A ação de fosfolipases A2 (FLA2s): miotoxinas (MTs) ?II e III, isoladas de Bothrops asper (VBa) e CB2, de Crotalus durissus terrificus (VCdt) e os venenos brutos, sobre a expressão de ciclooxigenases (COXs) e síntese de prostaglandina (PG) E2 e PGD2 foi avaliada. As MTs e VBa mas não CB2 e nem VCdt induziram a expressão de COX-2 por leucócitos. Em estudos in vitro ocorreram a liberação de PGs e expressão de COX-2, após a incubação de macrófagos (M?s) com FLA22s e, de neutrófilos (N?s) e M?s, com VBa. A CB2 induziu somente a liberação de PGs. A inibição de FLA2 citosólica (cFLA2), diminuiu os níveis de PG induzidos pelas MTs, mas não pela CB2, e não afetou a expressão de COX-2 induzida pelas MTs. O envolvimento do NF-?kB na expressão de COX-2 foi mostrado com inibidores. Em conclusão, MTs, CB2 e VBa estimulam a síntese de PGs in vivo e in vitro e MTs e VBa, mas não CB2, induzem a expressão de COX-2. O VCdt não afeta estes parâmetros. O efeito das MTs sobre a expressão de COX-2 e PGs é mediado pelo NF-kB e pela cFLA2, respectivamente. Os efeitos de CB2 na produção de PGs são independentes de cFLA2s e COX-2. O fato da MT-II ser destituída de atividade enzimática sugere que a atividade catalítica per se, não seja relevante para os efeitos observados. / Action of the phospholipase A2 (PLA22): myotoxins (MTs) -II and -III, from Bothrops asper (BaV) and CB2, from Crotalus durissus terrificus (CdtV) and these venoms on cyclooxygenases (COXs) and synthesis of prostaglandins (PGs) E2 and D2 were studied in vivo and in vitro. Intraperitoneal injection of sPLA22s and BaV but not CdtV released PGD2 and PGE2. MTs and BaV but neither CB2 nor CdtV induced expression of COX-2 by leukocytes. Release of PGs and expression of COX-2 occurred in vitro after incubation of macrophages (M?s) with PLA2 and neutrophils (N?) and M?s with BaV. CB2 induced only PGs release. Inhibition of cytosolic PLA2 (cPLA2), reduced PG levels caused by MTs, but not by CB2 while did not affect MTs-induced COX-2 expression. Involvement of NF-kB in COX-2 was showed using with inhibitors. In conclusion MTs, CB2 and BaV stimulate the synthesis of PGs in vivo and in vitro and MTs and BaV, but not CB2, induce COX-2 expression. VCdt does not affect these parameters. Effect of MTs on COX-2 is mediated by NF-kB, and on PGs by cPLA2. Effects of CB2 on PGs are independent of cPLA2 and OX-2. Since MT-II lacks catalytic activity the PLA2 activity per se is not relevant for activation of this cascade.

A destruição crônica do aparelho de inserção periodontal devido a uma intensa resposta inflamatória a bactérias conduz a uma condição clínica conhecida como doença periodontal. A inflamação periodontal geralmente provoca úlceras superficiais no sulco gengival, onde os capilares sanguíneos estão expostos a bactérias. Patógenos periodontais, assim como seus produtos podem ser translocados e liberados do sulco gengival para a corrente sanguínea e, portanto, ter efeitos periféricos. A bolsa periodontal é também importante reservatório de mediadores inflamatórios que podem atingir a corrente sanguínea. Diversos estudos avaliam a relação entre a doença periodontal e as doenças cardiovasculares. Sabe-se que muitas doenças cardiovasculares têm início em desordens vasculares, principalmente na camada endotelial dos vasos sanguíneos de grande condutância. Assim, o foco deste estudo foi investigar a reatividade vascular de aortas de animais com periodontite. Tanto a contração para a norepinefrina quanto o relaxamento para a acetilcolina estão diminuídos em animais com periodontite, mas os mecanismos para estes efeitos são diferentes. A diminuição da resposta contrátil à norepinefrina parece estar associada a um aumento da produção de óxido nítrico através da isoforma induzível da óxido nítrico sintase e a diminuição da resposta relaxante à acetilcolina parece estar associada a produção de prostanóides principalmente derivados da isoforma do tipo II da enzima ciclooxigenase. / The chronic destruction of the periodontal attachment apparatus due to an intense inflammatory response to bacteria leads to a condition known as periodontal disease. The periodontal inflammation usually causes superficial ulcers in the gingival sulcus, where blood capillaries are exposed to bacteria. Periodontal pathogens, as well as their products can be translocated and released into the gingival sulcus, subsequently into the bloodstream and thus have peripheral effects. The periodontal pocket is also an important reservoir of inflammatory mediators that can reach the bloodstream. Several studies have evaluated the relationship between periodontal disease and cardiovascular disease. It is known that many cardiac diseases begin as vascular disorders, especially in the endothelial layer of blood vessels of large conductance. Thus, the focus of this study was to investigate the vascular reactivity of aortas from animals with periodontitis. Both norepinephrine-mediated contraction and acetylcholine-mediated relaxation are decreased in animals with periodontitis, but the mechanisms are different for these responsess. The contraction appears to be associated with increased production of nitric oxide by inducible isoform of nitric oxide synthase and relaxation with prostanoids primarily derived type II isoform of the enzyme cyclooxygenase.

Achromobacter xylosoxidans (A. xylosoxidans) é um bacilo gram negativo, aeróbio, móvel, não fermentador de glicose e oxidase positivo, que coloniza habitualmente o trato digestivo e auditivo de humanos. Este bacilo tem sido associado a infecções oportunistas graves, especialmente pneumonia, em indivíduos imunossuprimidos, que em geral, são de difícil controle devido principalmente a fatores de virulência, mecanismos de escape e mutirresistência a antibióticoterapia. Dentre as condições que predispõem o desenvolvimento de infecção pulmonar por A. xylosoxidans, o câncer, a fibrose cística (FC) e a doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC) são as mais comuns. Essas doenças apresentam produção aumentada de vários mediadores lipídicos, como LTB4 e PGE2. A PGE2 é um lipídeo imunossupressor atuante no sistema imune inato e adaptativo que regula, por exemplo, a liberação de citocinas e quimiocinas, a ativação de células T, além de inibir as funções efetoras dos macrófagos. O LTB4, por outro lado, está associado ao recrutamento de células para o foco infeccioso, a ativação dos mecanismos efetores dos macrófagos, e aumento de mediadores inflamatórios. Neste trabalho, nosso objetivo foi investigar se, esses mediadores são liberados durante a infecção pulmonar por A. xylosoxidans e o possível papel dos mesmos. Nossos resultados demonstram que os tratamentos com celecoxibe, inibidor da síntese de prostaglandinas (PGs), nas doses de 1mg/kg ou 5mg/kg, não alteram a sobrevida dos animais infectados com inóculo letal ou subletal de A. xylosoxidans. No entanto, o tratamento com MK886, um inibidor da produção de leucotrienos (LTs), resultou em aumento da mortalidade dos animais infectados com inóculos letal ou subletal, redução do recrutamento de neutrófilos no dia 1 após infecção, redução de IL-6 do dia 14 e aumento de TNF-, IL-1 e MIP-1 no dia 7, KC no dia 14 e PGE2, em todos os períodos estudados. Este tratamento também induziu no lavado broncoalveolar, a diminuição não significativa do extravasamento de proteínas no dia 1, mas aumento significativo no dia 3. Com base nesses dados, podemos sugerimos que o tratamento com MK886 aumenta a mortalidade dos animais, devido ao aumento da permeabilidade vascular, com consequente edema, que leva os animais a insuficiência respiratória. Outros experimentos serão realizados para determinar o papel das prostaglandinas (PGs) e/ou metabolitos do ácido araquidônico neste fenômeno. / Achromobacter xylosoxidans (A. xylosoxidans) is a gram negative bacilli, aerobic, mobile, glucose non fermenter and oxidase positive, which normally colonizes the digestive and auditory tract of humans. This bacillus has been associated with severe opportunistic infections, especially pneumonia, in immunocompromised individuals, which are generally difficult to control mainly due to virulence factors, mechanisms and exhaust multidrug resistance to antibiotic therapy. Among the conditions that predispose the development of pulmonary infection by A. xylosoxidans, cancer, cystic fibrosis (CF) and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are the most common. These diseases have increased production of various lipid mediators, such as LTB4 and PGE2. PGE2 is an immunosuppressive lipid active in the innate and adaptive immune system that regulates, for example, the release of cytokines and chemokines, activation of T cells and inhibits the effector functions of macrophages. LTB4, on the other hand, is associated with the recruitment of cells to the infection, and the activation of effector mechanisms of macrophages, and increased production of inflammatory mediators. In this study, our aim was to investigate whether these mediators are released during pulmonary infection by A. xylosoxidans and the possible role of the same. Our results demonstrate that treatment with celecoxib, prostaglandin synthesis inhibitor (PGs), at doses of 1mg/kg or 5mg/kg not alter the survival of animals infected with lethal or sublethal inoculum of A. xylosoxidans. However, treatment with MK886, an inhibitor of the production of leukotrienes (LTs) resulted in an increased mortality of the animals infected with lethal or sublethal inoculum, reduce the recruitment of neutrophils on day 1 after infection, reduction in IL-6 day 14 and increased TNF-, IL-1 and MIP-1 at day 7, KC in day 14 and PGE2 in all periods. This treatment also induced in the bronchoalveolar lavage, no significant decrease protein extravasation in the day 1, but significantly increased on day 3. Based on these data, we suggest that treatment with MK886 increases the mortality of animals due to increased vascular permeability, with consequent edema, which leads the animals to respiratory failure. Other experiments will be conducted to determine the role of prostaglandins (PGs) and/or metabolites of arachidonic acid in this phenomenon.

A tuberculose é responsável por mais de 2 milhões de mortes ao ano. A imunidade protetora contra a tuberculose está relacionada com a ativação de linfócitos CD4+ e CD8+ produtores de IFN-g, citocina que potencializa os mecanismos microbicidas dos macrófagos para eliminação dos bacilos. Nos últimos anos, o leucotrieno B4 (LTB4) destacou-se como mediador lipídico que participa da imunidade protetora contra diversas infecções, incluindo a tuberculose. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi avaliar o papel dos leucotrienos na proteção induzida pela imunização homóloga com DNA-HSP65 ou heteróloga com BCG/DNA-HSP65. Para isso, inicialmente, nós confirmamos a participação dos leucotrienos no controle da infecção por M. tuberculosis ao mostrar que animais C57BL/6, que controlam a replicação dos bacilos, secretam mais LTB4; e ao bloquear a síntese de leucotrienos com a droga MK-886, estes animais ficaram suscetíveis à infecção. Em seguida, nós passamos a avaliar se os leucotrienos participavam da proteção conferida pela imunização homóloga com DNA-HSP65 ou heteróloga (prime-boost) com BCG/DNA-HSP65. Nossos resultados mostraram que animais deficientes para a síntese de LT (5-LO KO) infectados foram mais suscetíveis à infecção em relação aos animais WT. A maior suscetibilidade dos animais 5-LO KO foi associada à redução na secreção de IFN-g, nitrito e IL-17, aumento na secreção de PGE2, defeitos no recrutamento de células inflamatórias e aumento no influxo de células Foxp3+ para os pulmões. A imunização homóloga perdeu completamente seu efeito protetor na ausência de leucotrienos, enquanto a imunização heteróloga induziu proteção parcial. Animais 5-LO KO imunizados pelo esquema prime-boost secretaram concentrações mais elevadas de IL-17 e tiveram menor influxo de células Foxp3+ para os pulmões quando comparados aos animais 5-LO KO não imunizados e infectados. A inibição da síntese de prostaglandinas durante o protocolo de imunização pela estratégia prime-boost reduziu a capacidade protetora da vacina tanto em animais WT como nos 5-LO KO, sugerindo que as prostaglandinas podem desempenhar papel no processo de imunização. Em conjunto, nossos resultados reforçam a importância dos leucotrienos na imunidade protetora contra tuberculose, sugerindo sua atuação indireta, uma vez que, além de contribuírem para síntese de IFN-g e nitrito, também parecem colaborar na síntese de IL-17. / Tuberculosis is responsible for more than 2 millions of death for year. The immune response against tuberculosis is related to activation of IFN-g-producing CD4+ and CD8+ cells. IFN-g increases the microbicidal mechanisms of macrophages to kill intracellular bacilli. Recently, the lipid mediator leukotriene B4 (LTB4) has been related to protection against several diseases, including tuberculosis. In this sense, the aim of this study was to evaluate the role of leukotrienes in the protection induced by homologous immunization with DNA-HSP65 or heterologous with BCG/DNA-HSP65 (prime-boost). Firstly, we confirmed the role of leukotrienes to control the replication of M. tuberculosis when we showed that C57BL/6 mice, which are able to contain bacilli growth, secreted high levels of LTB4; and when we blocked leukotrienes synthesis by treatment with MK-886, C57BL/6 mice became more susceptible to infection. Then, we evaluated the role of leukotrienes in the protection induced by homologous or heterologous (prime-boost) immunization. Our data showed that animals deficient in leukotrienes synthesis (5-LO KO) infected with M. tuberculosis were more susceptible to infection than WT mice. The higher susceptibility of 5-LO KO was related to the decreasing of IFN-g, nitrite and IL-17 production, increasing of PGE2 secretion, defective recruitment of inflammatory cells and increased influx of Foxp3+ cells to the lungs. Homologous immunization has lost completely its protector effect in the absence of leukotrienes, while heterologous immunization induced only partial protection. Prime-boost-immunized 5-LO KO mice secreted higher levels of IL-17 and had lower influx of Foxp3+ cells to the lungs, when compared to non-immunized infected 5-LO KO. The abrogation of the synthesis of prostaglandins during the immunization by prime-boost reduced the protector effect of the vaccine either in WT and 5-LO KO mice, suggesting that prostaglandins may be important to the process of immunization. Together, our data reinforce the key role of leukotrines in immune response against tuberculosis, suggesting that these lipid mediators may act indirectly to induce IFN-g, nitrite and IL-17 synthesis.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Objetivos: Avaliar se o misoprostol por via retal constitui um mÃtodo efetivo para induÃÃo do parto em gestantes com ruptura prematura das membranas a termo. MÃtodos: Realizou-se um estudo, incluindo 70 gestantes com ruptura prematura das membranas entre 37 e 41 semanas, feto vivo e Ãnico, em apresentaÃÃo cefÃlica, escore de Bishop < 6 e sem contraÃÃes de trabalho de parto. Todas receberam misoprostol retal (50mcg) atà deflagraÃÃo do trabalho de parto. Analisaram-se desfechos diversos como intervalo entre induÃÃo e inÃcio do trabalho de parto, entre induÃÃo e parto, incidÃncia de taquissistolia, tipo de parto, incidÃncia de corioamnionite e resultados neonatais. Resultados: Os intervalos (mÃdia  desvio padrÃo) entre induÃÃo e inÃcio das contraÃÃes e entre induÃÃo e parto foram de, respectivamente, 286,5  154,6 min e 661,4  290,4 min. Observou-se uma freqÃÃncia de 11,4% de taquissistolia. 77,1% das pacientes evoluÃram para parto vaginal. Diagnosticou-se corioamnionite em 8,6% dos casos. A mediana dos escores de Apgar foi de 8 e 9 no primeiro e quinto minutos, respectivamente. Houve um caso de Apgar < 7 no quinto minuto. Sepse foi constatada em 10% dos recÃm-nascidos. ConclusÃes: A induÃÃo do parto com misoprostol retal foi efetiva em pacientes com ruptura prematura das membranas, constatando-se 77,1% de partos vaginais e uma baixa freqÃÃncia de corioamnionite. Estes achados precisam ser confirmados em grandes ensaios clÃnicos controlados. / Objectives: To investigate whether rectally administered misoprostol is an effective method for induction of labor in patients with ruptured membranes at term. Methods: A trial was conducted, enrolling 70 women with alive, singleton cephalic fetus and ruptured membranes between 37 and 41 weeks of pregnancy, with Bishop score less than 6 and without evidence of labor. They received rectal misoprostol (50mcg) every 4 hours until active labor was diagnosed. Outcomes included time from induction to labor and induction to delivery, incidence of tachysystole, mode of delivery, incidence of chorioamnionitis and neonatal outcome. Results: The mean (ÂSD) induction-to-Iabor and induction-to-delivery interval were 286.5  154.6 minutes and 661.4  290.4 minutes, respectively. The frequency of tachysystole was 11.4%. 77.1% of patients achieved vaginal delivery. Chorioamnionitis was diagnosed in 8.6% of patients. Median Apgar score at 1st and 5th minutes were 8 and 9 respectively. There was one case of Apgar < 7 at 5st minute. Neonatal sepsis occurred in 10% of neonates. Conclusions: Induction of labor with rectal misoprostol in the setting of premature rupture of membranes was effective, with 77.1% of vaginal deliveries and a low rate of chorioamnionitis. These findings must be confirmed in large randomized controlled trials.

A sepse é caracterizada por uma produção excessiva de mediadores inflamatórios, acompanhada de taquicardia e hipotensão. Experimentalmente, a administração de endotoxina (Lipopolissacarídeo, LPS) em doses relativamente elevadas induz choque endotoxêmico, sendo um bom modelo de estudo da sepse. Diversos grupos têm demonstrado ações antiinflamatórias e antitumorais do citral, um composto do óleo essencial de Cymbopogon citratus. Nosso laboratório demonstrou ação antipirética do citral em modelo de febre induzida por LPS, acompanhada de redução nos níveis de citocinas plasmáticas e de prostaglandina E2 (PGE2) no plasma e área pré óptica do hipotálamo (POA), importante região termorregulatória. A hipótese testada neste trabalho foi a de que o citral atenua a hipotensão provocada pela endotoxina, além de amenizar as alterações termoregulatórias. Todos os procedimentos foram executados de acordo com os princípios éticos de experimentação animal, aprovados pelo comitê de ética local (CEUA 2015.1 1214 58-2). Foi realizado o implante de cânulas na artéria e veia femoral para registro da pressão arterial e administração de LPS (1,5 mg/kg) ou salina apirogênica 0,9% além do implante de datalogger na cavidade peritoneal de ratos Wistar, para registro da temperatura corporal. No dia do registro, 30 minutos antes da administração de LPS ou salina, os animais receberam citral (100 mg/kg) ou tween 80 a 1% (veículo) por via oral. Os parâmetros cardiovasculares e temperatura corporal foram registrados por 300 minutos após os respectivos tratamentos. Os valores de pressão arterial média (PAM) e frequência cardíaca (FC) foram coletados a cada 10 minutos após o tratamento e a temperatura corporal foi registrada pelo datalogger em intervalos de 5 minutos. Em outro protocolo foi realizado apenas o implante de cânula na veia femoral dos animais de todos os grupos para administração de LPS ou salina, coleta de sangue para dosagem de interleucina 6, PGE2, nitrito e nitrato e corticosterona e coleta do encéfalo para dosagem de PGE2 e PGD2. As diferenças estatísticas entre os grupos foram analisadas pelo teste ANOVA two-way seguido por pós teste de Newman-Keuls, com o nível de significância adotado de p < 0,05. A administração de LPS provocou queda na PAM eaumento na FC. Tais respostas não foram afetadas pela administração prévia de citral. O LPS também induziu febre e aumento nas concentrações plasmáticas de interleucina - 6 (IL-6), óxido nítrico (NO), PGE2 e corticosterona. Esses parâmetros não foram alterados pela pré- administração de Citral. No entanto, o citral provocou redução na produção de PGD2 naPOA, sem alterar a de PGE2 nesta região. Podemos concluir que o citral não previne as alterações nos parâmetros cardiovasculares no modelo de endotoxemia em ratos, porém reduz a produção de um mediador termorregulatório e inflamatório do sistema nervoso central (a PGD2), sem alterar a produção de outros mediadores inflamatórios a nível periférico (no plasma). Portanto, em um modelo mais agressivo de inflamação sistênica o citral não se mostrou suficiente para proteger o organismo das ações deletérias do LPS. / Sepsis is characterized by the overproduction of inflammatory mediators, accompanied by tachycardia and hypotension. Experimentally, administration of endotoxin (Lipopolysaccharide, LPS) in relatively high doses induces endotoxemic shock, a widely used model of sepsis in rats. Several groups have demonstrated anti-inflammatory and antitumor roles of citral, an essential oil compound of Cymbopogon citratus. Emilio-Silva et al. (2017) have shown an antipyretic role of citral in a model of LPS-induced fever, accompanied by a reduction of cytokines and prostaglandin E2 plasma levels and in the preoptic area of hypothalamus (POA), the hierarchically most important thermoregulatory region. We hypothesized that citral attenuates the LPS-induced hypotension, besides mitigating the thermoregulatory adjustments in rats. All procedures were performed in agreement with ethical guidelines for animal experimentation aproved by the local ethical committee (CEUA 2015.1 1214 58-2). Femoral artery and vein were implanted with cannulas for blood pressure recording and LPS (1.5 mg/kg) or 0.9% apyrogenic saline injection. In a second surgical procedure a datalogger was implanted into the peritoneal cavity for measurements of body temperature. All surgical procedures were performed under Ketamin/xilazin (100/10 mg/kg) anesthesia. One day after arterial catheterization, 30 minutes prior to LPS or saline administration, the animals received either citral (100 mg / kg) or 1% tween 80 (vehicle) oralstarly. The cardiovascular parameters and body temperature were recorded for 300 minutes after the respective treatments. Mean blood pressure (MAP) and heart rate (HR) were collected every 10 minutes after treatments and body temperature was recorded by the datalogger at 5 minute intervals. Blood samples were obtained in another set of rats for interleukin-6, PGE2, nitrite and nitrate and corticosterone analyses. The brain was removed for PGE2 and PGD2 analyses. Statistical differences between groups were analyzed by the two-way or one-way ANOVA test followed by Newman-Keuls post-test, with significance level adopted at p <0.05. As expected, LPS administration caused a decrease in MAP and an increase in HR, and these responses were not affected by citral. LPS also induced fever and increased plasma levels of interleukin - 6 (IL - 6), nitric oxide (NO), prostaglandin E 2 andcorticosterone. These parameters were also not altered by citral. On the other hand, citral caused a reduction in prostaglandin D2 concentration in the POA, but failed to alter PGE2 levels in this region. Our data are consistent with the notion that citral does not affect changes in cardiovascular and thermoregulatory parameters. Consistently, citral also caused no changes in both LPS-induced peripheral inflammatory mediators (in plasma) and in the POA, except PGD2. Therefore, in our model which mimetic a fairly critical situation, citral may not be sufficient to protect the organism from the deleterious actions of LPS. Financial support: FAPESP / CAPES.

Orientador: Maria Cláudia Gonçalves de Oliveira Fusaro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas / Made available in DSpace on 2018-08-24T04:40:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Schiavuzzo_JalileGarcia_M.pdf: 1205741 bytes, checksum: b599c1bee7cda79ed3554fcb789eea9d (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Existem evidências do envolvimento do ATP via ativação do receptor P2X3 na dor muscular. Portanto, o objetivo deste estudo foi verificar se a ativação do receptor P2X3 no músculo gastrocnêmio de ratos induz hiperalgesia mecânica, e em caso afirmativo, analisar os mecanismos inflamatórios pelo qual os receptores P2x3 induzem hiperalgesia mecânica. O Antagonista não seletivo para o receptor P2X3 ?,?meATP foi administrado no músculo gastrocnêmio de ratos, induzindo hiperalgesia, a qual foi significativamente reduzida pelo antagonista seletivo do receptor P2X3 e P2X2/3 - A-317491. A hiperalgesia mecânica induzida pelo ?,?meATP foi reduzida pelo inibidor de ciclooxigenase Indometacina, pelo antagonista seletivo do receptor de Bradicinina B1 e B2- Dalbk e Bradyzide, respectivamente, antagonista dos adrenoceptores ?1 e ?2 - Atenolol e ICI 118,551 respectivamente, e inibidor não específico de selectinas Fucoidan. O ?,?meATP também induziu o aumento da concentração local de citocinas pro inflamatórias TNF-?, IL-1?, IL-6 e CIN e migração de neutrófilos. Juntos estes achados sugerem que o ?,?meATP induz hiperalgesia mecânica no músculo gastrocnêmio via ativação de receptor periférico P2X3, o qual envolve bradicinina, prostaglandinas e aminas simpatomiméticas e migração de neutrófilos. Portanto, nós sugerimos que os receptores P2X3 sejam um importante alvo no controle da dor muscular / Abstract: There is evidence of the involvement of endogenous ATP via activation of P2X3 in muscle pain. Therefore, the aim of this study was to verify whether the activation of P2X3 receptors in the gastrocnêmio muscle of rats induces mechanical hyperalgesia and, if so, to analyze the inflammatory mechanisms by which P2X3 receptors induce mechanical hyperalgesia. Intramuscular administration of the non-selective P2X3 receptor agonist ?,?-meATP in the gastrocnemius muscle of rats induced mechanical hyperalgesia, which was significantly reduced by the selective P2X3 and P2X2/3 receptors antagonist A-317491. The ?,?-meATP-induced mechanical hyperalgesia was prevented by the indomethacin cyclooxygenase inhibitor, the selective bradykinin B1- or B2- receptor antagonist DALBK and bradyzide, respectively, the ?1- or ?2-adrenoceptor antagonist atenolol and ICI 118,551, respectively, and the nonspecific selectin inhibitor fucoidan. ?,?-meATP also induced increase in the local concentration of the pro-inflammatory cytokines TNF-?, IL-1?, IL-6 and CINC-1 and the neutrophil migration. Together, these findings suggest that ?,?-meATP induced mechanical VIII hyperalgesia in the gastrocnemius muscle of rats via activation of peripheral P2X3 receptors, which involves bradykinin, prostaglandins, sympathetic amines, pro-inflammatory cytokines and neutrophil migration. Therefore, we suggest that P2X3 receptors are important targets to control muscle inflammatory pain / Mestrado / Biodinâmica do Movimento Humano e Esporte / Mestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo

Cyclooxygenases (COXs) and their main renal product, prostaglandin E2 (PGE2), regulate many physiological renal functions and are involved in the pathogenesis of diabetic kidney disease. The PGE2 receptor EP3 has been repeatedly shown to be upregulated during diabetes. Physiologically, EP3 is best recognized to act as a diuretic by antagonizing arginine-vasopressin (AVP)-mediated water reabsorption. Incidentally, the first renal manifestation of diabetes is polyuria, which may trigger a cascade of events leading to DN. We hypothesize that EP3 contributes to polyuria and kidney dysfunction during diabetes. We injected EP3-/- mice with streptozotocin (STZ) and evaluated their renal function 12-weeks post injection. EP3-/- STZ mice exhibit attenuated polyuria while exhibiting increased urine osmolality suggesting enhanced water reabsorption. Western blots reveal that EP3-/- STZ mice have increased expression of aquaporin-1 and aquaporin-2 as well as reduced urinary AVP excretion compared to STZ mice. However, salt transporters were equivalently increased in STZ and EP3-/- STZ mice. In vitro microperfusion shows that EP3 completely abrogates AVP-mediated water reabsorption in STZ cortical collecting ducts. Furthermore, EP3-/- STZ mice showed blunted renal COX-2 expression as well as reduced renal hypertrophy, glomerular hyperfiltration, and albuminuria. Taken together, the data suggests that EP3 contributes to polyuria during diabetes by inhibiting expression of aquaporins. Additionally, EP3 seems to contribute to renal COX-2 induction during diabetes. The lack of an increase in renal COX-2 protein levels in EP3-/- STZ mice may be protective by preventing further renal damage.

Orientador: Vital Paulino Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T05:19:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santana_AlanaMendonca_M.pdf: 2805390 bytes, checksum: 9512111e988de78a1ffde9d9f877658b (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi investigar os efeitos das combinações fixas dos análogos de prostaglandinas com timolol sobre a barreira hematoaquosa, a espessura macular central e a pressão intraocular (PIO), em pacientes pseudofácicos com glaucoma primário de ângulo aberto. Neste ensaio clínico randomizado, com observador mascarado e duração de 6 meses, os pacientes foram tratados uma vez por dia (20:00 horas) com lubrificante (grupo controle) ou com a combinação fixa de maleato de timolol 0,5% e latanoprosta 0,005% (CFLT), maleato de timolol 0,5% e bimatoprosta 0,03% (CFBT) ou maleato de timolol 0,5% e travoprosta 0,004% (CFTT). Foi incluído no estudo apenas um olho de 61 pacientes: CFLT (n=16), CFBT (n=15), CFTT (n=15) e grupo controle (n=15). A barreira hematoaquosa foi avaliada por meio do &quot;laser flare meter¿ antes do início do uso das medicações e após 15 dias, 1,2,3,4,5 e 6 meses de tratamento. A PIO foi medida sempre às 9:00 horas, nas mesmas ocasiões. A espessura macular central foi avaliada por meio da tomografia de coerência óptica antes do uso das medicações, após 1 e 6 meses de tratamento ou na hipótese de piora da acuidade visual. Não houve aumento estatisticamente significante nos valores médios de &quot;flare¿ em comparação aos valores iniciais em todos os grupos (p>0,05) em todas as visitas, exceto no grupo CFTT no primeiro mês (p=0,0476) e no grupo CFLT (p=0,0129) no terceiro mês de seguimento. Não houve diferença estatisticamente significativante entre os valores médios de &quot;flare¿ entre os grupos durante o estudo (p>0,05). A média dos valores da espessura macular central aumentou significativamente nos grupos CFLT (p=0,012) e CFTT (p=0,0419) no primeiro mês de tratamento em relação aos valores iniciais. Não houve aumento estatisticamente significante nos valores médios da espessura macular central em relação aos valores iniciais em todos os grupos após 6 meses de tratamento (p>0,05) e não ocorreu diferença estatisticamente significante entre os grupos durante o estudo (p>0,05). A PIO média inicial foi significativamente menor no grupo controle (p=0,0000). Todas as combinações fixas reduziram significativamente a PIO em todas as visitas (P<0,0001), com efeito hipotensor semelhante entre si (p=0,816). Estes resultados indicam que o uso das combinações fixas de análogos de prostaglandinas com timolol não aumentou significativamente a média dos valores de &quot;flare¿ ou a média da espessura macular após 6 meses de tratamento nesta população / Abstract: The aim of this study was to investigate the effects of prostaglandin analogues and timolol fixed-combinations on the blood-aqueous barrier, central macular thickness and intraocular pressure (IOP) in pseudophakic patients with primary open angle glaucoma. In this randomized, masked-observer, 6-month clinical trial, patients were treated once daily (8 pm) with lubricant eye drops (control group), 0,5% timolol and 0,005% latanoprost fixed-combination (LTFC), 0,5% timolol and 0,03% bimatoprost fixed-combination (BTFC) or 0,5% timolol and 0,004% travoprost fixed-combination (TTFC). One eye of 61 patients were included in the study: LTFC (n=16), BTFC (n=15), TTFC (n=15) and control group (n=15). The blood-aqueous barrier status was assessed using the laser flare meter before the medications were started and after 15 days, 1, 2, 3, 4, 5 and 6 months of treatment. The IOP was measured always at 9 am, at the same intervals. The central macular thickness was evaluated with optical coherence tomography before medications were started, after 1 and 6 months of follow-up or if a patient showed decreased visual acuity at any time during follow-up. There was no significant increase in mean flare measurements from baseline in all groups (p>0.05) in all visits, except TTFC group at 1 month (p=0,0476) and LTFC group at 3 months (p=0,0129). There were no significant differences in mean flare values among the groups (p>0.05). Mean central macular thickness values were significantly higher in LTFC (p=0,012) and TTFC groups (p=0,0419) at 1 month of follow-up. There was no significant increase in mean central macular thickness values from baseline in all groups (p>0.05) after 6 months and no significant differences among the groups (p>0.05) during follow-up. At baseline, mean IOP was significantly lower in control group (p=0,0000). All fixed-combinations significantly reduced IOP in all follow-up visits, with similar lowering effect (p=0,816). These findings indicate that the use of prostaglandin analogues and timolol fixed-combinations didn't significantly increased mean flare values or mean central macular thicknes measurements after 6 months of follow-up in this population / Mestrado / Oftalmologia / Mestra em Ciências Médicas

Endometrial prostaglandins (PGs) play a role in menstruation in primates and in luteolysis in nonprimates. Their biosynthesis is regulated by estrogen (E) and progesterone (P) in a manner not fully understood. The purpose of this thesis research was to (1) study the effects of E and P, both in vivo and in vitro, on basal endometrial PG output in vitro during the course of the artificial menstrual cycle in the rhesus monkey, and (2) further to examine the cellular mechanisms of P action in vivo on PG output using an ovine model system. To carry out the first objective, ovariectomized rhesus monkeys (n=39) were maintained on either a standard or manipulated artificial menstrual cycle (SAMC and MAMC, respectively) and endometrial biopsies were obtained at precise times in separate cycles on: cycle day 9 (mid-proliferative), 13 (mid-cycle E peak), 14 (one day post E peak), and 23 (mid-secretory). PGF2α was the most abundant PG produced in vitro by endometrial organ cultures, the levels of which changed most dramatically throughout the SAMC. Within the first 24 hours of organ culture, PGF2α accumulation was low on day 9 and rose significantly (p<0.01) on day 13, indicating a stimulatory effect of E in vivo. However, E added in vitro, at either physiologic or supraphysiologic concentrations, to endometrial cultures did not stimulate PGF2α accumulation on any cycle day examined. On day 14, just one day post E peak, there was a dramatic fall in PGF2α accumulation which appeared to be due to both a decline in stimulatory E in vivo and a rise in inhibitory P in vivo. Basal PGF2α accumulation in vitro by day 23 endometrial cultures was 10-fold higher (p<0.01) compared to days 9 and 14. This high level of PGF2α output on day 23 appeared to be caused by a paradoxical priming effect of P in vivo and also a slight enhancement by the mid-cycle peak of E in vivo. Padded in vitro, at a physiologic concentration, to day 23 endometrial cultures markedly inhibited (p<0.01) the high level of PGF2α accumulation, suggesting that P withdrawal in vivo promotes the rise in endometrial PGF2α production in vivo at the time of menstruation in primates. An ovine model system was further used to investigate the cellular mechanisms of P action in vivo. Ovariectomized sheep (n=8) were administered an infusion regimen of either E and P, or E and P vehicle alone, to examine the effects of P in vivo on PGF2α production in vitro by endometrial explants during short-term incubations. P in vivo increased the mass amount of stimulated PGF2α output by both physiologic and pharmacologic mechanisms. In addition, P did not appear to significantly alter the sensitivity of the endometrium to stimulatory levels of oxytocin in vitro indicating that the cellular events accounting for the P priming effect, in part, may occur independent of the oxytocin receptor closer to the PG biosynthetic pathway. In P-primed endometrium, the mass amount of PGF2α stimulated by a calcium-ionophore (A23l87) was less than that stimulated by OT suggesting the involvement of calcium-insensitive mechanisms in PGF2α synthesis.