O leite materno constitui uma rica fonte de nutrientes e peptídeos. O desmame precoce (DP) induz o aumento da proliferação e da diferenciação celular, e pode ser uma condição estressante capaz de elevar a corticosterona (CORT). Neste estudo, investigamos a interação entre padrão alimentar, CORT, TGF<font face=\"Symbol\">a e TGF<font face=\"Symbol\">b na regulação da proliferação celular na mucosa gástrica de ratos em desenvolvimento pós-natal. Utilizamos ratos Wistar em DP a partir do 15ºd, e observamos o aumento de CORT aos 16, 17 e 18d (p<0,05). No 17ºd, encontramos nível alto de TGF<font face=\"Symbol\">a e baixo de TGF<font face=\"Symbol\">b1 na mucosa gástrica (p<0,05). Para avaliarmos a ação da CORT, usamos o RU486, que ao reduzir a ação hormonal, estimulou a proliferação celular nos animais amamentados e DP (p<0,05), sem alterar os níveis de TGF<font face=\"Symbol\">a e TGF<font face=\"Symbol\">b. A sinalização para esses fatores foi estudada, e RU486 reduziu a ativação de ERK1/2 (p<0,05) no DP. Concluímos que a corticosterona circulante possui efeito antiproliferativo sobre a mucosa gástrica de ratos, e sua ação parece direta sem depender da regulação dos níveis de TGF<font face=\"Symbol\">a e TGF<font face=\"Symbol\">b. / Milk is a source of nutrients and active peptides. Early weaning (EW) leads to the increase of cell proliferation and differentiation, and can characterize a stressful condition to induce corticosterone (CORT). In the current study we investigated the interaction among dietary pattern, CORT, TGF<font face=\"Symbol\">a and TGF<font face=\"Symbol\">b on the regulation of cell proliferation in gastric mucosa of developing rats. We used Wistar rats submitted to EW on the 15thd, and we observed higher CORT levels throughout EW (p<0.05). At 17d, we also found higher TGF<font face=\"Symbol\">a and lower TGF<font face=\"Symbol\">b1 in the gastric mucosa (p<0.05). To evaluate CORT action, we used RU486 which antagonized the hormone and increased cell proliferation in both suckling and EW pups (p<0.05), without changing TGF<font face=\"Symbol\">a and TGF<font face=\"Symbol\">b1 levels. The signaling pathways triggered by these factors were studied and RU486 reduced ERK1/2 phosphorylation (p<0.05) in EW. We conclude that CORT is repressive for cell proliferation in the rat gastric mucosa, and its action seems to be direct, i.e. independent of TGF<font face=\"Symbol\">a and TGF<font face=\"Symbol\">b regulation.

Problemas reprodutivos ocorrem no hipo e no hipertireoidismo, mas pouco se conhece a respeito das bases moleculares destas alterações. Avaliou-se o efeito da administração de triiodotironina na atividade do gonadotrofo em ratos Wistar tireoidectomizados. O hipotireoidismo ocasionou elevação no TSH e do LH sérico, aumento do conteúdo do mRNA e redução do conteúdo protéico do LH e do FSH, redução da cauda poli (A), redução da testosterona e do FSH séricos, redução da expressão do receptor de LH, aumento da expressão do receptor de andrógenos testiculares e epididimais. O tratamento com T3 acarretou a diminuição do mRNA e aumento do conteúdo protéico de LH, aumento do FSH sérico, diminuição do conteúdo do mRNA e aumento do conteúdo protéico do FSH, aumento da expressão do receptor de LH, redução da expressão de receptores de andrógenos testiculares e epididimais. Esses resultados sugerem que o T3 age na modulação da função do gonadotrofo e na modulação da expressão dos receptores em tecidos-alvo. / Reproductive disorders occur in hypo and hyperthyroidism, but little is known about the molecular basis of these alterations. The effect of administration of triiodothyronine (T3) on the activity of gonadotropes in thyroidectomyzed male Wistar rats was evaluated. Hypothyroidism caused increased on TSH and LH serum concentrations, increased of mRNA content and decreased in protein content of LH and FSH, reduction in the length of poli(A) tail of LH, reduction in testosterone and FSH serum concentrations, reduction in the expression of LH receptor, increased in the expression of androgen receptors in the testis and epididymis. T3 treatment caused reduction on mRNA and increased on mRNA of LH and FSH, increased serum FSH, increased the expression of LH receptor, and reduction of the expression of androgen receptors in the testis and epididymis. These results suggest that T3 modulates the function of gonadotrope and the expression of the receptors in target-tissues.

As células que compõem o tumor podem interagir entre si, através da liberação e incorporação de vesículas extracelulares, muitas vezes contribuindo para a progressão tumoral. Dessa maneira, o presente trabalho teve como objetivo observar se as vesículas extracelulares , como as microvesículas e os exossomas liberados pelas células cancerosas em condições de estresse celular, após quimioterapia e indução de hipóxia conferem alguma vantagem adaptativa às células tumorais. Nossos resultados mostram que vesículas liberadas por células de melanoma humano em hipóxia ou normóxia apresentam tamanho médio característico de exossomos e microvesículas e não modulam os processos de proliferação, morte e migração celular. As vesículas liberadas pelas células após tratamento com o quimioterápico temozolamida também apresentam tamanho característico de exossomos e microvesículas; em adição, o tratamento com a temozolamida induziu um aumento na secreção dessas vesículas pelas células de melanoma. A incubação das células tumorais com vesículas oriundas da terapêutica com a temozolamida aumentou a proliferação celular, conferindo vantagem proliferativa às células de melanoma humano / Tumor cells can interact with each other by releasing and incorporating extracellular vesicles, contributing to tumor progression. Therefore, the aim of this study was to evaluate if extracellular vesicles, such as microvesicles and exossomes, released by cancer cells under cell stress conditions like chemotherapy and hypoxia, induce an adaptive advantage to tumor cells. Our results show that vesicles shed by human melanoma cells under hypoxia, or normoxia exhibit the characteristic size of exossomes and microvesicles and do not modulate cell proliferation, death or migration. The vesicles released by melanoma cells after temozolomide treatment also showed the average size of exossomes and microvesicles; moreover, temozolomide treatment induced an increase in extracellular vesicles shedding by tumor cells. Incubation of tumor cells with vesicles released under temozolamide therapeutics caused an increase in cell proliferation, providing a proliferative advantage to human melanoma cells

O câncer de mama é o tumor mais incidente entre as mulheres no mundo. Assim como em outros tumores, a tumorigênese nas mamas é um processo complexo resultante da combinação de fatores genéticos e ambientais que dirigem a transformação das células normais em células malignas. O gene PAWR, conhecido como PAR-4 (Prostatic apoptosis response-4) foi primeiramente identificado em células de câncer de próstata de rato induzidas a apoptose e codifica uma proteína de 342 aminoácidos que é efetiva na indução de apoptose nas células tumorais e causa regressão dos tumores ativando Fas/FasL e inibindo a atividade de NF-B. O aumento de Par-4 é suficiente para causar apoptose seletiva em células tumorais, mas não em células normais ou imortalizadas. Recentemente, um estudo de nosso grupo demonstrou que a expressão reduzida de Par-4 está associada a um pior prognóstico em câncer de mama e que esta proteína pode ter um papel importante na morfogênese da glândula mamária. O estudo funcional do gene Par-4 em diferentes linhagens de mama é importante para o melhor entendimento do papel deste gene no processo tumorigênico da glândula mamária. Portanto, a proposta do presente estudo foi investigar os efeitos do aumento de expressão ou supressão de Par-4 na proliferação celular e sobrevivência das células normais e tumorais de mama. As células MCF10A e MCF-7 foram transfectadas com os vetores de expressão para Par-4 (pCMV6-PAR-4) ou com oligos siRNA para supressão transiente de Par-4. A caracterização dos clones foi feita por Real Time PCR e Western Blot. Os ensaios de proliferação foram feitos por MTT e os ensaios de apoptose por dupla marcação com Laranja de Acridina/ Hoechst 33342 e por citometria de fluxo. O aumento da expressão de Par-4 diminuiu a proliferação de ambas às células comparadas às células-controle (p<0,01). Por outro lado, a diminuição de expressão de Par-4 por siRNA levou ao aumento da proliferação das células tumorais MCF-7 (p<0,01). A quantificação das células em apoptose mostrou um aumento significativo de apoptose nas células MCF-7 com aumento de Par-4 em relação às células controle MCF-7 pcNEO tratadas com ambas as concentrações de docetaxel (5 nM 13,24% versus 3,89%; p=0.001; 100 nM 24,81% versus 6,07%; p=0,0001) por 24 horas. Embora preliminares, os resultados de citometria também mostraram que as células MCF-7 com aumento de Par-4 apresentam maior porcentagem de células em apoptose na ausência de tratamento e após tratamento com 100 nM de docetaxel por 24 horas. Embora novos estudos sejam necessários, nossos dados sugerem que o aumento de expressão de Par-4 sensibilizou as células MCF-7 ao quimioterápico docetaxel. Pela primeira vez, mostramos o efeito inibitório de Par-4 no crescimento e sobrevivência das células epiteliais mamárias / Breast cancer is the most common tumor among women in the world. As for other malignancies the tumorigenic process of the breast involves genetic alterations that drive the progressive transformation of normal cells into malignant cells with and aggressive phenotype. Alterations in cells that upregulate proliferation or downregulate apoptosis are one of essential mechanisms that dictate tumor growth. The PAWR gene, also known as PAR-4 (Prostatic apoptosis response-4), was first identified in prostate cancer cells undergoing apoptosis and encodes a 332 aminoacid protein that is effective in inducing cancer cell apoptosis and cause regression of tumors by activating Fas/FasL and inhibiting NF-B activity. Interestingly, Par-4 overexpression is sufficient to cause apoptosis in cancer cells, but not in normal or immortalized cells. Recently, we demonstrated that reduced expression of PAR-4 is associated with breast cancer poor prognosis and this protein may have a role in the process of the mammary gland morphogenesis. The functional study of Par-4 gene in different cell lines of breast is important to better understand its role in the tumorigenic process of the breast. Therefore, the purpose of the present study was to investigate the effects of overexpression and suppression of PAR-4 in cell proliferation and survival in mammary epithelial cells. MCF10A and MCF-7 cells were transfected with expression vectors for PAR-4 overexpression (pCMV6-PAR-4) or with small interfering RNAs duplexed oligonucleotides. Clone characterization was performed using real time PCR and western blot. Proliferation assays were carried out using MTT and apoptotic assays were performed by doublefluorescence staining technique (Acridine Orange/Hoechst 33342) or using flow cytometry. PAR-4 overexpression decreased the proliferation rates in both MCF10A and MCF-7 cells compared to the parental or control cells (p<0,01). On the other hand, PAR-4 knockdown leads to increased proliferation in MCF7 cells (p<0,01). We observed a significant increase in apoptosis of MCF-7 cells with increased expression of Par-4 compared to control cells (MCF-7 pcNEO) in both concentrations of docetaxel (5 nM 13,24% versus 3,89%, p = 0,001; 100 nM 24,81% versus 6,07%, p < 0,0001). Cytometry analysis, although preliminary, showed that MCF-7 pcPar-4 have a higher percentage of apoptotic cells in the absence of treatment and after treatment of 100 nM of docetaxel. Although more studies are needed, our data suggest that increased expression of Par-4 sensitizes breast cancer cells to treatment with docetaxel. This is the first report showing that PAR-4 has inhibitory effects on mammary epithelial cells proliferation and survival

Apesar da ampla aplicação clínica de plasma rico em plaquetas (PRP), a sua eficácia no reparo de defeitos ósseos e na osseointegração de implantes metálicos continua sendo questionada. Em vista disso, objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos de um coquetel contendo os principais fatores de crescimento (GFs) e proteínas de PRP no desenvolvimento do fenótipo osteogênico in vitro sobre titânio (Ti). O coquetel referido continha PDGF-BB, TGF-&beta;1, TGF- &beta;2, albumina, fibronectina e trombospondina. Células da linhagem osteoblástica foram obtidas por digestão enzimática de osso alveolar humano e cultivadas sob condições osteogênicas convencionais até a subconfluência, sendo, em seguida, subcultivadas sobre superfície de Ti. As subculturas foram expostas durante os 7 primeiros dias a meio osteogênico, suplementado com GFs e proteínas, e apenas ao meio osteogênico nos 7 dias subseqüentes. Os grupos controles foram expostos apenas ao meio osteogênico. Nos experimentos dose-resposta foram utilizadas culturas primárias de calvária de ratos, as quais foram expostas ao coquetel de GFs e proteínas e às suas diluições de 1:10 e 1:100. Culturas derivadas de osso alveolar humano expostas ao coquetel de GFs e proteínas apresentaram: aumento significativo do número de células a partir do dia 4 e da proliferação celular em 1 e 4 dias; redução significativa nos níveis de atividade de fosfatase alcalina (ALP) em 4, 7 e 10 dias e ausência de marcação com vermelho de Alizarina em 14 dias. Apesar de as diluições 1:10 e 1:100 restaurarem a atividade proliferativa das culturas aos níveis controles, formações de matriz calcificada foram observadas apenas na diluição 1:100. Os resultados do presente trabalho mostram que o coquetel de GFs e proteínas inibe o desenvolvimento do fenótipo osteogênico de culturas de células osteoblásticas humanas e de ratos crescidas sobre Ti. / Background: Despite wide clinical application, the efficacy of platelet-rich plasma (PRP) for repairing bone defects and enhancing osseointegration of metal implants is still subject of debate. The objective of the present study was to evaluate the effects of a well-defined mixture of growth factors (GFs) and proteins (GFs+proteins) on the development of the osteogenic phenotype on titanium (Ti) in vitro. The composition of the mixture was based on the major components found in PRP preparations. Methods: The PRP-like mixture contained PDGF-BB, TGF-&beta;1, TGF-&beta;2, albumin, fibronectin, and thrombospondin. Osteoblastic cells were obtained by enzymatic digestion of human alveolar bone and cultured under standard osteogenic condition until subconfluence. They were then subcultured on Ti discs up to 14 days. Treated cultures were exposed during the first 7 days to osteogenic medium supplemented with GFs+proteins and to osteogenic medium alone thereafter. Control cultures were exposed to only osteogenic medium throughout the culture interval. Dose-response experiments were carried out using rat primary calvarial cells exposed to GFs+proteins and 1:10 or 1:100 dilutions of the mixture. Results: Treated human-derived cell cultures exhibited a significantly higher number of cells from day 4 on and of cycling cells at days 1 and 4, significantly reduced levels for alkaline phosphatase (ALP) activity, and no Alizarin red stained areas at day 14. Although the 1:10 and 1:100 dilutions restored the proliferative activity of rat calvaria-derived osteogenic cells to control levels, mineralized bone-like nodule formation was only observed with the 1:100 dilution. Conclusions: The present results demonstrated that a PRP-like protein mixture inhibits development of the osteogenic phenotype in both human and rat osteoblastic cell cultures grown on Ti.

A desnutrição altera o sistema imunológico, freqüentemente modificando a resposta do hospedeiro frente a patógenos e predispondo o indivíduo à infecções. Neste trabalho, utilizando ensaios clonogênicos e imunofenotipagem, avaliamos os efeitos da desnutrição protéica em precursores hematopoéticos esplênicos. Camundongos Swiss Webster, machos, com dois a três meses de idade, foram alimentados com ração contendo 4% e 20% de proteína constituindo os grupos desnutridos e controle, respectivamente. A fonte protéica das rações foi a caseína. Os animais foram mantidos em gaioleiros metabólicos, sob temperatura ambiente de 22&#176; a 25&#176;C e ciclo de luz de 12 horas. A desnutrição experimental foi induzida após período de adaptação às condições do gaioleiro metabólico. O consumo de ração, de água e a variação do peso corporal inicial, foram avaliados a cada 48 horas. Após a perda de 20-25% do peso corpóreo inicial, foram colhidas amostras sangüíneas para a verificação do perfil hematológico, determinação das concentrações séricas de proteínas e da albumina. As células esplênicas foram colhidas para a realização do esplenograma, dos ensaios clonogênicos e da imunofenotipagem, utilizando-se painel de anticorpos monoclonais. Para a obtenção de progenitores granulocíticos (CFC-GM), empregou-se a associação dos fatores de crescimento G-CSF (1ng) e GM-CSF (0,1ng). A obtenção de progenitores granulocíticos e eritróides (CFC-Mix) se deu pela associação dos fatores de crescimento IL-3 (1ng) e EPO (5UI). Os resultados obtidos indicaram redução significativa no grupo desnutrido, do consumo de ração e peso corpóreo, das concentrações séricas de proteínas totais e albumina, bem como do volume do hematócrito, concentração de hemoglobina e do número global de leucócitos. A celularidade esplênica também apresentou redução significativa no grupo desnutrido, quando comparada a do grupo controle. Nos ensaios clonogênicos, o grupo desnutrido apresentou menor formação de \"clusters\" e de colônias frente aos fatores de crescimento utilizados. Na imunofenotipagem, o mesmo grupo apresentou aumento na percentagem de células CD34+, bem como de precursores linfóides T, identificados por anti CD2 e anti CD5 e de precursores linfóides B, identificados por anti CD19 e anti CD22. Estes resultados sugerem que a desnutrição protéica induz, in vivo, a redução das células primitivas e bloqueio maturativo em células precursoras esplênicas. Os ensaios clonogênicos indicaram que as células de animais desnutridos não respondem adequadamente aos fatores de crescimento, sugerindo alterações em receptores e, ou processos transducionais e, ou transcricionais. / Malnutrition usually affects the immune system, most of the times modifying the immunological response to pathogens, predisposing the individuals to infections. In this work the effect of protein malnutrition on splenic hematological precursors were investigated by clonogenic assays and immunephenotyping. Two months old male Swiss Webster mice were fed with chow containing 4% and 20% casein, respectively the deprived and the control groups. The animals were observed in metabolic cages, at 22-25&#176; C and light-controlled during 12 hours. The experimental procedure was started after the animals were accustomed to the environment. The chow and water consumption as well as the weight were recorded every 48 hours. Soon after a 20-25% weight loss, blood samples were collected in order to determine hematological parameters, and serum protein and albumin. The splenic cells were collected and used to do the splenogram, clonogenic assays and immunephenotyping with monoclonal antibodies. Growth factors G-CSG (1 ng) and GM-CSF(0.1 ng) combination were employed to obtain the granulocytic progenitors CFC-GM. The growth factors IL-3 and EPO (5 UI) association were used to obtain the granulocytic and erythroid progenitors (CFC-Mix). The obtained data indicated significative reduction of weight, chow consumption, serum proteins, blood hematocrit, hemoglobin concentration and leucocytes in the deprived group. The deprived group splenic cellularity exhibited decrease in comparison to the control group as well. The clonogenic assays disclosed decreased formation of clusters and colonies at exposure to specific growth factors in the deprived group. In this group the immunephenotyping showed CD34+ cells increase, as well as linfoid T precursors, identified by anti CD2 and anti CD5, as well as linfoid B precursors, identified by anti CD19 and anti CD22. These data suggest that protein malnutrition leads, in vivo, to primitive cells reduction and progenitor cells maturative blocking. The clonogenic assays indicated that the hematopoietic cells from deprived animals did not respond to growth factors, suggesting that receptors, transduction and, or transcriptional modifications may have occurred.

AIM: To compare the rate of cell proliferation in two sites of the oral mucosa (tongue and floor) of patients exposed to crack cocaine and patients not exposed to drug. METHODS: The sample consisted of 71 individuals divided into control group (GC): 25 subjects who did not smoke and did not consume illicit drug, with 21 men and 4 women; Group Crack (GCR): 18 subjects who consumed daily or crack almost every day, 14 men and 4 women; Cocaine Group (GCO): 12 subjects who sniffed cocaine daily or almost daily, 7 men and 5 women; Group Crack-Cocaine (GCRO): 16 subjects who drank daily or almost daily crack cocaine, 12 men and 4 women. An interview was conducted to collect data identification, demographic, socio-economic status, oral health status and level of exposure to the drug. There were cytological smears edge of tongue and floor of the mouth, which were submitted to silver impregnation technique for quantifying the average and the percentage of AgNORs/nucleus. Measurements were compared by analysis of variance (ANOVA) and the Kruskal-Wallis, followed, respectively, by testing multiple comparisons Tukey and Mann Whitney test at a significance level p>0,05. RESULTS: Increased proliferation rate of the cells exfoliated from de edge of tongue pAgNOR>2 groups GCR and GCRO. At the site, floor of the mouth, there was no significant difference between the GC and the other groups. CONCLUSION: The edge of the tongue is a site more susceptible to drug exposure, but depending on these individuals being exposed to different types of external agents, can not be said that crack, in isolation, is responsible for the increased rate of cell proliferation the GCR. Among the difficulties in studying the effect of crack mouth are, the variety of the chemical composition of the drug (components and quantity), the combination of other drugs and the individual variability in the number of AgNORs / nucleus. / OBJETIVO: Comparar a taxa de proliferação celular de dois sítios da mucosa bucal (língua e assoalho) de indivíduos expostos ao crack, e/ou cocaína com a de indivíduos não expostos a droga. METODOLOGIA: A amostra foi composta de 71 indivíduos divididos em: Grupo Controle (GC): 25 indivíduos que não fumavam e não consumiam droga ilícita; Grupo Crack (GCR): 18 indivíduos, que consumiam crack diariamente ou quase todos os dias; Grupo Cocaína (GCO): 12 indivíduos que cheiravam cocaína diariamente ou quase diariamente; Grupo Crack-Cocaína (GCRO): 16 indivíduos que consumiam diariamente ou quase diariamente crack e cocaína. Todos os indivíduos dos grupos GCR, GCO e GCRO fumavam tabaco, maconha e ingeriam bebida alcoólica diariamente.Uma entrevista foi realizada para coletar dados de identificação, demográficos, sócio-econômico, condição bucal (e o questionários ASSIST foi aplicado para avaliar o) nível de exposição à droga. Realizaram-se esfregaços citológicos em borda de língua e de assoalho bucal, os quais foram submetidos à técnica de impregnação pela prata para avaliar a taxa de proliferação celular através da quantificação da média e do percentual de AgNORs/núcleo. As medidas foram comparadas pelo teste de Análise de Variância (ANOVA) e pelo teste de Kruskal-Wallis, seguidos, respectivamente, pelos testes de comparações múltiplas de Tukey e Dunn no nível de significância p<0,05. RESULTADOS: Foi verificado aumento da taxa de proliferação das células esfoliadas da borda de língua para pAgNOR>2 nos grupos GCR e GCO (p=0,02). No sítio, assoalho bucal, não houve diferença significativa entre o GC e os demais grupos (p=0,48). CONCLUSÕES: A borda de língua é um sítio mais suscetível a exposição a drogas, porém em função desses indivíduos se exporem a diferentes tipos de agentes externos, não se pode afirmar que o crack, de forma isolada, seja o responsável pelo aumento na taxa de proliferação celular no GCR. Dentre as dificuldades em se estudar o efeito do crack na boca estão; a variedade da composição química da droga (componentes e quantidade), a combinação de outras drogas e a variabilidade individual do número de AgNORs/núcleo.

O ultra-som terapêutico é um recurso físico muito empregado como coadjuvante na promoção do reparo tecidual. Neste trabalho, foi estudada a influência do ultra-som terapêutico na integração dos enxertos de pele total num modelo experimental em coelhos. Foram utilizados 20 coelhos adultos, fêmeas, nos quais foram realizadas cirurgias de enxerto autógeno de pele total nas regiões escapulares, pela ressecção de dois retalhos quadrados de pele de 2 cm de lado, invertendo sua posição, o enxerto retirado do lado direito sendo colocado na área receptora esquerda e vice-versa. O enxerto do lado direito era submetido ao tratamento efetivo com o ultra-som (3 MHz, 0,5 W/cm2, 5 minutos) e o enxerto do lado esquerdo, a tratamento placebo, iniciado no 3o dia pós-operatório e aplicado diariamente por sete dias. Os animais eram sacrificados no 11o dia pós-operatório e os enxertos, ressecados com uma margem de segurança, para análise histopatológica, com cortes de 5 µm. Foram obtidos cortes histológicos corados com técnicas específicas (Tricrômico de Gomori, PCNA e Picrosirius) e analisados ao microscópio de luz, sendo realizada a contagem das células em proliferação e dos vasos neoformados e a morfometria das áreas da epiderme e derme. Os resultados mostraram um significativo aumento no número de células em proliferação na epiderme e vasos neoformados na camada reticular da derme, mas isto não implicou em uma diferença entre as áreas da epiderme e derme, nos enxertos irradiados e não irradiados. Concluímos que o ultra-som terapêutico induz alterações morfológicas nos processos biológicos, como proliferação celular da camada germinativa da epiderme e neoangiogênese, envolvidos na integração de enxertos de pele total, com um potencial de aplicação clínica em humanos. / Therapeutic ultrasound is a widely used co-adjuvant physical mean to promote tissue repair. In the present investigation, the influence of therapeutic ultrasound on the integration of full-thickness skin graft was studied in rabbits. Twenty female adult rabbits were used, two 2x2 cm square-shaped full-thickness skin grafts being obtained from both scapular regions and swapped, the one cut out on the right being placed on the left and vice-versa. The graft on the right was effectively irradiated with the therapeutic ultrasound (3 MHz, 0,5 W/cm2, 5 minutes) for seven days beginning on the third postoperative day. The graft on the left was submitted to a sham irradiation. The animals were killed on the 11th day and the grafted areas were resected (graft + safety margin) for histologic examination by means of 5 µm-thick sections alternatively stained with Gomori's trichrome, PCNA and Picrosirius and examined on the light microscope. Eider proliferating cells and new blood vessels were counted, as well as the epidermic and dermic areas were measured. The results showed a significant increase in the number of epidermic proliferating cells and new blood vessels, but this did not imply any difference between the epidermic and dermic areas between irradiated and non-irradiated grafts. We conclude that the therapeutic ultrasound induces morphologic alterations in the biologic processes, as epidermic germinative layer cell proliferation and neo-angiogenesis, involved in the integration of full-thickness skin grafts and this has a potential for clinical use in humans.

Os peptídeos INKKI e YPVQPFTE foram isolados a partir da hidrólise da b-caseína bovina e correspondem às seqüências 26-30 e 114-121 respectivamente. A atividade proliferativa foi avaliada em culturas primárias de linfócitos T. A atividade antitumoral in vitro foi realizada em culturas de B16F10. Foi utilizado grupo com 40 camundongos da linhagem C57BL/6J para avaliar a atividade antitumoral. Nossos resultados mostraram que o peptídeo INKKI apresentou resposta proliferativa semelhante ao mitógeno comercial PHA. O peptídeo YPVEPFTE mostrou ter ação proliferativa maior do que a apresentada pelo mitógeno comercial PHA. O peptídeo INKKI mostrou ação quimiotáxica. O tratamento in vitro mostrou que somente o pentapeptídeo INKKI induz seletiva atividade citotóxica para as células de melanoma. Os animais portadores de tumores dorsais apresentaram significativa inibição da capacidade de crescimento e a metastatização. Conclui-se que os peptídeos apresentam ação significativa tanto nos experimentos in vitro como in vivo sugerindo um possível papel fisiológico. / Peptides INKKI and YPVQPFTE were isolated from the bovine b-casein after hydrolysis corresponding to the 23-30 and 114-121 sequence, respectively. Evaluation of the proliferative activity in primary cultures of lymphocytes. The activity antitumor in vitro was accomplished culture of was studied. Groups with 40 C57BL/6J lines mice had been used to evaluate the antitumoral activity. Our results showed that peptide presented similar proliferative response to the PHA commercial mitogen. The peptide YPVEPFTE showed to have proliferative action larger than presented by the commercial mitogen. The peptide INKKI showed in the chemotactic action. The treatment in vitro had shows that the peptide INKKI induces selective citotoxicity. The bearing animals of dorsal tumors had presented significant inhibition of the capacity of growth and the spread of methastasis. Thus, the peptides casein present significant action in in vitro and in vivo experiments, suggesting a possible physiologic role.

O colágeno é a proteína fibrosa predominante da matriz extracelular e é a maior proteína constituinte do tecido conectivo. Alterações nas taxas de colágeno tipo I na derme ocorrem durante o envelhecimento. A introdução de um agente eficaz para a manutenção da pele durante o envelhecimento é importante, possibilitando a redução destes efeitos. Neste projeto foram avaliados os efeitos proliferativos e de biossíntese de colágeno, em fibroblastos humanos de derme normal tratados com colágeno bovino e derivados de diferentes perfis moleculares, colágeno super hidrolisado, colágeno hidrolisado e gelatina, em diferentes experimentos, adesão e viabilidade celular, síntese de colágeno e análises das fases do ciclo celular. Os resultados sugerem que o colágeno bovino e derivados induzem as propriedades adesivas nos fibroblastos, não desencadeiam efeitos citotóxicos e induzem a biossíntese de colágeno pelos fibroblastos. Os resultados de síntese de colágeno indicam que concentrações menores de colágeno super hidrolisado e colágeno hidrolisado podem ser utilizadas em relação à amostra de gelatina. Comparando os resultados após 48 horas de cultura na síntese de colágeno e nas modificações na fase S do ciclo celular, as células tratadas com as amostras de colágeno super hidrolisado e colágeno hidrolisado induziram aumentos significativos. / Collagen is the predominant fibrous protein of the extracellular matrix and it is a major protein constituting connective tissue. Alterations in the rate of collagen type I deposition occur during aging. The introduction of an efficient agent for the maintenance of the skin during the aging process is important as it can reduce those effects. Thus, the proliferative effects and collagen biosynthesis in normal dermis of human fibroblasts were evaluated in this project. The fibroblasts were treated with bovine collagen and its derivates from different molecular mass, as well as super hydrolysate collagen, hydrolysate collagen and gelatine. Different assays were applied as adhesion, cell viability, collagen biosynthesis, and cell cycle phases analysis. The results suggest that the bovine collagen and its derivates can induce to adhesion properties in fibroblasts, they do not produce cytotoxic effects, and they can induce the collagen biosynthesis by fibroblasts. The results also show that super hydrolysate collagen and hydrolysate collagen can be used in lower concentrations than gelatine in collagen biosynthesis analysis. Analyzing the results after 48 hours of culture, the cells treated with the samples of super hydrolysate collagen and hydrolysate collagen had significant improvement in the collagen biosynthesis and in the modifications in the S phase of the cell cycle.