Les microARN constituent une classe de petits ARN non codants d'une vingtaine de nucléotides, issus de transcrits cellulaires, qui inhibent l'expression de gènes cibles au niveau post-transcriptionnel. Chez les mammifères, bien qu'ils puissent agir sur une cible parfaitement complémentaire (mode parfait), les microARN ont presqu'exclusivement des cibles partiellement complémentaires (mode imparfait). Puisqu'en mode imparfait une coupure endonucléolytique de la cible est impossible, il est généralement proposé que le mode imparfait soit moins efficace que le mode parfait : conduisant à un silencing moins efficace, nécessitant plus de complexes effecteurs (miRISC) et facilement saturable par une augmentation du nombre de cible. Dans ce travail j'ai développé une approche expérimentale reposant sur l'expression de protéines fluorescentes pour mesurer précisément le silencing au niveau de chaque cellule. J'ai fait trois observations inattendues sur l'efficacité de la régulation par les microARN : i) le silencing en mode parfait et imparfait nécessite des quantités similaires de petit ARN, ii) une augmentation, même très importante, de l'expression du gène cible ne lui permet pas d'échapper à la régulation, iii) le silencing n'est pas intrinsèquement plus faible en mode imparfait (qu'en mode parfait) mais n'est pas actif dans toutes les cellules. Si les deux premiers points sont facilement explicables dans le cadre de l'induction de la dégradation de l'ARNm cible sur un mode catalytique via la déadénylation de l'ARNm, le troisième indique l'existence d'une régulation forte du silencing qui est spécifique du mode imparfait. De plus, comme dans les deux modes le silencing dépend principalement du même partenaire, Ago2, cette régulation intervient après l'assemblage du complexe minimal (Ago2/petit ARN). Ainsi, les différences entre les modes parfait et imparfait ne se situent pas au niveau proposé puisque lorsque la cellule est compétente, leurs efficacités sont comparables. Par contre, mes travaux mettent en évidence l'existence d'un contrôle de la régulation en mode imparfait dont la nature reste à préciser.

La quantité de données générée dans le cadre d'étude à grande échelle du réseau d'interaction protéine-protéine dépasse notre capacité à les analyser et à comprendre leur sens; d'une part, par leur complexité et leur volume, et d'un autre part, par la qualité du jeu de donnée produit qui semble bondé de faux positifs et de faux négatifs. Cette dissertation décrit une nouvelle méthode de criblage des interactions physique entre protéines à haut débit chez Saccharomyces cerevisiae, la complémentation de fragments protéiques (PCA). Cette approche est accomplie dans des cellules intactes dans les conditions natives des protéines; sous leur promoteur endogène et dans le respect des contextes de modifications post-traductionnelles et de localisations subcellulaires. Une application biologique de cette méthode a permis de démontrer la capacité de ce système rapporteur à répondre aux questions d'adaptation cellulaire à des stress, comme la famine en nutriments et un traitement à une drogue. Dans le premier chapitre de cette dissertation, nous avons présenté un criblage des paires d'interactions entre les protéines résultant des quelques 6000 cadres de lecture de Saccharomyces cerevisiae. Nous avons identifié 2770 interactions entre 1124 protéines. Nous avons estimé la qualité de notre criblage en le comparant à d'autres banques d'interaction. Nous avons réalisé que la majorité de nos interactions sont nouvelles, alors que le chevauchement avec les données des autres méthodes est large. Nous avons pris cette opportunité pour caractériser les facteurs déterminants dans la détection d'une interaction par PCA. Nous avons remarqué que notre approche est sous une contrainte stérique provenant de la nécessité des fragments rapporteurs à pouvoir se rejoindre dans l'espace cellulaire afin de récupérer l'activité observable de la sonde d'interaction. L'intégration de nos résultats aux connaissances des dynamiques de régulations génétiques et des modifications protéiques nous dirigera vers une meilleure compréhension des processus cellulaires complexes orchestrés aux niveaux moléculaires et structuraux dans les cellules vivantes. Nous avons appliqué notre méthode aux réarrangements dynamiques opérant durant l'adaptation de la cellule à des stress, comme la famine en nutriments et le traitement à une drogue. Cette investigation fait le détail de notre second chapitre. Nous avons déterminé de cette manière que l'équilibre entre les formes phosphorylées et déphosphorylées de l'arginine méthyltransférase de Saccharomyces cerevisiae, Hmt1, régulait du même coup sont assemblage en hexamère et son activité enzymatique. L'activité d'Hmt1 a directement un impact dans la progression du cycle cellulaire durant un stress, stabilisant les transcrits de CLB2 et permettant la synthèse de Cln3p. Nous avons utilisé notre criblage afin de déterminer les régulateurs de la phosphorylation d'Hmt1 dans un contexte de traitement à la rapamycin, un inhibiteur de la kinase cible de la rapamycin (TOR). Nous avons identifié la sous-unité catalytique de la phosphatase PP2a, Pph22, activé par l'inhibition de la kinase TOR et la kinase Dbf2, activé durant l'entrée en mitose de la cellule, comme la phosphatase et la kinase responsable de la modification d'Hmt1 et de ses fonctions de régulations dans le cycle cellulaire. Cette approche peut être généralisée afin d'identifier et de lier mécanistiquement les gènes, incluant ceux n'ayant aucune fonction connue, à tout processus cellulaire, comme les mécanismes régulant l'ARNm. / The quantity of data generated within the framework of protein-protein interaction network large-scale studies exceeds our capacity to analyze them and to understand their meaning; on one hand, by their complexity and their number, and on the other hand, by the quality of the produced data, which are populated with spurious interactions. This dissertation describes new applications of a protein-fragments complementation assay (PCA) to screen for interactions among all proteins in the budding yeast Saccharomyces cerevisiae. This approach is carried out in intact cells, with proteins expressed in their native contexts and under their endogenous promoter, thus assuring correct post-translational modifications and subcellular localization. A further novel application of PCA is described for investigating proteome wide changes in response to cellular adaptation to stresses, such as nutrient starvations and drug treatments. Finally, as a result of the latter strategy applied to characterizing proteome-wide response to the immunosuppressant drug, rapamycin, I describe the discovery of an unforeseen mechanism of modulating cell cycle progression through control of cyclin mRNA stability. In the first chapter of this dissertation, I present a pairwise screen of interactions among proteins resulting from the ~6000 open reading frames in Saccharomyces cerevisiae. We identified 2770 interactions among 1124 proteins. We estimated the quality of our screen by comparing our results to curated gold standard data and coverage of known interactions to all previous studies. The majority of our interactions were novel, but overlap with data from previous studies was as high as 40%. PCA is based on refolding of the reporter protein from complementary N- and C- terminal fragments following interaction of the two proteins to which they are fused. Thus, reporter activity is sterrically limited to interactions in which the termini of the proteins to which the complementary reporter fragments are fused are sufficiently close in space. In the case of our reporter, this limit was 8 nm. Thus PCA is a molecular ruler, providing information on both direct protein-protein interactions and sterrically restricted distances between proteins in complexes. We benchmarked and demonstrated correct topological relationships for a number of known complexes, including the proteasome, RNA polymerase II and the nuclear pore complex. Thus our study provided, for the first time, a topological map of complex organization in a living cell. The integration of the results from such efforts with those of gene regulation dynamics and protein modifications will lead to a fuller understanding of how complex cellular processes are orchestrated at a molecular and structural level in the living cell. In chapter 2, I describe the results of an application of PCA to study the dynamic rearrangement of the proteome under a specific stress; treatment of cells with rapamycin. The results of these efforts were the identification of a novel mechanism of cell cycle control at the level of cyclin mRNA. Specifically, we discovered that the balance between the phosphorylated and dephosphorylated forms of the Saccharomyces cerevisiae arginine methyltransferase, Hmt1, regulates both its assembly into a hexamer and its enzymatic activity. The Hmt1 activity modulates cell cycle progression through stabilizing the B cyclin CLB2 mRNA. We then used PCA to identify the Hmt1 regulators under rapamycin treatment. We identified the catalytic subunit of the PP2a phosphatase, Pph22, activated by the inhibition of TOR, and the kinase Dbf2, activated during entry into mitosis, as the phosphatase and the kinase responsible for the modification of Hmt1 and for its regulatory functions in the cell cycle. I thus, in the end close the circle I began in this summary, going from large-scale discovery of protein-protein interactions, to mapping dynamics of proteome changes during an adaptation and finally to mechanistic insight into a primordial control mechanism in cellular dynamics. The strategies that we devised to discover this mechanism can be generalized to identify and mechanistically link genes together, including those of unknown function, to any cellular process.

Au cours de mes travaux de thèse, je me suis penché sur le pendant génétique de l'adaptation. Certes, les mutations sont générées au hasard; mais quelles sont celles que l'évolution retient et pourquoi? Peut-on définir certains principes qui déterminent les chemins génétiques favoris qu'emprunte et ré-emprunte l'évolution ? Ces principes génétiques bornent-ils parfois le jeu des adaptations possibles ? Le substrat génétique qui nourrit la sélection est-il le même lorsqu'il s'agit de l'émergence d'un caractère nouveau ou bien lorsqu'il s'agit de la diversification ou le raffinement d'un caractère existant ?Pour répondre à ces questions, je me suis penché sur des drosophiles à pois noirs. En particulier, des drosophiles du groupe melanogaster, dont un ancêtre s'est paré d'une tache noire sur le bout de l'aile, il y a environ 20 millions d'années. Cette tache s'est transmise de génération en génération, en se modifiant de façon spectaculaire dans certaines lignées.J'ai d'abord tenté de mettre à jour la logique génétique du bricolage qui a fondé l'émergence puis la diversification de cette tache. Ces travaux suggèrent un modèle général dans lequel les deux versants de l'adaptation, émergence et diversification, correspondent à deux bricolages génétiques distincts.Dans un deuxième temps, je me suis concentré sur l'émergence de cette tache. Ce travail en cours a permis de dégager certaines caractéristiques génétiques du module de régulation qui sous-tend le développement de cette tache. Mon travail de thèse contribue, dans son ensemble, à une meilleure compréhension des ressorts génétiques sur lesquels repose l'adaptation. / In my thesis, I studied the genetics of adaptation. Certainly, mutations are randomly generated, yet evolutionary relevant mutations are not randomly distributed; why? Can we define some principles that determine the most favorable genetic paths, in the light of evolution? Would these principles sometimes limit the range of possible adaptations? Are mutations that feed emergence of a new character and diversification or refinement of an existing character the same? To answer these questions, I studied fruit flies with black spots. In particular, fruit flies from the melanogaster group, whose ancestor evolved a black spot on the tip of its wing, about 20 million years ago. This spot has been inherited through generations, and diversified dramatically in some lineages.I first tried to uncover the logic of genetic tinkering underlying the emergence and diversification of the spot. Our results suggest a general model in which the two sides of adaptation, emergence and diversification, correspond to two distinct genetic tinkering.Second, I focused strictly on the emergence of this spot. This ongoing work has identified some general genetic features of the regulatory module underlying the development of this spot.Overall, my thesis contributes to a better understanding of the genetics of adaptation.

Regulatory T cells (Tregs) are a subpopulation of T cells with immuno-suppressive properties. Tregs play a key role in immune response regulation and tolerance to antigens, thereby preventing autoimmunity, and may be partly responsible for the lack of an appropriate immune response against tumor cells. However, a human microRNA (miR) Treg signature has not been described yet. We investigated human natural Tregs and identified a signature composed of five microRNAs (-21, -31, -125a, -181c and -374). Among those, two were considerably under-expressed (miR-31 and miR-125a). We identified a functional target sequence for miR-31 in the 3’ untranslated region (3’ UTR) of FOXP3 mRNA. Using lentiviral transduction of fresh cord blood T cells, we demonstrated that miR-31 and miR-21 had opposite effects on FOXP3 expression. We showed that miR-31 negatively regulates FOXP3 expression by binding directly to its potential target site in the 3’ UTR of FOXP3 mRNA. We next demonstrated that miR-21 acted as a positive, though indirect, regulator of FOXP3 expression.<p>Recent reports have shown that histone deacetylase inhibitors increased FOXP3 expression in T cells. We therefore decided to investigate in non-Treg CD4-positive cells, the mechanisms by which an aspecific opening of the chromatin could lead to an increased FOXP3 expression. We focused on the binding of potentially activating transcription factors to the promoter region of FOXP3 and on modifications in the five miRs constituting the Treg signature. Valproate treatment induced binding of Ets-1 and Ets-2 transcription factors to the FOXP3 promoter and acted positively on its expression, by increasing the acetylation of histone H4 lysines. Valproate treatment also induced the acquisition of the miRs of Treg signature. To elucidate whether the changes in the miRs expression could be due to the increased FOXP3<p>expression, we transduced these non-Tregs with a FOXP3 lentiviral expression vector, and found no changes in miRs expression. Therefore, the modification in their miR expression profile is not due to an increased expression of FOXP3 but directly results from histone deacetylase inhibition. Rather, the increased FOXP3 expression results from the additive effects of Ets factors binding and the change in the expression level of miR-21 and miR-31. These data, by allowing a better understanding of the molecular phenomena underlying the number and function of Tregs, could open the door to novel therapeutic approaches in cancer immunotherapy and treatment of autoimmune disorders. / Doctorat en Sciences / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Développer la capacité de régulation de l'allure est un enjeu important en Education Physique et Sportive (EPS), notamment dans un objectif d'autonomie et de santé. Peu d'études s'attachent pourtant à proposer des méthodes pour y parvenir. Les différentes travaux de cette thèse ont pour objectifs de mieux comprendre les fondements des capacités de régulation émotionnelle et de l'allure, de proposer une méthode visant à leur acquisition et un outil d'estimation du niveau de motivation. En plus de la perception de l'effort (RPE) et du plaisir (P), nous avons testé l'évolution de l'envie de continuer (EDC) et d'arrêter l'exercice (EDA) dans différentes conditions expérimentales lors de courses intermittentes de 3 à 15 minutes autorégulées et semi-contrôlées chez des étudiants et des lycéens. Une performance maximale était demandée pour chaque test. Les résultats de nos études montrent que l'utilisation de ces paramètres présente un intérêt en EPS. Les élèves font varier leur réserve émotionnelle d'un niveau élevé vers un niveau faible du début à la fin des différentes courses mais conservent un niveau de réserve trop important pour la réalisation d'une performance maximale car ils privilégient le but de maîtrise prioritairement au but de performance. De façon illogique, les élèves s'investissent plus pour les durées de courses élevées du fait d'une discordance entre la représentation des capacités et celle de la tâche. De ce fait, un travail visant à optimiser le niveau d'investissement est à privilégier chez les élèves en EPS. Ainsi, le fait d'imposer une perception de l'effort durant les courses semi-contrôlées au moins égale au niveau moyen consenti lors des tests autorégulés de durées équivalentes suffit pour améliorer la performance (+14,2% et + 14,5% pour les courses de 3 et 6 minutes respectivement). La consigne consistant à imposer une RPE minimale correspondant à 120% de la RPE moyenne observée lors des courses autorégulées semble être le compromis idéal durant des courses intermittentes de 3 et 6 minutes (+ 18,4% et 18,5% pour les courses de 3 et 6 minutes respectivement). Ces améliorations obtenues en une seule séance sont bien supérieures à celles espérées durant un cycle entier d'EPS consacré au développement des ressources physiologiques. La détermination du rapport entre l'envie de continuer et le niveau de perception de l'effort constitue une bonne estimation du niveau de motivation à poursuivre l'exercice fatiguant. / Pacing strategy is of great importance for physical education, especially for health and autonomy. Rather, few studies have attempted to propose metbods to develop this capacity . The aims of this thesis were to better understand pacing strategy and emotional regulation, to develop novel methods to improve it and to estimatc the level of motivation. Rating of perceived exertion (R.PE), but also pleasure, the desire to stop and the desire to continue the exercise were used in different self-paced and semi-controlled 3 to 15 min runs. Secondary students bave to reach maximal performance for each test. Results showed that the use of these novel emotional parameters was of importance in physical educarion. The strategy which correspond to the evolution of emotional reserve between high to low level with time have been used by school participants even if emotional reserve is still conserve at the end of exercise in all conditions. Wbat is surprising is that the investment is more important for long than during short duration exercises. Optimal strategics for short runs have been developed in school participants. Performance was improved when a minimal RPE was imposed (+14.2% and + 14,5% for 3 and 6 minute runs: RPE ≥ average value of the self-paccd run). 120% of the average RPE of the self-pace run seems to be the optimal during 3 and 6 min runs (+18,4% and 18,5% for 3 and 6 min runs). These improvements, obtained after only 1 session, are more important than what could be hoped when training consists in developing physiological adaptations. The determination of the ratio between the desire 10 continue and R PF. seems to be a good estimation of the level of intensity during exercise

Le premier chapitre montre l'interdépendance sur le marché locatif entre le formalisme procédural (FP) et les réseaux sociaux locaux. Tandis que le FP augmente le coût de résolution des conflits juridiques entre propriétaires et locataires, les réseaux sociaux présentent l'avantage de pouvoir régler un conflit sans la justice. Le FP permet de rendre plus intéressant aux yeux du propriétaire les individus appartenant à un réseau social. Le deuxième chapitre explique l'importance du soleil sur la demande de régulation du marché locatif. Les pays d'Europe du sud très ensoleillés sont attractifs de par leur douceur de vie. Cette immigration potentielle augmente la tension sur le marché locatif. Pour la réduire, les individus d'Europe du sud développent une complémentarité entre capital social local et régulation. Cette stratégie explique un équilibre méditerranéen où le capital social local et le FP sont élevés. A contrario, l'absence d'attractivité des pays faiblement ensoleillés explique un équilibre anglo-saxon et scandinave aux caractéristiques opposées. Le troisième chapitre explique le soutien pour la régulation du marché du travail par la présence de régulations sur le marché locatif. Lorsque ce dernier est très régulé, les propriétaires sélectionnent les locataires selon leur capacité à payer le loyer. Protéger les contrats à durée indéterminée oblige les entreprises à sélectionner les travailleurs et permet alors aux propriétaires de mieux estimer le risque individuel de licenciement. Nous construisons un modèle où les individus sans emploi demandent plus de régulations et de protections en dépit de l’augmentation du chômage et de la part des contrats temporaires. / The first contribution studies the complementarities between the strength of social networks and the stringency of procedural formalism. While procedural formalism increases the cost of legal dispute resolution between landlords and tenants, social networks allow conflicts to be solved without recourse to justice. Procedural formalism is thus a way to provide a market advantage to local individuals embedded in dense local social networks at the expense of nonlocal agents without access to such networks.The second contribution deals with the importance of the sun on the demand for regulation in the rental market. Southern European countries with good climate amenities are attractive by their mildness of life. This potential immigration increases the pressure on the rental market. To reduce it, individuals in Southern Europe develop complementarities between social capital and local regulations. This strategy explains a Mediterranean equilibrium characterized by high levels of local social capital and procedural formalism. Conversely, the lack of attractiveness of countries with low climate amenities leads to an Anglo-Saxon and Scandinavian equilibrium with opposite features.The third contribution explains the support for labor market regulation by the presence of regulations on the rental market. When the rental market is very regulated, landlords screen applicants with regard to their ability to pay the rent. Protecting regular jobs offers a second-best technology to sort workers, thereby increasing the rental market size. We provide a model where non-employed workers demand protected jobs despite unemployment and the share of short-term jobs increase.

Le présent travail a pour objectif de mesurer les effets du sevrage précoce des porcelets sur la taille de portée suivante d'une truie dans le but de tenir compte de cet effet environnemental dans les évaluations génétiques à l'aide d'un modèle animal-BLUP. Les effets de la longueur de lactation et de l'intervalle sevrage-saillie fécondante (ISSF) sur la taille de portée subséquente d'une truie ont d'abord été estimés en utilisant un modèle animal à partir de données provenant de deux troupeaux de sélection de Génétiporc pratiquant simultanément deux types de sevrage : le MMEW (lactation de moins de 14 jours, habituellement pas d'accouplement avant le deuxième œstrus) ou le sevrage conventionnel (truies sevrées après au moins 14 jours de lactation, habituellement accouplement au premier œstrus). Ces effets ont été estimés séparément pour les races Landrace et Yorkshire. Des effets linéaire, quadratique et logarithmique de la longueur de lactation sur la taille de portée suivante ont été examinés. L'effet de l'ISSF sur la taille de portée suivante a été étudié en utilisant une méthode basée sur des variables à seuil et une approche utilisant des polynômes segmentés. Dans le but de valider si les effets du type de sevrage pouvaient être généralisés à un ensemble de troupeaux ayant des techniques d'élevage différentes, les mêmes types d'analyses ont été faits, cette fois-ci en considérant des portées provenant d'une centaine de troupeaux québécois du programme PEG (Programme d'Évaluation Génétique). L'analyse des données de deux troupeaux de Génétiporc a montré des effets importants de la longueur de la lactation et de l'ISSF sur la taille de portée suivante. Ces effets, allant jusqu'à 0,8 porcelet/portée pour la longueur de la lactation et jusqu'à 1 porcelet/portée pour l'ISSF, étaient beaucoup plus prononcés chez les Landrace que chez les Yorkshire. Les effets estimés pour la longueur de la lactation et l'ISSF sur la taille de portée suivante étaient similaires à ceux obtenus dans l'analyse des données de plus de 100 troupeaux québécois. La longueur de la lactation et l'ISSF devraient donc être considérés dans les modèles d'évaluation génétique des tailles de portée des porcs afin d'augmenter la précision des valeurs génétiques prédites par le modèle. La méthode des polynômes segmentés peut être utilisée pour prédire la taille de portée suivante comme une fonction continue de l'ISSF ou pour déduire des facteurs d'ajustement pour corriger la taille de portée pour l'ISSF précédent.

Deux symbioses végétales partagent la même niche écologique, leur hôte, une légumineuse. Ces deux associations mutualistes sont la mycorhize arbusculaire (MA) et la symbiose Rhizobium/légumineuse. Chacune de ces relations symbiotiques, prise individuellement, peuvent contrôler leur propre colonisation par des mécanismes d'autorégulation. Ce contrôle exclusif s'effectue par rétroaction systémique et parviendrait à limiter le coût en carbone pour l'hôte. En vue d'étudier la restriction exercée par une plante hôte sur le degré de colonisation mycorhizienne et rhizobienne, la légumineuse Medicago sativa a été cultivée en chambre bicompartimentée (Split-Roots). Ce dispositif expérimental a permis de séparer en deux parties distinctes le système racinaire de M. sativa. Le but recherché par ces expérimentations était de vérifier à distance l'autorégulation au sein d'une symbiose sur la seconde partie du système racinaire et de mettre en évidence une régulation négative croisée entre deux symbioses différentes. En effet pour la première fois, il est démontré que l'autorégulation systémique n'est pas l'action d'une seule symbiose sur elle-même, mais que par des signaux communs entre les deux symbioses, il existe une régulation négative croisée entre elles. Cette approche permet d'examiner, sous un nouvel angle, la régulation de l'établissement d'une symbiose par une autre symbiose. Dans ces conditions, nos résultats montrent l'existence d'un lien évident de signalisation entre les deux symbioses végétales. Dans le cas précis d'une pré-colonisation de M. sativa par Sinorhizobium meliloti, les facteurs Nod se sont révélés impliqués au niveau de l'autorégulation. Dans cet exemple, les flavonoïdes exsudés par M. sativa sont non seulement reconnus par les Rhizobia mais aussi par le Glomus mosseae. Ces résultats représentent un acquis important pour l'interprétation de la signalisation au niveau de l'autorégulation des deux symbioses à l'étude. Par ailleurs, l'analyse des exsudats racinaires de M. sativa par chromatigraphie liquide à haute performance (HPLC) montre une modification significative du patron des isoflavonoïdes lorsque cette plante est soumise à différents contrôles dérivant d'autorégulations et de régulations négatives croisées. De plus il est loisible d'observer une variation similaire de patrons de flavonoïdes suite à l'application de facteurs Nod. En soi, d'une façon plus exacte, tous ces traitements provoquent une réduction marquée de la formononétine et de l'ononine. Ces deux isoflavonoïdes semblent être d'excellents candidats comme molécules ± signal ¿ dans la régulation à distance pour les deux symbioses végétales. De plus, l'application externe de ces deux isoflavonoïdes peut normalement restaurer la nodulation et la mycorhization. Les flavonoïdes jouent un rôle clef dans la formation de la symbiose MA chez M. sativa. Lors d'expériences avec diverses souches de G. mosseae nous avons cherché à montrer qu'il y avait bien une régularité et une constance dans le patron de flavonoïdes considérés comme molécule signal et cela peu importe les besoins métaboliques divergents associés à ces souches de G. mosseae. Selon cette prémisse nous concluons que leur production n'est pas subordonnée aux besoins métaboliques des souches fongiques. La constance de l'augmentation ou la réduction du patron de ces flavonoïdes pourraient bien être le résultat du rôle de flanovoïdes impliqués pour des mécanismes de signalisations qui accompagnent nécessairement l'établissement de la symbiose MA.

Le bois, ou le xylème secondaire, est le produit de la différenciation des cellules cambiales en cellules vasculaires spécialisées lignifiées telles que les fibres et les éléments de faisceaux. Chez les herbacées de nombreuses évidences ont été rapportées quant à l'implication de facteurs de transcription de type Homéodomaine Leucine Zipper de classe III (HD-Zip III) dans la régulation du développement du xylème primaire. À la lumière de évidences rapportées chez les herbacées l'hypothèse que nous avons voulu tester est que les HD-Zip III de peupliers auraient acquis des fonctions liées au développement du xylème secondaire. Pour tester cette hypothèse, nous avons choisit deux objectifs généraux : Tout d'abord 1) celui de caractériser l'abondance des transcrits de HD-Zip III dans le cambium par rapport à d'autres tissues. Et 2) caractériser de l'effet de la surexpression de HD-Zip DI chez des peupliers transgéniques, PtHB-1 et PtHB-5 respectivement homologues de REVOLUTA et AtHB-8. Ceci est une façon indirecte de lier leur fonction dans le développement vasculaire, s'ils altèrent la differentiation de fibres ou le développement général des tissus vasculaires. À la lumière des résultats, l'analyses d'expression des transcrits de HD-Zip III nous avons conclue qu'ils sont tous présent dans le xylème secondaire en formation (cambium). Néanmoins, un gène se distingue des autres : PtHB-5, qui présente le patron d'expression le plus spécifique au cambium. Finalement, la surexpression du gène PtHB-1 chez des peupliers transgéniques a mit en évidence son implication dans la formation du xylème primaire, par contre cette expérience ne nous a pas permis de conclure à propos de son implication potentielle dans le xylème secondaire.

L’objectif du présent projet était de caractériser l’impact d’injections d’acide folique et de vitamine B12 sur la reprise de l’activité ovarienne postpartum chez des vaches laitières grâce à une amélioration de l’efficacité du métabolisme énergétique. La phase expérimentale s’est effectuée sur 24 vaches réparties en 12 blocs de deux vaches. À partir de trois semaines avant la date prévue du vêlage les vaches ont reçu une injection intramusculaire hebdomadaire de 5 ml de : 1) saline 0,9 % ou; 2) 320 mg d’acide folique et 10 mg de vitamine B12. La prise alimentaire et la production du lait ont été enregistrées. Des échantillons de lait ont été récoltés aux deux semaines et analysés pour les composantes du lait. Des échantillons sanguins ont aussi été prélevés à toutes les semaines, sauf pour les trois premières semaines postpartum durant lesquelles des échantillons sanguins ont été prélevés aux trois jours, afin d’évaluer le statut métabolique. À compter du jour 30 de lactation, des échantillons sanguins ont été prélevés aux trois jours afin de définir le point de reprise de l’activité ovarienne. Le développement folliculaire a été suivi par un examen échographique aux trois jours à partir du jour 42. Aux fin de caractériser le développement folliculaire, une classification basée sur le diamètre des follicules (f<8 mm; 8<f<10 mm; 10<f<12 mm; 12<f<13 mm and f>14 mm) a été utilisée. Durant chaque échographie, le nombre de follicules dans chaque classe a été enregistré. La comparaison de développement folliculaire entre les vaches demandait un moment précis et comparable, et pour ce faire, le profil de concentrations sanguines de progestérone à l’ovulation comme un point commun des animaux a été retenu. Pour le taux de gestation, seule une conception à la première insémination a été considérée comme un résultat positif. Les concentrations plasmatique plus élevées de vitamine B12 et d’acide folique chez les animaux traités (p<0,0001, p=0,0014 respectivement) confirment que l’administration du traitement fut efficace. Les résultats ont mis en évidence l’effet positif du supplément vitaminique sur la perte de poids en début de lactation, période de balance négative d’énergie (p=0,0036). Le traitement vitaminique a augmenté le lactose total secrété dans le lait (p=0,0139), durant les premières huit semaines suivant la parturition et aussi la sécrétion de protéines totales du lait (p=0,0204), même si les gras totaux n’étaient pas significativement affectés par le traitement (p=0,3059). Ni les pourcentages des composantes du lait (gras, lactose et protéines), ni la prise alimentaire en périodes de pré- et postpartum, ont été affectés par le traitement (p>0,1). La production du lait tendait à augmenter chez les animaux traités (p=0,0543). La concentration de BHB a été diminuée par les vitamines en période postpartum (p=0,032) et un effet du temps a aussi été observé (p=0,005). Les analyses des données postpartum confirment une tendance décroissante dans le temps du BHB chez les vaches traitées (p=0,063). La concentration plasmatique de l'urée n'a pas été influencée par le traitement. La concentration plasmatique des AGL n'a pas été affectée par le traitement, mais une interaction de traitement et temps (p=0,076, p=0,088 pour le pré et postpartum, respectivement) indique une tendance à être plus faible chez les vaches traitées. Il y avait plus de follicules pré-ovulatoires chez les vaches traitées (p=0,0263) et le follicule dominant était plus gros (p=0,0091). Une différence significative des concentrations sériques d’œstradiol à l’ovulation ± 1 jour (p=0,0433) confirme le nombre et la taille plus élevés des follicules chez les vaches traitées. La première insémination des vaches se faisait au premier œstrus après 57 jours de lactation. Les vaches recevant l’injection de vitamine B12 et d’acide folique ont été inséminées 5,5 jours avant les vaches témoins mais la différence n’était pas significative. Les résultats confirment l’hypothèse de départ que des injections de vitamine B12 et d’acide folique auraient des effets positifs sur les performances productives et reproductives de vaches laitières en début de lactation.