Submitted by Milena Dias (milena.dias@ufpe.br) on 2015-03-12T17:58:26Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Rafaella do Nascimento.pdf: 2590367 bytes, checksum: 6d3de6f0c3e697e651f90e0cf7a6d5e1 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T17:58:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Rafaella do Nascimento.pdf: 2590367 bytes, checksum: 6d3de6f0c3e697e651f90e0cf7a6d5e1 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / A gestação é um fenômeno fisiológico que se inicia com a fecundação e progride no sentido de promover um ambiente adequado onde o feto possa crescer e formar um novo indivíduo com todo seu potencial genético expresso. Durante este período, os níveis lipídicos normalmente aumentam para permitir a manutenção da homeostase entre mãe e feto. Níveis lipídicos anormais estão relacionados com disfunção endotelial, reduzindo a produção de óxido nítrico (NO) e causando complicações para mãe e para o desenvolvimento fetal. O NO é principal regulador de eventos feto-placentários sendo produzido a partir da ação de 3 isoformas da óxido nítrico sintase (NOS). Polimorfismos de base única (SNPs) na NOS endotelial (eNOS) tem sido correlacionados à diversas patologias, sendo T-786C um dos SNPs responsáveis por reduzir a expressão da eNOS em 50%. Nosso estudo estabeleceu uma análise sobre estudo sobre o polimorfismo T-786C no gene da eNOS em mulheres no terceiro trimestre de gravidez, observando a possível associação com moléculas lipídicas e com a proteína c-reativa (PCR). Adicionalmente, a partir de ferramentas in silico, foram desenhados modelos de interação proteína-proteína (networks) para compreensão da importância do metabolismo da eNOS em condições normais e com patologias. Amostras de 92 mulheres grávidas foram submetidas à extração de DNA, identificação do polimorfismo T-786C por PCR-RFLP, e análise dos níveis de colesterol total (CT), HDL, LDL, triglicerídeos (TG) e PCR. Análise genotípica apresentou uma população de 71,73% TT, 26,08% CT e apenas 2,17% CC, estando o alelo C-786 presente em 15.21% do grupo estudado. Em relação à análise bioquímica, observou-se significância apenas para PCR quando as pacientes foram agrupadas por níveis sorológicos (normal ou alterado) de acordo com o genótipo da paciente. A CRP atua diretamente no desacoplamento da enzima eNOS prejudicando sua atividade e diminuindo a produção de NO, e servindo como marcador de eventos cardiovasculares. A partir das análises de bioinformática construímos duas networks. A primeira, denominada eNOSNet, possui 51 nós e 361 arestas de interação, mostrando proteínas ligantes da eNOS, pequenas moléculas e seus complexos formados. A segunda network, denominada eNOSNetD, relaciona proteínas envolvidas na via normal da eNOS com doenças descritas para o polimorfismo T-786C, tais como: doenças relacionadas ao sistema cardíaco, neurológico, à neoplasias e ao metabolismo lipídico, glicídico, protéico e hormonal. Estes dados podem ajudar na compreensão sobre a progressão de doenças que envolvem o funcionamento da eNOS e seus possíveis tratamentos e diagnósticos.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-04-08T13:17:51Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Diego de Hollanda Cavalcanti Tavares.pdf: 2494574 bytes, checksum: e8dc89834e1cb3194cbb61de8f169119 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T13:17:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Diego de Hollanda Cavalcanti Tavares.pdf: 2494574 bytes, checksum: e8dc89834e1cb3194cbb61de8f169119 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / FACEPE / No Nordeste brasileiro, a Leishmaniose Visceral (LV), provocada pela infecção com a Leishmania chagasi, é um sério problema de saúde pública cujo controle depende de um diagnóstico precoce dos reservatórios caninos e indivíduos afetados. Antígenos recombinantes são a melhor solução para o uso no diagnóstico sorológico e, em trabalhos prévios, novos antígenos de L. chagasi foram identificados com este propósito. Quando analisados por reações imunoenzimáticas os mesmos apresentaram uma sensibilidade variável e uma alta especificidade no diagnóstico da LV, e em misturas com dois ou mais antígenos houve um aumento da sensibilidade sem prejuízo da especificidade. A produção de um sistema de diagnóstico com mais de um antígeno, entretanto, aumenta os custos de fabricação e padronização. Neste trabalho, partimos de genes sintéticos (dof1, dof2 e dof3) desenhados com as melhores características (domínios repetitivos, regiões polares, epítopos para MHC) de antígenos selecionados e clonados em vetores plasmidiais. A partir de várias etapas de subclonagem estes genes foram utilizados na construção de genes quiméricos, codificando para as regiões repetitivas dos antígenos em diferentes combinações (3-2-1, 3-1-2 e 1-3-2). Os genes quiméricos, clonados em vetores plasmidiais de expressão, foram usados para a produção das respectivas proteínas em Escherichia coli, fusionadas a um motivo de poli-histidinas na sua extremidade N-terminal. Após purificação, via cromatografia de afinidade, estas proteínas foram avaliadas por ensaios de ELISA-indireto com soros humanos, onde se obteve alta sensibilidade e especificidade para as três proteínas, mesmo em diluições elevadas de soro. Estes resultados confirmam o potencial de uso das proteínas quiméricas como alternativa no diagnóstico da LV.

Submitted by Luiz Felipe Barbosa (luiz.fbabreu2@ufpe.br) on 2015-04-17T14:49:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Janilson Felix.pdf: 2886747 bytes, checksum: 655fb97010872b0b61680f88cdeefff8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T14:49:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Janilson Felix.pdf: 2886747 bytes, checksum: 655fb97010872b0b61680f88cdeefff8 (MD5) Previous issue date: 2013-07-30 / FACEPE CAPES / No presente estudo foram avaliados os desempenhos zootécnicos e as atividades das enzimas digestórias do hepatopâncreas do Litopenaeus vannamei em diferentes condições de cultivo. Três experimentos foram desenvolvidos. No primeiro (E1), adotaram-se três unidades experimentais, sendo um sistema água clara com aplicação de ração e dois sistemas com bioflocos, um com adição de ração e outro sem alimentação. O segundo experimento (E2) consistiu num delineamento inteiramente casualizado, com quatro tratamentos envolvendo diferentes concentrações de proteínas na ração comercial (20%, 25%, 30% e 35%). Por fim, no terceiro experimento (E3), os camarões foram submetidos às dietas com diferentes níveis de substituição da farinha de peixe (0% (C), 30% (S30), 60% (S60) e 100% (S100)) por concentrado protéico de soja (SPC). Para a análise das enzimas digestivas presentes nos extratos enzimáticos realizou-se ensaios in vitro na presença dos substratos de cadeia longa (azocaseína 1% e amido 2%), p-nitroanilide (BApNA, SApNA e Leu-p-Nan) e β-naphthylamide (alanina, arginina, leucina, tirosina, serina, glicina, isoleucina e histidina). Além disso, foram realizados SDS-PAGE e zimogramas de atividade proteolítica e amilolítica. Ao final dos experimentos, observou-se no E1 que os sistemas de bioflocos aumentaram as atividades das proteases digestórias quando comparadas às apresentadas pelo sistema autotrófico. No E2 não foram evidenciadas diferenças estatísticas (P<0,05) entre os animais, tanto no ganho de peso e biomassa final quanto na taxa de sobrevivência. Maior atividade proteolítica total (1,54 ± 0,11U·mg-1) e tríptica (15,00 ± 0,75 mU·mg-1) foram observadas para o tratamento 20%. Para quimotripsina, a atividade no tratamento 35% (0,16 ± 0,03 mU·mg-1) foi consideravelmente maior que as dos demais grupos. Em relação às leucineaminopeptidases foi observada maior atividade no grupo 30% (0,26 ± 0,03 mU·mg-1). Em relação às atividades enzimáticas do E3, ocorreram maiores atividades de enzimas quimotripsina (13,78±1,61 U.mg-1) e leucine aminopeptidase (0,45±0,03 U.mg-1) foram observadas para o grupo controle (C). Enquanto que a mais elevada atividade tríptica (13,13±0,53 U.mg-1) foi constatada para o tratamento S30. Entre os substratos β-naphthylamide analisados, verificou-se valores mais altos de atividade aminopeptídica para arginina e alanina em todos os tratamentos, principalmente no S30 que também obteve maior atividade na presença da glicina (1,05±0,08 U.mg-1). Notou-se que para a serina, a atividade das aminopeptidases sofreu uma redução gradativa à medida que aumentou o nível de SPC na dieta dos camarões. O tratamento S60 apresentou maior atividade aminopeptídica para isoleucina (0,69±0,02 U.mg-1) e histidina (0,85±0,04 U.mg-1). Em relação à leucina e tirosina, a atuação das aminopeptidases mostrou-se indiferente estatisticamente às variações dietárias. De acordo com o perfil eletroforético através de SDS-PAGE, observaram-se 17 bandas nas dietas 35%, 30% e 20% e 16 bandas para 25% no tratamento E2, enquanto que no E3 foram observadas vinte e seis bandas protéicas, compreendidas entre 6,9 e 198,8 KDa, para todos os tratamentos. Os zimogramas revelaram seis bandas com alta intensidade para os sistemas de bioflocos e três nos autototrófico no E1. E2 apresentou 12 bandas com atividades proteolíticas para 35% e 30% e 9 bandas para 25% e 20%. Em E3, o zimograma de protease exibiu dois perfis semelhantes, um com 18 (C e S30) e outro com 12 bandas proteolíticas (S60 e S100). Enquanto que o zimograma de amilase revelou cinco bandas com atividade amilolítica para todos os tratamentos. Com os resultados expostos, observou-se que os sistemas de bioflocos, proporcionou um efeito positivo na performance dos animais, mesmo reduzindo o teor de proteína nas dietas, bem como na substituição da farinha de peixe por SPC em 30, 60 e 100%.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:48:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Antígeno Prostático Específico (PSA) é um valioso biomarcador de rastreamento do câncer de próstata. Para determinação do PSA, os imunossensores emergem como uma técnica muito atraente devido à sua simplicidade, especificidade e menor tempo de análise, quando comparada com técnicas convencionais de imunoensaios. Um imunossensor empregando eletrodo de ouro foi usado, em um sistema eletroquímico, para determinação do PSA. O anticorpo monoclonal (anti-PSA) foi orientado na superfície do eletrodo de ouro via proteína A, usada para uma melhor orientação dos anticorpos em Monocamadas Auto-Organizadas, que foram formadas através da incubação do eletrodo numa solução de 2-aminoetanotiol (25mM) seguida por glutaraldeído 2.5% (v/v) durante 45min. A quantidade de anti-PSA imobilizada no eletrodo de ouro, modificado por SAM de tióis, utilizando a proteína A foi 27% maior que o controle (sem proteína A). Parâmetros ótimos foram estabelecidos para um bom desempenho do imunossensor: tempo de incubação (20min) e pH (7.0 - 7.5). A curva de calibração alcançou uma linearidade (r = 0,997, p <0,0001) e boa reprodutibilidade com erro relativo inferior a 5%, quando o antígeno PSA foi incubado variando as concentrações de 1,0 a 15 ng / mL a 25oC. Os resultados obtidos foram satisfatórios provando a viabilidade do desenvolvimento de imunossensores para a determinação do PSA

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5270_1.pdf: 6694120 bytes, checksum: 2f38ffe6a04cc43f85b6cbf0b87edb3d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Biosensor é um dispositivo no qual o material de origem biológica, tais como enzima, organela, tecido animal ou vegetal, microrganismo, antígeno ou anticorpo, ácidos nucléicos, lectina, entre outros, é imobilizado junto a um transdutor adequado. Portanto, o estudo da interface eletrodo/biomolécula/solução consiste em uma das principais etapas para o desenvolvimento de biosensores. O objetivo deste trabalho foi estudar a interface ouro/lectina utilizando as técnicas de Espectroscopia de Impedância Eletroquímica (EIS) e Ressonância de Plásmons de Superfície (SPR), como meios de transdução para a confecção de um futuro biosensor. Contudo, as lectinas pertencem a um grupo de proteínas com especificidade a carboidratos, característica que ampliou o foco da dissertação para a interação entre a lectina Concanavalina A e os carboidratos glicogênio e galactose. Neste trabalho foi montado um sistema de SPR acoplado ou não a um sistema eletroquímico, com o intuito de monitorar e caracterizar a adsorção da proteína em diferentes potenciais e sua interação com carboidratos. Com base nos resultados obtidos, a proteína na configuração desativada adsorveu mais que a forma ativada na superfície do eletrodo de filme fino de ouro, porém, foi a configuração ativada que melhor reconheceu o glicogênio e ambas não se ligaram à galactose. Além disso, foi verificado que a proteína, em ambas as configurações, não reconheceu a galactose e adsorveu mais facilmente em potenciais mais positivos, devido a um maior contraste de cargas entre o eletrodo e a proteína

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4549_1.pdf: 1671770 bytes, checksum: c5d987dfca24d06cae7f83b502cb6758 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A lectina ligadora de manose (MBL), membro das lectinas tipo-C, apresenta capacidade de se ligar através de múltiplos sítios a várias estruturas de carboidratos e promover a ativação do complemento. Os baixos níveis da MBL estão relacionados com a maior susceptibilidade as várias doenças infecciosas. Diferentes ensaios utilizados para a determinação da lectina não têm sido eficazes na identificação das várias formas moleculares da MBL presentes na circulação. Este trabalho tem como objetivo avaliar o perfil molecular da MBL no soro de pacientes com hepatite C usando um método de purificação com base em microplacas cobertas com discos de nitrocelulose, seguida a identificação protéica por ensaios de imuno-reconhecimento, SDS-PAGE (redutora e não-redutora) e análise por Western blot. Os resultados do método de purificação mostraram uma boa eficiência de ligação da membrana coberta com manana e a identificação da MBL foi confirmada para todos os genótipos por DOT-ELISA convencional. No geral, poucas bandas foram visualizadas nas amostras submetidas ao ensaio de purificação, os quais podem estar correlacionadas com a quantidade muito pequena de proteína presente. As bandas revelaram algumas diferenças para o padrão de bandeamento entre os genótipos avaliados AA, AO e OO, mostrando marcações acentuadas nas faixas de 50-90 kDa e 180 kDa, sendo equivalentes a variantes estruturais de baixa massa molecular e estruturas de alta massa molecular, respectivamente. Na análise por SDS-PAGE não-redutora, foram visualizadas uma larga faixa de massas moleculares, tais como as formas triméricas (3x3), dímeros, e bandas de subunidades estruturais da MBL identificadas em algumas amostras, sobretudo nos indivíduos com genótipo tipo selvagem AA. No Western blot, foi confirmado a presença das formas de baixa e alta massas semelhantemente ao observado nos géis de eletroforese, com destaque na detecção de formas de 128 e 32 kDa. Estes resultados sugerem um método para purificação protéica simplificado e de baixo custo para a MBL, o qual foi possível avaliar um perfil diferenciado das formas moleculares presentes no soro de pacientes infectados pelo vírus HCV. Vale ressaltar que este é um importante passo para uma maior elucidação da relação estrutura/genótipo e função da MBL em relação a hepatite C e que pode ser de fundamental importância na resposta ao tratamento

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:54:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4928_1.pdf: 514496 bytes, checksum: 113e8b4d7690d23dca2d8643a8dbe353 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2001 / As leishmanioses em Pernambuco representam um grave problema de saúde pública, não apenas pelo aumento do número de casos novos, mas também pela urgência em implementar mecanismos de controle descentralizados, em resposta às diretrizes do Sistema Único de Saúde (SUS) e de acordo com as proposições emanadas das Conferências Nacionais de Saúde. O município de Glória do Goitá, situado na Zona da Mata Norte de Pernambuco, a 72 Km de Recife, com uma população de aproximadamente 27.000 habitantes, caracteriza-se como uma área em expansão para o calazar, atingindo tanto trabalhadores como crianças. Para o diagnóstico da leishmaniose canina, elemento fundamental para o controle da endemia, o teste sorológico a ser escolhido para a identificação dos animais sororeagentes deve ser de prática e rápida execução, além de ter boa especificidade e sensibilidade. Neste sentido a imunofluorescência (IFI) é a técnica recomendada pelo Ministério da Saúde desde 1978, com boa sensibilidade, mas baixa especificidade. Neste trabalho foi comparado este método utilizando um ELISA recombinante e um método de coleta de sangue melhorado para o trabalho no campo na investigação da leishmaniose canina. Um total de 1151 cães oriundos de 84 localidades daquele município foram examinados por IFI com amostras em papel de filtro, obtendo-se 92 reagentes, 28 reações inconclusivas e 1031 negativas. Quando da eliminação dos cães cujas amostras foram reagentes ou inconclusivas (em média 8 meses após a primeira coleta), 72 deles já haviam morrido e 7 desaparecido, o que representa uma perda de cerca de 65% da amostragem. A soropositividade encontrada aponta para a elevada endemicidade do calazar nas localidades estudadas e sugere fortemente que a elevada mortalidade observada entre os cães sororeagentes se deva de fato ao calazar. Dos 41 cães sobreviventes coletou-se 2 ml de sangue por punção venosa para a realização da IFI com diluição seriada e 20 &#956;L de sangue por punção auricular, depositados em microtubo contendo 500 &#956;L de uma solução de imunoadsorção para realização do ELISA recombinante. Os animais foram submetidos à eutanásia e em seguida necropsiados. O material colhido foi examinado por ELISA recombinante (empregando um sonicado de Escherichia coli expressando a fração carboxi-terminal da HSP70 de Leishmania chagasi) e por IFI com diluição seriada. Houve uma elevada concordância entre os testes, embora, com base nos resultados da necrópsia, o ELISA S7 tenha sido mais sensível e específico. Em conclusão, o sistema de coleta por punção auricular e aspiração de gota em micropipeta é efetivo e aplicável em campo sem problemas e o ELISA recombinante é um teste mais específico e sensível do que o teste atualmente empregado. A associação destas duas técnicas, de coleta e de diagnóstico, pode trazer grande avanço no controle do calazar

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:55:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9634_1.pdf: 1724275 bytes, checksum: d4312579b65180a327243bc502d0715f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Nos últimos anos, a aquicultura tem apresentado um rápido desenvolvimento, sendo a carcinicultura um dos segmentos mais lucrativos e crescentes. Apesar do progresso dessa atividade econômica, o custo com a alimentação dos animais ainda representa um dos principais problemas para os produtores. Com isso, a substituição da farinha de peixe, ingrediente mais caro da dieta dos camarões, por fontes protéicas alternativas tem sido cada vez mais frequente. Desta forma, objetivou-se avaliar o efeito da substituição da farinha de peixe por concentrado protéico de soja (SPC) nos níveis de 0% (C), 30% (S30), 60% (S60) e 100% (S100) sobre o desempenho das enzimas digestivas do Litopenaeus vannamei. Para tanto, espécimes com 2,02±0,51g foram submetidos às dietas experimentais ao longo de dez semanas. Após esse período, foi realizada a biometria dos animais. Hepatopâncreas de quinze camarões de cada tratamento foram coletados, homogeneizados em tampão Tris-HCl 10mM, pH 8,0 com adição de NaCl 15mM e centrifugados para obtenção dos extratos enzimáticos. Para a análise das enzimas digestivas presentes nos extratos enzimáticos realizou-se ensaios in vitro na presença dos substratos de cadeia longa (azocaseína 1% e amido 2%), p-nitroanilide (BApNA, SApNA e Leu-p-Nan) e &#946;-naphthylamide (alanina, arginina, leucina, tirosina, serina, glicina, isoleucina e histidina). Além disso, foram realizados SDS-PAGE e zimogramas de atividade proteolítica e amilolítica. Dentre os grupos experimentais o S100 apresentou maior ação enzimática quando empregado os substratos azocaseína 1% (1,18±0,01 U.mg-1) e amido 2% (5,04±0,33 U.mg-1) para a determinação da atividade proteolítica e amilolítica total, respectivamente. Maiores atividades de enzimas quimotripsina (13,78±1,61 U.mg-1) e leucino aminopeptidase (0,45±0,03 U.mg-1) utilizando os respectivos substratos SApNA e Leu-p-Nan foram observadas para o grupo controle (C). Enquanto que a mais elevada atividade tríptica (13,13±0,53 U.mg-1), usando BApNA como substrato, foi constatada para o tratamento S30. Entre os substratos &#946;-naphthylamide analisados, verificou-se valores mais altos de atividade aminopeptídica para arginina e alanina em todos os tratamentos, principalmente no S30 que também obteve maior atividade na presença da glicina (1,05±0,08 U.mg-1). Notou-se que para a serina, a atividade das aminopeptidases sofreu uma redução gradativa à medida que aumentou o nível de SPC na dieta dos camarões. O tratamento S60 apresentou maior atividade aminopeptídica para isoleucina (0,69±0,02 U.mg-1) e histidina (0,85±0,04 U.mg-1). Em relação à leucina e tirosina, a atuação das aminopeptidases mostrou-se indiferente estatisticamente às variações dietárias. De acordo com o perfil eletroforético dos extratos enzimáticos através de SDS-PAGE, foram observadas vinte e seis bandas protéicas, compreendidas entre 6,9 e 198,8 KDa, para todos os tratamentos. O zimograma de protease exibiu dois perfis semelhantes, um com dezoito (C e S30) e outro com doze bandas proteolíticas (S60 e S100). Enquanto que o zimograma de amilase revelou cinco bandas com atividade amilolítica para todos os tratamentos. A análise do ganho de peso corporal médio dos camarões cultivados mostrou valor mais elevado com o uso da dieta S30 (8,48±1,03 g), entretanto não foram evidenciadas diferenças significativas (P<0,05) entre os tratamentos. Os resultados expostos concluíram que a substituição da farinha de peixe por SPC em 30, 60 e 100% nas dietas dos camarões cultivados proporcionou um efeito positivo na performance dos animais. Esses resultados fornecem informações importantes quanto ao potencial do camarão-branco (L. vannamei) em utilizar formulações de alimentos alternativos com baixos níveis de fontes de proteína animal

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:55:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9635_1.pdf: 3625171 bytes, checksum: 1af9e11b0a5c4759222495f08003d2d6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Saccharomyces cerevisiae e Candida utilis apresentam interesse biotecnológico para produção de biomassa e outros bioingredientes em substratos alternativos. O objetivo deste trabalho foi a produção de biomassa, por cultivo submerso utilizando como substrato resíduos da carcinicultura e das indústrias sucroalcooleira. O resíduo de camarão foi tratado com diferentes taxas de diluição a 40 °C, e analisada ao longo de 5 horas em intervalos de 1 hora, atingindo os melhores resultados de hidrólise protéica na diluição 1:4. O cultivo das leveduras nesse resíduo mostrou que apenas a C. utilis se adaptou ao substrato, atingindo uma taxa de crescimento máximo (&#956;max) 0,10 h-1 no cultivo submerso em frasco Erlenmeyer sob agitação de 150 rpm, a 30 °C durante 48 horas. A C. utilis foi cultivada em melaço in natura nas concentrações 1%, 2%, 4%, 6%, 8% e 10% (p/v) como fonte alternativa de carbono, obtendo os melhores resultados na condição de 2%. Os experimentos de cultivo em batelada com um volume de trabalho de 1 L e 4 L foram conduzidos em biorreator (BioFlo2000, New Brunswick Scientific) a 30 ºC, taxa de aeração 1 vvm e velocidade de agitação 150 rpm utilizando o resíuo de camarão hidrolisado na diluição de 1:4 durante 3 horas com inclusão de 2% (p/v) de melaço. A C. utilis mostrou a maior produção de biomassa (9.90 g/L) em 48 h de cultivo, consumindo cerca de 75% da concentração inicial dos açucares redutores presentes no meio. Valores de &#956;max, rendimento da biomassa (Yx/s) e produtividade (QX) foram 0,20 h-1, 0,8 g/g e 0,53 g/L h, respectivamente. A biomassa seca apresentou valores nutricionais com baixa concentração de lipídeos (0,63 g/100g de biomassa) e alta concentração de proteína (61,60 g/100g de biomassa), além de energia metabolizável (316,09 Kcal/100g de biomassa) e minerais como cálcio e sódio. Desta forma é possível concluir que a levedura C. utilis apresenta potencial na single cell protein visando sua utilização na suplementação alimentar animal

Dissertação(mestrado)- Universidade Federal do Rio Grande, Programa de Pós-Graduação em Engenharia e Ciência de Alimentos, Escola de Química e Alimentos, 2009. / Submitted by Caroline Silva (krol_bilhar@hotmail.com) on 2012-08-23T22:10:06Z No. of bitstreams: 1 elisane-dissertao.pdf: 1678353 bytes, checksum: 827dc6807ea87ca51e1133f6f1dd934b (MD5) / Approved for entry into archive by Bruna Vieira(bruninha_vieira@ibest.com.br) on 2012-09-09T17:36:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 elisane-dissertao.pdf: 1678353 bytes, checksum: 827dc6807ea87ca51e1133f6f1dd934b (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-09T17:36:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 elisane-dissertao.pdf: 1678353 bytes, checksum: 827dc6807ea87ca51e1133f6f1dd934b (MD5) Previous issue date: 2009 / O glicerol gerado na síntese de biodiesel pode ser usado na produção de biomassa, para suplementação na alimentação, agregando valor a este subproduto. Este trabalho teve como objetivos: selecionar uma cepa de levedura promissora para produção de biomassa como fonte de proteínas, comparando a utilização de glicerol comercial puro e glicerol bruto proveniente da síntese de biodiesel, como principal fonte de carbono; selecionar o meio de cultivo, através do teste de Tukey; avaliar a composição do meio de cultivo de forma a maximizar a concentração de biomassa e conteúdo proteico através da técnica de planejamento experimental. Foram utilizadas as leveduras Yarrowia lipolytica NRRL YB- 423, Candida lipolytica NRRL Y-1095, Candida utilis NRRL Y-900 e Candida rugosa NRRL Y-95, certificadas como GRAS (Generally Recognized As Safe). Os cultivos foram realizados em frascos agitados, conduzidos em incubadora rotatória a 30°C e 180 rpm. As leveduras Yarrowia lipolytica YB-423 e Candida lipolytica Y-1095 apresentaram maior produção de proteína total em meio contendo glicerol puro, cerca de 1,9 e 1,7 g/L, respectivamente. Quando utilizado meio contendo glicerol bruto, proveniente da produção de biodiesel, não houve diferença estatisticamente significativa quanto à produção de proteína total entre as leveduras, mas quanto ao conteúdo proteico a levedura Candida utilis Y-900 apresentou diferença em relação às demais cepas. Quando avaliada a biomassa máxima, a levedura Yarrowia lipolytica YB-423 apresentou melhor resultado(14,7 g/L). Desta forma, a levedura Yarrowia lipolytica YB-423 foi selecionada para produção de biomassa como fonte de proteínas. Com esta levedura, foram estudados quatro meios de cultivo com composição distinta, sendo selecionado aquele com 50 g/L de glicerol, 5,5 g/L de hidrogenofosfato de amônio, 5,5 g/L de dihidrogenofosfato de potássio, 1 g/L de sulfato de amônio, 0,25 g/L de sulfato de magnésio, 0,021 g/L de cloreto de cálcio dihidratado, 1 g/L de extrato de levedura, 1 g/L de peptona, ajustado a pH 5,5, obtendo-se 18,2 % de conteúdo proteico, 17,8 g/L de biomassa máxima e 3,1 g/L de produção de proteína total. Um planejamento experimental fracionário 2v 5-1 foi utilizado para determinar as variáveis que mais influenciaram na produção de biomassa e no conteúdo proteico. Os parâmetros estudados foram pH inicial do meio de cultivo e as concentrações de glicerol, hidrogenofosfato de amônio, peptona e extrato de levedura. Posteriormente, as variáveis que mais influenciaram foram avaliadas em um planejamento experimental completo 23, fixando-se as concentrações de hidrogenofosfato de amônio (5,5 g/L) e peptona (1,5 g/L). Através da técnica de superfície de resposta, a condição para maximização do conteúdo proteico validada pelo modelo empírico foi de 33,9 g/L de glicerol, pH inicial de 4,8 e 0,6 g/L de extrato de levedura, obtendo-se um conteúdo proteico de 20,1± 0,6%, com uma biomassa máxima de 19,5 ± 1,0 g/L. / The glycerol generated in the biodiesel synthesis can be used in the production of biomass, for diet supplementation, adds value to this by-product. This work aims to: select a promising strain of yeast for production of biomass as a source of protein, comparing the use of pure commercial glycerol and crude glycerol from biodiesel synthesis as the main carbon source; select the culture media through the Tukey test; evaluate the composition of the culture medium in order to maximize the concentration of biomass and protein content by the experimental design technique. The yeast Yarrowia lipolytica YB-423, Candida lipolytica NRRL Y-1095, Candida utilis Y-900 and Candida rugosa Y-95, certified as GRAS (Generally Recognized As Safe) were used. The cultures were performed in shaken flasks, conducted in rotary incubator at 30°C and 180 rpm. Yarrowia lipolytica YB- 423 and Candida lipolytica Y-1095 showed higher production of total protein in the medium containing pure glycerol, about 1.9 and 1.7 g/L, respectively. In medium containing crude glycerol derived from the production of biodiesel, the yeasts showed no statistically significant difference in the production of total protein, but the protein content of the yeast Candida utilis Y-900 showed a difference in relation to the other strains. When assessing the maximum biomass, the yeast Yarrowia lipolytica YB-423 showed the best result (14.7 g/L). Therefore, the yeast Yarrowia lipolytica YB-423 was selected for production of biomass as a source of protein. With this yeast, we studied four culture media with different compositions, thereby selecting that with 50 g/L of glycerol, 5.5 g/L of ammonium hydrogen phosphate, 5.5 g/L of potassium dihydrogen phosphate, 1 g/L of ammonium sulphate, 0.25 g/L magnesium sulphate, 0.021 g/L dihydrated calcium chloride, 1 g/L yeast extract, 1 g/L peptone, pH adjusted to 5.5, resulting in 18.2% of protein content, 17.8 g/L of maximum biomass and 3.1 g/L of total protein production. A 2v 5-1 fractional experimental design was used to determine the variables that most influenced the production of biomass and protein content. The parameters studied were initial pH of the culture medium, glycerol concentrations, ammonium hydrogen phosphate, peptone and yeast extract. Subsequently, the variables that most influenced were evaluated in a full experimental design 23, setting up the concentrations of ammonium hydrogen phosphate (5.5 g/L) and peptone (1,5 g/L). Through the technique of surface response, the condition for maximizing the protein content validated by empirical model was 33.9 g/L glycerol, initial pH of 4.8 and 0.6 g/L yeast extract, resulting in a protein content of 20.1 ± 0.6%, with a maximum biomass of 19.5 ± 1.0 g/L.