Lei Ieng Kit Kenny. / "April 2002." / Thesis (M.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2002. / Includes bibliographical references (p. 89-118). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Mode of access: World Wide Web.

Ma, Buig Yue Brigette. / Thesis M.D. Chinese University of Hong Kong 2014. / Includes bibliographical references (leaves 232-270). / Title from PDF title page (viewed on 18, November, 2016).

Aim. In this study, we attempted to identify HCC-specific serum glycoproteins by using glycoproteomic technologies. We targeted at finding glycoforms with aberrant alpha-2,6-sialylation and alpha-1,6-fucosylation in sera of HCC patients. These glycoforms may have potentials to be used as tumor marker(s) in the diagnosis of HCC. / Among the validated differential glycoproteins, Hp was the only glycoprotein, glycoforms of which were found to be significantly up-regulated in the HCC group when examining both the sialylated glycoprotein profiles and the fucosylated glycoprotein profiles. This glycoprotein was selected for further investigation. In the independent validation group, increased serum levels of Hp (total), alpha-2,6 sialylated Hp and alpha-1,6 fucosylated Hp was observed in the HCC patients. A unique pattern of Hp glycoforms comprising both hypersialylated fucosylated and hyposialytated fucosylated species was found in the HCC patients. Serum concentrations of these glycoforms were significantly higher in the HCC patients with advanced tumor, suggesting their tumor-specific nature. Besides, we have performed quantitative profiling of N-glycans of serum Hp in the HCC patients, CLD patients and normal subjects, and have attempted to identify HCC-associated N-glycans for HCC diagnosis. Combined used of serum alpha-fetoprotein, serum Hp and its N-glycans, we could achieve 84% sensitivity at 100% and 93% specificities when distinguishing the HCC patients from the CLD patients and from the normal subjects, respectively. / Background. Hepatocellular carcinoma (HCC) often arises in patients with coexisting chronic liver disease (CLD). Since alpha-fetoprotein, a conventional biomarker, may also be raised in patients with uncomplicated CLD, the use of alpha-fetoprotein in early detection of HCC is limited. Identification of additional biomarkers may improve early detection. Previous studies have shown that levels of alpha-2,6-sialyltransferase and alpha-1,6-fucosyltransferase change in liver cancer, leading to aberrant glycosylations on some serum proteins. / Conclusion. By undertaking glycoproteomic approach, we have identified a panel of potential biomarkers for diagnosis of HCC. These biomarkers were useful for classifying among normal healthy subjects, CLD patients, patients with early HCC and patients with advanced HCC. Some of them were validated with the independent cases. Finally, we have identified a unique pattern of Hp glycoforms comprising both hypersialylated fucosylated and hyposialylated fucosylated species in the HCC patients. Serum Hp and its N-glycans have been shown to have potential values for aiding the diagnosis of HCC. / Methodology. There are four parts in this study. The first part is "method development". A method for obtaining quantitative profiles of serum glycoproteins with alpha-2,6-sialylation or alpha-1,6-fucosylation was developed by combined use of lectin affinity chromatography, two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis and enzyme-linked lectin assay. The second part is "biomarker discovery". The quantitative profiles of the serum glycoproteins from 20 HCC patients and 10 CLD patients (control) were compared by bioinformatic approaches to identify potential biomarkers for diagnosis of HCC. The protein identities of the potential targets were obtained by using MALDI-TOF/TOF mass spectrometry. The third part is "validation". An independent set of serum samples from 40 HCC patients, 30 CLD patients and 20 normal subjects was used to evaluate the diagnostic values of the potential biomarkers. The last part of this study was aimed to identify HCC-associated N-glycans on one of potential biomarkers found, and examine their values in diagnosis of HCC. / Result. When analyzing alpha-2,6-sialylated glycoproteins, 53 glycoprotein spots were significantly different between the HCC and CLD groups, of which 44 spots belonged to 13 glycoproteins. Bioinformatic analyses revealed that these differential sialoglycoprotein profiles contained valuable information for differentiating the HCC patients from CLD patients, and classifying between early HCC and advanced HCC patients. When analyzing alpha-1,6-fucosylated proteins, 11 glycoprotein spots were significant different between the two study groups, of which 8 spots belonged to 1 glycoprotein. Majority of the protein identities were successfully obtained by MALDI-TOF/TOF mass spectrometry. Among the differential glycoproteins, we have identified a subgroup with a unique pattern of glycosylation. These glycoproteins were characterized by the presence of hypersialylated and fucosylated glycoforms. The differential patterns and the diagnostic values of some of these serum glycoproteins were confirmed in the independent validation group by measuring their serum levels with immunoassays. The results of the logistic regression analyses suggest that complement factor B and haptoglobin (Hp) can be used in combination with alpha-fetoprotein to improve the diagnosis of HCC. / Ang, Ling. / Adviser: Tereng Chuen Wai Poon. / Source: Dissertation Abstracts International, Volume: 69-02, Section: B, page: 0947. / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2007. / Includes bibliographical references (leaves 215-238). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Electronic reproduction. [Ann Arbor, MI] : ProQuest Information and Learning, [200-] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Abstract also in Chinese. / School code: 1307.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Melanomas se destacam entre os tumores sólidos por apresentar alto potencial de malignidade e incidência crescente, especialmente entre indivíduos jovens. Identificação de marcadores moleculares em melanomas é de enorme interesse para uso clínico e para estudos relacionados ao seu desenvolvimento. A linhagem de melanoma murino B16 tem sido amplamente empregada visando melhor compreensão do processo metastático. Objetivo: identificar moléculas na superfície de células B16, empregando anticorpos monoclonais, que apresentem função biológica importante para essas células, bem como investigar expressão de moléculas reconhecidas pelos mesmos mAbs em melanoma humano. Métodos: camundongos C57Bl/6 foram imunizados com células B16 irradiadas para produção de híbridos produtores de mAb. Resultados: após fusão foi obtido mAb da classe IgM, designado G12F2, que reconheceu uma única banda de aproximadamente 230 kDa em extrato total de células B16. A molécula era expressa na superfície celular e não por células não tumorigênicas, como fibroblastos ou melanócitos melan-a. Células não tumorigênicas, derivadas de melan-a, também não a expressaram ao passo que células tumorigênicas, de mesma origem, expressaram-na em grande quantidade. Variante menos metastática da linhagem B16 expressou menor quantidade desta molécula quando comparado à variante mais metastática. A neutralização da molécula de 230 kDa com mAb G12F2 inibiu proliferação, migração e invasão por células B16 in vitro. Também nestas condições, G12F2 promoveu atividade citolítica contra células B16, mediada por complemento. Por outro lado, adição in vitro de mAb G12F2 em nada alterou adesão das células B16 à fibronectina e laminina, ou adesão célula-célula. In vivo, o tratamento com mAb G12F2 inibiu crescimento do nódulo tumoral e formação de metástases pulmonares. Quando testado contra extrato de tumores de origem humana, como carcinoma e melanoma, mAb G12F2 reconheceu banda de 75 e 67 kDa, respectivamente. Por fim, foi demonstrado que mAb inibiu proliferação de células de melanoma humano in vitro. Conclusões: a molécula de 230 KDa parece ter importância durante crescimento do melanoma murino; identificação de molécula homóloga em melanoma humano fornecerá subsídios para diagnóstico e protocolos visando imunoterapia. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

INTRODUÇÃO: O carcinoma papilífero é o tumor maligno mais comum da tireoide e sua incidência vem aumentando em todo o mundo nas últimas décadas. A maioria dos pacientes com carcinoma papilífero apresenta bom prognóstico, com uma taxa de sobrevida em 10 anos de 90 a 95%, porém, as taxas de recorrência e a necessidade de continuar o tratamento continuam a ser um problema significativo para 5 a 40% dos pacientes. Embora sejam utilizadas diversas classificações de risco baseadas em diferentes fatores prognósticos, nenhuma é capaz de predizer quais pacientes terão maior chance de recorrência e desfecho desfavorável. Este estudo tem como objetivo analisar a expressão de marcadores imunoistoquímicos (Citoqueratina-19, Galectina- 3, EGFR, Ki-67, NF-kB) como marcadores preditivos de recorrência no carcinoma papilífero de tireoide. MÉTODOS: Estudo retrospectivo caso-controle, que incluiu 42 casos de pacientes com carcinoma papilífero de tireoide tratados cirurgicamente no A.C. Camargo Cancer Center entre janeiro de 2000 e julho de 2010 que apresentaram recorrência diagnosticada durante o período de seguimento. Pacientes do grupo controle foram pareados por gênero, idade, estadiamento patológico T e N. Os casos selecionados tiveram suas características clínicas registradas e variáveis anatomopatológicas revistas por um patologista com experiência em patologia tireoideana. As lâminas foram confeccionadas pelo sistema de tissue microarray e foram submetidos a reação de imunoistoquímica. Análise de sobrevida multivariada pelo método de Cox foi aplicada para identificar fatores de risco independentes para recorrência. RESULTADOS: Dos 42 casos selecionados, 30 pacientes (71,4%) eram do gênero feminino e 12 (28,6%) do gênero masculino, com a idade variando entre 10 e 80 anos (mediana de 39 anos). A maioria dos pacientes (64,3%) tinha tumores com estadiamento T inicial (T1-T2). Metade da casuística foi classificada como baixo risco, segundo a estratificação de risco da American Thyroid Association (ATA). Dezessete pacientes (40,5%) apresentava risco intermediário e quatro pacientes (9,5%) foram classificados como de alto risco. O tempo de seguimento variou de 46 a 196 meses, com tempo até a recorrência de 2 a 106 meses (mediana de 30 meses). Entre os marcadores analisados, o CK-19 e Ki-67 apresentaram associação estatisticamente significativa com o risco de recorrência (p=0,029 e p=0,007 respectivamente). Na análise multivariada, a imunoexpressão para os marcadores CK-19 e Ki-67 foram identificados como fatores independentes significativos para predição do risco recorrência loco-regional (IC-1,14-81,01 e 1,32- 7,94, respectivamente). Galectina-3, EGFR e NF-kB não apresentaram associação estatisticamente significante. Não observamos associação entre a imunoexpressão dos marcadores imunoistoquímicos e as variáveis clinico-patológicas estudadas. CONCLUSÃO: A análise imunoistoquímica dos marcadores de Ki-67 e CK-19 mostrou-se significativa para predizer recorrência tumoral em pacientes com carcinoma papilífero de tireoide / INTRODUCTION: Papillary carcinoma is the most common malignant thyroid tumor and its incidence has been increasing around the world in recent decades. Most papillary carcinoma have a good prognosis, with a 10-year survival rate of 90-95%, however, as rates of recurrence and salvage treatment remain a significant problem for 5-40% of patients. Although several risk classifications based on prognostic factors are in use, no one is able to predict precisely higher risk os recurrence and unfavorable outcome. The aim os this study is to analyse the immunohistochemical expression of selected markers (Cytokeratin-19, Galectin-3, EGFR, Ki 67, NF-kB) as predictors of thyroid papillary carcinoma recurrence. METHODS: Retrospective case-control study, which included 42 cases of patients with papillary thyroid carcinoma surgically treated at the A.C.Camargo Cancer Center between January 2000 and July 2010. The control group was matched by gender, age, pathological staging T and N stages. Clinical data was registered and pathological characteristics were reviwed by a single pathologist specialized in thyroid diseases. The slides were prepared for microarray tissue system and were submitted to an immunohistochemical reactions. Multivariate Cox method was used to identify the independent risk factors for recurrence. RESULTS: Of the 42 selected cases, 30 patients (71.4%) were female and 12 (28.6%) were male, ranging in age from 10 to 80 years (median of 39 years). Most patients (64.3%) had tumors at initial T staging (T1-T2). Half of the sample was classified as low risk according to the American Thyroid Association (ATA) risk stratification. Seventeen patients (40.5%) presented intermediate risk and four patients (9.5%) were classified as high risk. Follow-up ranged from 46 to 196 months, with time to recurrence from 2 to 106 months (median of 30 months). Among the markers analyzed, CK-19 and Ki-67 had a statistically significant association with the risk of recurrence (p = 0.029 and p = 0.007, respectively). In the multivariate logistic regression analysis, immunoexpression for the CK-19 and Ki-67 markers was independent risk factors for locoregional recurrence (CI-1.14-81.01 and 1.32-7.94, respectively) . Galectin-3, EGFR and NF-kB did not present a statistically significant association in this study. We did not observe an association between the immunoexpression of the immunohistochemical markers and the clinical-pathological variables studied. CONCLUSION: The immunohistochemical analysis of the Ki-67 and CK-19 markers are significant predictors of tumor recurrence in patients with papillary thyroid carcinoma

INTRODUÇÃO: O carcinoma papilífero é o tumor maligno mais comum da tireoide e sua incidência vem aumentando em todo o mundo nas últimas décadas. A maioria dos pacientes com carcinoma papilífero apresenta bom prognóstico, com uma taxa de sobrevida em 10 anos de 90 a 95%, porém, as taxas de recorrência e a necessidade de continuar o tratamento continuam a ser um problema significativo para 5 a 40% dos pacientes. Embora sejam utilizadas diversas classificações de risco baseadas em diferentes fatores prognósticos, nenhuma é capaz de predizer quais pacientes terão maior chance de recorrência e desfecho desfavorável. Este estudo tem como objetivo analisar a expressão de marcadores imunoistoquímicos (Citoqueratina-19, Galectina- 3, EGFR, Ki-67, NF-kB) como marcadores preditivos de recorrência no carcinoma papilífero de tireoide. MÉTODOS: Estudo retrospectivo caso-controle, que incluiu 42 casos de pacientes com carcinoma papilífero de tireoide tratados cirurgicamente no A.C. Camargo Cancer Center entre janeiro de 2000 e julho de 2010 que apresentaram recorrência diagnosticada durante o período de seguimento. Pacientes do grupo controle foram pareados por gênero, idade, estadiamento patológico T e N. Os casos selecionados tiveram suas características clínicas registradas e variáveis anatomopatológicas revistas por um patologista com experiência em patologia tireoideana. As lâminas foram confeccionadas pelo sistema de tissue microarray e foram submetidos a reação de imunoistoquímica. Análise de sobrevida multivariada pelo método de Cox foi aplicada para identificar fatores de risco independentes para recorrência. RESULTADOS: Dos 42 casos selecionados, 30 pacientes (71,4%) eram do gênero feminino e 12 (28,6%) do gênero masculino, com a idade variando entre 10 e 80 anos (mediana de 39 anos). A maioria dos pacientes (64,3%) tinha tumores com estadiamento T inicial (T1-T2). Metade da casuística foi classificada como baixo risco, segundo a estratificação de risco da American Thyroid Association (ATA). Dezessete pacientes (40,5%) apresentava risco intermediário e quatro pacientes (9,5%) foram classificados como de alto risco. O tempo de seguimento variou de 46 a 196 meses, com tempo até a recorrência de 2 a 106 meses (mediana de 30 meses). Entre os marcadores analisados, o CK-19 e Ki-67 apresentaram associação estatisticamente significativa com o risco de recorrência (p=0,029 e p=0,007 respectivamente). Na análise multivariada, a imunoexpressão para os marcadores CK-19 e Ki-67 foram identificados como fatores independentes significativos para predição do risco recorrência loco-regional (IC-1,14-81,01 e 1,32- 7,94, respectivamente). Galectina-3, EGFR e NF-kB não apresentaram associação estatisticamente significante. Não observamos associação entre a imunoexpressão dos marcadores imunoistoquímicos e as variáveis clinico-patológicas estudadas. CONCLUSÃO: A análise imunoistoquímica dos marcadores de Ki-67 e CK-19 mostrou-se significativa para predizer recorrência tumoral em pacientes com carcinoma papilífero de tireoide / INTRODUCTION: Papillary carcinoma is the most common malignant thyroid tumor and its incidence has been increasing around the world in recent decades. Most papillary carcinoma have a good prognosis, with a 10-year survival rate of 90-95%, however, as rates of recurrence and salvage treatment remain a significant problem for 5-40% of patients. Although several risk classifications based on prognostic factors are in use, no one is able to predict precisely higher risk os recurrence and unfavorable outcome. The aim os this study is to analyse the immunohistochemical expression of selected markers (Cytokeratin-19, Galectin-3, EGFR, Ki 67, NF-kB) as predictors of thyroid papillary carcinoma recurrence. METHODS: Retrospective case-control study, which included 42 cases of patients with papillary thyroid carcinoma surgically treated at the A.C.Camargo Cancer Center between January 2000 and July 2010. The control group was matched by gender, age, pathological staging T and N stages. Clinical data was registered and pathological characteristics were reviwed by a single pathologist specialized in thyroid diseases. The slides were prepared for microarray tissue system and were submitted to an immunohistochemical reactions. Multivariate Cox method was used to identify the independent risk factors for recurrence. RESULTS: Of the 42 selected cases, 30 patients (71.4%) were female and 12 (28.6%) were male, ranging in age from 10 to 80 years (median of 39 years). Most patients (64.3%) had tumors at initial T staging (T1-T2). Half of the sample was classified as low risk according to the American Thyroid Association (ATA) risk stratification. Seventeen patients (40.5%) presented intermediate risk and four patients (9.5%) were classified as high risk. Follow-up ranged from 46 to 196 months, with time to recurrence from 2 to 106 months (median of 30 months). Among the markers analyzed, CK-19 and Ki-67 had a statistically significant association with the risk of recurrence (p = 0.029 and p = 0.007, respectively). In the multivariate logistic regression analysis, immunoexpression for the CK-19 and Ki-67 markers was independent risk factors for locoregional recurrence (CI-1.14-81.01 and 1.32-7.94, respectively) . Galectin-3, EGFR and NF-kB did not present a statistically significant association in this study. We did not observe an association between the immunoexpression of the immunohistochemical markers and the clinical-pathological variables studied. CONCLUSION: The immunohistochemical analysis of the Ki-67 and CK-19 markers are significant predictors of tumor recurrence in patients with papillary thyroid carcinoma

<p>Uvod: Karcinom jajnika predstavlja značajan zdravstveni problem.Karakteri&scaron;e ga najveća smrtnost od svih ginekolo&scaron;kih maligniteta. Najveći broj slučajeva karcinoma jajnika dijagostikuje se u uznapredovalim stadijumima bolesti (FIGO st. III i IV), kod kojih petogodi&scaron;nje preživljavanje iznosi ispod 30%, dok se svega 25% slučajeva otkrije u prvom stadijumu gde petogodi&scaron;nje preživljavanje iznosi preko 90%. Do danas nije otkrivena dijagnostička metoda za rano otkrivanje početnog karcinoma jajnika u op&scaron;toj populaciji koja je dovoljno osetljiva i specifična da bi se koristila kao &bdquo;screening&ldquo; metoda. Uspeh u lečenju karcinoma jajnika direktno zavisi od rano postavljene dijagnoze. Cilj istraživanja: Utvrditi značaj tumorskih markera Ca125, HE4, Roma indexa, konvencionalne i dopler transvaginalne sonografije u dijagnostici karcinoma jajnika. Metodologija: Istraživanje je sprovedeno kao prospektivna klinička studija, na Klinici za ginekologiju i aku&scaron;erstvo u Novom Sadu. Ispitivanjem je obuhvaćeno 238 pacijenktinja sa adneksalnim tumorom za operativno lečenje. Preoperativno svim pacijentkinjama je uzeta detaljna anamneza, urađen konvencionalni i dopler transvaginalni ultrazvučni pregled i uzeta krv za određivanje tumorskih markera CA125, HE4, Roma indexa. U zavisnosti od definitivnog patohistolo&scaron;kog nalaza pacijentkinje su podeljene u dve grupe. Grupu A ili ispitivanu grupu su činile ispitanice sa karcinomom i border line tumorima,a grupu B ili kontrolnu grupu,pacijentkinje sa benignim tumorima jajnika. Rezultati: Prosečna starost pacijentkinja je 53 godine. U ukupnom ispitivanom uzorku bilo je statistički značajno vi&scaron;e pacijentkinja u premenopauzi(59,2%) u odnosu na postmenopauzalne pacijentkinje. U ispitivanoj grupi najče&scaron;će zastupljen patohistolo&scaron;ki tip karcinoma je high-grade serozni cistadenokarcinom. Kod najvećeg broja pacijentkinja(49,4%) karcinom je dijagnostikovan u I stadijumu bolesti. U diferencijaciji karcinoma jajnika i benignih tumora jajnika, AUC vrednosti za HE4,Ca125 i Roma index su 0.933, 0.831 i 0.932. Senzitivnost HE4,Ca125,Roma indexa iznosi 0.797/ 0.734 / 0.823. Specifičnost HE4,Ca125, Roma indexa je 0.881 / 0.838 / 0.774. Senzitivnost konvencionalne i dopler transvaginalne sonografije je 0,937/ 0,750, a specifičnost je 0,736/ 0,931 respektivno.Kod pacijentkinja sa endometriozom, vrednost tumorskog markera HE4 je povi&scaron;ena samo kod 6% pacijentkinja, za razliku od vrednosti Ca125 koje su povi&scaron;ene kod 76% pacijentkinja sa endometriozom. Zaključak: Najsnažniji prediktori u diferencijaciji karcinoma od benignih tumora jajnika su: tumorski marker HE4, Roma index, indeks otpora protoku krvi kroz tumorsko tkivo (RI), neravan unutra&scaron;nji zid tumora i ekrescencije unutar tumora. Najbolju senzitivnost u detekciji karcinoma jajnika pokazala je konvencionalna transvaginalna sonografija u odnosu na druge dve ispitivane metode, dok najbolju specifičnost u odvajanju benignih tumora od karcinoma jajnika pokazuje dopler transvaginalna sonografija.</p> / <p>Background: Ovarian cancer represents very important world health issue. It is characterized by the highest mortality rate of all gynecological malignancies. The majority of ovarian cancer cases are diagnosed in advanced stages (FIGO III and IV) in which 5 year survival rate is less than 30%, and only 25% of cases are diagnosed in stage I with survival rate of 90%. So far no diagnostic method has been discovered that is specific and accurate enough to diagnose ovarian cancer in early stage in general population, so that it can be used as screening method. Success rate of treatment of ovarian cancer is dependent on the stage in which the diagnosis has been made. Objective: to determine the importance of tumor markers CA 125, HE4, Roma index, conventional and Doppler transvaginal ultrasound in diagnosis of ovarian cancer. Method: Research was undertaken as prospective study at Clinic for Gynecology and Obstetrics in Novi Sad. The analysis included 238 women with adnexal tumors indicated for surgery. Preoperatively detailed medical history, blood analysis (CA125,HE4,ROMA index), conventional and Doppler transvaginal ultrasound were done for all patients. Patients were divided into two groups depending on their definite pathohistological finding. Group A included patients with carcinoma and border line tumors. Group B (control group) included patients with benign ovarian tumors. Results: Average age of patient was 53 years. More patients were premenopausal (59.2%). The most frequent pathohistological type of carcinoma was high grade serous cystadenocarcinoma. In most cases diagnosis was made in stage I (49.4%). In differentiation between ovarian carcinoma and benign ovarian tumors AUC for HE4, Ca125and Roma index were 0.933,0.831,0.932. Sensitivity of HE4,Ca125 and Roma index is 0.797,0.734,0.832. Specificity of HE4,Ca125 and Roma index is 0.881,0.838,0.774. Sensitivity of conventional and transvaginal ultrasound is 0.937, 0.750, and specificity is 0.736 and 0.931 respectively. In patients with endometriosis tumor marker HE4 levels were elevated in only 6% of cases, while Ca125 levels were elevated in 76% of cases. Conclusion: The most important predictors in carcinoma/benign tumor differentiation are tumor markers HE4, Roma index, RI, uneven inner walls of tumor and ekrescency inside tumor. The highest sensitivity in ovarian cancer detection showed conventional transvaginal ultrasound when compared to two other used methods. The highest specificity in carcinoma/bening tumor differentiation showed doppler transvaginal ultrasound.</p>

Introdução: O câncer de próstata (CP) é a neoplasia mais comum do homem e o seu rastreamento e métodos de detecção têm sido motivo de grande discussão. Devido a sua alta prevalência, busca-se a identificação de tumores clinicamente significantes, evitando-se o supertratamento e seus consequentes efeitos colaterais. Atualmente a ressonância magnética multiparamétrica e outros marcadores moleculares têm sido utilizados, mas falham em acurácia. A busca de novos marcadores diagnósticos e de caracterização da agressividade do CP é urgente. Objetivos: Identificação do perfil de expressão dos genes ERG, SPOP, PTEN, AMACR, GOLM1, EN2 e NKX3.1 e dos miRNAs 21, 221, 100 e 141 no tecido proveniente de biópsias de próstata por agulha e avaliação de sua acurácia no diagnóstico e determinação do prognóstico do CP. Análise de proteínas glicosiladas na urina através da proteômica e espectometria de massa para o diagnóstico do CP. Materiais e Métodos: Estudo prospectivo, exploratório para identificação de biomarcadores diagnósticos e prognósticos de CP. Cento e trinta e dois pacientes com indicação de biópsia de próstata (PSA > 4,0 ng/ml e/ou alterações no toque retal) foram submetidos a biópsia prostática em sextantes no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP e no Instituto do Câncer do Estado de São Paulo (ICESP). Uma amostra aleatória de biópsia foi submetida a qRT-PCR para análise da expressão dos genes e miRNAs. A urina foi coletada após a biópsia e mantida a -20oC. Doze amostras de urina sendo seis de pacientes com diagnóstico de CP e seis com hiperplasia próstatica benigna foram submetidas a análise proteômica com espectrometria de massa. Os perfis de expressão de miRNAs, genes e proteínas foram comparados entre pacientes com e sem diagnóstico de CP. Avaliamos também o perfil de expressão de genes e miRNAs e sua relação com a graduação histológica de Gleason. Resultados: Os níveis aumentados de expressão tissular de NKX3, SPOP, AMACR, EN2, GOLM1 e ERG foram significativamente maiores no grupo CP quando comparados ao grupo controle p=0.03, p=0.004, p < 0.001, p < 0.001, p < 0.001, p=0,002 respectivamente. A avaliação da curva ROC revelou AUC de 0,744; 0,726; 0,692; 0,659; 0,646; 0,609 e 0,469 respectivamente para AMACR, GOLM1, EN2, ERG, SPOP, NKX3 e PTEN no diagnóstico do CP. Com base na análise de regressão linear foi proposto um modelo de análise conjunta dessas variáveis e criado um nomograma com GOLM1 e AMACR integrados com idade e níveis de PSA. A acurácia do nomograma proposto foi de 78,2% no diagnóstico do CP. Na avaliação prognóstica comparando dois grupos de Gleason 6 vs 7 a 10, os genes EN2, GOLM1 e AMACR foram significativamente mais expressos nos tumores mais agressivos (p=0,027, p=0,002, p=0,013 respectivamente). A curva ROC revelou AUC de 0,675, 0,727 e 0,684 respectivamente para EN2, GOLM1 e AMACR. Seguindo o mesmo tratamento estatístico do modelo diagnóstico proposto nesse estudo, foi elaborado um nomograma prognóstico com integração do PSA, idade e expressão de GOLM1 que mostrou uma acurácia de 79%. Na avaliação prognóstica entre os grupos Gleason 6 e 7 vs 8, 9 e 10 apenas os marcadores NKX3 e SPOP foram diferencialmente expressos, p=0,036 e p=0,044 respetivamente. A avaliação da curva ROC revelou AUC 0,704 e 0,696 para NKX3 e SPOP respectivamente. O nomograma proposto, a partir dessas informações e tratamento estatístico das variáveis, integrando PSA, idade e expressão de SPOP mostra uma acurácia de 89% na identificação de tumores de alto grau. Os miRNAs não apresentaram expressão significativamente diferente entre os grupos tanto para o diagnóstico quanto para o prognóstico. A análise proteômica revelou um painel de 56 N-glicopeptídeos capaz de discriminar completamente os grupos de pacientes com e sem CP. A avaliação da curva ROC para o painel formado mostrou uma AUC=1. Conclusões: A análise da expressão de genes em fragmento de biópsia de próstata por agulha, aleatoriamente retirado foi capaz de identificar a presença ou não do CP e caracterizar a sua agressividade. O nomograma desenhado a partir da expressão de GOLM1 e AMACR associados a idade e aos níveis de PSA mostrou acurácia de 78,2% no diagnóstico da doença. Os níveis de expressão tecidual de GOLM1 associados ao PSA demonstraram uma acurácia de 79,1% para a identificação de carcinomas com graduação >=7 e os níveis de expressão tecidual de SPOP associados ao PSA demonstraram uma acurácia de 89,0% para a identificação de carcinomas com graduação >=8. Os níveis de expressão de 56 N-glicopeptídeos intactos na urina mostraram uma ROC: AUC de 1 para o diagnóstico do câncer de próstata / Introduction: Prostate cancer (PC) is the most common cancer among men and screening and detection methods have been a matter of great discussion. Due to its high prevalence, there is an urgent need to search for new biomarkers able to distinguish the clinically significant PC, trying to avoid or postpone the side effects related to the curative treatment. Recently, multiparametric magnetic resonance and some molecular markers have been used but fail in accuracy. The search for new markers to diagnose and classify the aggressiveness of PC is urgent. Objective: Evaluate the expression of ERG, SPOP, PTEN, AMACR, GOLM1, EN2 and NKX 3.1 and miRNAs 21, 221, 100 and 141 in prostate tissue obtained by needle biopsy relating the results with the accuracy in the diagnosis and characterization of the aggressiveness of PC. Analysis of glycosylated proteins in the urine by proteomics and mass spectrometry to be applied in the diagnosis of PC. Materials and methods: Exploratory prospective study to identify diagnostic and prognostic biomarkers for PC. One hundred and thirty-two patients underwent prostate biopsy (PSA > 4.0 ng/ml and/or abnormalities in the digital rectal examination) at the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP and the Cancer Institute of the State of São Paulo (ICESP). A random core was submitted to qRT-PCR for evaluation of gene and miRNA expression. The urine was collected after the biopsy and maintained at -20oC. Twelve samples of urine (six patients with PC and six with benign prostatic hyperplasia) were subjected to proteomic analysis with mass spectrometry. The expression profiles of miRNAs, genes and proteins were compared between patients with and without PC. In addition, the same analysis was performed considering the Gleason and ISUP grading. Results: NKX3, SPOP, AMACR, EN2, GOLM1 and ERG had significantly higher expression in the PC group (p=0.03, p=0.004, p < 0.001, p < 0.001, p=0.002, respectively). Evaluation of ROC curve revealed an AUC of 0.744, 0.726, 0.692, 0.659, 0.646, 0.609 and 0.469 respectively for AMACR, GOLM1, EN2, ERG, SPOP, NKX3 and PTEN. Based on the linear regression analysis, a model of joint analysis of these variables was proposed and a nomogram was created with GOLM1 and AMACR associated with age and PSA levels. The accuracy of this nomogram in diagnosing PC was 78.2%. Considering the prognosis, comparing Gleason 6 vs 7 to 10, EN2, GOLM1 and AMACR were significantly more expressed in more aggressive tumors (p=0.027, p=0.002, p=0.013 respectively). ROC curve evaluation revealed an AUC of 0.675, 0.727 and 0.684 respectively for EN2, GOLM1 and AMACR. Following the same statistical treatment used for diagnosis, a nomogram was created with PSA, age and GOLM1 expression showing an accuracy of 79%. Another prognostic evaluation compared Gleason 6 and 7 vs 8,9 and 10. Only the NKX3 and SPOP were differentially expressed (p=0.036 and p=0.044, respectively) and the ROC curve revealed an AUC 0.704 and 0.696 for NKX3 and SPOP, respectively. A nomogram was designed including age, PSA and SPOP expression. The accuracy for this model in identifying high grade tumors was 89%. MiRNAs expression was not different between the groups considering diagnosis and prognosis. Proteomics analysis revealed a panel of 56 N-glycopeptides able to completely discriminate the groups with and without PC with an (ROC: AUC=1). Conclusion: Evaluating the expression of genes in a random core of prostate biopsy we were able to identify the presence of PC and to characterize its aggressiveness. A nomogram using GOLM1 and AMACR associated with PSA serum levels and age showed and accuracy of 78.2% in diagnose PC. The levels of GOLM1and PSA showed an accuracy of 79.1% in the identification of PC Gleason >=7. SPOP and PSA showed and accuracy of 89% in the identification of PC Gleason >=8. The expression levels of 56 N-glycoproteins perfectly discriminated PC and BPH (ROC: AUC=1)

INTRODUÇÃO: O carcinoma de pulmão de pequenas células (CPPC) e o carcinoma neuroendócrino (CNE) extra-pulmonar apresentam características histopatológicas e tratamentos similares, porém os desfechos encontrados nos dois grupos podem ser diferentes. Avaliamos a expressão de alguns biomarcadores e a associação destes com taxa de resposta (TR) à quimioterapia baseada em platina e sobrevida global (SG) nos dois grupos. METODOS: Realizamos estudo retrospectivo de pacientes com CPPC e CNE extra-pulmonares tratados com quimioterapia baseada em platina. Todas as amostras tumorais foram revisadas pelo mesmo patologista (R.S.S.M.) e analisadas quanto a expressão imunoistoquímica de Ki-67, ERCC1, Bcl-2 e Lin28a, a qual foi determinada através do H-escore (calculado multiplicando o produto da intensidade da coloração - 0 a 3 - com a porcentagem de células positivas - 0 a 100 -, podendo variar de 0 a 300 - positivo quando >= 200). Os biomarcadores foram analisados tanto como variáveis contínuas quanto categóricas e a TR foi determinada por RECIST 1.1. A associação entre a expressão de cada biomarcador e a TR foi avaliada através do teste de qui-quadrado ou teste exato de Fisher para variáveis categóricas e regressão logística simples para variáveis contínuas. Sobrevida global foi estimada por Kaplan-Meier e as curvas foram comparadas por log-rank. O modelo de regressão de cox foi utilizado para avaliar associação entre SG e a expressão de biomarcadores como variável contínua. RESULTADOS: Entre Julho de 2006 e Julho de 2014, 142 pacientes foram identificados: N=82 (57,7%) com CPPC e N=60 (42,3%) com CNE extra-pulmonar. As características clínicas eram semelhantes em ambos os grupos. Mediana de ki67 foi de 60% (7-100) no CPPC e de 50% (20-95%) no segundo grupo (p=0,858). Com uma mediana de 5 ciclos por paciente (N=123 elegíveis para análise de TR), a TR foi de 86,8% no CPPC, enquanto nos com CNE extra-pulmonar, foi de 44,6% (p < 0.001). A mediana de SG (N=132 elegíveis para análise da SG) foi similar entre os grupos (10,3 meses em CPPC e 11,1 meses em CNE extra-pulmonar; p=0,069). Não houve diferença no padrão de expressão do ERCC1 (p=0,277) e do Lin28a (p=0,051) entre os grupos. Bcl2 foi expresso em 38 pacientes (46,3%) com CPPC e em 17 pacientes (28,3%) com CNE extra-pulmonar (p=0,030). Apenas no grupo com CNE extra-pulmonar, a alta expressão do Bcl2 foi associada com pior prognóstico (8,0 meses vs 14,7 meses; p=0,025). A expressão dos demais marcadores em CNE extra-pulmonar e dos quatro em CPPC não apresentou influência sobre a SG, não havendo também associação entre estes e a taxa de resposta à quimioterapia. Dentre os pacientes com CNE extra-pulmonar, não houve diferença na SG ou na TR entre os pacientes com carcinoma bem diferenciado (N=13;) e com carcinoma pouco diferenciado (N=47). CONCLUSÃO: Apesar do CPPC e do CNE extra-pulmonar serem tratados de forma semelhante, nesta coorte a taxa de resposta entre os grupos foi significativamente diferente. Quando comparado com CPPC, os pacientes com CNE extra-pulmonar apresentam uma menor responsividade à quimioterapia baseada em platina, mas com tendência a maior SG. Dentre os CNE extra-pulmonares, a alta expressão de Bcl-2 foi associada a pior prognóstico. Os demais biomarcadores não apresentaram papel preditor de resposta ou prognóstico / INTRODUCTION: Small cell lung cancer (SCLC) and high-grade extrapulmonary neuroendocrine carcinomas (EPNEC) share similar histopathological features and treatment, but outcomes may differ. We evaluated the expression of biomarkers and their association with response rate (RR) to platin-based chemotherapy and overall survival (OS) in these entities. METHODS: We conducted a retrospective analysis of patients with advanced EPNEC and SCLC treated with platinum-based chemotherapy. A single pathologist (R.S.S.M.) revised all samples. Paraffin-embedded tumor samples were tested for Ki-67, ERCC1, Bcl-2 and Lin28a expression by immunohistochemistry (IHC). Final IHC score (H-score) was calculated multiplying the intensity of staining by grading (0-300, with >= 200 considered positive). Biomarkers were analyzed as both categorical and continuous variables. RR was determined by RECIST 1.1. Associations between each biomarkers expression and RR were assessed using Chi-square or Fisher\'s exact test for categorical variables and univariate logistic regression for continuous variables. OS was estimated by the Kaplan-Meier method and curves were compared by log-rank. Cox regression analysis was used to evaluate any association between biomarkers expression (continuous variables) and OS. RESULTS: From July 2006 to July 2014, 142 patients were identified: N=82 (57,7%) with SCLC and N=60 (42,3%) with EPNEC. Baseline clinical characteristics were similar. Median Ki67 was 60% (7-100) among SCLC patients and 50% (20-95%) in EPNEC (p=0,858). With a median of 5 cycles per patient in both groups (N=123 evaluable patients), the RR was significantly higher in the SCLC group (86,8% vs 44.6%; p < 0.001). Median OS (N=132 evaluable patients) was similar between the groups (10.3 months in SCLC and 11.1 months in EPNEC; p=0,069). In the EPNEC group, there wasn\'t any difference in OS or RR between the patients with welldifferentiated (N=13) and poorly differentiated carcinoma (N=47). ERCC1 (p=0.277) and Lin28a (p=0.051) were similarly expressed between the groups. Bcl2 was expressed in 38 SCLC patients (46.3%) and in 17 EPNEC patients (28.3%; p=0.030). Only in the EPNEC group, Bcl2 high expression was associated with worse survival (8.0 months vs 14.7 months; p = 0.025). RR to chemotherapy was not influenced by the expression of the ERCC1, Lin28a, Bcl-2, Ki-67 in either EPNEC or SCLC groups. CONCLUSION: Even though SCLC and EPNEC are treated similarly, in this cohort, the rate response differed significantly. When compared with SCLC, patients with EPNEC apparently had tumors less responsive to platin-based chemotherapy, but tended to live longer. In EPNEC treated with platin, high expression of Bcl2 was associated with poor prognosis. We could not identify additional predictive or prognostic biomarkers

Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2016-09-29T20:17:35Z No. of bitstreams: 1 josehenriquemferreira_dissert.pdf: 1670640 bytes, checksum: 3707d57cc4f4e98d8edb6594786c1b7e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-29T20:17:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 josehenriquemferreira_dissert.pdf: 1670640 bytes, checksum: 3707d57cc4f4e98d8edb6594786c1b7e (MD5) Previous issue date: 2014-10-20 / Introduction: Mammary neoplasms are the most common type of tumor in dogs. Some proteins play an important role in tumor progression, thus are candidate prognosis markers. During tumor growth, the transcription factor induced by hypoxia (HIF-1α) activates the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF), promoting angiogenesis. Interleukin-8 (IL-8) is a pro-inflammatory and pro-angiogenic cytokine and has been associated with tumor progression. Objectives: To evaluate the prognostic value of HIF-1α, VEGF and IL-8 proteins in tumor tissue in dogs with mammary tumors, correlating them with clinicopathological parameters, clinical outcome and survival. Material and Methods: The concentrations of HIF-1α, VEGF and IL-8 proteins were evaluated by ELISA (Enzyme-linked immunosorbent) in macerated tumor of 25 bitches with mammary tumors and control samples and compared statistically. Results: The levels of HIF-1α, VEGF and IL-8 were higher in dogs over the age of 10 years and that had died (p <0.05). Moreover, HIF-1α concentrations were elevated in the tumors of dogs who developed metastases (p = 0.04), while VEGF levels were highest in tumors with clinical stages III and IV (p = 0.03) and IL-8 tumors in tumor with development greater than six months (p = 0.03). Still, high levels of HIF-1α, VEGF and IL-8 were also related to shorter overall survival (p <0.05). Conclusions: High levels of HIF-1α, VEGF and IL-8 are associated with features of poor prognosis, suggesting that the assessment of these proteins in tumor macerated has important prognostic value. / Introdução: As neoplasias mamárias são o tipo mais comum de tumor na espécie canina. Algumas proteínas exercem importante papel na progressão tumoral e portanto, são candidatos marcadores de prognóstico. Durante o crescimento tumoral, o fator de transcrição induzido por hipóxia (HIF-1α) ativa a expressão do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), promovendo a angiogênese. A interleucina-8 (IL-8) é uma citocina pró-inflamatória e pró-angiogênica e tem sido associada à progressão tumoral. Objetivos: Avaliar o valor prognóstico das proteínas HIF-1α, VEGF e IL-8 no tecido tumoral em cadelas com neoplasia mamária, relacionando-os com os parâmetros clínico-patológicos, evolução clínica e sobrevida. Material e Métodos: As concentrações das proteínas HIF-1α, VEGF e IL-8 foram avaliadas pelo método de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent Assay) no macerado tumoral de 25 cadelas com neoplasia mamária e amostras controle e comparadas estatisticamente. Resultados: Os níveis de HIF-1α, VEGF e IL-8 foram maiores em cadelas com idade superior a 10 anos e que vieram a óbito (p < 0,05). Além disso, concentrações de HIF-1α foram elevadas nos tumores de cadelas que desenvolveram metástase (p = 0,04), enquanto os níveis de VEGF foram maiores em tumores com estadiamento clínico III e IV (p = 0,03), e de IL-8 em tumores com evolução tumoral maior que seis meses (p = 0,03). Ainda, níveis elevados de HIF-1α, VEGF e IL-8 também foram relacionados com menor tempo de sobrevida global (p < 0,05). Conclusões: Altas concentrações de HIF-1α, VEGF e IL-8 estão associadas com características de pior prognóstico, sugerindo que a avaliação dessas proteínas no macerado tumoral possui importante valor prognóstico.