Em mulheres, o câncer de mama é o tipo mais incidente depois do tumor de pele não melanoma e é a principal causa de morte por câncer. Apesar dos avanços já alcançados na caracterização da doença, a busca por novos marcadores moleculares para diagnóstico, tratamento e entendimento molecular da doença é de extrema importância. Estudos em nosso laboratório apontaram a proteína EMC1 (do inglês, Endoplasmic Reticulum Complex 1) como relacionada a propriedades malignas em linhagens celulares de câncer de mama e melanoma, assim como aumento no crescimento tumoral em ensaios in vivo. Despertou-se, então, o interesse em nosso laboratório, no estudo das outras proteínas do complexo EMC. Este estudo atual, busca analisar dados em larga escala do banco TCGA em um painel de 32 tipos tumorais, e aponta associação da expressão de diversas proteínas EMCs a pior sobrevida dos pacientes. O gene EMC2, que se localiza na região cromossômica altamente amplificada em diversos tumores (8q23.1), se destaca pela intensidade de pacientes com superexpressão em câncer de mama (40%). Em linhagens desse tipo tumoral, o knockdown de EMC2 aponta redução na taxa proliferativa, assim como associação à progressão do ciclo celular na fase M, quando feito o protocolo de sincronização utilizando a droga nocodazol. Em conjunto, nossos dados sugerem que o complexo EMC pode favorecer o desenvolvimento de tumores e influenciar em sua malignidade. Além disso, a proteína EMC2 parece apresentar funções relacionadas a proliferação e possivelmente, ciclo celular. / In woman, the breast cancer is the most incidence type after skin tumor non melanoma and it is a main cause of cancer death. Despite the advances already achieved in the disease caracterization, the search for novel molecular biomarkers to diagnostic, treatment and disease knowledge is extremely importante. In vitro approaches pointed Endoplasmic Reticulum Complex 1 (EMC1) involvement in malignant properties in breast cancer and melanoma cell lines, and increase in tumor growth in a in vivo assay. It highlighted the study of the other members of EMC complex. In this study, we used a large-scale database from TCGA in a range of 32 tumoral types, and showed association in EMC expression and poor surviving curve. The EMC2 gene, localized in a high amplified chromosome region in cancer (8q23.1), have a interesting upregulation level in breast cancer (40%). In knockdown EMC2 cell lines, the proliferation is less intense and progression in M phase, in a nocodazole sincronization assay, is impaired. Together, the data suggest that the EMC complex favors the tumour development and the EMC2 protein seens to play a role in proliferation and maybe in cell cycle.

Orientadores: João Ernesto de Carvalho, Mary Ann Foglio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T06:52:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Longato_GiovannaBarbarini_M.pdf: 3207604 bytes, checksum: 101ab74753d736c58751655cdb930feb (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O câncer é um conjunto de doenças que atinge milhões de pessoas, sendo a segunda causa de morte da população mundial. Caracteriza-se pelo desenvolvimento de células instáveis que passam a não responder aos estímulos internos e externos que controlam a proliferação, diferenciação e morte celular. Apesar da grande quantidade de estudos relacionados ao gênero Piper e suas espécies, não há descrição sobre a atividade antiproliferativa in vitro e antitumoral in vivo da espécie P. regnellii (Miq.) C. DC. var. regnellii. O presente estudo avaliou a atividade antiproliferativa in vitro desta espécie, coletada em três épocas diferentes: junho e outubro de 2008 e fevereiro de 2009. Dentre as coletas realizadas, o extrato bruto diclorometânico de junho e suas frações de média polaridade apresentaram atividade citotóxica in vitro com boa correlação entre concentração e efeito e também seletividade para as linhagens hormônio-dependentes de ovário (OVCAR-3) e mama (MCF7), bem como para as linhagens de melanoma (UACC- 62) e próstata (PC-3). De acordo com os nossos estudos, uma das substâncias responsáveis por esta atividade é uma neolignana denominada eupomatenóide-5. Os efeitos observados in vitro pela fração rica em lignanas foram comprovados em modelo in vivo de tumor sólido de Ehrlich. Além disso, o extrato bruto diclorometânico de P. regnellii reduziu o edema de pata produzido por carragenina sugerindo uma correlação entre câncer e inflamação. Este é o primeiro trabalho que relata o efeito antiproliferativo e antiinflamatório de P. regnellii e os resultados obtidos incentivam a continuação dos estudos visando a elucidação do mecanismo de ação e identificando outros princípios ativos que, em sinergismo com o composto eupomatenóide-5, potencializem a atividade de P. regnellii. / Abstract: Cancer is a pool of many diseases diagnosed in thousands of people all over the world and represents the second major cause of death worldwide. The loss of normal cell growth control is the main event in the development of cancer and includes specific steps known as cell proliferation, differentiation and apoptosis. Despite numerous studies related to Piper genus, there is no description of any antiproliferative (in vitro) or antitumoral activity (in vivo) of Piper regnellii (Miq.) C. DC. var. regnellii. The present study evaluated the antiproliferative activity of this species, collected in three different periods: June and October, 2008 and February 2009. Among the plants evaluated, the medium polarity fractions obtained from the dichloromethanic crude extract of the plants collected in June presented concentration-effect correlation and also selectivity towards hormonedependent ovary (OVCAR-3) and breast (MCF7) cell lines, as well as melanoma (UACC- 62) and prostate (PC-3). According to our studies, one of the compounds responsible for this activity is classified as eupomatenoid-5, that is a neolignan. Effects observed in vitro for the lignans enriched fractions were confirmed through the Ehrlich solid tumor model in mice. In addition, preliminary results with dichloromethane crude extract of P. regnellii in anti-inflammatory experimental model of paw edema induced by carrageenan suggest the connection between cancer and inflammation. The present study represents the first report of both antiproliferative and anti-inflammatory promising activities of this species indicating the benefits of further studies in the search of more purified compounds and active principles that in synergism with eupomatenoid-5 can potentiate anticancer activity's result, as well as their mechanisms of action. / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Marcio Ajudarte Lopes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-17T15:24:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gouvea_AdrieleFerreira_D.pdf: 1529519 bytes, checksum: 67d58c675522b5dd769d5fcad163d152 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Leucoplasia verrucosa proliferativa (LVP) tem como principais características acometer principalmente mulheres, com idades acima dos 60 anos, sem hábitos nocivos, com lesões multifocais, recorrentes após excisão e com altas taxas de malignização. Alguns estudos com proteínas que podem estar envolvidas no controle do ciclo celular, incluindo Mcm2 e geminina, e análise de ploidia do DNA têm sido realizados com o objetivo de identificar lesões com maior predisposição para transformação maligna. Objetivos: Determinar a correlação das características clinicopatológicas de 21 pacientes com diagnóstico de LVP a seu estado de ploidia do DNA e expressão de Ki-67, Mcm2 e geminina. Métodos: 65 amostras de biópsia de 21 pacientes com LVP e 12 amostras de mucosa oral normal foram coletados, feitas imunoistoquímicas para ki-67, Mcm2 e geminina e realizada a análise da ploidia do DNA utilizando citometria de imagem (ACIS III); Resultados: Relação mulher: homem foi de 6:1 e a média de idade foi 65,5 anos. Dos 21 casos, 17 (80,96%) não reportaram fumo ou consumo de bebidas alcoólicas. Transformação maligna foi observada em nove pacientes (42,86%), em um tempo de seguimento clínico de 7,38 anos. Dos 21 pacientes, vinte tiveram seu DNA analisado por citometria de imagem e aneuploidia foi encontrada em 95,24% dos casos. A freqüência e severidade da aneuploidia e valores médios do índice de heterogeneidade (HI) aumentaram de acordo com o aumento das anormalidades epiteliais (p<0.0001), assim como as frações excedentes de 5n (p=0.0007). Os casos que desenvolveram carcinoma não apresentaram status aneuplóide mais grave do que as outras amostras (a maioria foi moderadamente aneuplóide). Em cinco casos as biópsias iniciais apresentando hiperqueratose e acantose ou displasia leve mostraram status aneuplóides e progrediram para carcinoma (55,5%). Não houve correlação entre os graus de displasia e a expressão de das diferentes proteínas estudadas, exceto para Mcm2 (p= 0.0317). Conclusões: Estes achados associados aos altos índices de anormalidades na ploidia do DNA podem contribuir para previsão de áreas com chances de malignização e suportam a afirmação de que LVP é uma entidade de fato distinta. / Abstract: Proliferative verrucous leukoplakia (PVL) presents as main characteristics: affects mostly women, with ages over 60 years, not presenting harmful habits; presence of multifocal lesions, recurrent after excision, with high malignization rates. Some studies with proteins that may be involved in the cell cycle control, including Mcm2 and geminin, and DNA ploidy analyzis has been performed aiming to identify lesions with a greater predisposition to malignant transformation. Objectives: To determine the correlation of the clinicopathological features of 21 PVL patients with their DNA ploidy status and Mcm2, geminin and Ki-67 expression. Methods: 65 biopsy specimens of 21 PVL patients and 12 normal oral mucosa were collected; immunohistochemistry to Mcm2, geminin and ki-67 and DNA ploidy analysis using image based citometry (ACIS III) were performed. Results: Female: male ratio was of 6:1 and the average age was 65.5 years. Of the 21 PVL cases, seventeen (80.96%) did not report smoking or alcoholic habit. Malignant transformation was observed in nine patients (42.86%). Of the 21 patients, twenty had the DNA examined by an image-based cytometry and aneuploidy was found in 95.24% of the cases. The frequency and severity of aneuploidy and the mean values of DNA HI increased according to the epithelial abnormality (p<0.0001), as well the 5n exceeding fractions (p=0.0007). Cases that developed carcinoma did not presented higher ploidy status compared to the other samples (the majority was moderately aneuploidy). In five cases (55.5%), initial biopsies presenting hyperkeratosis and acanthosis or mild dysplasia showed aneuploid status and latter developed carcinoma. There was no correlation between the grades of dysplasia and the LI of different immunohistochemically studied proteins, except for Mcm2 (p= 0.0317). Conclusions: This finding associated to the high incidences of DNA ploidy abnormalities may contribute to predict areas prone to malignant transformation and to support the hypothesis that PVL is a distinct entity. / Doutorado / Patologia / Doutor em Estomatopatologia

Orientador: Cristina Pontes Vicente / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T06:17:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carneiro_GianeDaniela_M.pdf: 3364731 bytes, checksum: 2f5ed663ad69815d0943761ec70e6408 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: As células progenitoras endoteliais (CPEs) foram descritas por Asahara et al. (1997), isoladas a partir do sangue periférico e são células originadas da medula óssea. Estas células podem ser reconhecidas pela expressão de marcadores como o CD34, CD133, VEGFR2 e o CD31, pela capacidade de internalização de acLDL e de formar estruturas semelhantes a vasos quando cultivas em matrizes tridimensionais. Quando ocorrem lesões endoteliais, elas podem ser mobilizadas da medula migrando para o sangue periférico e atuar no local da lesão arterial, podendo se diferenciar em células endoteliais maduras e promover a re-endotelização do vaso lesionado. Contudo, estas células estão presentes na medula óssea e no sangue periférico em quantidade muito pequena, 0,1 e 0,01% do total de células respectivamente, o que leva diversos grupos de pesquisa buscarem selecionar e cultivar estas CPEs visando aumentar seu número para melhor caracterizá-las in vitro e in vivo. Em nosso trabalho, buscamos estabelecer um meio de cultura capaz de sustentar o crescimento, proliferação e diferenciação das células progenitoras endoteliais isoladas a partir de medula óssea de camundongos C57bl/6, e de caracterizar seus vários estágios de diferenciação destas células em diferentes tempos de cultura. Para tal, células mononucleares foram isoladas da medula de camundongos C57bl/6 por gradiente de Ficoll-Paque PLUS e cultivadas por 3, 7 e 14 dias em meios de cultura diferentes acrescidos de diferentes fatores de crescimento (VEGF, IGF, bFGF e EGF) com concentrações variadas. Dentre todos os meios testados, o DMEM1-M1 (DMEM com vermelho de fenol acrescido de VEGF, IGF e bFGF) foi o que apresentou melhores resultados para os ensaios de proliferação, de viabilidade celular por DAPI, Azul de Tripan e MTT. A partir deste meio foram realizados testes para verificar a expressão de marcadores celulares (CD133, CD34, VEGFR-2 e CD31) por imunocitoquímica, imunofluorescência, Western Blotting e citometria de fluxo. Os resultados de imunocitoquímica e imunofluorescência foram positivos para todos os marcadores, em todos os períodos analisados. A análise por Western Blotting confirmou a expressão destes marcadores, com aumento na expressão de 3 para 7 dias de cultura. Por citometria de fluxo analisamos o perfil destas células em cultura de 7 dias comparando com as células in vivo, e conseguimos visualizar um aumento principalmente na freqüência de células que expressam VEGFR-2, um indicativo de que o meio utilizado está selecionando células progenitoras. A internalização de acLDL que também indica CPEs foi positiva após 7 e 14 dias. As células cultivadas em Matrigel® formaram estruturas semelhantes a vasos após 7 dias de cultura. Nossos resultados indicam que fomos capazes de estabelecer um meio de cultura eficiente na seleção e proliferação de CPEs, inibindo sua diferenciação inicial em células endoteliais, o que nos permitirá utilizar esta técnica de cultura para expandir o número de CPEs obtidas da medula óssea e poder utilizá-las no tratamento de lesões arteriais e em diferentes processos de terapia celular / Abstract: Endothelial progenitor cells (EPCs) were described by Asahara et al. (1997) isolated from peripheral blood, these cells are derived from bone marrow. EPCs can be characterized by the expression of cellular markers like CD34, CD133, VEGFR2 and CD31, internalization of acLDL and formation of structures similar to vessels when culture in tridimensional matrices. In the presence of endothelial lesion, they can be mobilized from bone marrow, migrating to peripheral blood and subsequently the endothelial lesion site. They can differentiate into mature endothelial cells and participate in the re-endothelization of the damaged vessel. However these cells are rare in bone marrow and peripheral blood 0,1 and 0,01%, respectively, several research groups are trying to develop strategies to isolate and cultivate these cells to better determine their characteristics in vitro and in vivo. In our study we tried to establish a culture medium able to sustain growth and proliferation of EPC obtained from C57bl/6 mice bone marrow and characterize the stages of differentiation that they could present in different times of culture. In order to do it, we isolated mononuclear cell from bone marrow using a Ficoll-Paque PLUS gradient and cultivated then for 3, 7 and 14 days using culture mediums with different compositions and concentrations of growth factors (VEGF, IGF, bFGF, EGF). Cellular growth determined by DAPI, trypan blue counting and MTT was more significant with the medium we named DMEM1-M1 (with VEGF, IGF and bFGF). Results obtained with immunocitochemistry and immunofluorescence with this medium was positive in all culture times. Western blotting demonstrated the expression of VEGFR2, CD34 and CD133 in 3 e 7 day, with a litte increase after 7 days. Flow citometry analysis of cells after 7 days in culture demonstrated an increase in cells expressing VEGFR2, indicating the selection of EPC with this medium. Internalization of acLDL and formation of structures similar to vessels were observed after 7 and 14 days in culture and confirms differentiation of mononuclear cells into EPC. So, in conclusion, our results indicate that we developed a culture medium able to sustain proliferation and differentiation of EPCs, inhibiting their terminal differentiation what will allow us to use this culture technique to increase the number of EPC from bone marrow obtained and in the future use these cells in the treatment of arterial lesions in different process of cellular therapy / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

A anóxia neonatal, considerada problema clínico mundial, é importante causa de lesão encefálica em neonatos que pode apresentar consequências graves e permanentes, como déficits cognitivos e comportamentais. O objetivo deste estudo foi analisar longitudinalmente possíveis alterações na morte, proliferação e diferenciação neuronais no hipocampo de ratos submetidos à anóxia neonatal. Para tanto, utilizamos modelo adaptado e validado em nosso laboratório. Os resultados mostraram que a anóxia neonatal causa morte neural em CA1 e CA2-3, detectadas pela maior quantidade de células TUNEL+ em CA1 e CA2-3 e FJB+ em CA2-3, além de diferentes tipos de morte neuronal em CA1 e GD, 24 horas após a anóxia,observadas por microscopia eletrônica. Houve aumento do volume de CA1 em P14 no grupo anóxia, porém o padrão de proliferação na zona subgranular não foi alterado. Enfim, a anóxia neonatal promoveu diminuição da neurogênese em animais adultos, o que poderia estar associado aos déficits de memória espacial e aprendizagem descritos em literatura para modelos similares. / Neonatal anoxia, considered a worldwide clinical problem, is a major cause of brain injury in neonates and may present serious and permanent consequences such as cognitive and behavioral deficits. The aim of this study was to analyze possible changes longitudinally in neural death, proliferation and neuronal differentiation in the hippocampus of rats submitted to neonatal anoxia. We used an adapted model validated in our laboratory. The results showed that neonatal anoxia cause neural death in CA1 and CA2-3 detected by the TUNEL+ cells in CA1 and CA2-3 and FJB+ in CA2-3, and different types of neuronal death in CA1 and GD 24 hours of anoxia, observed by electron microscopy. There was an increase in the volume of CA1 in the P14 anoxia group but the pattern of proliferation in the subgranular zone was not changed. Anyway, neonatal anoxia caused decrease in neurogenesis in adult animals, which could be associated with deficits in spatial memory and learning described in the literature in similar models.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-11-30T11:20:19Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rodrigo Fernandes de Lima - 2015.pdf: 2077886 bytes, checksum: 41cc0e061b83ff79f5098eb054d1fcda (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-11-30T11:21:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rodrigo Fernandes de Lima - 2015.pdf: 2077886 bytes, checksum: 41cc0e061b83ff79f5098eb054d1fcda (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-30T11:21:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rodrigo Fernandes de Lima - 2015.pdf: 2077886 bytes, checksum: 41cc0e061b83ff79f5098eb054d1fcda (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-03-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The neonatal development is stimulated by various hormonal interactions. Environmental pollutants that mimic steroid hormones, such as bisphenol A (BPA) can cause changes in the pattern of development of the prostate, leading to lifelong lesions. The objective of this study was to determine whether neonatal exposure to BPA affects the development of prostate gerbils males and females. For this, the newborns were exposed to environmental levels (LBPA - 40 μ / kg / day) and high dose (HBPA - 4 mg / kg / day) of BPA, from 1st to the 7th day of life. On the eighth day, the prostatic complexes were collected and processed for morphological analysis, stereological and immunohistochemistry. It was observed through the three-dimensional reconstruction that in males the prostatic buds have elongated in a "V" form towards the ventral condensed mesenchyme (VMP). The stereological data of males showed a significant increase in the relative frequency of the mesenchymal compartment in the LBPA group compared to other groups (p ≤ 0.05). The AR-positive cells became significantly more frequent in the periurethral mesenchyme (PEM), ventral epithelial buds (VB) and muscle layer (SM) in the BPA group. There was a reduction in the frequency of PCNA-positive cells in the periurethral buds (PeB) and in the SM of the LBPA group. In females, the three-dimensional reconstruction showed that PeBs can emerge from one or both sides of the urethra and it was also visible a significant paraurethral mesenchyme (MAP) reduction in the BPA group. Only females of the HBPA group apparently presented paraurethral buds (PAB) more developed. In the LBPA group it was observed an increase in the AR-positive cells frequency in the PeM and a decrease of these cells in the PeB and mesenchyme paraurethral (PaM). In the HBPA group the AR-positive cells were more frequent in the PeM and PaB and reduced in PeB and PaM. PCNA-positive cells became significantly less frequent in the PaB and PaM of LBPA and HBPA groups. Regarding the ER-α positive cells in the group LBPA females showed a reduction in the immunoblots of PeM and MS, whereas in the group HBPA this reduction occurred only in the PaM. This study revealed that the postnatal development of the prostate of female gerbils occurs earlier and are morphologically distinct from what occurs in males of the same species. Furthermore, it can be seen that the BPA exerted a proliferative effect on the prostate gland of males and females with eight days of postnatal life, though females being more susceptible to this environmental chemicals. / O desenvolvimento neonatal é estimulado por diversas interações hormonais. Os poluentes ambientais que mimetizam hormônios esteróides, como o bisfenol-A (BPA), podem causar alterações no padrão de desenvolvimento da próstata, levando a lesões ao longo da vida. O objetivo deste estudo foi verificar se a exposição neonatal ao BPA afeta o desenvolvimento da próstata de gerbilos machos e fêmeas. Para isso, os recém-nascidos foram expostos a níveis ambientais (LBPA – 40 μ/kg/dia) e doses elevadas (HBPA – 4 mg/kg/dia) de BPA, do 1° ao 7º dia de vida. No oitavo dia, os complexos prostáticos foram coletados e processados para as análises morfológica, estereológica e imunohistoquímica. Com a reconstrução tridimensional observamos que nos machos os brotos prostáticos se alongaram em forma de “V” em direção ao mesênquima condensado ventral (VMP). Os dados estereológicos dos machos demonstraram um aumento significativo na frequência relativa do compartimento mesenquimal do grupo LBPA em relação aos demais grupos (p ≤ 0,05). As células AR-positivas tornaram-se significativamente mais frequentes no mesênquima periuretral (PeM), brotos epiteliais ventrais (VB) e camada muscular (SM) dos grupos tratados com BPA. Ocorreu uma redução na frequência de células PCNA-positivas nos brotos periuretrais (PeB) e na SM do grupo LBPA. Em fêmeas, a reconstrução tridimensional demonstrou que os PeBs podem emergir de um ou ambos os lados da uretra e também foi visível uma significativa redução do mesênquima parauretral (PaM) nos grupos tratados com BPA. Apenas as fêmeas do grupo HBPA apresentaram brotos parauretrais (PaB) aparentemente mais desenvolvidos. No grupo LBPA observou-se um aumento na frequência de células AR-positivas no PeM e uma diminuição destas células no PeB e mesênquima parauretral (PaM). No grupo HBPA as células AR-positivas tornaram-se mais frequentes no PeM e PaB, contudo sofreram redução no PeB e PaM. Células PCNA-positivas tornaram-se significativamente menos frequentes no PaB e PaM dos grupos LBPA e HBPA. Em relação às células ER-α positivas, nas fêmeas do grupo LBPA observou-se uma redução das imunomarcações no PeM e SM, enquanto que no grupo HBPA essa redução ocorreu apenas no PaM. Este estudo revelou que o desenvolvimento pós-natal da próstata de fêmeas de gerbilos é mais precoce e morfologicamente distinto do que ocorre nos machos da mesma espécie. Além disso, pode-se observar que o BPA exerceu um efeito antiproliferativo sobre a glândula prostática de machos e fêmeas com oito dias de vida pós-natal, sendo as fêmeas mais susceptíveis a este químico ambiental.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-08T09:43:02Z No. of bitstreams: 2 Tese - Danilo Ferreira Rodrigues - 2015.pdf: 3104256 bytes, checksum: 5220ab62ef2503c7a83e2620a047a725 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-08T09:45:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Danilo Ferreira Rodrigues - 2015.pdf: 3104256 bytes, checksum: 5220ab62ef2503c7a83e2620a047a725 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-08T09:45:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Danilo Ferreira Rodrigues - 2015.pdf: 3104256 bytes, checksum: 5220ab62ef2503c7a83e2620a047a725 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-07-09 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / In Veterinary Medicine treatment of skin wounds can be costly, slow and ineffective in patients with disadvantageous factors such as the elderly, diabetics, obese, comatose, malnourished, burned, and with infection process. The search for innovative and effective techniques that favor the healing process, promotes a series of scientific studies around the world. Promising results were obtained using the phytotherapy with barbatiman (Stryphnodendron adstringens) and autologous bone marrow mononuclear cells. However, there are no reports describing the association of these therapies in wounds. The aim of this study was to determine if the treatment of excisional wounds in rabbits (Oryctolagus cuniculus) is optimized by barbatiman extract associated with autologous bone marrow mononuclear cells, and to compare these therapies used alone. Initially, the wounds were evaluated clinically by the intensity of parameters such as hyperemia, bleeding, discharge, crusting, epithelialization of the wound area and healing time, plus the histological evaluation, with observation of polymorphonuclear cells, mononuclear cells, fibroplasia and angiogenesis, in addition to quantitation of collagen fibers. Then, we evaluated whether the therapies aided in the study of cell proliferation. This study employed clinical evaluation, morphometric, histological and histochemical methods in the wounds. We observed that, in the initial phase of the healing, barbatiman stimulates the production of collagen fibers and promotes the formation of more exuberant crusts on the wounds and remodeling phase favors the orientation of collagen fibers, but when combined with autologous bone marrow mononuclear cells it does not stimulate the wound healing in rabbits. / Na Medicina Veterinária, o tratamento de lesões cutâneas pode ser dispendioso, demorado ou ineficaz em pacientes com fatores predisponentes que desfavoreçam a cicatrização, como os idosos, diabéticos, obesos, comatosos, desnutridos, queimados e que apresentam processos infecciosos. Pela importância do assunto, a busca por técnicas inovadoras e eficazes que favoreçam o processo cicatricial, impulsiona uma série de estudos científicos em todo o mundo. Dentre esses, resultados promissores foram obtidos pelo uso do fitoterápico barbatimão (Stryphnodendron adstringens) e de células mononucleares da medula óssea. No entanto, não há relatos que descrevam a associação dessas terapias em feridas. Objetivou-se, neste estudo, determinar se o tratamento feridas cutâneas excisionais de coelhos (Oryctolagus cuniculus) é otimizado pelo extrato de barbatimão associado a células mononucleares autólogas da medula óssea em comparação a estas terapias empregadas isoladamente. Inicialmente, avaliaram-se clinicamente as feridas por meio da classificação da intensidade dos parâmetros de hiperemia, hemorragia, secreção, crostas, reepitelização, área da ferida e tempo de cicatrização, acrescida da avaliação histológica, com observação de células polimorfonucleares, células mononucleares, angiogênese e fibroplasia, além da quantificação de fibras colágenos. Em seguida, verificou-se se as terapias do estudo auxiliam na proliferação celular. Foram empregados métodos de avaliação clínica, morfométrica, histológica e histoquímica das feridas. Conclui-se que, na fase inicial da cicatrização, o barbatimão estimula a produção de fibras colágenas e promove a formação de crostas mais exuberantes sobre a ferida e, na fase de remodelação, favorece a orientação das fibras colágenas, mas a associação desse fitoterápico com CMMO não estimula a cicatrização de feridas de coelhos.

Gliomas são tumores do sistema nervoso central e o glioblastoma multiforme (GBM) é sua forma mais comum e de pior prognóstico. A proliferação desordenada, migração estão entre os processos biológicos que conferem ao GBM um comportamento altamente agressivo. O objetivo deste estudo foi analisar in vitro o papel de PGE2 na proliferação, migração e apoptose da linhagem de glioma humano T98G através de tratamento com ácido gama-linolênico (GLA), Ibuprofeno (IBU) e adição de prostaglandina E1 (PGE1) e prostaglandina E2 (PGE2) exógeno. Nossos resultados demonstraram através uma diminuição nas taxas de proliferação e de migração e uma indução de apoptose nas células T98G tratadas com GLA ou IBU. Por outro lado, a adição exógeno de PGE1 ou PGE2 resultou num aumentou da proliferação e da migração e numa inibição da apoptose. Esses resultados demonstram a influência de PGE2 na linhagem T98G. / Gliomas are tumors of the central nervous system and glioblastoma multiforme (GBM) is the most common form with the worst prognosis. Uncontrolled cell proliferation, migration are among the biological processes that give GBM a highly aggressive behavior. The aim of this study was to analyze in vitro the role of PGE2 the proliferation, migration and apoptosis of the T98G human glioma cell line through treatment with gamma-linolenic acid (GLA), ibuprofen (IBU) and the addition of exogenous prostaglandin E1 (PGE1) and prostaglandin E2 (PGE2). Our results demonstrated through various tests a decrease in the rates of proliferation and migration and an induction of apoptosis in T98G cells treated with GLA or IBU. On the other hand, the addition of exogenous PGE1 or PGE2 resulted in increased proliferation and migration and inhibition of apoptosis. These results demonstrate the influence of PGE2 in the T98G cell line.

MicroRNAs regulam processos celulares e tumorigênese. O carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço (CECP) é a sexta neoplasia mais comum no mundo e não existe consenso sobre características moleculares representativas deste tumor. O receptor de fator de crescimento epidemal (EGFR), bem como efetores de sua via de sinalização, podem ser regulados por miRNA-7. Avaliamos a expressão de EGFR e miRNA-7 em amostras tumorais e livres de tumor, observando maior expressão em tumores. O papel do miRNA-7 em CECP foi investigado através de estudo de ganho de função em linhagem celular de carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço e em queratinócito oral e por PCR Array direcionado para genes de vias mediadas por EGF. A super-expressão do miRNA-7 alterou a expressão de diversos genes na linhagem celular de carcinoma, resultando na diminuição da proliferação, possivelmente relacionada com a diminuição da expressão gênica e proteica de p70S6K1. Em queratinócitos orais não houve alteração significativa na expressão dos genes avaliados. Concluímos que miRNA-7 interfere na progressão do ciclo celular através da regulação de p70S6K1. A resposta diferente de dois tipos celulares à super-expressão do miRNA-7 mostra a complexidade de suas vias de regulação. / MicroRNAs regulate gene expression. Alterations in microRNA expression are involved in the progression of cancers. MiRNA-7 regulates epidermal growth factor receptor (EGFR) signaling and multiple other genes involved in EGFR-related pathways. Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is the six most common cancer in the world, with no consensus on molecular markers for prognosis. We assessed EGFR and miRNA-7 expression levels in HNSCC and tumor-free samples. MiRNA-7 was over-expressed in tumor. Aiming to understand the role of miRNA-7 and EGFR regulation in HNSCC, we over-expressed this molecule in an oral squamous cell carcinoma cell line and in normal oral keratinocytes, and evaluated the expression level of genes of the EGFR signaling pathway using a PCR Array. Most genes were deregulated in the cell line. Cell cycle arrest, possibly due to the down-regulation of p70S6K1, was observed. This deregulation was not detected, in keratinocytes. We conclude that miRNA-7 can interfere in cell cycle progression through targeting p70S6K1 but this action varies according to the molecular background of a given pathology. The understanding of this complexity in gene regulation in critical for therapeutic application of miRNAs.

Neste trabalho nós estudamos qual seria o impacto da indução de resposta imune a epítopos CD8 subdominantes na imunidade gerada pela vacinação genética. Durante a infecção experimental apenas um epítopo imunodominante presente no antígeno ASP-2 é reconhecido. Já os linfócitos T CD8+ induzidos nos animais vacinados com o gene da ASP-2 são capazes de reconhecer além deste mais dois outros epítopos (subdominantes). A identificação desses epítopos permitiu que estudássemos o papel da resposta imune a epítopos subdominantes na imunidade protetora. Após imunização genética com o gene da ASP-2 mutado, sem resposta para o epítopo dominante, confirmamos que a resposta imune aos epítopos subdomiantes pode contribuir na proteção contra a infecção experimental. Apesar do papel critico dos linfócitos T CD8+ na resposta imune protetora induzida pela vacinação genética do tipo imunização e reforço heterólogo, não se sabe ao certo se após o desafio experimental estes linfócitos T CD8+ necessitam proliferar ou recircular para mediar a imunidade protetora. Nossos resultados desafiam o paradigma de ação das vacinas tradicionais de que a imunidade é dependente da proliferação e não da recircular dos linfócitos T de memória e para mediar a imunidade protetora. / In the present study, we evaluated the impact of the immune response to sub-dominant CD8 epitopes on immunity generated by genetic vaccination. During experimental infection only a single dominant epitope is recognized on the antigen ASP-2. In contrast, the CD8+ T lymphocytes induced in animals genetically vaccinated with ASP-2 recognized, in addition to the dominant epitope, two other epitopes (sub-dominants). The identification of these epitopes allowed us to test the role of immune response to sub-dominant epitopes in protective immunity. After genetic vaccination with ASP-2 mutated gene, without the response to dominant epitope, we concluded that the immune response to the sub-dominant epitopes can be important to protective immunity. In spite of the critical role of CD8+ T lymphocytes in protective immune response induced by genetic vaccination using the heterologous prime-boost regimen, it is unclear whether after the experimental challenge these CD8+ T lymphocytes need to proliferate or recirculate to mediate protective immunity. Our results challenge the paradigm of action of traditional vaccines that immunity is dependent on the proliferation of memory T lymphocytes and that these cells do not need to recirculate.