Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / La fibrilación auricular (FA) es la arritmia más común y prevalente en la población adulta, en especial aquella hipertensa. La FA se caracteriza por una rápida activación eléctrica descoordinada de la aurícula, con el consiguiente deterioro de su función contráctil. La inflamación es un factor de riesgo en pacientes con FA e incluso podría tener un papel causal en su desarrollo. Al respecto se ha descrito que los niveles de la proteína C reactiva (PCR), una proteína inflamatoria generada en la pared de los vasos y el hígado, están incrementados tanto en la FA paroxística como en la de tipo persistente. Por otra parte se ha sugerido que los niveles plasmáticos de esta proteína podrían estar determinados por ciertos polimorfismos en su gen, en particular el +219G>A. Este trabajo tuvo por objetivos: a) evaluar si factores inflamatorios sistémicos y/o locales determinan la aparición de FA por remodelado de la aurícula y b) investigar si el polimorfismo +219G>A del gen para PCR determina un mayor riesgo y los niveles plasmáticos circulantes de esta proteína inflamatoria. En el presente trabajo se utilizó como modelo de estudio, la FA que se presenta en un 20% de los pacientes que se someten a cirugía cardiaca electiva. En estos pacientes se determinaron los niveles de PCR antes y después de la cirugía y se genotificaron para este polimorfismo mediante la reacción de amplificación en cadena de la polimerasa en su versión confrontando dos pares de partidores. A este estudio ingresaron 109 pacientes de los Hospitales Clínicos de la Universidad Católica y de la Universidad de Chile. El promedio de edad fue de 61± 11 años y el 82% fue de sexo masculino. El 48% de los pacientes presentó hipertensión arterial, el 40% dislipidemia y un 24% diabetes. La incidencia de FA postoperatoria fue de 26%. Los niveles promedio de PCR pre y postoperatorios fueron de 3,4 y 75,6 mg/L, respectivamente. Las frecuencias genotípicas fueron 0,394 para el homocigoto GG, y 0,303 para el homocigoto AA y el heterocigoto GA. Las frecuencias alélicas calculadas cumplen con el equilibrio de Hardy-Weinberg y fueron de 0,546 y 0,454 para el alelo G y el alelo A, respectivamente. Se realizó la asociación entre los distintos genotipos y la aparición de FA a través de un análisis estadístico de 2, no encontrándose diferencia significativa entre ellos. Los resultados muestran que no existe relación entre el polimorfismo y la aparición de FA postoperatoria ni entre el polimorfismo y los niveles plasmáticos de PCR.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2008. / Submitted by Jaqueline Oliveira (jaqueoliveiram@gmail.com) on 2008-12-12T14:15:35Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_JulianaFrossardRMendes.pdf: 639928 bytes, checksum: cc62ab7b801d878ec0fe1d8e124d5657 (MD5) / Approved for entry into archive by Georgia Fernandes(georgia@bce.unb.br) on 2009-02-18T19:45:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_JulianaFrossardRMendes.pdf: 639928 bytes, checksum: cc62ab7b801d878ec0fe1d8e124d5657 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-02-18T19:45:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_JulianaFrossardRMendes.pdf: 639928 bytes, checksum: cc62ab7b801d878ec0fe1d8e124d5657 (MD5) / Objetivo Embora essencial em vários processos vitais no organismo humano, o ferro catalisa reações de geração de espécies reativas de oxigênio, as quais têm sido associadas ao aumento do risco de doenças crônicas não transmissíveis e ao envelhecimento precoce. Este estudo teve por objetivo investigar possíveis correlações e associações entre as concentrações de ferritina e hemoglobina sérica e o consumo dietético de ferro e os biomarcadores de estresse oxidativo em adultos. Materiais e métodos Os dados foram coletados de 134 indivíduos supostamente saudáveis, acima dos 18 anos, selecionados aleatoriamente que participavam do estudo piloto do projeto “Prevalência dos fatores de risco para doenças crônicas não transmissíveis no Distrito Federal – Brasil (VIVA Saúde - DF)”, um estudo transversal. Foram analisadas as concentrações séricas de ferritina, malondialdeído (MDA), proteínas carboniladas (PC), hemoglobina (Hb) e o consumo dietético de ferro. Resultados Foi observada uma correlação (r = 0,189 e p = 0,032) e associação (p = 0,046) entre ferritina e MDA séricos. A concentração de Hb foi associada positivamente com o MDA sérico (p = 0,040). Para a população total, verificou-se uma associação positiva entre as ingestões dietéticas de ferro total e hêmico e a concentração sérica de MDA (p =0,008 e p = 0,033, respectivamente). Entre as mulheres, a ingestão dietética de ferro inorgânico foi positivamente associada a concentração sérica de PC (p = 0,036). Menores concentrações séricas de MDA foram encontradas em indivíduos com níveis de ferritina abaixo da referência de normalidade (p = 0,015), e em homens anêmicos (p = 0,011). Conclusão Esse resultados sugerem que altos níveis de ferro podem contribuir para um aumento no estado de estresse oxidativo. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Objective Although essential in many vital processes in the organism, iron catalyzes reactions of reactive oxygen species generation, which have been associated to an enhanced risk of noncommunicable chronic diseases and precocious ageing. This study aimed to investigate whether ferritin and hemoglobin concentration, and dietary iron consumption were related to oxidative stress biomarkers in adults. Research methods and procedures Data were collected from 134 supposedly health subjects above 18 years, randomly select, participants of a pilot project “Risk factors prevalence for non-communicable chronic diseases in Federal District – Brazil (VIVA Saúde-DF), a transversal study. Serum ferritin, malondialdehyde (MDA) and carbonylated proteins (PC) concentrations; hemoglobin (Hb); and dietary iron consumption were analyzed. Results A positive correlation (r = 0.189, p = 0.032) and association (p = 0.046) was observed for serum ferritin and MDA. Hb concentration was positively associated with serum MDA (p = 0.040). Total and hemic iron dietary intakes showed a positive association with serum MDA for all subjects (p = 0.008 e p = 0.033, respectively). Among woman inorganic iron intake was positively associated with serum PC (p = 0.036). Lower serum MDA concentration was found in ferritin deficient subjects (p =0.015), and anemic men (p = 0.011). Conclusion These results suggest that high levels of iron may increase oxidative stress status.

O câncer de esôfago é a sexta neoplasia maligna mais comum no mundo. No Rio Grande do Sul, Brasil, o carcinoma epidermóide de esôfago apresenta coeficientes de mortalidade elevados e com tendência ascendente com, pelo menos, o dobro dos coeficientes padronizados de mortalidade encontrados em outros estados brasileiros ou em países do cone sul da América latina. O diagnóstico tardio parece ser o principal responsável pelo mau prognóstico. Nos últimos anos, diversos estudos têm demonstrado a possibilidade de identificação das lesões precursoras do câncer esofágico, mas sem repercussão no prognóstico, até o momento. Considera-se, atualmente, que a carcinogênese esofágica está relacionada a uma interação entre fatores ambientais e anormalidades genéticas Recentemente, estudos em biologia molecular têm demonstrado a influência dos fatores reguladores do ciclo celular no prognóstico de diversas moléstias, inclusive o câncer. O Rb é um gene supressor tumoral envolvido no mecanismo de controle do ciclo celular, cuja expressão tem sido demonstrada no câncer do esôfago. O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência da perda da expressão da proteína pRb na mucosa esofágica de indivíduos sob risco para o carcinoma epidermóide de esôfago, bem como relacionar esta expressão com o consumo de tabaco, álcool e chimarrão, achados histopatológicos e cromoscopia com lugol. Foram estudados 170 casos e 20 controles através de reação imunohistoquímica utilizando anticorpo monoclonal anti-pRb em amostras teciduais fixadas em formalina e armazenadas em parafina. Um total de 33 casos demonstrou perda da expressão imunohistoquímica da proteína pRb, determinando uma prevalência de 19,4% na amostra estudada. Não houve associação estatisticamente significativa entre a perda da expressão da proteína pRb e as variáveis idade, raça, exposição ao fumo, álcool e chimarrão, bem como a cromoendoscopia com lugol. Foi demonstrada uma associação significativa entre a perda da expressão da pRb com a história de câncer na família. Da mesma forma, foi demonstrada uma associação linear significativa entre a perda da pRb e o grau histopatológico das lesões. Estes resultados demonstraram uma influência da proteína pRb na evolução da carcinogênese esofágica e permitem sugerir que os indivíduos expostos aos fatores de risco estudados sejam candidatos a uma maior vigilância.

A demanda por antioxidantes naturais vem aumentando devido à toxicidade de alguns antioxidantes sintéticos. Estudos vêm identificando antioxidantes de origem natural, como a proteína da soja, que é capaz de contribuir na melhoria de propriedades funcionais e biológicas de alimentos. A hidrólise enzimática da proteína de soja aumenta sua atividade antioxidante, assim como a capacidade emulsificante e a capacidade de formação de espuma. O objetivo deste trabalho foi o estudo da hidrólise da proteína de soja através de uma protease produzida por Chryseobacterium sp., a verificação da capacidade antioxidante e aplicação do hidrolisado em diferentes tipos de carnes para evitar a oxidação lipídica. A eficácia da hidrólise foi determinada através da proteína solúvel utilizando o método de Folin enquanto que a atividade antioxidante foi avaliada pelos métodos referentes à captura do radical DPPH e ABTS. Os hidrolisados foram adicionados em carne de porco e peixe e foi verificada a inibição da oxidação lipídica. A influência de três parâmetros (temperatura, pH, relação enzima/substrato) na hidrólise foi estudada através um experimento fatorial 23 . Como respostas foram avaliadas a atividade antioxidante (DPPH e ABTS), atividade quelante de ferro, proteína solúvel, capacidade de formação de espuma e capacidade emulsificante. Observou-se um aumento na concentração de proteína solúvel em função do tempo, sendo que os hidrolisados foram capazes de inibir tanto o radical DPPH quanto o ABTS. Os hidrolisados inibiram em parte a oxidação lipídica em carne suína e peixe. Ainda foi possível concluir que dependendo da finalidade para que se deseja o hidrolisado, diferentes condições devem ser utilizadas. Os resultados demonstram uma potencial aplicação da protease microbiana para gerar hidrolisados antioxidantes da proteína de soja. / The demand for natural antioxidants has been increasing due to the toxicity of some synthetic antioxidants. Studies have identified naturally occurring antioxidants, such as soy protein, which can contribute to improve functional and biological properties of food. Enzymatic hydrolysis of soy protein increases its antioxidant activity, as well as emulsifying capacity and foaming capacity. The purpose of this work was to study the hydrolysis of soy protein, verifying the antioxidant capacity, application of the hydrolysate in different types of meat and optimization of hydrolysis. The efficiency of hydrolysis was determined by the soluble protein by the method of Folin while the antioxidant activity was evaluated by the methods related to the capture of the radical DPPH and ABTS. The hydrolysates were added to pork and fish and the extent of lipid oxidation was determined by TBARS. In optimizing of the hydrolysis three parameters were varied (T, pH, enzyme substrate), it was applied to a surface response methodology for conducting trials using a 23 factorial experiment. As answers were evaluated antioxidant activity (DPPH and ABTS), iron chelating activity, Lowry, foaming capacity and emulsifying capacity. There was an increase in soluble protein concentration versus time, and the hydrolysates were able to inhibit both the ABTS and the DPPH radical. The hydrolysates were able of inhibit lipid oxidation in pork and fish. Was still possible to conclude that depending on the finality that will be given to hydrolysates different treatment conditions should be used. The results demonstrate a significant potential for application of microbial protease to generate antioxidants of hydrolyzed soy protein.

A pré-eclâmpsia (PE) é causa importante de mortalidade fetal e materna em todo mundo e existem evidências que a resistência à insulina esteja implicada em sua fisiopatologia. A via Akt/PKB é estimulada pela insulina e exerce várias funções vitais como crescimento, sobrevivência e metabolismo celular. Objetivo: investigar a expressão basal da Akt/PKB, proteínas que regulam sua atividade e de seus substratos em placenta, músculo esquelético e adipócitos de parturientes normais e com pré-eclâmpsia. Método: amostras de 17 pacientes normais e 17 pacientes com PE foram coletadas, preparadas e analisadas por Western blot para quantificação da expressão de proteínas envolvidas na cascata de sinalização da Akt/PKB. Resultados: em placentas a expressão basal da P85 foi 1,12 (0,83 – 1,62 mediana e percentils 25 - 75), para normais e 1,29 (0,89 – 1,96) para PE com p = 0,42; a expressão da Akt/PKB total foi 1,85 (1,07 - 3,12) para normais e 1,53 (1,27-3,08) com p = 1,00. A atividade dos substratos da Akt/PKB fosforilados em serina e treonina foi semelhante entre placentas de parturientes normais e PE, e a expressão da HSP90 também se mostrou semelhante entre os dois grupos. No músculo esquelético a expressão da P85 foi de 1,41 (1,20 - 6,29) para normais e 1,63 (1,32- 1,90) para PE com p = 0,91. A expressão de Akt/PKB total foi de 0,96 (0,84 - 1,31) para normais e 1,55 (0,87 - 1,86), p = 0,41. A atividade dos substratos da Akt/PKB fosforilados em serina e treonina foi semelhante nesse tecido entre normais e PE, e a expressão da HSP90 também se mostrou semelhante entre os dois grupos no músculo esquelético. No tecido adiposo a expressão de Akt/PKB total foi 1,10 (0,53 - 1,73) em normais e 1,66 (0,83 - 2,00) em PE com p = 0,37 e a expressão do IRß; 1,58 (0,56 - 3,23) para normais e 2,00 (0,91 - 6,65) para PE com p = 0,53. Conclusões: Não houve diferença na via da Akt/PKB, em estado basal, em placenta e músculo esquelético de pacientes com PE e normais. Contudo, não podemos descartar defeitos nessa via de sinalização como fisiopatologia da PE, pois ainda é necessária a análise dessa via estimulada. / Preeclampsia (PE) is important cause of fetal and maternal mortality around the world and there are evidences that insulin resistance has been implicated in the pathophysiology of preeclampsia. Akt/PKB via is stimulated by insulin and perform several vital functions as growth, survival and cellular metabolism. Objective: to investigate the basal expression of Akt/PKB, proteins that regulate Akt/PKB activity and Akt/PKB substrate in the placenta, skeletal muscle and adipocytes of normal and preeclampsia parturient. Method: samples were collected from 17 normal patients and 17 PE patients, prepared and analyzed by Western blot to quantify the proteins expression involved in signaling cascade of Akt/PKB. Results: the basal expression of P85 in normal placentas was 1.12 (0.83 – 1.62 median and percentiles 25 - 75), and for PE 1.29 (0.89 – 1.96) with p = 0.42; total Akt/PKB expression for normal was 1.85 (1.07 – 3.12) and 1.53 (1.27-3.08) with p = 1.00. The Akt/PKB phospho(ser/thr) substrates activity was not different in placentas of the normal and PE groups and the HSP90 also showed no difference between the groups. In the skeletal muscle the expression of P85 of normal placentas was 1.41 (1.20 – 6.29) and for PE 1.63 (1.32- 1.90) with p = 0.91. Total Akt/PKB expression for normal was 0.96 (0.84 – 1.31) and 1.55 (0.87 – 1.86), p = 0.41. The Akt/PKB phospho(ser/thr) substrates activity was not different in skeletal muscle of the normal and PE groups and the HSP90 also showed no difference between the groups. Total Akt/PKB expression in the adipose tissue of normal placentas was 1.10 (0.53 – 1.73) and for PE 1.66 (0.83 – 2.00) with p = 0.37 and the expression of IRß of normal placentas was 1.58 (0.56 – 3.23) and for PE 2.00 (0.91 – 6.65) with p = 0.53. Conclusions: there was no difference in Akt/PKB via, in basal state, in placentas and skeletal muscle of normal and PE patients. However, we cannot discard defects in this signaling via as pathophysiology of PE, because it is still necessary to analyze this via during stimulation.

Este estudo se propõe a avaliar a expressão da proteína p53 em queratinócitos de antebraços de indivíduos com níveis diferentes de fotoenvelhecimento. O fotoenvelhecimento é um processo crônico definido por alterações fisiológicas, histológicas e clínicas, induzidas pela radiação ultravioleta. A radiação solar é considerada o mais importante carcinógeno em humanos, induzindo e promovendo alteração de DNA nos queratinócitos até a conversão maligna. A expressão do p53, gene supressor de tumores, seria o grande marcador genético da tendência à malignização induzida pela radiação ultravioleta. As mutações no gene p53 precedem o câncer de pele, mas não está determinado em que momento. A importância da avaliação desta proteína no fotoenvelhecimento, seria para avaliar um indicador de mutação no gene p53 precocemente às lesões malignas, e, portanto, melhor compreender e prevenir o câncer de pele não-melanoma. Sessenta pacientes com fototipo II e fotoenvelhecimento cutâneo foram avaliados segundo dois critérios: quanto à presença de ceratoses actínicas, grupo A, e quanto à presença de atrofia cutânea associada à elastose ou ao intenso ressecamento, grupo B. Ambos os grupos, com 60 pacientes, foram divididos em dois níveis: leve e grave. Câncer de pele diagnosticado previamente foi critério de exclusão. Os dois grupos, de forma independente, foram comparados quanto à expressão da proteína p53 através do método de imunoistoquímica. Biópsias foram realizadas em pele exposta ao sol de antebraço esquerdo, para avaliação histológica e pelo método de imunoistoquímica. O p53 estava expresso em todas as biópsias, sendo encontrada, no grupo A, mediana de 10,8 (2,8 -23,3) no nível leve, com 43 pacientes e mediana de 20 (9,5 -26,3) no nível grave, com 17 pacientes. No grupo B, mediana de 11.3 (3,0 -22,9) no nível leve, com 36 pacientes, e mediana de 18,8 (5,4 -26,7) no nível grave, com 24 pacientes. As diferenças entre os níveis leve e grave, segundo os dois critérios, não foram significativas estatisticamente. Nesta amostra, não se encontrou diferença estatística quanto à expressão da proteína p53 nos diferentes níveis de fotoenvelhecimento. Diversas hipóteses podem justificar o resultado, sendo possível que as alterações moleculares no fotoenvelhecimento sejam muito precoces aos cânceres de pele.

Submitted by Mendes Eduardo (dasilva@ufba.br) on 2013-08-21T15:10:18Z No. of bitstreams: 1 Dissertação final Igor Leonardo.pdf: 1062966 bytes, checksum: a0b1f2e686019a267d4eefce030fe7c0 (MD5) / Approved for entry into archive by Vilma Conceição(vilmagc@ufba.br) on 2013-08-21T18:08:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação final Igor Leonardo.pdf: 1062966 bytes, checksum: a0b1f2e686019a267d4eefce030fe7c0 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-21T18:08:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação final Igor Leonardo.pdf: 1062966 bytes, checksum: a0b1f2e686019a267d4eefce030fe7c0 (MD5) / Fapesb / A atividade industrial tem potencial para gerar resíduos tóxicos que podem atingir o ambiente. Nos complexos industriais, as correntes “não orgânicas” que compõem o sistema supostamente “não contaminado” são direcionadas a bacias de contenção, cujo reuso das águas pode ser feito, fundamentando-se na comprovação de sua qualidade. O uso de biomarcadores de exposição no embasamento de ações de controle e risco permite a detecção de impactos deletérios antes que sejam manifestados em níveis de populações ou comunidades. As metalotionéinas são proteínas que indicam a presença de metais traços no ambiente. Este trabalho visou avaliar a biodisponibilidade de metais traços na água e no sedimento de diferentes pontos de Bacias de Contenção de efluentes petroquímicos, utilizando como organismos-testes juvenis de Tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus), através da indução de metalotioneínas. As tilápias foram expostas à água, proveniente de diversos pontos amostrais da bacia de contenção, bem como ao sedimento, por um período de 24 horas. Foram utilizadas 5 réplicas para cada ponto de amostragem, além de um ponto controle. Os resultados indicaram a presença de metais traços em concentrações acima das encontradas na amostra-controle, salientando a eficiência destes biomarcadores na avaliação da qualidade hídrica para o reuso industrial. / Salvador, Bahia.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-11T19:23:00Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ODONTO_Flávia Caló de Aquino.pdf: 1450921 bytes, checksum: c2df2bc28eeb600f745df589edb6037a (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-09-12T01:41:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_ODONTO_Flávia Caló de Aquino.pdf: 1450921 bytes, checksum: c2df2bc28eeb600f745df589edb6037a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-12T01:41:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ODONTO_Flávia Caló de Aquino.pdf: 1450921 bytes, checksum: c2df2bc28eeb600f745df589edb6037a (MD5) / CAPES / A queilite actínica refere-se a uma lesão cancerizável que acomete os lábios, causada por radiação ultravioleta e que histologicamente pode apresentar de graus variados de displasia epitelial ao carcinoma escamocelular de lábio. Para contribuir com o entendimento da carcinogênese bucal, avaliou-se pela técnica imuno-histoquímica a p63, uma proteína homóloga à p53, utilizando-se o anticorpo anti-p63 (Clone 4A4), que reconhece as seis isoformas da p63, para se estabelecer o comportamento deste em quarenta lesões de queilite actínica e sessenta e cinco casos de carcinoma escamocelular de lábio, no intuito de verificar sua utilidade como biomarcador de risco para transformação maligna. Para isso, associou-se o grau histológico das displasias presentes nas queilites actínicas seguindo os critérios propostos por Bánóczy e Csiba (1976), e a graduação histológica de malignidade dos carcinomas escamoceluares de lábio, de acordo com o sistema estabelecido por Anneroth, Batsakis e Luna (1987), modificado por Bryne et al. (1989), com o percentual de células imunomarcadas pela p63. Em todos os casos estudados foi possível detectar a presença da proteína p63, onde nas lesões de queilite actínica o padrão de marcação foi basal e suprabasal, já nos carcinomas escamocelulares observou-se a maior parte das células tumorais expressando a proteína. Não existiu diferença estatisticamente significante entre o percentual de células imunomarcadas nas displasias severas e moderadas, assim como entre os carcinomas de alto e baixo escore de malignidade (p > 0,05). Com isso, a avaliação pelo anticorpo anti-p63 (4A4) não mostrou qualidades como um biomarcador de risco para o desenvolvimento do câncer de lábio. Sendo assim, uma reavaliação pode ser conduzida na hipótese da produção de anticorpos para os seis diferentes isotipos da p63, pois isoladamente podem apresentar valor preditivo, principalmente as isoformas Np63. / Salvador

DIAS, Lucas Pinheiro. Purificação e caracterização bioquímica de um inibidor de tripsina de sementes de Cassia leiandra Benth. e avaliação de sua atividade inseticida contra Aedes aegypti (Diptera: Culicidae). 2016. 81 f. Tese (Doutorado em Bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Weslayne Nunes de Sales (weslaynesales@ufc.br) on 2017-03-29T16:22:03Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_lpdias.pdf: 1964581 bytes, checksum: 311be97d5f40d2773e56367b158412b4 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-03-29T17:07:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_lpdias.pdf: 1964581 bytes, checksum: 311be97d5f40d2773e56367b158412b4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-29T17:07:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_lpdias.pdf: 1964581 bytes, checksum: 311be97d5f40d2773e56367b158412b4 (MD5) Previous issue date: 2016 / The World Health Organization (WHO) considers dengue virus infection one of the most important public health problems. Aedes aegypti (Diptera: Culicidae), a blood-sucking insect that lives and cohabits with the human population in tropical and subtropical areas, is the principal vector responsible for dengue virus transmission [3]. Ae. aegypti is also the main transmitter of Chikungunya and Zika viruses. To eliminate dengue mosquitoes, chemical control with insecticides is widely used. However, prolonged and indiscriminate application of these compounds has favored the appearance of resistant insects. This issue has driven the search for natural compounds with insecticidal activity, and plants are potential sources of such constituents. This present study reports the purification and biochemical characterization of a trypsin inhibitor (ClTI) from the seeds of Cassia leiandra Benth. (Fabaceae, Caesalpinioideae), a plant species native to the Amazon rainforest. In addition, the ClTI action on Ae. aegypti midgut proteases and its effect on the development and survival of this mosquito are assessed. ClTI was purified by DEAE-Cellulose and trypsin-Sepharose 4B chromatography, with a 15.5-fold purification and 2.4% yield. ClTI is composed of one polypeptide chain of 19,484 Da, as revealed by ESI mass spectrometry, is non-glycosylated, and comprises 35% β-sheets, 14% β-turns, and 50% disordered structures. ClTI is an uncompetitive inhibitor of bovine trypsin (IC50 of 33.81 x 10-8 M), with a Ki of 6.25 x 10-8 M, and has an amino acid sequence similar to other inhibitors of the Kunitz-type family. ClTI was stable over a broad range of pH (2.2–10.0) and temperature (30–70 C), but DTT incubation caused a partial loss of inhibitory activity. ClTI (4.65 x 10-6 M) promoted 50% activity reduction of Ae. aegypti midgut proteases, showed a dose-dependent acute toxicity on Ae. aegypti 3rd instar larvae, with an LC50 of 2.28 x 10-2 M, and after ten days of exposure, caused a 24-h delay of larval development and 44% mortality. Our results are an important contribution to a better understanding of the insecticidal activity of protease inhibitors, suggesting that ClTI has biotechnological potential as an alternative strategy to control this multiple disease vector, which may be used alone or in combination with other insecticidal compounds to produce enhanced toxicity. / A Organização Mundial da Saúde considera a dengue como um dos mais importantes problemas de saúde pública. Aedes aegypti (Diptera: Culicidae), um inseto sugador de sangue que se desenvolve em áreas tropicais e subtropicais, é o principal vetor do vírus da dengue, além de ser um importante transmissor das viroses Zica e Chikungunya. O controle químico através de inseticidas é bastante usado no combate do Ae. aegypti, mas sua aplicação indiscriminada e prolongada tem favorecido o surgimento de insetos resistentes. Isso tem motivado a busca por compostos naturais com atividade inseticida e as plantas têm se sobressaído como potenciais fontes de tais substâncias. Este estudo teve como objetivo a purificação e caracterização bioquímica de um inibidor de tripsina, denominado ClTI, de sementes de Cassia leiandra Benth. (Fabaceae, Caesalpinoideae), uma espécie vegetal nativa da Amazônia. A ação do ClTI sobre proteases intestinais do Ae. aegypti e seus efeitos no desenvolvimento e sobrevivência desse inseto foram também investigados. O ClTI foi purificado por cromatografias em DEAE-Celulose e tripsina-Sepharose 4B, com índice de purificação de 15,5 vezes e rendimento proteico de 2,4%. O inibidor puro é composto de uma cadeia polipeptídica de 19.484 Da, como mostrado por espectrometria de massas com ionização por “electrospray” (ESI), não glicosilado e apresenta estrutura secundária constituída por 35% de folhas-β, 14% de β-voltas e 50% de estruturas desordenadas. O ClTI é um inibidor incompetitivo de tripsina bovina (CI50 de 33,81 x 10-8 M), com Ki de 6,25 x 10-8 M e sequência de aminoácidos similar às de outros inibidores da família Kunitz. ClTI se mostrou estável em ampla faixa de pH (2,2-10,0) e temperatura (30-70 C), mas a incubação com ditiotreitol causou perda parcial de sua atividade inibitória. In vitro, ClTI (4,65 x 10-6 M) promoveu redução de 50% na atividade das proteases intestinais de Ae. aegypti. In vivo, esse inibidor apresentou toxicidade aguda dose-dependente para larvas de 3 estágio de Ae. aegypti, com uma CL50 de 2,28 x 10-2 M. O tratamento crônico de Ae. aegypti com ClTI (1,54 x 10-5 M concentração final) não interferiu na eclosão dos ovos, mas retardou o desenvolvimento larval do inseto em 24 h e causou mortalidade de 44%. Os resultados obtidos contribuem para um melhor entendimento da atividade inseticida dos inibidores de proteases e sugerem que ClTI tem potencial biotecnológico para ser usado como estratégia alternativa no controle desse vetor de várias doenças, o qual pode ser usado sozinho ou em combinação com outros compostos inseticidas na perspectiva de potencializar a toxicidade

VIDAL, Juliana Maria Aderaldo. Utilização de resíduos da filetagem de tilápia-do-nilo(Oreochromis niloticus) na obtenção de concentrado protéico de peixe:caracterização físico-química e aceitação sensorial. 2007. 108 f. : Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Tecnologia de Alimentos, Fortaleza-CE, 2007 / Submitted by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-06-13T13:09:20Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_jmavidal.pdf: 2042354 bytes, checksum: 73ba06640339358107dc98cda64b5df6 (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-06-13T13:09:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_jmavidal.pdf: 2042354 bytes, checksum: 73ba06640339358107dc98cda64b5df6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T13:09:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_jmavidal.pdf: 2042354 bytes, checksum: 73ba06640339358107dc98cda64b5df6 (MD5) Previous issue date: 2007 / This study aimed to use mechanically separated mince (MSM) from the residues left after filleting Nile tilapia (Oreochromis niloticus Linnaeus, 1757) to obtain a protein concentrate for human consumption and to assess its proximal composition and sensory characteristics. Three laboratory scale methods of obtaining fish protein concentrate (FPC) from MSM were studied. FPC evaluation included process yield, protein, fat and moisture contents as well as water activity. Based on these preliminary results a test procedure was established to obtain FPC. Yield, proximal composition, water activity sensory evaluation and microbial counts were analyzed on the dry FPC. Sensory evaluation used affective tests and hedonic scales relative to the ideal value for appearance, color and aroma of the product and was accomplished by 48 untrained tasters Five levels of FPC (0%, 15%, 22.5%, 30% and 37.5%, according to the recommended daily intake (RDI) of protein for young adults) were then included in a food formulation based on rice. These samples were identified, respectively, as: A, B, C, D and E were evaluated for appearance, color, aroma, taste and global acceptance by 80 untrained tasters using structured hedonic scales of nine points, following a balanced complete block design. The intention of consumption by the tasters was also assessed using a nine point scale. Data from chemical composition of MSM and FPC were submitted to descriptive analysis. Sensory data were analyzed by graphic design, descriptive analysis, analysis of variance (ANOVA) and Tukey test, using the SPSS statistical program v.13.0 FPC has a yield of 18.34%, and contained 1.38% moisture, 62.39% protein, 32.63% fat, 2.26% ash and had 0.16 Aw. The increase in protein percentage in FPC related to MSM was approximately four times. Microbial counts indicated that the experimental FPC is safe according to Brazilian microbiological standards and therefore it is fit for human consumption. Sensory evaluation of dry FPC powder expressed as acceptance by tasters frequency was 60.4% for color, 51.1% for general appearance and 41.7% for aroma. Description of flavor with terms like "typical of fish" was reported by only 44.2% of the tasters, suggesting the need for a more efficient deodorizing process and showing a balance in relation to the group of tasters that did not notice the characteristic smell. With regard to the perceived intensity of odor, 68.8% of the tasters considered the product ideal, which suggests an odor highly acceptable. Sensory evaluation of CPP included in the rice base showed the sample with 0% of CPP significantly (p 0.01) different from all other samples added of CPP for all attributes studied. Sample B (15% added FCP) however showed the best acceptability among the samples containing FPC. Thus, FPC obtained from MSM from Nile tilapia is a raw material acceptable to use as a food ingredient in various food bases as showed in this study with rice which is considered a neutral food base. Moreover, it is possible to add value to a residual food material offering an alternative source of protein at a relatively low cost. / Este estudo teve como objetivo o aproveitamento da carne mecanicamente separada (CMS) de resíduos da filetagem de tilápia-do-Nilo (Oreochromis niloticus) na obtenção de um concentrado protéico para o consumo humano, caracterizando-o quanto aos parâmetros físico-químicos e sensoriais. Foram estudados, em escala de laboratório, três métodos de obtenção de concentrado protéico de peixe (CPP) a partir da CMS. Os seguintes parâmetros foram avaliados: rendimento, percentual de proteína, gordura, umidade e atividade de água (Aw). Baseando-se nos resultados obtidos, elaborou-se um procedimento analítico que foi utilizado na obtenção do CPP em escala piloto. Para a caracterização do CPP realizaram-se as análises de rendimento, composição centesimal, Aw, análises microbiológicas e sensoriais. Nos testes sensoriais do CPP, 48 provadores não treinados avaliaram as características de aparência, cor e aroma usando os testes afetivos de escala hedônica e escala relativa ao ideal. Posteriormente, testou-se cinco níveis do CPP usando o arroz como alimento veículo. Os níveis de adição 0% (controle), 15%, 22,5%, 30% e 37,5% foram calculados a partir da Ingestão Diária Recomendada (IDR) de proteínas para adultos jovens. As cinco amostras de CPP adicionado em arroz identificadas, respectivamente, como: A, B, C, D e E foram avaliadas por 80 provadores não treinados com relação à aparência, cor, aroma, sabor e aceitação global através da escala hedônica estruturada de nove pontos, seguindo um delineamento de blocos completos balanceados. Também avaliou-se a intenção de consumo dos provadores usando uma escala de ação de nove pontos. Os dados de composição química da CMS e do CPP foram submetidos à análise descritiva. Os dados sensoriais foram analisados através de representação gráfica, análise descritiva, análise de variância (ANOVA) e teste de Tukey, utilizando-se o programa estatístico SPSS v.13.0. O CPP obtido em escala piloto apresentou um rendimento de 18,34%, teor de umidade de 1,38%, proteína 62,39%, gordura 32,63% e cinza 2,26% e Aw 0,16. O acréscimo do percentual de proteína do CPP em relação ao da matéria-prima original foi aproximadamente quatro vezes. A análise microbiológica revelou que o CPP atendeu aos padrões microbiológicos da legislação e, portanto, encontrava-se apto para o consumo humano. Na avaliação sensorial do CPP, a freqüência de aceitação dos provadores foi de 60,4% para cor, 51,1% para o aspecto geral e 41,7% para o aroma. A descrição do aroma com termos como “característico de pescado” foi relatada por 44,2% dos provadores, sugerindo a necessidade de uma desodorização parcial do material, e indicando um equilíbrio em relação ao grupo dos provadores que não perceberam o odor característico. Com relação à intensidade do odor percebido, 68,8% dos provadores consideraram ideal, o que revela um odor altamente aceitável. Os resultados sensoriais da adição do CPP em arroz mostraram que a amostra com 0% de CPP diferiu significativamente (p 0,001) das demais amostras adicionadas de CPP para todos os atributos estudados e, dentre as amostras adicionadas de CPP, a amostra B (15%) foi a que apresentou melhor aceitabilidade. Assim, o CPP obtido a partir da CMS de resíduos de filetagem de tilápia-do-Nilo é uma matéria-prima viável de utilização como ingrediente alimentício em diferentes bases alimentares, haja vista sua aceitação satisfatória em arroz, considerada uma base neutra. Além disso, esta pesquisa agregou valor a um material de descarte, gerando possibilidades de oferta de uma fonte protéica alternativa, de custo relativamente baixo.