Made available in DSpace on 2016-06-02T20:34:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5875.pdf: 3093779 bytes, checksum: 5229ef01b8b2206f72e4f4a81acd582c (MD5) Previous issue date: 2013-06-14 / Universidade Federal de Sao Carlos / We have immobilized proline, like prolinamide, by using flash chromatography with commercial grade silica and magnetite nanoparticles that were synthesized in our lab. The degree of functionalization has been determined by the nitrogen content from the data collected from elemental analysis of the particles. The organofunctionalization of the silica surface and the structure have been confirmed by 13C CP-TOS NMR and 29Si-NMR CPMAS solid state analysis. The confirmation of the catalyst-supported structure on functionalized magnetite can be correlated to the data obtained from the silica, since methodology was the same. The materials Pro-SiO2 and Fe3O4 @ SiO2-Pro were used in catalysis for the Michael reaction. The catalysts have been tested in several conditions: solvents, additive, reaction time and determined the minimum amount of catalyst needed to optimize reaction conditions. It was observed that the catalysis is best conducted without a solvent or in saturated NaCl solution and in the presence of additive, such as benzoic acid or acetic acid. The recyclability for both materials was satisfactory and no significant losses were observed after five cycles. The best results were obtained for propanone and cyclohexanone as a Michael donor and nitrostyrene as a Michael receptor with excellent yields and diastereoselectivity (in the case of cyclohexanone). Enantiomeric excess obtained for these reactions were too low to be observed proving the structural efficiency of the catalytic process. / Neste trabalho foi imobilizada a prolina, na forma de prolinamida, na sílica flash comercial e em nanopartículas de magnetita. Os materiais foram sintetizados e o grau de funcionalização foi adquirido através do teor de nitrogênio obtido da análise elementar. As estruturas foram confirmadas pela análise de 13C- RMN-CP-TOSS e 29Si-RMN-CPMAS no estado sólido para a sílica organofuncionalizada. A confirmação da estrutura do catalisador suportado na magnetita funcionalizada pode ser correlacionada com os dados obtidos da sílica, uma vez que a metodologia utilizada foi a mesma. Os materiais SiO2-Pro e Fe3O4@SiO2-Pro foram aplicados na catálise da reação de Michael. Os catalisadores foram testados em diversos solventes, aditivos, tempo de reação e quantidade de catalisador mínima até serem encontradas as condições ótimas de reação. A reação resulta em maior rendimento e diastereosseletividade quando conduzidas sem solvente ou em solução saturada de NaCl, na presença dos aditivos ácido benzóico ou acético. Suas reciclabilidades foram satisfatórias, não tendo perdas significativas após cinco ciclos. Os melhores resultados foram obtidos para a cicloexanona e propanona como doadores de Michael e nitroestireno como aceptor de Michael. Mesmo obtendo excelentes rendimentos e diastereosseletividades, os excessos enantioméricos obtidos foram de baixo valor.

Neste trabalho foi investigado o efeito da administração crônica de prolina sobre o conteúdo total de gangliosídios, fosfolipídios e de colesterol, assim como, sobre o perfil de gangliosídios no córtex, no hipocampo, no hipotálamo e no cerebelo de ratos. Também, foi avaliado o conteúdo e o perfil de gangliosídios nas frações solúvel e resistente a detergente obtidas de membranas sinápticas de córtex. Ratos Wistar foram divididos em dois grupos: 1) injetados subcutaneamente com solução 0,9% de NaCl (animais controle) e 2) injetados subcutaneamente com solução de prolina, em concentrações adequadas ao peso corporal (animais hiperprolinêmicos). Tanto a solução de prolina quanto a salina foram administradas do 6° ao 28° dia pós-natal. Doze horas após a última administração, os animais foram sacrificados mediante decapitação sem anestesia. As estruturas cerebrais foram dissecadas e em seguida homogeneizadas em clorofórmio:metanol na proporção 1:1 vpara a extração lipídica. As membranas sinápticas foram obtidas através de centrifugação diferencial e as frações solúvel e resistente a detergente foram isoladas através de tratamento das membranas com Triton X-100 a 4°C para investigação de microdomínios de membrana. Após a realização das análises, os resultados mostraram que os animais submetidos ao tratamento crônico com prolina apresentaram um marcado aumento no conteúdo de gangliosídios no córtex cerebral e no hipocampo, enquanto os conteúdos de fosfolipídios e de colesterol aumentaram somente no hipocampo. Além disso, os conteúdos destes compostos não foram alterados no hipotálamo e no cerebelo de animais hiperprolinêmicos. Por outro lado, o conteúdo de gangliosídios diminuiu nas frações solúvel e resistente a detergente obtidas de membranas sinápticas de córtex de animais hiperprolinêmicos. Embora os perfis de gangliosídios não tenham sido aparentemente modificados, as quantidades absolutas das espécies foram alteradas tanto no extrato total, como nos microdomínios de membrana obtidos do córtex. Estes dados revelam que o tratamento crônico com prolina afeta de forma distinta as diferentes regiões cerebrais quanto à composição lipídica das membranas celulares, refletindo-se sobre a distribuição de lipídios nos microdomínios de membrana do córtex. Entre as conseqüências destes fenômenos poderiam ser sugeridas modulações diferentes nas transmissões sinápticas que contribuiriam para o déficit cognitivo e/ou outras disfunções neurológicas presentes em pacientes com hiperprolinemia tipo II. / In the present work we investigated the effects of chronic proline administration on ganglioside, cholesterol and phospholipid total contents, as well as on ganglioside profile in cerebral cortex, hippocampus, hypothalamus and cerebellum of rats. We also evaluated the ganglioside content and profile in detergent- soluble and resistant fractions isolated from synaptic membranes obtained from cerebral cortex. Wistar rats were divided into two groups: 1) saline (control) and 2) proline injected (hyperprolinemic). Proline solution or saline were administered from 6th to 28th postnatal day, according to body weight. Twelve hours after the last injection, the animals were sacrificed by decapitation without anesthesia. Brain structures were homogenized with chlorophorm:methanol 1:1 for lipid extraction. Synaptic membrane was extracted by differential centrifugation and detergent- soluble and resistant fractions were isolated by cold Triton X-100 treatment. Results showed that rats subjected to chronic proline treatment presented a significant increase of ganglioside content on cortex and hippocampus, while phospholipid and cholesterol contents only increased in hippocampus. However, the content of these components were not altered in hypothalamus and cerebellum of hyperprolinemic rats. On the other hand, ganglioside content decreased in detergent- soluble and resistant fractions isolated from synaptic membrane obtained from hyperprolinemic cortex. Although ganglioside profiles were apparently not modified, the individual absolute quantities were altered in cortex total lipid extract and membrane microdomains obtained from cerebral cortex. Our findings suggest that chronic proline treatment affects, in a distinct manner, different cerebral regions concerning the lipid composition of the cell membranes, reflecting on its distribution in the cortex membrane microdomains. Among these phenomena consequences, different modulations in synaptic transmission may be suggested which may contribute to the impairment in cognition and/or other neurological disfunctions found in hyperprolinemia type II patients.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-06Bitstream added on 2014-06-13T19:37:04Z : No. of bitstreams: 1 silva_j_me_jabo.pdf: 720015 bytes, checksum: 604d84726aec59dab602e4c339fd16f8 (MD5) / O objetivo deste trabalho foi verificar os efeitos do estresse térmico no conteúdo de prolina e no crescimento inicial de plântulas de guandu, oriundas de sementes tratadas com putrescina e espermidina, visando verificar se esta aplicação promove o acúmulo de prolina para atenuar os efeitos do estresse térmico no processo germinativo e no crescimento inicial das plântulas. Para tanto, a semeadura da cv. BRS Mandarim e cv. Caqui foi realizada em caixas plásticas tipo ―gerbox‖ contendo papel de germinação umedecido com soluções de 0,5mM de putrescina ou espermidina. Para os experimentos de germinação, as sementes foram submetidas às temperaturas subótimas de 20ºC, 18ºC, 16ºC e 14ºC e de aquecimento em 36ºC, 38ºC, 40ºC e 44ºC, por 24h e 48h. Após estes períodos, foram submetidas à temperatura ótima de 25 ºC, até o 10º dia de semeadura, quando foi verificada a porcentagem de germinação das sementes. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado em esquema fatorial 3x4x2+3 (0,0mM; 0,5mM de Put ou 0,5mM de Spd; estresse térmico por resfriamento em 20ºC, 18ºC, 16ºC e 14ºC e por aquecimento em 36ºC, 38ºC, 40ºC e 44ºC, tempos de exposição aos estresses por 24h ou 48h, mais os fatores adicionais que consistiu do tratamento controle de temperatura de 25ºC com 0,0mM e 0,5mM de Put e Spd) com quatro repetições de 25 sementes, separadamente, para cada cultivar. Para os teores de prolina e o crescimento inicial das plântulas, foi utilizado outro esquema fatorial, uma vez que apenas os dados das temperaturas subótimas de 18ºC e 14ºC e supraótimas de 36ºC e 40ºC apresentaram-se homogêneos e expressivos. Deste modo, o delineamento experimental foi em esquema fatorial 3x2x2+3 (0,0mM; 0,5mM de Put ou 0,5mM de Spd, estresse térmico de resfriamento em... / The objective of this study was to verify the effects of temperature stress on proline content and initial growth of seedlings of pigeonpea, from seeds treated with putrescine and spermidine in order to check if this application promotes the accumulation of proline to mitigate the effects of temperature stress in germination and early seedling growth. Therefore, sowing cv. BRS Mandarin and cv. Kaki was performed in plastic devices gerbox containing germination paper moistened with 0,5mM of putrescine or spermidine. For germination experiments, seeds were subjected to suboptimal temperatures at 20ºC, 18ºC, 16ºC and 14ºC and supraoptimal temperatures at 36ºC, 38ºC, 40ºC and 44ºC, for 24h and 48h. After these periods, underwent optimum temperature of 25ºC, until the 10th day of sowing, when it was checked for germination of seeds. The experimental design was a completely randomized factorial 3x4x2+3 (0,0mM; 0,5mM Put or 0,5mM Spd, chilling at 20ºC, 18ºC, 16ºC and 14ºC and heating at 36ºC, 38ºC, 40ºC and 44ºC , times of exposure to stress for 24h or 48h, and additional factors which consisted of treatment control temperature of 25ºC with 0,0mM and 0,5mM of Put or Spd) with four replications of 25 seeds separately for each cultivar. For contents of proline and initial growth of seedlings, it was used another factorial, because only data of suboptimal temperatures 18ºC and 14ºC and supraoptimal temperatures 36ºC and 40ºC were homogeneous and expressive. Thus, the experimental design was a factorial 3x2x2+3 (0,0mM; 0,5mM Put or 0,5mM Spd, chilling at 18ºC and 14ºC and heating at 36ºC and 40ºC, exposure times to stress for 24h or 48h, plus additional factors) with four replications of 25 seeds, separately for the cv. BRS Mandarin and cv. Kaki. The exogenous polyamines attenuate the effects of suboptimal temperatures and... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-07-14Bitstream added on 2014-06-13T19:07:07Z : No. of bitstreams: 1 queiroz_rjb_me_jabo.pdf: 279148 bytes, checksum: f2c7d7d0a4340fa883e5d22a2352282b (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / No presente estudo, verificou-se o acúmulo da trealose e da prolina livre e o crescimento inicial de duas cultivares de cana-de-açúcar, IAC91-2195 e IAC91-5155, sensível e tolerante ao estresse hídrico, respectivamente. Inicialmente, as mudas foram cultivadas sem qualquer restrição hídrica. Após 40 dias, foram transferidas para vasos com três níveis de disponibilidade hídrica do solo (DHS): 55% (sem estresse), 40% (estresse moderado) e 25% (estresse severo), mantidos pelo método das pesagens durante 30 e 60 dias. O delineamento experimental foi em blocos ao acaso, com quatro repetições, em arranjo fatorial 2x3x2 (cultivares x deficiência hídrica x épocas de crescimento). O experimento foi conduzido em casa de vegetação climatizada (29ºC e 75% UR). A cultivar IAC91-5155 apresentou maior acúmulo de trealose e de prolina livre nos menores níveis de disponibilidade hídrica do solo, indicando tolerância às condições de estresse hídrico. Aos 30 dias, sob estresse hídrico, houve maior acúmulo de prolina livre apenas na cv. IAC91-5155. Os osmoprotetores, trealose e prolina livre, podem ser indicados como marcadores bioquímico-fisiológicos de tolerância ao estresse hídrico somente para a cv. IAC91-5155. A cv. IAC91-5155 pode ser considerada mais tolerante ao estresse hídrico que a cv. IAC91-2195. / In this work, the accumulation of trehalose and free proline and the initial growth were measured in two sugarcane cultivars, IAC91-2591 and IAC91-5155, sensitive and stress tolerant, respectively. Buds, after 40 days old cultivated in soil with no water restriction when were transferred to pots and submitted to three soil water levels: 55% (no stress), 40% (moderate stress) and 25% (severe stress). The experiment was carried out in greenhouse (29ºC and 75% RH). The Weighing Method was used to control the soil water levels for 30 and 60 days. The experimental design was randomized blocks with four replicates in 2x3x2 factorial arrangement (cultivars, water deficit and periods of growth). The cultivar IAC91-5155 showed higher accumulation of the trehalose and free proline under water deficiency. The accumulation of the proline was higher in IAC91-5155 cultivar at 30 days under soil water levels. Trehalose and free proline could only be considered as biochemical-physiological markers to soil water deficits in cultivar IAC91-5155. The cultivar IAC91-5155 may be more tolerant to water stress than IAC91-2195.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-18Bitstream added on 2014-06-13T20:18:20Z : No. of bitstreams: 1 monteiro_jg_me_jabo.pdf: 471881 bytes, checksum: 32821ac7e50d0e7880feb6e9f27a50af (MD5) / Os objetivos deste trabalho foram: avaliar germinação, teores de prolina e crescimento inicial das plúmulas e raízes primárias dos genótipos de guandu, BRS Mandarim e Caqui, sob efeito do estresse salino e estresse hídrico associado à poliamina exógena (putrescina) visando, nesta genótipos, verificar a utilização da prolina como marcador bioquímico-fisiológico à salinidade e potencial hídrico e o efeito atenuante da putrescina (Put) quando associada ao estresse salino e hídrico. Dois experimentos foram conduzidos, utilizando o delineamento experimental inteiramente casualizado no esquema fatorial 2x6x2 (BRS Mandarim e Caqui; 0,0; 20; 40; 60; 80 e 120 mM de NaCl e 0,0 mM e 0,5 mM de Put). Para o estresse hídrico o esquema fatorial 2x5x2 (BRS Mandarim e Caqui; 0,0; -0,2; -0,3; -0,4; -0,5 MPa de PEG e 0,0 mM e 0,5 mM de Put). Os resultados evidenciaram que o estresse salino e hídrico reduzem a germinação de sementes e o crescimento inicial de ambas as cultivares de guandu. A putrescina exógena atenua os efeitos deletérios apenas do estresse salino na germinação de sementes de ambas as cultivares de guandu. Os estresses salino e hídrico causam acúmulo de prolina podendo ser considerado osmólito indicador bioquímico-fisiológico dos efeitos destes estresses em plântulas de ambas cultivares de guandu. A putrescina exógena causa acúmulo de prolina nas plântulas de ambas cultivares de guandu sob estresse salino e apenas nos níveis moderados de estresse hídrico. O maior crescimento da cv. BRS Mandarim com putrescina exógena não está relacionado com o maior conteúdo de prolina / The objectives of this study were to evaluate germination, growth and proline contents of plumule initial and primary roots of the pigeon pea cultivars BRS Mandarim and Caqui under salt stress and water stress associated with exogenous polyamine (putrescine) order, these cultivars, check the use of proline as a marker biochemical-physiological salinity and water potential and the dampening effect of putrescine (Put) when associated to salt stress and drought. Two experiments were conducted using a completely randomized design in a factorial 2x6x2 (BRS Mandarim and Caqui, 0.0, 20, 40, 60, 80 and 120 mM NaCl and 0.0 mM and 0.5 mM Put) . For the water stress 2x5x2 factorial (BRS Mandarin and Caqui, 0.0; -0.2, -0.3, -0.4, -0.5 MPa PEG and 0.0 mM and 0.5 mM of Put). The results showed that salt stress and drought reduce seed germination and early growth of both varieties of pigeonpea. The exogenous putrescine only mitigates the deleterious effects of salt stress on seed germination of both cultivars of pigeon pea. The salt and water stresses cause accumulation of proline may be considered osmolyte physiological-biochemical indicator of the effects of stress on the seedlings of both cultivars of pigeon pea. The cause exogenous putrescine accumulation of proline in the seedlings of two cultivars of pigeon pea under salt stress and only moderate levels of water stress. The largest growth of cv. BRS Mandarim with exogenous putrescine is not related to the higher content of proline

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The increasing demand for biofuels has provided significant increases in the areas of sugar cane in Brazil and in recent decades,and long periods of drought have limited the production of this species. This study aimed to evaluate the performance of cultivars RB 85-5536 and RB 93-509 of cane sugar on water restriction during the first stages of development. Experiment was carried out in the greenhouse of the Department of Agronomic Engineering at UFS in randomized blocks in factorial2 x 4, two cultivars (RB 85-5536 and RB 93-509) and four levels of water in the soil based on predefined at field capacity (100% Cc, 80% Cc, 60% Cc and 40% Cc), with four replications, each replicate consisting of a plant. Were evaluated the initial fluorescence emission (F0), maximum fluorescence (Fm), the quantum yield of photosystem (Fv/Fm) and fluorescence transient OJIP, indices of photosynthetic pigments and proline contents determined in leaves determined +1. The measurements of emission of fluorescence were performed during the period of seven days every two days, from 10 to 12 am, with the aid of fluorometer (OS-30P) and clips fixed on the central portion of the leaf, the contents of pigments were determined in the same period with the aidofaportable chlorophyllmeter (Clorofilog CFL 1030) whereas the proline content in the end of the experiment. The fluorescence emission levels and rates of photosynthetic pigments decreased with the increase of water restriction in both cultivars. The cultivar RB 93-509 has accumulated higher proline contentat the level of stress 60% of Cc. With the increase of stress severe by water restriction occurs a reduction in total levels of chlorophyll fluorescence and photosynthetic pigment contents from the seventh day of stress in both varieties of sugar cane. The cultivar RB 93-509 presents greater sensitivity to water stress than the cultivar RB 85-5536. / A crescente demanda por biocombustíveis tem proporcionado aumentos significativos das áreas de cana-de-açúcar no Brasil e nas últimas décadas os períodos prolongados de seca têm limitado a produção dessa espécie. Esse trabalho teve por objetivo avaliar o comportamento das cultivares RB 85-5536 e RB 93-509 de cana-deaçúcar quanto à restrição hídrica visando à seleção precoce. O experimento foi conduzido em casa de vegetação do Departamento de Engenharia Agronômica da UFS em delineamento experimental de blocos ao acaso em esquema fatorial 2 x 4, duas cultivares (RB 85- 5536 e RB 93-509) e quatros níveis de água no solo predefinidos com base na capacidade de campo (100% Cc, 80% Cc, 60% Cc e 40% Cc), com quatro repetições, sendo cada repetição constituída por uma planta. Foram avaliadas a emissão de fluorescência inicial (F0), fluorescência máxima (Fm), rendimento quântico do fotossistema (Fv/Fm) e fluorescência transiente OJIP,índices de pigmentos fotossintetizantes e teores de prolina determinados nas folhas +1. As medições da emissão de fluorescência foram realizadas durante o período de sete dias, a cada dois dias, entre 10 e 12 h da manhã, com auxílio de fluorímetro (OS-30P) e clipes fixados na porção mediana do limbo foliar, os índices de pigmentos foram determinados no mesmo período com auxílio de um medidor portátil de clorofila (Clorofilog CFL 1030) enquanto que o teor de prolina no final do experimento.Os níveis de emissão de fluorescência e os índices de pigmentos fotossintéticos reduziram com o aumento da restrição hídrica em ambas cultivar. A cultivar RB 93-509 acumulou maior teor de prolina ao nível de estresse de 60% da Cc. Com o aumento do estresse severo de restrição hídrica ocorre redução total nos níveis de fluorescência da clorofila e índices de pigmentos fotossintéticos ao sétimo dia de estresse em ambas cultivar de cana-de-açúcar. A cultivar RB 93-509 apresenta maior sensibilidade ao estresse hídrico que a cultivar RB 85-5536.

Orientador: Durvalina Maria Mathias dos Santos / Banca: Rogério Falleiros Carvalho / Banca: Nei Peixoto / Resumo: Os objetivos deste trabalho foram: avaliar germinação, teores de prolina e crescimento inicial das plúmulas e raízes primárias dos genótipos de guandu, BRS Mandarim e Caqui, sob efeito do estresse salino e estresse hídrico associado à poliamina exógena (putrescina) visando, nesta genótipos, verificar a utilização da prolina como marcador bioquímico-fisiológico à salinidade e potencial hídrico e o efeito atenuante da putrescina (Put) quando associada ao estresse salino e hídrico. Dois experimentos foram conduzidos, utilizando o delineamento experimental inteiramente casualizado no esquema fatorial 2x6x2 (BRS Mandarim e Caqui; 0,0; 20; 40; 60; 80 e 120 mM de NaCl e 0,0 mM e 0,5 mM de Put). Para o estresse hídrico o esquema fatorial 2x5x2 (BRS Mandarim e Caqui; 0,0; -0,2; -0,3; -0,4; -0,5 MPa de PEG e 0,0 mM e 0,5 mM de Put). Os resultados evidenciaram que o estresse salino e hídrico reduzem a germinação de sementes e o crescimento inicial de ambas as cultivares de guandu. A putrescina exógena atenua os efeitos deletérios apenas do estresse salino na germinação de sementes de ambas as cultivares de guandu. Os estresses salino e hídrico causam acúmulo de prolina podendo ser considerado osmólito indicador bioquímico-fisiológico dos efeitos destes estresses em plântulas de ambas cultivares de guandu. A putrescina exógena causa acúmulo de prolina nas plântulas de ambas cultivares de guandu sob estresse salino e apenas nos níveis moderados de estresse hídrico. O maior crescimento da cv. BRS Mandarim com putrescina exógena não está relacionado com o maior conteúdo de prolina / Abstract: The objectives of this study were to evaluate germination, growth and proline contents of plumule initial and primary roots of the pigeon pea cultivars BRS Mandarim and Caqui under salt stress and water stress associated with exogenous polyamine (putrescine) order, these cultivars, check the use of proline as a marker biochemical-physiological salinity and water potential and the dampening effect of putrescine (Put) when associated to salt stress and drought. Two experiments were conducted using a completely randomized design in a factorial 2x6x2 (BRS Mandarim and Caqui, 0.0, 20, 40, 60, 80 and 120 mM NaCl and 0.0 mM and 0.5 mM Put) . For the water stress 2x5x2 factorial (BRS Mandarin and Caqui, 0.0; -0.2, -0.3, -0.4, -0.5 MPa PEG and 0.0 mM and 0.5 mM of Put). The results showed that salt stress and drought reduce seed germination and early growth of both varieties of pigeonpea. The exogenous putrescine only mitigates the deleterious effects of salt stress on seed germination of both cultivars of pigeon pea. The salt and water stresses cause accumulation of proline may be considered osmolyte physiological-biochemical indicator of the effects of stress on the seedlings of both cultivars of pigeon pea. The cause exogenous putrescine accumulation of proline in the seedlings of two cultivars of pigeon pea under salt stress and only moderate levels of water stress. The largest growth of cv. BRS Mandarim with exogenous putrescine is not related to the higher content of proline / Mestre

Orientador: Durvalina Maria Mathias dos Santos / Banca: Ricardo Andrade Reis / Banca: Sônia Cristina Juliano Gualtieri / Resumo: O objetivo deste trabalho foi verificar os efeitos do estresse térmico no conteúdo de prolina e no crescimento inicial de plântulas de guandu, oriundas de sementes tratadas com putrescina e espermidina, visando verificar se esta aplicação promove o acúmulo de prolina para atenuar os efeitos do estresse térmico no processo germinativo e no crescimento inicial das plântulas. Para tanto, a semeadura da cv. BRS Mandarim e cv. Caqui foi realizada em caixas plásticas tipo ―gerbox‖ contendo papel de germinação umedecido com soluções de 0,5mM de putrescina ou espermidina. Para os experimentos de germinação, as sementes foram submetidas às temperaturas subótimas de 20ºC, 18ºC, 16ºC e 14ºC e de aquecimento em 36ºC, 38ºC, 40ºC e 44ºC, por 24h e 48h. Após estes períodos, foram submetidas à temperatura ótima de 25 ºC, até o 10º dia de semeadura, quando foi verificada a porcentagem de germinação das sementes. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado em esquema fatorial 3x4x2+3 (0,0mM; 0,5mM de Put ou 0,5mM de Spd; estresse térmico por resfriamento em 20ºC, 18ºC, 16ºC e 14ºC e por aquecimento em 36ºC, 38ºC, 40ºC e 44ºC, tempos de exposição aos estresses por 24h ou 48h, mais os fatores adicionais que consistiu do tratamento controle de temperatura de 25ºC com 0,0mM e 0,5mM de Put e Spd) com quatro repetições de 25 sementes, separadamente, para cada cultivar. Para os teores de prolina e o crescimento inicial das plântulas, foi utilizado outro esquema fatorial, uma vez que apenas os dados das temperaturas subótimas de 18ºC e 14ºC e supraótimas de 36ºC e 40ºC apresentaram-se homogêneos e expressivos. Deste modo, o delineamento experimental foi em esquema fatorial 3x2x2+3 (0,0mM; 0,5mM de Put ou 0,5mM de Spd, estresse térmico de resfriamento em... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to verify the effects of temperature stress on proline content and initial growth of seedlings of pigeonpea, from seeds treated with putrescine and spermidine in order to check if this application promotes the accumulation of proline to mitigate the effects of temperature stress in germination and early seedling growth. Therefore, sowing cv. BRS Mandarin and cv. Kaki was performed in plastic devices "gerbox" containing germination paper moistened with 0,5mM of putrescine or spermidine. For germination experiments, seeds were subjected to suboptimal temperatures at 20ºC, 18ºC, 16ºC and 14ºC and supraoptimal temperatures at 36ºC, 38ºC, 40ºC and 44ºC, for 24h and 48h. After these periods, underwent optimum temperature of 25ºC, until the 10th day of sowing, when it was checked for germination of seeds. The experimental design was a completely randomized factorial 3x4x2+3 (0,0mM; 0,5mM Put or 0,5mM Spd, chilling at 20ºC, 18ºC, 16ºC and 14ºC and heating at 36ºC, 38ºC, 40ºC and 44ºC , times of exposure to stress for 24h or 48h, and additional factors which consisted of treatment control temperature of 25ºC with 0,0mM and 0,5mM of Put or Spd) with four replications of 25 seeds separately for each cultivar. For contents of proline and initial growth of seedlings, it was used another factorial, because only data of suboptimal temperatures 18ºC and 14ºC and supraoptimal temperatures 36ºC and 40ºC were homogeneous and expressive. Thus, the experimental design was a factorial 3x2x2+3 (0,0mM; 0,5mM Put or 0,5mM Spd, chilling at 18ºC and 14ºC and heating at 36ºC and 40ºC, exposure times to stress for 24h or 48h, plus additional factors) with four replications of 25 seeds, separately for the cv. BRS Mandarin and cv. Kaki. The exogenous polyamines attenuate the effects of suboptimal temperatures and... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Sandro Roberto Valentini / Coorientador: Cleslei Fernando Zanelli / Banca: Mário Henrique Bengtson / Banca: Erich Birelli Tahara / Banca: Iran Malavazi / Banca: Flávio Henrique da Silva / Resumo: O fator de tradução 5A (eIF5A) é altamente conservado e essencial para a viabilidade celular. eIF5A é a única proteína conhecida que sofre uma modificação pós-traducional que gera um resíduo de hipusina, essencial para sua função. Apesar de eIF5A já ter sido envolvida em diferentes vias celulares, estudos mais recentes reforçam seu papel no processo de síntese proteica, mais especificamente na etapa de elongação da tradução. Resultados do nosso grupo revelaram uma relação funcional entre eIF5A e o Fator de Elongação da Tradução 2 (eEF2). No intuito de melhor compreender o papel de eIF5A com o processo de elongação da tradução, o presente trabalho buscou aprofundar os estudos de interação física entre eIF5A e eEF2. Foi mostrado que eIF5A não interage fisicamente de forma direta com eEF2 e que a interação física destes dois fatores é dependente de complexos ribossomais. Ainda, foi revelado que eIF5A e eEF2 não estão presentes no ribossomo simultaneamente ou não ocupam o mesmo ribossomo por muito tempo. Além disso, como foi mostrado que o homólogo de eIF5A em bactéria, EF-P, interage físicamente com a proteína ribossomal L1, foi investigada a relação funcional entre eIF5A e L1 em levedura. Os resultados obtidos mostraram uma forte interação genética entre estes fatores e uma possível dependência da presença de L1 para a ligação de eIF5A no ribossomo. Por fim, como foi mostrado que eIF5A é necessária para a tradução de sequências de prolinas, as quais causam stalling do ribossomo durante a tradução, e que outros tipos de stalling do ribossomo recrutam e ativam o complexo Ribossome Quality Control (RQC), foi estudada também a interação funcional entre o eIF5A e os fatores do RQC, Ltn1 e Tae2. Apesar de ter sido identificada interação genética entre mutantes de eIF5A e destes fatores... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The translation factor 5A (eIF5A) is highly conserved and essential for cell viability. eIF5A is the only protein known to contain the essential amino acid residue hypusine, generated by a post-translational modification. Although eIF5A has been involved in different cellular pathways, recent studies have strengthened its role in protein synthesis, more specifically in the translation elongation step. Results of our group revealed a functional correlation between eIF5A and the Translation Elongation Factor 2 (eEF2). To further investigate the role of eIF5A in translation elongation, we carried out new experiments to study the physical interaction between eIF5A and eEF2. eIF5A does not interact directly with eEF2 and their physical interaction is dependent on ribosomal complexes. Moreover, eIF5A and eEF2 do not bind simultaneously to the same ribosome or they do not occupy the same ribosome for a long time. Additionally, as it was shown that the homolog of eIF5A in bacteria, EF-P, interacts physically with the Large Ribosome Protein 1 (L1). We evaluated a functional interaction between eIF5A and L1. The results demonstrated a strong genetic interaction between these factors and a possible dependency of L1 in the eIF5A ribosome binding. Finally, as eIF5A was recently involved in translation of polyproline stretches, which cause ribosome stalling, and other types of ribosome stalling recruit and activate the Ribosome Quality Control (RQC) complex, we also investigated the functional interaction between eIF5A and the RQC factors Ltn1 and Tae2. Although it was identified genetic interaction between mutants of eIF5A and mutants of these RQC factors, ribosome stalled at polyproline residues does not recruit the RQC complex. Curiously, it was observed that eIF5A is important for the formation of cellular aggregates... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Neste trabalho foi investigado o efeito da administração crônica de prolina sobre o conteúdo total de gangliosídios, fosfolipídios e de colesterol, assim como, sobre o perfil de gangliosídios no córtex, no hipocampo, no hipotálamo e no cerebelo de ratos. Também, foi avaliado o conteúdo e o perfil de gangliosídios nas frações solúvel e resistente a detergente obtidas de membranas sinápticas de córtex. Ratos Wistar foram divididos em dois grupos: 1) injetados subcutaneamente com solução 0,9% de NaCl (animais controle) e 2) injetados subcutaneamente com solução de prolina, em concentrações adequadas ao peso corporal (animais hiperprolinêmicos). Tanto a solução de prolina quanto a salina foram administradas do 6° ao 28° dia pós-natal. Doze horas após a última administração, os animais foram sacrificados mediante decapitação sem anestesia. As estruturas cerebrais foram dissecadas e em seguida homogeneizadas em clorofórmio:metanol na proporção 1:1 vpara a extração lipídica. As membranas sinápticas foram obtidas através de centrifugação diferencial e as frações solúvel e resistente a detergente foram isoladas através de tratamento das membranas com Triton X-100 a 4°C para investigação de microdomínios de membrana. Após a realização das análises, os resultados mostraram que os animais submetidos ao tratamento crônico com prolina apresentaram um marcado aumento no conteúdo de gangliosídios no córtex cerebral e no hipocampo, enquanto os conteúdos de fosfolipídios e de colesterol aumentaram somente no hipocampo. Além disso, os conteúdos destes compostos não foram alterados no hipotálamo e no cerebelo de animais hiperprolinêmicos. Por outro lado, o conteúdo de gangliosídios diminuiu nas frações solúvel e resistente a detergente obtidas de membranas sinápticas de córtex de animais hiperprolinêmicos. Embora os perfis de gangliosídios não tenham sido aparentemente modificados, as quantidades absolutas das espécies foram alteradas tanto no extrato total, como nos microdomínios de membrana obtidos do córtex. Estes dados revelam que o tratamento crônico com prolina afeta de forma distinta as diferentes regiões cerebrais quanto à composição lipídica das membranas celulares, refletindo-se sobre a distribuição de lipídios nos microdomínios de membrana do córtex. Entre as conseqüências destes fenômenos poderiam ser sugeridas modulações diferentes nas transmissões sinápticas que contribuiriam para o déficit cognitivo e/ou outras disfunções neurológicas presentes em pacientes com hiperprolinemia tipo II. / In the present work we investigated the effects of chronic proline administration on ganglioside, cholesterol and phospholipid total contents, as well as on ganglioside profile in cerebral cortex, hippocampus, hypothalamus and cerebellum of rats. We also evaluated the ganglioside content and profile in detergent- soluble and resistant fractions isolated from synaptic membranes obtained from cerebral cortex. Wistar rats were divided into two groups: 1) saline (control) and 2) proline injected (hyperprolinemic). Proline solution or saline were administered from 6th to 28th postnatal day, according to body weight. Twelve hours after the last injection, the animals were sacrificed by decapitation without anesthesia. Brain structures were homogenized with chlorophorm:methanol 1:1 for lipid extraction. Synaptic membrane was extracted by differential centrifugation and detergent- soluble and resistant fractions were isolated by cold Triton X-100 treatment. Results showed that rats subjected to chronic proline treatment presented a significant increase of ganglioside content on cortex and hippocampus, while phospholipid and cholesterol contents only increased in hippocampus. However, the content of these components were not altered in hypothalamus and cerebellum of hyperprolinemic rats. On the other hand, ganglioside content decreased in detergent- soluble and resistant fractions isolated from synaptic membrane obtained from hyperprolinemic cortex. Although ganglioside profiles were apparently not modified, the individual absolute quantities were altered in cortex total lipid extract and membrane microdomains obtained from cerebral cortex. Our findings suggest that chronic proline treatment affects, in a distinct manner, different cerebral regions concerning the lipid composition of the cell membranes, reflecting on its distribution in the cortex membrane microdomains. Among these phenomena consequences, different modulations in synaptic transmission may be suggested which may contribute to the impairment in cognition and/or other neurological disfunctions found in hyperprolinemia type II patients.