâmetros de produção e purificação parcial das bacteriocinas, bem como os efeitos de fatores limitantes de crescimento (cloreto de sódio e nitrito). Os resultados demonstraram que essas linhagens não possuem atividade de enzimas indicadoras de patogenicidade (termonuclease, -hemolisinas e gelatinases). A tolerância às condições ácidas variou dependendo da linhagem. Lactobacillus plantarum CTC 368 e Enterococcus avium CTC 469 apresentaram maior tolerância a valores de pH 2,0 e 3,0. Lactococcus lactis subsp. cremoris CTC 204 e Enterococcus avium CTC 483 também apresentaram 100% de sobrevivência a pH 3,0 e, mesmo com uma diminuição da tolerância a pH 2,0, a sobrevivência foi cerca de 80%. Com relação à susceptibilidade aos sais de bile, observou-se que a viabilidade variou entre as linhagens em função da concentração e tempo de incubação. Enterococcus avium CTC 469 e Lactococcus lactis subsp. hordinae CTC 484 foram as mais tolerantes e apresentaram sobrevivência de 57% e 58%, respectivamente. As linhagens mostraram excelente sobrevivência tanto a baixos valores de pH, quanto às concentrações de sais biliares indicando potencial probiótico. As características de crescimento e de produção de bacteriocinas foram semelhantes para todas as linhagens e meios avaliados. A viabilidade aumentou durante o período de incubação e a produção de bacteriocinas mostrou uma cinética de metabólito primário. A suplementação do meio MRS com 1,0% de NaCl e 0,1% de NaNO2, não afetou o crescimento de Lc. lactis subsp. cremoris CTC 204, mas promoveu a redução da atividade da bacteriocina de 42,5% e 17,5%, respectivamente. O crescimento de Lactococcus lactis subsp. hordinae CTC 484 foi afetado com a adição de NaCl e NaNO2 ao meio APT, mas ainda reteve 50% da atividade bacteriocigênica. O espectro de atividade das bacteriocinas variou de acordo com a susceptibilidade da linhagem indicadora, a concentração ou atividade da bacteriocina, a viabilidade e/ou presença das células produtoras e os procedimentos de extração das bacteriocinas. Os resultados revelaram que as bacteriocinas de Lactococcus lactis subsp. cremoris CTC 204 e Lactococcus. lactis subsp. hordinae CTC 484 promoveram um efeito bactericida contra Staphylococcus aureus. Concluiu-se que essas duas culturas produtoras de bacteriocinas apresentam propriedades para utilização como bioconservantes em alimentos e que estudos mais aprofundados, relacionados com a purificação da bacteriocina e avaliação de seu uso em alimentos, devem ser realizados. / In addition to the technological characteristics of lactic bacteria for the processing of fermented foods, other properties need to be developed and explored, such as bacteriocin production. Several of these protein-based compounds have antimicrobial activities targeted towards pathogens and have a significant potential for use as natural biopreservatives in processed foods. The objective of this study was to evaluate the viability of using five bacteriocin-producing lactic cultures as biopreservatives in foods. The safety and probiotic properties of these cultures were evaluated, followed by the determination of bacteriocin production and purification parameters and the effect of growth-limiting factors (sodium chloride and nitrite). The results demonstrated that these strains do not show activity of marker enzymes of pathogenicity (thermonuclease, - hemolysins and gelatinases). Tolerance to acidic conditions varied depending on the specific strain. Lactobacillus plantarum CTC 368 and Enterococcus avium CTC 469 exhibited greater tolerance to pH values 2,0 and 3,0. Lactococcus lactis subsp. cremoris CTC 204 and En. avium CTC 483 also presented 100% survival at pH 3,0, and even with reduced tolerance at pH 2,0, the survival rate was 80%. Variation in susceptibility to bile salts was observed between the strains as a function of concentration and incubation time. En. avium CTC 469 and Lactococcus lactis subsp. hordinae CTC 484 were found to be the most tolerant, exhibiting survival rates of 57% and 58%, respectively. The strains demonstrated excellent survival not only at low pH values, but also at high bile salt concentrations, thereby indicating probiotic potential. The growth and bacteriocin-producing characteristics were similar for all the strains and culture media evaluated. Bacterial multiplication increased during the incubation period, while bacteriocin production displayed primary metabolite kinetics. The activity spectrum of the bacteriocins varied with the susceptibility of the indicator strain, the concentration or activity of the bacteriocin, the viability and/or presence of bacteriocinproducing cells and the bacteriocin extraction procedures. The results reveal that the bacteriocins produced by Lc. lactis subsp. cremoris CTC 204 and Lc. lactis subsp. hordinae CTC 484 exerted a bactericidal effect against Staphylococcus aureus. Supplementation of the MRS medium with 1,0% NaCl and 0,1% NaNO2, did not affect the growth of Lc. lactis subsp. cremoris CTC 204, but did reduce by 42,5% and 17,5% the activity of the bacteriocin, respectively. Growth of Lc. lactis subsp. hordinae CTC 484 was affected by the addition of NaCl and NaNO2 to the APT medium, but even so still exerted 50% of its bacteriocinogenic activity. It was concluded that Lc. lactis subsp. cremoris CTC 204 and Lc. lactis subsp. hordinae CTC 484 exhibited adequate properties for use as biopreservatives in foods and that more extensive studies related to the purification of bacteriocins and assessment of their use in foods should be conducted.

Foram conduzidos dois experimentos no confinamento experimental do Departamento de Zootecnia da ESALQ/USP com o objetivo de estudar os efeitos de diferentes aditivos em dietas para bovinos terminados em confinamento. As dietas continham 78,1% de milho moído fino, 12% feno de Tifton-85, 6% melaço de cana, 2,5% mineral, 1,4% uréia e os respectivos aditivos. No experimento 1 foram utilizados 134 tourinhos da raça Nelore com 24 meses de idade e 330 kg de peso corporal médio inicial, alocados em 24 baias por 102 dias. Os tratamentos foram: 1) Controle (sem aditivo), 2) Monensina (30 ppm), 3) Monensina (20 ppm) + Virginiamicina (15 ppm), 4) Monensina (30 ppm) + Virginiamicina (15 ppm), 5) Virginiamicina (17 ppm), 6) Salinomicina (13 ppm) + Virginiamicina (15 ppm). No experimento 2 foram utilizados 93 tourinhos da raça Nelore com 24 meses de idade e 320 kg de peso corporal médio inicial, alocados em 16 baias por 109 dias. Os tratamentos foram: 1) Controle (sem aditivo), 2) Monensina (30 ppm), 3) Levedura (Saccharomyces cerevisiae; 109 UFC/g) 10g/animal/dia, 4) Combinação dos microrganismos probióticos Bifidobacterium bifidum (3,33 x 106 UFC/g), Lactobacillus acidophilus (3,33 x 106 UFC/g), Lactobacillus plantarum (1,66 x 106 UFC/g), Enterococcus faecium (1,66 x 106 UFC/g) e Saccharomyces cerevisiae (3,33 x 105 UFC/g) FLORAFORT® na dosagem de 3g/animal/dia. No experimento 1, a suplementação com monensina sódica exclusiva e em combinação com virginiamicina reduziu (P<0,1) a ingestão de MS (9,89; 9,20; 9,29; 8,98; 9,76; 9,85). O ganho de peso diário dos animais (1,33; 1,33; 1,39; 1,44; 1,45; 1,49) não foi afetado pelos tratamentos (P>0,05). Em comparação com o tratamento controle, a suplementação com Monensina (30 ppm) + Virginiamicina (15 ppm) aumentou a eficiência alimentar dos animais (P<0,05). O uso de aditivos antibióticos foi efetivo (P<0,05) para aumentar os valores de energia líquida de ganho das dietas (1,05; 1,14; 1,17; 1,26; 1,15; 1,16). No experimento 2, a monensina sódica reduziu a ingestão de MS (P<0,1) em comparação com os demais tratamentos (9,35; 8,25; 9,33; 9,20). O ganho de peso diário, a eficiência alimentar e a densidade energética das dietas não foram afetados pela monensina sódica e pelos probióticos testados (P>0,05). / Two trials were conducted at the ESALQ/USP Animal Science Department experimental feedlot to evaluate the effect of different feed additives in feedlot finished cattle. The animals were fed with 78.1% ground corn, 12% Tifton hay, 6% sugarcane molasses, 2.5% mineral, 1.4% urea and the respective additives. The first trial had 134 Nellore bulls with an average of 24 months and 330 Kg of initial body weight, allocated in 24 pens for 102 days. Treatments were: 1) Control (without additive), 2) Monensin (30 ppm), 3) Monensin (20 ppm) + Virginiamycin (15 ppm), 4) Monensin (30 ppm) + Virginiamycin (15 ppm), 5) Virginiamicyn (17 ppm), 6) Salinomicyn (13 ppm) + Virginiamicyn (15 ppm). The second trial had 93 Nellore bulls with an average of 24 months and 320 Kg of initial body weight, allocated in 16 pens for 109 days. Treatments were: 1) Control (without additive), 2) Monensin (30 ppm), 3) Yeast (Saccharomyces cerevisiae) 10g/animal/day 109 UFC/g, 4) Combination of probiotic microorganisms: Bifidobacterium bifidum (3.33 x 106 UFC/g), Lactobacillus acidophilus (3.33 x 106 UFC/g), Lactobacillus plantarum (1.66 x 106 UFC/g), Enterococcus faecium (1.66 x 106 UFC/g) and Saccharomyces cerevisiae (3.33 x 105 UFC/g) FLORAFORT® 3g/animal/day. In the first trial, the results showed that monensin alone or in combination with virginiamycin decreased (P<0.1) dry matter intake (9.89; 9.20; 9.29; 8.98; 9.76; 9.85). The average daily gain(1.33; 1.33; 1.39; 1.44; 1.45; 1.49) was not affected by the treatments (P>0.05). In comparison to the control diet, the monensin (30 ppm) + virginiamycin (15 ppm) supplementation increased feed efficiency (P<0.05). The use of antibiotic additives was effective (P<0.05) to increase the diet energy values (1.05; 1.14; 1.17; 1.26; 1.15; 1.16). In the second trial, monensin decreased dry matter intake (P<0.1) in comparison to the other treatments (9.35; 8.25; 9.33; 9.20). Average daily gain, feed efficiency and diet energy density were not affected by monensin and probiotics (P>0.05).

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2017-08-29T18:10:46Z No. of bitstreams: 1 2017 - Renata Oliveira Santos.pdf: 1382777 bytes, checksum: 331bbbcbeb5b7d3a9f1d49008191a5b8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-29T18:10:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017 - Renata Oliveira Santos.pdf: 1382777 bytes, checksum: 331bbbcbeb5b7d3a9f1d49008191a5b8 (MD5) Previous issue date: 2017-02-14 / CAPES / In the past few years the use of prebiotics in the making of dairy products has been gathering many supports, although the search for low cost raw-material to achieve that it still a big challenge, which highlights the potential to the development in the research for alternatives sources or new processes in order to obtain those ingredients. Besides, the need to reduces the additives in the diet has been mandatory to the consumers who wants a health diet, as a growing tendency in the food industry in the development of products with cleaner labels, which are known as clean label. In this context, the search and/or value of natural ingredients that contributes simultaneously for the improvement in the functional properties, sensory and technological of food products that make them essential. Among the sources of these ingredients, stands out the araruta (Maranta arundinacea L.) as unconventional food plants (PANC?s) from Marantaceas Family, which presents a food potential, nutritional, functional that is neglected. Therefore, the aim of this paper was to evaluate the effect of the adding of araruta flours in the physical Chemical characteristics, rheological and in the growing of probiotic bacteria in the vanilla dairy dessert. In the Chapter I was developed and research in the literature in order to evaluate the sensory aspects and technological of prebiotics flours in the dairy products. In the Chapter II was performed a study of the prebiotic potential in the araruta flour, as well as, the effect of different % of these flours in the reological and technological of the mentioned dessert. It is possible to conclude that the particles size of the flours directed affected the texture of the desserts, once the flours with bigger size contributed to the increase in firmness of the dairy desserts. In addition, regarding the functional aspects, the araruta flour presented high level of resistent starch (29,47%) low IG(41,8), beyond the probiotic potential, which contribute to the increase number on the Lactobacillus Casey counting. Also, it was verified that % flour contribute to the reduction in the syneresis, rheological properties(flow behavior in oscillatory tests), texture (firmness and stickiness) and on the microscopical characteristics in the vanilla dairy dessert. / Nos ?ltimos anos, o uso de prebi?ticos na elabora??o de produtos l?cteos tem sofrido grande incentivo, embora a procura por mat?rias-primas de baixo custo para sua obten??o ainda seja um grande desafio, evidenciando um potencial para desenvolvimento de pesquisas de fontes alternativas ou novos processos de obten??o desses ingredientes. Al?m disso, a necessidade de redu??o de aditivos na dieta tem sido mandat?ria para os consumidores que buscam uma alimenta??o mais saud?vel, assim como, uma tend?ncia crescente da ind?stria de alimentos no desenvolvimento de produtos com r?tulos mais limpos, conhecidos como clean label. Neste contexto, a busca e/ou valoriza??o de ingredientes naturais que contribuam simultaneamente para a melhoria das propriedades funcionais, sensoriais e tecnol?gicas dos produtos aliment?cios se torna fundamental. Dentre as fontes desses ingredientes, destaca-se a araruta (Maranta arundinacea L.) uma planta aliment?cia n?o convencional (PANC) da fam?lia das Marantaceas que apresenta potencial aliment?cio, nutricional, funcional e tecnol?gico negligenciado. Assim, o objetivo geral do presente trabalho foi avaliar o efeito da adi??o de farinha de araruta nas caracter?sticas f?sico-qu?micas, reol?gicas e no crescimento de bact?rias probi?ticas de sobremesa l?ctea sabor baunilha. No Cap?tulo I deste trabalho foi realizada uma revis?o de literatura visando avaliar os aspectos sensoriais e tecnol?gicos do uso de farinhas prebi?ticas em produtos l?cteos. No Cap?tulo II foi realizado o estudo das propriedades f?sicas, funcionais (amido resistente e ?ndice glic?mico) e do potencial prebi?tico da farinha de araruta, bem como, o efeito de diferentes % dessa farinha nas propriedades reol?gicas e tecnol?gicas de uma sobremesa l?ctea sabor baunilha. Pode-se concluir que o tamanho de part?cula das farinhas afetou diretamente a textura das sobremesas, uma vez que, as farinhas com maior tamanho m?dio de part?culas contribu?ram para aumento da firmeza das sobremesas l?cteas. Com rela??o aos aspectos funcionais, a farinha de araruta apresentou elevado teor de amido resistente (29,47%), baixo IG (41,8), al?m de potencial prebi?tico contribuindo para o aumento da contagem de Lactobacillus casei. Foi verificado que % farinha contribui para redu??o da sin?rese, al?m de afetar as propriedades reol?gicas (comportamento de fluxo e ensaios oscilat?rio), na textura (firmeza e adesividade) e nas caracter?sticas microsc?picas da sobremesa l?ctea sabor baunilha.

Dentre as espécies exóticas de peixes produzidas no Brasil, a truta arco-íris, Oncorhynchus mykiss, tem se destacado. Diante da expansão desse setor, intensifica-se a necessidade de estudos visando à diminuição dos problemas produtivos e sanitários apresentados na piscicultura, assim como a busca por tratamentos alternativos aos controversos antimicrobianos. Nesse contexto, o uso de probióticos, constituídos por microrganismos vivos, que quando consumidos adequadamente beneficiam a saúde do hospedeiro, demonstra ser uma abordagem promissora no aprimoramento na criação de trutas. Deste modo, o presente trabalho buscou contribuir para o desenvolvimento de uma tecnologia alternativa na criação de truta arco-íris, avaliando o efeito de preparações probióticas sobre o desempenho dos animais submetidos às condições convencionais de manejo ou de estresse crônico. O estresse consistiu em aumentar diariamente o adensamento dos tanques de 15k g/m3 para 45 kg/m3 por 90 minutos. O tratamento consistiu na avaliação de um pool de células composto por 4 cepas de Lactobacillus com propriedades probióticas, que foi incorporado à alimentação por meio de veículo oleoso, totalizando 4 x 108 UFC/g de ração. O delineamento experimental consistiu na utilização de 140 trutas com peso médio de 360,8 ± 22,67 g e comprimento de 30,2 ± 0,8 cm, mantidas em tanques de 1500L e distribuídas em 4 grupos, a saber: Grupo NR - ração controle; Grupo ER - estresse de manejo e ração controle; Grupo NP - ração contendo a preparação probiótica; Grupo EP - estresse e ração contendo a preparação probiótica. Foram coletados 8 indivíduos de cada grupo nos dias inicial, 30 e 60 para avaliação das variáveis hematológicas, bioquímicas e de desempenho zootécnico. A possibilidade de incorporação de cepas probióticas, não liofilizadas, na ração extrusada de peixes foi demonstrada. Os resultados mostraram que a suplementação da dieta de truta com probiótico aumentou significativamente (P<0,05) a contagem de eritrócitos e monócitos. Não foram observadas alterações estatisticamente discerníveis nos parâmetros bioquímicos e no desempenho, bem como não ficou comprovado que o tratamento avaliado mitigou as respostas de estresse. / Among the exotic species of fish produced in Brazil, the rainbow trout, Oncorhynchus mykiss, has excelled. Given the expansion of this sector, intensifies the need for studies to decrease production and health problems presented in aquaculture, as well as the search for alternatives to controversial antimicrobial treatments. In this context, the use of probiotics and consist of live microorganisms, that when properly consumed benefit the health of the host, proves to be a promising approach to the improvement in the creation of trout. Thus, the present study sought to contribute to the development of an alternative technology in creating rainbow trout, evaluating the effect of probiotic preparations on the performance of the animals subjected to conventional management conditions or chronic stress. The stress consisted of daily increasing densification of 15k g/m3 tanks to 45 kg/m3 for 90 minutes. The treatment consisted in evaluating a pool of cells composed of four Lactobacillus strains with probiotic properties, was incorporated by feeding oil vehicle, totaling 4 x 108 CFU/g of feed. The experiment consisted in using 140 trout with an average weight of 360.8 ± 22.67 g and length of 30.2 ± 0.8 cm, kept in tanks of 1500L and divided into 4 groups, namely: NR Group - feed control; CWT - stress management and diet control; NP Group - feed containing probiotic preparation; EP group - stress and diet containing the probiotic preparation. Were collected eight subjects in each group in the initial, 30 and 60 for assessment of hematological, biochemical and growth performance variables. The possibility of incorporating not freeze-dried probiotic strains in extruded fish feed was demonstrated. The results show that dietary supplementation with probiotic trout increased significantly (P <0.05) the erythrocyte count and monocytes. No statistically discernible changes in biochemical parameters and performance were observed, and it was not proven that evaluated treatment mitigated the stress response. Keywords:

In the gastrointestinal tract, probiotics have been shown to promote host immunity and to regulate immune signaling pathways. This study used Caco-2 cell line to examine the effects of a Lactobacillus rhamnosus isolate from “amabere amaruranu” a Kenyan traditional cultured milk, on the production inflammatory cytokines in enterocytes. Live Lactobacillus rhamnosus (MRS6AN), its cytoplasmic fraction (CF), filtered spent broth (FSB) or heat inactivated FSB (HIB) were used as treatments on differentiated Caco-2 cell monolayer in transwells. Cytokine content in the cell lysates, apical and basolateral supernatants were determined using ELISA. Caco-2 cell lysate treatments showed significantly increased anti-inflammatory TGF-β (ng/ml) levels on average about 100x more compared to the increase in pro-inflammatory IL-8 (pg/ml) levels. These levels were significantly reduced after inhibition of NF-κB. In conclusion, live Lactobacillus rhamnosus, its CF, FSB or HIB seemed to modulate the production of inflammatory cytokines in enterocytes partly via the NF-κB signaling pathway.

Orientador: Juliana Campos Junqueira / Coorientadora: Patrícia Pimentel de Barros / Banca: Silvana Soléo Ferreira dos Santos / Banca: Alessandra Bühler Borges / Resumo: O uso de probióticos como método de prevenção para a cárie dental tem sido amplamente investigado com resultados promissores. Portanto, torna-se necessário o desenvolvimento de formulações, para aplicação na cavidade bucal, que contenham cepas probióticas com atividade contra Streptococcus mutans. Assim, o objetivo desse projeto foi avaliar os efeitos antimicrobianos de formulações probióticas de Lactobacillus paracasei 28.4 sobre a atividade antibacteriana em crescimento planctônico, produção de polissacarídeos e formação de biofilmes de S. mutans. Inicialmente, a atividade antibacteriana de 3 diferentes formulações probióticas (concentrações de 0,5, 0,75 e 1% p/v de gellan gum em CaCl2) foram testadas em culturas planctônicas sobre cepas de S. mutans (cepa padrão UA 159 e 5 cepas clínicas). Os resultados demonstraram inibição total do crescimento das cepas de S. mutans quando tratadas com todas as formulações probióticas testadas. Nos estudos subsequentes, foram avaliados os efeitos profiláticos da formulação probiótica na concentração de 1% p/v nos biofilmes de 4 e 24 horas de S. mutans, utilizando-se a cepa UA 159 e 2 cepas clínicas. Por meio do método sulfúrico-antrona, foi observado que a aplicação da formulação probiótica reduziu a capacidade de produção de polissacarídeos extracelulares pelas cepas de S. mutans em aproximadamente 80% nos dois tempos dos biofilmes testados. A formulação probiótica também foi capaz de reduzir significativamente a biomassa total dos biof... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre