INTRODUÇÃO: O transplante pulmonar é terapia reconhecida de tratamento de doenças terminais pulmonares. Os pulmões, entretanto, são muito susceptíveis às transformações hormonais e hidroeletrolíticas ocorridas no doador após a morte encefálica. As baixas taxas de aproveitamento dos pulmões alavancam pesquisas e meios de utilizar pulmões considerados nãoideais. Um desses modelos é o recondicionamento pulmonar ex-vivo concebido por Steen, no qual se utiliza uma solução hiperosmolar (Steen Solution®) para avaliação e melhora dos pulmões doados. Consideramos que o desenvolvimento de uma solução de recondicionamento pulmonar produzida no Brasil seria conveniente aos serviços de transplante e aos pacientes. Foram comparadas a solução de recondicionamento Steen Solution® e uma solução de fabricação nacional em modelo de ex vivo de pulmões humanos não aceitos para transplante, através da avaliação da mecânica ventilatória, hemodinâmica, trocas gasosas e histologia. MÉTODOS: Foram utilizados 16 pulmões de doadores em morte encefálica, considerados inadequados para o transplante pulmonar. Os pulmões foram submetidos à captação habitual e acondicionados sob isquemia fria por 10 horas. Após este período, os pulmões foram designados, por sorteio, para reperfusão com a solução padrão (Steen solution®) ou a solução nacional por 1h em modelo ex vivo. A lesão pulmonar foi estudada através de parâmetros gasométricos, resistência pulmonar e complacência pulmonar. Foram medidos os pesos em três tempos e relação peso úmido/peso seco após a reperfusão para avaliação de edema. A partir de biópsias seriadas era calculado um score de lesão tecidual e grau de apoptose. RESULTADOS: A capacidade de oxigenação foi de 498,00 ± 37,53 mmHg no grupo STEEN e 521,00 ± 55,43 mmHg no grupo SRNac (p = 0,348). A capacidade relativa de oxigenação calculada ao final do recondicionamento foi 501,37 ± 207,77 no grupo STEEN e 470,30 ± 232,41 no grupo SRNac (p=0,782). Os pesos dos pulmões nos três momentos de avaliação foram: início da isquemia: STEEN = 1.026 ± 451 g, SRNac = 745 ± 282 g (p = 0,180); fim da isquemia: STEEN = 998 ± 391 g, SRNac = 738 ± 316 g (p = 0,184); e fim da reperfusão: STEEN = 1.097 ± 526 g, SRNac = 743 ± 248 g (p = 0,163). A relação peso úmido/peso seco foi 3,63 ± 1,26 no grupo SRNac e 2,06 ± 0,28 no grupo STEEN (p = 0,009). A resistência vascular pulmonar foi 787,99 ± 367,23 dina.s.cm-5 no grupo STEEN e 1.026,81 ± 1.112,53 dina.s.cm-5 no grupo SRNac (p = 0,575). A complacência pulmonar média foi 46,75 ± 20,99 mL/cmH2O no grupo STEEN e 49,74 ± 26,11 cmH2O no grupo SRNac (p = 0,809). O Escore de Lesão Pulmonar foi: STEEN = 4,38 ± 1,51 e SRNac = 4,50 ± 1,77 (p = 0,881). O número de células apoptóticas foi: STEEN = 2,4 ± 2,0 cel/mm2 e SRNac = 4,8 ± 6,9 cel/mm2 (p = 0,361). CONCLUSÕES: Os pulmões reperfundidos com a solução de recondicionamento de fabricação nacional apresentaram características morfológicas e funcionais similares aos que foram reperfundidos com a solução STEEN®, apesar do maior edema encontrado no grupo da solução nacional / INTRODUCTION: Lung transplantation is routine treatment of end-stage lung diseases. The lungs, however, are very susceptible to hormonal and electrolyte changes occurred in the donor after brain death. The low recovery rates of the lungs leverage researches and ways to use lungs considered non-ideal. One such model is the lung ex vivo reconditioning designed by Steen, in which using a hyperosmolar solution (Steen Solution®) for evaluation and improvement of donor lungs. We believe that the development of a pulmonary reconditioning solution produced in Brazil would be convenient to transplantation service and patients. Were compared the standard Steen Solution® and a national manufacturing solution in ex vivo model with human lungs not accepted for transplant, through the evaluation of respiratory mechanics, hemodynamics, gas exchange and histology. METHODS: 16 brain-dead donors lungs, considered unsuitable for lung transplantation, were used. The lungs were harvest as usual, packed and stored in cold ischemia for 10 hours. After this period, the lungs were appointed by randomization to reperfusion with the standard solution (Steen Solution®) or national solution for 1 h in ex vivo model. Lung injury was accessed by blood gas parameters, lung resistance and lung compliance. The weights were measured in three times and the after reperfusion wet weight / dry weight ratio for evaluation of edema. The degree of apoptosis and tissue injury score was calculated from serial biopsies. RESULTS: The oxygenation capacity was 498.00 ± 37.53mmHg in STEEN group and 521.00 ± 55.43mmHg in SRNac group (p = 0.348). The relative oxygenation capacity calculated at the end of the reconditioning was 501.37 ± 207.77 in the STEEN group and 470.30 ± 232.41 in the SRNac group (p = 0.782). The weights of lungs in the three stages of evaluation were: onset of ischemia: STEEN = 1,026 ± 451g, SRNac = 745 ± 282g (p = 0.180); end of ischemia: STEEN = 998 ± 391g, SRNac = 738 ± 316g (p = 0.184); and the end of reperfusion: STEEN = 1,097 ± 526g, SRNac = 743 ± 248g (p = 0.163). The wet weight / dry weight ratio was 3.63 ± 1.26 in SRNac group and 2.06 ± 0.28 in STEEN group (p = 0.009). Pulmonary vascular resistance was 787.99 ± 367.23dina.s.cm-5 in STEEN group and 1026.81 ± 1112.53dina.s.cm-5 in SRNac group (p = 0.575). The Lung Injury Score was: STEEN = 4.38 ± 1.51 and SRNac = 4.50 ± 1.77 (p = 0.881). The number of apoptotic cells was: STEEN = 2.4 ± 2.0 cells / mm 2 and SRNac = 4.8 ± 6.9 cells / mm2 (p = 0.361). CONCLUSIONS: The lungs reperfused with national manufacturing reconditioning solution presented morphological and functional characteristics similar to those reperfused with STEEN® solution despite the greater edema found in the group of national solution

INTRODUÇÃO: Em contraste aos bons resultados do transplante pulmonar no tratamento de pacientes com doença supurativa pulmonar avançada, a colonização por Burkholderia cepacia complex (BCC), sobretudo o genomovar III, vem sendo relacionada a pior prognóstico e, por conseguinte, uma contraindicação ao procedimento em alguns centros transplantadores. O objetivo deste estudo foi avaliar o impacto em sobrevida após o transplante pulmonar de pacientes com doença pulmonar supurativa colonizados por BCC, além de determinar a incidência da colonização e suas variantes genômicas no Instituto do Coração/HC-FMUSP. MÉTODOS: Foram analisados prospectivamente dados clínicos e amostras de culturas do trato respiratório dos pacientes que realizaram transplante pulmonar por doença supurativa entre janeiro de 2008 e dezembro de 2013. A tipagem molecular para estudar os diferentes genótipos da BCC foi realizada a partir de janeiro de 2012 por método de sequenciamento genético e análise do gene RecA. RESULTADOS: Foram realizados 132 transplantes pulmonares, 62 pacientes com doença pulmonar supurativa, sendo 28 em pacientes com Bronquiectasias e 34 com Fibrose Cística. Observou-se a colonização por BCC em 16 pacientes; em 7 amostras identificados os seguintes subtipos: três cepas B. metallica e quatro cepas B. cenocepacia. A incidência de BCC nos pacientes com Fibrose Cística foi de 38,2%, enquanto nos pacientes com Bronquiectasias foi 10,7%. Dentre os 16 pacientes colonizados por BCC, ocorreram 2 óbitos, nenhum deles relacionados à infecção pelo agente. Um óbito foi atribuído a sepse por Acinetobacter baumannii resistente a múltiplas drogas e o outro, a disfunção orgânica múltipla. O estudo desenvolvido demostrou que a colonização por BCC não gerou impacto em mortalidade nos pacientes após o transplante pulmonar, mesmo quando colonizados pelo subtipo B. cenocepacia / INTRODUCTION: Notwithstanding the good results of lung transplantation for treatment of patients with advanced lung suppurative disease, colonization by Burkholderia cepacia complex (BCC), especially genomovar III has been related to a worse prognosis in these patients and therefore contraindication to the procedure certain centers. The aim of this study was to evaluate the impact on survival after lung transplantation in patients with suppurative lung disease colonized with BCC to determine the incidence of colonization and its genomic variants at the Heart Institute / HC -FMUSP. METHODS: We prospectively analyzed clinical data and respiratory tract samples of suppurative lung disease patients that performed lung transplantation from January-2008 through November-2013. From January-2012 through December-2013, we also subtyed the different B. cepacia genotypes by DNA sequencing primers of the gene RecA. RESULTS: 132 lung transplantation were performed, 62 patients with suppurative lung disease, 28 patients with Bronchiectasis and 34 with Cystic Fibrosis. BCC was observed in 16 patients; in 7 samples we identified the following subtypes: three strains B. metallica and four strains B. cenocepacia. The incidence of BCC in patients with Cystic Fibrosis was 38.2% while in patients with Bronchiectasis was only 10.7%. Among the 16 patients colonized with BCC, there were two deaths, none of them related to infection by the agent. One death due to sepsis Acinetobacter baumannii resistant to multiple drugs and the other, multiple organ dysfunction. The study demonstrated that colonization by BCC developed no impact on the mortality rate of patients after lung transplantation, even when colonized by the subtype B. cenocepacia

Introdução: O transplante de pulmão é uma opção terapêutica bem estabelecida para o tratamento de pneumopatias em estágio final. Uma complicação frequente relacionada aos transplantes é a lesão de isquemia e reperfusão (IR), estando o estresse oxidativo envolvido no processo. O azul de metileno (AM) é um inibidor da produção de espécies reativas de oxigênio, atuando como receptor alternativo de elétrons da xantina oxidase. Objetivo: Avaliar a eficácia do AM como inibidor da lesão de IR em transplante pulmonar de ratos. Métodos: Quarenta ratos fêmea Sprague Dawley (300g - 350g) foram divididas em quatro grupos de dez animais. Os animais foram submetidos a transplante pulmonar unilateral esquerdo. Os enxertos foram expostos a 3 ou 6 horas de isquemia fria seguido de 2 horas de reperfusão. Nos animais do grupo controle, 2 mL de solução salina foram injetados na cavidade peritoneal e, nos animais do grupo experimento, 2 mL de AM a 1% foram injetados da mesma forma. Resultados: A dosagem da PaO2 foi significativamente superior no grupo AM entre os animais submetidos a isquemia de 3 horas (AM = 150,2 ± 50,1 vs Salina = 102,6 ± 40,4 mmHg; p = 0,028), assim como a dosagem do óxido nítrico exalado foi significativamente inferior no mesmo grupo (AM = 3,2 ± 2,0 vs Salina = 5,2 ± 2,3 ppb; p = 0,05). O infiltrado neutrofílico foi menor nos animais do grupo AM submetidos a 6 horas de isquemia no lavado broncoalveolar (LBA); (AM = 11,8 ± 7,4 vs Salina = 30 ± 19,2 X 104/mL; p = 0,023). A análise histopatológica mostrou menor formação de edema perivascular no grupo AM submetido a 6 horas de isquemia (AM = 35,2 ± 7,65 vs Salina = 44,8 ± 6,39%; p = 0,001) e perialveolar no grupo AM submetido a 3 horas de isquemia (AM = 18,4 ± 14,2 vs Salina = 28,1 ± 18,2%; p = 0,041) e menor infiltrado neutrofílico perialveolar na comparação entre os grupos submetidos a 6 horas de isquemia (AM = 2,8 ± 2,2 vs Salina = 5,1 ± 3,1%; p = 0,046). Os níveis de IL-6 no LBA foram inferiores no grupo AM em ambos os tempos de isquemia (3 h - AM = 122,4 ± 24,9 vs Salina = 175.6 ± 50.3 pg/mL; p = 0.008; 6 h - AM = 142 ± 38,7 vs Salina = 351,3 ± 80,7 pg/mL; p = 0,002); Os níveis de TNF-? foram menores no grupo AM submetido a 6 horas de isquemia (AM = 189,5 ± 93,3 vs Salina = 342,9 ± 130,4 pg/mL, p = 0.007). A dosagem do ácido úrico foi significativamente maior no grupo AM em ambos os tempos de isquemia (3 h - AM = 4,7 ± 0,9 vs Salina = 2,7 ± 0,7 mg/dL; p = 0,003; 6 h - AM = 5,3 ± 2,4 vs Salina = 2,3 ± 0,9 mg/dL; p < 0,001). Não houve diferença entre os grupos em relação a apoptose. Conclusão: O AM demonstrou ser uma droga eficaz na prevenção da lesão de isquemia e reperfusão no transplante pulmonar de ratos / Introduction: Lung transplantation (LTx) has become an established therapeutic option for end-stage pulmonary disease. Ischemia reperfusion injury (IR) is a major cause of organ dysfunction after LTx and oxidative stress is involved in this process. Methylene blue (MB) is an inhibitor of reactive oxygen species production. Objective:To investigate the effects of MB on the IR in a rodent model of LTx. Methods: Forty female Sprague Dawley rats (300g - 350g) were divided into four groups (n = 10) according to treatment (saline solution or MB) and graft cold ischemic time (3 or 6 hours). Animals underwent a left-sided unilateral lung transplantation. Recipients received 2mL of intraperitoneal saline or MB 1%. After 2 hours of reperfusion, animals were killed and blood gas, exhaled nitric oxide, cell count and cytokines leves in bronchoalveolar lavage (BAL) as well as histopathology, serum uric acid and apoptosis were evaluated. Results: PaO2 was significantly higher in MB group undergoing 3 hour ischemic time (MB =150.2 ± 50.1 vs Saline = 102.6 ± 40.4 mmHg; p = 0.028). Exhaled nitric oxide values showed differences only between groups with 3 hour of ischemia (MB = 3.2 ± 2.0 vs Saline = 5.2 ± 2.3 ppb; p = 0.05). Neutrophils in BAL were different between groups subjected to 6 hours of ischemia (MB = 11.8 ± 7.4 vs Saline = 30.0 ± 19.2 x 104/mL; p = 0.023). IL-6 levels in BAL were lower in MB group in both ischemic time (3 h - MB = 122.4 ± 24.9 vs Saline = 175.6 ± 50.3 pg/mL; p = 0.008; 6 h - MB = 142 ± 38.7 vs Saline = 351.3 ± 80.7 pg/mL; p = 0.002); TNF-? levels were also lower in MB group undergoing 6 hour of ischemia (MB = 189.5 ± 93.3 vs Saline = 342.9 ± 130.4 pg/mL; p = 0.007). The number of neutrophils in lung parenchyma were reduced in MB group (6 h - MB = 2.8 ± 2.2 vs Saline = 5.1 ± 3.1%; p = 0.046) and also decreased edema in perivascular (6 h - MB = 35.2 ± 7.65 vs Saline = 44.8 ± 6.39%, p = 0.001) and perialveolar tissues (3 h - MB = 18.4 ± 14.2 vs Saline = 28.1 ± 18.2% p = 0,041) were observed. Uric acid levels were higher in MB group in both ischemic time (3 h - MB = 4.7 ± 0.9 vs Saline = 2.7 ± 0.7 mg/dL; p = 0.003; 6 h - MB = 5.3 ± 2.4 vs Saline = 2.3 ± 0.9 mg/dL; p < 0.001).There were no difference in the expression of apoptosis. Conclusion: MB was able to prevent ischemia-reperfusion injury in this lung transplantation model and represent a new option for further studies

O treinamento físico aeróbio crônico regular provoca importantes adaptações autonômicas e hemodinâmicas que influenciam o sistema cardiovascular. O presente trabalho teve como objetivo estudar os efeitos do treinamento físico aeróbio crônico, na citoarquitetura alveolar dos pulmões de ratos Wistar, sob os aspectos morfoquantitativo e funcional, bem como avaliar o efeito do treinamento na modulação da freqüência cardíaca (FC), da pressão arterial (PA), no perfil bioquímico (lactato, hemogasometria, glicemia e perfil lipídico: triglicérides, colesterol total, colesterol fracionado). Desta forma foram utilizados quinze ratos Wistar machos, com idade de 60 dias, que receberam ração própria para roedores e água sem restrição, e foram divididos em três grupos, sendo eles: Controle etário (CE, n=5), saudável sedentário (SS, n=5) e saudável treinado (ST, n=5). Após os registros de todos os parâmetros hemodinâmicos supracitados, os animais foram eutanasiados e fixados por perfusão com solução de formoldeído (4%), sendo o mesmo fixador instilado pela traquéia e perfundido via tronco pulmonar. Métodos estereológicos foram empregados para estimar o número total de aberturas alveolares pulmonares, bem como o volume do pulmão (Princípio de Cavalieri). A pressão arterial sistólica (PAS) foi 140,87 mmHg para o CE, 146,70 mmHg para o SS e 149,53 mmHg para o ST (p = 0,137) A pressão arterial diastólica (PAD) foi 115,83 mmHg para o CE, 107,00 mmHg para o SS e 105,39 mmHg para o ST (p = 0,0004). A pressão arterial média (PAM) foi 128,93 mmHg para o CE, 125,22 mmHg para o SS e 125,34 mmHg para o ST (p = 0,332). A FC foi 388,40 bpm para o CE, 379,83 bmp para o SS e 370,85 bpm para o ST (p = 0,381). O volume do pulmão foi 1,05 cm³ para o CE, 1,24 cm³ para o SS e 0,95 cm³ para o ST (p = 0,484). O número de aberturas alveolares pulmonares foi 21x106 para o CE, 25x106 para o SS e 38x106 para o ST (p = 0,02). Os resultados desse estudo sugerem que o treinamento físico aeróbio crônico em ratos promove um melhor estado hemodinâmico e um aumento no número de aberturas alveolares do pulmão dos animais exercitados. / The cardiovascular system is subject to important autonomic and haemodynamic adaptation by virtue of regular physical training. The aim of this study was to describe the effects of a treadmill physical training on the alveolar cytoarchitecture of the rat\'s lung from a morphoquantitative and functional point of view. Additional aims were to quantify the heart rate (HR), arterial pressure (AP), lactate, arterial blood gases, glucose, triglycerides, total and fractional cholesterol. For this purpose fifteen 60-day-old male Wistar rats were used. Animals were divided into three groups: age control (CE, n=5), sedentary (SS, n=5) and trained rats (ST, n=5). After recording the haemodynamic parameters, the animals were euthanised and perfusion-fixed with a 4 % formaldehyde solution, which was also intratracheally instillated. Design-based stereological methods were applied for estimating the total number of alveolar openings as well as the lung volume using Cavalieri\'s principle. The systolic arterial pressure (SAP) was 140.87 mmHg for the CE, 146.7 mmHg for the SS and 149.53 mmHg for the ST group (p=0.137). The diastolic arterial pressure (DAP) was 115.83 mmHg for the CE, 107 mmHg for the SS and 105.39 mmHg for the ST group (p=0.0004). The mean arterial pressure (MAP) was 128.93 mmHg for the CE, 125.22 mmHg for the SS and 125.34 mmHg for the ST group (p=0.332). HR was 388.4 bpm for the CE, 379.83 bmp for the SS and 370.85 bpm for the ST group (p=0.381). The lung volume was 1.05 cm³ for the CE, 1.24 cm³ for the SS and 0.95 cm³ for the ST group (p=0.484). The total number of alveolar openings alveolar was 21x106 for the CE, 25x106 for the SS and 38x106 for the ST group (p=0.02). The main findings of this research suggest that low-intensity treadmill physical training improves the haemodynamic parameters and increases the total number of alveolar openings of trained rats.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_eduarda_schultze.pdf: 1903452 bytes, checksum: 1fd6d0e0478c9c31687ae8d7882532ea (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / Retinoid derivatives and analogs have been widely studied as antitumor agents due to their effects on cell proliferation and differentiation. Tretinoin (TT), also known as retinoic acid is a retinoid derivative that has been used as an adjuvant in the treatment of acute promyelocytic leukemia with excellent rates of remission. This compound has antiproliferative activity in various tumor types. However, non small cell lung cancer in general exhibit strong resistance to the effects of TT, which may be related to the deficiency in the cellular up-take of TT in that cell type. A strategy to enhance the antiproliferative activity of TT is to increase the cellular internalization of the compound through carriers such as liposomes or other vesicles or nanospheres or nanocapsules. Here we evaluated TT lipid-core nanocapsules (TT-LCNC) for their power to inhibit growth, induce apoptosis and interfere with the cell cycle of lung adenocarcinoma, A549 cell line, which is resistant to treatment with TT. The results showed that TT-LCNC was able to overcome the cellular resistance to treatment with TT, reducing cell viability and inducing apoptosis, upregulation of P21 and cell cycle arrest in G1 phase. / Derivados e análogos retinóides têm sido largamente estudados como agentes antitumorais devido a seus efeitos sobre a proliferação e diferenciação celular. Tretinoína (TT), também conhecida como ácido retinóico é um derivado retinóide que tem sido usado como adjuvante no tratamento de leucemia promielocítica aguda com excelentes índices de remissão da doença. Este composto exerce atividade antiproliferativa em diversos tipos de tumores. Entretanto, células de adenocarcinoma de pulmão humano em geral exibem uma forte resistência aos efeitos da tretinoína, a qual pode estar relacionada com a deficiência na internalização celular de tretinoína nesse tipo de célula. Uma estratégia para aumentar a atividade antiproliferativa de tretinoína é aumentar a captação celular do composto através de carreadores como lipossomas ou outras vesículas como nanocápsulas ou nanoesferas. Neste trabalho nanocápsulas de núcleo lipídico contendo tretinoína (TT-LCNC) foram avaliadas quanto ao seu potencial de inibir o crescimento, induzir a apoptose e interferir com o ciclo celular de células de adenocarcinoma de pulmão, linhagem A549, resistentes ao tratamento com TT livre. Os resultados demonstraram que TT-LCNC foi capaz de superar a resistência celular ao tratamento com TT, reduzindo a viabilidade celular e induzindo apoptose, superexpressão de P21 e parada do ciclo celular em G1.

Diphenyl ditelluride (PhTe)2 is an organic tellurium compound widely used as an intermediate in organic synthesis reactions and in the industry. Several studies have shown that this compound causes various toxic effects in different tissues. Particularly notable are teratogenic, genotoxic and neurotoxic effects. Although the mechanisms involved in cytotoxicity mediated by the compound are not fully understood, its pro-oxidant activity is directly related to its toxicology. Inhibition of sulfhydryl enzyme and antioxidant, thiol depletion, and lipid peroxidation are biochemical changes found in tissues such as blood, brain, liver and kidney of animals exposed to the compound. On the other hand, there are few histopathological studies showing the effects of exposure to (PhTe)2 in specific organs. Thus, the present study aimed to carry out the anatomopathological evaluation of the brain, kidney, liver and lung of mice exposed subcutaneously acutely (1 dose of 250 μmol/kg) and subchronically (doses 10 and 50 μmol/kg for 7 and 14 days) to the compound. Histological analysis showed that the hepatocytes of animals exposed subchronically to both doses of the compound developed extensive vacuolization of the cytoplasm or hydropic degeneration and hyperchromatic nuclei. Subchronic exposure to 50μmol/kg has also induced nonspecific focal hepatitis and focal necrosis. Hepatic steatosis was observed in animals acutely exposed to the compound. In the kidney, acute and/or subchronic intoxication with (PhTe)2 caused vacuolar degeneration or hydropic degeneration, atrophy and hypertrophy of renal tubules, forming hyaline casts and acute tubular necrosis. Pulmonar edema and vascular congestion were found in the lungs of animals exposed to (PhTe)2 50μmol/kg. Histological analysis of brain tissue revealed that acute and subchronic exposure to (PhTe)2 induced neurodegenerative disorders (neuropil vacuolation, status spongiosus) in the hippocampus and thalamus. The presence of neuronal nuclear pyknosis, the loss of neuronal viability and neuronal death were observed particularly in the hippocampus. Additionally, through immunohistochemistry, we identified glial reaction and loss of pre-synaptic activity in the thalamus and cortex, corresponding to areas of spongiform change. Our findings suggest that exposure to (PhTe)2, subcutaneously causes severe morphological changes in liver, kidney, lung and brain. The data obtained will contribute significantly to increase the knowledge on the toxicology of the compound (PhTe)2, since this is the first work that evaluates the histology of tissues of various organs after intoxication with the compound. / O ditelureto de difenila (PhTe)2 é um composto orgânico de telúrio amplamente usado na indústria, como na produção industrial de borracha, aço e vidro, indústria de nanopartículas, painéis solares, semicondutores bem como intermediário em reações de síntese orgânica. Vários estudos têm demonstrado que esse composto causa diversos efeitos tóxicos em diferentes tecidos. Dentre esses, destacam-se os teratogênicos, os genotóxicos e os neurotóxicos. Embora os mecanismos de ação envolvidos na citotoxicidade mediada pelo composto não se encontrem totalmente esclarecidos, sua atividade pró-oxidante está diretamente ligada a sua toxicologia. Inibição de enzimas sulfidrílicas e antioxidantes, depleção de tióis e peroxidação lipídica são alterações bioquímicas encontradas em tecidos como sangue, cérebro, fígado e rim de animais expostos ao composto. Por outro lado, são raros na literatura estudos histopatológicos mostrando os efeitos da exposição ao (PhTe)2 em órgãos específicos. Assim, o presente estudo teve como objetivo realizar a avaliação anatomopatológica de cérebro, rim, fígado e pulmão de camundongos expostos, via subcutânea, de forma aguda (1 dose de 250 μmol/kg) e subcrônica (doses de 10 e 50 μmol/kg por 7 e 14 dias) ao composto. As análises histológicas revelaram que os hepatócitos dos animais expostos subcronicamente a ambas as doses do composto desenvolveram extensa vacuolização do citoplasma ou degeneração hidrópica e núcleos hipercromáticos. A exposição subcrônica a 50 μmol/kg também induziu hepatite focal e não específica, e necrose focal. Esteatose hepática foi verificada nos animais agudamente expostos ao composto. Em rim, a intoxicação aguda e subcrônica com (PhTe)2 provocou degeneração vacuolar ou degeneração hidrópica, atrofia e hipertrofia de túbulos renais, formação de moldes (casts) hialinos e necrose tubular aguda. Edema e congestão vascular foram encontrados nos pulmões dos animais expostos a 50 μmol/kg de (PhTe)2. A análise histológica do tecido cerebral revelou que a exposição aguda e subcrônica ao (PhTe)2 induziu alterações neurodegenerativas (vacuolização do neurópilo, status spongiosus) na região do tálamo e hipocampo. A presença de picnose nuclear de neurônios, a perda de viabilidade neuronal e foram particularmente observados no na camada granular do hipocampo. Adicionalmente, através de técnica imunoistoquímica, foram identificadas reação glial e perda de atividade pré-sináptica na região do tálamo e córtex, correspondentes às áreas de alteração espongiforme. Nossos achados sugerem que a exposição ao (PhTe)2, por via subcutânea, provoca severas alterações morfológicas em fígado, rim, pulmão e cérebro. Os dados obtidos contribuirão de forma significativa para aumentar o conhecimento sobre a toxicologia do composto (PhTe)2, uma vez que, este é o primeiro trabalho que avalia a histologia de tecidos de vários órgãos após a intoxicação com o composto.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-01-22T13:03:09Z No. of bitstreams: 1 schirleysantanamedeiros.pdf: 2068227 bytes, checksum: 845e9f62691a822685f4425cfe32abc4 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-01-25T18:51:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 schirleysantanamedeiros.pdf: 2068227 bytes, checksum: 845e9f62691a822685f4425cfe32abc4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-25T18:51:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 schirleysantanamedeiros.pdf: 2068227 bytes, checksum: 845e9f62691a822685f4425cfe32abc4 (MD5) Previous issue date: 2014-02-17 / A análise das taxas de mortalidade por câncer de pulmão, traqueia e brônquios segundo os efeitos do período e da coorte é relevante devido às mudanças de comportamento com relação ao tabagismo, cuja prevalência vem sofrendo alterações ao longo dos anos, segundo sexo e faixa etária. O objetivo do estudo foi analisar a tendência da mortalidade por câncer de pulmão, traqueia e brônquios no Estado de Minas Gerais, de 1980 a 2010 e comparar as taxas específicas de mortalidade e o comportamento das séries temporais, segundo subgrupo etário e sexo, conforme as coortes de nascimentos. Trata-se de um estudo ecológico de série temporal com a utilização de dados secundários de óbitos por câncer de pulmão, traqueia e brônquios composta por indivíduos acima de 30 anos de idade. Foram utilizados dados do Sistema de Informação sobre Mortalidade e do Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística. Foi realizada a correção dos sub-registros através da redistribuição dos óbitos por causas mal definidas. Os dados foram avaliados levando-se em consideração o período e a coorte de nascidos vivos, através dos subgrupos etários agrupados de cinco em cinco anos. As taxas de mortalidade pelas causas selecionadas foram ajustadas pela faixa etária, conforme a técnica de padronização pelo método direto, utilizando como população padrão a de Minas Gerais, do ano de 2010. O efeito do período apontou uma tendência significantemente crescente de mortalidade no sexo feminino e uma estabilidade no sexo masculino. A análise de coorte e faixa etária foi realizada por meio do indicador taxa específica de mortalidade e da razão das taxas, mostrada por meio de gráficos de tendências e tabelas. O efeito da coorte mostrou convergência de taxas entre os dois sexos, com um aumento maior das taxas no sexo feminino. As taxas de mortalidade em ambos os sexos aumentaram com a idade, porém esse efeito foi maior no sexo feminino que no masculino. A avaliação das taxas específicas de mortalidade, segundo faixa etária, mostrou redução das taxas de mortalidade no sexo masculino entre 30 a 54 anos. Entre as mulheres, houve um aumento das taxas específicas em todas as faixas etárias acima dos 35 anos de idade. Os resultados sugerem que o impacto das mudanças de comportamento tenha sido “negativo” para o sexo feminino. Além disso, o fato de neste estudo terem sido realizadas análises por coorte possibilitou evidenciar com mais clareza as diferentes fases da epidemia do tabaco pelos quais passam homens e mulheres de Minas Gerais. A variação nas taxas de mortalidade entre os sexos pode estar contribuindo para a diminuição do diferencial entre os sexos no Estado. Ressalta-se a necessidade de ampliação das ações de controle do tabagismo, levando em consideração as diferenças de comportamento entre os sexos, a fim de permitir a diminuição da prevalência do câncer de pulmão, traqueia e brônquios. As diferenças de tendências entre os sexos despertam a necessidade de melhor compreender outras questões relacionadas ao gênero, que possam influenciar as taxas de mortalidade. / Analysis of mortality rates for cancer of the lung, trachea, and bronchi according to period and cohort effects is relevant due to changes in behavior related to smoking, whose prevalence has been changing over the years, by sex and age group. The aim of the study was to analyze trends in mortality from lung, tracheal, and bronchial cancer in the State of Minas Gerais, from 1980 to 2010, and compare the specific mortality rates and time series behavior, by age and gender subgroup, according to birth cohorts. This is an ecological study of time series using secondary data on deaths from cancer of the lung, trachea, and bronchi, comprised of individuals over 30 years of age. Data from the Mortality Information System and the Brazilian Institute of Geography and Statistics were used. Correction for underreporting was performed by redistributing deaths from poorly-defined causes. Data were evaluated by taking into account the period and the cohort, across age subgroups in five-year segments. Mortality rates for the selected causes were adjusted by age group, according to the direct method standardization technique, using the population of Minas Gerais, from the year 2010, as the standard. The period effect indicated a significantly increasing mortality trend in females and stability in males. The cohort and age group analysis was performed by means of the specific mortality rate indicator and the ratio of the rates, depicted via trend charts and tables. The cohort effect showed a convergence of rates between the two sexes, with a greater increase in the rates for females. Mortality rates for both sexes increased with age, but this effect was greater for females than for males. The evaluation of specific mortality rates, by age group, showed a reduction in mortality rates in males between 30 and 54 years. Among women, there was an increase in the specific rates for all age groups above 35 years. The results suggest that the impact of the changes in behavior has been "negative" for females. Moreover, the fact that cohort analyses were performed in this study made it possible to show more clearly the different stages of the tobacco epidemic that men and women of Minas Gerais undergo. The variation in mortality rates between the sexes may be contributing to the reduction of gender-related differences in this state. We emphasize the need for further actions to control smoking, taking into account the differences in behavior between the sexes, in order to reduce the prevalence of lung, tracheal, and bronchial cancer. The differences in trends between the sexes raise the need to better understand other gender-related issues that may influence mortality rates.

O epitélio pulmonar é formado por uma grande diversidade celular, que incluí: células secretoras, ciliadas, basais e neuroendócrinas (NE). A distribuição balanceada destes tipos celulares é crucial para a função pulmonar e pode ser dramaticamente alterada em doenças como a asma. Neste trabalho, estudamos o papel de Notch no pulmão em desenvolvimento ao inativar condicionalmente Rbpjk ou Pofut1, componentes críticos da sinalização Notch. Pulmões mutantes apresentaram-se superpopulados por células ciliadas e NE, além da ausência de células de Clara. Nossos dados sugeriram que Notch suprime os programas de diferenciação de células ciliadas e NE para permitir a diferenciação de células de Clara, através de um mecanismo de inibição lateral. Identificamos também genes associados com a diferenciação de células secretoras e ciliadas através de microarrays. A heterogeneidade no padrão de expressão gênica sugeriu que a via de sinalização Notch estabelece múltiplos subtipos de células ciliadas e secretoras no epitélio pulmonar em desenvolvimento. / The airway epithelium comprises a diverse population of secretory, ciliated, basal and neuroendocrine cells (NE). The proper balance of these cell types is critical for normal lung function and can be altered dramatically in conditions, such as asthma. We studied the role of Notch in airway progenitor cell fate by conditionally inactivating Rbpjk or Pofut1, two critical Notch pathway components in mouse mutants. This resulted in airways overpopulated with ciliated and NE cells and absence of secretory Clara cells. We found that Notch suppresses the ciliated and the NE cell programs to allow secretory cell differentiation through a lateral inhibition mechanism. We also identified genes associated with the differentiation of secretory and ciliated cells through a microarray gene profiling experiment. The great heterogeneity of gene expression patterns suggested that Notch plays a role in establishing multiple subsets of secretory and ciliated cells in the developing lung.

As neoplasias induzidas pela forma oncogênica da KRAS são doenças muito comuns, para as quais não existem terapias efetivas. Uma inibição direta da KRAS falhou em ensaios clínicos e esforços intensos tem sido feitos para identificar alvos de KRAS importantes para a oncogênese. Uma via promissora regulada por KRAS, que tem sido pouco explora a é a via dos microRNAs (miRNAs). Nossa meta foi identificar miRNAs regulados pela KRAS em células pulmonares e pancreáticas, que possam contribuir para o fenótipo oncogênico. Para alcançar esta meta nós usamos duas abordagens: (1) Nós investigamos o miRNA 486-5p como um alvo de KRAS em câncer de pâncreas e de pulmão. A expressão deste miRNA havia sido correlacionada positivamente com a presença de mutações em KRAS em pacientes portadores de câncer de cólon; (2) Nós usamos uma plataforma de microarranjo para identificar miRNAs diferencialmente expressos entre células humanas primárias imortalizadas pulmonares ou pancreáticas e suas linhagens isogênicas transformadas por KRAS. Na primeira abordagem, conseguimos mostrar que a expressão do miRNA 486-5p está correlacionada ao status de KRAS em células primárias pulmonares, mas não em células primárias pancreáticas. Além disso, geramos células pulmonares tanto com ganho e perda de função de KRAS e demonstramos que KRAS regula a expressão do miRNA 486-5p. Também de terminamos uma correlação negativa entre a expressão de KRAS e a expressão do alvo do miRNA 486-5p FoxO1, um supressor tumoral. Para avaliar como o miRNA 486-5p afeta as propriedades oncogênicas induzidas por KRAS, nós transfectamos oligonucleotídeos inibitórios para o miRNA 486-5p em células pulmonares positivas para mutações em KRAS. A inibição da expressão do miRNA 486-5p levou a uma redução da clonogenicidade e viabilidade celulares. Esta redução não está associada a um aumento de morte celular, mas a uma redução da proliferação celular. Interessantemente, a transfecção de oligonucleotídeos mímicos do miRNA 486-5p em células pulmonares negativas para mutações em KRAS ou em células com perda de função de KRAS por RNAi levou a um aumento da proliferação e clonogenicidade. Estes dados indicam que o miRNA 486-5p, não só é um alvo de KRAS em câncer de pulmão, mas também age como um oncomiR contribuindo para a proliferação celular induzida por KRAS. Na nossa segunda abordagem, nós identificamos 17 miRNAs com expressão aumentada e 3 com expressão diminuída em células primárias pancreáticas expressando KRAS oncogênica. Destes, 9 miRNAs foram foram também identificados por metanálise de dados de microarranjo publicados comparando amostras tumorais pancreáticas com amostras não tumorais. Apesar do experimento de microarranjo com as linhagens primárias pulmonares não ter produzido resultados estatisticamente significativos após a correção por FDR, uma tendência à expressão diferencial foi observada para vários miRNAs e nós validamos por qPCR a expressão diferencial dos miRNAs 720 e 139-3p. Em conclusão, nós conseguimos identificar miRNAs regulados pela KRAS tanto em células pulmonares, quanto pancreáticas. Um melhor entendimento das suas funções biológicas, bem como dos alvos por eles regulados nestes contextos, pode revelar novas vias para a exploração terapêutica. / KRAS-induced lung cancer is a very common disease, for which there are currently no effective therapies. Direct targeting of KRAS has failed in clinical trials and intense efforts are underway to identify KRAS targets that play a crucial role in oncogenesis. One promising KRAS-regulated pathway that has so far been overlooked is the micro RNA (miRNA) pathway. Our goal was to identify miRNAs regulated by oncogenic KRAS in lung and pancreatic cells that could contribute to the oncogenic phenotype. In order to achieve this goal we used two different approaches: (1) We investigated miRNA 486-5p as a KRAS target in lung and pancreatic cancer. The expression of this miRNA had been correlated to the presence of KRAS mutations in colon cancer patients; (2) we used a microarray platform to identify differentially expressed miRNAs between immortalized human primary pulmonary or pancreatic epithelial cell lines and their isogenic K-Ras-transformed counterparts. In our first approach, we were able to show that mi486-5p expression correlates with KRAS status in lung primary cells, but not in pancreatic primary cells. Furthermore, we generated lung cancer cells with either gain-of-function or loss-of-function of KRAS and demonstrated that KRAS regulates miRNA 486-5p in these cells. We also found, in all lung cell models analyzed, a negative correlation between expression of KRAS and expression of miR-486-5p target FoxO1, a tumor suppressor. In order to evaluate how miR-486-5p affects KRAS-induced oncogenic properties, we transfected miR-486-5p inhibitor oligonucleotides into KRAS-positive lung cancer cell lines. Inhibition of miR-486-5p expression leads to reduced clonogenic growth and viability. This reduction is not associated with increased cell death, but with decreased cell proliferation. Interestingly, transfection of miR-486-5p double-stranded RNA mimic oligonucleotides in to KRAS negative lung cancer cell lines or into cells with loss-of-function of KRAS by RNAi leads to enhanced proliferation and clonogenicity. These results indicate, not only that miR-486-5p is a KRAS target in lung cancer, but also that miR-486-5p acts as an oncomiR contributing to KRAS-induced cell proliferation. In our second approach, we identified 17 upregulated microRNAs and 3 downregulated microRNAs in the primary pancreatic cell line expressing KRAS. Of these, 9 miRNAs were also identified by a metanalysis of published microarray datasets comparing pancreatic cancer patient samples to non-cancerous pancreatic tissues. Even though our array experiment in the primary pulmonary cells did not produce statistically significant results after FDR correction, differential expression trends were seen for many miRNAs and we validated miRNAs 720 and 139-3p as differentially expressed. In conclusion we were able to identify miRNAs regulated by KRAS both in lung and pancreatic cancer cells. Further understanding of their biological function, as well as the targets they regulate in these settings, could uncover novel pathways for therapy design.

Submitted by Adriana Martinez (amartinez@unoeste.br) on 2017-05-31T21:00:12Z No. of bitstreams: 1 Fernanda Freire Marin Soares.pdf: 704573 bytes, checksum: bf544d5550ee825719abaa7a01a5e94c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-31T21:00:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernanda Freire Marin Soares.pdf: 704573 bytes, checksum: bf544d5550ee825719abaa7a01a5e94c (MD5) Previous issue date: 2017-03-20 / Cadmium is a metal that is widely used in industry. Cadmium exposure may result in a variety of pulmonary diseases. No studies have evaluated tracheal damage or even whether cadmium intake can damage the respiratory tract. The aim of this study was to investigate the histopathological changes caused by cadmium poisoning via intake into the respiratory tract and the possible effects of water pH in the genesis of these changes. Ninety male Wistar rats were used and were divided into six groups (n=15): Group A received 400 mg/l cadmium chloride (CdCl2) in the drinking water at a pH of 7.0; group B received CdCl2 (400 mg/l) in the drinking water at a pH of 5.0; group C received CdCl2 (400 mg/l) in the drinking water at a pH of 8.0; group D received water at a pH of 5.0; group E received water at a pH of 8.0; and group F received water at a pH of 7.0. Animals were euthanized after 6 months. Samples of the lung and trachea were removed. The histopathological analysis was performed to evaluate the presence or not of the following parameters: 1. Trachea: inflammatory infiltrate and type of inflammatory cell; tissue congestion; muscle hypertrophy; non-neoplastic lesions of the mucosa; dysplastic lesions; benign and malignant neoplastic lesions; mucus type (acid or basic); and the number of goblet cells; 2. Lung: interstitial inflammatory infiltrate, inflammatory cell type and location; tissue congestion; interstitial fibrosis; emphysema; necrosis of the parenchyma; dysplastic lesions and the presence of benign and malignant neoplastic lesions. Animals exposed to cadmium had a mean of goblet cells in the trachea of 65.83 cells / 6 high-power fields (HPF), while the animals exposed to cadmium had 85.16 cells / 6 HPF (p = 0.012). Pulmonary emphysema occurred in 71.43 to 100% of the cases, while the non-exposed had emphysema in 6.66% to 15.38% of the cases (p <0.001). The respiratory tract is a target for cadmium-related deficits after intake; however, the pH of the water did not influence the development of these lesions. / O cádmio é um metal muito utilizado na indústria. A exposição ao cádmio pode desenvolver uma variedade de doenças pulmonares. Não há na literatura avaliação do dano traqueal ou mesmo se a ingestão de cádmio pode também provocar danos ao trato respiratório. O objetivo do estudo é investigar as alterações histopatológicas causadas por intoxicação por cádmio via ingestão no trato respiratório e os possíveis efeitos do pH da água na gênese destas alterações. Utilizaram-se 90 ratos Wistar, divididos em 6 grupos (n=15): A – solução de cloreto de cádmio (CdCl2 - 400mg/L) na água de beber com pH 7,0; B – CdCl2 (400mg/L) na água de beber com pH 5,0; C – CdCl2 (400mg/L) na água com pH 8,0. D – água com pH 5,0; E – água com pH 8,0; F – água com pH 7,0. Todos os animais foram eutanasiados após 6 meses após o início do experimento. Retiraram-se fragmentos do pulmão e traquéia. A análise histopatológica foi realizada para avaliar presença ou não dos seguintes parâmetros: 1. Traquéia: infiltrado inflamatório e tipo de célula inflamatória; congestão tecidual; hipertrofia da musculatura; lesões não neoplásicas da mucosa; lesões displásicas; lesões neoplásicas benignas e malignas; tipo de muco (ácido ou básico); e o número de células caliciformes; 2. Pulmão: infiltrado inflamatório intersticial, tipo de célula inflamatória e localização; congestão tecidual; fibrose intersticial; enfisema; necrose do parênquima; lesões displásicas e presença de lesões neoplásicas benignas e malignas. Observou-se que os animais expostos ao cádmio apresentarem média de células caliciformes na traquéia de 65,83 células/6 campos de grande aumento (CGA), enquanto que os animais não expostos apresentaram 85,16 células/6CGA (p=0,012). Enfisema pulmonar ocorreu em 71,43 a 100% dos casos, enquanto os não expostos apresentaram enfisema em 6,66 a 15,38% dos casos (p<0,001). Concluiu-se que o trato respiratório é alvo do cádmio também na intoxicação via ingestão, porém o pH da água não influenciou no desenvolvimento das lesões.