Submitted by Flávia Ferreira (flaviaccf@yahoo.com.br) on 2015-01-21T13:04:19Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Catarina_Lôbo_Santos_de_Souza.pdf: 2464523 bytes, checksum: 254ccbec18e303f9fa6d5b9af58f4ab4 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira (flaviaccf@yahoo.com.br) on 2015-03-09T14:40:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Catarina_Lôbo_Santos_de_Souza.pdf: 2464523 bytes, checksum: 254ccbec18e303f9fa6d5b9af58f4ab4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-09T14:40:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Catarina_Lôbo_Santos_de_Souza.pdf: 2464523 bytes, checksum: 254ccbec18e303f9fa6d5b9af58f4ab4 (MD5) / Introdução: A quimioterapia adjuvante é tratamento de escolha para destruição das micro-metástases não detectáveis ao diagnóstico do câncer. Este tratamento parece induzir ganho de peso e influenciar negativamente os compartimentos corporais em mulheres com diagnostico do câncer de mama. Objetivo: verificar a ocorrência de alterações no peso, composição e distribuição de gordura corporal em mulheres submetidas à quimioterapia adjuvante para o câncer de mama, assim como investigar seus fatores associados. Métodos: estudo longitudinal avaliou vinte e sete mulheres, com diagnostico de câncer de mama, em três momentos: T0- antes, T1- durante e T2- após conclusão da quimioterapia adjuvante. Foram realizadas medidas antropométricas de peso, altura, circunferência da Cintura (CC), circunferência do quadril (CQ), circunferência do braço (CB) e pregas cutâneas. Foi avaliado o consumo calórico por registro alimentar, nível de atividade física pelo International Physical Activity Questionnare (IPAQ). Além disso, foi colhido em prontuário estadiamento clínico (EC), receptividade hormonal (RH), protocolo quimioterápico e uso de corticoides. As mulheres informaram o estado climatérico. A análise estatística descritiva foi apresentada em media, desvio-padrão e distribuição proporcional. As diferenças nas médias das variáveis dependentes (peso, CC, RCQ e gordura corporal) nos momentos de avaliação (T0, T1 e T2) foram verificadas por Anova de medidas repetidas. O Modelo Linear Misto para dados de medidas repetidas foi utilizado para explicar as alterações das variáveis dependentes em função das variáveis independentes (nível de atividade física, consumo alimentar, EC, RH e estado climatérico). Resultados: A maior parte das mulheres era pré-menopausada (59,3%), em EC II (59%), receptoras de estrogênio positivo (74%), ativas (59,3%), utilizaram protocolo quimioterápico AC-T(66,7%), corticoide no regime quimioterápico (77,8%), com consumo calórico 1568,53 kcal/dia. Foi verificado que o peso, a CC e a gordura corporal tiveram aumento entre o momento intermediário e final da quimioterapia (T1-T2) de 1,95kg (p=0,01), 2,04 cm (p=0,04), 1,15kg (p=0,02), respectivamente. A diferença entre os valores médios da RCQ não foram estatisticamente significante nos momentos de avaliação (p=0,92). O consumo calórico foi à única variável independente relacionada com a mudança nas medidas de peso e gordura corporal total. Não foi encontrado fator que se relacionasse com a elevação na CC. Conclusão: Sabendo-se que existem efeitos adversos no estado nutricional após submissão à quimioterapia adjuvante, recomendam-se práticas e políticas públicas de intervenção nutricional no combate ao ganho de peso e obesidade em mulheres diagnosticadas com câncer de mama.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-05T23:10:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 318382.pdf: 1686846 bytes, checksum: 51ac5e51f122726f40392a9cb814daf3 (MD5) Previous issue date: 2013 / No presente trabalho transfectamos uma cepa de Leishmania amazonensis com um plasmídeo contendo o gene da ?-galactosidase, visando estabelecer um ensaio colorimétrico para triagem de compostos ativos contra amastigotas intracelulares de leishmania. A transfecção não alterou o crescimento de promastigotas em cultura, a infectividade de células THP-1 e de camundongos Balb/c. A atividade da enzima foi diretamente proporcional ao número de parasitos. A inibição do crescimento dos parasitos intracelulares pelo fármaco de referência Anfotericina B, determinada tanto pelo método colorimétrico quanto por contagem microscópica dos parasitos, produziu resultados semelhantes, validando o ensaio. O teste colorimétrico também foi aplicado com sucesso para avaliar a atividade de uma classe de moléculas análogas e derivadas do ácido gálico. O estudo da correlação estrutura atividade mostrou que estas moléculas possuem uma atividade leishmanicida pouco seletiva. Algumas melhorias como a transfecção integrativa e estável, bem como padronização deste método com outras espécies de Leishmania ainda são desejáveis. Contudo, o ensaio com L. amazonensis expressando ?-galactosidase foi robusto, sensível, reprodutível e rápido na avaliação da atividade leishmanicida de compostos <br>

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-24Bitstream added on 2014-06-13T19:04:09Z : No. of bitstreams: 1 marcondes_jpc_dr_botfm.pdf: 345309 bytes, checksum: 8feb5bc849ad4ec9e213cb66ca068172 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os linfomas representam um grupo heterogêneo de tumores que acometem o tecido linfóide nodal e extranodal. O tratamento, baseado na utilização da poliquimioterapia associada ou não à radioterapia, tem proporcionado altas taxas de cura. Entretanto, é sabido que tais terapias podem induzir mutações genéticas que, mais tarde, podem ser responsáveis pelo desenvolvimento de neoplasias secundárias. Assim sendo, o presente estudo objetivou avaliar os efeitos tardios das terapias antineoplásicas para linfomas. Para isso, foram investigados os danos no DNA e a capacidade de reparo da molécula pelo teste do cometa, e a relação entre polimorfismos e expressão de dois genes de reparo do DNA - XRCC1 (codons 280 e 399) e hOGG1 (codon 326) – com os níveis de lesões genotóxicas. A casuística do estudo incluiu 3 grupos de indivíduos: 14 pacientes recém-diagnosticados com linfoma e antes de qualquer tratamento antineoplásístico (grupo pré-terapia); 29 pacientes com história de linfoma e que haviam finalizado o tratamento há no mínimo 2 anos (histopatologicamente negativos para neoplasia; grupo pós-terapia); 29 indivíduos saudáveis pareados por sexo, idade e hábito tabagista (grupo controle). Os resultados mostraram que os pacientes com diagnótico ou história de linfoma (pré e pós-terapia, respectivamente), apresentavam níveis aumentados de danos no DNA quando comparados aos indivíduos saudáveis. Esses dados evidenciam a relação entre a presença da doença e lesões no DNA, e que mesmo com diagnóstico negativo, os indivíduos com história de linfoma apresentam níveis aumentados de genotoxicidade até, em média, sete anos após o término da terapia. A menor capacidade de reparo do DNA observada nos pacientes do grupo pós-terapia, e o menor nível de expressão dos genes XRCC1 e hOGG1 nos pacientes pré e pós-terapia, poderiam ser explicações para tais achados... / Lymphomas are a heterogenous group of malignancies that arise in nodal sites with or without extranodal involvement. The treatment, based on polychemotherapy associated or not with radiotherapy, has provided high cure rates. However, it is known that such therapies can induce genetic mutations that could be related to development of second malignancies. Therefore, the present study aimed to evaluate the late effects of antienoplastic therapies for lymphomas. DNA damage and repair capability as depicted by the comet assay, and the relationship between DNA repair genes polymorphisms (XRCC1 codons 280 and 399, hOGG1 codon 326) or gene expressions and the levels of DNA lesions were investigated. Three groups were included in this study: pre-therapy, with 14 patients newly diagnosed with lymphoma and before any antienoplastic; post-therapy, with 29 patients with history of lymphoma and who had finished treatment at least three years before blood collection (histopathologically negative for neoplasia); control, with 29 healthy subjects matched for age, sex and smoking habit. The results showed that patients from pre- and post-therapy groups presented higher amount of DNA damage than the healthy subjects. These data first indicated that individuals with lymphoma have high frequency of primary DNA lesion in lymphocytes, then, that even with negative histopathological diagnostic, patients with history of lymphoma presented increased DNA damage until the average of 7 years after the end of therapy. The reduced DNA repair capability and the low XRCC1 and hOGG1 expression observed in the post-therapy group could explain such findings. Furthermore, higher DNA repair capability was observed in those subjects with XRCC399arg/arg, XRCC1280arg/his and hOGG1326ser/ser genotypes. In conclusion, our data demonstrated that lymphomas were associated with high level of damage and low DNA repai... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-23. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:46:59Z : No. of bitstreams: 1 000828941_20180223.pdf: 246237 bytes, checksum: 69f2b55221a27bc97a05e593fbc263c5 (MD5) Bitstreams deleted on 2018-02-23T13:06:33Z: 000828941_20180223.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-02-23T13:07:24Z : No. of bitstreams: 1 000828941.pdf: 5791672 bytes, checksum: c31d8c70f8aa0a0104870a71c7ba408a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivo: Este estudo avaliou a influência de múltiplas sessões da Terapia com Laser em Baixa Intensidade (LLLT) coadjuvante a raspagem e alisamento radicular (RAR), e da terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) associada ou não ao tratamento mecânico de RAR, no tratamento da periodontite experimental (PE) em ratos submetidos à quimioterapia com 5-Fluorouracil. Materiais e Métodos: Duzentos e dezesseis ratos foram submetidos à indução da PE por meio de ligadura no primeiro molar inferior direito e esquerdo. Após 7 dias a ligadura foi removida e os animais separados aleatoriamente em 9 grupos: PE (n=24) - sem tratamento; 5FU-PE (n=24) - tratados sistemicamente com 5FU (60mg/kg e 40mg/kg); 5FU-PE-RAR (n=24) - tratados sistemicamente com 5-FU e com RAR; 5FU-PE-RAR-1LLLT (n=24) - tratados sistemicamente com 5-FU, com RAR seguida da LLLT (sessão única) (660 nm; 0,035 W; 4,2 J, 120 segundos; 1,23 W/cm2); 5FU-PE-RAR-4LLLT (n=24) - tratados sistemicamente com 5-FU, com RAR seguida da LLLT (0, 24, 48 e 72 horas); 5FU-PE-RAR-1aPDT (n=24) - tratados sistemicamente com 5-FU, com RAR e 1 episódio de aPDT (LLLT + azul de metileno); 5FU-PE-RAR-4aPDT (n=24) - tratados sistemicamente com 5-FU, com RAR e aPDT (0, 24, 48, 72 horas); 5FU-PE-1aPDT (n=24) - tratados sistemicamente com 5-FU seguida da aPDT; 5FU-PE-4aPDT (n=24) - tratados sistemicamente com 5-FU, seguida da aPDT (0, 24, 48, 72 horas). Oito animais de cada grupo foram eutanasiados aos 7, 15 e 30 dias após tratamento local. A área de perda óssea (PO) na região de furca foi analisada histometricamente, histologicamente e análise dos padrões de imunomarcação para TRAP, PCNA RANKL, OPG e CASP-3-AT foram realizadas. A quantificação da citocina PGE2 foi avaliada pelo ELISA e TNF-α e IL-6 foram avaliadas pelos Kits de ensaio Multiplex. A prevalência... / Objective: This study evaluated the influence of multiple sessions of Low Level Laser Therapy (LLLT), adjuvant to the scaling and root planing (SRP), and antimicrobial photodynamic therapy (aPDT), with or without the mechanical treatment of SRP, in the treatment of experimental periodontitis (EP) in rats treated with chemotherapy 5- fluorouracil (5-FU). Materials and methods: Two hundred and sixteen animals were subjected to induction of EP by ligature in mandibular first molar right and left. 7 days after the ligature was removed, the animals were randomly divided into 9 groups: EP (n=24) - no treatment; 5FU-EP (n=24) - systemically treated with 5-FU (60mg/kg and 40mg/kg); 5FU-EP-SRP (n=24) - systemically treated with 5-FU, with SRP; 5FU-EP-SRP-1LLLT (n= 24) - systemically treated with 5-FU, with SRP, followed by LLLT (single session) (660 nm, 0.035 W; 4.2 J, 120 seconds; 1.23 W/cm2); 5FU-EP-SRP-4LLLT (n= 24) - systemically treated with 5-FU, with SRP, followed by LLLT (0, 24, 48 and 72 hours); 5FU-EP-SRP-1aPDT (n=24) - systemically treated with 5-FU, with SRP, followed by one application of antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) (LLLT + methylene blue); 5FU-EP-SRP-4aPDT (n=24) - systemically treated with 5-FU, with SRP followed by aPDT (0, 24, 48, 72 hours); 5FU-EP-1aPDT (n=24) - systemically treated with 5-FU followed by aPDT; 5FU-EP-4aPDT (n=24) - treated systemically with 5-FU, followed by treatment with aPDT (0, 24, 48, 72 hours). Eight animals in each group were euthanized at 7, 15 and 30 days after local treatment. The area of bone loss (BL) in the furcation region was analyzed histometrically, histologically and analysis of immunostaining patterns for RANKL, OPG, TRAP, PCNA and CASP-3-AT were performed. Quantity of cytokine was measured by ELISA for PGE2 and TNF-α and IL-6 were evaluated by kits multiplex assays. The prevalence... / FAPESP: 12/05864-0 / FAPESP: 12/08649-3

Dissertação (mestrado)–Universidade de Brasília, Universidade UnB de Planaltina, Programa de Pós-Graduação em Ciência de Materiais, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-07-15T13:21:44Z No. of bitstreams: 1 2016_IsisPiresThomé.pdf: 1759165 bytes, checksum: 802581531ad1c8049db8b4a6e5545850 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-08-19T11:51:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_IsisPiresThomé.pdf: 1759165 bytes, checksum: 802581531ad1c8049db8b4a6e5545850 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-19T11:51:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_IsisPiresThomé.pdf: 1759165 bytes, checksum: 802581531ad1c8049db8b4a6e5545850 (MD5) / O câncer é uma doença muito agressiva que atinge milhões de pessoas no mundo. Entre os vários tipos de câncer, o carcinoma mamário é o segundo mais frequente no mundo e o que mais acomete as mulheres. A quimioterapia é uma abordagem terapêutica bastante empregada, especialmente no caso de doença metastática. Contudo, este tipo de tratamento apresenta limitações como falta de especificidade às células tumorais e ocorrência de quimioresistência. Por isso, faz-se necessário o desenvolvimento de tratamentos mais eficazes contra esta doença. Com o objetivo de melhorar a eficácia da quimioterapia para aumentar a expectativa de vida dos pacientes, várias propostas têm sido sugeridas. Os complexos metálicos vêm se mostrando agentes antitumorais promissores. Dentre eles, os complexos de Rutênio (Ru), como o KP1019, têm se destacado, pois apresentam (1) capacidade em se ligar à biomoléculas como transferrina; (2) considerável labilidade química; (3) atuação em células que desenvolveram resistência à cisplatina e (4) capacidade em participar de reações de oxirredução permitindo a existência dos mais importantes estados de oxidação em meio biológico. No presente trabalho, foi realizada a síntese do KP1019 e sua caracterização por ressonância magnética nuclear (RMN). Além disso, avaliou-se o efeito citotóxico deste complexo em células murinas de carcinoma mamário (4T1) e normais de fibroblastos (NIH-3T3). A citotoxicidade do KP1019 foi avaliada por testes de viabilidade celular por meio do método colorimétrico de MTT. As células foram tratadas com doses que variaram de 1,25 a 200 μM de KP1019 e cisplatina por períodos de 24, 48 e 72 horas. O KP1019 foi sintetizado e depois caracterizado por RMN e avaliado quanto à sua toxicidade. Após 24 h de tratamento, KP1019 induziu citotoxicidade semelhante à cisplatina em ambas as linhagens celulares. Além disso, notou-se que as linhagens 4T1 e NIH-3T3 tiveram a mesma sensibilidade ao tratamento com KP1019. No período de 48 horas, o KP1019 induziu diferente citotoxicidade nas duas linhagens, sendo que este não apresentou citotoxicidade para 4T1, enquanto que a cisplatina foi mais citotóxica para esta linhagem (doses acima de 12,5 μM). Em contrapartida, o KP1019 foi mais citotóxico para NIH-3T3 em doses a partir de 25 μM. Já no período de 72 horas, ambos os complexos foram similarmente citotóxicos em ambas as linhagens celulares a partir das doses 12,5 μM. Além disso, o efeito citotóxico de KP1019 e cisplatina foram diferentes na linhagem 4T1 (doses 1,25 e 2,5 μM). Ademais, a morfologia das células 4T1 foi analisada em microscópio óptico após tratamento por 24 horas com 20 μM de KP1019 ou cisplatina (IC50) e observou-se várias alterações relacionadas à citotoxicidade como arredondamento das células e aumento na quantidade de vesículas citoplasmáticas. Dessa forma, sugere-se que o efeito citotóxico de KP1019 foi dependente da dose, linhagem celular e tempo avaliados e, esta citotoxicidade está associada a alterações morfológicas provenientes de processo de morte celular, o que reforça o excelente potencial de KP1019 para uso na quimioterapia do câncer de mama. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cancer is a very aggressive disease that affects millions of people worldwide. Among the various types of cancer, breast cancer is the second most frequent in the world and that most affects women. Chemotherapy is fairly a therapeutic approach employed, particularly for metastatic disease. However, this treatment has limitations such as lack of specificity for tumor cells and occurrence of chemoresistance. Therefore, it is necessary to develop more effective treatments for this disease. In order to improve the effectiveness of chemotherapy to increase the life expectancy of patients, various proposals have been suggested. The metal complexes have shown to be promising antitumor agents. Among them, the complexes of ruthenium (Ru) as the KP1019, have been highlighted as present (1) the ability to bind to biomolecules such as transferrin; (2) substantial chemical lability; (3) operating in cells that have developed resistance to cisplatin and (4) the ability to participate in redox reactions allowing the existence of the most important oxidation states in biological medium. In the present work, the synthesis of KP1019 and its characterization by nuclear magnetic resonance imaging was performed (NMR). In addition, it evaluated the cytotoxic effect of this complex on murine mammary carcinoma cells (4T1) and normal fibroblasts (NIH-3T3). The cytotoxicity of KP1019 was evaluated by cell viability tests using the MTT colorimetric method. Cells were treated with doses ranging from 1.25 to 200 mM of KP1019 and cisplatin for periods of 24, 48 and 72 hours. The KP1019 was synthesized and then characterized by NMR and evaluated for their toxicity. After 24 h of treatment, KP1019 induced cytotoxicity similar to cisplatin in both cell lines. Furthermore, it was observed that the 4T1 and NIH-3T3 lines showed the same sensitivity to treatment with KP1019. Within 48 hours, the KP1019 induced cytotoxicity in two different strains, and this showed no cytotoxicity for 4T1, while cisplatin was more cytotoxic to this strain (over 12.5 uM doses). In contrast, KP1019 was more cytotoxic to NIH-3T3 at doses from 25 uM. In the 72-hour period, both complexes were cytotoxic similar in both cell lines from 12.5 uM doses. Additionally, the cytotoxic effect of cisplatin were KP1019 and different in lineage 4T1 (doses 1.25 and 2.5 uM). Furthermore, the morphology of 4T1 cells was examined under an optical microscope after treatment for 24 hours with 20 uM of KP1019 or cisplatin (IC50) and observed several changes related to cytotoxicity and rounding of the cells and increasing the amount of cytoplasmic vesicles. Thus, it is suggested that the cytotoxic effect of KP1019 was dose-dependent cell line and evaluated time and this cytotoxicity is associated with morphologic changes from cell death process, which enhances the excellent potential KP1019 for use in cancer chemotherapy breast cancer.

Dissertação (mestrado)–Universidade de Brasília, Universidade UnB de Planaltina, Programa de Pós-Graduação em Ciência de Materiais, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2016-08-01T14:06:58Z No. of bitstreams: 1 2016_PriscillaAmaralGuede.pdf: 2007056 bytes, checksum: b00c37f76daad8abedd65974283257a0 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-08-02T22:17:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_PriscillaAmaralGuede.pdf: 2007056 bytes, checksum: b00c37f76daad8abedd65974283257a0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T22:17:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_PriscillaAmaralGuede.pdf: 2007056 bytes, checksum: b00c37f76daad8abedd65974283257a0 (MD5) / O câncer é uma doença extremamente agressiva. Entre os tipos de cânceres, o carcinoma mamário é o segundo mais frequente no mundo e o que mais ocorre no sexo feminino. Dessa forma, torna-se imperativo o estudo de medidas alternativas que visem o tratamento eficaz desta doença. Sabe-se que os tratamentos mais utilizados apresentam algumas limitações. Um dos grandes empecilhos enfrentados na quimioterapia, por exemplo, é a sua falta de especificidade em relação às células tumorais e a quimioresistência. Desse modo, com o objetivo de melhorar a eficácia da quimioterapia, várias propostas têm sido sugeridas e estudadas no intuito de oferecer melhor expectativa de vida e maior taxa de sobrevivência aos indivíduos. Complexos metálicos têm mostrado resultados promissores como agentes quimioterápicos para tratamento de câncer. Dentre eles, os complexos de rutênio (Ru) vêm se tornando cada vez mais atraentes porque além de apresentarem atividade anticancerígena, estes apresentam: (1) capacidade em mimetizar íons de ferro (Fe), se ligando a biomoléculas responsáveis por transportar o Fe, como a transferrina e a albumina e, dessa forma, íons de Ru são transportados mais especificamente nas células tumorais; (2) importante papel em reações de oxirredução, o que permite a existência dos mais importantes estados de oxidação em fluidos biológicos e (3) mecanismos de atuação que podem superar os problemas de resistência encontrados nas drogas de platina. Em nosso estudo, realizamos a síntese e a caracterização de NAMI-A por meio de ressonância magnética nuclear e por infravermelho, bem como avaliamos seu efeito citotóxico e citostático em células de carcinoma mamário murino da linhagem 4T1 (linhagem que apresenta potencial metastático) e normais de fibroblastos da linhagem NIH-3T3. A cisplatina foi usada como controle positivo. Para avaliar estes efeitos, inicialmente realizou-se testes de viabilidade celular por meio do ensaio colorimétrico de MTT. As células foram tratadas com doses que variaram entre 1,25 a 4000 μM por períodos de 24, 48 ou 72 horas. Notou-se que o NAMI-A foi citotóxico em doses acima de 200 μM e a partir de 48 h. Já a cisplatina apresentou-se mais citotóxica, pois inibiu a viabilidade celular a partir da dose de 50 μM em 24 h. Ainda, no tratamento com 250 a 4000 μM de NAMIA, a citotoxicidade foi proporcional ao aumento da dose sendo que, em 72 horas de tratamento, os efeitos citotóxicos foram mais pronunciados em células tumorais (4T1) do que em células saudáveis (NIH-3T3). Nas análises posteriores, adotamos avaliar apenas a linhagem 4T1 e a dose que inibiu 50% das células (IC50 – 1800 μM ± 0,7) no período de 24 h. Por conseguinte, analisamos os efeitos de NAMI-A sob a morfologia, fragmentação do DNA e perfil do ciclo celular por meio de análise em microscópio óptico e em citômetro de fluxo. Após 24 horas de exposição das células 4T1 com 1800 μM de NAMI-A foram observadas várias alterações morfológicas e estruturais como arredondamento das células, condensação da cromatina e aumento da quantidade de vesículas em relação ao controle. Além disso, notou-se um aumento da fragmentação do DNA e acúmulo de células na subfase G2, indicando o efeito citostático de NAMI-A e, mais uma vez, corroborando seu efeito citotóxico na linhagem tumoral. Portanto, sugerimos que o NAMI-A induziu citotoxicidade que foi dependente da dose, tempo e linhagem celular e também que este composto induziu alterações morfológicas e estruturais na célula e no seu DNA e ainda no perfil do ciclo celular. Assim, este estudo confirmou vários resultados relatados na literatura e agregou novas informações que poderão ser utilizadas em futuras investigações sobre o potencial antimetastático de NAMI-A em 4T1. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cancer is an extremely aggressive disease. Among the types of cancers, breast cancer is the second most frequent in the world and what occurs more in females. Thus, it becomes imperative to study alternative measures to the effective treatment of this disease. It is known that the most widely used treatments have some limitations. One of the major obstacles faced in cancer chemotherapy, for example, is their lack of specificity for the tumor cells and chemoresistance. Thus, in order to improve the efficacy of chemotherapy, several proposals have been suggested and studied in order to offer improved life expectancy and higher survival rate of individuals. metal complexes have shown promising results as chemotherapeutic agents for cancer treatment. Among them, the complex ruthenium (Ru) are becoming increasingly attractive because besides having anticancer activity, they present: (1) ability to mimic iron ions (Fe), by binding to biomolecules responsible for carrying Fe, such as albumin and transferrin, and thus Ru ions are transported more specifically in tumor cells; (2) important role in redox reactions, allowing the existence of the most important oxidation states in biological fluids, and (3) mechanisms of action which can overcome resistance problems found in platinum drugs. In our study, we performed the synthesis and characterization of NAMI-A by nuclear magnetic resonance and infrared, as well as evaluate their cytotoxic effect and cytostatic in murine mammary carcinoma cells 4T1 lineage (lineage that has metastatic potential) and normal fibroblast NIH-3T3 line. Cisplatin was used as a positive control. To assess these effects initially held cell viability tests using the colorimetric MTT assay. Cells were treated with doses ranging from 1.25 to 4000 uM for periods of 24, 48 or 72 hours. It was noted that the Nami-A was cytotoxic at doses above 200 uM and after 48 h. Since cisplatin had to be more cytotoxic therefore inhibited cell viability from the dose of 50 uM for 24 h. Furthermore, treatment with 250 to 4,000 uM Nami-A cytotoxicity was proportional to dose increase and, in 72 hours of treatment, the cytotoxic effects were more pronounced in the tumor cells (4T1) than in healthy cells (NIH -3T3). In later analyzes, we adopted to evaluate only the 4T1 line and the dose that inhibited 50% of the cells (IC50 - 1800 ± 0.7 uM) in 24 hour period. Therefore, we analyzed the effects Nami-A on the morphology, DNA fragmentation and cell cycle profile analysis by optical microscope and flow cytometry. After 24 hours of exposure of 4T1 cells with 1800 uM Nami-A were observed several morphological and structural changes such as cell rounding, chromatin condensation and increasing the amount of vesicles as compared to control. In addition, it was noted an increase in DNA fragmentation and cell accumulation in G2 subphase indicating the cytostatic effect Nami-A and, again, confirming its cytotoxic effect on the tumor. Therefore, we suggest that Nami-A induced cytotoxicity which was dose-dependent, time and cell lineage and also that this compound induced structural and morphological changes in the cell and its DNA and still in the cell cycle profile. This study confirmed several results reported in the literature and added new information that may be used in future research on the antimetastatic potential of NAMI-A in 4T1.

Orientador : Prof. Dr. Ricardo Antonio Tanhofer / Coorientador : Prof. Dr. Sandro José Ribeiro Bonatto / Dissetação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Fisiologia. Defesa: Curitiba, 28/08/2017 / Inclui referências : f. 65-78 / Resumo: Introdução: A quimioterapia usada no tratamento de neoplasias malignas pode provocar leucopenia, que pode levar à necessidade de suspensão do tratamento até a melhora da imunidade. Mesmo havendo muitos estudos que mostram o efeito imunomodulatório de alguns lipídios, pouco se sabe sobre os mecanismos envolvidos. Objetivos: Avaliar viabilidade/capacidade proliferativa dos linfócitos após período de incubação na presença de óleo de fígado de tubarão (OFT) ou óleo de peixe (OP) e/ou quimioterápico. Material e métodos: Células mononucleares do plasma de homens saudáveis com idade de 20 a 30 anos, foram obtidas e separadas em 12 grupos experimentais para avaliação da capacidade proliferativa (Alamar Blue®) em presença de óleo de peixe (OP) ou óleo de fígado de tubarão (OFT) (complexados com soro fetal bovino), associados ou não ao quimioterápico (Qt), com estímulo do mitógeno concanavalina A (ConA). Apoptose e necrose celular também foram avaliadas após 72 horas de incubação por citometria de fluxo, e a presença de AGPI n-3 no sobrenadante das células foi avaliada por HPLC. Os dados foram submetidos à análise de variância de uma via (ANOVA), seguida de pós-teste de Tukey, nível de significância p < 0,05. Resultados e discussão: Resultados obtidos com AlamarBlue® revelaram que linfócitos tratados com quimioterápico associado com OP ou OFT demonstraram maior viabilidade celular do que os submetidos apenas ao quimioterápico. As células tratadas com Qt1+OFT mantiveram-se 54%, 42% e 36% mais viáveis que as células tratadas apenas com quimioterápico, em 24, 48, e 72h, respectivamente. As tratadas com Qt1+OP apresentaram resultado ainda mais pronunciado, com aumento da viabilidade de 64%, 69% e 74% em 24, 48 e 72h, respectivamente. As células tratadas com Qt3+OFT mantiveram-se 38% e 45% mais viáveis que as células tratadas apenas com quimioterápico, em 24 e 72h, respectivamente. As tratadas com Qt3+OP apresentaram resultado ainda mais significativo, com aumento da viabilidade de 52%, 64% e 68% em 24, 48 e 72h, respectivamente. Por citometria foi possível observar que OP e OFT, após 72h de cultivo, associados ou não a Qt, foram capazes de reverter efeito pró-necrótico do quimioterápico em maior concentração. Os resultados obtidos por HPLC sugerem presença de efeito dependente e independente de incorporação dos ácidos graxos n-3 na membrana celular. Conclusão: OFT e OP foram capazes de se contrapor ao efeito do quimioterápico nas condições estudadas, sendo o efeito do OP mais pronunciado. Palavras-chave: Óleo de peixe, óleo de fígado de tubarão, quimioterapia, linfócitos. / Abstract: Introduction: Chemotherapy used in the treatment of malignant neoplasms promotes leukopenia, which may lead to treatment suspension until immunity improves. Although there are many studies that show the immunomodulatory role of some lipids, little is known about the mechanism. Objectives: To evaluate the viability / proliferative capacity of lymphocytes after the incubation period in the presence of shark liver oil (SLO) or fish oil (FO) and/ or chemotherapy. Material and methods: Plasma mononuclear cells from healthy men aged from 20 to 30 years were collected and separated into 12 experimental groups for the evaluation of proliferative capacity (Alamar Blue®) in the presence of fish oil (FO) or shark liver oil (SLO) (complexed with fetal bovine serum - FBS), associated or not to chemotherapy (Ct), stimulated by mitogen concanavalin A (ConA). Apoptosis and cell necrosis were also evaluated after 72 hours of incubation by flow cytometry and presence of n-3 PUFA in the cell supernatant by HPLC. For the statistical test, data were submitted to One-Way ANOVA, followed by Tukey post-test, significance level p<0.05. Results and discussion: Results obtained with AlamarBlue® revealed that lymphocytes treated with OP or OFT chemotherapy showed greater cell viability than those submitted to chemotherapy alone. Cells treated with Ch1 + SLO remained 54%, 42% and 36% more viable than cells treated with chemotherapy alone at 24, 48, and 72h, respectively. Those treated with Ch1 + FO presented an even more significant result, with a viability increase of 64%, 69% and 74% at 24, 48 and 72h, respectively. Cells treated with Ch3 + SLO remained 38% and 45% more viable than cells treated with chemotherapy alone, at 24 and 72h, respectively. Those treated with Ch3 + FO presented an even more significant result, with a viability increase of 52%, 64% and 68% at 24, 48 and 72h, respectively. By cytometry it was possible to observe that FO and SLO, after 72h of culture, associated or not to Ch, were able to revert pro-necrotic effect of the chemotherapeutic in higher concentration. The results obtained by HPLC suggest the presence of a dependent and independent effect of n-3 fatty acids incorporation into the cell membrane. Conclusion: SLO and FO were able to reverse chemotherapy effect under the investigated conditions, with the effect of OP being more pronounced. Keywords: Fish oil, Shark liver oil, chemotherapy, lymphocytes.

Resumo: Pesquisa qualitativa do tipo estudo de caso, que teve como objetivo descrever as ações de cuidado realizadas pelos sujeitos antes, durante e após a quimioterapia antineoplásica, desenvolvida em uma clínica privada de oncologia, localizada na cidade de Curitiba, Paraná, durante o período de 2010 a 2011. A amostra foi constituída por dez sujeitos, adultos, de ambos os sexos, que foram submetidos à quimioterapia antineoplásica por câncer de intestino e que haviam terminado o tratamento há mais de três meses. A coleta dos dados ocorreu nos meses de janeiro a maio de 2011, foi empregada a técnica relatos de vida, mediante entrevista narrativa. A idade dos sujeitos variou de 35 a 60 anos, seis eram do sexo masculino e quatro do feminino, e uma característica peculiar foi o elevado grau de escolaridade. A confluência das falas e a percepção e interpretação do pesquisador possibilitaram a definição das categorias revelação, adaptação e vivência da cura. Na categoria “revelação”, identificou-se uma fase de constantes incertezas com a suspeita de que algo fora do normal estava acontecendo com seus corpos, mas ao mesmo tempo tentava fugir ou encontrar outras respostas para os sinais e sintomas. As ações de cuidado desenvolvidas neste período foram abandono de hábitos inadequados, busca por exames diagnósticos, preocupação com a família, entre outros. O diagnóstico de câncer de intestino desencadeia angústia, ansiedade e medo da possibilidade da morte. Após o impacto do diagnóstico, vem a fase de adaptação às novas situações impostas pelo câncer de intestino, repleta de alterações na rotina de vida, com acréscimo de ações de cuidado e com a prevenção aos efeitos colaterais da quimioterapia antineoplásica. Para além das orientações e cuidados oriundos dos profissionais da saúde, os sujeitos buscaram na medicina alternativa complementar novas estratégias de cuidado. Com o término do tratamento, o sujeito vivencia a cura mas ainda convive com o fantasma do câncer, demonstrado pelo medo da recidiva. O retorno ao trabalho foi uma forma de ocupação da mente a fim de evitar as lembranças da doença e, também, uma demonstração de que são capazes de voltar à rotina anterior. O enfoque principal desse estudo foram as ações de cuidado que o sujeito realiza em prol do seu bemestar durante o tratamento do câncer de intestino. Estas puderam ser descritas nos relatos de vida obtidos, subsidiadas pelas informações repassadas pela equipe de saúde e transformadas de acordo com o conhecimento e experiências prévias dos sujeitos. Destaque para o enfermeiro, que, em sua prática profissional, orienta quanto à doença, tratamento, possíveis efeitos colaterais e cuidados necessários; também acolhe o sujeito e sua família, auxiliando no enfrentamento da doença, facilitando com isto a reabilitação.

Orientador: Letícia Helena Theodoro / Coorientador: Valdir Gouveia Garcia / Banca: Edilson Ervolino / Banca: Cristiane Duque / Banca: José Eduardo Cezar Sampaio / Banca: Renato Corrêa Viana Casarin / Resumo: Objetivo: Este estudo avaliou a influência de múltiplas sessões da Terapia com Laser em Baixa Intensidade (LLLT) coadjuvante a raspagem e alisamento radicular (RAR), e da terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) associada ou não ao tratamento mecânico de RAR, no tratamento da periodontite experimental (PE) em ratos submetidos à quimioterapia com 5-Fluorouracil. Materiais e Métodos: Duzentos e dezesseis ratos foram submetidos à indução da PE por meio de ligadura no primeiro molar inferior direito e esquerdo. Após 7 dias a ligadura foi removida e os animais separados aleatoriamente em 9 grupos: PE (n=24) - sem tratamento; 5FU-PE (n=24) - tratados sistemicamente com 5FU (60mg/kg e 40mg/kg); 5FU-PE-RAR (n=24) - tratados sistemicamente com 5-FU e com RAR; 5FU-PE-RAR-1LLLT (n=24) - tratados sistemicamente com 5-FU, com RAR seguida da LLLT (sessão única) (660 nm; 0,035 W; 4,2 J, 120 segundos; 1,23 W/cm2); 5FU-PE-RAR-4LLLT (n=24) - tratados sistemicamente com 5-FU, com RAR seguida da LLLT (0, 24, 48 e 72 horas); 5FU-PE-RAR-1aPDT (n=24) - tratados sistemicamente com 5-FU, com RAR e 1 episódio de aPDT (LLLT + azul de metileno); 5FU-PE-RAR-4aPDT (n=24) - tratados sistemicamente com 5-FU, com RAR e aPDT (0, 24, 48, 72 horas); 5FU-PE-1aPDT (n=24) - tratados sistemicamente com 5-FU seguida da aPDT; 5FU-PE-4aPDT (n=24) - tratados sistemicamente com 5-FU, seguida da aPDT (0, 24, 48, 72 horas). Oito animais de cada grupo foram eutanasiados aos 7, 15 e 30 dias após tratamento local. A área de perda óssea (PO) na região de furca foi analisada histometricamente, histologicamente e análise dos padrões de imunomarcação para TRAP, PCNA RANKL, OPG e CASP-3-AT foram realizadas. A quantificação da citocina PGE2 foi avaliada pelo ELISA e TNF-α e IL-6 foram avaliadas pelos Kits de ensaio Multiplex. A prevalência... / Abstract: Objective: This study evaluated the influence of multiple sessions of Low Level Laser Therapy (LLLT), adjuvant to the scaling and root planing (SRP), and antimicrobial photodynamic therapy (aPDT), with or without the mechanical treatment of SRP, in the treatment of experimental periodontitis (EP) in rats treated with chemotherapy 5- fluorouracil (5-FU). Materials and methods: Two hundred and sixteen animals were subjected to induction of EP by ligature in mandibular first molar right and left. 7 days after the ligature was removed, the animals were randomly divided into 9 groups: EP (n=24) - no treatment; 5FU-EP (n=24) - systemically treated with 5-FU (60mg/kg and 40mg/kg); 5FU-EP-SRP (n=24) - systemically treated with 5-FU, with SRP; 5FU-EP-SRP-1LLLT (n= 24) - systemically treated with 5-FU, with SRP, followed by LLLT (single session) (660 nm, 0.035 W; 4.2 J, 120 seconds; 1.23 W/cm2); 5FU-EP-SRP-4LLLT (n= 24) - systemically treated with 5-FU, with SRP, followed by LLLT (0, 24, 48 and 72 hours); 5FU-EP-SRP-1aPDT (n=24) - systemically treated with 5-FU, with SRP, followed by one application of antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) (LLLT + methylene blue); 5FU-EP-SRP-4aPDT (n=24) - systemically treated with 5-FU, with SRP followed by aPDT (0, 24, 48, 72 hours); 5FU-EP-1aPDT (n=24) - systemically treated with 5-FU followed by aPDT; 5FU-EP-4aPDT (n=24) - treated systemically with 5-FU, followed by treatment with aPDT (0, 24, 48, 72 hours). Eight animals in each group were euthanized at 7, 15 and 30 days after local treatment. The area of bone loss (BL) in the furcation region was analyzed histometrically, histologically and analysis of immunostaining patterns for RANKL, OPG, TRAP, PCNA and CASP-3-AT were performed. Quantity of cytokine was measured by ELISA for PGE2 and TNF-α and IL-6 were evaluated by kits multiplex assays. The prevalence... / Doutor

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, Laboratório de Interação Patógeno-Hospedeiro, 2014. / Submitted by Larissa Stefane Vieira Rodrigues (larissarodrigues@bce.unb.br) on 2014-11-11T17:03:56Z No. of bitstreams: 1 2014_BrinaPortugal.pdf: 5308132 bytes, checksum: 69ee6a201953bbfef580a53ab902a8fa (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-11-11T18:14:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_BrinaPortugal.pdf: 5308132 bytes, checksum: 69ee6a201953bbfef580a53ab902a8fa (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-11T18:14:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_BrinaPortugal.pdf: 5308132 bytes, checksum: 69ee6a201953bbfef580a53ab902a8fa (MD5) / A linha de pesquisa do nosso grupo visa à identificação e caracterização de alvos potenciais para a quimioterapia de doenças como a de Chagas, Dengue, Leishmaniose e Tuberculose tendo as proteases como principal enfoque, uma vez que estão envolvidas em processos biológicos fundamentais para a viabilidade e virulência de patógenos. Neste contexto, esta tese aborda alguns aspectos bioquímicos, estruturais e funcionais da prolil oligopeptidase de Mycobacterium tuberculosis, microrganismo responsável por desencadear uma resposta inflamatória característica da tuberculose. A prolil oligopeptidase de Mycobacterium tuberculosis (rPOPMt) revelou possuir atividade catalítica sobre o substrato N-Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-AMC, com uma atividade ótima a pH 7,5 e temperatura ótima a 28 °C. Aditivos como NaCl, DTT e íons não influenciaram a atividade enzimática da proteína. Os parâmetros cinéticos calculados para a enzima foram Km e kcat/Km de 108 μM e 21.838 mM-1 .s-1, respectivamente, com N-Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-AMC como substrato. Neste contexto, esta tese aborda alguns aspectos bioquímicos, estruturais e funcionais da prolil oligopeptidase de Mycobacterium tuberculosis, microrganismo responsável por desencadear uma resposta inflamatória característica da tuberculose. A prolil oligopeptidase de Mycobacterium tuberculosis (rPOPMt) revelou possuir atividade catalítica sobre o substrato N-Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-AMC, com uma atividade ótima a pH 7,5 e temperatura ótima a 28 °C. Aditivos como NaCl, DTT e íons não influenciaram a atividade enzimática da proteína. Os parâmetros cinéticos calculados para a enzima foram Km e kcat/Km de 108 μM e 21.838 mM-1 .s-1, respectivamente, com N-Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-AMC como substrato. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Our group aims to identify and characterize potential targets for chemotherapy for diseases such as Chagas disease, dengue, leishmaniasis and tuberculosis. Proteases are the main focus since they are involved in fundamental biological processes for viability and virulence of pathogens. In this context, this thesis reports some biochemical, structural and functional aspects of the prolyl oligopeptidase of Mycobacterium tuberculosis, the microorganism responsible for triggering an inflammatory response characteristic of tuberculosis. The prolyl oligopeptidase of M. tuberculosis (rPOPMt) showed catalytic activity towards the substrate N-Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-AMC, with optimal pH and temperature activity at 7.5 and 28 °C, respectively. Additives such as NaCl and DTT, and ions did not affect the enzymatic activity of the protein. The kinetic parameters for the enzyme using N-Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-AMC as substrate were calculated showing Km and kcat/km of 108 μM and 21.838 mM-1.s-1, respectively. The enzyme was only susceptible to serine protease inhibitors such as AEBSF and TPCK, with a residual activity of 33 and 66 %, respectively. In presence of Z-Pro-prolinal, a specific inhibitor of prolyl oligopeptidase, a Ki value of 16.87 nM was calculated. Studies of homology modeling and molecular dynamics permitted the achievement of POPMt theoretical structure, and as for other POPs, the structure possess two domains: the catalytic and β-propeller domain, moreover, the catalytic site comprises the triad Ser-Asp-His is conserved along POPs. When the recombinant protein was used in a vaccine formulation with CpG DNA, it was observed a higher level of IgG2a antibody known as a marker for Th1-type immune response. The immunomodulatory properties of POPMt in triggering immune responses in vitro shows that the secretion of cytokines analyzed, TNF-α, IL-6, IL-12p70, IL-23, IL-10, IL-1β and MCP-1 induced by POPMt were largely dependent on the activity of the enzyme. Thus, the recombinant protein can help to determine the role of the native POP in M. tuberculosis.