Vacas leiteira de alta produção têm apresentado declínio da eficiência reprodutiva. Essa redução é devido a causas multifatoriais, entre elas a baixa concentração de estradiol (E2) no proestro e a baixa concentração de progesterona (P4) no ciclo estral subsequentente. O objetivo deste trabalho foi comparar o uso de gonadotrofina exógena na dinâmica folicular e na taxa de prenhez de vacas submetidas ao protocolo Ovsynch (Experimento 1) ou a protocolos utilizando P4 e E2 (Experimento 2). No Experimento 1, animais de primeiro serviço foram pré-sincronizados com dois protocolos (Presynch ou Double-Ovsynch). Já os animais de segundo ou mais serviços foram resincronizados com o protocolo Resynch. Os animais receberam GnRH (1º GnRH), seguido 7 dias depois pela adiministração de prostaglandina F2α (PGF2α). Nesse momento os animais foram divididos homogeneamente por paridade e número de inseminação em um de dois tratamentos: sem FSH (Ovsynch, n = 561) ou com FSH (Ovsynch + FSH, n = 571). O segundo GnRH (2º GnRH) foi administrado 56 horas após a PGF2α e a inseminação em tempo fixo foi realizada 16 horas após. Amostras de sangue foram colhidas no 1º e no 2º GnRH, na PGF2α e 6 e 13 dias após o 2º GnRH para dosagem de P4. Ainda, no 2º GnRH dosou-se também E2 No Experimento 2, os animais foram sincronizados no dia 0 com um dispositivo de P4 associado a 2 mg de benzoato de estradiol. Oito dias após o dispositivo foi removido e os animais receberam uma dose de PGF2α. Neste mesmo momento, as vacas foram divididas homogeneamente por paridade, número de serviços prévios, escore de condição corporal e presença de CL no inicio do protocolo em três tratamentos: Controle (sem tratamento adicional; n = 232); eCG (400 UI de eCG; n = 232) e FSH (20 mg de FSH; n = 230). Todos os animais receberam GnRH e foram insemados 56h após a retirada do dispositivo. Foram colhidas amostras de sangue a cada 48h do dia 11 ao dia 22. No Experimento 1, não houve efeito do FSH na concetração sérica de E2 no 2º GnRH (P = 0,88), no tamanho do maior folículo no 2 º GnRH (P = 0,63), na taxa de ovulação ao 2º GnRH (P = 0,69) ou na concentração sérica de P4 no 6º (P = 0,15) e 13º (P = 0,36) dia após o 2º GnRH. A taxa de prenhez foi semelhante (P> 0,05) entre os animais tratados com Ovsynch (36,2%) e Ovsynch + FSH (39,1%). No Experimento 2, os tratamentos não alteraram o diâmetro do folículo ovulatório (P = 0,15), o intervalo entre a remoção do dispositivo de P4 e a ovulação (P = 0,30) e a taxa de ovulação (P = 0,44). Não houve efeito de tratamento na concentração sérica de P4 (P = 0,15). A taxa de prenhez foi diferente entre os tratamentos aos 30 dias após a IATF (Controle = 28,0a vs FSH = 18,7b vs eCG = 29,7a %; P = 0,01), mas não aos 60 dias (Controle = 21,6 vs FSH = 16,1 vs eCG = 24,1%; P = 0,08) e na perda de gestacional (Controle = 18,8 vs FSH = 14,0 vs eCG = 18,4%; P = 0,39). Assim, o tratamento com FSH não estimulou o crescimento folicular final e a função luteínica de vacas leiteiras de alta produção sincronizadas com os protocolos Ovsynch e P4/E2. / Fertility in high-producing dairy cows has decreased over the years, which has been associated with reduced estradiol (E2) concentrations during proestrus and suboptimal progesterone (P4) concentrations during early stages of gestation. The objectives of the present study were to evaluate the effects of exogenous gonadotropins on follicular dynamics and risk of pregnancy per artificial insemination (P/AI) in cows subjected to the Ovsynch protocol (Experiment 1) or to a P4/E2-based timed AI protocol (experiment 2). In experiment 1, cows were enrolled in the Ovsynch protocol (GnRH, 7 d PGF2α, 56 h GnRH, 16 h IA) either after presynchronization (Presynch or Double-Ovsynch; first AI postpartum) or 32 d after previous AI. At the PGF2α injection, cows were blocked by parity and number of AI and, within each block, randomly allocated to eitherreceive 20 mg of FSH at the moment of the PGF2α(Ovsynch + FSH, n = 571) or to remain as untreated control (Ovsynch, n = 561). Blood was sampled at the 1st and 2nd GnRH and PGF2α injections, as well as on d 6 and 13 after the 2nd GnRH to access P4 and E2 (at the 2nd GnRH only) concentrations. In experiment 2, cows were received a P4 device and 2 mg of estradiol benzoate. The device was removed 8 d later concurrently with an injection of PGF2α, followed by an injection of GnRH and AI at 56 h.At the PGF2α injection, cows were blocked by parity, number of AI, body condition score, and presence of a CL at device insertion.Within each block, cows were randomly allocated to receive either 20 mg of FSH (FSH, n = 230), 400 IU of eCG (eCG, n = 232), or no additional treatment at the moment of the PGF2α (Control, n = 232). Blood was sampled at every 48 h from 1 to 12 d after AI. In experiment 1, there was no effect of FSH on serum E2 at the 2nd GnRH (P = 0.88), follicle diameter at the 2nd GnRH (P = 0.63), ovulatory response to the 2nd GnRH (P = 0.69), or serum P4 on d 6 (P = 0.15) and 13 (P = 0.36) after the 2nd GnRH. Also, P/AI was similar (P > 0.05) between Ovsynch (36.2%) and Ovsynch + FSH (39.1%). In experiment 2, treatment did not affect ovulatory diameter (P = 0.15), interval from P4 device removal and ovulation (P = 0.30), ovulatory response to the 2nd GnRH (P = 0.44), and serum P4 (P = 0.15). Interestingly, treatment with FSH reduced (P = 0.01) P/AI on d 30 (Control = 28.0a vs. FSH = 18.7b vs. eCG = 29.7a %), but not on d 60after timed AI (Control = 21.6 vs. FSH = 16.1 vs. eCG = 24.1%; P = 0.08).The risk of pregnancy loss was not affected by treatment (Control = 18.8 vs. FSH = 14.0 vs. eCG = 18.4%; P = 0.39). In conclusion, treatment with FSH failed to enhance the final growth of the ovulatory follicle and did not improve luteal function after AI in high-producing dairy cows synchronized with either the Ovsynch or P4/E2-based timed AI protocols.

O presente estudo avaliou a possibilidade de extração e dosagem de esteroides sexuais em amostras de gordura de carcaças e biópsias de baleia jubarte. A progesterona (P4), testosterona (T) e estradiol (E2) puderam ser dosados em todas as amostras pela técnica de enzimaimunoensaio. Amostras de carcaças foram utilizadas para validação da colheita. Uma série de experimentos foi realizada a fim de se avaliar: se o estado de decomposição da amostra altera os níveis hormonais; se os níveis de hormônios são diferentes em diferentes locais amostrados; se a profundidade de colheita (camadas externa, média e interna) altera os níveis hormonais; e finalmente o efeito do tamanho da amostra sobre as dosagens de hormônio. Todos estes elementos podem influenciar de maneira significativa a dosagem final. Também foram realizadas colheitas por meio de biópsias em 2011 e 2012 em área de reprodução no Atlântico Sul o Parque Nacional Marinho de Abrolhos e seu entorno; e em área de alimentação em 2011 e 2012 no Pacífico Sul o Parque Marino Francisco Coloane e seu entorno - localizado na Patagônia chilena. Como esperado, fêmeas apresentaram médias mais elevadas de P4 e E2 que machos, e machos apresentaram médias mais elevadas de T que fêmeas. Também foi observada sazonalidade reprodutiva com níveis mais elevados T em machos adultos em área de reprodução, especialmente nos meses de setembro e outubro. Os níveis de E2 em áreas de alimentação foram mais elevados que em área de reprodução tanto em machos quanto em fêmeas. Esta aparente inversão dos níveis de E2 com relação ao estado reprodutivo deve-se provavelmente ao tempo de metabolização deste hormônio na gordura. Algumas fêmeas adultas acompanhadas e desacompanhadas de filhotes apresentaram nível de P4 compatível com níveis de prenhez em outras espécies de cetáceos. Alguns dos animais biopsados tiveram seu comprimento corporal estimado através de fotogrametria. A menor fêmea acompanhada de filhote mediu 10.21 metros. Machos e fêmeas não apresentaram comprimentos corporais diferentes entre si, 12.96 e 12.04 metros, respectivamente. O tecido adiposo mostrou-se como uma matriz viável para dosagens de esteroides sexuais e estudos acerca da fisiologia reprodutiva de baleias de vida livre. A dosagem de hormônio da camada de gordura tem o potencial de indicar variações sazonais, estados de prenhez, picos de testosterona em machos, e diferenças entre machos e fêmeas. Quando combinada com comprimento corporal e história de vida, a dosagem hormonal pode promover informações ainda mais robustas acerca do estado reprodutivo dos indivíduos de determinada população. / The current study evaluated the possibility of extracting and measuring steroid hormones from the blubber of carcasses and living animals. Progesterone (P4), testosterone (T) and estradiol (E2) were successfully measured trough enzimaimunoassay technique. Stranded animals were sampled to validate the blubber collection. A set of experiments were performed: whether the state of decomposition of fat affects hormone levels; whether the body region from which samples were collected affects the levels of P4, E2, and T; whether the depth of the layer selected (outer, middle, inner) affects hormone levels; and finally the size of sample effect on hormone levels. All of these four elements can potentially alter the measurement final results. Also, biopsy sampling were done at a South Atlantic breeding Area, National Marine Park Abrolhos in 2011 and 2012; and in one feeding area, the Marine Park Francisco Coloane, locate at Chilean Patagonia. As expected females had higher P4 and E2 means compared to males, and males exhibited higher means of T than females. Also a reproductive seasonality was detected in E2 and T levels. T levels were higher in adult males during breeding season, especially in September and October. E2 were higher in both females and males during feeding season. This apparent inversion of E2 level to the reproductive condition is probably a result of the lag of the hormone from blood to blubber and the time for its metabolism to occur. Part of the adult females with calves and without calves had P4 levels similar to some pregnant cetacean species. Some of the biopsied animals had their body length estimated. The smallest female with calf had 10.21 meters. Males and females did not differ in total body length: 12.96 and 12.04 respectively. The bubbler showed to be a feasible biological matrix to measure sex hormones from free ranging humpback whales, and can indicate differences among sexes and reproductive states. When combined with total body length and life history, the hormone measurements can provide robust information on reproductive state of individuals.

O objetivo do presente estudo foi analisar a expressão gênica dos receptores de estrógeno (ERα e ERβ) e progesterona (PR) em oócitos e células do cumulus de cadelas nas diferentes fases do ciclo estral. Ovários de cadelas previamente avaliadas e submetidas à ovário-histerectomia foram fatiados, sob refrigeração, em PBS com 10% de SFB. No momento imediatamente pré-cirúrgico foi colhido sangue da cadela, que foi submetido posteriormente à dosagem de estradiol e progesterona. As cadelas foram agrupadas nas diferentes fases do ciclo estral de acordo com a avaliação prévia por colpocitologia, colposcopia e dosagem sérica de progesterona. Os oócitos recuperados após o fatiamento foram denudados mecanicamente. Oócitos e células do cumulus foram criopreservados separadamente e posteriormente foram submetidas a PCR em tempo real para quantificação relativa dos genes de interesse. A expressão gênica de ERα, ERβ e PR em oócitos e células do cumulus não foi diferente nas fases do ciclo estral. Foi possível, pela primeira vez, relatar a presença de ERα e ERβ em oócitos de cadelas. / The objective of the present study was to analyze the gene expression of estrogen (ERα and ERβ) and progesterone (PR) receptors in oocytes and cumulus cells on different phases of the estrous cycle in dogs. Ovaries from selected bitches were recovered after ovary-hysterectomy and sliced at low temperatures in PBS supplemented with 10% FCS. Immediately after surgery, blood samples were harvested for measurement of estrogen and progesterone serum concentration. Bitches were grouped within different phases of the estrous cycles, according to previous evaluation of colpocytology, colposcopy and serum progesterone levels. Oocytes recovered after slicing were mechanically denuded. Isolated oocytes and cumulus cells were cryopreserved and submitted to RT-PCR followed by a real time PCR for relative quantification of gene expression. Gene expression of ERα, ERβ and PR in oocytes and cumulus cells was not different among phases of the estrous cycles. For the first time it was possible to demonstrate ERα and ERβ in dog oocytes.

O objetivo deste estudo foi avaliar a dinâmica folicular ovariana, a concentração circulante de progesterona (P4) e a expressão hepática de genes (AKR1C4, AKR1D1, CYP3A4, CYP2C19, SRD5A1, SRD5A3) relacionados ao metabolismo de P4 durante protocolo de sincronização para IATF em novilhas Nelore (n = 16) e Holandesas (n = 16) submetidas a alto (ACMS) e baixo (BCMS) consumo de matéria seca/energia de acordo com o (NRC, 2001). O experimento foi realizado em arranjo fatorial 2 x 2 e delineamento cross-over. A dieta experimental foi fornecida por um período de 34 dias. Os animais foram pré-sincronizados com duas aplicações de cloprostenol sódico (500 µg,i.m. PGF2α, Sincrocio&reg, Ourofino Agronegócio), com intervalo de 12 dias (D -24 e D-12). Duas doses adicionais de PGF2α (18 e 12 h) foram administradas antes da inserção do dispositivo (D0). No D0, os animais receberam um dispositivo intravaginal de P4 (CIDR&reg, Zoetis, Brasil), 2 mg i.m. de benzoato de estradiol (BE, Sincrodiol&reg, Ourofino Agronegócio) e mais uma dose de PGF2α. Após 8 dias, o dispositivo de P4 foi retirado e 24 h após foi administrado i.m. 1 mg de BE. Foram realizados exames ultrassonográficos a cada 24h durante o período de permanência do dispositivo de P4, a cada 12h da retirada do dispositivo até a ovulação, e no D14 e D17 para mensurar o volume do corpo lúteo (CL). Foram realizadas coletas de sangue diárias do D0 ao D10. Uma única réplica foi realizada para biópsia hepática, que foi feita 48 h após a inserção de dispositivo de P4 (D2). Para os dados de dinâmica folicular e concentrações hormonais, os resultados foram analisados pelo PROC MIXED, e para os dados de expressão gênica pelo PROC GLIMMIX do SAS 9.3, e apresentados como média ± EPM. O número de folículos recrutados foi maior em novilhas Nelore que Holandesas (42,1 ± 3,4 vs. 23,5 ± 3,3, P < 0,001). Entretanto, não se verificou efeito da dieta no número de folículos recrutados (ACMS = 33,7 ± 3,3 vs. BCMS = 31,9 ± 3,3; P = 0,62). O diâmetro máximo do folículo dominante (mm) foi maior em novilhas Holandesas que novilhas Nelore (14,5 ± 0,4 vs. 13,0 ± 0,4, P = 0,009); e em animais com ACMS, que com BCMS (14,8 ± 0,4 vs. 12,7 ± 0,4; P = 0,0004). Ainda, novilhas Holandesas apresentaram maior volume do CL (mm3) que novilhas Nelore (6195 ± 427 vs. 3507 ± 461; P < 0,0001). Novilhas submetidas à BCMS apresentaram maior concentração plasmática de P4 ao longo do protocolo que novilhas submetidas à ACMS (P < 0,05), sendo isto mais evidente em novilhas Nelore (raça * dieta, P = 0,05). Novilhas Holandesas tiveram maior expressão de mRNA para SRD5A1, AKR1C4 e AKR1D1 (P < 0,05), que novilhas Nelore. Entretanto, a expressão de mRNA para CYP3A4 foi maior em novilhas Nelore que Holandesas (P < 0,0001). A expressão de mRNA para AKR1D1 foi maior em novilhas submetidas à ACMS comparada à BCMS (P = 0,004), e a expressão de mRNA para AKR1C4 foi maior em novilhas sob BCMS comparada à ACMS (P = 0,01). Os dados são indicativos de que pode existir característica inerente à raça e à dieta quanto à metabolização de P4, resposta folicular e modulação na expressão de genes envolvidos com a metabolização de P4 em fêmeas bovinas submetidas ao protocolo de sincronização da ovulação com dispositivo intravaginal de P4. / The objective of this study was to evaluate the circulating progesterone (P4) concentration, ovarian follicular dynamics, and liver-gene expression of genes (CYP2C19, CYP3A4, SRD5A1, SRD5A3, AKR1C4, AKR1D1) associated to P4 metabolism in Nelore (n = 16) and Holstein (n = 16) heifers, kept in high (HDM) or low (LDM) dry matter intake according NRC (2001) during a timed AI protocol. The experiment was performed in a cross-over factorial 2 x 2 design. The experimental diet was fed for a period of 34 days. Heifers were presynchronized with two prostaglandin treatments (500 µg,i.m. PGF2α, Sincrocio®, Ourofino Agronegócio) given 12 days apart (D-14 e D-12). Two further PGF2α treatments were also performed 18 and 12 h before device insertion (D0). At the beginning of the synchronization protocol (D0), all heifers received an intravaginal P4 device (CIDR®, Zoetis, Brazil), 2 mg i.m. of estradiol benzoate (BE, Sincrodiol&reg, Ourofino Agronegócio) and a PGF2α treatment. Eight days later, the P4 device was removed and 1 mg of BE was applied i.m. 24h later. Ultrasound exams took place at every 24h throughout the P4 device insertion period, at 12h intervals from device removal to ovulation, and again on D14 and D17 to measure corpus luteum (CL) volume. Daily blood sampling was performed from D0 to D10. A single liver biopsy was done 48 h after P4 device insertion (D2). The PROC MIXED procedure was used to analyze data from follicular dynamics and hormonal profiles, and gene expression records were analyzed by the PROC GLIMMIX of SAS 9.3. Results are presented as mean ± SEM. The number of recruited follicles was greater in Nelore than in Holstein heifers (42.1 ± 3.4 vs. 23.5 ± 3.3, P < 0.001). The diameter of the dominant follicle (mm) was greater in Holstein than in Nelore heifers (14.5 ± 0.4 vs. 13.0 ± 0.4, P = 0.009) and also for HDM heifers than for LDM (14.8 ± 0.4 vs. 12.7 ± 0.4; P = 0.0004). In addition, Holstein heifers had greater CL volume (mm3) than Nelore (6195 ± 427 vs. 3507 ± 461; P < 0.0001). Heifers submitted to BCMS have greater concentrations of P4 during the protocol that heifers submitted to ACMS (P < 0.05), and this is most evident in Nelore heifers (breed * diet, P < 0,05). Holstein heifers had greater mRNA expression of SRD5A1, AKR1C4 and AKR1D1 (P < 0.05) than Nelore heifers. The mRNA expression of the gene CYP3A4 was greater though in Nelore compared Holsteins (P < 0.0001). Furthermore, the mRNA expression of AKR1D1 was greater in heifers on HDM than in LDM (P = 0.004). In contrast, the mRNA expression of AKR1C4 was more expressed in heifers on LDM compared to HDM (P = 0.01). In conclusion, these results suggest that both cattle breed as well as level of dry matter intake can alter P4 metabolism, follicular dynamics and gene expression in heifers supplemented with exogenous P4 during synchronization programs.

Objetivando reduzir o manejo em protocolos de inseminação artificial em tempo fixo (IATF), quatro experimentos foram realizados para avaliar a dinâmica folicular (Experimentos 1A e 1B) e a taxa de concepção (TC; Experimentos 2, 3 e 4) em vacas de corte tratadas com Cipionato (CE) ou Benzoato (BE) de estradiol como indutores da ovulação. No Experimento 1A, 51 animais receberam 2mg de BE e um dispositivo intravaginal de progesterona (DIB) novo no D0. No D8, os animais foram distribuídos entre quatro tratamentos (G-BE8, G-BE8,5, G-BE9 e G-CE8). Neste dia, o dispositivo foi removido, 0,530mg de Cloprostenol e 300UI de eCG foram administrados [manhã (M) no G-BE8, G-CE8 e G-BE9; tarde (T) no G-BE8,5]. As vacas do G-CE8 receberam 1,0mg de CE, as do G-BE8 e G-BE8,5 receberam 1,0mg de BE na retirada do DIB, e aquelas do G-BE9 receberam 1,0mg de BE 24 horas após. Análises ultra-sonográficas foram realizadas a cada 12 horas, da retirada do dispositivo até a ovulação. Foram utilizados os PROC GLM e GLIMMIX do SAS para análise estatística. Nos experimentos não foram observadas interações. Os resultados para G-BE8, G-CE8, G-BE8,5 e G-BE9 foram, respectivamente: diâmetro do folículo ovulatório (FO;11,9±0,4b; 14,3±0,4a; 12,3±0,4b; e 13,3±0,abmm; P=0,01), taxa de ovulação (TO;100%; 90,0%; 100% e 91,7%; P=0,99] e intervalo retirada/ovulação (IRO;58,3±2,1b; 72,0±2,0a; 57,6±1,3b e 72,0±0,0ah; p<0,001). No Experimento 1B (n=35), foi utilizado arranjo fatorial 3x3 [números de uso do DIB vs protocolos de indução da ovulação (PIO)]. No D0, os animais foram divididos em três grupos [DIB novo (DIBN), usado 8 (DIB8) e 16 dias (DIB16)]. Na retirada do DIB, os animais foram redistribuídos para os PIOs descritos no Experimento 1A (exceto G-BE8). Os resultados para G-CE8, G-BE8,5 e G-BE9 foram, respectivamente: FO (14,0±0,6; 13,8±0,6 e 13,6±0,5mm; P=0,88), TO [81,8%; 83,3% e 83,3%; P=0,93] e IRO (72,0±2,0a; 59,6±1,6b e 73,2±1,2ah; p<0,01). Os resultados para DIBN, DIB8 e DIB16 foram respectivamente: FO (13,8±0,7; 13,5±0,6 e 13,9±0,5mm; P=0,99), TO [90,9%; 83,3% e 75,0%; P=0,93] e IRO (74,4±1,6a; 72,0±0,0ab e 68,0±2,0bh; P=0,02). No Experimento 2, 584 animais foram alocados em fatorial 3x2 [PIO (CE8, BE8,5 e BE9) e período de IATF (IATF-M ou IATF-T)], utilizando DIBN. Não houve diferença na TC: CE8 (57,5%), BE9 (59,9%) e BE8,5 (49,5%; P=0,09) e IATF M (56,6%) ou T (54,8%; P=0,66). No Experimento 3, 521 vacas foram divididas como no Experimento 2, porém com DIB8. Não houve diferença na TC nos PIOs: CE8 (47,3%), BE9 (53,3%) e BE8,5 (55,2%; P=0,10). Porém, houve diferença na TC para IATF-M (60,7%) ou IATF-T (48,3%; P=0,01). No Experimento 4, 1192 vacas foram distribuídas em fatorial 2x3x2 (DIBN e DIB8; BE8,5, BE9 e CE8; IATF-M e IATF-T). Não houve diferença na TC para: IATF-M (64,6%) ou IATF-T (59,5%; P=0,06) e PIOs; CE8 (65,8%), BE9 (61,8%) e BE8,5 (58,6%; P=0,12). Entretanto, houve diferença na TC (P=0,04) para uso do DIB; DIBN (65,0%) e DIB8 (59,4%). Esses resultados indicam que os PIOs apresentam mesma eficiência. Com DIB8, a IATF-T apresentou menor TC e o uso de DIB8 resultou em menor TC do que DIBN. / Aiming to minimize the number of handling during protocols for fixed-time artificial insemination (FTAI), four experiments were performed to evaluate the follicular dynamics (Experiments 1A and 1B) and conception rate (CR; Experiments 2, 3 e 4) in beef cows treated with estradiol cypionate (EC) or benzoate (EB) as ovulation inducers. In Experiment 1A, 51 animals received 2mg of EB and a new intravaginal progesterone device (DIB) on D0. On D8, animals were assigned into four treatments (G-EB8, G-EB8.5, G-EB9 and G-EC8). On the same day, the device was removed, 0.530mg of Cloprostenol and 300UI of eCG were administered [morning (AM) - G-EB8, G-EC8 and G-EB9; afternoon (PM) - G-EB8.5]. Cows of G-EC8 received 1.0mg of EC, while G-EB8 and G-EB8.5 received 1.0mg of EB at DIB removal, and those of G-EB9 received 1.0mg of EB 24h later. Ultrasonography was performed every 12h from DIB removal until ovulation. Statistical analysis was performed using PROC GLM and PROC GLIMMIX (SAS). No interactions were observed between treatments. Results of G-EB8, G-EC8, G-EB8.5 and G-EB9 were, respectively: diameter of ovulatory follicle (OF;11.9±0.4b; 14.3±0.4a; 12.3±0.4b; and 13.3±0.6abmm; P=0.01), ovulation rate (OR; 100%; 90.0%; 100% and 91.7%; P=0.99) and interval between device removal-ovulation (IRO; 58.3±2.1b; 72.0±2.0a; 57.6±1.3b and 72.0±0.0ah; p<0.001). Experiment 1B (n=35) was performed using a fatorial design 3x3 [DIB reutilization and ovulation inducer (OI)]. On D0, animals were allocated into three groups [new DIB (DIBN), used 8 (DIB8) and 16 days (DIB16)]. At DIB removal, animals were reallocated into the same OIs described on Experiment 1A, except by the G-EB8. The results of G-EC8, G-EB8.5 and G-EB9 were, respectively: OF (14.0±0.6; 13.8±0.6 and 13.6±0.5mm; P=0.88), OR [81.8%; 83.3% and 83.3%; P=0.93], and IRO (72.0±2.0a; 59.6±1.6b and 73.2±1.2ah; p<0.01). Results of DIBN, DIB8 and DIB16 were, respectively: OF (13.8±0.7; 13.5±0.6 and 13.9±0.5mm; P=0.99), OR (90.9%; 83.3% and 75.0%; P=0.93), and IRO (74.4±1.6a; 72.0±0.0ab and 68.0±2.0bh; P=0.02). At Experiment 2, 584 animals were allocated into a 3x2 fatorial design [OI (EC8, EB8.5 and EB9) and FTAI period (FTAI-AM or FTAI-PM)], being treated with DIBN. There was no difference on CR: EC8 (57.5%), EB9 (59.9%) and EB8.5 (49.5%; P=0.09) and IATF AM (56.6%) or PM (54.8%; P=0.66). On Experiment 3, 521 cows were allocated into the same experimental design of Experiment 2, however using DIB8. There was no difference on CR between different OIs: EC8 (47.3%), EB9 (53.3%) and EB8.5 (55.2%; P=0.10). However, there was difference on CR between FTAI-AM (60.7%) and FTAI-AM (48.3%; P=0.01). On Experiment 4, 1192 cows assigned into a 2x3x2 fatorial design (DIBN and DIB8; EB8.5, EB9 and C8; FTAI-AM and FTAI-PM). No differences were found on CR between FTAI-AM (64.6%) or FTAI-PM (59.5%; P=0.06), and OIs; EC8 (65.8%), EB9 (61.8%) and EB8.5 (58.6%; P=0.12). Cows treated with DIBN showed higher CR when compared to those treated with DIB8 (65.8 vs. 59.4%, respectively; P=0.04). These results indicate a similar efficiency using different OIs. Using DIB8, the FTAI-PM showed lower CR. Also the protocol using DIB8 resulted in lower CR than using DIBN.

Foram utilizados 60 animais da raça Holandesa, distribuídos em 2 grupos de acordo com número de lactação e em dois tempos de acordo com época de concepção. Para Alu-1, animais com genótipo Leu/Leu apresentaram maior produção de leite na lactação (p = 0,016) e tendência para maior produção ao pico (p = 0,054) que animais do genótipo Leu/Val. Não foi possível demonstrar efeito de genótipo para Dde-1 sobre nenhuma das variáveis estudadas. Houve correlação positiva entre níveis de IGF-1 e P4 (R2 = 0,28 e p = 0,011), correlação negativa entre IGF-1 DEAs, produção na lactação e produção ao pico de lactação (R2=- 0,267 e p = 0,016; R2=- 0,424 e p =0,0001; R2= -0,231 e p=0,0001, respectivamente). Houve tendência de correlação positiva entre escore corporal e níveis de P4 (R2 = 0,216 e p = 0,053). Concluí-se que o polimorfismo do fragmento de restrição identificado pela Alu-1 possa ser utilizado como marcador genético importante para seleção de gado leiteiro, e que o polimorfismo para Dde-1 não se apresentou como um bom marcador genético a ser utilizado para a raça Holandesa, o nível plasmático de IGF-1 parece ser um bom indicador do retorno a atividade reprodutiva. / Sexty female Holstein cows were used in this experiment, animals were arranged random in two groups in agreement lactation number and conception time.Animals with ALU-1 genotipe showed biggest milk production in lactation (p = 0,016) and tendence to biggest milk peak production than Leu/Val animals. Dde-1 didn?t showed genotipe effect for any variavels. There were positive correlactin among IGF-1 and progesterone (R2 =0,280 e p = 0,011). There were negative correlactin among IGF-1 and days open, lactation production, peak lactation (R2=- 0,267 p = 0,016; R2=- 0,424 p =0,0001; R2= -0,231 p=0,0001, respective). There were tendence of positive correlaction (R2 = 0,216 p=0,053) among body condition and progesterone levels. Basead on the results of the experiment, the Alu-1 polymorphism could be used as genetic markers to milk cow selection; DDE-1 polymorphism isnt indicate like genetic marker in Holstein cows; the IGF-1 levels seens a good indicator to return reproduction activite.

A Inseminação Artificial (IA) é a biotécnica que proporciona a maior pressão de seleção no melhoramento genético de um rebanho e, portanto deveria ser imprescindível na pecuária moderna. A ineficiência na detecção de estro e a baixa ciclicidade ovariana no período pós-parto constituem um grande entrave na aplicabilidade de programas de IA. Frente a estas dificuldades, o uso da Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF) vem incrementando os resultados obtidos, uma vez que elimina a necessidade de observação de estro e induz a ciclicidade de vacas em anestro pós-parto. Nos protocolos de IATF é de fundamental importância o uso dos dispositivos intravaginais para liberação de progesterona (P4). No mercado atual, estes dispositivos importados são fabricados à base de silicone, um polímero biocompatível, porém não biodegradável. Recentemente, dispositivos intravaginais de P4, incorporada à matriz polimérica biodegradável de poli-hidroxibutirato (PHB), vêm sendo estudados. Este trabalho teve como objetivo comparar a eficiência, em programa de IATF, de um novo dispositivo intravaginal (Progestar®), na taxa de prenhez, em bovinos da raça Nelore, com a do dispositivo à base de silicone, DIB®, atualmente disponível no mercado brasileiro. Foram utilizadas 240 vacas da raça Nelore, em um delineamento de blocos casualizados generalizados, divididas em dois grupos (controle - DIB® e tratamento - Progestar®, usados nos protocolos de sincronização e IATF). Foram realizados 2 experimentos distintos: no primeiro experimento utilizaram-se dispositivos de 1º uso (n=136), enquanto que no segundo experimento, dispositivos de 2º uso (n=104). As taxas de prenhez, decorrentes da IATF (TPIATF) e ao final da estação de monta (TPEM) (variáveis dependentes), foram comparadas por análise de variância, separando o efeito de tratamento, dos blocos e das interações. No experimento 1: não houve interação das variáveis com o tratamento; não houve efeito de tratamento sobre a TPIATF (DIB® - 66,7% e Progestar® - 65,8%) nem sobre a TPEM (DIB® - 95% e Progestar® - 94,7%); houve interação entre período pós-parto (PPP) e escore de condição corporal (ECC). Animais no PPP1 (45 a 70 dias) e ECC4 apresentaram resultados inferiores na TPIATF em relação aos animais ECC5 e 6; houve também interação entre PPP e escore de condição ovariana (ECO), em que animais no PPP2 (71 a 90 dias) que não estavam ciclando apresentaram resultados inferiores de TPIATF, em relação aos animais ciclando; e também não houve efeito das demais variáveis sobre a TPIATF e TPEM. No experimento 2: não houve interação das variáveis com o tratamento; não houve efeito de tratamento sobre a TPIATF (DIB® 2 - 61,6% e Progestar® 2 - 55,8%) nem sobre a TPEM (DIB® 2 - 94,2% e Progestar® 2 - 88,5%); houve interação entre categoria animal (Cat) e PPP, em que primíparas no PPP1 (32 a 55 dias) apresentaram resultados inferiores na TPEM em relação às primíparas no PPP2 (56 a 90 dias); houve também interação entre PPP e ECC, em que animais no PPP2 e com ECC4 apresentaram resultados inferiores de TPEM, em relação aos animais com ECC5; e também houve efeito negativo do PPP1 sobre a TPIATF e de um dos touros na TPEM. Após a realização do experimento concluiu-se que o Progestar® possui semelhante eficiência na taxa de prenhez, quando comparado ao DIB® e que ambos tratamentos têm potencial para proporcionar TPIATF acima de 50% e TPEM acima de 90%. / The artificial insemination (AI) is a biotechnique that causes the fastest genetic improvement of a herd and, therefore should be essential in the modern livestock. Heat detection inefficiency and low ovarian ciclicity in the postpartum period establish a great obstacle on applicability of AI programs. In front of these difficulties, the use of timed artificial insemination (TAI) improves the results, because eliminates the heat detection and induces the ciclicity of cows in anestrous postpartum. In TAI protocols is fundamental the use of intravaginal devices for releasing progesterone (P4). In the current market, these devices are imported and made of silicone, a biocompatible polymer, but not biodegradable. Recently intravaginal progesterone devices made of PHB, a biodegradable polymer, have been studied. The aim of this study was to compare the efficiency, in TAI program, of a new intravaginal device (Progestar®), on pregnancy rate, in Nelore cows, with a device made of silicone DIB®, currently available in the brazilian market. Were used 240 Nelore cows, in a generalized randomized block design, divided in two groups (control - DIB® and treatment - Progestar®, used in the synchronization protocols and TAI). Two experiments were done: the first experiment used new intravaginal devices (n=136), while the second experiment utilized used intravaginal devices (n=104). The pregnancy rates, of TAI (TAIPR) and breeding season (BSPR) (dependent variables), were compared by analysis of variance, separating the treatment, blocks and interactions effect. In experiment 1: there was no interaction between variables and treatment; there was no effect of treatment on TAIPR (DIB® - 66,7% and Progestar® - 65,8%) and on BSPR (DIB® - 95% and Progestar® - 94,7%); there was an interaction between postpartum period (PPP) and body condition score (BCS), in which animals in PPP1 (45 to 70 days) and BCS4 showed inferior results on TAIPR related to animals BCS5 and 6; there was also an interaction between PPP and ovary condition score (OCS), in which animals in PPP2 (71 to 90 days) not cyclic showed inferior results on TAIPR, related to cyclic animals; and there was also no effect of variables on TAIPR and BSPR. In experiment 2: there was no interaction between variables and treatment; there was no effect of treatment on TAIPR (DIB® 2 - 61,6% and Progestar® 2 - 55,8%) and on BSPR (DIB® 2 - 94,2% and Progestar® 2 - 88,5%); there was an interaction between animal category (Cat) and PPP, in which primiparous in PPP1 (32 to 55 days) showed inferior results on BSPR, related to primiparous in PPP2 (56 to 90 days); there was also an interaction between PPP and BCS, in which animals in PPP2 and BCS4 showed inferior results on BSPR, related animals BCS5; and there was also negative effect of PPP1 on TAIPR and one of the bulls on BSPR. This experiment showed that the Progestar® had the same efficiency on pregnancy rate, as the commercially available DIB® and both treatments have the potential to provide TAIPR above 50% and BSPR above 90%.

Com o aumento do número de animais inseminados por IATF (inseminação artificial em tempo fixo), a diminuição de custos e o incremento de índices reprodutivos têm sido os objetivos de vários grupos de pesquisa. Nos protocolos de IATF utilizados, empregam-se dispositivos de liberação sustentada de progesterona (P4), que são, em sua maioria, constituídos de um esqueleto de nylon, recoberto com uma camada de silicone com P4 . Visando a diminuição dos custos de produção e impacto ambiental, foi desenvolvido um dispositivo à base de biopolímeros. Neste estudo, foram comparados dispositivos confeccionados com uma blenda constituída de Poli-hidroxi-butirato (PHB) e Poli-&epsion;-caprolactona (PCL), com o Dispositivo Interno Bovino (DIB&reg;), utilizado como controle . No teste in vitro, utilizaram-se dois tipos de dispositivo à base de biopolímeros, com uma área superficial de 147 cm2: DISP8 (46% PHB, 46% PCL e 8% P4; n=4), DISP10 (45% PHB, 45% PCL, 10% P4; n=4) e o DIB&reg; (1 g de P4, área de 120 cm2; n=3). Os testes in vitro foram conduzidos segundo especificações da USP 23, em um dissolutor de comprimidos, empregando-se uma mistura de álcool/água (60/40) como meio de difusão. Amostras do meio foram colhidas aos 2 min., 2, 4, 8, 12, 24, 48, 60, 72, 84 e 96 h. Os teores de P4 foram dosados por espectrofotometria, em 244 nm de comprimento de onda. Realizaram-se as comparações 3 a 3 dos coeficientes angulares das retas obtidas pela regressão das concentrações acumuladas de P4, em função da raiz quadrada do tempo. As médias e respectivos erros-padrão dos coeficientes angulares foram de 677,39 ± 16.13 µg/cm2/t1/2 para o DIB&reg;, 566,17 ± 3.68 µg/cm2/t1/2 para o Disp8 e 774,63 ± 45.26 µg/cm2/t1/2 para o Disp10. Houve diferença entre o DISP8 e o DISP10 (p< 0,05), mas ambos não diferiram do DIB. Para análise das quantidades liberadas por dia de teste in vitro, consideraram-se 4 períodos: 0-24, 24-48, 48-72 e 72-96 h. Houve interação entre tratamento e tempo (p=0,0024). Nas primeiras 24 horas, o DISP8 liberou significativamente menos P4 do que o DISP10 e o DIB&reg;, cujas liberações não diferiram entre si. No intervalo entre 24 e 48h, o DISP 10 liberou significativamente mais P4 do que o DIB&reg;. O DISP8 liberou uma quantidade de P4 intermediária e não se diferenciou significativamente nem do DIB&reg; e nem do DISP10. No intervalo entre 48 e 72h a quantidade de P4 liberada pelo DISP10 foi significativamente maior do que a do DIB&reg; e a do DISP8, que não diferiram entre si. No intervalo entre 72 e 96h, o DISP10 liberou significativamente mais P4 do que o DIB&reg; e o DISP8 liberou uma quantidade intermediária que não diferiu do DIB&reg; nem do DISP10. No teste in vivo, seis vacas mestiças ovariectomizadas receberam DIB (n=4) ou DISP8 (n=8), em um delineamento alternado, com seqüência não balanceada (cross-over), adicionado de medidas repetidas no tempo, referentes aos 16 dias de colheita das amostras de sangue. As amostras foram analisadas por rádio-imuno-ensaio, em fase sólida, utilizando-se &quotkit&quot comercial da DPC (Diagnostics Products Corporation). As concentrações de pico foram atingidas 4 h após a colocação dos dispositivos e este foi o único momento em que as concentrações plasmáticas de P4 diferiram segundo dispositivo (11,45±1,96 vs 9,23±1,15 ng/mL, respectivamente para DIB e DISP8; p= 0,027). No dia 8 do ensaio, as concentrações plasmáticas de P4 proporcionadas pelo DIB e pelo DISP8 foram respectivamente 2,44±0,09 e 1,89±0,13 ng/mL (p=0.58). Ambos dispositivos mantiveram teores de P4 superiores a 1 ng/mL, durante os 16 dias do teste in vivo. Concluiu-se que os dispositivos confeccionados com a blenda dos biopolímeros PHB/PCL, podem liberar P4 de maneira sustentada, tanto quanto os que empregam silicone em sua fabricação. / With the increase in the number of animals inseminated by TAI (timed artificial insemination) the decrease of costs and the improvement of reproductive performance are the goals of several research groups. Progesterone devices which are majority constituted of a nylon skeleton covered with a silicone layer with P4, are used in TAI protocols. Aiming the decrease of the production costs and the environmental impact, was a new device developed with biopolymers matrix. In this study, were compared a blend of Poli-hidroxi-butirate (PHB) and poli-?-caprolactone (PCL) device with the Bovine Internal Device (DIB&reg;). In the in vitro test, two kinds of the new device with a superficial area of 147 cm2: DISP8 (46% PHB, 46% PCL and 8% P4; n=4), DISP10 (45% PHB, 45% PCL, 10% P4; n=4) and DIB&reg; (1 g of P4, area of 120 cm2; n=3). The in vitro tests were led following USP 23 specifications in a drug dissolutor in alcohol/water (60/40) solution as a diffusion medium. Samples were collected at 2 min., 2, 4, 8, 12, 24, 48, 60, 72, 84 and 96 hours. Progesterone concentrations were estimated by spectrophotometry at UV 244 nm wavelenght. Comparisons 3 by 3 of the angular coefficients of the straight lines obtained by the regression of the accumulated P4 concentrations in function of the square root of time were performed. The averages and respective standard-errors of the angular coefficients were 677,39 ± 16.13 µg/cm2/t1/2 to DIB&reg;, 566,17 ± 3.68 µg/cm2/t1/2 to Disp8 and 774,63 ± 45.26 µg/cm2/t1/2 to Disp10. Difference were observed between DISP8 and DISP10 (p< 0.05) but both did not differ to DIB&reg;. Four periods were considered for analysis of the amounts released per day of in vitro test: 0-24, 24-48, 48-72 and 72-96 hours. Interaction between treatment and time was observed (p=0.0024). In the first 24 hours DISP8 released significantly less P4 than DISP10 and DIB&reg; but the lathers did not differ from each other. In the interval between 24 and 48 hours DISP10 released significantly more P4 than DIB&reg;. The device DISP8 released an intermediary concentration of P4 and was similar to DIB&reg; and to DISP10. In the interval between 48 and 72 hours the progesterone concentration released by DISP10 was significantly higher than DIB&reg; and DISP8 but lathers did not differ from each other. In the interval between 72 and 96 hours DISP10 released significantly more P4 than DIB&reg; while DISP8 released an intermediary amount which did not differ to DIB&reg; or to DISP10. In the test in vivo test, six ovariectomized beef cows received the devices DIB&reg; (n=4) or DISP8 (n=8) in an alternated delineation in a nom balanced sequence (cross-over) added of repeated measures in time, related to the 16 days of blood samples collects. Progesterone concentration from these samples were measured by radioimmunoassay in solid phase using the commercial kit from DPC (Diagnostics Products Corporation). The peak of the progesterone concentrations were observed 4 hours after the devices insertion and this was the unique moment in which plasmatic progesterone concentrations differed depending on device (11,45 ± 1,96 vs 9,23 ± 1,15 ng/mL, respectively for DIB and DISP8; p= 0,027). After 8 days from the device insertion plasmatic progesterone concentrations provided by DIB and DISP8 were respectively 2,44 ± 0,09 and 1,89 ± 0,13 ng/mL (p=0.58). Both devices kept the progesterone concentration higher than 1 ng/mL during the 16 days of the in vivo test. In conclusion, the devices made with biopolymers blends of PHB/PCL can release sustained P4 comparable with silicone matrix.

As novas biotécnicas são ferramentas inovadoras no estudo da fisiologia da reprodução de cães, bem como na preservação do material genético de espécies ameaçadas de extinção. Tendo em vista, pois, a relevância de tais ferramentas, emprestou-se a este estudo o objetivo maior de avaliar os efeitos do 17-ß estradiol, progesterona e do co-cultivo em células da tuba uterina na maturação in vitro de oócitos de cães. Ovários de cadelas em anestro foram fatiados em PBS com 10% SFB. Os oócitos foram selecionados e divididos em 8 grupos: grupo 1 (sem suplementação hormonal), grupo 2 (20 µg/ml de 17-ß estradiol), grupo 3 (20 µg/ml de progesterona), grupo 4 (20 µg/ml de 17-ß estradiol e 20 µg/ml de progesterona), grupo 5 (co-cultivo em células da tuba uterina sem suplementação hormonal), grupo 6 (co-cultivo em células da tuba uterina + 20 mg/ml de 17-ß estradiol), grupo 7 (co-cultivo em células da tuba uterina + 20 µg/ml de progesterona) e grupo 8 (co-cultivo em células da tuba uterina + 20 µg/ml de 17-ß estradiol + 20 µg/ml de progesterona). O cultivo das células da tuba uterina foi realizado por no mínimo 48 horas previamente à adição dos oócitos. Para a maturação, utilizou-se TCM 199 suplementado com 2,5 µg/ml de FSH e 5 µg/ml de LH. Decorridas 48, 72 e 96 horas em estufa a 39&ordm;C, 5% de CO2 em ar e alta umidade, os oócitos foram fixados em paraformaldeído a 4% com Triton 10X e corados com Hoescht 33342 (10 µg/ml) em glicerol. O estágio de maturação nuclear (vesícula germinativa - VG, quebra da vesícula germinativa – QVG, metáfase I – MI, metáfase II – MII, degenerados ou não passíveis de determinação) foi avaliado em microscópio invertido equipado com luz ultravioleta e filtro de 365-420 de excitação/emissão. Os dados foram analisados mediante o PROC NPAR1WAY de análise de variância não paramétrica, sendo o efeito dos tratamentos verificado por meio do teste de Kruskal-Wallis, e as comparações múltiplas do teste de Wilcoxon com os tratamentos comparados dois a dois, considerando as diferenças significativas quando p<0,05. Verificou-se influência positiva da suplementação hormonal no desenvolvimento oocitário in vitro, particularmente com referência à adição de progesterona, associada ou não ao estrógeno. Não houve influência significativa do co-cultivo de células da tuba uterina na maturação oocitária em comparação aos meios de cultivo, sem presença de células epiteliais da tuba uterina, suplementados com hormônios esteróides. Conquanto sem significância estatística, verificou-se tendência de os oócitos, obtidos de cadelas em anestro, desenvolverem-se ao estágio de metáfase II após o período de maturação de 96 horas. Demonstrou-se, portanto, ser plenamente exeqüível o estudo da maturação de oócitos de cães em sistemas de cultivo in vitro a partir de ovários obtidos por ovário-histerectomia, tal estudo propicia, ademais, a pesquisa de características reprodutivas fisiológicas da espécie. / Recent biotechniques are innovative tools for the canine reproductive physiology research, as well as for assisted reproduction of endangered species. The aim of this study was to evaluate the effects of estradiol-17ß, progesterone and the co-culture with oviductal ephitelial cells on in vitro maturation. Ovaries from anestrous bitches were sliced in PBS with 10% FCS. Oocytes were selected and distributed in 8 groups: group 1 (no hormonal suplementation), group 2 (estradiol-17ß at 20 µg/ml), group 3 (progesterone at 20 µg/ml), group 4 (estradiol-17ß at 20 µg/ml + progesterone at 20 µg/ml), group 5 (co-culture in oviductal ephitelial cells without hormonal suplementation), group 6 (co-culture in oviductal ephitelial cells + estradiol-17ß at 20 µg/ml), group 7 (co-culture with oviductal ephitelial cells + progesterone at 20 µg/ml) and group 8 (co-culture with oviductal ephitelial cells + estradiol-17ß at 20 µg/ml + progesterone at 20 µg/ml). Oviductal ephitelial cells culture was performed at least 48 hours prior to oocyte co-culture. For in vitro maturation, TCM 199 supplemented with FSH (2.5 &micro;g/ml) and LH (5 &micro;g/ml) was utilized. After periods of 48, 72 and 96 hour at 39ºC in humidified atmosphere of 5% CO2 in air, oocytes were fixed with Triton-X10 in paraformaldehyde at 4% and and stained with Hoescht 33342 (10 µg/ml) in glycerol. Oocytes were examined through an inverted fluorescence microscope equipped with a 365-420 nm wavelength excitation/emisson filter. Nuclear maturation was classified according to chromatin configuration as: germinal vesicle stage (GV), germinal vesicle break down (GVBD), metaphase I (MI), metaphase II (MII) and degenerated and unidentifiable oocytes. Data was evaluated through PROC NPAR1WAY of non parametrical variance analysis and treatment was verified by the Kruskal-Wallis test and the Wilcoxon test for multiple comparisions. Differences were considered significant at p<0.05. Positive influence of hormonal supplementation for oocyte development rates was verified, particularly with respec to progesterone. No significant influence of oviductal cells co-culture was however verified. In addition, a tendency of the oocytes reaching metaphase II in the 96 hour period was observed. Therefore, the study of canine in vitro oocyte maturation is feasible and provides an important tool for reproductive physiology research.

O objetivo do presente estudo foi caracterizar implantes de Progesterona e suas reutilizações e avaliar sua eficiência. Três experimentos foram conduzidos: para avaliação das quantidades de P4 liberadas (Experimento in vitro), teores plasmáticos proporcionados (Experimento in vivo - vacas ovariectomizadas) e taxas de concepção na IATF (Experimento a campo vacas paridas). No experimento in vitro, as três reutilizações do implante foram testadas em dissolutor de comprimidos com seis cubas, tendo uma solução álcool/água (60:40) como meio de difusão. Dois ensaios foram realizados, totalizando 12 implantes, sendo que no terceiro uso do dispositivo foi adicionado um anel de P4 (0,1g) e no quarto uso foram adicionados 2 anéis (0,1g cada). Os implantes novos foram testados em quadruplicata em um terceiro ensaio, com a mesma metodologia. Amostras foram coletadas nos tempos 2 min, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72 e 96h. As quantidades de P4 foram dosadas por Cromatografia Líquida de Alto Desempenho (HPLC). Para quantidade acumulada de P4, segundo dispositivo, em função do tempo, houve interação tempo*tratamento (P=0,0002). A quantidade de P4 diferiu (P=0,0152) conforme os subseqüentes usos dos implantes Cronipres® e também em relação ao tempo (P<0.0001). As equações que descrevem as quantidades liberadas são: dispositivos novos y = 240,69 + 84,127A x (R2=0,9721); 2°uso y = 75,918 + 42,595B x (R2=0,8858); 3°uso - y=62,94 + 31,29C x (R2=0,8629) e 4° uso y = 40,595 + 32,148C x (R2=0,7205). No experimento in vivo, cada uso foi testado em triplicata, totalizando 12 animais. Os implantes foram inseridos e amostras de sangue foram colhidas nos tempos 0 (momento da colocação do implante), 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168 e 192h. As dosagens de P4 foram realizadas por Rádio-Imuno-Ensaio RIE, com kit comercial da DPC (Diagnostics Products Corporation, EUA). A AUC diferiu entre o primeiro e segundo (p<0,0001), segundo e terceiro (p=0,0010), mas não entre o terceiro e o quarto usos (p=0,8764). Para análise estatística destes experimentos, foram utilizados os PROC IML, GLM (comando REPEATED) e REG (teste in vitro, o qual gerou uma equação de regressão) ou avaliação da area under the curve AUC no teste in vivo, pelo teste t. No teste a campo, quatro lotes de vacas de corte paridas (n=763) Nelore e Simental x Nelore, com idade variando entre 3 e 10 anos e condição corporal entre 4 e 7 (escala de 1-9) foram utilizados. No D0 do tratamento todos os animais receberam 2 mg i.m. de Benzoato de Estradiol (Cronibest® - Biogénesis-Bagó, Argentina) e um implante Cronipres® (implante novo, contendo 1 g de P4 n=194; implante de segundo uso, n=190; implante de terceiro uso acrescido de um anel complementar de P4 (0,1g de P4), n=191; implante de quarto uso com um anel de P4 usado e dois anéis de P4 novos, n=188). No D8 procedeu-se a retirada do implante e aplicação i.m. de 300 UI de eCG (Novormon®, ScheringPlough, EUA) e 150 µg i.m. de D-cloprostenol (Croniben®, Biogénesis-Bagó, Argentina). No D9, todos os animais receberam 1mg i.m. de Benzoato de estradiol (Cronibest®) e, após 30h, foi realizada a IATF. Em todos os lotes, os tratamentos foram igualmente distribuídos. Os dados foram submetidos à regressão com análise de variância (PROC GLIMMIX do SAS Statistical Analysis Sistem®), separando-se como causas de variação: tratamento (implante novo, 2° uso, 3° uso e 4° uso), escore de condição corporal (ECC<5, ECC5 e ECC>5), ciclicidade (ciclando e nãociclando), lote (1 a 4), período pós parto (<3 meses, 3 a 5 meses e >5meses) e grau de sangue (Nelore e Simental X Nelore) e suas interações, eliminando-se as variáveis do modelo quando estas apresentavam p >0.2. No modelo final permaneceram as variáveis: tratamento (p=0,18), grau de sangue (p=0,11) e lote (p=0,14). Não houve diferença estatística nas TC segundo tratamento (implante novo 55,1%, 2° uso 47,9%, 3° uso 48,7%, 4° uso 44,15%) (p=0.18). A taxa de concepção geral foi de 49,1%. / The aim of this study was to characterize progesterone devices and their reuse and to evaluate its efficiency. Three experiments were conducted: to assess the quantities of released P4 (in vitro trial), plasma levels provided (in vivo trial -ovariectomized cows) and conception rates at FTAI (field trial suckled beef cows). In vitro trial, the three reuses of devices were tested in a tablet dissolutor with six tanks, with a solution of alcohol / water (60:40) as way of dissemination. Two trials were conducted, totaling 12 implants. The third use of the device was added with a P4 ring (0.1 g) and in the fourth use two rings were added (0.1 g each). The new implants were tested in quadruplicate in a third trial, using the same methodology. Samples were collected at 2 min, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72 and 96h. The amounts of P4 were measured by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). For the cumulative amount of P4, there was a time * treatment interaction (P = 0.0002). The amount of P4 differed (P = 0.0152) as the subsequent use of implants Cronipres ® and also over time (P <0.0001). The equations that describe the amounts released are: new devices - y = 240.69 +84.127A x (R2 = 0.9721), second use - y = 75.918 +42.595B x (R2 = 0.8858), third use - y = 62.94 + 31.29C x (R2 = 0.8629) and fourth use - y = 40.595 + 32.148C x (R2 = 0.7205). In the in vivo trial, each use was tested in triplicate, totaling 12 animals. The implants were inserted and blood samples were collected at time 0 (time of implant insertion), 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168 and 192h. The dosages of P4 were performed by Radio-Immuno-Assay RIA, using a commercial kit from DPC (Diagnostics Products Corporation, USA). The area under the curve differed between the first and second (p <0.0001), second and third (p = 0.0010) but not between the third and fourth use (p = 0.8764). For the statistical analysis of these experiments, the PROC IML, GLM (command REPEATED) and REG (for in vitro test, which generated a regression equation) or the t test (for the area under the curve assessment in vivo test), were used (Statistical Analysis System - SAS). In the field test, four groups of suckled Nellore and Simmental x Nellore beef cows (n = 763), aged between 3 and 10 years and body condition score between 4 and 7 (range 1-9) were used. On D0 of treatment all animals received 2 mg im of estradiol benzoate (Cronibest ® - Biogénesis-Bagó, Argentina) and an implant Cronipres ® (new implant containing 1 g of P4, n = 194; second use implant, n = 190; third use implant added with of an additional ring of P4 (0.1 g of P4), n = 191; fourth use implant added with a used ring of P4 and two new rings of P4, n = 188). On D8 the implant was removed and an i.m. application of 300 IU of eCG (Novormon ®, Schering-Plough, USA) and 150 mg i.m D-cloprostenol (Croniben ®, Biogénesis-Bagó, Argentina) was performed. On D9, all animals received 1 mg i.m. of estradiol benzoate (Cronibest ®) and after 30h, FTAI was performed. In all groups, the treatments were equally distributed. Data were subjected to regression with analysis of variance (PROC GLIMMIX in SAS ® Statistical Analysis System), separating as causes of variation: treatment (new use, second, third and fourth use), body condition score (BCS <5, ECC5 and BCS> 5), cyclicity (non-cycling and cycling), groups (1-4), postpartum period (<3 months, 3-5 months and> 5mounths) and breed (Nellore and Simmental x Nellore) and their interactions, eliminating the variables of the model when they showed p> 0.2. In the final model was consisted of treatment (p = 0.18), breed (p = 0.11) and group (p = 0.14). There was no statistical difference in conception rates between treatments (new device - 55.1%, second use - 47.9%, third use - 48.7% and fourth use - 44.15%) (p = 0.18). The overall conception rate was 49.1%.