Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC) causa a redução da capacidade respiratória e seu desenvolvimento é associado à fumaça de cigarro. O cigarro possui mais de 4800 substâncias tóxicas e causa a morte de seis milhões de pessoas por ano no mundo. Estudos buscam meios de reverter os males causados pela fumaça de cigarro. A própolis (P) é um produto produzido por abelhas que possui várias propriedades. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos antioxidantes da P em macrófagos murinos e na inflamação pulmonar aguda induzida pela fumaça de cigarro (CS) em camundongos. A análise dos compostos fitoquímicos do extrato alcóolico da P (EAP) foi feita por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa (GC-MS). Células da linhagem RAW 264.7 foram tratadas em diversas concentrações de P durante 24 horas. Após tratamento, as seguintes análises foram realizadas: polifenóis totais; viabilidade celular (MTT); potencial redutor (DPPH); espécies reativas de oxigênio totais (ROS) e de malondialdeído (MDA). Trinta camundongos C57BL/6 foram divididos em 3 grupos (n=10/grupo): Controle+P, CS e CS+P. Ambos os grupos CS foram expostos a 6 cigarros/dia durante 5 dias. O grupo CS foi tratado com veículo. O pulmão e o lavado broncoalveolar (BAL) foram coletados para análise histológica e contagem diferencial de células. As análises para mieloperoxidase (MPO), superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx), glutationa reduzida (GSH) e oxidada (GSSG), MDA, nitrito e western blotting para TNF-alfa foram realizadas. A análise fitoquímica do EAP mostrou a presença dos ácidos hidrocinâmicos e coumárico, a artepilina C e a drupanina. Foi observado o aumento concentração-dependente dos níveis de polifenóis totais (p<0,001), do MTT (p<0,001) e do DPPH (p<0,001), e o inverso com o MDA (p<0,001). Os níveis de ROS diminuem nas concentrações de 15,6 e 31,2 mg/mL (p<0,05, ambos). A histologia pulmonar do grupo Controle+P foi similar ao do CS+P e foi observado um influxo de macrófagos e neutrófilos no grupo CS (p<0,01 e p<0,001, respectivamente). Os níveis de MPO foram aumentados no grupo CS (526,534,72 mU/mg ptn, p<0,01), mas houve uma redução no grupo CS+P (385,127,64 mU/mg ptn, p<0,05) comparável ao Controle+P (13412,99 mU/mg ptn, p<0,001), o mesmo aconteceu com as enzimas antioxidantes: SOD (Controle+P: 523,529,6 U/mg ptn; CS: 523,529,6 U/mg ptn, p<0,001; CS+P: 246,815,69 U/mg ptn, p<0,001); CAT (Controle+P: 37,383,39 U/mg ptn; CS: 92,686,24 U/mg ptn, p<0,001; CS+P: 59,844,55 U/mg ptn, p<0,05); GPx (Controle+P: 2,230,17 (M/min/mg ptn) x 10-1; CS: 4,510,31 (M/min/mg ptn) x 10-1, p<0,001; CS+P: 2,640,19 (M/min/mg ptn) x 10-1, p<0,05). O inverso ocorreu com a relação GSH/GSSG (Controle+P: 1,0880,17; CS: 0,7360,07, p<0,05; CS+P: 1,2580,10, p<0,05). Os níveis de MDA (Controle+P: 0,2660,05 nMol/mg ptn; CS: 0,940,076 nMol/mg ptn, p<0,001; CS+P: 0,4980,06 nMol/mg ptn, p<0,01) e de nitrito (Controle+P: 50,014,19 Mol/mg ptn; CS: 108,77,73 Mol/mg ptn, p<0,001; CS+P: 58,843,42 nMol/mg ptn, p<0,01) estavam aumentados no CS que em outros grupos. A expressão de TNF-&#945; foi observada no grupo CS. O tratamento da P apresentou ação anti-inflamatória e antioxidante em macrófagos e em camundongos expostos à fumaça de cigarro, possivelmente pela ação dos polifenóis presentes nela / Chronic obstructive pulmonary disease (DPOC) causes a respiratory capacity reduction and its development is be associated with cigarette smoke. Cigarette has more than 4800 toxic substances in your composition and it causes death of six million people in the world. Studies had been made to find methods to change cigarette-induced health problems. Propolis (P) has been reported as a natural product with several properties. Here, we used two types of experiments, in vitro and in vivo, to study the potential antioxidant use of P. Phytochemical analyze was made to evaluate which compounds are within P. Murine macrophages, RAW 264.7 cell line, are exposed to different concentrations of propolis and following analyses were made: total polyphenols levels; cell viability (MTT); reduction potential (DPPH); total reactive oxygen species levels (ROS) and malondialdehyde (MDA). Thirty C57BL6 mice were divided into 3 groups: Control+P, CS and CS+P. Both CS groups were exposed to 6 cigarettes per day for 5 days. CS group was treated with vehicle. Lung and bronchoalveolar lavage (BAL) were collected for histological analysis and differential cell counts. Analysis for mieloperoxidase (MPO), superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx), reduced glutathione (GSH), oxidized glutathione (GSSG), MDA, nitrite and western blotting for TNF-alpha were performed. Phytochemical analyses of P showed which possesses four main compounds: hydrocinnamic and coumaric acids; artepillin C and drupanin. P showed an increase in total polyphenols (p<0.001), cell viability (p<0.001) and DPPH levels (p<0.001) in concentration-dependent manner, different from MDA (p<0.001) which was inverse pattern. P decreased ROS levels in 15.6 and 31.2 mg/mL groups (p<0.05). Lung histology of Control+P group was similar to CS and CS+P groups, however significant inflammatory cell influx was observed in CS group. Propolis administration reduced significantly macrophages and neutrophils compared with CS group (p<0.01 e p<0.001, respectively). MPO levels was increased in CS (526.534.72 mU/mg ptn, p<0.01), but was shown to be reduced in CS+P (385.127.64 mU/mg ptn, p<0.05) compared with Control+P (13412.99 mU/mg ptn, p<0.001), similar pattern was found in antioxidant enzymes: SOD (Controle+P: 523.529.6 U/mg ptn; CS: 523.529.6 U/mg ptn, p<0.001; CS+P: 246.815.69 U/mg ptn, p<0.001), CAT (Controle+P: 37.383.39 U/mg ptn; CS: 92.686.24 U/mg ptn, p<0.001; CS+P: 59.844.55 U/mg ptn, p<0.05) and GPx (Controle+P: 2.230.17 (M/min/mg ptn) x 10-1; CS: 4.510.31 (M/min/mg ptn) x 10-1, p<0.001; CS+P: 2.640.19 (M/min/mg ptn) x 10-1, p<0.05) and different from GSH/GSSG ratio (Controle+P: 1.0880.17; CS: 0.7360.07, p<0.05; CS+P: 1.2580.10, p<0.05). MDA (Controle+P: 0.2660.05 nMol/mg ptn; CS: 0.940.076 nMol/mg ptn, p<0.001; CS+P: 0.4980.06 nMol/mg ptn, p<0.01) and nitrite levels (Controle+P: 50.014.19 Mol/mg ptn; CS: 108.77.73 Mol/mg ptn, p<0.001; CS+P: 58.843.42 nMol/mg ptn, p<0.01) increased in CS group when compared with other groups. TNF-&#945; expression was observed in CS only. P administration showed an antioxidant action in murine macrophages and reduced cigarette smoke-induced lung inflammation and oxidative stress, probably, by action of its phytochemical compounds actions

INTRODUÇÃO: O transplante pulmonar é a única opção terapêutica para determinados pacientes com doença pulmonar em estágio terminal. A maioria dos transplantes de pulmão é realizada a partir de doadores em morte encefálica, condição que per si pode comprometer o sucesso do procedimento. A fisiopatologia da morte encefálica é complexa e envolve mecanismos hemodinâmicos, simpáticos e inflamatórios. A administração de metilprednisolona 60 minutos após indução da morte encefálica reduz a atividade inflamatória em pulmões de ratos. OBJETIVO: Avaliar os efeitos do tratamento com metilprednisolona em pulmões de ratos transplantados a partir de ratos doadores induzidos à morte encefálica quando administrada 60 minutos após indução da mesma. MÉTODOS: doze ratos Wistar foram randomizados e anestesiados em 2 grupos (n=6): controle: indução de morte encefálica e administração de solução salina; metilprednisolona (MET): indução de morte encefálica e administração de metilprednisolona 60 minutos após. Os animais foram observados e ventilados por 120 minutos e depois submetidos a transplante pulmonar. Foram avaliados parâmetros hemodinâmicos e gasométricos, escore histológico, dosagem de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), superóxido dismutase (SOD), TNF-α e interleucina-1β (IL-1β). RESULTADOS: houve redução significativa dos níveis de TNF-α e IL-1β no grupo que recebeu metilprednisolona (p=0,0084; p=0,0155, respectivamente). Não houve diferença significativa na atividade do TBARS e SOD entre os grupos controle e MET (p=0,2644; p=0,7461, respectivamente). Não houve diferença significativa na gasometria, nos parâmetros hemodinâmicos, e nas alterações histológicas entre os grupos controle e MET. CONCLUSÃO: a utilização de metilprednisolona após a morte encefálica em ratos doadores reduz a atividade inflamatória em pulmões transplantados, mas não tem influencia sobre o estresse oxidativo. / INTRODUCTION: Lung transplantation is the only therapeutic option for a subset of patients with end-stage lung disease. Most lung transplantations are performed using brain-dead donors, a condition that compromises the success of the procedure. The physiopathology of brain death is complex and involves haemodynamics, the sympathetic nervous system and inflammatory mechanisms. Administering methylprednisolone 60 minutes after inducing brain death in rats has been shown to modulate pulmonary inflammatory activity. OBJECTIVE: To evaluate the effects of methylprednisolone on transplanted rat lungs from donors treated 60 minutes after brain death. METHODS: Twelve Wistar rats were anaesthetised and randomly assigned to 1 of 2 groups (n=6): a control group that underwent the induction of brain death and the administration of saline solution and a methylprednisolone (MET) group that underwent the induction of brain death and the administration of methylprednisolone after 60 minutes. All of the animals were observed and ventilated for 120 minutes and then submitted to lung transplantation. We evaluated haemodynamic and blood gas parameters, the histologic score, the lung tissue determination of thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS), the level of superoxide dismutase (SOD), the level of TNF-α and the level of interleukin-1β (IL-1β). RESULTS: There was a significant reduction in the levels of TNF-α and IL-1β in the group that received methylprednisolone (p=0.0084 and p=0.0155, respectively). There were no significant differences in TBARS and SOD between the control and MET groups (p=0.2644 and p=0.7461, respectively). There were no significant differences in the blood gas parameters, the haemodynamic parameters and the histologic alterations between the control and MET groups. CONCLUSION: The administration of methylprednisolone after brain death in donor rats reduces inflammatory activity in transplanted lungs but has no influence on oxidative stress.

Durante a montagem de uma resposta inflamatória, um estímulo reconhecido como um fator de perigo desencadeia a supressão de melatonina noturna pela pineal e a indução da produção em monócitos. A poluição atmosférica é um dos maiores fatores de risco à saúde da população urbana. Neste estudo in vivo, a exposição aguda aos poluentes do ar gera um estresse oxidativo pulmonar, deflagra uma resposta inflamatória a partir da ativação da via de sinalização do NF-&#954;B, do aumento das moléculas de adesão PECAM e ICAM e da sintase de óxido nítrico induzida (iNOS), bem como de citocinas inflamatórias. A medida que o tempo de exposição à poluição progride, a concentração plasmática noturna da melatonina se reduz em 39 %, enquanto que a pulmonar aumenta 55%. Tanto as enzimas AA-NAT e ASMT envolvidas na biossíntese da melatonina, quanto as enzimas antioxidantes SOD, CAT e GPx tem suas expressões gênicas no pulmão duplicadas, bem como suas atividades aumentadas. Os mRNAs das enzimas antioxidantes SOD e CAT pulmonar foram reduzidos a partir do bloqueio dos receptores MT1 e MT2. Tais resultados fundamentam ações farmacológicas que protejam ou revertam os efeitos lesivos gerados pela poluição atmosférica através do eixo imune-pineal tendo a melatonina como um agente terapêutico. / During assembly of an inflammatory response a stimulation recognized as a risk factor triggers the suppression of nocturnal pineal melatonin and by inducing the production in immunocompetent cells. Air pollution is one of the major risk factors to health of the urban population. In this in vivo study, acute exposure to air pollutants generates a pulmonary oxidative stress triggers an inflammatory response from the signaling pathway of activation of NF-&#954;B, the increase in adhesion molecules PECAM and ICAM and nitric oxide synthase induced (iNOS) as well as inflammatory cytokines. As time progresses exposure to pollution, nocturnal plasma melatonin concentration is reduced by 39%, while the lung increases by 55%. Both AA-NAT enzymes and ASMT involved in the biosynthesis of melatonin, as the antioxidant enzymes SOD, CAT and GPx has its gene expression in lung duplicate, as well as its increased activities. The mRNAs of antioxidant enzymes SOD and CAT lung were reduced from blocking the MT1 and MT2 receptors. These results support pharmacological actions to protect or reverse the harmful effects caused by air pollution through the immune-pineal axis taking melatonin as a therapeutic agent.

A lesão pulmonar aguda é caracterizada por inflamação pulmonar podendo ser induzida diretamente (LPD), por inalação de lipopolissacarídeo (LPS), ou indiretamente (LPI), por mediadores inflamatórios liberados por órgãos distantes após lesão de isquemia e reperfusão (IR). A Bradicinina, mediador inflamatório, pode agir em dois receptores, um constitutivo (B2R), e um induzido por citocinas inflamatórias (B1R). Neste trabalho verificamos o papel do B1R em modelos de LPD e LPI. Em camundongos C57bl/6, a LPD foi induzida por tratamento intra-nasal com LPS, e a LPI foi induzida por 45 minutos de IR renal. Observamos alterações pulmonares em ambos os modelos de lesão 24 horas após o insulto, como aumento de infiltrado celular, hiperreatividade pulmonar à metacolina, aumento de permeabilidade vascular, e citocinas pró-inflamatórias. Bloqueamos o B1R com antagonista e vimos que a lesão pulmonar foi diminuída em ambos os modelos de lesão. Assim, sugerimos que o B1R contribui tanto para a LPD, induzida por LPS, quanto para a LPI, induzida por IR renal. / The acute lung injury (ALI) is characterized by lung inflammation and can be induced directly by lipopolysaccharides inhalation, or indirectly, by systemic inflammatory mediators released from distant organs after and ischemia and reperfusion injury (IRI). Bradykinin, an inflammatory mediator, can act in two different receptors; one is constitutive (B2R), whereas the other is induced by inflammatory cytokines (B1R). We aimed to study the role of B1R in models of direct and indirect ALI. Direct ALI was induced by LPS instillation in C57bl/6 mice, while indirect ALI was induced by 45 minutes of renal IRI. In both injuries, 24 hours after insult, animals presented an increase in cellular infiltration, vascular permeability, hyperreactivity to methacholine, and an up-regulation of pro-inflammatory cytokines in lungs. We blocked the B1R using antagonist and observed that the lung injury was attenuated in both injury models. Thus, we suggest that B1R has an important role in the development of both, direct ALI, induced by LPS, and indirect ALI induced by renal IRI.

The lung carcinomas stand out as a major public health problem, therefore, are among the leading causes of cancer death worldwide. They are classified into two major histological groups: small cell lung carcinome (SCLC) and non small cell lung carcinoma non (NSCLC). In the search for novel therapies, many natural products derived from plants and other organisms has been studied for use as a source for the development of chemotherapeutic agents used in the treatment of various cancers, including carcinomas of the lung. In this context, the essential oils is part of medicinal plants produced by such as the genus Lippia that have many therapeutic properties, among them, antimicrobial, anti-inflammatory and antiproliferative. This study proposes to investigate the cytotoxic activity of essential oils of different species and genotypes of the genus Lippia plants. the Active Germplasm Bank of the Federal University of Sergipe (UFS) located at the Experimental Farm "Rural Campus of the UFS," which have varied chemical composition. For this A549 cells (lung carcinoma) were treated with increasing concentrations (20-160 / mL) essential oils Lippia gracilis (genotypes 106 and 110) of Lippia alba (genotypes 13:57) and Lippia sidoides (genotypes 102 and 104) during the 24 hour interval. Cytotoxicity of these essential oils was determined by the MTT colorimetric method. The absorbance values obtained in the treatments were normalized to the untreated cells and used to calculate IC50 values by regression analysis. IC50 values of 75.42 and 158.6 ug / ml were obtained for the LG-106 and LG-110 genotypes, respectively. For LS-102 and LS-104 genotypes IC50 were respectively 97.93 and 150.70 mg / mL and LA-13 and LA-57 genotypes these values were 86.14 and 70.34 mg / mL . Microscopic analysis of cells stained by hematoxylin-eosin showed morphological changes, including condensation of cytoplasm, chromatin condensation and nuclear fragmentation induced by all genotypes. These results suggest that the cytotoxic activity presented by the essential oils of Lippia on A549 lineage cells involves induction of programmed cell death. Therefore, it is concluded that these oils represent a promising source compounds for the development of new anti-tumor therapies. / Os carcinomas de pulmão destacam-se como um grave problema de saúde pública, pois, encontram-se entre as principais causas de morte por câncer no mundo. São classificados em dois principais grupos histológicos: carcinoma de pulmão de células pequenas (CPCP) e carcinoma de pulmão de células não pequenas (CPCNP). Na busca por terapias inovadoras, diversos produtos naturais derivados de plantas e outros organismos têm sido estudados para utilização como fonte para o desenvolvimento de quimioterápicos empregados no tratamento de diversos tipos de câncer, inclusive dos carcinomas de pulmão. Nesse contexto, insere-se os óleos essenciais produzidos por plantas medicinais como as do gênero Lippia que apresentam diversas propriedades terapêuticas, dentre elas, atividade antimicrobiana, antinflamatória e antiproliferativa. O presente trabalho propõe a investigação da atividade citotóxica dos óleos essenciais de diferentes espécies e genótipos de plantas do gênero Lippia. do Banco Ativo de Germoplasma da Universidade Federal de Sergipe (UFS), localizado na Fazenda Experimental “Campus Rural da UFS”, que apresentam variada composição química. Para isso as células A549 (Carcinoma de pulmão), foram tratadas com concentrações crescentes (20 a 160 μg/mL) de óleos essenciais de Lippia gracilis (genótipos 106 e 110), de Lippia alba (genótipos 13 e 57) e Lippia sidoides (genótipos 102 e 104) durante o intervalo de 24 horas. A citotoxicidade destes óleos essenciais foi determinada pelo método colorimétrico do MTT. Os valores das absorbâncias obtidas nos tratamentos foram normalizados com os das células não tratadas e utilizados para calcular os valores de IC por análise de regressão. Valores de IC50 de 75,42 e 158,6 μg/mL foram obtidos para os genótipos LG-106 e LG-110, respectivamente. Para os genótipos LS-102 e LS-104 as IC50 foram, respectivamente, 97,93 e 150,70 μg/mL e para os genótipos LA-13 e LA-57 estes valores foram 86,14 e 70,34 μg/mL. A análise microscópica das células coradas por hematoxilina-eosina revelou alterações morfológicas incluindo condensação do citoplasma, condensação da cromatina e a fragmentação nuclear induzidas por todos os genótipos avaliados. Estes resultados sugerem que atividade citotóxica apresentada pelos óleos essenciais de Lippia sobre células da linhagem A549 envolve a indução de morte celular programada. Com isso, conclui-se que tais óleos representam uma fonte promissora de compostos para o desenvolvimento de novas terapias antitumorais. / São Cristóvão, SE

Os recém-nascidos pré-termo extremos, por estarem ainda em uma fase do desenvolvimento pulmonar anterior à alveolização, estão mais vulneráveis a fatores como a hiperoxia, o barotrauma, o volutrauma e, o uso de medicações como os corticosteróides. A ação destes fatores, associada à imaturidade pulmonar, pode alterar a organização estrutural pulmonar, interferindo na alveolização e na organização de fibras elásticas e de colágeno. Estas alterações são comuns à \"nova\" displasia broncopulmonar, patologia freqüente entre os recém-nascidos pré-termo, especialmente os extremos. Criou-se um modelo experimental de restrição nutricional e hiperoxia, em coelhos pré-termo, com o objetivo de analisar os efeitos da restrição nutricional e da hiperoxia sobre a arquitetura pulmonar (número de alvéolos, intercepto linear médio(ILm), área de superfície interna(ASI), espessura de septo interalveolar), especialmente em relação à deposição de fibras elásticas e de colágeno. Após a realização de cesárea, em coelhas New Zealand White, com idade gestacional de 28 dias, seus filhotes foram divididos em 4 grupos, de acordo com a dieta e a concentração de oxigênio administradas: GIA (dieta padrão e FiO2=0,21) (n=120); GIB (dieta padrão e FiO2>0,95) (n=232); GIIA (restrição nutricional e FiO2=0,21) (n=72); GIIB (restrição nutricional e FiO2>0,95) (n=368). A restrição nutricional foi definida como uma redução em 30% de todos os nutrientes, em relação à dieta padrão. Os coelhos foram pesados, diariamente. Após o sacrifício, aos 7 e 11 dias de vida, os pulmões foram removidos, pesados e fixados em formol tamponado 10%, com uma pressão de 30 cm de H2O. O volume pulmonar total foi medido pelo método de deslocamento de água. Nos cortes histológicos utilizou-se as seguintes colorações: hematoxilina-eosina, para contagem do número de alvéolos, ILm, ASI, medida de septo interalveolar; orceína-resorcina modificada para análise de fibras elásticas e picrosirius, para análise de colágeno. Os resultados foram apresentados através de médias e realizou-se ANOVA para comparação dos resultados, considerando-se um p < 0,05 como significante. A restrição nutricional alterou o crescimento somático, reduzindo o ganho de peso e, alterou o crescimento e a morfologia pulmonares, reduzindo o volume pulmonar, o número de alvéolos e a deposição de fibras elásticas e de colágeno aos 7 e 11 dias de vida. A hiperoxia elevou a mortalidade e modificou a arquitetura pulmonar, reduzindo o número de alvéolos e aumentando suas dimensões, bem como aumento da espessura dos septos interalveolares, aos 7 e 11 dias de vida. Aos 11 dias, a hiperoxia reduziu a deposição de colágeno. A restrição nutricional associada à hiperoxia teve os seus efeitos intensificados sobre a redução do número de alvéolos e do depósito de colágeno, aos 7 e 11 dias. Estes resultados ilustram o papel da nutrição como modulador da lesão pulmonar pela hiperoxia, em pulmões em desenvolvimento / Characteristic pathologic findings in bronchopulmonary dysplasia are the presence of alveolization impairment, widened alveolar septa, disordered collagen and elastic fibers deposition. There are likely to be multiple factors that result in the histological changes seen with the development of bronchopulmonary dysplasia, besides the lung imaturity: hyperoxia, volutrauma, barotrauma, nutrition. The aim of this study is to developed an experimental model, in preterm rabbits, to evaluate the effects of nutritional restriction and hyperoxia on lung weight and volume, alveoli number, mean linear intercept (Lm), internal surface area (ISA), alveolar septal thickness, elastic fibers and collagen density. After c-section, 28 days preterm New Zealand White rabbits were randomized into 4 groups: GIA (regular diet and FiO2=0,21) (n=120); GIB (regular diet and FiO2>0,95) (n=232); GIIA (nutritional restriction and FiO2=0,21) (n=72); GIIB (nutritional restriction and FiO2>0,95) (n=368). They were kept in incubators, warmer and humidified oxygen (Plexiglas chamber). Nutritional restriction was defined as caloric-proteic intake limited to 70% of the regular diet. After sacrifice with 7 and 11 days, the lungs were removed and fixed in 10% formalin under 30 cm H2O transtracheal pressure. The total lung volume was measured by displacement water. Lung slices were stained with hematoxylin and eosin for alveoli number, Lm, ISA and alveolar septal thickness; resorcin-orcein for elastic fibers and Picrosirius for collagen (fibers/parenchyma pointy counting). Statistical analysis was done by ANOVA. Level of significance was set at 0,05. Values are means +- sd. It was observed that GIA and GIB (regular diet) put on more weight than nutritional restriction groups from 8th till 11th day of life. Nutritional restriction influenced the ponderal evolution and reduced lung volume, alveoli number, collagen and elastic fibers deposition at 7th and 11th days of life. Hyperoxia elevated the mortality. In relation to lung architetural, the hyperoxia reduced alveoli number and elevated Lm, besides widened alveolar septal at 7th and 11th days of life. At 11th days, hyperoxia reduced collagen deposition, too. Nutritional restriction and hyperoxia had an additive efect on the reduction of alveoli number and collagen deposition. These findings suggest that nutrition has a modulator effect on lung injury by hyperoxia. This study strengthened the contribution of nutrition on preterm lung development

Mutações ativadoras no gene KRAS são prevalentes em cancer de pulmão e a as vias de sinalização de RAS estão aumentadas em células iniciadoras de tumor (CITs), que são definidas como células autorrenováveis capazes de iniciar a formação tumoral, sustentar o crescimento tumoral e promover a disseminação tumoral. Entretanto, terapias direcionadas a RAS não foram efetivas até hoje e a identificação de alvos de KRAS que contribuam para o fenótipo oncogênico é necessária. Como a quinase Aurora A (AURKA) já foi implicada, tanto na oncogênese induzida por KRAS, quanto em promover a função das CITs, nós hipotetizamos que a inibição das vias de AURKA seria detrimental para a função de CITs pulmonares portadoras de KRAS oncogênica, desta forma diminuindo o comportamento maligno do câncer de pulmão. Para avaliar a função das CITs, nós usamos ensaios de crescimento de tumoresferas que permitem o crescimento seletivo de CITs in vitro. As linhagens pulmonares positivas para KRAS H358 e A549 formaram tumoresferas em cultura de baixa aderência e, quando comparadas às linhagens parentais, às células oriundas de tumoresferas apresentaram maior capacidade clonogênica in vitro e maior tumorigenicidade in vivo. Além disso, uma análise por qPCR revelou que as células oriundas de tumoresferas possuem expressão aumentada de fatores de células tronco, uma característica de CITs. Em seguida, nós inibimos a AURKA nas linhagens pulmonares positivas para KRAS H358 e A549 por interferência de RNA (RNAi) ou com um inibidor das quinases Aurora (AI II). A inibição de AURKA diminuiu a formação de tumoresferas e o crescimento destas em culturas seriadas, além de reduzir a capacidade clonogênica das células oriundas de tumoresferas. Estes resultados indicam que a AURKA é importante para a autorrenovação e a oncogenicidade de CITs, e que a AURKA induz o fenótipo tronco-tumoral, o que é corroborado pelo achado de que a inibição de AURKA nas tumoresferas reduz a expressão de fatores de célula tronco. Um destes fatores regulados por AURKA é o marcador de superfície de célula tronco CD24. De fato, quando comparadas às células cultivadas de forma aderente, as células oriundas de tumoresferas apresentam maior número de células positivas para CD24 (CD24+) e estes números são reduzidos pelo tratamento com AI II. Finalmente, nós purificamos células H358 CD24+ por citometria de fluxo e mostramos que, quando comparadas às células negativas para CD24, as células CD24+ apresentam maior capacidade de formar tumoresferas em culturas seriadas, e o tratamento com AI II inibe preferencialmente a capacidade de células CD24+ de formarem tumoresferas. Nossos resultados sugerem que uma terapia baseada na inibição de AURKA pode reduzir o número e função de CITs pulmonares portadoras de KRAS oncogênica e, portanto, pode representar uma estratégia terapêutica atraente para reduzir a recidiva e metástase no câncer de pulmão induzido por KRAS. / Activating mutations in KRAS are prevalent in lung cancer and RAS sinaling is enhanced in cancer initiating cells (CICs), which are defined as self-renewing tumor cells able to initiate tumor formation, sustain tumor growth and drive tumor dissemination. However, therapies targeted to oncogenic RAS have been ineffective to date and identification of KRAS targets that impinge on the oncogenic phenotype is warranted. Because Aurora kinase A (AURKA) has been implicated both in RAS oncogenesis and in promoting CIC function, we hypothesized that targeting AURKA pathways would impair KRAS-positive lung CIC function, thereby decreasing lung cancer malignant behavior. To evaluate CIC function, we used tumorsphere assays that allow selective growth of CICs in vitro. KRAS positive lung cancer H358 and A549 cells formed tumorspheres under low attachment conditions, and, when compared to the parental cell lines, sphere-forming cells had increased clonogenic ability in vitro and increased tumorigenicity in vivo. In addition, qPCR analysis revealed that tumorsphere cells displayed increased expression of stem cell factors, a hallmark of CICs. Next, we targeted AURKA in KRAS positive lung cancer H358 and A549 cells by RNA interference (RNAi) or with an Aurora inhibitor (AI II). AURKA targeting decreased tumorsphere formation and growth in serial cultures and reduced clonogenic growth of tumorsphere-forming cells. These results indicate that AURKA is important for CIC selfrenewal and oncogenicity and that AURKA induces a CIC phenotype, which is further underscored by the finding that AURKA targeting in tumorspheres decreases expression of stem cell factors. One such factor shown to be regulated by AURKA is the stem cell surface marker CD24. In fact, when compared to adherent cultures, A549 and H358 tumorspheres display increased numbers of CD24-positive (CD24+) cells and these numbers are reduced by AI II treatment. Finally we purified H358 CD24+cells by flow cytometry and showed that, when compared to CD24-negative cells, CD24+ cells have increased ability to form tumorspheres in serial cultures, and AI II treatment preferentially reduced the ability of CD24+ cells to form tumorspheres. Our results suggest that AURKA inhibition therapy can reduce the number and function of KRAS-positive lung CICs, and, therefore might be an attractive therapeutic strategy to reduce recurrence and metastasis in KRAS-induced lung cancer.

A deterioração da qualidade do ar ameaça a qualidade de vida dos habitantes nos grandes centros urbanos. O material particulado é constituído por partículas sólidas, liquidas ou ambas, suspensas no ar. Os idosos são o grupo mais susceptível aos efeitos negativos da poluição atmosférica e essa população vem crescendo exponencialmente no mundo inteiro, afetando quase todos os países do mundo, inclusive o Brasil, atualmente representado por um contingente populacional correspondente a 12% da população. Há fortes evidências científicas que a família das sirtuínas tem grande influência no processo do envelhecimento e longevidade em mamíferos. Alguns estudos apontam uma função protetora de Sirt1 contra danos oxidativos e inflamatórios. O objetivo desse estudo é avaliar o impacto das partículas de exaustão do diesel (DEP) sobre as alterações pulmonares decorrentes do processo do envelhecimento e a possível influência das sirtuínas nesse processo. Camundongos na idade de 02 meses e 15 meses foram expostos às DEPs ou ar filtrado por um período de 30 dias. Os parâmetros funcionais foram mensurados pelo FlexiVent. Após as exposições os pulmões foram coletados e o perfil inflamatório avaliado no lavado broncoalveolar e no soro sanguíneo, por meio das mensurações das citocinas inflamatórias. O estresse oxidativo foi avaliado pela técnica espectrofotometria e as expressões gênicas das sirtuínas foram mensuradas pela técnica de RT-PCR no homogenato do tecido pulmonar. De forma geral, além das diferenças fisiológicas relacionadas com a idade observadas entre os grupos, às exposições as DEPs afetaram o perfil inflamatório e as enzimas antioxidantes nos animais jovens e idosos. Além disso, o grupo idoso apresentou comprometeram no ganho de peso e aumento na deposição de colágeno no tecido pulmonar. As exposições diminuíram os níveis de expressão gênica de Sirt6, enquanto Sirt1 foi diminuída com a idade. Em conjunto, os dados obtidos enfatizam que as exposições ambientais aceleraram as alterações associadas ao envelhecimento pulmonar / The deterioration of the air quality is a threat to the habitants\' quality of life of the urban areas. The particulate matter is constituted of solid, liquid or both particles suspended in the air. The elderly is the most susceptible group to the harmful effects of the air pollution and this population is growing exponentially all over the world, affecting almost all the countries, including Brazil, representing 12.1% of the population. There are strong scientific evidences that the Sirtuins family has great influence on the aging and longevity process in mammals. Some studies points out a Sirt1 protective function against oxidative and inflammatory damage. This study aims to evaluate the impact of the diesel exhaust particulate (DEP) on the pulmonary changes resulting from the aging process and the possible influence of the sirtuins in this process. Two and fifteen months old mice were exposed to DEP for a period of 30 days. Functional assessment of these animals was measured by FlexiVent. After the exposures period, the lungs were collected and the inflammatory profile was evaluated in the bronchoalveolar lavage fluid and blood serum, by means of the measurements of the inflammatory cytokines. Oxidative stress was evaluated by the spectrophotometric technique and the sirtuin gene expression was measured by the RT-PCR technique in the pulmonary tissue homogenate. Our data showed that, besides the age-related physiological differences observed between groups; exposure to DEPs affected the inflammatory profile and antioxidant enzymes activity in young and old animals. In addition, the elderly group presented compromised in weight gain and increased collagen deposition in lung tissue. The exposures decreased gene expression levels of Sirt6, while Sirt1 was decreased due to age. Taken together, the data obtained emphasize that environmental exposures accelerated changes associated with pulmonary aging

INTRODUÇÃO: A morte encefálica (ME) associa-se à instabilidade hemodinâmica, disfunção microvascular e inflamação, comprometendo a viabilidade dos órgãos para o transplante. O hormônio 17beta-estradiol caracteriza-se por seus efeitos protetores vasculares e propriedades antiinflamatórias. OBJETIVO: Neste estudo investigou-se os efeitos do 17beta- estradiol, como modulador da microcirculação, em modelo de indução rápida de morte encefálica em ratos machos. MÉTODOS: Ratos Wistar machos foram submetidos à indução rápida de morte encefálica através da insuflação intracraniana do cateter de Fogarty. Os animais foram randomizados em 3 grupos: ratos falso-operados, apenas trepanados (FO, n=11); ratos submetidos à ME (ME, n=11); ratos tratados com 17beta-estradiol (280 ug/Kg, iv) 60 minutos após a indução da ME (E2, n=11). Os experimentos foram realizados decorridos 180 minutos após a ME. A perfusão e o fluxo sanguíneo na microcirculação mesentérica foram avaliados através das técnicas de microscopia intravital e fluxometria a laser. A expressão gênica relativa da sintase endotelial do óxido nítrico (eNOS) e da endotelina-1, no mesentério e pulmão, foi avaliada por técnica de PCR (polymerase chain reaction) em tempo real. A expressão proteica de eNOS, endotelina-1, P-selectina, molécula de adesão intercelular (ICAM)-1, molécula de adesão vascular (VCAM)-1 e molécula de adesão da plaqueta/célula endotelial (PECAM)-1 foi determinada por técnica de imunohistoquímica. As alterações histopatológicas pulmonares foram analisadas por técnica histomorfométrica. A expressão da sintase induzível do óxido nítrico (iNOS) no pulmão foi determinada por técnica de imunohistoquímica. Citocinas, quimiocinas, corticosterona e 17beta-estradiol foram quantificados por enzima-imunoensaio (ELISA). RESULTADOS: O grupo ME apresentou redução da porcentagem de microvasos perfundidos ( < 30 um) no mesentério comparado ao grupo FO e ao grupo E2, decorridos 180 minutos (p=0,0117), sem alterações no fluxo sanguíneo mesentérico (p=0,3692). Houve aumento na expressão proteica (p < 0,0001) e gênica (p=0,0009) de eNOS no mesentério no grupo E2. Não houve diferenças na expressão proteica e gênica da endotelina-1 entre os grupos. A expressão de ICAM-1 nos microvasos mesentéricos aumentou no grupo ME (p < 0,0001) e a expressão de VCAM-1 foi reduzida no grupo E2 (p=0,0008). Não houve diferenças significativas na expressão de P-selectina entre os grupos (p=0,0675). As análises histopatológicas do pulmão demonstraram aumento do edema (p < 0,0001) e hemorragia (p < 0,0001) no grupo ME comparado aos grupos FO e E2, sem diferenças no número de células inflamatórias (células polimorfonucleares: p=0,4033; células linfomononucleares: p=0,5003). A expressão de iNOS no tecido pulmonar aumentou no grupo ME comparado aos grupos FO e E2 (p < 0,0001). A expressão proteica de eNOS no pulmão diminuiu nos ratos ME e aumentou nos ratos E2 (p=0,0002). A expressão proteica de endotelina-1 no pulmão assim como a expressão gênica pulmonar de eNOS e endotelina-1 não diferiram entre os grupos. Com relação à expressão de moléculas de adesão na microcirculação pulmonar observou-se que os níveis de ICAM-1 não diferiram entre os grupos (p=0,4550); os níveis de VCAM-1 reduziram-se no grupo E2 (p < 0,0001); níveis de PECAM-1 foram reduzidos nos ratos ME (p=0,0037). Observou-se aumento das concentrações séricas de TNF-alfa (p=0,0004) e redução de VEGF sérico (p=0,0380) nos ratos ME. Houve redução das concentrações séricas de CINC-1 (p=0,0020) e aumento de MCP- 1 (p=0,0094) no grupo E2. CONCLUSÃO: O tratamento com o 17beta-estradiol foi efetivo em restaurar a perfusão mesentérica e reduzir a lesão pulmonar associadas à morte encefálica. Sugere-se que o estradiol, como modulador microcirculatório, possa contribuir para a preservação dos órgãos destinados ao transplante / BACKGROUND: Brain death (BD) is associated with hemodynamic instability, microvascular dysfunction and inflammation, which compromise the viability of the organs for transplantation. The hormone 17?-estradiol is known to display vascular protective effects and anti-inflammatory properties. OBJECTIVE: This study aimed to investigate the effects of 17beta-estradiol, as a microcirculatory modulator, in a sudden onset BD model in male rats. METHODS: Male Wistar rats underwent rapid onset BD by inflating a Fogarty catheter in the intracranial space. Rats were randomly divided in three groups: sham-operated rats submitted to trepanation only (SH, n=11); rats submitted to BD (BD, n=11); and rats treated with 17beta-estradiol (E2, 280 ug/kg, iv) 60 min after BD (E2, n=11). Experiments were performed 180 min thereafter. Laser Doppler flowmetry and intravital microscopy were used to evaluate mesenteric microvascular alterations. Gene expression of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) and endothelin-1 in the mesentery and lungs were measured by real-time polymerase chain reaction. Protein expression of eNOS, endothelin-1, Pselectin, intercellular adhesion molecule (ICAM)-1, vascular cell adhesion molecule (VCAM)-1, and platelet/endothelial cell adhesion molecule (PECAM)-1 was investigated by immunohistochemistry. Lung histopathological changes were evaluated by histomorphometry and tissue expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) by immunohistochemistry. Cytokines, chemokines, 17beta- estradiol, and corticosterone were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. RESULTS: The proportion of mesenteric perfused small vessels ( < 30 um diameter) was reduced in BD rats compared to SH and E2 rats at 180 min (p=0.0117), without changes in mesenteric blood flow (p=0.3692). Protein expression of eNOS was increased in E2 group (p < 0.0001), as well gene expression of eNOS (p=0.0009). There were no differences in protein and gene expression of endothelin-1 between groups. The expression of ICAM-1 on mesenteric vessels was increased in BD group (p < 0.0001) and expression of VCAM-1 was reduced in E2 rats (p=0.0008). There were no differences in the expression of P-selectin between groups (p=0.0675). Lung histopathological analyses showed increased edema (p < 0.0001) and hemorrhage (p < 0.0001) in BD group compared to SH and E2 groups, without differences in the number of inflammatory cells (polymorphonuclear cells: p=0.4033; lymphomononuclear cells: p=0.5003). The expression of iNOS on lung tissue was increased in BD group, compared with SH and E2 groups (p < 0.0001). Lung protein expression of eNOS decreased in BD rats, and increased in E2 rats (p=0.0002). Protein expression of lung endothelin-1 as well as gene expression of lung eNOS and endothelin-1 did not differ among groups. Regarding the expression of adhesion molecules on lung microcirculation, it was observed that ICAM-1 levels did not differ between groups (p=0.4550); levels of VCAM-1 decreased in E2 group (p < 0.0001); PECAM-1 levels were reduced in BD rats (p=0.0037). BD rats showed increased levels of TNF-alpha (p=0.0004), and a reduction in the levels of VEGF (p=0,0380) in the serum. BD-E2 rats exhibited reduced CINC-1 levels (p=0.0020) and increased levels of MCP-1 (p=0,0094) in the serum. CONCLUSION: Data presented showed that 17beta-estradiol treatment was effective in restoring mesenteric perfusion and reducing lung injury in braindead rats. Estradiol, as a microcirculatory modulator, is a promise therapy to improve organs viability to transplant

INTRODUÇÃO: A exposição prolongada às partículas ambientais está associada à mortalidade prematura devido às causas cárdio-respiratórias e ao câncer do pulmão. O tamanho e composição destas partículas estão relacionados à maior toxicidade, agravada pela retenção prolongada destas partículas no pulmão. Pode-se postular que partículas com diferentes composições elementares podem ter distribuição diferente ao longo da árvore traqueobrônquica. A captura por micro-dissecção a laser (CML) aparece neste cenário como uma alternativa rápida e eficaz para se obter amostras para estudo da distribuição destas partículas no pulmão. OBJETIVOS: Testar a eficácia da CML no estudo de partículas retidas no pulmão comparando com outra técnica de análise de cortes de parafina (P), já consagrada na literatura. Comparar também o perfil elementar de partículas retidas ao longo da árvore traqueobrônquica e linfonodos em duas cidades com perfis distintos de poluição, através da CML, associada à espectometria de raios-X por dispersão de energia (RX-DE) aliada à microscopia eletrônica de varredura (MEV). MÉTODOS: Vinte e quatro casos autopsiados foram obtidos em duas cidades com perfis distintos de poluição (São Paulo e São José do Rio Preto). As amostras de parênquima pulmonar obtidas do lobo médio do pulmão direito foram coletadas em três regiões: tecido peribrônquico, parênquima pulmonar periférico e linfonodos hilares. Para P, a análise foi feita em áreas visualizadas no MEV correspondentes às áreas de antracose. Estas áreas de antracose foram também micro-dissecadas, usando CML e analisadas através do RX-DE aliado ao MEV. RESULTADOS: Quando os dois métodos foram comparados, a maioria dos elementos encontrados, mostrando diferença significante, foi vista na CML, exceto pelo Ca e Mg (mais comumente encontrados em P). A análise elementar das partículas depositadas ao longo da árvore traqueobrônquica mostra dois grupos de distribuição dos elementos, com deposição predominante peribronquiolar ou com deposição predominante linfonodal. A análise elementar das áreas peribrônquicas descrimina melhor (95.8 %), o tipo de exposição à poluição, sem diferença significante para os outros locais estudados. CONCLUSÃO: Os perfis elementares das partículas retidas ao longo da árvore traqueobrônquica mostram dois grupos com padrão de distribuição distinta. A região proximal é o principal local para discriminação do tipo de exposição do indivíduo, sendo a antracose o carimbo da exposição à poluição. A CML se mostrou também uma ferramenta útil para discriminar áreas de interesse no estudo da análise elementar de partículas retidas no pulmão quando comparada com a análise nos cortes de parafina. / RATIONALE: Prolonged exposure to ambient particles is associated with premature mortality due to cardio respiratory diseases and lung cancer. Size and composition of these particles determine toxicity, aggravated by their long term retention in the lungs. In this context, it is plausible to postulate that different particles with different elemental composition must have distinct distribution patterns along the bronchial tree. Laser capture microdissection (LCM) appears as a rapid and efficient alternative for obtaining representative lung tissue for particle analysis. OBJECTIVES: To test laser capture microdissection (LCM) as a new tool for studying particle retention, comparing to a classical method using paraffin sections (PS). To compare the elemental profile of particles retained along the bronchial tree and lymph nodes in two cities with distinct pollution backgrounds by using LCM, through energy dispersive x-ray (EDX) and scanning electron microscopy (SEM). METHODS: Twenty-four right lung middle lobes from autopsied cases were obtained in two cities with different pollution backgrounds. Lung samples were collected from three distinct regions in the lungs at the time of autopsy: peribronchial tissue, peripheral parenchyma and hylar lymph nodes. For PS, analysis was performed in areas visualized in the SEM correspondent to anthracotic areas. These areas of anthracosis were also microdissected using LCM and analyzed for elemental composition through EDX allied to SEM. RESULTS: When the two methods were compared, the majority of the elements showing significant difference was predominantly found when LCM was used, except for Ca and Mg (more related to PS) Elemental analysis of particles deposited along the bronchial tree shows two groups of distribution: elements with preferable peribronchiolar or preferable lymph node deposition. Elemental profile of peribronchial areas discriminate accurately (95.8 %) the type of pollution exposure, with no statistical difference noted for the other sites. CONCLUSIONS: Elemental profiling of the particles retained along the bronchial tree shows two groups with distinct distribution patterns. The proximal bronchial tree is the main site for discrimination of pollution exposure, with an elemental finger print of anthracosis. LCM has also proven to be a useful tool in discriminating areas of interest for elemental analysis of particles retained in the lung when compared to analysis in PS.