This study measures Radiation Induced Conductivity (RIC) in five insulating polymeric materials over temperatures ranging from ~110 K to ~350 K: polyimide (PI or Kapton HNTM and Kapton ETM), polytetraflouroethylene (PTFE or TeflonTM), ethylene-tetraflouroethylene (ETFE or TefzelTM), and Low Density Polyethylene (LDPE). RIC occurs when incident ionizing radiation deposits energy and excites electrons into the conduction band of insulators. Conductivity was measured when a voltage was applied across vacuum-baked, thin film polymer samples in a parallel plate geometry. RIC was calculated as the difference in sample conductivity under no incident radiation and under an incident ~4 MeV electron beam at low incident dose rates of 0.01 rad/sec to 10 rad/sec. The steady-state RIC was found to agree well with the standard power law relation, σRIC(D) = kRIC(T) DÄ(T) between conductivity, óRIC and adsorbed dose rate, D. Both the proportionality constant, kRIC, and the power, Ä, were found to be temperature-dependent above ~250 K, with behavior consistent with photoconductivity models developed for localized trap states in disordered semiconductors. Below ~250 K, kRIC and Ä exhibited little change in any of the materials.

RIC-8B é uma proteína que apresenta, in vitro, atividade de fator de troca de nucleotídeos guanina (GEF). No entanto, seu papel in vivo não é conhecido. Dados anteriores do nosso laboratório demonstraram que essa proteína interage especificamente com Gαolf, que é uma proteína G exclusiva do sistema olfatório, presente nos cílios dos neurônios olfatórios, onde ocorre a transdução de sinal ativada pelos odorantes. No camundongo adulto verificou-se, por meio de ensaios de hibridização in situ, que RIC-8B está presente somente em regiões de expressão de Gαolf: no epitélio olfatório maduro e no núcleo estriado do sistema nervoso central. Para avaliar a função fisiológica de RIC-8B in vivo, resolvemos gerar uma linhagem de camundongo knockout para Ric-8B. Verificamos que a linhagem é inviável devido à letalidade dos embriões já em fases precoces do desenvolvimento (por volta de E8,5 e E9,0). A coloração de embriões com X-gal mostra que RIC-8B é especificamente expressa em regiões que darão origem ao sistema nervoso, como na região ventral do tubo neural, e em regiões cefálicas. Interessantemente, mostramos que RIC-8B é expressa na placa do assoalho do tubo neural, de uma maneira muito semelhante ao padrão de expressão de Sonic Hedgehog (SHH), que apresenta um papel fundamental para a organização do sistema nervoso, entre outras funções. Nossos resultados indicam, portanto, que RIC-8B desempenha um papel crucial durante a embriogênese, e que este papel pode estar relacionado com o papel exercido por SHH. Além disso, como a via de sinalização de SHH ocorre em cílios primários nas células alvo, nossos dados levantam a interessante possibilidade de que RIC-8B apresenta funções relacionadas a cílios, tanto no camundongo adulto (neste caso nos cílios dos neurônios olfatórios) como no embrião (neste caso nos cílios primários). / RIC-8B is a protein that, in vitro, acts as a guanine nucleotide exchange factor (GEF). However, its role in vivo remains unknown. Previous data from our laboratory demonstrated that this protein is able to interact specifically with Gαolf, a G protein found only in the olfactory system. This G protein is located in the cilia from olfactory neurons, where odorant signaling occurs. In situ hybridization experiments showed that RIC-8B, in adult mice, is expressed only in regions where Gαolf is expressed, such as the olfactory epithelium and the nucleus striatum in the central nervous system. In order to determine the function of RIC-8B in vivo, we decided to generate a knockout mouse strain for Ric-8B. We found that this strain is not viable due to the lethality of embryos in the early stages of development (around days E8.5 and E9.0). X-gal staining of embryos shows that RIC-8B is specifically expressed in regions that originate the nervous system, such as the ventral neural tube and also cephalic regions. Interestingly, we show that RIC-8B is restrictedly expressed in the floor plate of the neural tube, in a pattern that is very similar to the one shown by Sonic Hedgehog (SHH). The SHH protein plays a fundamental role in the organization of the nervous system, among other functions. Therefore, our results indicate that RIC-8B plays an essential role during the embryogenesis, and that this role can be related to the role played by SHH. Furthermore, because the SHH signaling pathway occurs in primary cilia in the target cells, our data raise the interesting possibility that the role played by RIC-8B is related to ciliary functions, both in adult mice (in this case, in olfactory cilia), and in the embryo (in this case, in primary cilia)

RIC-8B é um fator trocador de nucleotídeo de guanina (GEF) predominantemente expresso em neurônios olfatórios maduros de camundongos adultos. Trabalhos desenvolvidos em nosso laboratório mostraram que RIC-8B interage com Gαolf e Gγ13, duas subunidades de proteína G que estão enriquecidas nos cílios dos neurônios olfatórios, onde participam da transdução do sinal de odorantes. In vitro, RIC-8B é capaz de amplificar a sinalização de receptores olfatórios através de Gαolf, no entanto, seu papel fisiológico ainda é desconhecido. Para determinar a função desempenhada por essa proteína in vivo, nós utilizamos a tecnologia de Gene Trap com o objetivo de produzir um camundongo knockout para Ric-8B. Apesar de a expressão de Ric-8B ser restrita a poucos tecidos no camundongo adulto, descobrimos que homozigotos para a mutação em Ric-8B são inviáveis e morrem por volta do dia embrionário E10,5. Além disso, são menores e apresentam evidente falha no fechamento do tubo neural na região cranial (exencefalia). Utilizamos o gene repórter β-galactosidase expresso pelo alelo mutado para determinar o padrão de expressão de Ric-8B em embriões durante o desenvolvimento. Observamos que, no estágio E8,5, Ric-8B é expresso nas pregas neurais da região cefálica e na notocorda. De E9,5 a E12,5, a expressão de Ric-8B é detectada predominante no assoalho da placa. Esse padrão de expressão se assemelha ao de outro gene importante para a embriogênese, Sonic hedgehog (Shh). SHH é um morfógeno diretamente responsável pela padronização dorsoventral do sistema nervoso central e sua sinalização depende de cílio primário. Cílio primário é uma organela baseada em microtúbulos que se projeta da superfície da maioria das células de mamíferos e funciona como um centro de sinalização intracelular. Nossos dados mostram que fibroblastos embrionários Ric-8B-/- formam cílios primários, assim como alguns tecidos do embrião. Além disso, não encontramos alterações na sinalização de Shh em embriões homozigotos mutantes. No entanto, observamos que esses embriões apresentam apoptose aumentada em células migratórias da crista neural cranial. Shh é importante para a sobrevivência de células da crista neural migratória, sugerindo um possível papel para Ric-8B a downstream da sinalização de SHH. / Ric-8B is a guanine nucleotide exchange factor (GEF) which is predominantly expressed in mature olfactory sensory neurons in adult mice. We have previously shown that RIC-8B interacts with both Gαolf and Gγ13, two G protein subunits, which are enriched in olfactory cilia and are required for odorant signal transduction. In vitro, RIC-8B is able to amplify odorant receptor signaling through Gαolf, however, its physiological role remains unknown. To determine the role played by RIC-8B in vivo we used the Gene trap technology to generate a Ric-8B knockout mouse. We found that, despite the limited distribution of Ric-8B gene expression in adult mice, Ric-8B homozygous mutants are not viable and die around the E10,5 stage. Mutant embryos are also smaller and fail to close the neural tube at the cranial region (exencephaly). We used the activity of the β-galactosidase reporter gene to determine the pattern of expression of the Ric-8B gene in heterozygous embryos. At E8,5 the Ric-8B gene is expressed in the notochord and neural folds of the cephalic regions. From E9,5 to E12,5 Ric-8B is predominantly expressed in the floor plate, in a pattern that strongly resembles the one shown by Sonic hedgehog (Shh). SHH is a morphogen directly responsible for the dorsoventral patterning of the central nervous system and its signaling depends on primary cilia. Primary cilia are microtubule-based organelles that protrude from the surface of mammalian cells and act as a signaling center. We show that Ric-8B-/- embryonic fibroblasts and some embryonic tissues grow primary cilia normally. In addition, we did not find alterations in the SHH signaling of homozygous mutants. Instead, we found an increased apopotosis in migratory cells of the cranial neural crest in these embryos. Shh is an important factor to survival of neural crest cells, suggesting a role for RIC-8B downstream of the SHH signaling.

RIC-8B é uma proteína que apresenta, in vitro, atividade de fator de troca de nucleotídeos guanina (GEF). No entanto, seu papel in vivo não é conhecido. Dados anteriores do nosso laboratório demonstraram que essa proteína interage especificamente com Gαolf, que é uma proteína G exclusiva do sistema olfatório, presente nos cílios dos neurônios olfatórios, onde ocorre a transdução de sinal ativada pelos odorantes. No camundongo adulto verificou-se, por meio de ensaios de hibridização in situ, que RIC-8B está presente somente em regiões de expressão de Gαolf: no epitélio olfatório maduro e no núcleo estriado do sistema nervoso central. Para avaliar a função fisiológica de RIC-8B in vivo, resolvemos gerar uma linhagem de camundongo knockout para Ric-8B. Verificamos que a linhagem é inviável devido à letalidade dos embriões já em fases precoces do desenvolvimento (por volta de E8,5 e E9,0). A coloração de embriões com X-gal mostra que RIC-8B é especificamente expressa em regiões que darão origem ao sistema nervoso, como na região ventral do tubo neural, e em regiões cefálicas. Interessantemente, mostramos que RIC-8B é expressa na placa do assoalho do tubo neural, de uma maneira muito semelhante ao padrão de expressão de Sonic Hedgehog (SHH), que apresenta um papel fundamental para a organização do sistema nervoso, entre outras funções. Nossos resultados indicam, portanto, que RIC-8B desempenha um papel crucial durante a embriogênese, e que este papel pode estar relacionado com o papel exercido por SHH. Além disso, como a via de sinalização de SHH ocorre em cílios primários nas células alvo, nossos dados levantam a interessante possibilidade de que RIC-8B apresenta funções relacionadas a cílios, tanto no camundongo adulto (neste caso nos cílios dos neurônios olfatórios) como no embrião (neste caso nos cílios primários). / RIC-8B is a protein that, in vitro, acts as a guanine nucleotide exchange factor (GEF). However, its role in vivo remains unknown. Previous data from our laboratory demonstrated that this protein is able to interact specifically with Gαolf, a G protein found only in the olfactory system. This G protein is located in the cilia from olfactory neurons, where odorant signaling occurs. In situ hybridization experiments showed that RIC-8B, in adult mice, is expressed only in regions where Gαolf is expressed, such as the olfactory epithelium and the nucleus striatum in the central nervous system. In order to determine the function of RIC-8B in vivo, we decided to generate a knockout mouse strain for Ric-8B. We found that this strain is not viable due to the lethality of embryos in the early stages of development (around days E8.5 and E9.0). X-gal staining of embryos shows that RIC-8B is specifically expressed in regions that originate the nervous system, such as the ventral neural tube and also cephalic regions. Interestingly, we show that RIC-8B is restrictedly expressed in the floor plate of the neural tube, in a pattern that is very similar to the one shown by Sonic Hedgehog (SHH). The SHH protein plays a fundamental role in the organization of the nervous system, among other functions. Therefore, our results indicate that RIC-8B plays an essential role during the embryogenesis, and that this role can be related to the role played by SHH. Furthermore, because the SHH signaling pathway occurs in primary cilia in the target cells, our data raise the interesting possibility that the role played by RIC-8B is related to ciliary functions, both in adult mice (in this case, in olfactory cilia), and in the embryo (in this case, in primary cilia)

RIC-8B é um fator trocador de nucleotídeo de guanina (GEF) predominantemente expresso em neurônios olfatórios maduros de camundongos adultos. Trabalhos desenvolvidos em nosso laboratório mostraram que RIC-8B interage com Gαolf e Gγ13, duas subunidades de proteína G que estão enriquecidas nos cílios dos neurônios olfatórios, onde participam da transdução do sinal de odorantes. In vitro, RIC-8B é capaz de amplificar a sinalização de receptores olfatórios através de Gαolf, no entanto, seu papel fisiológico ainda é desconhecido. Para determinar a função desempenhada por essa proteína in vivo, nós utilizamos a tecnologia de Gene Trap com o objetivo de produzir um camundongo knockout para Ric-8B. Apesar de a expressão de Ric-8B ser restrita a poucos tecidos no camundongo adulto, descobrimos que homozigotos para a mutação em Ric-8B são inviáveis e morrem por volta do dia embrionário E10,5. Além disso, são menores e apresentam evidente falha no fechamento do tubo neural na região cranial (exencefalia). Utilizamos o gene repórter β-galactosidase expresso pelo alelo mutado para determinar o padrão de expressão de Ric-8B em embriões durante o desenvolvimento. Observamos que, no estágio E8,5, Ric-8B é expresso nas pregas neurais da região cefálica e na notocorda. De E9,5 a E12,5, a expressão de Ric-8B é detectada predominante no assoalho da placa. Esse padrão de expressão se assemelha ao de outro gene importante para a embriogênese, Sonic hedgehog (Shh). SHH é um morfógeno diretamente responsável pela padronização dorsoventral do sistema nervoso central e sua sinalização depende de cílio primário. Cílio primário é uma organela baseada em microtúbulos que se projeta da superfície da maioria das células de mamíferos e funciona como um centro de sinalização intracelular. Nossos dados mostram que fibroblastos embrionários Ric-8B-/- formam cílios primários, assim como alguns tecidos do embrião. Além disso, não encontramos alterações na sinalização de Shh em embriões homozigotos mutantes. No entanto, observamos que esses embriões apresentam apoptose aumentada em células migratórias da crista neural cranial. Shh é importante para a sobrevivência de células da crista neural migratória, sugerindo um possível papel para Ric-8B a downstream da sinalização de SHH. / Ric-8B is a guanine nucleotide exchange factor (GEF) which is predominantly expressed in mature olfactory sensory neurons in adult mice. We have previously shown that RIC-8B interacts with both Gαolf and Gγ13, two G protein subunits, which are enriched in olfactory cilia and are required for odorant signal transduction. In vitro, RIC-8B is able to amplify odorant receptor signaling through Gαolf, however, its physiological role remains unknown. To determine the role played by RIC-8B in vivo we used the Gene trap technology to generate a Ric-8B knockout mouse. We found that, despite the limited distribution of Ric-8B gene expression in adult mice, Ric-8B homozygous mutants are not viable and die around the E10,5 stage. Mutant embryos are also smaller and fail to close the neural tube at the cranial region (exencephaly). We used the activity of the β-galactosidase reporter gene to determine the pattern of expression of the Ric-8B gene in heterozygous embryos. At E8,5 the Ric-8B gene is expressed in the notochord and neural folds of the cephalic regions. From E9,5 to E12,5 Ric-8B is predominantly expressed in the floor plate, in a pattern that strongly resembles the one shown by Sonic hedgehog (Shh). SHH is a morphogen directly responsible for the dorsoventral patterning of the central nervous system and its signaling depends on primary cilia. Primary cilia are microtubule-based organelles that protrude from the surface of mammalian cells and act as a signaling center. We show that Ric-8B-/- embryonic fibroblasts and some embryonic tissues grow primary cilia normally. In addition, we did not find alterations in the SHH signaling of homozygous mutants. Instead, we found an increased apopotosis in migratory cells of the cranial neural crest in these embryos. Shh is an important factor to survival of neural crest cells, suggesting a role for RIC-8B downstream of the SHH signaling.

INTRODUCCIÓ: En les patologies articulars que afecten el cartílag existeix una relació bidireccional entre la degradació del teixit i la resposta inflamatòria. El plasma ric en plaquetes conté factors moduladors de la inflamació i promotors de la regeneració. Aquests factors podrien actuar sobre els condròcits modificant-ne l’expressió de citocines i molècules de la matriu cartilaginosa, de forma que es generaria un entorn favorable per la recuperació del dany. OBJECTIUS: Establir models in vitro de condròcits tractats amb LPS i de condròcits tractats amb agents oxidants i avaluar l’efecte del plasma ric en plaquetes sobre aquests models cel·lulars. MATERIAL I MÈTODES: S’han establert cultius primaris de condròcits a partir de biòpsies de cartílag articular i s’han tractat amb LPS (100 μg/ml) o amb H2O2 (1mM) durant 24 h. S’ha valorat l’activitat metabòlica dels condròcits mitjançant la quantificació de glicosaminoglicans (GAGs) en els sobrenadants dels cultius i també s’ha valorat el patró de citocines i factors de creixement (IL-12p70, TNF-_, IL-10, IL-6, IL-1β, IL-8 i TGF-β) alliberats pels condròcits en el sobrenadant, mitjançant citometria de flux o ELISA. S’ha generat plasma ric en plaquetes a partir de sang sencera i se n’ha valorat el contingut en TGF-β. S’han tractat els cultius de condròcits amb PRP (25% i 50%) i s’ha valorat l’activitat metabòlica i el perfil de citocines dels condròcits. RESULTATS: El tractament dels condròcits amb LPS provoca un increment de GAGs i de les citocines TNF-α, IL-6, IL-8 i IL-10 en els sobrenadant, mentre que disminueixen els nivells de TGF-β. A l’afegir PRP ric en TGF-β al cultiu, el TNF-α i la IL-10 del sobrenadant disminueixen. L’oxidació dels condròcits amb H2O2 provoca la disminució de GAGs en el sobrenadant però no altera el perfil de citocines. L’efecte del PRP sobre el cultiu de condròcits en condicions d’oxidació genera un increment de la IL-8 i un lleuger augment de la IL-6. CONCLUSIONS: Els condròcits participen de forma activa en la resposta inflamatòria ja que quan estan en presència d’un agent com el LPS canvien el perfil de citocines inflamatòries i reguladores que sintetitzen. El PRP, ric en TGF-β, modifica el patró de citocines cap a un perfil menys inflamatori i pot promoure la proliferació dels condròcits. El tractament amb PRP de condròcits en un entorn oxidatiu provoca uns efectes similars als del tractament amb PRP sobre cultius normals, però en menor intensitat. / INTRODUCCIÓN:En las patologías articulares que afectan el cartílago existe una relación bidireccional entre la degradación del tejido y la respuesta inflamatoria, de manera que se generan situaciones de inflamación crónica y de perpetuación de la degradación del tejido. El plasma rico en plaquetas (PRP) contiene factores moduladores de la inflamación y promotores de la regeneración como el TGF-β. La hipótesis de este trabajo es que estos factores podrían actuar sobre los condrocitos modificando la expresión de citocinas y de moléculas de la matriz cartilaginosa, de forma que se generaría un entorno favorable para la recuperación del daño. OBJETIVOS: Establecer modelos in vitro de condrocitos tratados con LPS y de condrocitos tratados con agentes oxidantes, y evaluar el efecto del plasma rico en plaquetas (PRP) en estos modelos de daño celular. MATERIALES Y MÉTODOS: Se han establecido cultivos primarios de condrocitos a partir de biopsias de cartílago articular procedentes de pacientes (70-90 años) sometidos a cirugía de reemplazamiento. Se han generado modelos de daño celular tratando cultivos de condrocitos con LPS (100 µg/ml) o con H2O2 (1mM) durante 24 h. Se ha valorado la actividad sintética de los condrocitos con la cuantificación de los glucosaminoglicanos (GAGs) en los sobrenadantes de los cultivos mediante el ensayo colorimétrico DMMB. También se ha valorado el patrón de citocinas inflamatorias y antiinflamatorias, y de factores de crecimiento (IL-12p70, TNF-α, IL-10, IL-6, IL-1β, IL-8 y TGF-β) liberados por los condrocitos en el sobrenadante, mediante citometría de flujo (ensayo CBA) o mediante ELISA. Se ha generado plasma rico en plaquetas mediante centrifugación (460 g) de sangre entera y se ha determinado el contenido de TGF-β después de la activación de las plaquetas con 45mM CaCl2. Se han tratado los diferentes cultivos de condrocitos con PRP (25% y 50%) y se ha valorado el efecto de éste sobre la actividad sintética y el perfil de citocinas de los condrocitos. RESULTADOS:El tratamiento de los condrocitos con LPS provoca un incremento de GAGs y de las citocinas TNF-α, IL-6, IL-8 e IL-10 en los sobrenadantes, mientras que los niveles de TGF-β disminuyen. Cuando se añade PRP rico en TGF-β al cultivo, la cantidad de TNF-α y de IL-10 en el sobrenadante disminuye, mientras que la cantidad de IL-6 e IL-8 se mantiene elevada, como también se mantiene la capacidad de síntesis de GAGs. La oxidación de los condrocitos con H2O2 provoca la disminución de GAGs en el sobrenadante, pero no modifica el perfil de citocinas. El efecto del PRP sobre el cultivo de condrocitos en condiciones de oxidación recupera la síntesis de GAGs y genera un incremento de la IL-8 y un ligero aumento de la IL-6. CONCLUSIONES: Los condrocitos participan de forma activa en la respuesta inflamatoria ya que, cuando están en presencia de un agente como el LPS, cambian el perfil de citocinas inflamatorias y reguladoras que sintetizan. Con la adición en el cultivo de PRP, rico en TGF-β, se estaría supliendo la disminución de TGF-β provocada por el LPS en los condrocitos y provocaría el cambio en el patrón de citocinas hacia un perfil menos inflamatorio. Si una situación similar sucediera in vivo, con el uso del PRP, se estaría generando un entorno favorable para la recuperación del daño. El tratamiento in vitro con PRP de condrocitos en un entorno oxidativo, produce efectos similares a los tratamientos con PRP sobre cultivos normales, pero en menor intensidad, pudiendo, eso sí, recuperar la actividad sintética de matriz extracelular. / INTRODUCCIÓN:En las patologías articulares que afectan el cartílago existe una relación bidireccional entre la degradación del tejido y la respuesta inflamatoria, de manera que se generan situaciones de inflamación crónica y de perpetuación de la degradación del tejido. El plasma rico en plaquetas (PRP) contiene factores moduladores de la inflamación y promotores de la regeneración como el TGF-β. La hipótesis de este trabajo es que estos factores podrían actuar sobre los condrocitos modificando la expresión de citocinas y de moléculas de la matriz cartilaginosa, de forma que se generaría un entorno favorable para la recuperación del daño. OBJETIVOS: Establecer modelos in vitro de condrocitos tratados con LPS y de condrocitos tratados con agentes oxidantes, y evaluar el efecto del plasma rico en plaquetas (PRP) en estos modelos de daño celular. MATERIALES Y MÉTODOS: Se han establecido cultivos primarios de condrocitos a partir de biopsias de cartílago articular procedentes de pacientes (70-90 años) sometidos a cirugía de reemplazamiento. Se han generado modelos de daño celular tratando cultivos de condrocitos con LPS (100 µg/ml) o con H2O2 (1mM) durante 24 h. Se ha valorado la actividad sintética de los condrocitos con la cuantificación de los glucosaminoglicanos (GAGs) en los sobrenadantes de los cultivos mediante el ensayo colorimétrico DMMB. También se ha valorado el patrón de citocinas inflamatorias y antiinflamatorias, y de factores de crecimiento (IL-12p70, TNF-α, IL-10, IL-6, IL-1β, IL-8 y TGF-β) liberados por los condrocitos en el sobrenadante, mediante citometría de flujo (ensayo CBA) o mediante ELISA. Se ha generado plasma rico en plaquetas mediante centrifugación (460 g) de sangre entera y se ha determinado el contenido de TGF-β después de la activación de las plaquetas con 45mM CaCl2. Se han tratado los diferentes cultivos de condrocitos con PRP (25% y 50%) y se ha valorado el efecto de éste sobre la actividad sintética y el perfil de citocinas de los condrocitos. RESULTADOS:El tratamiento de los condrocitos con LPS provoca un incremento de GAGs y de las citocinas TNF-α, IL-6, IL-8 e IL-10 en los sobrenadantes, mientras que los niveles de TGF-β disminuyen. Cuando se añade PRP rico en TGF-β al cultivo, la cantidad de TNF-α y de IL-10 en el sobrenadante disminuye, mientras que la cantidad de IL-6 e IL-8 se mantiene elevada, como también se mantiene la capacidad de síntesis de GAGs. La oxidación de los condrocitos con H2O2 provoca la disminución de GAGs en el sobrenadante, pero no modifica el perfil de citocinas. El efecto del PRP sobre el cultivo de condrocitos en condiciones de oxidación recupera la síntesis de GAGs y genera un incremento de la IL-8 y un ligero aumento de la IL-6. CONCLUSIONES: Los condrocitos participan de forma activa en la respuesta inflamatoria ya que, cuando están en presencia de un agente como el LPS, cambian el perfil de citocinas inflamatorias y reguladoras que sintetizan. Con la adición en el cultivo de PRP, rico en TGF-β, se estaría supliendo la disminución de TGF-β provocada por el LPS en los condrocitos y provocaría el cambio en el patrón de citocinas hacia un perfil menos inflamatorio. Si una situación similar sucediera in vivo, con el uso del PRP, se estaría generando un entorno favorable para la recuperación del daño. El tratamiento in vitro con PRP de condrocitos en un entorno oxidativo, produce efectos similares a los tratamientos con PRP sobre cultivos normales, pero en menor intensidad, pudiendo, eso sí, recuperar la actividad sintética de matriz extracelular.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:12:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AnaKellyA.pdf: 272146 bytes, checksum: ac50883b6dbc7f732a9806af95ec650e (MD5) Previous issue date: 2007-10-31 / This work exposes the Paul Ric ur s thought in relation to the contemporary complaint between the hermeneutics and the ideologies criticism. It shows, in this direction, the unity between text and action according to Ric ur s perspective. The philosophical view of Ric ur, It affirms, is far from any eclecticism, but if it characterizes for a dynamic style, explained here from the analogies with the movement of the particles, of the quantum physics, which help to excuse to the make a mistake idea of compilation and eclecticism, resultant of superficial readings of its texts. In deep, this work nothing more it is that a contribution to the construction of a theory of the reading of the text of this notable philosopher / Este trabalho exp?e o pensamento de Paul Ric ur em rela??o ao debate contempor?neo entre a hermen?utica e a cr?tica das ideologias. Procura mostrar, neste sentido, a unidade existente entre texto e a??o segundo a perspectiva ricoeuriana. A proposta filos?fica de Ric ur, afirma-se, est? longe de qualquer ecletismo, mas se caracteriza por um estilo din?mico e inquietante, aqui explicado a partir das analogias com o movimento das part?culas subat?micas, da f?sica qu?ntica, as quais ajudam a dispensar a id?ia equivocada de compila??o e ecletismo, resultante de leituras superficiais de seus textos. Na verdade, este trabalho ? uma contribui??o ? constru??o de uma teoria da leitura do texto desse not?vel fil?sofo

O sistema olfatório de mamíferos é capaz de detectar milhares de substâncias químicas diferentes, mesmo em baixas concentrações. Um odorante disperso no ar pode se ligar a um receptor olfatório (OR) iniciando o processo de detecção. Os ORs são membros da super família de receptores acoplados a proteína G (GPCRs). Apesar de a via de transdução de sinal de odorantes estar bem descrita, pouco se sabe sobre os seus moduladores. Em 2005, nosso laboratório identificou RIC-8B como um possível fator de troca de nucleotídeos de guanina (GEF) que poderia amplificar a atividade da proteína G olfatória (Golf). No presente trabalho mostramos que RIC-8B é capaz de interagir com Gγ13. Procurando os outros componentes desse complexo identificamos Gβ1 como sendo a subunidade Gβ mais expressa no epitélio olfatório. Além disso, RIC-8B, Gαolf, Gβ1 e Gγ13 encontram-se concentrados nos cílios dos neurônios olfatórios e se co-localizam nesse compartimento celular. Nossos experimentos de co-imunoprecipitação mostram que RIC-8B interage mais fortemente com Gαolf, na presença de GDP do que na presença de GTP, como esperado para uma GEF. Curiosamente quando Gβ1 e Gβ13 estão presentes, RIC-8B e Gαolf co-imunoprecipitam igual, independente do nucleotídeo de guanina utilizado. Apesar de, na presença de Gβ1 e Gγ13, não observarmos dissociação física de RIC-8B e Gαolf com a mudança do estado de ativação, o efeito de RIC-8B na produção de AMPc não é afetada. Também mostramos que a quantidade de Gαolf, Gβ1 e Gγ13 presentes na membrana celular aumenta quando estas são co-transfectadas com RIC-8B em células de mamíferos. Nossos resultados apontam para um papel duplo da RIC-8B. Primeiro, RIC-8B poderia funcionar como uma chaperona auxiliando na formação e transporte do complexo heterotrimérico, Golf, em neurônios olfatórios. Em segundo lugar, RIC-8B também atuaria como uma GEF sobre Gαolf, aumentando a produção de AMPc e portanto amplificando a via de transdução de sinal de odorantes. Por fim, acreditamos que um possível papel para Gβ1 e Gγ13 nesse complexo seria funcionar como um andaime molecular, aproximando RIC-8B de seu alvo, Gαolf, potencializando ainda mais a atividade de GEF. / The mammalian olfactory system detects small amounts of thousands of different chemical compounds. Odorant perception starts when an odorant in the air binds to an olfactory receptor (OR). ORs belong to the super family of G-protein coupled receptors (GPCRs). Even though the odorant signaling pathway is well known, little is known about its modulators. In 2005, our lab identified RIC-8B as a putative guanine nucleotide exchange factor (GEF) that is able to interact with the olfactory G-protein (Golf) and amplify its activity. Here we show that RIC-8B also interacts with Gγ13. We also found that Gβ1 is the Gβ subunit that is predominantly expressed in the olfactory epithelium. Furthermore, RIC-8B, Gαolf, Gβ1 and Gγ13 are highly concentrated in the cilia of olfactory neurons and co-localize in this cellular compartment. We also show that RIC-8B interaction with G&#945olf is stronger in the presence of GDP than GTP, as expected for a GEF. Curiously, in the presence of Gβ1 and Gγ13, RIC-8B and Gαolf remain associated, in the presence of both GDP or GTP, probably through an indirect interaction via Gβ1/Gγ13. We also showed that the amounts of Gαolf, Gβ1 and Gγ13 in the cell membrane increase if RIC-8B is cotransfected in the same cell. Our results suggest that RIC-8B plays two roles. First, it may act as a chaperone which assists in the assembly and trafficking of the G protein complex. Second, RIC-8B would also act as a GEF to increase Gαolf dependent cAMP production and thereby amplify odorant signal transduction. Lastly, we believe that Gβ1 and Gγ13 may act as a scaffold to position RIC-8B close to its target, Gαolf, further enhancing the GEF activity.

O sistema olfatório de mamíferos é capaz de detectar milhares de substâncias químicas diferentes, mesmo em baixas concentrações. Um odorante disperso no ar pode se ligar a um receptor olfatório (OR) iniciando o processo de detecção. Os ORs são membros da super família de receptores acoplados a proteína G (GPCRs). Apesar de a via de transdução de sinal de odorantes estar bem descrita, pouco se sabe sobre os seus moduladores. Em 2005, nosso laboratório identificou RIC-8B como um possível fator de troca de nucleotídeos de guanina (GEF) que poderia amplificar a atividade da proteína G olfatória (Golf). No presente trabalho mostramos que RIC-8B é capaz de interagir com Gγ13. Procurando os outros componentes desse complexo identificamos Gβ1 como sendo a subunidade Gβ mais expressa no epitélio olfatório. Além disso, RIC-8B, Gαolf, Gβ1 e Gγ13 encontram-se concentrados nos cílios dos neurônios olfatórios e se co-localizam nesse compartimento celular. Nossos experimentos de co-imunoprecipitação mostram que RIC-8B interage mais fortemente com Gαolf, na presença de GDP do que na presença de GTP, como esperado para uma GEF. Curiosamente quando Gβ1 e Gβ13 estão presentes, RIC-8B e Gαolf co-imunoprecipitam igual, independente do nucleotídeo de guanina utilizado. Apesar de, na presença de Gβ1 e Gγ13, não observarmos dissociação física de RIC-8B e Gαolf com a mudança do estado de ativação, o efeito de RIC-8B na produção de AMPc não é afetada. Também mostramos que a quantidade de Gαolf, Gβ1 e Gγ13 presentes na membrana celular aumenta quando estas são co-transfectadas com RIC-8B em células de mamíferos. Nossos resultados apontam para um papel duplo da RIC-8B. Primeiro, RIC-8B poderia funcionar como uma chaperona auxiliando na formação e transporte do complexo heterotrimérico, Golf, em neurônios olfatórios. Em segundo lugar, RIC-8B também atuaria como uma GEF sobre Gαolf, aumentando a produção de AMPc e portanto amplificando a via de transdução de sinal de odorantes. Por fim, acreditamos que um possível papel para Gβ1 e Gγ13 nesse complexo seria funcionar como um andaime molecular, aproximando RIC-8B de seu alvo, Gαolf, potencializando ainda mais a atividade de GEF. / The mammalian olfactory system detects small amounts of thousands of different chemical compounds. Odorant perception starts when an odorant in the air binds to an olfactory receptor (OR). ORs belong to the super family of G-protein coupled receptors (GPCRs). Even though the odorant signaling pathway is well known, little is known about its modulators. In 2005, our lab identified RIC-8B as a putative guanine nucleotide exchange factor (GEF) that is able to interact with the olfactory G-protein (Golf) and amplify its activity. Here we show that RIC-8B also interacts with Gγ13. We also found that Gβ1 is the Gβ subunit that is predominantly expressed in the olfactory epithelium. Furthermore, RIC-8B, Gαolf, Gβ1 and Gγ13 are highly concentrated in the cilia of olfactory neurons and co-localize in this cellular compartment. We also show that RIC-8B interaction with G&#945olf is stronger in the presence of GDP than GTP, as expected for a GEF. Curiously, in the presence of Gβ1 and Gγ13, RIC-8B and Gαolf remain associated, in the presence of both GDP or GTP, probably through an indirect interaction via Gβ1/Gγ13. We also showed that the amounts of Gαolf, Gβ1 and Gγ13 in the cell membrane increase if RIC-8B is cotransfected in the same cell. Our results suggest that RIC-8B plays two roles. First, it may act as a chaperone which assists in the assembly and trafficking of the G protein complex. Second, RIC-8B would also act as a GEF to increase Gαolf dependent cAMP production and thereby amplify odorant signal transduction. Lastly, we believe that Gβ1 and Gγ13 may act as a scaffold to position RIC-8B close to its target, Gαolf, further enhancing the GEF activity.

The diploma thesis deals with a new growth strategy of the company Škoda Auto a.s., which aims to increase sales to over 1.5 mil. cars a year by the year 2018. This growth strategy is based on four pillars: sales over 1.5 million vehicles targeting on EU and RIC-markets, profitability and financial strength, strategic "spearhead" focused on price/value, practicality and spaciousness and eventually top employer with global talent pool. The goal is to analyze the whole growth strategy. The work is divided into three chapters. The introductory chapter focuses on an automotive history. The second chapter deals with the current situation of the automotive industry and the last part analyzes the particular pillars of the new growth strategy.