Apesar de ser principalmente um colonizador da pele e mucosas, Staphylococcus epidermidis, juntamente com outros estafilococos coagulase negativos, tornou-se um importante patógeno oportunista, responsável por infecções nosocomiais associadas ao uso de dispositivos implantáveis. O fator mais importante na patogênese de infecções estafilocócicas associadas a estes dispositivos é a habilidade do patógeno de formar um biofilme bacteriano, sendo que a presença dos genes ica, aap e atlE é considerada importante para a sua formação. Este estudo compara diferentes métodos para a detecção de formação de biofilme em S. epidermidis isolado de cateter venoso central (CVC). Dois métodos fenotípicos foram realizados: o teste da microplaca, considerado o padrão ouro e o teste com ágar Congo Red (ACR). No método genotípico, através da técnica de PCR, foi verificada a presença dos genes icaA, icaD, aap e atlE. Das 166 amostras analisadas, 107(64%) produziram biofilme pelo teste da microplaca, sendo 17 fortes, 23 moderadas e 67 fracas produtoras, enquanto 90(54%) produziram biofilme pelo teste com ACR. Foi verificada a presença dos genes icaA e icaD em 97% (104/107) das amostras produtoras de biofilme pela microplaca; em 77% foi identificado o gene aap e em 92% o gene atlE. Os genes icaA e icaD foram considerados os marcadores mais confiáveis na identificação molecular de biofilme porque apresentaram maior sensibilidade (97%) quando comparados com os demais genes. A ausência de genes icaA e icaD em três isolados produtores de biofilme através do teste da microplaca, chamados de “ica-independente”, sugerem a presença de um mecanismo alternativo de formação de biofilme, como a proteína Aap, que pode substituir funcionalmente PIA como uma adesina intercelular. A alta prevalência do gene atlE entre os isolados deste estudo pode ser explicada pelo fato de a proteína AtlE ser um importante fator para a aderência em superfícies plásticas como CVC. Porém a sua presença nem sempre implica em formação de biofilme. Este estudo confirma a importância do operon ica na formação do biofilme e nas infecções relacionadas a cateter, uma vez que a maioria das amostras produtoras de biofilme isoladas de CVC carreavam tal gene. / Although Staphylococcus epidermidis is essentially a colonizer of skin and mucous membranes, it has become an important opportunistic pathogen among other coagulasenegative staphylococci, and it is responsible for nosocomial infections associated to indwelling medical devices. The most important factor in the pathogenesis of staphylococcal device-related infections is the pathogen ability to produce a biofilm, and it has been demonstrated that ica, aap and atle genes are important to its production. The present study compares different detection methods of biofilm formation in isolates of S. epidermidis from central venous catheter (CVC). Two phenotypic methods were performed: the microtiter plate test, considered a golden standard, and Congo red agar test. Through a genotypic method, using the PCR technique, it was verified the presence of icaA, icaD, aap and atlE genes. Using the microtiter plate assay, biofilm formation was observed in 107 of 166 analyzed samples (64%, including 17 strong, 23 moderate and 67 weak producers) while the Congo Red agar (CRA) plate assay reveled 90 (54%) biofilm producers. The presence of icaA and icaD genes was verified in 104 of the 107 biofilm producers samples identified through the microtiter assay (97%), while 77% presented aap gene and 92% presented atlE gene. Compared to other genes, icaA and icaD presented the higher sensibility (97%) and were considered the most reliable markers for molecular identification of biofilm producers. The absence of icaA and icaD genes in three biofilm-producing isolates identified through the microtiter assay (the “ica-independent”) suggests the existence of an alternative mechanism for biofilm formation, such as the Aap protein, that can be a functionally substitute for PIA as an intercellular adhesin. The high occurrence of atlE gene among the isolates in this study may be due to AtlE protein being an important factor for adherence to plastic surfaces, such as CVC, but the presence of this gene does not always results in biofilm formation. The present study corroborate the importance of ica operon in biofilm formation and in catheter-related infections, since most of the biofilm-producing sample isolates from CVC presented these genes.

As doenças lisossômicas de depósito (DLD) são erros inatos do metabolismo causadas pela deficiência de uma proteína, normalmente uma enzima, que resulta no depósito de lipídios nos lisossomos. Neste trabalho, nos propusemos a avaliar uma metodologia para a investigação bioquímica das DLDs. Amostras em papel filtro apresentam um menor volume de sangue coletado e uma maior facilidade quanto ao transporte e acondicionamento. Tivemos por objetivos estabelecer fatores pré-analíticos em amostras de sangue em papel filtro (SPF) tais como: efeito de anticoagulantes, temperatura de armazenamento e estabilidade ao longo do tempo para as enzimas b-galactosidase (b-gal), hexosaminidase total (Hex t), alfa-galactosidase (GLA), arilsulfatase B (ASB) e alfa-glicosidase (GAA). Também foi realizada a miniaturização e a correlação das metodologias em estudo. Descrevemos ainda nossa experiência no rastreamento das DLD em SPF em uma população de alto risco. Amostras de sangue de indivíduos normais (controles) foram coletadas em tubos com anticoagulantes EDTA, heparina, ou diretamente impregnados em papel filtro e armazenadas em diferentes temperaturas (-20, 4, 25 e 37ºC) e tempos (3, 10, 17 e 180 dias). Através da determinação da atividade enzimática em SPF por técnicas fluorométricas chegamos aos seguintes resultados: não houve diferença significativa entre os diferentes métodos de coleta do estudo para nenhuma das enzimas pesquisadas. Com relação ao efeito da temperatura e do tempo foi possível determinar que aos três dias de armazenamento, em todas as temperaturas estudadas e para todas as enzimas, as atividades permaneceram estáveis. A partir deste tempo cada enzima demonstrou um efeito diferente ao longo do tempo para as diversas temperaturas estudadas. Existem aquelas que não sofrem variação em sua atividade até 180 dias de armazenamento nas temperaturas estudadas (Hex t e GLA), aquelas que só vão diminuir sua atividade aos 180 dias em todas as temperaturas (ASB) ou somente a 37°C (b-gal) ou ainda aquela que diminui constantemente sua atividade a partir de 10 dias de armazenamento em todas as temperaturas (GAA). Se o objetivo for medir a atividade de todas as enzimas no mesmo papel filtro, então o melhor será armazenar o papel filtro por no máximo 10 dias em qualquer uma das temperaturas estudadas. Este tempo pode ser estendido até 180 dias em qualquer das temperaturas se formos analisar somente as atividades enzimáticas da Hex t, GLA e b-gal. O estudo de correlação das amostras de papel filtro de 1,2mm e 3mm de diâmetro para as enzimas alfagalactosidase, arilsulfatase B e alfa-glicosidase resultou nos coeficientes 0,994; 0,900 e 0,957; respectivamente. Isto demonstra que podemos diminuir o picote de papel sem perda da qualidade do ensaio. Por fim realizamos um rastreamento para as doenças de Pompe, Fabry, Mucopolissacaridose I e VI em 205 amostras de pacientes de alto risco, onde foi observado uma freqüência de 2,9% para estas DLDs após a utilização da metodologia pesquisada. Nossos resultados mostram a viabilidade na medida da atividade enzimática em SPF, o que facilita a coleta, envio e armazenamento das amostras para a triagem destas doenças lisossômicas. / Lysosomal storage diseases (LSD) are inborn errors of metabolism caused by deficiency of a protein, usually an enzyme, which results in storage of lipids in lysosomes. In this work, we have proposed a methodology for the biochemical investigation of LSD. Dried blood spot samples on filter paper (DBS) have a lower volume of blood collected and ease about the transport and storage. The aims of the study for pre-analytical factors on DBS were: to investigate the effect of anticoagulants, storage temperature and stability over time for the enzymes b-galactosidase (b-gal), total hexosaminidase (Hex t), alphagalactosidase (GLA), arylsulfatase B (ASB) and alpha-glucosidase (GAA). We also made the miniaturization and the correlation of the methodologies under study. Also describe our experience in LSD screening on DBS in a high-risk population. Blood samples from normal individuals (controls) were collected in tubes with anticoagulant EDTA, heparin, either directly impregnated on filter paper and stored at different temperatures (-20, 4, 25 and 37ºC) and times (3, 10, 17 and 180 days). The enzymatic activities in DBS were determined by fluorometric techniques and we achieved the following results: no significant difference between the different collection methods was observed for any of the enzymes. Regarding the effect of temperature and time it was determined that the three days of storage at all temperatures studied and for all the enzymes, the activity remained stable. From this time each enzyme showed a different effect over time for various temperatures. There are enzymes that do not suffer variations in their activity until 180 days of storage at temperatures studied (t- Hex and GLA), there are those that will slow down their activity after 180 days at all temperatures only (ASB) or only at 37°C (b-gal ) or only that is constantly decreasing its activity after 10 days of storage at all temperatures (GAA). If the goal is to measure the activity of all enzymes in the same DBS, then it is best to store the DBS for a maximum of 10 days in any of the temperatures studied. This time can be extended to 180 days in any of the temperatures if we consider only the enzymatic activities of t-Hex, GLA and b-gal. The correlation study of samples of DBS of 1.2 mm and 3 mm in diameter for the enzyme GLA, ASB and GAA resulted in the coefficients 0.994, 0.900 and 0.957, respectively. This shows that we can decrease the paper punch without losing the quality of the test. Finally we performed a screening for Pompe disease, Fabry disease, Mucopolysaccharidosis I and VI in 205 samples of DBS of high-risk patients. This screening revealed a frequency of 2.9% of these LSD after using the methodology researched. Our results demonstrated the feasibility for measurement of enzymatic activity in DBS, which facilitates the collection, sending and storage of samples for the screening of these lysosomal disorders.

Orientador: Mariana Gobbo Braz / Resumo: O presente estudo teve como objetivo comparar diversos marcadores inflamatórios e neuro-endócrinos em pacientes submetidos ao ato cirúrgico sob anestesia mantida com o halogenado desflurano ou desflurano associado ao gás óxido nitroso (N2O). Adicionalmente, realizou-se a comparação entre os momentos do estudo em cada grupo analisado em relação ao perfil neuro-imune-endócrino. Este estudo clínico prospectivo foi realizado em indivíduos adultos sem comorbidades, de ambos os sexos, que foram submetidos a cirurgia de septoplastia sob anestesia com desflurano ou desflurano associado ao N2O 60%. Amostras de sangue venoso foram coletadas em três momentos: antes da medicação pré-anestésica na sala de operação (basal), aos 90 minutos após a indução anestésica e no dia posterior ao ato cirúrgico. As citocinas inflamatórias interleucina (IL)-1β, -6, -8, -10, -17A e o fator de necrose tumoral (TNF)-α foram analisados por citometria de fluxo e a proteína C-reativa de alta sensibilidade (PCR-as) foi analisada por imunoensaio quimioluminescente. A expressão dos genes IL-6, ciclooxigenase-2 (COX-2) e fator de transcrição nuclear kappa-B (NF-kB), relacionados à inflamação, foi avaliada por reação em cadeia da polimerase em tempo real. Os hormônios adrenocorticotrófico (ACTH), cortisol e prolactina foram detectados por ensaio imunoenzimático quimioluminescente. Os dois grupos não diferiram quanto aos dados demográficos, intraoperatórios e neuro-imune-endócrinos. Houve aumento de prolactina no ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The current study aimed to compare several of inflammatory and neuro-endocrine markers in surgical patients with anesthesia maintained with the halogenated desflurane or desflurane associated with the nitrous oxide (N2O) gas. In addition, the study compared the neuro-immune-endocrine profile among the time points in each studied group. This prospective clinical trial was conducted in adults with no comorbidities, of both sexes, who underwent septoplasty with desflurane or desflurane asnesthesia associated with N2O 60%. Blood samples were collected at three time points: before the patient received preanesthetic medication in the operating room (baseline), 90 minutes after anesthesia induction and the day after surgery. The inflammatory cytokines interleukin (IL)-1β, -6, -8, -10, -17A and tumor necrosis factor (TNF)-α were analyzed by flow cytometry, and high-sensitivity C-reactive protein (hs-CRP) was analyzed in the by chemiluminescent immunoassay. Inflammatory genes IL-6, cyclooxygenase-2 (COX-2) and nuclear factor - kappa B (NF-KB) were detected by quantitative polymerase chain reaction. The adrenocorticotrophic hormone (ACTH), cortisol and prolactin were detected by chemiluminescent immunoenzymatic assay. Both groups did not differ regarding demographic, intraoperative and neuro-immune-endocrine data. There were similar significant increases of intraoperative prolactin, and post-operative IL-6 and hs-CRP, in both groups. In conclusion, both anesthetic techniques did not di... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by NAYARA MICARELLI DE ARRUDA (nayara_micarelli@hotmail.com) on 2018-07-10T13:25:25Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Final Entregue na Pós.pdf: 1784541 bytes, checksum: 05d8fbdffd0412f32ac00ab76d237b45 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Pizzani null (luciana@btu.unesp.br) on 2018-07-10T19:39:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 arruda_nm_me_bot.pdf: 1784541 bytes, checksum: 05d8fbdffd0412f32ac00ab76d237b45 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-10T19:39:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arruda_nm_me_bot.pdf: 1784541 bytes, checksum: 05d8fbdffd0412f32ac00ab76d237b45 (MD5) Previous issue date: 2018-05-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O presente estudo teve como objetivo comparar diversos marcadores inflamatórios e neuro-endócrinos em pacientes submetidos ao ato cirúrgico sob anestesia mantida com o halogenado desflurano ou desflurano associado ao gás óxido nitroso (N2O). Adicionalmente, realizou-se a comparação entre os momentos do estudo em cada grupo analisado em relação ao perfil neuro-imune-endócrino. Este estudo clínico prospectivo foi realizado em indivíduos adultos sem comorbidades, de ambos os sexos, que foram submetidos a cirurgia de septoplastia sob anestesia com desflurano ou desflurano associado ao N2O 60%. Amostras de sangue venoso foram coletadas em três momentos: antes da medicação pré-anestésica na sala de operação (basal), aos 90 minutos após a indução anestésica e no dia posterior ao ato cirúrgico. As citocinas inflamatórias interleucina (IL)-1β, -6, -8, -10, -17A e o fator de necrose tumoral (TNF)-α foram analisados por citometria de fluxo e a proteína C-reativa de alta sensibilidade (PCR-as) foi analisada por imunoensaio quimioluminescente. A expressão dos genes IL-6, ciclooxigenase-2 (COX-2) e fator de transcrição nuclear kappa-B (NF-kB), relacionados à inflamação, foi avaliada por reação em cadeia da polimerase em tempo real. Os hormônios adrenocorticotrófico (ACTH), cortisol e prolactina foram detectados por ensaio imunoenzimático quimioluminescente. Os dois grupos não diferiram quanto aos dados demográficos, intraoperatórios e neuro-imune-endócrinos. Houve aumento de prolactina no intraoperatório e de IL-6 e PCR-as no pós-operatório de maneira semelhante em ambos os grupos. Em conclusão, ambas as técnicas anestésicas não diferiram quanto ao perfil inflamatório ou de resposta neuro-endócrina e tiveram perfil semelhante nos momentos avaliados. Assim, tanto a manutenção anestésica com desflurano ou desflurano associado a N2O 60% podem ser opções viáveis para pacientes hígidos submetidos a cirurgia minimamente invasiva. / The current study aimed to compare several of inflammatory and neuro-endocrine markers in surgical patients with anesthesia maintained with the halogenated desflurane or desflurane associated with the nitrous oxide (N2O) gas. In addition, the study compared the neuro-immune-endocrine profile among the time points in each studied group. This prospective clinical trial was conducted in adults with no comorbidities, of both sexes, who underwent septoplasty with desflurane or desflurane asnesthesia associated with N2O 60%. Blood samples were collected at three time points: before the patient received preanesthetic medication in the operating room (baseline), 90 minutes after anesthesia induction and the day after surgery. The inflammatory cytokines interleukin (IL)-1β, -6, -8, -10, -17A and tumor necrosis factor (TNF)-α were analyzed by flow cytometry, and high-sensitivity C-reactive protein (hs-CRP) was analyzed in the by chemiluminescent immunoassay. Inflammatory genes IL-6, cyclooxygenase-2 (COX-2) and nuclear factor - kappa B (NF-KB) were detected by quantitative polymerase chain reaction. The adrenocorticotrophic hormone (ACTH), cortisol and prolactin were detected by chemiluminescent immunoenzymatic assay. Both groups did not differ regarding demographic, intraoperative and neuro-immune-endocrine data. There were similar significant increases of intraoperative prolactin, and post-operative IL-6 and hs-CRP, in both groups. In conclusion, both anesthetic techniques did not differ in relation to inflammatory profile and neuro-endocrine response, and were similar when analyzed at the evaluated time points. Therefore, anesthesia maintained with desflurane or desflurane associated with N2O 60% can be suitable options for healthy subjects who undergo minimally invasive surgery. / Nº Processo: 131029/2016-9 CNPq

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-27Bitstream added on 2014-06-13T20:17:28Z : No. of bitstreams: 1 kina_j_me_araca.pdf: 1193550 bytes, checksum: d217ade36af8adc9e54b137cf2f19928 (MD5) / Introdução: Para a eficiência da ancoragem, diferentes protocolos são preconizados durante a mecânica ortodôntica, principalmente quando se deseja a retração inicial do canino para o alinhamento e nivelamento anterior sem a mesialização do segmento posterior. Nesse contexto, a utilização dos minimplantes tem sido cada vez mais frequente, pois possuem características desejáveis para essa finalidade como a facilidade operacional de sua instalação, dispensa a colaboração do paciente para o desenvolvimento da mecânica ortodôntica,é favorável na estética e permite um sistema de forças mais previsível. O objetivo deste trabalho foi comparar quantitativamente por meio de telerradiografias em norma lateral e radiografias panorâmicas, a taxa de retração inicial de caninos (RIC) superiores, utilizando-se dois sistemas distintos de ancoragem. Métodos: Foram selecionados 18 pacientes, formando dois grupos aleatórios de 9 indivíduos (G1 e G2), triados para tratamento ortodôntico na UNESP - Araçatuba. Como ancoragem foi utilizado minimplantes no grupo G1 e botão de Nance no grupo G2. Para todos os pacientes foram realizadas duas telerradiografias em norma lateral (T1 e T2) e duas panorâmicas (P1 e P2). Para comparação entre as fases Início (antes do tratamento) e Após (após a retração inicial de caninos) foi utilizado o teste t pareado. Para a comparação entre os grupos de minimplante e botão de Nance foi utilizado o teste t de Student para medidas independentes. Em todos os testes foi adotado nível de significância de 5% (p<0,05). Resultados: Para a RIC no Grupo G1, obteve-se uma média de 0,63 mm/mês, enquanto para o grupo G2 a média foi de 0,56 mm/mês. Conclusões: A análise das telerradiografias em norma lateral e das radiografias panorâmicas revelou a inexistência de diferença estatisticamente significante entre os dois grupos. / Introduction: For efficiency of the anchorage, different protocols are recommended during orthodontic mechanics, especially when clinicians want to retract the initial alignment and leveling without the inclination of the posterior segment. In this context, the use of mini-implants has been frequent. For this purpose it has desirable characteristics, such as the operational facility of installation, the collaboration of the patient, exemption for the development of orthodontic mechanics, it is favorable in appearance and allows more predictable system forces. This study compared, by teleradiographs and panoramic radiographs, the initial rate of retraction of canines (ICR), using two different systems of anchoring. Methods: 18 patients were selected and divided in two random groups of 9 subjects (G1 and G2). They needed and were refered to orthodontic treatment at UNESP - Araçatuba. In G1, mini-implants were used as anchor and G2 used the Nance button appliance. Two teleradiographs (T1 and T2) and two panoramic (P1 and P2) were made for all patients. The paired T test was used for comparison between Initial (before treatment) and After (after the initial retraction of canines) phases. Student's t test for independent measures was used for comparison between groups of mini-implants and the Nance button appliance. A significance level of 5% (p <0.05) was adopted in all tests. Results: For G1, an average of 0.63 mm / month was obtained, while for G2, the average was 0.56 mm / month. Conclusions: The analysis of teleradiographs and panoramic radiographs showed the absence of statistically significant difference between the two groups.

Orientador: Prof. Dr. Sérgio Bernardo Tenório / Co-orientador: Prof. Dr. Antônio Carlos Ligocki Campos / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clínica Cirúrgica. Defesa: Curitiba, 11/02/2010 / Inclui referências / Resumo: As cirurgias cardiacas com uso de circulacao extracorporea (CEC) desencadeiam potente resposta inflamatoria. Diversas tecnicas e medicamentos buscam modular de maneira eficaz essa resposta. O presente estudo avaliou se a clonidina, farmaco da classe dos ƒ¿ 2 agonistas, administrada por via subaracnoidea, reduz a resposta ao trauma cirurgico. Estudaram-se 27 pacientes, de ambos os sexos, com idades entre 18 e 75 anos, submetidos a cirurgias cardiacas com uso de CEC. Os procedimentos foram realizados no Hospital de Clinicas da Universidade Federal do Parana. Os pacientes foram separados por randomizacao em dois grupos: grupo A (controle) com 15 pacientes e grupo C (clonidina) com 12 pacientes. A anestesia geral foi induzida com propofol ou etomidato, fentanil em dose total maxima de 25ƒÊg.kg-1, pancuronio ou vecuronio. Utilizou-se isofluorano na concentracao maxima de 2,5% para a manutencao. Apenas o grupo C foi submetido, apos a inducao da anestesia geral, a puncao lombar para administracao de clonidina, na dose de 1ƒÊg.kg-1, com seringa de 1 ml. Pacientes que fizeram uso de acido acetilsalicilico associado a heparina ate 3 dias antes da cirurgia e que, devido a randomizacao, estariam no grupo clonidina, foram realocados no grupo controle. Procedeu-se dessa maneira com a finalidade de reduzir os riscos de formacao de hematoma peridural. Utilizaram-se como marcadores da resposta ao trauma cirurgico as dosagens sanguineas de cortisol, glicemia, troponina e lactato. A glicemia, o cortisol e o lactato foram dosados no momento da instalacao da pressao arterial invasiva (PAM), dez minutos apos a administracao da primeira cardioplegia e no momento da sutura da pele, respectivamente denominados tempos 1, 2 e 3. Medidas dinamicas dos marcadores tambem foram efetuadas, ou seja, tempo 3 . tempo 2 e tempo 3 . tempo 1. A troponina nao foi avaliada durante a circulacao extracorporea (tempo 2). Os resultados das medidas isoladas dos marcadores nao revelaram diferencas estatisticamente significativas. Apenas a avaliacao dinamica da glicemia apresentou variacao entre os grupos. Concluise q e a clonidina espinhal em dose de 1ƒÊg.kg-1 nao foi capaz de diminuir as dosagens sanguineas de troponina, cortisol ou lactato. Somente a glicemia sofreu uma menor variacao durante o procedimento. Esse fato, ja registrado na literatura, ainda necessita de maiores investigacoes para ser esclarecido. / Abstract: Cardiac surgeries using cardiopulmonary bypass result in a powerful inflammatory response. Several techniques and medicaments try to modulatein an effective way this response. The present study evaluated if the use of clonidine, a drug class of ƒ¿ 2 agonists, administered via spinal reduces the surgical stress response. Twenty seven patients of both sexes, aged between 18 and 75, underwent cardiac surgery with cardiopulmonary bypass (CPB) were studied. The procedures were performed at the Hospital de Clinicas of U.F.P.R. The patients were divided randomly into two groups: group A (control) with 15 patients and group C (clonidine) with 12 patients. General anesthesia was ind ced with propofol or etomidate, fentanyl maximum total dose of 25ƒÊg.kg -1, pancuronium or vecuronium. Maintenance with Isoflurane at the maximum concentration of 2.5%. Only group C was submitted ,after induction of general anesthesia, to lumbar puncture for the administration of clonidine, dose of 1ƒÊg.kg-1, with 1 ml syringe. Randomizated patients of clonidine group who used aspirin with heparin until 3 days before surgery , were relocated in the control in order to reduce the risk of epidural hematoma. Dosages of blood cortisol, glucose, lactate and troponin were used as markers of inflammatory response .and were measured at the time of installation of invasive blood pressure (IBP), ten minutes after the first administration of cardioplegia, and at skin suture, called respectively times 1, 2 and 3. Dynamic measurements of the markers were also made, ie, time 3 - time 2 and time 3 - time 1. Troponin was not evaluated during cardiopulmonary bypass (time 2). Isolated measurements results of markers showed no statistically significant differences. Only the dynamic evaluation of blood glucose showed variation between groups. In conclusion spinal clonidine in dose of 1ƒÊg.kg -1 was not able to decrease blood dosage of troponin, cortisol and lactate. Blood glucose was the only one which suffered a minor variation during the procedure. This fact, already recorded in literature, requires further investigations to be clarified.

Submitted by DARLENE BRAVIM CERQUEIRA null (darlenecerqueira@fmb.unesp.br) on 2017-04-12T13:18:33Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao.pdf repo.pdf: 30244012 bytes, checksum: bdb6539ba52a271c95f34bba5a806832 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-17T20:34:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cerqueira_db_me_bot.pdf: 30244012 bytes, checksum: bdb6539ba52a271c95f34bba5a806832 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-17T20:34:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cerqueira_db_me_bot.pdf: 30244012 bytes, checksum: bdb6539ba52a271c95f34bba5a806832 (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / Introdução: A segurança do paciente tem se configurado objeto de estudo em diferentes aspectos da assistência a saúde, incluindo a segurança dos procedimentos cirúrgicos. A Organização Mundial de Saúde lançou o protocolo “Cirurgias Seguras Salvam Vidas” para: prevenção de infecção de sitio cirúrgico; anestesia segura; cirurgias seguras e indicadores de assistência. A lista de verificação é uma ferramenta de simples, porém sua implantação efetiva ainda é um desafio. Objetivo: Construir e validar um ambiente virtual de ensino aprendizagem à distância sobre cirurgia segura. Método: Trata-se de uma pesquisa metodológica de validação de tecnologia, na qual foi dividida em duas etapas: construção e validação. Para a construção do ambiente virtual, foram seguidas seis etapas de acordo com proposta de Cook & Dupras e para execução da 2a etapa foi realizada a seleção dos juízes-especialistas da área, sendo utilizada a estratégia de validação de conteúdo por meio da técnica IVC (Índice de validade de conteúdo). Resultados: A construção do Ambiente Virtual de Ensino Aprendizagem (AVEA) e a implementação foram realizadas, após vários encontros entre a pesquisadora e equipe técnica, sendo disponibilizado na plataforma MOODLE com acesso restrito as pesquisadoras e ao grupo de juízes. O curso de cirurgia segura foi dividido da seguinte forma: um pré-teste e três módulos: módulo 1: apresentação da lista de verificação, módulo 2: aplicação do conhecimento manual; módulo 3: refletindo o aprendizado, para finalizar o curso um pós teste. A apreciação do instrumento foi realizada por um grupo de juízes, constituídos por 14 enfermeiros, que seguiram os critério pré-estabelecidos. Todos os itens foram avaliados positivamente por 86% dos avaliadores. Após esta avaliação os especialistas fizeram algumas sugestões com vistas a adequar o material educativo. Produto: Um curso de Educação à Distância sobre Cirurgia Segura foi obtido como fruto dessa dissertação. Conclusão: Considera-se que o material desenvolvido está adequado para a equipe de enfermagem, e que o mesmo facilitará a prática da aplicação da lista de verificação de segurança cirúrgica, tendo em vista que a tecnologia utilizada é capaz de facilitar a aquisição dos conhecimentos. / Introduction: The safety of the patient has been configured object of study in different aspects of health care, including the safety of surgical procedures. The World Health Organization has launched the protocol “Safe Surgeries Saves Lives” for the prevention of infection in the surgical site; safe anesthesia; safe surgeries and care indicators. The checklist is a simple tool, but its effective deployment is still a challenge. Objective: To build and validate a virtual environment of teaching and learning in distance about safe surgery. Method: This is a methodological research of technology validation, in which it was divided into two stages: build and validation. For building of the virtual environment, six steps were followed according to the proposal of Cook & Dupras and for the execution of the 2nd stage the selection of the expert judges of the area was carried out, using the content validation strategy by the means of the IVC technique (Content validity index). Results: The build of the Virtual Environment for Teaching Learning (AVEA) and the implementation were carried out, after several meetings between the researcher and the technical team, being made available in the MOODLE platform with restricted access to the researchers and the group of judges. The safe surgery course was divided as follows: one pre-test and three modules: module 1: presentation of the checklist, module 2: application of the manual knowledge; module 3: reflecting the learning, to finish the course a post test. The evaluation of the instrument was carried out by a group of judges, made up of 14 nurses, following the pre-established criteria. All the items were evaluated positively by 86% of the evaluators. After this evaluation the experts made some suggestions with a view to adjusting the educational material. Product: We built a Safe Surgery Distance Learning Course as product. Conclusion: It is considered that the material developed is adequate for the nursing team, and that it will facilitate the practice of applying the safe surgery checklist, given that the technology used is capable of facilitating the acquisition of knowledge.

Made available in DSpace on 2015-07-16T02:04:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000472305-Texto+Completo-0.pdf: 11662378 bytes, checksum: 4fe1ede28b6e0e1ba0ea85af9d135c86 (MD5) Previous issue date: 2015 / Objective : The thesis has as main goal the improvement of electrical safety in surgical procedures. It can be find risks of health hazards of the patients from the use of electromedical equipment (EME) that operates with electricity and are susceptible to failure. The consequence of these electrical failures taken into account in this thesis is a differential current (leakage) improper passing through a patient’s body, thus creating a microshock. Materials and Methods : A literature review was performed, concerning the electrical safety norms related with EMEs, facilities in critical hospital environments such as surgical centers and physiological effects of electrical current on the human body. A study about mathematical/statistical methods that can be used to calculate similarity between electrical current waveforms was also built. Therefore, a reference platform capable of capturing EMEs differential current during surgical procedures was developed. Accordingly, a methodology of differential current analysis is proposed, generating a scale of dangerousness relating to electrical current value, frequency spectrum and the similarity between simultaneous waveforms. Results : The reference platform was validated in the laboratory using TN-S and IT medical earthing systems. For validation, in both grounding systems were artificially produced leakage currents and microshocks, which were analyzed in the scales dangerousness proposed. Furthermore, differential current events were captured with the reference platform embedded in gas and socket panel of an operating room, in order to provide an evaluation in real environment of use. Discussion of results : laboratory tests have proven that the reference platform is able to capture the differential current events with the necessary precision to a broad analysis. The proposed dangerousness scales proved to be adequate for the analysis of the events captured in six months of use at the surgical center. In this period, at least 49 situations with danger alert were detected. With the similarity scale between electric current waveforms, progress was made in the detection of microshock. Conclusion : It can be stated that this thesis contributed to the improvement of electrical safety during surgical procedures. The reference platform, using the dangerousness scale proposed, can distinguish between a meaningless event and an event with a real risk. Maybe in the future, the knowledge produced in this thesis can incorporate electrical safety norms in surgical procedures. / Objetivo : Esta tese possui como principal objetivo a melhoria da segurança elétrica em procedimentos cirúrgicos. Pode-se encontrar riscos de danos à saúde dos pacientes a partir do uso dos equipamentos eletromédicos (EEM), que usam a eletricidade e podem ser acometidos de falhas. A consequência destas falhas elétricas levada em consideração nesta tese é uma corrente diferencial (fuga) indevida circulando por um paciente, configurando assim um microchoque. Materiais e Métodos : Uma revisão bibliográfica acerca das normas de segurança elétrica relacionadas com EEM, das instalações em ambientes hospitalares críticos como centros cirúrgicos e dos efeitos fisiológicos da corrente elétrica no corpo humano foi realizada. Um estudo sobre métodos matemáticos/estatísticos que podem ser usados para calcular a similaridade entre formas de onda (FO) de corrente elétrica também foi construída. Então, uma plataforma de referência capaz de capturar correntes diferenciais de EEM durante procedimentos médicos foi desenvolvida. É proposta ainda uma metodologia de análise dessas correntes diferenciais, produzindo escalas de periculosidade a saúde em relação ao valor da corrente, ao espectro de frequência e à similaridade entre FO simultâneas. Resultados : A plataforma de referência foi validada em laboratório usando o sistema de aterramento Terra/Neutro (TN-S) e com sistema isolado sem alimentação referenciada ao Terra (IT-Médico). Para a validação, em ambos os sistemas de aterramento, foram produzidos artificialmente correntes de fuga e microchoques, que foram analisados nas escalas periculosidade propostas. Foram ainda coletados, com a plataforma de referencia embarcada no painel de gases e tomadas de um centro cirúrgico, eventos de corrente diferencial, a fim de proporcionar uma avaliação em ambiente real de uso. Discussão dos resultados : Os testes em laboratório comprovaram que a plataforma de referência consegue capturar os eventos de corrente diferencial com a precisão necessária para uma ampla análise. As escalas de periculosidade propostas se mostraram adequadas na análise dos eventos capturados em seis meses de uso junto ao centro cirúrgico. Nesse período, foram detectados pelo menos 49 situações com a produção de alertas de Perigo. Com a escala de similaridade entre FO de corrente elétrica ainda conseguiu-se avançar na detecção de microchoques. Conclusões : Pode-se afirmar que esta tese contribuiu para a melhoria da segurança elétrica em procedimentos médicos. A plataforma de referência, utilizando as escalas de periculosidade propostas, consegue distinguir entre um evento sem significado e um evento com um risco real. Talvez no futuro, o conhecimento produzido nesta tese possa ser parte das normas de segurança elétrica em procedimentos cirúrgico.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:12:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000437829-Texto+Completo-0.pdf: 3097644 bytes, checksum: 63052063f3fb08648c7ca5a4506262bc (MD5) Previous issue date: 2011 / The genus Angiostrongylus Kamensky, 1905 belongs to the Phylum Nematode, with round shape as its main feature. Two species have medical importance, A. costaricensis living in mesenteric arteries of wild mice and causing abdominal angiostrongyliasis in human and A. cantonensis which lives in pulmonary arteries of rats and may cause eosinophilic meningoencephalitis in humans. The diagnosis of both diseases is difficult due to absence of parasite in feces in case of the infection by A. costaricensis and seldom detected larvae in the cerebrospinal fluid in case of eosinophilic meningoencephalitis. Several studies have been performed to improve the diagnosis of angiostrongyliasis which should be able to differentiate in a specific and sensitive way among other parasitic infections. The 31kDa antigen has been considered the main antigen for eosinophilic meningoencephalitis diagnosis due to A. cantonensis infection. However this antigen is obtained from crude extracts of the worm by a laborious process of purification with low yielding and insufficient amount for large distribution to other diagnostic centers. In order to improve the serologic diagnostic of angiostrongyliasis and make the antigens widely available the present work aimed to identify new antigenic targets and also characterize the 31kDa antigen for further recombinant production. Besides that, essential molecules for parasite survival were investigated which in the future may be targets for disease treatment. Two sources of antigen from female worms were used: excretion and secretion products (ES) and total extract (TE). In ES, sample antioxidant enzymes activity were detected such as catalase and superoxide dismutase. Also was identified by Western blot and Mass spectrometry (MS), 17 proteins target for disease diagnosis and treatment like hemoglobinases, heat shock proteins and proteases inhibitors. In TE sample antioxidant enzymes as well as glutathione transferases (GST) which is another kind of defense enzyme were also detected. GSTs were purified by affinity chromatography and analyzed by MS. Peptide sequences from this experiment matched with homologous sequences of sigma class GST. In TE samples was possible to characterize the 31kDa and after two-dimensional electrophoresis was shown to be composed of four spots around 4. 5 of isoelectric point (pI) and being recognized by sera from patients infected with Angiostrongylus spp. The spots were analyzed by MS and three different proteins were identified: 14-3-3 protein, NAC domain containing protein, and epsilon subunit of the coatomer protein complex isoform 2. The 31kDa antigen was characterized as a glycoprotein through studies of oxidation of carbohydrate where it was observed that the antigenicity of four spots was dependent on sugar residues. The DNA sequences of the antigens were obtained by random sequencing of the genome for 454 platform (Roche) and deposited in Genbank. The data generated in this study contribute significantly to the development of recombinant antigens that may be widely distributed for independent diagnostic validation. / O gênero Angiostrongylus Kamensky, 1905 agrupa animais pertencentes ao filo Nematoda, cuja característica marcante é a forma corporal cilíndrica. Duas espécies possuem importância médica: A. costaricensis cujo habitat natural são as artérias mesentéricas de camundongos silvestres e na infecção humana pode levar ao desenvolvimento de angiostrongilíase abdominal; e A. cantonensis que habita as artérias pulmonares de roedores e na infecção humana pode causar meningoencefalite eosinofílica. O diagnóstico de ambas as doenças é dificultado pela ausência de formas parasitárias nas fezes, no caso de infecções por A. costaricensis e raramente encontradas no líquido cefaloraquidiano no caso de meningoencefalite eosinofílica. Muitos estudos vêm sendo desenvolvidos para o aprimoramento da detecção das angiostrongilíases visando testes que sejam capazes de discernir das diferentes infecções parasitárias de forma sensível e específica. O antígeno de 31kDa é considerado atualmente o principal antígeno para o diagnóstico da meningoencefalite eosinofílica, causada por A. cantonensis, entretanto é proveniente da purificação de extratos brutos do parasito o que acarreta num processo laborioso e dispendioso que em última análise gera quantidades insuficientes para que haja ampla distribuição e compartilhamento entre os centros de diagnóstico. Com o intuito de aprimorar o diagnóstico sorológico das angiostrongilíases e tornar os antígenos disponíveis globalmente o presente trabalho buscou identificar novos alvos antigênicos e caracterizar o antígeno de 31kDa para posterior propagação de formas recombinantes. Além disso, foram estudadas moléculas que podem ser fundamentais na manutenção do parasitismo, que futuramente poderão ser alvos para o tratamento das angiostrongilíases. Duas fontes de antígenos a partir de vermes adultos fêmeas foram empregadas: produtos de excreção e secreção (ES) e extrato bruto (TE). Nos ES foi detectada a atividade de enzimas antioxidantes como catalase e superóxido dismutase e identificadas, por western blot e espectrometria de massas (MS), 17 proteínas alvo para o diagnóstico e tratamento das angiostrongilíases dentre elas hemoglobinases, proteínas de choque térmico e inibidores de proteases. Nas amostras de TE além da identificação de enzimas antioxidantes, estavam presentes glutationas transferases (GST), outra classe de enzimas de defesa. Estas proteínas foram purificadas por cromatografia de afinidade e analisadas por MS o que revelou sequencias peptídicas homólogas a GST de classe sigma. Em TE também foi possível a caracterização do antígeno de 31kDa que quando submetido a eletroforese bidimensional mostrou-se ser composto por 4 spots com ponto isoelétrico (pI) em torno de 4,5 sendo reconhecidos pelo soro de pacientes infectados com Angiostrongylus spp. Os spots foram analisados por MS e três diferentes proteínas foram identificadas: 14-3-3; proteína com domínio NAC e a subunidade épsilon do coatamero. O antígeno de 31kDa foi caracterizado como uma glicoproteína através de estudos de oxidação de glicídeos, onde se observou que a antigenicidade dos 4 spots foi dependente de resíduos de açúcar. As sequências de DNA dos antígenos foram obtidas pelo sequenciamento aleatório do genoma pela plataforma 454 (Roche) e depositadas no Genbank. Os dados gerados no presente trabalho contribuem de forma significativa para o desenvolvimento de antígenos recombinantes que poderão ser amplamente distribuídos para validação e aplicação em diagnóstico.

Made available in DSpace on 2014-11-04T01:01:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000462324-Texto+Completo-0.pdf: 3205960 bytes, checksum: 9ae99a266b918522a991ea13e531b2fb (MD5) Previous issue date: 2014 / Schistosomiasis is endemic in 74 countries, affecting more than 200 million people. In Brazil, Schistosoma mansoni is the only causative agent of schistosomiasis, which affects 19 states. Control measurements and effective treatment can result in a decrease of the parasitic load of individuals with the severe form. In this matter, when diagnostic methods with adequate sensitivity for monitoring are not used, those measurements may difficult diagnosis, favoring the persistence of the infection for long periods, as well as the environmental contamination and consequently exposure to local population reinfection. In these areas, or where there was recent introduction of S. mansoni, classic parasitological methods to find eggs in feces are not efficient. Although immunological and molecular techniques are currently considered as main diagnostic tools, parasitological methods re necessary to confirm the infection. Helmintex™ has been recently described as highly sensitive diagnostic method that isolates eggs from 30 gram of feces through the interaction of eggs with paramagnetic microspheres in a magnetic field. Despite the sensibility, its limitation lies in the number of slides to be analyzed, making the process time consuming and not applicable for clinical routine. In this context, this work opens perspectives for the use of new tools in an attempt to optimize S. mansoni egg detection in the last step of the Helmintex™, using chemiluminescence, and ninhydrin staining. Another alternative tested was the ninhydrin staining. Helmintex™ sediments containing S. mansoni eggs were fixed with 70% ethanol and deposited on Whatman Grade 541 filter paper, immersed in a solution of ninhydrin:ethanol (30: 70 %) for later eggs visualization at the optical microscope. Reading time for each filter was counted and registered. Ideal conditions for incubation with ninhydrin were established in 15 minutes at 24 °C. Reading time for each sample was, in general, of 23 minutes. When compared to the original Helmintex™ method, the use of ninhydrin decreased the reading time of the final sediment in, at least, 450 minutes. The results of this work showed that the implementation of new tools in existent diagnostic methods may contribute to a better performance of sensitive techniques with limited application in field studies, and open perspectives to new studies that aim to investigate and to optimize primordial steps of concentration methods. / A esquistossomose é endêmica em 74 países, afetando mais de 200 milhões de pessoas. No Brasil, o Schistosoma mansoni é o único agente etiológico da esquistossomose, que atinge 19 estados. Medidas de controle e tratamento efetivo podem resultar em diminuição da carga parasitária de indivíduos com a forma severa da doença. Assim, quando não forem utilizados métodos diagnósticos com sensibilidade adequada para acompanhamento, essas medidas podem dificultar o diagnóstico, favorecendo a permanência da infecção por longos períodos, além da contaminação ambiental e consequentemente a exposição à população local à reinfecção. Nestas áreas, ou onde ocorreu introdução recente de S. mansoni, os métodos parasitológicos clássicos para encontrar ovos nas fezes não demonstram eficácia. Embora as técnicas imunológicas e moleculares sejam consideradas atualmente as principais ferramentas de diagnóstico, são necessários métodos parasitológicos para a confirmação da infecção. Recentemente, o Helmintex® foi descrito como um método diagnóstico altamente sensível que isola ovos a partir de 30 gramas de fezes através da interação dos ovos com microesferas paramagnéticos em um campo magnético. Apesar da sensibilidade, sua limitação está no número de lâminas a serem analisadas, tornando o processo demorado e inviável para aplicação na rotina clínica. Neste contexto, este trabalho abre perspectivas para a utilização de novas ferramentas na tentativa de otimizar a detecção de ovos de S. mansoni na última etapa do método Helmintex®, utilizando a quimioluminescência, e a coloração por ninidrina. Outra alternativa testada foi a coloração do sedimento final com ninidrina. Os sedimentos de Helmintex® contendo ovos de S. mansoni foram fixados com etanol 70 % e depositados em papel filtro Whatman Grau 541, imersos em uma solução de ninidrina:etanol (30:70%) para posterior visualização dos ovos corados em microscópio óptico. O tempo de leitura de cada filtro foi cronometrado. As condições ideais para incubação com a ninidrina foram estabelecidas em 15 minutos à 24 °C. O tempo de leitura para cada amostra foi, em média, de 23 minutos. Em comparação com o método Helmintex® original, a utilização de ninidrina diminuiu o tempo de leitura do sedimento final em, ao menos, 450 minutos. Os resultados deste trabalho mostraram que a implementação de novas ferramentas em métodos diagnósticos já existentes podem contribuir para um melhor desempenho de técnicas sensíveis, porém com aplicação limitada em estudos de campo, e abrem perspectivas para novos estudos que visam investigar e otimizar etapas primordiais de métodos de concentração.