One important objective of prostate cancer (PCa) research is to understand the molecular basis underlying the progression of these cancers from an androgen dependent to an androgen independent state. Hypermethylation of the promoter CpG islands is associated with the transcriptional silencing of specific gene sets in each tumor type and subtype. Transcriptional silencing of antitumor genes via CpG island hypermethylation could be a mechanism mediating PCa progression from an androgen-dependent to an androgen-independent state. Hypermethylation associated gene silencing has been reported for a great number of genes in PCa with the exception of the genes that undergo methylation associated silencing specifically during cancer development to androgen independence. The first aim of this thesis is to identify novel glenes which undergo DNA hypermethylation associated gene silencing during the cancer progression. The androgen-dependent (AD, as defined as the inability of celill to proliferate in the absence of androgen) PCa cell line LNCaP gives rise to the androgen-independent (AI) subline LNCaPcs generated by maintaining LNCaP in medium with charcoal-stripped (CS) serum for over 30 passages. This LNCaP cell model was used to identify differentially methylated sequences between the two genomes using the Methylation-Sensitive Restriction Fingerprinting (MSRF) technique. One sequence identified is located in a 5' CpG island, which encompasses part of the promoter, exon 1, and part of intron 1, of the Peroxisomal Membrane Protein 24 KD (PMP24) gene. PMP24 is silenced in concert with the hypermethylation of its CpG island in AI LNCaPcsand PC-3 cell lines. The silencing is reactivated by the treatment with a DNA methyltransferase inhibitor, 5-aza-2'-deoxycytidine (5AZAdC). PMP24 is specifically silenced in PCa cancer cell lines and shows potential antitumor properties. These results demonstrate the utility of MSRF in the identification of novel, differentially methylated DNA sequences in the genome and suggest that hypermethylation-mediated silencing of PMP24 is an epigenetic event involved in PCa progression to androgen independence. The next study investigated the molecular mechanism for DNA methylation associated gene silencing of PMP24 in AI LNCaPcs and PC-3 cell lines. We demonstrated that PMP24 transcription is repressed by the disruption of transcription factor binding to a critical cis-element by hypermethylation of its promoter CpG island. We found a CpG containing activator protein 2 (AP-2) cis-element in the intron 1 of PMP24 whose first CpG dinucleotidle is essential for the sequence-specific protein binding and the promoter activity of the gene. We presented first in cellulo evidence that the methylation of AP-2 cis-element alone but not the whole CpG island, using a newly developed methylated oligonucleotides treatment, is sufficient for the downregulation of PMP24. Our study is the first to report that the silencing mechanism for PMP24 in AI LNCaPcs and PC-3 is mediated by the complete methylation of a single GpG site of AP-2 cis-element in the intron 1 part of the CpG island, which interferes with transcription factor binding. Most interestingly, the promoter CpG island of PMP24 is hypermethylated in AD LNCaP cells with the incomplete methylation specifically at the AP-2 cis-element. The silencing of PMP24 in AD LNCaP cells was reactivated not by the 5AZAdC treatment but by the treatment with Trichostatin A (TSA), a histone deacetylase inhibitor. An alternative silencing mechanism for PMP24 other than the interference with transcription factor binding by methylation is therefore likely involved at this androgen-dependent stage. During the androgen ablation process, this mechanism is either evolved by the spread of methylation in the promoter CpG island or selected against, leading to the methylation-dominant silencing mechanism in the AI cells as seen in LNCaPcsand PC-3 cells. Taken together, this thesis emphasized the important role of DNA methylation in the progression of PCa into androgen independence. Particular respect should be paid to the specific CpG dinucleotides in cis-elements critical for the promoter activity, whose complete methylation could dominate the silencing mechanism which is independent of androgen. This thesis also pointed to the importance of monitoring the effects of cell culture on the methylation status of genes. Most importantly, this thesis raised the possibility that the silencing mechanisms for PMP24 could be different in AD LNCaP cells as compared to AI LNCaPcs and PC-3 cells. Either the evolution of such mechanism or the selectivity against it during the androgen ablation process would result in a methylation-dominant silencing mechanism of the genes such as PMP24 in AI cells and may contribute to the overall androgen independence of the cells.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:46:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sergio Riguete Zacchi.pdf: 1519504 bytes, checksum: bd940a0de6abfd7245ba353b00ee9514 (MD5) Previous issue date: 2012-12-18 / Introduction: Prostate cancer is the malignant neoplasm with the highest incidence in the Brazilian population and the second leading cause of cancer mortality among men, with an increasing trend over time and with 75% of cases occurring in men above 65 years old. Objectives: To assess the association of sociodemographic and clinical variables with the initial clinical staging; analyze mortality and survival and their associations with demographic and clinical variables in patients with prostate cancer. Methods: We analyzed retrospectively the data of men with prostate cancer registered in the Hospital Cancer Registry of the Santa Rita de Cássia Hospital (HSRC), in the city of Vitória, ES, Brazil during the period from January 1st, 2000 to December 31th, 2006. Data from the Mortality Information System(SIM) were used to determine the outcome. The data were analyzed using the Statistical Package for Social Sciences (SPSS) version 18.0. For the study variables that showed statistical significance, we calculated the crude and adjusted odds ratio using a multivariate logistic regression model. For estimating the survival, it was used the Kaplan-Meier method. For comparing survival curves, it was used the Log Rank test, with a significance level of 5%. The influence of the variables was calculated by Cox s multiple regression. Results: Of the 1290 men with prostate cancer, 758 (58.8%) were found alive, 308 (23.9%) had died of prostate cancer and for 224 (17.4%) the outcome was death by other causes. It was found a higher risk of being diagnosed with late stage men with PSA > 20ng/dl and Gleason score ≥ 7. The risk was reduced in those who reached the HSRC already diagnosed and without previous treatment. Death from prostate cancer was associated to a Gleason score > 9, PSA levels >20 ng/dl and the presence of metastasis. Death from other causes was associated to being a widower, entering the HSRC undiagnosed and untreated and with PSA levels > 50 ng/dl. It was found that Prostate Cancer Specific Survival (PCSS) at 5 and 8 years was 81.9% and 77.2% for all stages, and Overall Survival (OS) at 5 and 8 years was 70.1% and 69 8%, respectively. The variables Gleason score ≥ to 7, PSA >20 ng/dl and presence of metastasis were associated with a shorter survival. Conclusion: The variables that were associated with late clinical stage, mortality from prostate cancer and reduction of survival time are likely to be recognized and early diagnosed in screening consultations. It is extremely important to adopt actions from more effective health policies aimed at men with the goal of ensuring equal access to all those diagnosed with prostate cancer, so they can receive early diagnosis and timely treatment / Introdução: O câncer de próstata é a neoplasia maligna de maior incidência na população brasileira e a segunda causa de mortalidade oncológica entre os homens, com uma tendência de aumento temporal e 75% dos casos incidindo em homens acima de 65 anos. Objetivos: Avaliar a associação das variáveis sociodemográficas e clínicas com o estadiamento clínico inicial; analisar a mortalidade e a sobrevida e suas associações com variáveis sociodemográficas e clínicas nos pacientes com câncer de próstata. Metodologia: Analisouse, de forma retrospectiva, os dados dos homens com câncer de próstata registrados no Registro Hospitalar de Câncer do Hospital Santa Rita de Cássia (HSRC), Vitória-ES, durante o período de 01 de janeiro de 2000 a 31 de dezembro de 2006. Utilizaram-se os dados do Sistema de Informação sobre Mortalidade (SIM) para determinar o desfecho. Analisou-se através do Pacote Estatístico para Ciências Sociais (SPSS), versão 18.0. Para as variáveis do estudo que apresentaram significância estatística, calcularam-se os Odds ratio brutos e ajustados pelo modelo de regressão logística multivariada. Para se estimar a sobrevida, utilizou-se o método de Kaplan-Meier e para a comparação das curvas de sobrevida, empregou-se o teste de Log Rank. Calculou-se a influência das variáveis pela regressão múltipla de Cox. Resultados: Dos 1.290 homens com câncer de próstata, 758 (58,8%) encontraram-se vivos, 308 (23,9%) apresentaram óbito por câncer de próstata e em 224 (17,4%) o desfecho foi o óbito por outras causas. Encontrou-se um maior risco de serem diagnosticados em estadiamento tardio os homens com PSA > 20ng/dl e escore de Gleason ≥ 7. O risco foi reduzido naqueles que chegaram ao HSRC encaminhados com diagnóstico e sem tratamento prévio. Associou-se ao óbito por câncer de próstata o escore de Gleason > 9, o valor de PSA > 20 e a presença de metástase. Associou-se ao óbito por outras causas o estado civil viúvo, ingressar no HSRC sem diagnóstico e sem tratamento prévio e o valor do PSA >50 ng/dl. Encontrou-se Sobrevida Câncer de Próstata Específica (SCPE) em 5 e 8 anos de 81,9% e de 77,2% para todos os estadiamentos e Sobrevida Global (SG) em 5 e 8 anos de 70,1% e 69,8%, respectivamente. As variáveis Escore de Gleason ≥ 7, o PSA > 20 ng/dl e a presença de metástase associaram-se a um menor tempo de sobrevida. Conclusão: As variáveis que se associaram a um estadiamento clínico mais tardio, à mortalidade por câncer de próstata e à redução do tempo de sobrevida são passíveis de reconhecimento e diagnóstico precoce em consultas de rastreamento. É de extrema relevância a adoção de ações a partir de políticas de saúde mais efetivas voltadas para o homem com o objetivo de garantir um acesso equitativo a todos aqueles com diagnóstico de câncer de próstata, para que possam receber diagnóstico precoce e tratamento oportuno

O adenocarcinoma prostático (CaP) é o tumor que ocupa a segunda posição em incidência e em mortalidade dentre as neoplasias malignas masculinas, tendo aumentado a detecção de tumores em estágios precoces da sua história natural nas últimas décadas, frequentemente pequenos e pouco agressivos. A definição clínica mais aceita de tumor de baixo risco foi proposta por DAmico e consiste em PSA 10 ng/ml, Gleason 6 e não ser palpável ou não acometer mais de um lobo prostático no toque retal. A localização do tumor na próstata, bem como o seu estadiamento local através da detecção de extensão extracapsular (EEC) e/ou invasão de vesículas seminais (IVS) têm importância fundamental na opção e adequação terapêuticas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ultrassonografia transretal (USTR), a ultrassonografia com Doppler de amplitude (USDA), a ressonância magnética (RM), a espectroscopia de prótons por RM (RMS) e a RM dinâmica com contraste endovenoso (RMD) na localização tumoral e estadiamento local do CaP de baixo risco, em comparação com resultados anatomopatológicos. Este foi um estudo prospectivo realizado entre os anos de 2005 e 2009, que avaliou 35 pacientes por RM, RMS e RMD, dos quais 26 foram também submetidos a USTR e USDA. Após a prostatectomia radical, 16 (45,7%) destes pacientes apresentaram doença confinada à próstata, em 11 (31,4%) detectou-se margem cirúrgica positiva e 8 (28,9%) exibiram doença extraprostática. Sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivo e negativo (VPP e VPN) e acurácia na localização do CaP foram de 53,1%; 48,3%; 63,4%; 37,8% e 51,3% para USTR; 70,4%; 36,2%; 65,1%; 42,0% e 57,7% para USDA; 71,5%; 58,9%; 76,6%; 52,4% e 67,1% para RM; 70,4%; 58,7%; 78,4%; 48,2% e 66,7% para RMS; 67,2%; 65,7%; 79,3%; 50.6% e 66,7% para RMD, respectivamente. Sensibilidade, especificidade, VPP, VPN e acurácia na detecção de EEC foram de 33,3%; 92,0%; 14,3%; 97,2% e 89,7% para USTR e 50,0%; 77,6%; 13,7%; 95,6% e 75,7% para RM, respectivamente. Para detecção de IVS esses valores foram de 66,7%; 85,7%; 22,2%; 97,7% e 84,6% para USTR e 40,0%; 83,1%; 15,4%; 94,7% e 80,0% para RM. Embora preliminares, estes resultados sugerem que os métodos avaliados apresentam baixa concordância na localização e estadiamento local do CaP de baixo risco / Prostate cancer is the second most common tumor and cause of deaths among men neoplasms, with increased detection of tumors at earlier stages in its natural history in the recent decades, often of small size and low agressiveness. The most accepted classification for low-risk prostate cancer was proposed by DAmico and is defined as PSA 10 ng/ml, Gleason score 6 and being undetected or limited to one lobe on digital rectal exam. Tumor location within the prostate as well as its local staging, which consists in extracapsular extension (ECE) and seminal vesicle invasion (SVI) detection, are of extreme importance in treatment choice and planning. The purpose of this study was to evaluate transrectal ultrasound (TRUS), amplitude Doppler ultrasound (ADUS), magnetic resonance imaging (MRI), magnetic resonance spectroscopy (MRS) and dynamic contrast-enhanced magnetic resonance imaging (DMRI) in localizing and locally staging low-risk prostate cancer, in comparison with surgical histopathology. This was a prospective study realized from the year of 2005 to 2009, which evaluated 35 patients by MRI, MRS and DMRI, 26 of whom were also submitted to TRUS and ADUS. After radical prostatectomy, 16 (45.7%) of these patients had pathologically proved organ confined disease, 11 (31.4%) had positive surgical margin and 8 (28.9%) had extraprostatic disease. Sensitivity, specificity, positive and negative predictive values (PPV and NPV) and accuracy values for localizing low risk prostate cancer were: 53.1%, 48.3%, 63.4%, 37.8% and 51.3% for TRUS; 70.4%, 36.2%, 65.1%, 42.0% and 57.7% for ADUS; 71.5%, 58.9%, 76.6%, 52.4% and 67.1% for MRI; 70.4%, 58.7%, 78.4%, 48.2% and 66.7% for MRS; 67.2%, 65.7%, 79.3%, 50.6% and 66.7% for DMRI, respectively. Sensitivity, specificity, PPV, NPV and accuracy values for detecting ECE were: 33.3%, 92%, 14.3%, 97.2% and 89.7% for TRUS and 50.0%, 77.6%, 13.7%, 95.6% and 75.7% for MRI, respectively. For detecting SVI, these values were of 66.7%, 85.7%, 22.2%, 97.7% and 84.6% for TRUS and 40.0%, 83.1%, 15.4%, 94.7% and 80.0% for MRI. Although preliminary, our results suggest that imaging modalities have low agreement in localizing and locally staging low-risk prostate cancer

Introdução: O câncer de próstata é a neoplasia maligna não-cutânea mais frequente nos homens brasileiros. Seu rastreamento é tema controverso na literatura, e a maioria das entidades médicas não recomenda sua realização a partir dos 70 anos. Não existem estudos sobre suas características nessa faixa etária da população brasileira, que não é submetida a rastreamento ativo sistemático. Objetivos: Avaliar a prevalência e critérios de agressividade do câncer de próstata diagnosticado por rastreamento ativo em homens com idade inferior e superior a 70 anos no Brasil. Pacientes e métodos: Estudo transversal retrospectivo incluindo 17.571 voluntários no Brasil, submetidos a rastreamento ativo através de toque retal e dosagem sérica do antígeno prostático específico (PSA), entre janeiro de 2004 e dezembro de 2007. Os critérios de indicação para a biópsia foram: PSA>4,0ng/ml, ou PSA entre 2,5 e 4,0ng/ml com relação PSA livre/total <=15%, ou toque retal suspeito. Todos os homens rastreados foram divididos em dois grupos etários: grupo A, entre 45 e 69 anos; grupo B, acima de 70 anos. Os grupos foram comparados com relação a prevalência e critérios de agressividade da doença (valor do PSA sérico, escore de Gleason da biópsia e estadiamento clínico TNM). Resultados e discussão: A prevalência do câncer de próstata na nossa amostra foi de 3,71%. O grupo dos homens com mais de 70 anos apresentou prevalência da doença 2,9 vezes maior (RP 2,90; p <0,001), o valor médio de PSA foi mais elevado nos acometidos (17,28ng/ml no grupo B versus 9,54ng/ml no grupo A), assim como ocorreu maior chance de haver portadores de câncer com PSA acima de 10,0ng/ml (OR 2,63; p=0,003). No grupo de homens com mais de 70 anos também houve uma prevalência 3,59 vezes maior do padrão histológico mais agressivo (Gleason 8-10: RP 3,59; p<0,001) e maior prevalência de doença metastática (RP 4,95; p<0,05). Conclusão: O rastreamento do câncer de próstata nos homens com idade acima de 70 anos e expectativa de vida superior a 10 anos pode ser relevante no Brasil. Neste grupo etário detectamos uma maior prevalência desta doença, quando comparado ao grupo de idade entre 45 e 69 anos. Nosso estudo também demonstrou que o grupo de homens com mais de 70 anos possui maior probabilidade de apresentar doença de alto risco ao diagnóstico (PSA sérico mais elevado e em faixas de maior risco; escore de Gleason 8 a 10 e disseminação metastática à distância mais frequentes) / Background: Prostate cancer (PC) is the leading non-cutaneous malignancy among Brazilian men. PC may present as an indolent or aggressive life-threatening disease. There is no consensus in the literature regarding PC screening, and most medical organizations do not recommend it over the age of 70 years old. There are no studies in the literature addressing this topic in the Brazilian population. Objectives: To compare the prevalence and the aggressiveness of prostate cancer diagnosed, by active screening, in men under and over 70 years. Patients and methods: We performed a retrospective cross-sectional study including 17,571 volunteers. Screening was performed by digital rectal examination and prostatespecific antigen (PSA) measurement. Individuals who met the criteria for PC suspicion (PSA>4.0ng/ml, or PSA 2.5-4.0ng/ml with free/total PSA ratio <=15%, or suspicious digital rectal examination) underwent prostate biopsy. Those diagnosed with cancer were staged. The screened men were stratified by age in two groups: group A, between 45 and 69 years old, and group B, over 70 years old. The groups were compared regarding PC prevalence and its aggressiveness criteria (seric PSA value, Gleason score from biopsy and TNM staging). Results and discussion: The prevalence of prostate cancer was 3.71% in all population. The group of men over 70 years old had disease prevalence 2.9 times higher (RP 2.90; p<0.001); higher mean PSA value in men diagnosed with prostate cancer (17.28ng/ml vs. 9.54ng/ml); and greater likelihood to present PC when PSA level was above 10.0ng/ml (OR 2.63; p=0.003), when compared with men between 45 and 69 years old. The group of men aged over 70 years also presented a prevalence of histologic aggressive disease 3.59 times higher (Gleason 8-10: RP 3.59, p<0.001) and greater prevalence of metastatic disease (RP 4,95; p<0,05). Conclusion: Our study reveals that men over 70 years old presented a higher prevalence of prostate cancer and a higher probability to present high-risk disease at diagnosis (higher PSA; Gleason score 8-10 and metastatic disease more frequent), when compared to men aged 45-69 years. Screening for prostate cancer in men aged over 70 years and life expectancy over 10 years may be relevant in Brazil

INTRODUÇÃO: O diagnóstico do câncer de próstata é realizado através da dosagem do PSA sérico e da realização do toque retal. Qualquer alteração dem ambos indicam a necessidade de realização da biópsia de próstata guiado por ultrassom. Contudo, a grande maioria dos pacientes submetidos a biópsia não tem câncer e, portanto, são submetidos a biópsia desnecessariamente. Além disso, muitos casos diagnosticados não precisam ser tratados devido ao comportamento indolente da neoplasia. Portanto, há necessidade de ferramentas mais acuradas no diagnóstico e prognóstico do câncer de próstata e os marcadores urinários são instrumentos promissores na avaliação dessa neoplasia. OBJETIVO: Avaliar o perfil de expressão de 5 genes (MMP9, PSMA, GREB1, hk3, PCA3) na urina de pacientes portadores de câncer de próstata em comparação com pacientes sem a neoplasia e analisar se há relação com os fatores prognósticos pré e pós-tratamento. MATERIAL/MÉTODOS: O estudo constituiu na análise de 46 pacientes portadores de câncer de próstata e 28 pacientes sem suspeita da neoplasia (PSA<2,5ng/ml; TR normal; e sem fatores de risco). A urina dos pacientes foi colhida após massagem prostática, armazenada e analisada posteriormente a expressão gênica através de reação em cadeia da polimerase em tempo real. Além da análise do perfil de expressão gênica em relação aos casos sem neoplasia, foram avaliados os perfis de acordo com os fatores prognósticos, como: escore de Gleason, PSA, densidade do PSA, estadiamento clínico e porcentagem do fragmento envolvido na biópsia. Posteriormente, as expressões dos genes foram avaliadas de acordo com as características patológicas da peça operatória, como estadio patológico, escore de Gleason, volume tumoral, comprometimento de vesículas seminais e de linfonodos. RESULTADOS: Foi demonstrada uma superexpressão da MMP9 em 85,7% das amostras com câncer em relação ao grupo controle, com média de 6,4x maior. Os genes PSMA, GREB1, hK3 e PCA3 apresentaram um padrão mais heterogêneo, com tendência a subexpressão nos casos de câncer. Quando avaliados conjuntamente, pode-se evidenciar que a superexpressão simultânea da MMP9 e PSMA estava presente em 100% dos pacientes com PSA >= 10ng/ml (p=0,007) e a superexpressão da MMP9 e GREb1 estava presente em 66,7% dos pacientes com < 50% dos fragmentos positivos (p=0,036). Após avaliação anátomo-patológica, foi possível identificar superexpressão do GREB1 em casos pT2 em comparação com pT3 (p=0,031) e superexpressão do PCA3 em casos com volume tumoral maior (>= 11% x < 11%) (p=0,006). CONCLUSÕES: O estudo demonstrou que os marcadores urinários podem ser uma ferramenta útil no diagnóstico e prognóstico do câncer de próstata. Foi evidenciada a superexpressão da MMP9 nos casos de câncer em relação ao grupo controle. Além disso, a superexpressão da MMP9 e PSMA em conjunto pode estar relacionada a tumores com PSA mais alto e, portanto, com prognóstico mais desfavorável, enquanto que a superexpressão da MMP9 e GREb1 em conjunto pode estar relacionado a tumores de menor volume. Também foi possível correlacionar os genes urinários com os achados anátomo-patológicos, com GREb1 significativamente mais expresso em tumores confinados a próstata, enquanto PCA3 mais expresso em casos de maior volume tumoral / INTRODUCTION: Currently, prostate cancer diagnosis is performed through the measurement of serum PSA and digital rectal examination. Any alteration in one or both indicates the need for ultrasound-guided prostate biopsy. However, the vast majority of patients undergoing biopsy do not have cancer and therefore undergo unnecessary biopsies. Moreover, many prostate cancer cases do not need to be treated due to the indolent behavior. Therefore, more accurate methods for diagnosis and prognosis of prostate cancer are necessary and urinary markers are promising tools in the evaluation of prostate tumors. OBJECTIVES: To evaluate the expression profile of 5 genes (MMP9, PSMA, GREB1, hk3, PCA3) in urine of patients with prostate cancer compared with patients without cancer and to determine whether there is a relationship with the pre and post treatment prognostic factors. MATERIAL/METHODS: The study consisted of the analysis of 46 patients with prostate cancer and 28 patients without cancer (PSA < 2.5 ng/ml, normal DRE, and no risk factors). The urine of patients was collected after prostatic massage, stored and subsequently gene expression analyzed by real time polymerase chain reaction. Besides the analysis of gene expression compared to cases without cancer, the profiles according to prognostic factors were evaluated, like Gleason score, PSA, PSA density, clinical staging and percentage fragment involved in the biopsy. Subsequently, gene expressions were evaluated according to the pathological features, such as pathologic stage, Gleason score, involvement of lymph nodes and seminal vesicles. RESULTS: An over-expression of urinary MMP9 was demonstrated in 85.7% of the samples with cancer compared to non-cancer, with a mean of 6.4x. The PSMA, GREB1, hK3 and PCA3 genes showed a more heterogeneous pattern, with a tendency to under-expression in cancer. When considered together, it can be evidenced that the simultaneous over-expression of MMP9 and PSMA was present in 100% of patients with PSA >= 10ng/ml (p=0.036) and over-expression of MMP9 and GREb1 was present in 66.7% of patients < 50% positive fragments involved (p=0,036). After pathological evaluation were identified over-expression of GREB1 in pT2 cases compared to pT3 (p = 0.031), and over-expression of PCA3 in cases with greater tumor volume ( >= 11% x <11%) (p=0.006). CONCLUSIONS: The study showed that urinary markers can be a useful tool in the diagnosis and prognosis of prostate cancer. Overexpression of MMP9 was observed in cancer cases compared to control cases and can be helpful to avoid unnecessary prostate biopsies. Furthermore, overexpression of PSMA and MMP9 together may be related to higher PSA tumors and therefore more unfavorable prognosis, whereas overexpression of MMP9 and GREb1 together may be related to lower volume tumors. It was also possible to correlate urinary genes with pathologic findings with GREb1 significantly more expressed in tumors confined to the prostate, while PCA3 most expressed in cases of higher tumor volume

Introdução: Os micro RNA (miRNA) são formados a partir de RNA precursores de fita dupla que contém entre 60 a 110 nucleotídeos e formam estruturas do tipo hairpin. Imediatamente após sua transcrição pela RNA polimerase II a enzima Dicer promove a clivagem do RNA precursor em seqüências menores contendo 19 a 22 nucleotídeos. Após a clivagem, o miRNA integra-se ao complexo silenciador induzido pelo RNA (RISC) que o conduz ao seu RNA mensageiro (mRNA) homólogo recém transcrito. Esta associação promove a degradação do mRNA, ou interfere na tradução da proteína caracterizando um grande mecanismo de controle da expressão dos genes. Este mecanismo está relacionado ao desenvolvimento de órgãos e tecidos, e está envolvido no processo de carcinogênese. Nosso objetivo é identificar um perfil de expressão de miRNA que defina o adenocarcinoma de próstata de prognóstico favorável e desfavorável considerando os níveis de PSA e dados anatomopatológicos. Materiais e métodos: Foram selecionados 53 pacientes com tumores desfavoráveis (mediana do escore de Gleason igual a 8, 79,2% estadiados pT3, mediana de PSA 10,1 ng/mL e mediana do volume tumoral de 23%) e 45 considerados favoráveis (mediana do escore de Gleason igual a 5, 80% estadiados pT2, mediana de PSA de 7,8 ng/mL e mediana do volume tumoral de 11,5%). O controle foi representado por 7 pacientes com hiperplasia prostática benigna (HPB). Todos os pacientes foram submetidos a prostatectomia radical pelo mesmo cirurgião. Os espécimes cirúrgicos foram examinados na sua totalidade pelo mesmo patologista. A análise dos miRNA foi feita a partir de tecido congelado e tecido incluído em parafina usando a técnica da reação em cadeia da polimerase em tempo real quantitativa (qRT-PCR) utilizando primers e sondas Taqman® específicas. O RNU43 foi usado como controle interno. Resultados: Com exceção dos miRNA 199a, 21, 15a, 16 e 25 que se mostraram subexpressos tanto nos casos desfavoráveis como nos favoráveis, houve uma diminuição global na expressão dos miRNA com redução estatisticamente significativa na expressão dos miRNA 143, 145 e 146a, 191, 218 e Let7c em tumores desfavoráveis em relação aos tumores favoráveis. Conclusão: Demonstramos que no processo de transição entre os carcinomas favoráveis e desfavoráveis de próstata existe uma perda global na expressão de miRNA que podem ser importantes controladores de expressão de uma série de genes relacionados a progressão desta neoplasia. Dados experimentais avaliando o papel desses miRNA devem ser conduzidos para que possamos definir seu papel na evolução do câncer de próstata / Introduction: micro RNA (miRNA) are formed from double-stranded RNA precursors that contain between 60-110 nucleotides and form structures such as hairpin. Immediately after their transcription by RNA polymerase II, the enzyme Dicer promotes the cleavage of precursor RNA sequences containing minor 19-22 nucleotides. After cleavage, the miRNA is part of the RNA-induced silencing complex (RISC) that leads to its messenger RNA (mRNA) newly transcribed counterpart. This association promotes the degradation of mRNA, or interferes with the protein translation characterizing a great mechanism for controlling gene expression. This mechanism is related to the development of organs and tissues, and may be involved in the process of carcinogenesis. Our goal is to identify a miRNA expression profile that distinguishes prostate adenocarcinoma of favorable and unfavorable prognosis considering the PSA and pathological findings. Material and Methods: We studied 53 patients with tumors considered unfavorable (Median of Gleason score 8, 79.2% staged pT3, median of PSA 10.1 ng/mL and median of tumor volume of 23%) and 45 considered favorable (Median of Gleason score 5, 80% staged pT2, median of PSA 7.8 ng/mL and median of tumor volume of 11.5%). The control group was represented by seven patients with benign prostatic hyperplasia (BPH). All patients underwent radical prostatectomy by the same surgeon. The surgical specimen was examined entirely by the same pathologist. The analysis of miRNA was made from frozen and paraffin embedded tissue by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) using the Taqman® specific primers and probes. The RNU43 was used as a internal control. Results: Except for miRNAs 199a, 21, 15a, 16 e 25 that were underexpressed by both favorable and unfavorable prostate cancer, there was a global decrease of all miRNAs studied, and some differences were statistically significant as miRNAs 143, 145 e 146a, 191, 218 e Let7c that were underexpressed in unfavorable carcinomas compared favorable tumor. Conclusion: We have demonstrated that in the process of transition between favorable and unfavorable prostate cancer there is a global loss of expression of miRNAs. These molecules can be important controllers of a series of genes related to cancer progression. Experimental studies are needed in order to comprehend the role of these genes in prostate carcinogenesis

Introdução: O Câncer de próstata (CaP) é o tumor mais comum e a segunda causa de óbito por câncer no homem. O diagnóstico é feito pelo toque retal, nível sérico do antígeno prostático específico (PSA) e biópsia. A avaliação prognóstica é definida pelo PSA, estádio e escore de Gleason, porém, nenhum destes fatores clássicos, mesmo quando avaliados em conjunto, tem excelente performance na determinação prognóstica desta neoplasia. O CD44 é uma glicoproteína transmembrana envolvida em múltiplos processos celulares entre eles a adesão, migração, transmissão de sinal e apoptose. Tem como seu principal ligante o ácido hialurônico sendo assim um importante elemento na interação entre a célula e a matriz e por isso tem sido estudada como potencial marcador em várias neoplasias. Além da forma padrão (CD44s), apresenta ainda dez isoformas resultantes de splicing. São poucos os estudos de CD44 no CaP, principalmente relacionados a expressão de suas isoformas. Objetivo: Analisar e correlacionar a expressão de CD44s e de suas isoformas CD44v2, CD44v3, CD44v4, CD44v5, CD44v6, CD44v7, CD44v8, CD44v9 e CD44v10 no câncer localizado de próstata com os fatores prognósticos clássicos. Material e métodos: Analisamos retrospectivamente os espécimes cirúrgicos de 94 pacientes submetidos a prostatectomia radical (PR) entre outubro de 1997 e abril 2002. A expressão da forma standard, assim como das suas oito variantes resultado de splicing alternativo foi analisada através da reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR). O grupo controle foi constituído pelos espécimes cirúrgicos de 14 pacientes com hiperplasia prostática benigna (HPB) submetidos a cirurgia aberta. Correlacionamos o perfil de expressão da forma padrão e suas variantes com escore de Gleason, estadiamento patológico, nível de PSA pré-operatório e recidiva bioquímica definida por níveis de PSA acima de 0,2ng/ml em seguimento médio de 53,3 meses. Resultados: Encontramos subexpressão de CD44s e superexpressão de todas as isoformas resultado de splicing alternativo no CaP localizado quando comparado a HPB. Observamos que a média de expressão da maioria das variantes foi maior nos pacientes que não recidivaram, porém apenas a maior expressão de CD44v2 esteve significativamente associada a menor chance de recidiva bioquímica (p=0,044). Conclusão: No CaP, existe uma alteração na expressão de CD44, com perda de CD44s e aumento de expressão de todas as suas variantes. No entanto, a recorrência tumoral mostrou-se significativamente associada a perda da expressão de CD44v2 / Introduction: Prostate cancer (PC) is the most common tumor and the second leading cause of cancer death in men. The diagnosis is made by rectal examination, serum prostate-specific antigen (PSA) and biopsy. The prognosis is defined by the PSA, tumor stage and Gleason escore, however, none of these classical factors, even when combined, have excellent accuracy in determining tumor behavior. The CD44 is a transmembrane glycoprotein related to many cell processes including adhesion, migration, signaling transduction and apoptosis, being considered a potential marker in many tumors. Besides the standard form (CD44s) there are ten isoforms resulted from alternative splicing. There is scarce data in the literature regarding the role of CD44 and its isoforms in PC prognosis. Objective: To analyze the expression of the CD44s and its isoforms CD44v2, CD44v3, CD44v4, CD44v5, CD44v6, CD44v7, CD44v8, CD44v9 and CD44v10 in in surgical specimens of localized PC correlating the expression profile with the classical prognostic factors and biochemical recurrence. Methods: We retrospectively analyzed the surgical specimens of 94 patients that underwent radical prostatectomy between October 1997 and April 2002. The standard form as well as its nine variants were analyzed by quantitative, real time polymerase chain reaction (qRT-PCR). The control group consisted of 14 specimens of patients with benign prostatic hyperplasia (BPH) submitted to open surgery. We correlated the expression of the variants with the Gleason escore, pathological stage, pre-operatory PSA and the occurrence of biochemical recurrence defined as PSA higher than 0.2 ng/ml in a mean follow up of 53.3 months. Results: CD44s was underexpressed, and all isoforms were overexpressed in PC when compared with BPH. However, the mean expression of most variants was higher in patients without recurrence, while a higher expression of CD44v2 correlated with higher recurrence free survival rate (p=0.044). Conclusion: In PC, there is a change in CD44 expression with a loss of CD44s and an overexpression of all of the CD44 variants. We also found that biochemical recurrence was significantly associated with loss of CD44v2 expression.

INTRODUÇÃO: O câncer de próstata é a neoplasia sólida mais comum em homens. Na doença localizada, as alternativas de tratamento cirúrgico são a Prostatectomia Radical Retropúbica (PRR), Prostatectomia Radical Perineal (PRP), Prostatectomia Radical Laparoscópica (PRL) e Prostatectomia Radical Robótica Assistida (PRRA). A cirurgia robótica tem recebido atenção de especialistas pelas perspectivas de melhores resultados funcionais, se comparado às demais técnicas, porém não há evidências suficientes na literatura que defina fatores prognósticos para os resultados funcionais. OBJETIVO: Identificar fatores prognósticos para resultados funcionais em portadores de câncer de próstata localizado submetidos à PRRA. MÉTODO: Analisaram-se vídeos de 143 PRRA realizadas de janeiro de 2009 a janeiro de 2012 no Hospital Alemão Oswaldo Cruz, São Paulo (Brasil) por um único cirurgião. A potência sexual foi avaliada considerando os parâmetros de dissecção bilateral ou unilateral, nota de dissecção, uso de cautério, uso de tração, uso de pontos hemostáticos no Feixe Vásculo Nervoso (FVN) e dados pré e pós-operatórios. Em relação à continência urinária, considerou-se o comprimento e qualidade do coto uretral, o tamanho do colo vesical e dados pré e pós-operatórios. No pós-operatório, potência sexual foi definida como a capacidade de penetração em mais de 50% das tentativas de intercurso sexual (escore >= 3 na Questão 2 do IIEF-5) com ou sem o uso de inibidores de Fosfodiesterase tipo 5. Continência urinária foi considerada quando não houve necessidade do uso de forros ou, se usados, que fosse no máximo um e apenas como segurança, ou que apresentaram escore zero no ICIQ-SF. RESULTADOS: Observou-se correlação para recuperação da potência com dissecção bilateral do FVN (p=0,001), maior nota de dissecção do FVN no 6º (p < 0,01) e 12º mês (p < 0,01), mediana de nota 9 para dissecção do FVN (p < 0,01), menor idade no 6º (p < 0,01) e 24º mês (p=0,01), idade média de 59 (p=0,007), 58,35 (p=0,02) e 57,7 anos (p=0,005) no 6º, 18º e 24º mês, respectivamente, peso corporal médio de 76,18 Kg (p=0,01), peso prostático com mediana de 31 g (p=0,03), menor valor de Gleason total (p=0,03), Gleason total com mediana de 6 (p=0,009), mediana de 12 fragmentos retirados (p=0,001), menor volume tumoral no 1º (p=0,01) e 18º mês (p=0,02), volume tumoral com mediana de 5,25 (p=0,03), 5,40 (p=0,02) e 5,25 cm³ (p=0,04) no 1º, 18º e 24º mês, respectivamente, tumor unilateral (p=0,02), e ausência de invasão capsular (p=0,02). As variáveis, uso de cautério, tração e pontos hemostáticos no FVN não apresentaram correlação com recuperação de potência sexual. A continência urinária apresentou correlação com maior tempo de cirurgia no 3º (p < 0,01) e 12º mês (p=0,02), mediana de tempo de cirurgia de 3,45 (p=0,001), 3,35 (p=0,04) e 3,30 horas (p=0,04) no 3º, 6º e 12º mês, respectivamente. As variáveis, comprimento do coto uretral, qualidade do coto uretral e tamanho do colo vesical não se correlacionaram com continência urinária, apesar de tamanho do colo vesical mostrar tendência com mediana de 15,92 mm (p=0,054). CONCLUSÃO: As variáveis, dissecção bilateral, nota de dissecção do FVN, idade, peso corporal, peso da próstata, Gleason total, número de fragmentos retirados, volume tumoral, estadiamento tumoral e tempo de cirurgia apresentaram-se como ferramentas úteis para definir fatores prognósticos para resultados funcionais em homens portadores de câncer de próstata localizado, submetidos à PRRA / INTRODUCTION: Prostate cancer is the most common solid malignancy in men. For localized disease, surgical alternatives include Radical Retropubic Prostatectomy (RRP), Radical Perineal Prostatectomy (RPP), Radical Laparoscopic Prostatectomy (RLP) and Robotic Assisted Radical Prostatectomy (RARP). The robotic approach has received great attention, due to the perspective of better functional outcomes when compared to the other surgical alternatives; however, there is not enough evidence in the literature to define prognostic factors for functional outcomes. OBJECTIVE: To identify prognostic factors for functional outcomes in prostate cancer patients undergoing RARP. METHODS: We analyzed the video files of 143 RARP performed by a single surgeon between January 2009 and 2012 at Oswaldo Cruz German Hospital in São Paulo, Brazil. Sexual potency was evaluated considering unilateral or bilateral dissection, grade of dissection, use of electrocautery, use of traction, and use of hemostatic stitches on the neurovascular bundles (NVB), and pre and postoperative data. Urinary continence was evaluated considering the length and quality of the urethral stump, size of the bladder neck, and pre and postoperative data. Postoperatively, sexual potency was defined as successful vaginal penetration in more than 50% of sexual intercourses (IIEF-5, Question 2, score >= 3) with or without the use of Phosphodiesterase type 5 inhibitors. Urinary continence was defined as no pad use, or the use of up to one pad for safety, or an ICIQ-SF score of zero. RESULTS: For the sexual potency recovery, we found correlations with bilateral NVB dissection (p=0.001), higher NVB dissection grade at 6º month (p<0.01) and 12º month (p < 0.01), median NVB dissection grade of 9 (p < 0.01), younger age at 6º month (p < 0.01) and 24º month (p<0.01), mean age of 59 (p=0.007), 58.35 (p=0.01) and 57.7 years (p=0.005) at the 6º, 18º and 24º months respectively, median body weight of 76.18 kilograms (p=0.01), median prostatic weight of 31 g (p=0.03), lower total Gleason score (p=0.03), total Gleason with a median of 6 (p=0.009), median of 12 fragments removed at biopsy (p=0.001), lower tumor volume at 1º (p=0.01) and 18º months (p=0.02), median tumor volume of 5.25 (p=0.03), 5.40 (p=0.02) and 5.25cc (p=0.04) at 1º, 18º and 24º months respectively, unilateral tumor (p=0.02), and absence of capsular invasion (p=0.02). Use of electrocautery, traction and hemostatic stitches on the NVB where not significant. Urinary continence showed correlation with longer surgical times at 3º (p < 0.01) and 12º months (p=0.02), median surgical times of 3.45 (p=0.001), 3.35 (p=0.04) and 3.3 hours (p=0.04) at 3º, 6º and 12º months, respectively. Urethral stump length, quality, and bladder neck size did not show correlation with continence, although there was a trend for bladder necks of 15.92 mm (p=0.054). CONCLUSIONS: The following parameters: NVB bilateral dissection, NVB dissection grade, patient age and weight, prostate weight, total Gleason, number of removed fragments, tumor volume, tumor stage, and surgical time are useful prognostic factors for predicting functional outcomes in prostate cancer patients undergoing RARP

Introdução: O emprego da técnica de RT-PCR na detecção da expressão de genes epiteliais como a CK-19 no sangue periférico de pacientes com câncer de próstata é uma oportunidade para avaliar a progressão tumoral ao nível molecular na ausência de doença clinicamente mensurável. Material e métodos: Inicialmente 10 pacientes com nível sérico de PSA< 2ng/ml e toque retal sugestivo de hiperplasia prostática benigna foram incluídos como grupo controle através de coleta de sangue única para dosagem do transcrito da CK-19. Subsequentemente,foram seguidos de maneira prospectiva 44 pacientes com câncer de próstata (21 com doença localizada e 23 com doença metastática), com coleta de sangue seriada a cada 3 meses por 18 meses. Foi medida a expressão sérica do transcrito da CK-19 por RT-PCR na fração leucocitária do sangue periférico e correlacionada aos níveis séricos de PSA e outras variáveis clinicas e patológicas. Resultados: Nenhum de 10 pacientes controles apresentou expressão do transcrito da CK-19 no sangue periférico. Nos pacientes com câncer de próstata a expressão do transcrito da CK-19 na entrada do estudo não se correlacionou com o escore de Gleason, estádio clínico e os níveis séricos de DHL, Hemoglobina, PSA, Fosfatase alcalina ou Testosterona. A presença de pelo menos uma dosagem positiva de CK-19 durante o seguimento se correlacionou com o tempo para a progressão bioquímica do PSA na amostra como um todo(p=0,049) e no subgrupo com doença metastática(p=0,032). Conclusão: Não houve expressão do transcrito da CK-19 na fração mononuclear do sangue periférico em homens do grupo controle. Nos pacientes com câncer de próstata não houve correlação entre a expressão do transcrito da CK-19 na entrada do estudo e as principais variáveis clínicas e patológicas de prognóstico. Nos pacientes com câncer de próstata, a presença de pelo menos uma dosagem positiva para o transcrito da CK-19 no seguimento se correlacionou com um menor tempo para recidiva bioquímica , especialmente no subgrupo de pacientes com doença metastática tratados com hormonioterapia / Background: The recent introduction of sensitive RT-PCR-based techniques for the detection of epithelial antigen expression, such as CK-19,in the peripheral blood of prostate cancer patients may provide an opportunity to evaluate early tumor progression at the molecular level, even in the absence of measurable disease. Methods: Ten men with PSA <2ng/ml and digital rectal examination suggestive for benign prostatic hyperplasia were included as controls by only one colleted blood sample to measure of CK-19 transcript. We also studied serially collected blood samples of 44 patients with prostate cancer (21 with localized and 23 with metastatic disease) every three months for 18 months. We measured CK-19 transcript expression in the peripheral blood mononuclear fraction (PBMN) of these samples by RT-PCR and correlated it with PSA values and other clinical and pathologic variables. Results: None of the 10 normal control men showed CK-19 transcript expression in their PBMN. In the patients with prostate cancer, CK-19 transcript positivity at entry did not correlate with Gleason score, clinical stage, DHL, hemoglobin level, PSA, alkaline phosphatase or testosterone levels. Having at least one positive CK- 19 result during follow up correlated significantly with time to PSA progression in all coorte (p = 0.049) and in the subgroup of metastatic disease (p = 0.032). Conclusion: There are no expression of CK-19 transcript in the PBMN of control men. In prostate cancer patients there are no correlation between CK-19 at entry and the most important clinical and pathological prognostic variables. Prostate cancer patients that had at least one CK-19 transcript expression in the peripheral blood present lower time to PSA progression, specially metastatic patients receiving hormonal therapy

Orientador: Hernandes Faustino de Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T08:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Asciutti_AugustoCesarSpadaccia_M.pdf: 1128451 bytes, checksum: ed87729f9d44f5ffd0d06e755272756f (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Introdução: Durante o desenvolvimento e a vida adulta de um organismo, células troncoindiferenciadas, capazes de dar origem a um ou mais tipos celulares, proliferam e se diferenciam para, tanto produzir os tecidos de um organismo em desenvolvimento, quanto repor células perdidas pelo envelhecimento, doença ou injúria. Essas células residem em um nicho especializado contendo células diferenciadas e elementos responsáveis por manter o estado predominantemente quiescente. Acredita-se que as células tronco da próstata contribuam para o desenvolvimento de câncer através da desregulação dos elementos do nicho. ps20 é um elemento secretado por células musculares lisas da próstata, o qual demonstra capacidade de inibir o crescimento da linhagem de células prostáticas cancerígenas PC3 em cultura. Evidências sugerem uma possível relação entre ps20 com a adesão celular. No entanto, seu funcionamento é pouco conhecido. Objetivos: Analisar o efeito do silenciamento do gene WFDC1/ps20 sobre o comportamento das células p63+ e arquitetura tecidual durante o desenvolvimento prostático pós-natal. Materiais e métodos: Próstatas ventrais de ratos Wistar recém nascidos foram cultivadas sobre membranas flutuantes permeáveis, na presença de RNA de interferência para reduzir a expressão de ps20. Os órgãos foram cultivados por sete dias e em seguida analisados através da contagem da formação de estruturas epiteliais, colorações histológicas, imunohistoquímica e PCR em Tempo Real. Resultados: O silenciamento de WFDC1/ps20 levou a uma redução de 36% na quantidade de mRNA de WFDC1/ps20. Foi observada redução no número de pontas de ductos epiteliais entre o segundo e quarto dia cultura e entre o quarto e sétimo dia. A análise histológica revelou ductos com ramificação reduzida e com as pontas mais dilatadas, em resposta a redução de WFDC1/ps20. Foi observada polarização celular prejudicada e cavitação reduzida. A imunohistoquímica para p63 revelou que os níveis reduzidos de ps20 promoveram a concentração das células p63+ nas pontas dilatadas dos ductos epiteliais. Real Time PCR revelou que o silenciamento do gene WFDC1/ps20 promoveu um aumento de nove vezes na quantidade do mRNA de MMP9.Discussão: O silenciamento de WFDC1/ps20afetou o desenvolvimento prostático com um efeito sem ambiguidade no comportamento das células basais p63+, como representado pelo seu acumulo nas pontas dos ductos e diminuição ao longo dos ductos estendidos. O tratamento também prejudicou a polarização de células luminais e comprometeu a cavitação.O conteúdo elevado de mRNA de MMP9 pode estar relacionado com o acumulo da proteína e a degradação descontrolada da matriz extracelular ao redor pontas dos ductos, levando ao fenótipo dilatado. Como a degradação correta da matriz em locais específicos é requerida para a formação do ponto de ramificação, é sugerido que a ps20 regula o balanço da atividade de MMP9 necessária durante o desenvolvimento prostático. Essa ideia coloca o sistema uPA/uPAR acima da regulação e ativação de MMP9.Conclusões:A redução deWFDC1/ps20comprometeu a morfogênese em ramos, polarização das células epiteliais e cavitação. Esses aspectos estão associados com a desestabilização do comportamento das células p63+, como sugerido pelo seu acumulo nas pontas dilatadas e diminuição do compartimento de células basais ao longo dos ductos estendidos / Abstract: Introduction: During the development and adult life of an organism, undifferentiated stem cells, capable of giving rise to one or more cell types in an adult organism, proliferate and differentiate to both produce the tissues of an developing organism and replace cells lost by aging, disease or injury. These cells reside in a specialized niche containing differentiated cells and elements responsible for maintaining their predominantly quiescent state. Prostate stem cells are believed to contribute to cancer development via deregulation of niche elements. ps20 is a protein secreted by prostate smooth muscle cells which was shown to inhibit the growth of prostatic PC3 cancer cell line in culture. Evidences exist favoring a possible relationship between ps20 and cell adhesion. However its functioning is still poorly known. Objectives: Analyze the effect of the silencing of the WFDC1/ps20 gene in the behavior of p63-positive cells and tissue architecture during the post-natal prostatic development. Materials and methods: Ventral prostate of newborn Wistar rats were cultured on floating permeable membranes, in the presence of small interference RNA to reduce ps20 expression. The organs were cultured for seven days, and then analyzed by counting of epithelial structures formation, histological and immunohistochemical staining and Real Time PCR. Results: The silencing of WFDC1/ps20 led to a 36% reduction in WFDC1/ps20 mRNA amount. It was observed reduction in the number of epithelial duct tips between the second and fourth day of culture, and between the fourth and seventh day. Histological analysis revealed reduced branching and dilated tips in response toWFDC1/ps20knocking down. It was observed hindered polarization and reduced cavitation. Immunohistochemistry for p63 revealed that reduced levels of ps20 promoted the concentration of p63+ cells at the enlarged ductal tips. Real Time PCR revealed that the knocking down the WFDC1/ps20 gene promoted a 9-fold increase in the amount of MMP9 mRNA. Discussion: The silencing of WFDC1/ps20affected prostate development with an unambiguous effect on p63+ cells behavior, as represented by their accumulation at the ductal tips and depletion along the extended ducts. The treatment also hampered the differentiation of luminal cells and compromised cavitation. The increased MMP9 mRNA content might be correlated with the accumulation of the protein and uncontrolled degradation of the extracellular matrix around the duct tips, leading to the dilated phenotype. Since the correct degradation of the matrix in specific sites is required for the branch point formation we suggest that ps20 regulates the balance for MMP9 activity required during prostate development. This idea places the uPA/uPAR system upstream of MMP-9 regulation and activation. Conclusions: The reduction in the WFDC1/ps20expressioncompromised branching morphogenesis, epithelial cell polarization and cavitation. These aspects are associated with a destabilization of p63+cell behavior, as suggested by their accumulation at the dilated tips and depletion from the basal cell compartment along the extended ducts / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural