Orientadores: Sebastião Roberto Taboga, Silvana Gisele Pegorin de Campos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T14:53:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goncalves_BiancaFacchim_D.pdf: 8580892 bytes, checksum: 1e3927b5ad73e189b4b4245aa141895e (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Um dos principais desafios no campo de pesquisa do câncer prostático é a busca por sistemas modelo que permitam a investigação dos aspectos patológicos, bioquímicos e genéticos desta doença. O gerbilo Meriones unguiculatus tem possibilitado a avaliação de lesões prostáticas e sua evolução de estágio benigno para maligno (invasivo) após período relativamente curto de tratamento com o carcinógeno N-Metil-N-Nitrosuréia (MNU), um potente causador de metilação do DNA por ação direta. Assim, o presente trabalho teve por objetivos: 1) Determinar a incidência, multiplicidade e latência tumoral de lesões espontâneas e quimicamente induzidas nos lobos prostáticos ventral e dorsolateral do gerbilo; 2) Investigar se o estradiol exerce papel protetor e/ou promotor sobre neoplasias induzidas por MNU; 3) Avaliar o potencial promotor da dieta hiperlipídica sobre a carcinogênese induzida na próstata ventral; 4) Analisar a participação de produtos alterados de genes ras e do status global de metilação do DNA do epitélio prostático no processo tumoral mediado por MNU. Para tanto foram utilizados animais adultos submetidos à dose única intraperitoneal de MNU (50mg/Kg), exceto o grupo controle. Os grupos experimentais foram submetidos à exposição crônica de andrógeno, estradiol ou dieta hiperlipídica por 14 e 28 semanas. As metodologias aplicadas envolveram análises quantitativas e estatísticas de multiplicidade e incidência de lesões prostáticas, peso corporal, acúmulo de gordura corporal, peso prostático, dosagens hormonais, índice proliferativo, cariometria, frequência de células AR-positivas e basais, status global de metilação e determinação da expressão de proteínas. O modelo de indução tumoral prostática por MNU associado à testosterona no gerbilo se mostrou eficaz, pois reduziu a latência tumoral e permitiu o estudo de estágios avançados da carcinogênese após curto período. As neoplasias se manifestam inicialmente no lobo dorsolateral e requerem um tempo maior para se estabelecer no lobo ventral. No entanto, a progressão de lesões pré-malignas para malignas ocorre de maneira mais significativa no lobo ventral. Isso indica que a progressão tumoral ocorre de maneira distinta entre os lobos prostáticos e que vias alternativas estão possivelmente envolvidas nesse processo. A longa exposição a altas doses de estrógeno foi capaz de prevenir e reduzir a taxa de crescimento tumoral. Apesar dos efeitos terapêuticos contra a progressão neoplásica, a terapia estrogênica levou ao estabelecimento de um epitélio com características distintas da próstata normal, como: mudanças no padrão de metilação do DNA e aumento de células basais e AR positivas. Juntos, esses eventos contribuíram para criar um ambiente epitelial instável que pode provocar a recidiva das lesões em períodos subsequentes. A associação entre MNU e dieta hiperlipídica promoveu aumento na incidência de lesões estimuladas pelo carcinógeno isoladamente, as quais apresentaram maior número de células AR-positivas, ruptura da camada de músculo liso indicando microinvasão tumoral, e alta reatividade para metaloproteinase do tipo 2. A análise molecular indicou alta expressão das proteínas Ras em tecidos induzidos por MNU, sugerindo a participação dessa via na promoção e progressão de tumores prostáticos. Assim, conclui-se que a dieta hiperlipídica pode ser considerada um agente promotor da carcinogênese prostática, e o gerbilo representa um bom modelo para estudos histopatológicos / Abstract: One of the major challenges in the field of prostate cancer research is the search for model systems that allow the investigation of pathological, biochemical and genetic factors of this disease. The gerbil Meriones unguiculatus has enabled the evaluation of prostate lesions and evolution from benign to malignant (invasive) stage after a relatively short period of treatment with the carcinogen N-methyl-N-nitrosourea (MNU), a potent causative of DNA methylation by direct action. Thus, this study aimed to: 1) Determine the incidence, multiplicity, and tumor latency of spontaneous and chemically-induced lesions in ventral and dorsolateral gerbils' prostatic lobes; 2) Investigate whether estradiol exerts protective and/or promoter hole on neoplasms induced by MNU; 3) Evaluate the promotional potential of high-fat diet on induced-carcinogenesis in ventral prostate; 4) Analyze the involvement of altered ras gene products and the global DNA methylation status of prostate epithelium on MNU-mediated tumor process. Therefore, we used adult animals subjected to a single intraperitoneal dose (50mg/kg) of MNU, except the control group. The experimental groups were subjected to chronic exposure of androgen, estradiol or high-fat diet for 14 and 28 weeks. The methodologies involved quantitative and statistical analysis of multiplicity and incidence of prostatic lesions, body weight, body fat accumulation, prostate weight, hormonal measurements, proliferative index, karyometry, frequency of AR-positive and basal cells, global methylation status and determination of protein expression. The model of prostatic tumor induction by MNU associated with testosterone in the gerbil was effective because it reduced tumor latency and allows the study of advanced stages of carcinogenesis after short period. Neoplasms manifest initially in dorsolateral lobe and require a longer time to be established in ventral lobe. However, the progression from premalignant to malignant lesions occurs more significantly in the ventral lobe. This indicates that tumor progression occurs differently between prostatic lobes and alternative pathways maybe possibly involved in this process. Long exposure to high doses of estrogen was able to prevent and reduce the rate of tumor growth. Despite therapeutic effects against neoplastic progression, estrogen therapy led to the establishment of an epithelium with distinct characteristics from normal prostate, such as changes in the pattern of DNA methylation and increased amount of basal cell and ARpositive cells. Together, these events contributed to create an unstable epithelial compartment that can cause lesions recurrence in subsequent periods. The association between MNU and high-fat diet promoted an increase in incidence of lesions stimulated by carcinogen alone, which had a higher number of AR-positive cells, disruption of the smooth muscle layer indicating tumor microinvasion and high reactivity for metalloproteinase type 2. Molecular analysis indicated high expression of Ras proteins in tissues induced by MNU, suggesting the involvement of this pathway in the promotion and progression of prostate tumors. Thus, we conclude that the high-fat diet can be considered a promotional agent of prostate carcinogenesis and that gerbil is a good model for histopathological studies / Doutorado / Biologia Celular / Doutora em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Laura Sterian Ward, Ubirajara Ferreira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T18:25:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LimaJunior_MarioMacielde_D.pdf: 2397268 bytes, checksum: 63d55e4a5572d5d7f06e615be4d98384 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: As doenças da glândula prostática em geral e a incidência de câncer da próstata, em particular, mostram disparidades acentuadas entre os diferentes países e etnias. De fato, etnia, idade e história familiar são os mais fortes fatores de risco conhecidos para o câncer da próstata, mas a dieta, índice de massa corporal e outros fatores também podem influenciar o seu desenvolvimento. O objetivo deste estudo é descrever aspectos clínicos, antropométricos e genéticos da próstata de índios brasileiros da região amazônica. Foram analisados um total de 228 indígenas do sexo masculino ? 40 anos submetidos a exame físico, incluindo exame retal digital da próstata (TR), e a um questionário individualizado que incluía características demográficas e estilo de vida; história médica familiar e pessoal para câncer da próstata. Amostras de sangue foram obtidas para a determinação do antígeno prostático específico (PSA) e concentrações de testosterona sérica e genotipagem para TP53 e GSTP1. Os dados da população indígena foram comparados com os de um grupo controle de 87 não-indígenas masculinos da mesma região. Entre os 14 grupos étnicos identificados, Macuxi, é a etnia de índios aculturados mais frequente (43,6%), seguido pela Yanomami (14,5%), que é composta por índios mais isolados e primitivos. Os participantes tinham média de idade de 54,7 anos; circunferência abdominal de 86,6 cm e IMC de 23,9 kg/m2, com Yanomanis apresentando ambos IMC (21,4 contra 24,8; p=0,001) e peso da próstata mais baixos do que os Macuxis (15g contra 20g; p=0,001). Na população controle a idade média foi de 41 anos. Nenhum dos índios apresentaram sintomas relacionados à próstata e apenas um paciente teve diagnóstico de hiperplasia benigna da próstata, associada à manifestação de retenção urinária. Não foram identificadas diferenças nos valores de PSA (0,48 ng/mL contra 0,6 ng/mL; p=0,349) entre Yanomami e Macuxis. Observou-se correlação entre o IMC, peso da próstata, estilo de vida e hábitos alimentares, apesar das concentrações de testosterona (414 contra 502; p=0,207) serem semelhantes entre Macuxis e Yanomanis e, um aumento progressivo das concentrações de PSA ser observado com o envelhecimento em ambas etnias. A genotipagem de TP53 nos indígenas mostrou uma super representação do haplótipo selvagem Arg/Arg (74,5% versus 42,5%; p<0.0001) em relação à população controle. O perfil genotipico de GSTP1 também diferiu consideravelmente entre os não índios e os índios (Ile/Ile 60,9% versus 35,3%; Ile/Val 28,7% versus 45,9%; Val/Val 10,3% versus 18,8%; p = 0,0003, respectivamente). Não encontramos qualquer associação entre os hábitos alimentares ou características do estilo de vida, peso da próstata, PSA, concentrações de testosterona e o perfil genético da população investigada. No entanto, observamos especificidades alimentares, sociais e culturais nas populações estudadas, bem como um perfil genético específico para TP53 e GSTP1 que podem estar associados à boa saúde prostática da população indígena estudada / Abstract: Prostate diseases in general and prostate cancer incidence, in particular, show marked disparities among different countries and ethnicities. Age, ethnicity and family history are the strongest known risk factors for prostate cancer, but diet, body mass index and other factors may also influence its development. We aimed to describe clinical, anthropometric, genetic and prostatic features of Brazilian Indians from the Amazon area. A total of 228 male Indians ?40 years old were submitted to a physical examination, including digital rectal examination (DRE), and to an in-person questionnaire on demographic characteristics and life style; personal and familial medical history. Blood samples were obtained for the determination of total prostatic specific antigen (PSA) and serum testosterone levels. In addition, we obtained a control group of non-Indian males from the same region. Among the 14 ethnic groups identified, Macuxi group, composed by more acultured indians, was the most frequent (43.6%), followed by Yanomami (14.5%) group, that is composed by more isolated and primitive indians. Participants had a mean age of 54.7 years; waist circumference of 86.6 cm and BMI of 23.9 kg/m2, with Yanomamis presenting both lower BMI (21,4 versus 24,8; p=0,001) and lower prostate volume than Macuxis (15 versus 20; p=0,001). None of the indians presented prostate symptoms and only one patient had a benign prostate hyperplasia that caused urine retention. Serum PSA (0,48 versus 0,6 p=0,349). We observed a relationship among BMI, prostate volume, life style and dietary patterns, although testosterone (414 versus 502; p=0,207) levels were similar in Macuxi and Yanomami indians and a progressive increase of PSA levels was observed with aging in both groups. TP53 genotyping evidenced a different profile in indians, with a super representation of the Arg/Arg haplotype (74,5% versus 42,5%; p<0,0001) compared to the control population. Likewise, GSTP1 genotyping demonstrated very differently among control population compared to indians Ile/Ile 60,9% versus 35,3%; Ile/Val 28,7% versus 45,9%; Val/Val 10,3% versus 18,8%; p = 0,0003); respectively. We were not able to find any association among dietary patterns or any life style characteristic; prostate volume, serum PSA and testosterone levels; and the genetic profile of the investigated population. We observed specific dietary, social and cultural features, as well as a specific genetic profile for TP53 and GSTP1 that may contribute to Brazilian Indian population prostate good health / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Introduction: Prostate cancer is the most common malignancy in Brazilian males and androgen deprivation therapy (ADT) is generally employed in its treatment. However, ADT is associated with negative outcomes, like increased incidence of obesity, insulin resistance, diabetes, dyslipidemia and cardiovascular diseases. Many of these side effects are closely related to atherosclerosis. Carotid intima-media thickness (CIMT) is an important biomarker of atherosclerosis, and is employed as risk predictor for cardiovascular and cerebrovascular disease. Objectives: The study aimed to analyze the carotid intima-media thickness in patients with prostate cancer, inspect for the presence of plaque in their carotid arteries, and investigate the relationship between carotid plaques with ADT duration and cardiovascular risk factors. Methods: A cross-sectional study of 65 men diagnosed with prostate cancer undergoing ADT for, at least three months, was conducted from July to November 2013. Patients were matched for age, comorbidities, treatment type, duration and stage of the neoplasm. The presence of plaque was defined as a focal structure that encroaches into the arterial lumen of at least 0.5 mm or 50% of the surrounding intima-media thickness value or demonstrates a thickness >1.5. Results: Seventy participants were enrolled, but five were excluded due to incomplete data collection. The mean age (±SD) was 73.9 (±9.4) years, 34% were receiving maximum androgen blockade (peripheral and central associated) and patients were under ADT for 34.8 (±31.5) months. The LDL-c, HDL-c and triglycerides had values outside the normal range in 26%, 65% and 48% patients, respectively. Thirty-nine (60%) patients had carotid plaques. The average thickness of the carotid intima-media in patients without plaques was 1.24 (±0.18) mm. Statistically significant relationship between the intima-media thickness and age, diastolic blood pressure and body mass index (BMI) was found (p = 0.002; p = 0.015 and p = 0.007, respectively). About the laboratory tests, statistical significance was found between atherosclerosis in this population and SHBG (sex hormone-binding globulin) and quantitative CRP (C-reactive protein), p = 0.033 and p = 0.011, respectively. Patients under maximum androgen blockade had significantly higher risk for the presence of carotid plaques in comparison to patients under exclusive central androgen blockage (p = 0.01). Conclusion: Among the 65 men tested, the average thickness of the carotid intima-media was 1.24 mm. Carotid-artery plaque was present in 60% of the individuals, although no statistical significance was found between the presence of carotid plaques and duration of androgen treatment. On the other hand, a significant relationship between CIMT and age, BMI, diastolic blood pressure, maximum androgen blockade, SHBG and CRP was observed, that should be considered for risk-benefit discussion related to ADT and future studies. / Introdução: O câncer de próstata é a neoplasia maligna mais comum no homem brasileiro e o tratamento antiandrogênico (TAA) é frequentemente utilizado. No entanto, seu uso está relacionado a uma série de efeitos adversos, como obesidade, resistência à insulina, diabetes mellitus, dislipidemia e doenças cardiovasculares. Muitos desses efeitos colaterais guardam relação bem estabelecida com o processo de aterosclerose. A espessura íntima-média carotídea (EIMC) é um importante marcador diagnóstico de aterosclerose subclínica e é utilizada como preditor de risco para doença cardiovascular (DCV) e cerebrovascular. Objetivos: Analisar a EIMC em pacientes portadores de câncer de próstata, verificar a presença de placas nas artérias carótidas, relacionar a presença de placas carotídeas à duração do TAA e aos fatores de risco de DCV. Casuística e métodos: Estudo transversal envolvendo 65 homens com diagnóstico de câncer de próstata em TAA há pelo menos três meses, no período de julho a novembro de 2013. Os pacientes foram pareados por idade, comorbidades, tipo de tratamento, duração e estágio da neoplasia. Considerou-se como placa uma alteração focal que se projeta para a luz arterial em pelo menos 0,5 mm ou 50% do valor adjacente da EIMC, ou uma medida da EIMC > 1,5 mm. Resultados: Setenta pacientes foram entrevistados, porém cinco foram excluídos por desistência. A média da idade foi de 73,9 (±9,4) anos, 34% recebiam bloqueio androgênico combinado (castração associada a bloqueio periférico) e os pacientes encontravam-se em média há 34,8 (±31,5) meses sob TAA. O LDL-c, o HDL-c e os triglicerídeos apresentaram valores fora da normalidade em 26%, 65% e 48% dos pacientes, respectivamente. Trinta e nove (60%) pacientes apresentaram placas carotídeas. A espessura média da íntima-média carotídea nos pacientes sem placas foi de 1,24 (±0,18) mm. Foi encontrada significância estatística, quanto à presença de espessamento médio-intimal com relação à idade, à pressão arterial diastólica (PAD) e ao índice de massa corpórea (IMC), com p=0,002; p=0,015 e p=0,007, respectivamente. Quanto aos exames laboratoriais, houve significância estatística entre a presença de aterosclerose e os valores encontrados na análise sérica de SHBG (globulina transportadora de hormônio sexual) e PCR (proteína C reativa) quantitativa, com p=0,033 e p=0,011, respectivamente. Os pacientes em uso de bloqueio hormonal combinado apresentaram significativamente maior risco para placas carotídeas que os pacientes em castração exclusiva (p=0,01). Conclusão: Dentre os 65 homens analisados, a espessura média da íntima-média carotídea foi de 1,24 mm. Foi observada presença de placas nas artérias carótidas de 60% da amostra, porém não foi encontrada significância estatística entre a presença de placas carotídeas e a duração do tratamento antiandrogênico. Por outro lado encontrou-se relação significativa entre EIMC e idade, IMC, PAD, bloqueio androgênico combinado, SHBG e PCR, que devem ser levados em consideração na discussão do risco-benefício do TAA e em futuros estudos.

Background: Overtreatment of localized prostate cancer (PCa) is a concern as many men die of other causes prior to experiencing a treatment benefit. This dissertation characterizes the need for assessing other cause mortality (OCM) risk in older men with PCa and informs efforts to identify patients most likely to benefit from definitive PCa treatment. Methods: Using the linked Surveillance Epidemiology and End Results-Medicare Health Outcomes Survey database, 2,931 men (mean age=75) newly diagnosed with clinical stage T1a-T3a PCa from 1998-2009 were identified. Survival analysis methods were used to compare observed 10-year OCM by primary treatment type. Age and health factors predictive of primary treatment type were assessed with multinomial logistic regression. Predicted mortality estimates from Social Security life tables (recommended for life expectancy evaluation) and two OCM risk estimation tools were compared to observed rates. An improved OCM prediction model was developed fitting Fine and Gray competing risks models for 10-year OCM with age, sociodemographic, comorbidity, activities of daily living, and patient-reported health data as predictors. The tools’ ability to discriminate between patients who died and those who did not was evaluated with Harrell’s c-index (range 0.5-1), which also guided new model selection. Results: Fifty-four percent of older men with localized PCa underwent radiotherapy while 13% underwent prostatectomy. Twenty-three percent of those treated with radiotherapy and 12% of those undergoing prostatectomy experienced OCM within 10 years of treatment and thus were considered overtreated. Health factors indicative of a shorter life expectancy (increased comorbidity, worse physical health, smoking) had little to no association with radiotherapy assignment but were significantly related to reductions in the likelihood of undergoing prostatectomy. Social Security life tables overestimated mortality risk and discriminated poorly between men who died and those who did not over 10 years (c-index=0.59). Existing OCM risk estimation tools were less likely to overestimate OCM rates and had limited but improved discrimination (c-index=0.64). A risk model developed with self-reported age, Charlson comorbidity index score, overall health (excellent-good/fair/poor), smoking, and marital status predictors had improved discrimination (c-index=0.70). Conclusions: Overtreatment of older men with PCa is primarily attributable to radiotherapy and may be reduced by pretreatment assessment of mortality-related health factors. This dissertation provides a prognostic model which utilizes a set of five self-reported characteristics that better identify patients likely to die of OCM within 10 years of diagnosis than age and comorbidity-based assessments alone.

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No / Dystroglycan is frequently lost in adenocarcinoma, but the mechanisms and consequences are poorly understood. We report an analysis of beta-dystroglycan in prostate cancer in human tissue samples and in LNCaP cells in vitro. There is progressive loss of beta-dystroglycan immunoreactivity from basal and lateral surfaces of prostate epithelia which correlates significantly with increasing Gleason grade. In about half of matched bone metastases there is significant dystroglycan re-expression. In tumour tissue and in LNCaP cells there is also a tyrosine phosphorylation-dependent translocation of beta-dystroglycan to the nucleus. Analysis of gene expression data by microarray, reveals that nuclear targeting of beta-dystroglycan in LNCaP cells alters the transcription of relatively few genes, the most unregulated being the transcription factor ETV1. These data suggest that proteolysis, tyrosine phosphorylation and translocation of dystroglycan to the nucleus resulting in altered gene transcription could be important mechanisms in the progression of prostate cancer.

Introdução: O câncer de próstata (CP) é a neoplasia mais comum do homem e o seu rastreamento e métodos de detecção têm sido motivo de grande discussão. Devido a sua alta prevalência, busca-se a identificação de tumores clinicamente significantes, evitando-se o supertratamento e seus consequentes efeitos colaterais. Atualmente a ressonância magnética multiparamétrica e outros marcadores moleculares têm sido utilizados, mas falham em acurácia. A busca de novos marcadores diagnósticos e de caracterização da agressividade do CP é urgente. Objetivos: Identificação do perfil de expressão dos genes ERG, SPOP, PTEN, AMACR, GOLM1, EN2 e NKX3.1 e dos miRNAs 21, 221, 100 e 141 no tecido proveniente de biópsias de próstata por agulha e avaliação de sua acurácia no diagnóstico e determinação do prognóstico do CP. Análise de proteínas glicosiladas na urina através da proteômica e espectometria de massa para o diagnóstico do CP. Materiais e Métodos: Estudo prospectivo, exploratório para identificação de biomarcadores diagnósticos e prognósticos de CP. Cento e trinta e dois pacientes com indicação de biópsia de próstata (PSA > 4,0 ng/ml e/ou alterações no toque retal) foram submetidos a biópsia prostática em sextantes no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP e no Instituto do Câncer do Estado de São Paulo (ICESP). Uma amostra aleatória de biópsia foi submetida a qRT-PCR para análise da expressão dos genes e miRNAs. A urina foi coletada após a biópsia e mantida a -20oC. Doze amostras de urina sendo seis de pacientes com diagnóstico de CP e seis com hiperplasia próstatica benigna foram submetidas a análise proteômica com espectrometria de massa. Os perfis de expressão de miRNAs, genes e proteínas foram comparados entre pacientes com e sem diagnóstico de CP. Avaliamos também o perfil de expressão de genes e miRNAs e sua relação com a graduação histológica de Gleason. Resultados: Os níveis aumentados de expressão tissular de NKX3, SPOP, AMACR, EN2, GOLM1 e ERG foram significativamente maiores no grupo CP quando comparados ao grupo controle p=0.03, p=0.004, p < 0.001, p < 0.001, p < 0.001, p=0,002 respectivamente. A avaliação da curva ROC revelou AUC de 0,744; 0,726; 0,692; 0,659; 0,646; 0,609 e 0,469 respectivamente para AMACR, GOLM1, EN2, ERG, SPOP, NKX3 e PTEN no diagnóstico do CP. Com base na análise de regressão linear foi proposto um modelo de análise conjunta dessas variáveis e criado um nomograma com GOLM1 e AMACR integrados com idade e níveis de PSA. A acurácia do nomograma proposto foi de 78,2% no diagnóstico do CP. Na avaliação prognóstica comparando dois grupos de Gleason 6 vs 7 a 10, os genes EN2, GOLM1 e AMACR foram significativamente mais expressos nos tumores mais agressivos (p=0,027, p=0,002, p=0,013 respectivamente). A curva ROC revelou AUC de 0,675, 0,727 e 0,684 respectivamente para EN2, GOLM1 e AMACR. Seguindo o mesmo tratamento estatístico do modelo diagnóstico proposto nesse estudo, foi elaborado um nomograma prognóstico com integração do PSA, idade e expressão de GOLM1 que mostrou uma acurácia de 79%. Na avaliação prognóstica entre os grupos Gleason 6 e 7 vs 8, 9 e 10 apenas os marcadores NKX3 e SPOP foram diferencialmente expressos, p=0,036 e p=0,044 respetivamente. A avaliação da curva ROC revelou AUC 0,704 e 0,696 para NKX3 e SPOP respectivamente. O nomograma proposto, a partir dessas informações e tratamento estatístico das variáveis, integrando PSA, idade e expressão de SPOP mostra uma acurácia de 89% na identificação de tumores de alto grau. Os miRNAs não apresentaram expressão significativamente diferente entre os grupos tanto para o diagnóstico quanto para o prognóstico. A análise proteômica revelou um painel de 56 N-glicopeptídeos capaz de discriminar completamente os grupos de pacientes com e sem CP. A avaliação da curva ROC para o painel formado mostrou uma AUC=1. Conclusões: A análise da expressão de genes em fragmento de biópsia de próstata por agulha, aleatoriamente retirado foi capaz de identificar a presença ou não do CP e caracterizar a sua agressividade. O nomograma desenhado a partir da expressão de GOLM1 e AMACR associados a idade e aos níveis de PSA mostrou acurácia de 78,2% no diagnóstico da doença. Os níveis de expressão tecidual de GOLM1 associados ao PSA demonstraram uma acurácia de 79,1% para a identificação de carcinomas com graduação >=7 e os níveis de expressão tecidual de SPOP associados ao PSA demonstraram uma acurácia de 89,0% para a identificação de carcinomas com graduação >=8. Os níveis de expressão de 56 N-glicopeptídeos intactos na urina mostraram uma ROC: AUC de 1 para o diagnóstico do câncer de próstata / Introduction: Prostate cancer (PC) is the most common cancer among men and screening and detection methods have been a matter of great discussion. Due to its high prevalence, there is an urgent need to search for new biomarkers able to distinguish the clinically significant PC, trying to avoid or postpone the side effects related to the curative treatment. Recently, multiparametric magnetic resonance and some molecular markers have been used but fail in accuracy. The search for new markers to diagnose and classify the aggressiveness of PC is urgent. Objective: Evaluate the expression of ERG, SPOP, PTEN, AMACR, GOLM1, EN2 and NKX 3.1 and miRNAs 21, 221, 100 and 141 in prostate tissue obtained by needle biopsy relating the results with the accuracy in the diagnosis and characterization of the aggressiveness of PC. Analysis of glycosylated proteins in the urine by proteomics and mass spectrometry to be applied in the diagnosis of PC. Materials and methods: Exploratory prospective study to identify diagnostic and prognostic biomarkers for PC. One hundred and thirty-two patients underwent prostate biopsy (PSA > 4.0 ng/ml and/or abnormalities in the digital rectal examination) at the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP and the Cancer Institute of the State of São Paulo (ICESP). A random core was submitted to qRT-PCR for evaluation of gene and miRNA expression. The urine was collected after the biopsy and maintained at -20oC. Twelve samples of urine (six patients with PC and six with benign prostatic hyperplasia) were subjected to proteomic analysis with mass spectrometry. The expression profiles of miRNAs, genes and proteins were compared between patients with and without PC. In addition, the same analysis was performed considering the Gleason and ISUP grading. Results: NKX3, SPOP, AMACR, EN2, GOLM1 and ERG had significantly higher expression in the PC group (p=0.03, p=0.004, p < 0.001, p < 0.001, p=0.002, respectively). Evaluation of ROC curve revealed an AUC of 0.744, 0.726, 0.692, 0.659, 0.646, 0.609 and 0.469 respectively for AMACR, GOLM1, EN2, ERG, SPOP, NKX3 and PTEN. Based on the linear regression analysis, a model of joint analysis of these variables was proposed and a nomogram was created with GOLM1 and AMACR associated with age and PSA levels. The accuracy of this nomogram in diagnosing PC was 78.2%. Considering the prognosis, comparing Gleason 6 vs 7 to 10, EN2, GOLM1 and AMACR were significantly more expressed in more aggressive tumors (p=0.027, p=0.002, p=0.013 respectively). ROC curve evaluation revealed an AUC of 0.675, 0.727 and 0.684 respectively for EN2, GOLM1 and AMACR. Following the same statistical treatment used for diagnosis, a nomogram was created with PSA, age and GOLM1 expression showing an accuracy of 79%. Another prognostic evaluation compared Gleason 6 and 7 vs 8,9 and 10. Only the NKX3 and SPOP were differentially expressed (p=0.036 and p=0.044, respectively) and the ROC curve revealed an AUC 0.704 and 0.696 for NKX3 and SPOP, respectively. A nomogram was designed including age, PSA and SPOP expression. The accuracy for this model in identifying high grade tumors was 89%. MiRNAs expression was not different between the groups considering diagnosis and prognosis. Proteomics analysis revealed a panel of 56 N-glycopeptides able to completely discriminate the groups with and without PC with an (ROC: AUC=1). Conclusion: Evaluating the expression of genes in a random core of prostate biopsy we were able to identify the presence of PC and to characterize its aggressiveness. A nomogram using GOLM1 and AMACR associated with PSA serum levels and age showed and accuracy of 78.2% in diagnose PC. The levels of GOLM1and PSA showed an accuracy of 79.1% in the identification of PC Gleason >=7. SPOP and PSA showed and accuracy of 89% in the identification of PC Gleason >=8. The expression levels of 56 N-glycoproteins perfectly discriminated PC and BPH (ROC: AUC=1)

INTRODUÇÃO: O câncer de próstata (CaP) é o tipo mais comum entre os tumores malignos que afetam o homem. Dentre as opções terapêuticas para o tratamento precoce do CaP, destaca-se o tratamento cirúrgico com resultados satisfatórios de até 94% de cura nos casos localizados. A ressecção cirúrgica do CaP pode ser feita por três abordagens principais: prostatectomia radical retropúbica (PRR), prostatectomia radical laparoscópica (PRL) e mais recentemente a prostatectomia radical laparoscópica robô assistida (PRAR). Uma vez que existem várias alternativas terapêuticas para esse tipo de câncer, a qualidade de vida e satisfação relacionadas à avaliação, tornam-se muito importantes nos diferentes tipos de técnicas cirúrgicas. OBJETIVO: Comparar a qualidade de vida e o índice de satisfação nos pacientes submetidos a PRR e PRAR através de um estudo prospectivo e aleatorizado. MATERIAL E MÉTODOS: Através do Sistema Único de Saúde (SUS), 200 pacientes com diagnóstico de adenocarcinoma de próstata localizado, foram selecionados de forma aleatória para participarem do estudo, sendo então encaminhados entre março de 2010 a janeiro de 2011 para o Hospital Alemão Oswaldo Cruz (HAOC) para realizar PRAR, ou para o Instituto do Câncer do Estado de São Paulo (ICESP), para a realização de PRR. Todos os pacientes foram seguidos clinicamente de maneira padrão. Utilizamos questionário SF-36 da seguinte forma: no pré-operatório e no pós-operatório de 1, 3, 6, 12, 18 e 24 meses, além de outro elaborado para avaliar a satisfação dos pacientes no pós operatório de 6, 12 e 18 meses. Os dados obtidos foram avaliados estatisticamente com nível de significância de 5%. RESULTADOS: Foram então aplicados os questionários em 200 pacientes submetidos às cirurgias (grupos homogêneos com 100 pacientes para PRR e 100 para PRAR). De acordo com os domínios de qualidade de vida, os escores médios dos aspectos físicos, aspectos emocionais e saúde mental só variaram estatisticamente entre os momentos de avaliação, sendo os grupos iguais entre si para estes domínios. De acordo com aspectos sociais houve diferença entre os grupos independente do momento de avaliação, sendo maior nos pacientes submetidos a cirurgia aberta (p = 0,016). O nível de escolaridade e a renda familiar dos pacientes que realizaram a cirurgia robótica são maiores que as dos pacientes que realizaram a cirurgia aberta (p = 0,044 e p = 0,029 respectivamente). De acordo com o grau de satisfação pós cirurgia, encontramos que os pacientes que fizeram cirurgia robótica apresentam um maior grau de satisfação com a cirurgia que aqueles submetidos a cirurgia aberta (p < 0,001). O que mais incomoda ou preocupa o paciente que realiza a cirurgia aberta é a disfunção erétil enquanto que nos pacientes que fazem à cirurgia robótica a preocupação se distribui entre cura, impotência e perda urinária. CONCLUSÃO: Demonstramos que a maioria dos aspectos de qualidade de vida são semelhantes entre os pacientes submetidos a PRR e PRAR com exceção dos aspectos sociais que foram maiores nos pacientes submetidos ao procedimento aberto, demonstramos ainda que o índice de satisfação dos pacientes é maior no procedimento robótico, entretanto a grande maioria dos pacientes realizariam o mesmo tratamento quando questionados / INTRODUCTION: Prostate cancer (PCa) is the most common malignant tumors that affect man. Among the treatment options for early treatment of PCa, stands out the surgical treatment with satisfactory results, achieving cure results of up to 94% in localized cases. Surgical resection of PCa can be done through three main approaches, which are radical retropubic prostatectomy (RRP), laparoscopic radical prostatectomy (LRP) and more recently robotic-assisted laparoscopic radical prostatectomy (RALRP). Since there are several alternative therapies for this cancer, quality of life and satisfaction related to the evaluation of different types of surgery became very important. OBJECTIVE: Evaluate the two most widely used techniques: RRP and RALRP through a prospective randomized study, checking the satisfaction and quality of life in patients who have undergone these treatments. MATERIAL AND METHODS: The choice of surgical approach of the patient occurred randomly and the patients were selected through the Unified Health System (SUS) and sent to the Oswaldo Cruz Hospital (HAOC) for RALRP (robotic-assisted laparoscopic radical prostatectomy) or sent to the Cancer Institute of the State of São Paulo (ICESP) for RRP (radical retropubic prostatectomy), between March 2010 and January 2011. All patients were followed clinically in a standard way through a questionnaire, SF-36 and a questionnaire to evaluate their satisfaction. It was also verified the level of regret in post-surgery within 1, 3, 6, 12 and 24 months and the level of satisfaction was verified at 6 12 and 18 months post-surgery. The data were statistically evaluated with a significance level of 5%. RESULTS: We then applied the questionnaires in 200 patients who underwent surgery, and 100 patients who underwent RRP and 100 patients who underwent RALRP. The groups were quite homogeneous. According to the domains of quality of life, the average scores of physical, emotional and mental health only varied significantly among time points of evaluation, and the groups were equal to each other for these domains. According to the social aspects there were differences between the groups regardless of the time of evaluation, being higher in patients who underwent open surgery (p = 0.016). The education level and family income of patients who underwent robotic surgery are higher than of patients who underwent open surgery (p = 0.044 and p = 0.029 respectively). According to the level of satisfaction post-surgery, we realized that robotic surgery patients have a higher level of satisfaction about the surgery than those undergone open surgery (p < 0.001). The most signicant thing that bothers or worries the open surgery patients is sexual impotence while in robotic surgery patients, the concern is distributed among cure, impotence and urinary incontinence. CONCLUSION: We demonstrated that most aspects of quality of life are similar among patients undergoing RRP and RALRP except social aspects that were higher in patients undergone open surgery. We further demonstrated that the rate of satisfaction is higher in the robotic procedure patients. However, when questioned, the vast majority of patients would do the same treatment

INTRODUÇÃO: Nos pacientes com câncer de próstata considerados de baixo risco, a braquiterapia de baixa taxa de dose (BBTD) utilizando sementes de 125I é uma excelente opção, com seguimento após o tratamento, devendo ser feito por meio de medidas seriadas de PSA. A avaliação de falha bioquímica após radioterapia, definida por elevação do PSA, tem sido feita pelo critério da ASTRO (American Society for Therapeutic Radiology and Oncology) e, mais recentemente, pelo critério do consenso de Phoenix. OBJETIVOS: Avaliar a sobrevida livre de falha bioquímica (SLFB) de pacientes submetidos à BBTD pelos critérios ASTRO e Phoenix e as relações entre eles com as falhas clínicas. Correlacionar essas sobrevidas com idade, grau histológico de Gleason, estadiamento clínico, PSA inicial, porcentagem de fragmentos positivos na biópsia, invasão perineural, volume prostático na ultra-sonografia diagnóstica, hormonioterapia neoadjuvante, bounce e D90 (dose recebida por 90% do volume de próstata). MÉTODO: Estudo retrospectivo de 329 pacientes tratados, entre julho de 1998 e dezembro de 2002, no serviço de Radioterapia do Hospital Sírio-Libanês, São Paulo. Foram excluídos 18 pacientes que tinham recebido braquiterapia associada à RT externa, 18 pacientes classificados como de alto risco, 61 casos com menos de dois anos de seguimento mínimo e 12, com dados incompletos nos prontuários. Portanto, 220 pacientes formaram a base desta análise. RESULTADOS: Cento e vinte e um (55%) pacientes foram classificados como de baixo risco e 99 (45%) de risco intermediário. O seguimento mediano foi de 53,5 meses (24 a 116); 74 pacientes (33,6%) fizeram algum tipo de bloqueio hormonal por um tempo mediano de 90 dias e 66 pacientes (30%) apresentaram bounce. O tempo médio para o aparecimento do bounce foi de 15 meses, com um nadir médio de 0,30ng/mL. A SLFB em cinco anos pelo critério ASTRO foi de 83% e de 88,3% pelo Phoenix (p < 0,05). Para os pacientes de risco baixo e intermediário, respectivamente, 86,7% e 78,4% pela definição ASTRO (p = 0,069) e 88,5% e 77,9% de acordo com Phoenix (p = 0,016). Na análise multivariada, PSA inicial < 10 ng/mL e porcentagem de fragmentos positivos < 50% foram fatores prognósticos favoráveis em relação à falha (p < 0,05) pelo critério ASTRO. De acordo com o critério Phoenix, PSA inicial < 10 ng/mL, grau histológico de Gleason < 7, porcentagem de fragmentos positivos < 50% e grupo de baixo risco foram os fatores independentes favoráveis, preditivos de falha bioquímica (p < 0,05). CONCLUSÕES: Os dados de sobrevida livre de falha bioquímica em cinco anos para pacientes de risco baixo e intermediário desta análise foram comparáveis aos da literatura. Nesta análise, não houve diferença entre as definições ASTRO e Phoenix de falha. PSA, escore de Gleason, porcentagem de fragmentos positivos na biópsia e grupo de risco foram os fatores prognósticos independentes para falha bioquímica. / INTRODUCTION: Patients with low-risk prostate adenocarcinoma may be very well treated by low dose-rate brachytherapy (LDR) using 125I seeds. Follow-up with periodical serum prostate specific antigen (PSA) dosages is used to determine the effectiveness of treatment. Biochemical relapse may be defined either by the American Society for Therapeutic Radiology and Oncology (ASTRO) definition, or, more recently, by the Phoenix Consensus criteria. PURPOSE: To evaluate and compare biochemical failure-free survival (BFFS) of patients treated with LDR brachytherapy using ASTRO and Phoenix criteria. Also, to correlate BFFS with age, Gleason score, clinical stage, initial PSA, percentage of positive prostate biopsies, perineural invasion, prostate volume at diagnostic ultrasound, neoadjuvant hormone therapy, bounce, and D90 (dose received by 90% of the prostate). METHODS: A cohort of 329 patients who received LDR brachytherapy for prostate cancer, between 1998 and 2002 at Hospital Sírio-Libanês, São Paulo, was retrospectively studied. Eighteen patients who received external beam irradiation were excluded, together with another 18 high-risk patients, 61 with less than 2 years minimal followup, and 12 with incomplete record data. So, 220 patients were the basis of this study. RESULTS: One hundred and twenty one (55%) were low-risk patients and 99 (45%) were intermediate-risk. Median follow-up was 53.5 months (24-116); 74 (33.6%) patients received neoadjuvant hormone therapy during a median period of 90 days, and 66 (30%) presented bounce. Mean time till bounce was 15 months, with mean nadir of 0,30ng/mL. The 5-year BFFS was 83% using ASTRO criteria, and 88.3% using Phoenix (p > 0,05). Low and intermediate-risk patients presented, respectively, 86.7% and 78.4% 5-year BFFS using ASTRO definition (p = 0,069), and 88.5% and 77.9%, considering Phoenix criteria (p = 0,016). In multivariate analysis, initial PSA < 10 ng/mL, and percentage of positive prostate biopsies < 50% were favorable prognostic factors, regarding biochemical relapse using ASTRO criteria (p < 0,05), while initial PSA < 10 ng/mL, Gleason score < 7, percentage of positive prostate biopsies < 50%, and low-risk group were detected as independent favorable prognostic factors using Phoenix definition (p < 0,05). CONCLUSIONS: The 5-year estimates of BFFS using both criteria, for low and intermediate-risk patients, were similar to previous published data, with no significant difference between them. Initial PSA, Gleason score, percentage of positive prostate biopsies, and risk group were independent prognostic factors for biochemical relapse.

Objetivo: Retrovirus Endógeno Humano (HERV) compreende ao redor de 8% do genoma humano. Apesar do fato de que em sua maioria são genes não-funcionais devido a processos de mutação ou perda de material genético no processo de retrotransposição, existem evidências do aumento da expressão de HERVs em tecido de câncer de próstata. Nós estudamos e comparamos a imunogenicidade de peptídeos da família HERV em 2 coortes de pacientes com câncer de próstata. Posteriormente examinamos o estado de ativação e senescência linfocitária nestas coortes. Desenho Experimental: Células Mononucleares de Sangue Periférico (CMSP) de 65 pacientes com câncer localizado da próstata em situação de hormônio-sensibilidade e de 24 pacientes com câncer de próstata metastático e em situação de resistência à castração, comparados a um grupo controle de 12 indivíduos normais foram avaliados em relação ao seu estado de resposta imune pela técnica de ELISPOT contra um conjunto de peptídeos derivados dos exons gag e env do gene da família HERV-K HML-2. Como parte de nosso estudo, foi realizado de forma preliminar uma análise genômica in silico de 500 pacientes com câncer de próstata sequenciados e disponíveis para análise pública do banco de dados TCGA, com o objetivo de reforçar o racional de nossa interrogação científica. Além disso , como estudo de correlação, fizemos uma análise por citometria de fluxo da ativação celular de linfócitos T de nossas coortes para determinarmos a imunofenotipagem e ontogenia linfocitária em nossos indivíduos investigados, no momento de nossa pesquisa de sua resposta imune. Resultados: Nossa análise da resposta imune contra peptídeos de HERV-K HML-2 por ELISPOT-Interferon Gama não mostrou nenhum resultado significativo. Nenhum paciente apresentou dados significativos de resposta de acordo com nossos critérios, apesar de nossos dados preliminares de expressão gênica terem mostrado expressão gênica em torno de 17% em pacientes com doença localizada. Nossos dados de ativação linfocitária mostraram maior ativação e senescência nos pacientes com doença disseminada e resistente à castração. Conclusões: Este parece ser o primeiro estudo a interrogar a presença de resposta celular imune contra peptídeos de HERV-K em pacientes com câncer de próstata. Nosso achados não mostraram resposta imune relevante em doença localizada ou disseminada e em diferentes estados de ativação linfocitária ou status de integridade hormonal. Apesar destes resultados, pesquisa posterior poderia utilizar diferente metodologia, como por exemplo a utilização de citometria de fluxo bem como a busca de diferentes citoquinas envolvidas, tais como as relacionadas a resposta Th2, ao invés de Th1 / Purpose: Human Endogenous Retrovirus (HERV) comprises 8% of human genome. Despite the fact that most of it is non-functional due to mutations or loss of genetic material in the process of retrotransposition, there are some evidence of increased expression of HERV in prostate cancer tissue. We studied the cellular immunogenicity of peptides from HERV-K family in 2 cohorts of prostate cancer patients. Experimental Design: PBMCs from 65 patients with hormone-intact localized prostate cancer and 24 patients with castrate-metastatic disease, matched with 12 normal controls were evaluated for cellular immune response by ELLISPOT against a pool of gag and env peptides from HERV-K family of HML-2 type. As an independent supportive study we did in silico genomic analysis of 500 prostate cancer patients from TCGA database to give another evidence of the prevalence of HERV-K gene expression in prostate cancer genome, reinforcing the rational of our questions. Results: Our analysis of cellular immune response against HERV-K HML-2 peptides by Interferon-gama ELISPOT did not show any meaningful results. No patient showed any minimal criteria of response, despite the fact that in our preliminary genomic analysis we obtained HERV expression in about 17% of a cohort of 500 patients with localized prostate cancer. In regards to the flow cytometry data of the lymphocytes we showed stronger activation and senescence status in the cohort of patients with castration sensitive and resistant disseminated disease, compared to the localized disease cohort. Conclusions: To the authors\'s knowledge this is the first study to look for cellular immune response against peptides derived from coding HERV-K transcripts in prostate cancer patients. Our findings did not show relevant immune response in neither localized nor metastatic castrate prostate cancer patients. Despite those results, further research could continue using different methodology, like flow cytometry as well as looking for different cytokines involved, such as those related to a Th2 response, instead of Th1