A osteoporose, uma doença óssea progressiva, é considerada um grave problema de saúde pública, sendo uma das condições mais importantes associadas ao envelhecimento e que afeta milhões de pessoas no mundo. Esta doença multifatorial é caracterizada pela densidade óssea reduzida e deterioração da microarquitetura óssea. O objetivo deste trabalho foi investigar as mudanças comportamentais em células mesenquimais da medula óssea e células osteoblásticas da calvária de ratas induzidas à osteoporose. Após aprovação da Comissão de Ética no Uso de Animais, 18 ratas Wistar foram utilizadas e divididas em grupos controle e ovariectomizadas. Após 150 dias, as ratas de ambos os grupos foram sacrificadas para coleta dos fêmures e fragmentos da calvária. As células recolhidas a partir da medula óssea e calvária foram cultivadas em placas de 24 poços (n = 5) para avaliação da proliferação e viabilidade celular, atividade de fosfatase alcalina (ALP), detecção e quantificação de nódulos mineralizados e análise da expressão gênica por meio de PCR em tempo real. Os dados foram submetidos ao testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney, com nível de significância de 5%. As células da medula óssea do grupo controle (MC) mostraram uma diminuição significativa na proliferação quando comparado com as células do grupo controle da calvária (CC) em todos os períodos (p < 0,05). Por outro lado, as células da medula óssea de ratas com osteoporose (MO) revelaram um aumento significativo na taxa de proliferação após 7 e 10 dias (p < 0,01) em comparação às células da calvária de ratas ovariectomizadas (CO). A viabilidade celular foi maior em todos os períodos estudados dos grupos CC e CO em relação aos grupos MC e MO (p < 0,05). A atividade de fosfatase alcalina não foi significativamente diferente após 7 dias de cultura entre os grupos estudados; por outro lado, após 10 e 14 dias, observou-se uma diminuição da sua atividade no grupo MC quando comparado ao grupo CC (p < 0,01). Nas ratas com osteoporose, as células da medula óssea mostraram um aumento desta atividade quando comparada às células de calvária (p < 0,01). A análise dos nódulos mineralizados após 14 e 21 dias revelou que os grupos controle CC e MC não apresentaram diferenças significativas, ao passo que no grupo MO observou-se um aumento da mineralização quando comparado ao grupo CO nos mesmos períodos experimentais. Os resultados obtidos na análise de expressão gênica mostraram que para os genes Runx2, Oc, Alpl, Rank-l e Er&alpha; a expressão no grupo MO foi maior que no grupo MC (p < 0,05), enquanto que para as células da calvária, CC teve maior expressão gênica que CO (p < 0,05). Os genes Opg e Er&beta; apresentaram variações de acordo com o grupo avaliado. Frente aos resultados obtidos, sugere-se que existam alterações no metabolismo das células progenitoras e células diferenciadas após a indução da osteoporose e que as células da medula óssea apresentam um aumento da sua função como uma resposta compensatória neste modelo animal ovariectomizado. / Osteoporosis, a progressive bone disease, is considered a serious public health problem, being one of the most important conditions associated with aging, affecting millions of people worldwide. This multifactorial disease is characterized by reduced bone density and deterioration of bone microarchitecture. The objective of this work was to investigate the behavioral changes in mesenchymal cells from bone marrow and osteoblastic cells from calvaria bone of female rats induced to osteoporosis. After institutional review board approval, 18 Wistar female rats were used and divided into control and ovariectomized groups. After 150 days, the rats of both groups were sacrificed for collection of femurs and calvariae fragments. The cells collected from bone marrow and calvaria were cultured in 24-well plates (n=5) for the assessment of cell proliferation and viability, alkaline phosphatase (ALP) activity and detection and quantification of mineralized nodules. The data were submitted to Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests, with significance level set at 5%. The cells from bone marrow control group (MC) showed a significantly decrease in proliferation when compared to the cells from calvaria bone control group (CC) in all periods evaluated (p < 0,05). On the other hand, bone marrow cells from osteoporotic rats (MO) revealed a significant increase in their proliferation rate after 7 and 10 days (p < 0,01) compared to calvaria cells from ovariectomized rats (CO). Cell viability was higher in all investigated periods of CC and CO groups compared to MC and MO groups (p < 0,05). Alkaline phosphatase activity was not significantly different after 7 days of culture among the studied groups; in spite of that, after 10 and 14 days, there was a decrease in its activity in MC group when compared to CC (p < 0,01). In the osteoporotic rats, bone marrow cells showed an increase in this activity when compared to calvaria cells (p < 0,01). The analysis of mineralized nodules after 14 and 21 days revealed that control groups (CC and MC) did not have significant differences, whereas it was observed in MO group an increase in the mineralization when compared to CO in the same experimental periods. The data obtained in the analysis of gene expression showed that for Runx2, Oc, Alpl, Rank-l and Er&alpha; genes, the expression in MO group was higher than in MC (p < 0,05), whereas for the calvaria cells, CC group had higher gene expression than CO group (p < 0,05). The Opg and Er&beta; genes showed variations according to the evaluated group. Thus, it is suggested that there are changes in the metabolism of progenitor and differentiated cells after osteoporosis induction and that bone marrow cells present an enhancement of their function as a compensatory response in this ovariectomized rat model.

Este trabalho teve como objetivo estudar as alterações microvasculares intraneurais agudas em nervo isquiático de rato submetido à esmagamento por diferentes cargas. Foram utilizados sessenta ratos machos da linhagem Wistar, distribuídos em dois grupos experimentais de acordo com o protocolo de injeção de vasos e subdivididos de acordo com a carga de esmagamento. Os nervos isquiáticos direitos de cada grupo experimental foram isolados e submetidos ao esmagamento com diferentes cargas (0,5 Kg, 1 Kg, 5 Kg, 10 kg e 15 kg) por 10 minutos e os nervos isquiáticos esquerdos foram utilizados como controle. Após o esmagamento, 30 animais foram submetidos ao Protocolo I, que constou de: cateterização da aorta abdominal, perfusão manual da solução composta de tinta da China e gelatina 5% em formol 10%, dissecação e retirada dos nervos direitos e esquerdos, desidratação e diafanização para análise longitudinal dos vasos intraneurais. Os outros trinta animais foram submetidos ao Protocolo II, que constou de: cateterização da aorta abdominal e perfundidos com solução composta de tinta da China e gelatina 5% em soro fisiológico e, após, mantidos em freezer -20°C por uma hora. Em seguida os nervos foram dissecados e retirados em toda a sua extensão, cortados em 3 fragmentos, congelados em isopentano em gelo seco e armazenados em freezer -70°C, seccionados em cortes transversais semi-seriados em criostato para análise e contagem dos vasos intraneurais. Os resultados mostraram regiões de hematoma endoneural e epineural nas diferentes cargas utilizadas indicando que as forças de esmagamento foram suficientes para lesar os vasos intraneurais do nervo isquiático, especialmente com cargas elevadas. A análise morfométrica mostrou um comportamento diferente nas três regiões estudadas, constatando menor número de vasos na região do esmagamento e não nas regiões acima e abaixo da mesma. Estes resultados sugerem lesão localizada dos vasos intraneurais que foi proporcional à carga de esmagamento, causando hematoma endoneural e epineural, o que criará um microambiente desfavorável para a regeneração das fibras nervosas que também foram lesadas nesse modelo. / The objective of this work was to study the acute intraneurial microvascular changes in the rat sciatic nerve submitted to a crush injury by different loads. Sixty Wistar male rats were used and distributed into two experimental groups according to vessel injection protocol and subdivided according to the crush load. The right sciatic nerves of each experimental group were isolated and submitted to crush by different loads (0,5 Kg, 1 Kg, 5 Kg, 10 kg and 15 kg) for ten minutes. The left sciatic nerves were used as controls. After the crush, thirty animals were submitted to Protocol I, which consisted of: abdominal aorta catheterization, manual perfusion withf a solution composed of China ink and gelatin 5% in formaldehyde 10%. After that the right and left nerves were collected, fixed in formaldehyde10%, dehydrated and diaphanized for longitudinal analysis of the intraneurial vessels. The other thirty animals were submitted to Protocol II, which consisted of: abdominal aorta catheterization, as described above and perfused with a solution of China ink and gelatin 5% in physiologic saline and then placed in a freezer at -20°C for one hour. After that the nerves were dissected and removed in their entire length, cut into three fragments, frozen in isopentane and dry ice and placed in a freezer at -70°C, cut in semi-serial histological transverse sections for analysis and intraneurial vessel quantification.The results showed endoneurial and epineurial haematoma areas in the different groups, indicating that the crush forces were enough to damage the intraneurial vessels, specially with high loads. The morphometrical analysis showed a different profile in the three fragments, with smaller number of vessels in the crush region then above and below, suggesting that the damage to intraneurial vessels was proportional to the crush load, causing endoneurial and epineurial haematoma, which creates an unfavorable microenvironment for the regeneration of the nerve fibers that were also damaged in that model.

A baixa sensibilidade dos animais à droga e a função hepática pouco alterada são as principais dificuldades para o desenvolvimento da cirrose hepática experimental. A proposta deste trabalho foi aprimorar o modelo de cirrose por injeção intraperitoneal de tioacetamida (TAA) a fim de reduzir a adaptação dos animais ao fármaco. Foram utilizados 5 grupos de fêmeas de ratos Wistar: A (200 mg TAA/kg); B (aumento de 20% aos 48 dias); C (aumento de 10% a cada 24 dias); D (aumento de 15% a cada 24 dias); E (solução salina). Os animais foram injetados 3 vezes por semana durante 14 semanas. Foram realizadas coletas sanguíneas, por punção cardíaca, no início, no final do experimento e antes dos aumentos de dose, para análise dos marcadores de função hepática. A avaliação comportamental foi efetuada pelo método do labirinto em cruz elevado (LCE). Amostras de fígado foram colhidas e submetidas ao processamento para microscopia de luz. Os animais tratados com TAA apresentaram piloereção, icterícia e cromodacriorréia. Os testes do LCE demonstraram estresse e/ou ansiedade nesses animais. Os fígados cirróticos apresentaram nódulos regenerativos e lesões hemorrágicas na superfície. O ganho de peso foi semelhante entre os grupos tratados, porém, inferior ao do grupo E. Os danos de função hepática foram mais acentuados nos grupos em que houve aumento de dose, entretanto, a mortalidade do grupo D foi elevada (44%). O tratamento com TAA levou ao desenvolvimento de cirrose com formação de nódulos regenerativos circundados por septos fibrosos e desarranjo da arquitetura hepática. A deposição de colágeno foi maior nos grupos B e C. O grupo D apresentou quantidade de colágeno semelhante a do grupo A. O exame histopatológico demonstrou intensa proliferação de células ovais e hiperplasia de ductos biliares com produção de muco ácido. Foi observada presença de hemossiderina, hepatócitos balonizados, lesões nucleares e células inflamatórias. A administração de TAA provocou ainda o desenvolvimento de lesões pré-neoplásicas, sugerindo possível efeito carcinogênico dessa substância. Os resultados demonstraram que os grupos B e C foram os mais eficazes no desenvolvimento da cirrose experimental. O grupo D, apesar do aumento maior na dose, apresentou resultados similares aos do grupo A (dose constante) e alta mortalidade, selecionando animais resistentes à droga. Assim, recomenda-se o modelo de indução do grupo B por apresentar menor mortalidade (5%), menor influência no aspecto emocional e quadro cirrótico tão grave quanto o dos animais do grupo C. / The low sensitivity of animals to drugs and the lack of changes in liver function are the main difficulties for the development of experimental liver cirrhosis. The aim of this study was improving the model of cirrhosis by intraperitoneal injection of thioacetamide (TAA) to reduce the animal adaptation to the drug. We used 5 groups of female Wistar rats: A (200 mg TAA/kg), B (increase of 20% to 48 days), C (increase of 10% every 24 days), D (increase of 15% every 24 days), E (saline). The animals were injected 3 times a week for 14 weeks. Blood samples were collected by cardiac puncture at the start and at the end of the experiment as well as before each dose increment, for analysis of markers of liver function. The behavioral assessment was done by the method of elevated plus-maze. Samples of liver were collected and processed to light microscopy. The animals treated with TAA showed piloerection, jaundice and chromodacryorrhea. Behavioral test showed stress and/or anxiety in these animals. The liver cirrhosis showed regenerative nodules and hemorrhagic lesions on the surface. Weight gain was similar among the groups treated, however, all of them were smaller than those of group E. The damage of the liver function was more pronounced in groups where the dose was increased over the experimental period, however, the mortality of group D was higher (44%). Treatment with TAA led to the development of cirrhosis with formation of regenerative nodules surrounded by fibrous septa and hepatic architecture disruption. The deposition of collagen was higher in groups B and C, whereas group D was similar to group A. Histopathologic evaluation showed intense proliferation of oval cells and bile duct hyperplasia, with production of acid mucin. It was observed the presence of hemosiderin, hepatocyte ballonization, nuclear lesions and inflammatory cells. The administration of TAA led to the development of neoplastic lesions, suggesting possible carcinogenic effect of this substance. The results showed that the treatment of groups B and C were most effective in the development of experimental cirrhosis. Despite that animals of group D received an increment in their TAA dose, their results seems similar to those of group A but with high mortality, probably because the treatment selected resistant animals to the drug. Therefore, it is recommended the model of induction of group B due to the lower mortality (5%), less influence on the emotional aspect and development of cirrhosis as severe as that the rats of group C.

Peçonhas de aranhas são uma rica fonte de moléculas, dentre as quais se destacam os peptídeos neuroativos, que atuam no tecido nervoso de insetos e mamíferos, tais como receptores colinérgicos e glutamatérgicos A retina constitui um neuroepitelio, uma das membranas do segmento posterior do olho, é uma extensão do sistema nervoso central. A lesão isquêmica nesse tecido desencadeia um processo de degeneração celular, sendo os neurônios os principais afetados. Várias patologias oculares, como o glaucoma, estão associadas a uma degeneração neuronal secundária à isquemia, na qual o excesso de L-glutamato (L-Glu) extracelular é lesivo aos neurônios. A peçonha da aranha Parawixia bistriata contém componentes com grande potencial neuroprotetor, como a Parawixina10 (Pwx10), que atua potencializando o transporte de L-Glu e glicina para o meio intracelular. Neste contexto, diante da necessidade de se buscar novas terapias para o tratamento de neuropatologias e de se entender a lesão isquêmica, a Pwx10 surge como potencial fármaco neuroprotetor. Portanto, o objetivo deste trabalho foi analisar o potencial neuroprotetor da Pwx10, em um modelo de isquemia retiniana aguda, com e sem reperfusão, em ratos Wistar. Durante os experimentos de isquemia (ISQ), a pressão intra-ocular (PIO) foi aumentada para 120 mmHg, e mantida por 45 minutos. Nos experimentos em que houve reperfusão (ISQ/REP), após a isquemia, a pressão foi reduzida aos níveis normais e mantida por mais 15 minutos, de forma a restaurar o fluxo sanguíneo e os níveis basais da PIO. As drogas utilizadas para tratamento foram injetadas por via intravitrea, 15 minutos antes do início da isquemia. Após a cirurgia foram realizados os processos histológicos que envolvem técnicas de H-E e Fluoro-Jade C. Em seguida, foram analisadas as densidades de células viáveis na camada nuclear interna (CNI) e camada de células ganglionares (CCG). Os resultados mostraram que os tratamentos com a Pwx10 protegeram as células da CNI tanto em ISQ como ISQ/REP. Comparada com o Riluzole, a Pwx10 foi mais eficaz em CCG ISQ em 15% e CNI ISQ/REP em 23%. Portanto, a Pwx10 apresenta efeitos neuroprotetores em ratos Wistar submetidos à isquemia retiniana aguda, seguida por reperfusão ou não. / Spider venoms are a rich source of molecules, among which stand out the neuroactive peptides that act on the nervous tissue of insects and mammals, such as cholinergic and glutamatergic receptors. The retina is a neuroepithelium, a membrane lining the cavity of the eyeball, it being an extension of the central nervous system. Ischemic injury that tissue triggers a cell degeneration process, and the neurons affected major. Various eye diseases such as glaucoma, are associated with neuronal degeneration secondary to ischemia in which excess L-glutamate (L-Glu) extracellular is harmful to neurons. The venom of Parawixia bistriata spider contains components with high neuroprotective potential, as Parawixina10 molecule (Pwx10), which operates enhancing the transport of L-Glu and glycine to the intracellular medium. In this context, on the need to seek new therapies for the treatment of these diseases and to understand the ischemic injury, Pwx10 emerges as potential neuroprotective drug. Therefore the aim of this study was to evaluate the neuroprotective potential of Pwx10 on an acute retinal ischemia model, with and without reperfusion in rats. During the experiments ischemia (ISC), the intraocular pressure (IOP) was increased to 120 mmHg and maintained at this level for 45 minutes. In experiments in which there was reperfusion (I/R) after the period of ischemia, the pressure was reduced to normal levels and maintained there for 15 minutes in order to restore blood flow and baseline IOP. The drugs used for the treatment were intravitreally injected 15 minutes before the onset of ischemia. After surgery were performed histological techniques involving procedures H-E and Fluoro-Jade C. Then, viable cell densities in the inner nuclear layer were analyzed (INL) and ganglion cell layer (GCL). The results showed that the treatments with Pw10 protected the INL cells both in ISC as IR. Compared with Riluzole, the Pwx10 was more effective in GCL ISC 15% and INL I/R 23%. Therefore, Pwx10 shows neuroprotective effects in Wistar rats with acute retinal ischemia followed by reperfusion or not.

Orintador: Miguel Arcanjo Areas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-09-11T20:50:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goncalves_EstelaMaria_M.pdf: 12830222 bytes, checksum: 30d3d475c9ac706186a0ba8f4166c976 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: As fibras alimentares podem diminuir a digestão e a absorção de nutrientes e influenciar negativamente sua utilização, dependendo de sua fonte e características físico-químicas. Nos países em desenvolvimento, a população consumidora de grande quantidade de fibra é, geralmente, a mesma que apresenta deficiências nutricionais. Dessa forma, um alto consumo de fibra, aliado à desnutrição, pode dificultar a satisfação das necessidades nutricionais, especialmente em situações de alta demanda energética. Assim, fatores como crescimento, gestação precoce, desnutrição e alto consumo de fibra podem, associados ou não, colocar em risco o desenvolvimento infantil, materno e fetal. Por outro lado, a necessidade de adequação nutricional em condições de desnutrição, abre caminho para o estudo dos efeitos do consumo de fontes alimentares não convencionais em indivíduos nutricionalmente carentes. A polpa de laranja, subproduto da produção de suco, é uma fonte não purificada de fibra alimentar (71,1 % de fibra total) que contém, também, proteína (10,7%), gordura (1,2%) e carboidrato (9,9%). Ratas Wistar de 21 dias foram distribuídas em grupos alimentados com as seguintes dietas: normoprotéicas - 25% de proteína sem (N) ou com (NF) a adição de 20% da polpa de laranja; hipoprotéicas - 6% de proteína sem (H) ou com (HF) a adição de 20% da polpa de laranja. Durante o período pré-puberal, no grupo HF observou-se tendência de maior ganho de peso corporal, em relação ao grupo H. O primeiro ciclo estral foi observado aos 84,6 + 5,4 dias de idade (grupo H), 75,1 + 6,0 dias de idade (grupo HF), e aos 45 dias de idade nos grupos N e NF. Verificou-se redução significativa da taxa de mortalidade no grupo HF (9,8%) em relação ao grupo H (59,2%), nesse período. Após o primeiro ciclo estral, as ratas foram acasaladas e mantidas em gaiolas metabólicas até o sacrifício no 19° dia de gestação. As ratas que engravidaram formaram os grupos G. Não foram observadas diferenças significativas entre os grupos com relação à glicemia, proteínas totais plasmáticas e peso fetal. Verificou-se que as ratas normais grávidas e não grávidas que não receberam a polpa de laranja (grupos N e NG), apresentaram maior ganho de peso e maior eficiência alimentar em relação às demais (grupos H, HF, HFG, NF e NFG). As ratas desnutridas (grupos H, HF e HFG), apresentaram ingestão alimentar e hídrica menores que as ratas normais (grupos N, NG, NF e NFG). As ratas que receberam a polpa de laranja na dieta (grupos HF, HFG, NF e NFG), apresentaram pesos relativos do estômago+conteúdo gástrico e do ceco+cólon maiores, em relação aos grupos H, N e NG. A incidência de gravidez e o tamanho das ninhadas foram menores no grupo NFG em relação ao grupo NG. Não foi observada gestação no grupo HG. A percentagem de fetos reabsorvidos foi maior no grupo HFG, em relação ao grupo NG. A polpa de laranja, devido à sua composição química, proporcionou aumento do teor protéico da dieta possibilitando, nas ratas desnutridas, tendência de maior ganho de peso corporal no período pré-puberal, menor taxa de mortalidade, menor atraso no início da puberdade e presença de gravidez. Por outro lado, a ingestão da polpa de laranja pode ter comprometido a biodisponibilidade e a utilização dos nutrientes da dieta nas ratas normais, face às reduções do ganho de peso no período pós-puberal, do coeficiente de eficiência alimentar, da incidência de gravidez e do tamanho das ninhadas, observadas nesses animais / Abstract: Dietary fiber may decrease digestion and absorption of nutrients and nutrient availability, depending on its source and physico-chemical characteristics. In developing countries, people that ingest diets rich in fiber, usually, also exhibit nutritional deficiencies. Consequently, high consumption of foods rich in dietary fiber, associated to malnutrition, may difficultate the satisfaction of nutritional requeriments, especially in situations of high energetic demand. Thus, factors such growth, adolescent pregnancy, malnutrition and high consumption of fiber may, either associated or not, to put in risk infantile, maternal and fetal developments. On the other hand, the need of nutritional adequation in these cases, provides guidelines for study of the effects of consumption of nonconventional dietary sources by subjects nutricionally depleted. Orange pulp, a byproduct of orange juice industry, is a non-purified source of dietary fiber (71,1 % of total dietary fiber) wich also contains protein (10,7%), fat (1 ,2%) and carbohydrate (9,9%). Wistar female rats (21 days of age) were distributed in groups receiving the following diets: normoproteicals - 25% of protein without (N) or with (NF) the addition of 20% of orange pulp; hipoproteicals - 6% of protein without (H) or with (HF) the addition of 20% of orange pulp. During prepubertal period, body weight gain tended to be higher in HF group, comparing to H group. Onset of puberty occured at 84,6 + 5,4 days of age (H group), 75,1 + 6,0 days of age (HF group) and 45 days to age (N and NF groups). Significative reduction of mortality was observed in HF group (9,8%) when compared to H group (59,2%), in these period. After onset of puberty, rats were mated and kept in metabolical cages until sacrifice on 19° day of pregnancy. Pregnant rats composed G groups. Plasmatic glucose, total plamatic proteins and fetal weight were not different among groups. Body weight gain and feed efficiency was higher in N and NG groups than H, HF, HFG, NF and NFG groups. Undernourished females (H, HF and HFG groups) showed lower feed consumption and water ingestion than well-nourished females (N, NG, NF and NFG groups). Rats wich received orange pulp (HF, HFG, NF and NFG groups) presented higher relative weights of fuIl stomach and cecum+colon than groups without orange pulp (H, N and NG). Incidence of pregnancy and offsprings were smaller in NFG group than NG group. Occurence of gestation was 0% in HG group. Fetal reabsorption was higher in HFG group than NG group. Orange pulp, due it chemical composition, could provide increase of proteic level of diet to make possible, in undernourished rats, tendency of higher body weight gain during prepubertal period, reduced mortality, less delay on onset of puberty, and occurence of pregnancy. On the other hand, after onset of puberty, it could decrease nutrient availability in well-nourished females, because the lower body weigth gain during pos-pubertal period, reduction of feed efficiency, less incidence of pregnancy and smaller offsprings observed in these rats / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Rosana Rossi Ferreira / Banca: Luis Antônio de Assis Taveira / Banca: Marjorie de Assis Golim / Resumo: A pele é uma estrutura complexa pois apresenta um conjunto de estruturas superficiais com características elásticas, áspera e sob condições normais tem capacidade de se autoregenerar. Um acidente causando uma lesão de pele de menor ou maior intensidade pode ocasionar um dano grave para o paciente como as queimaduras, as quais, na maioria das vezes, são ocasionadas por agentes térmicos, químicos, elétricos ou radioativos. O tratamento destas lesões visa a restauração dos tecidos lesados e uma das opções de tratamento é a utilização dos biocurativos, um produto biotecnológico desenvolvido pelo Laboratório de Engenharia Celular do Hemocentro de Botucaut/UNESP obtidos a partir da adição "in vitro" de trombina e gluconato de cálcio ao Concentrado de Plaquetas (CP), estimulando a degranulação destas para liberação de vários fatores de crescimento, como PDGF e TGF-ß, atuando no processo de cicatrização. Este estudo propõe avaliar a eficácia do Gel de Plaquetas home made em ratos Wistar com lesões de pele sofridas por queimaduras por escaldo e realizar farmacoeconomia, analisando uma comparação do tempo de tratamento, eficácia e custo do Gel de Plaquetas com o tratamento hospitalar usual em queimaduras à base de colagenase + cloranfenicol. Foram incluídos 25 ratos da raça Wistar, divididos em 3 grupos segundo o tipo de tratamento utilizado: Grupo A, Colagenase + Cloranfenicol (10 ratos); Grupo B, Gel de Plaquetas (10 ratos) e Grupo C, controle (5 ratos). Os produtos foram aplicados em dias alternados em todos animais por um período de 30 dias e as lesões analisadas clinicamente e histológicamente. No grupo A, observou-se eritema em todos os animais avaliados, onde a presença de crosta foi uma constante, com exceção de 1 animal. A presença de exsudato ocorreu em 2 animais deste grupo. No grupo B, observou-se a presença de eritema e crosta em todos os animais e não houve exsudato ... / Abstract: Skin is a complex structure because it shows a surface structure group with elastic features, rough and under normal conditions it is able to self regenerate. An accident causing a lower or higher intensity skin lesion may cause serious injury to the patient such as burns which usually are caused by thermal, chemical, electrical or radioactive agents. The treatment of such injury aims at the restoration of damaged tissues and one treatment option is the use of bio bandages, a biotech product developed by the Laboratório de Engenharia Celular do Hemocentro de Botucatu/UNESP (Cell Blood Center Engineering Laboratory from Botucatu / UNESP) obtained from "in vitro" thrombin and calcium gluconate addition to Platelet Concentrates (PC), stimulating the degranulation to releasing several growth factors such as PDGF and TGF-ß, working in the healing process. This study aims to assess the home made Platelet Gel effectiveness in Wistar rats with skin injuries suffered from scald burns and perform pharmacoeconomics, analyzing a treatment time comparison, the cost and effectiveness of Platelet Gel concerning the usual hospital treatment for collagenase + chloramphenicol based burns. We included 25 Wistar rats divided into 3 groups according to treatment type used: Group A, Collagenase + Chloramphenicol (10 rats), Group B, Platelet Gel (10 rats) and Group C, control (5 rats). Products were administered on alternate days in all animals for 30 days and lesions were clinically and histologically analyzed. In group A, erythema was observed in all evaluated animals, where the presence of crust was a steady, with one animal exception. The presence of exudate occurred in two animals in this group. In group B, erythema and crust were observed in all animals and there was no exudate in any animal this group. In group C, all animals showed erythema, but the presence of crust occurred in only 1 animal. There was no exudate in the animals. In statistical ... / Mestre

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2012-04-09T22:31:59Z No. of bitstreams: 2 Tese_ModeloInVitroParkinsonismo.pdf: 1410946 bytes, checksum: 6c060f9f78f49f433c8060e15db57ef8 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos(edisangela@ufpa.br) on 2012-04-09T22:34:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese_ModeloInVitroParkinsonismo.pdf: 1410946 bytes, checksum: 6c060f9f78f49f433c8060e15db57ef8 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-09T22:34:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese_ModeloInVitroParkinsonismo.pdf: 1410946 bytes, checksum: 6c060f9f78f49f433c8060e15db57ef8 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2011 / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / Evidências crescentes na literatura têm sugerido papel importante para os fatores ambientais, como a exposição a pesticidas, na patogênese da doença de Parkinson. Em animais experimentais, a exposição à rotenona, um pesticida e piscicida de uso comum, induz características de parkinsonismo através da inibição do complexo I mitocondrial. O objetivo deste estudo foi investigar a morte de neurônios induzida por rotenona utilizando culturas primárias mistas neurônio/glia derivadas de hipocampo e de mesencéfalo ventral de ratos, bem como o papel do Ca2+ na neste modelo experimental e a utilização de extrato aquoso de folhas de mogno com substâncias com alto poder antioxidante. A perda neuronal foi analisada com ensaios colorimétricos (MTT e LDH). Nossos resultados mostraram significativa redução na viabilidade celular após exposição à rotenona de maneira dependente de concentração, mas não dependente de tempo. Foi observada igual e elevada suscetibilidade em culturas mistas neurônio/glia derivadas de hipocampo e de mesencéfalo ventral ao agente neurotóxico. Em termos mecanicísticos, nossos resultados mostraram um papel discreto desempenhado pelo Ca2+ mitocondrial na neurodegeneração induzida por rotenona. Além disso, neste paradigma utilizado, verificamos que o extrato aquoso de folhas de mogno não promoveu proteção contra a toxicidade da rotenona, na concentração testada; ainda, promoveu efeito sinérgico em associação com rotenona. Verificou-se ainda que a rotenona, bem como o extrato de mogno promoveu indução de morte celular tanto por necrose quanto por apoptose, nas concentrações utilizadas. Os resultados deste estudo devem avançar nosso conhecimento sobre o mecanismo de ação de fatores ambientais na patogênese da doença de Parkinson. / Increasing evidence has suggested a role for environmental factors, such as exposure to pesticides, in the pathogenesis of Parkinson’s disease. In experimental animals the exposure to rotenone, a common herbicide and piscicide, induces features of parkinsonism by inhibiting the activity of mitochondrial complex I. Here we propose to investigate rotenone-induced death of neurons by using primary neuron-enriched and neuron-glia cultures from the rat hippocampus and ventral mesencephalon. The neuronal loss was evaluated with the colorimetric MTT assay. Our results showed significant reduction in the cell viability after exposure to rotenone in a dose- but not in a timedependent manner. We also discovered a remarkable feature of rotenone-induced degeneration of cultured neurons. The higher susceptibility was observed in neuron-glia cultures from the ventral mesencephalon, suggesting that the presence of glia, especially microglia, is an important factor contributing to neurodegeneration. Also, as showed by immunohistochemistry, this type of culture presented the higher density of tirosinahidroxilase (TH)-positive neurons. Mechanistically, our results with calcium blockers showed a minimal role played by external calcium, and an important synergistic influence of the ions from the internal stores in the rotenone-induced neurodegeneration. Indeed, in this study, we report that aqueous extract of mahogany leaves didn’t protect against the rotenone-induced toxicity, in the used concentration; and promoted a synergistic effect when associated with rotenona. Finally, the mahogany leaves extract induced celular death both necrosis and apoptosis. The results of this study should advance our understanding of the mechanism of action for environmental factors in the pathogenesis of Parkinson’s disease.

A incidência de osteoartose, ou degeneração da cartilagem articular aumenta na pós-menopausa, condição esta relacionada à deficiência de estrógeno. Por outro lado, tem sido demonstrado que a atividade física regular e moderada tem efeitos benéficos sobre o sistema esquelético, em qualquer condição, mas especialmente na menopausa. Utilizando ratos Wistar, como modelo experimental, os objetivos deste trabalho são: a) verificar se a ooforectomia produz alterações na estrutura da cartilagem articular da epífise proximal da tíbia e b) verificar se a realização de exercícios físicos aeróbicos tem efeito sobre estas alterações. Para a realização deste estudo foram utilizadas 24 ratas com 6 meses de idade, da linhagem Wistar, distribuídas em 3 grupos de oito ratas cada: GC-Ratas com seis meses de idade, não submetidas à ooforectomia nem atividade física; GOS-Ratas com seis meses de idade, que sofreram ooforectomia bilateral, mas que não fizeram atividade física e, GOT-Ratas com seis meses de idade que foram submetidas à ooforectomia bilateral mais atividade física (corrida em esteira) durante 3 meses. Todos os animais foram eutanasiados com 9 meses de idade. A avaliação foi realizada através de microscopia de luz em cortes histológicos corados pela Hematoxilina-Eosina e pelo Picrossírius e estudos à microscopia eletrônica de varredura. À microscopia de luz, foram feitas medidas da espessura das zonas da cartilagem articular, contado o número de condrócitos por área, determinados os volumes dos núcleos dos condrócitos e a densidade de volume das fibras colágenas e à microscopia eletrônica de varredura foi analisada a superfície da cartilagem nos três grupos. Os dados quantitativos foram comparados estatisticamente pelo ANOVA e teste de Tukey. Os resultados mostraram que houve um aumento de peso nos animais do GOS e GOT em relação ao GC. Quanto ao treinamento, os animais do GOT tiveram melhor rendimento nos TEMs. Quanto à espessura da cartilagem observamos um aumento da espessura da zona superficial no côndilo medial da tíbia no GOS em relação ao GC. O número de condrócitos por campo foi alterado apenas no GOS, que mostrou um aumento de 34% em relação ao GC, o que, ao que parece, se deveu ao aumento do número de condrócitos da camada profunda. O volume nuclear dos condrócitos da zona superficial foi menor no GOS que no GC. O mesmo ocorreu na zona média do côndilo medial. Quanto aos valores da cartilagem da epífise proximal como um todo, observamos que o volume nuclear dos condrocitos do GOS e também do GOT foram menores do que do GC. Para o colágeno observamos um aumento da densidade de volume do colágeno no GOS e no GOT em relação ao GC. A microscopia eletrônica revelou a presença de lesões degenerativas semelhantes tanto para o GOS, quanto para o GOT. Podemos concluir que a depressão dos níveis de estrógeno acarreta alterações importantes na cartilagem articular da epífise proximal da tíbia tanto no componente celular, quanto na matriz e que a realização de exercícios físicos, isoladamente, parece não influenciar essas alterações. / The incidence of osteoarthritis increase in women in the post-menopausal period. This condition is relationed with the estrogen deficiency. Otherwise, it\'s being demonstrated that regular or moderate physical activity have beneficial effects on the skeletal system, in any condition, but especially in the menopause. Using Wistar rats, as an experimental model, the aims of this work are: a) to check if the ovariectomy produces alterations in the articular cartilage structure of the tibial proximal epiphysis and b) To check if aerobic physical exercises have effects on this alterations. To achieve these goals it was used 24 Wistar rats of 6 months of age, distributed in 3 groups of eight rats each: Control group- Rats with six months of age without ovariectomy and physical activity; GOS- Rats with six months of age with ovariectomy bilateral and without physical activity and, GOT- Rats with six months of age with ovariectomy bilateral and physical activity during 3 months. Al rats were euthanasied with 9 months of age. The results were obtained by using light microscopy to observe the histological sections stained with Hematoxylin and Eosin, and Picrosirius stain and the Scanning Electron Microscope. For light microscopy, were measured the thickness of cartilage, counted the number of chondrocytes, determined the volumes nuclei of chondrocytes and the density of volume of the collagens fibers. For the Scanning Electron Microscope, was analyzed the cartilage surface in the three groups. The data were statistically compared for the ANOVA and Tukey´s test. The results showed that there was an increase in the weight in the animals of GOS and of GOT. In relation to training, the animals of GOT obtained the best income in the TEMs. In relation to the thickness of the articular cartilage it was observed a decrease in the superficial layer of the medial condyle in the GOS and GOT. The number of chondrocytes was altered only in the GOS, that obtained an increase of the 34% on GC in the deep layer. The nuclear volume of chondrocytes in the superficial layer was higher in the GC than the GOS .The same occurred in the medium layer when the two tibial condyles, lateral and medial were assessed separately, but when the values of the epiphysial cartilage was considered as a whole, we found that the volume nuclei of chondrocytes in the GC was higher than the GOS and the GOT. For the collagen, the values of density of volume of the collagen fibers was higher in the GOS and in the GOT than the GC. The Scanning Electron microscopy showed the presence of degenerative lesions in both GOS and GOT. We can conclude that the depression levels of estrogen produced important changes in the tibial cartilage and that the physical activity doesn\'t have effects on these changes.

Problemas de consolidação óssea são um grande desafio clínico, pois geram altos custos de tratamento, morbidades e prejuízos a qualidade de vida. A técnica de regeneração óssea guiada é empregada com o intuito de promover a melhora no processo de regeneração de defeitos ósseos através da utilização de barreiras biológicas, que protegem o local da lesão e favorecem a ação de células osteogênicas. A membrana de látex natural, extraído da seringueira Hevea brasiliensis tem sido apontado como um biomaterial promotor da regeneração em diferentes tecidos, e por este motivo escolhido como objeto de estudo desta pesquisa. O objetivo foi avaliar o efeito da utilização de membrana de látex natural no processo de regeneração guiada de defeito ósseo em ossos longos de ratos, através de análises estruturais, radiológicas, microscópicas e da expressão de proteínas osteogênicas. Foram utilizados sessenta ratos Wistar divididos igualmente em quatro grupos (n=15), sendo: animais tratados com membrana de látex por uma (L1) ou quatro semanas (L4) e animais que não receberam tratamento específico por uma (C1) ou quatro semanas (C4). Um defeito ósseo de 2,5 mm de diâmetro foi realizado na região medial da tíbia esquerda de cada animal. Nos animais do grupo tratado, uma membrana de látex foi posicionada sobre os defeitos ósseos. Após os períodos experimentais de uma ou quatro semanas os animais foram submetidos a eutanásia e a tíbia esquerda de cada animal foi dissecada, limpa das partes moles e submetida às análises macroscópica, densitométrica, radiológica, mecânica, histomorfométrica, estereológica e imunohistoquímica. A influência das varáveis tempo e membrana, bem como a interação tempo*membrana sobre os dados foram avaliadas. Para os dados referentes à imunomarcação de osteocalcina foi aplicado teste de modelo linear generalizado com fatores independentes. Para o restante dos resultados foi realizada análise de ANOVA multivariada com dois fatores independentes. Todas as comparações foram realizadas com ajuste de Bonferroni e adotado nível de significância de 5%. Foram observadas diferenças estatisticamente significantes em relação a variável tempo, em que grupos avaliados quatro semanas após a cirurgia apresentaram resultados superiores para as medidas de comprimento (p<0,001), massa (p<0,001), força máxima (p<0,001) e rigidez relativa da tíbia (p<0,001), bem como para as medidas de densidade radiológica (p=0,008), densidade mineral óssea (p=0,017), volume ósseo neoformado (p<0,001) e fibras de colágeno tipo III (p<0,001). Em relação à utilização da membrana de látex, os grupos tratados apresentaram resultados estatisticamente superiores para as análises de rigidez relativa (p=0,048), fibras de colágeno tipo I (p=0,018), volume ósseo neoformado (p<0,001) e expressão de osteopontina (p=0,037). Concluímos que a utilização de membrana de látex em regeneração óssea guiada em defeitos realizados em tíbias de ratos melhorou sensivelmente a regeneração do tecido. / Problems of bone consolidation are a significant clinical challenge, as they generate high treatment costs, morbidities, and damages to the quality of life. The guided bone regeneration technique is used to improve the regeneration process of bone defects through the use of biological barriers that protect the site and favor the action of osteogenic cells. The natural latex membrane extracted from the rubber tree Hevea brasiliensis has been identified as a biomaterial promoting regeneration in different tissues, and for this reason chosen as the object of study of this research. The objective was to evaluate the effect of the use of natural latex membrane in the process of guided regeneration of bone defect in long bones of rats, through structural, radiological, microscopic analysis and the expression of osteogenic proteins. Sixty Wistar rats were equally divided into four groups (n = 15): latex membrane treated animals for one (L1) or four weeks (L4) and animals that received no specific treatment for one (C1) or four weeks (C4). A bone defect of 2.5 mm diameter was performed in the medial region of the left tibia of each animal. In the animals of the treated group, a latex membrane was positioned over the bone defects. After the experimental periods of one or four weeks, the animals were submitted to euthanasia, and the left tibia of each animal was dissected, cleaned of soft parts and submitted to macroscopic, densitometric, radiological, mechanical, histomorphometric, stereological and immunohistochemical analysis. The influence of the variable time and membrane as well as the time * membrane interaction on the data were evaluated. For the data referring to the osteocalcin immunostaining, a generalized linear model with independent factors was applied. For the rest of the results, a multivariate ANOVA analysis was performed with two independent factors. All comparisons were performed with Bonferroni adjustment and adopted a significance level of 5%. Statistically significant differences were observed in relation to the time variable, in which groups evaluated four weeks after surgery presented superior results for the measures of length (p <0.001), mass (p <0.001), maximal strength (p <0.001) and stiffness (P <0.001), as well as for measurements of radiological density (p = 0.008), bone mineral density (p = 0.017), neoformed bone volume (p <0.001) and type III collagen fibers (p <0.001) ). About the use of the latex membrane, the treated groups presented statistically superior results for analyzes of relative stiffness (p = 0.048), type I collagen fibers (p = 0.018), neoformed bone volume (p <0.001) and expression of Osteopontin (p = 0.037). We conclude that the use of latex membrane in guided bone regeneration in defects performed in rat tibiae significantly improved tissue regeneration.

Submitted by Márcio Ropke (ropke13marcio@gmail.com) on 2017-07-06T12:56:02Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tratamento da Periodontite Experimental em Ratos com Clorexidina como.pdf: 1477084 bytes, checksum: a0168417a41928c735cd9509027a9f46 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-06T12:56:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tratamento da Periodontite Experimental em Ratos com Clorexidina como.pdf: 1477084 bytes, checksum: a0168417a41928c735cd9509027a9f46 (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / Sem bolsa / Evidências científicas apontam que os microorganismos presentes nos biofilmes subgengivais podem causar danos diretos e indiretos ao periodonto. O dano indireto pode ser ocasionado pela ativação das respostas imunoinflamatórias do hospedeiro, e, de forma geral, é o principal responsável pela degeneração dos tecidos periodontais. O tratamento da periodontite é baseado na remoção de microbiota subgengival patogênica, por meio da raspagem e alisamento radicular (RAR). No entanto, fatores sistêmicos e locais, como áreas de difícil acesso aos instrumentos periodontais, podem comprometer a eficácia do tratamento periodontal. Intervenções terapêuticas associando diferentes fármacos ao tratamento com RAR têm sido pesquisadas. Assim, este estudo avalia os efeitos da irrigação subgengival utilizando clorexidina (RAR) 0,12% e 0,2% como adjuvante ao tratamento mecânico da periodontite induzida por ligadura de algodão em ratos. A periodontite foi induzida por ligadura de algodão amarrada subgengivalmente ao redor do primeiro molar inferior esquerdo em noventa ratos. A ligadura foi removida após sete dias e os animais foram distribuídos nos grupos: 1) grupo RAR, raspagem e alisamento radicular (RAR) e irrigação subgengival com solução salina a 0,9% (n = 30); 2) grupo RAR + 0,12% CHX, RAR e irrigação com CHX a 0,12% (n = 30); 3) RAR + grupo CHX a 0,2%, RAR e irrigação com CHX a 0,2% (n = 30). Dez animais de cada grupo foram sacrificados aos 7, 15 e 30 dias após o tratamento. A região de furca foi analisada histometricamente para determinar a área de perda óssea. Os dados foram analisados com a análise de variância unidirecional de Kruskal-Wallis (ANOVA) seguida pelo teste de Dunn (p <0,05). Ambos os grupos de clorexidina apresentaram menor inflamação e melhor reparação tecidual ao longo do experimento quando comparados com o grupo RAR. Na análise histométrica aos 7, 15 e 30 dias, o grupo RAR (4,58 ± 2,51 mm2, 4,21 ± 1,25 mm2, 3,49 ± 1,48 mm2) apresentou maior perda óssea (p> 0,05) do que os grupos RAR + 0,12% CHX (1,86 ± 1,11 mm2, 0,79 ± 0,27 mm2, 0,34 ± 0,14 mm2) e RAR + 0,2% CHX (1,14 ± 0,51 mm2, 0,98 ± 0,40 mm2, 0,41 ± 0,21 mm2), respectivamente. A irrigação subgengival com clorexidina parece apresentar propriedades antiinflamatórias com características histoprotetoras durante o tratamento da periodontite. / Periodontitis is caused by subgingival bacterial communities with virulence potential. These bacteria cause tissue rupture and/or trigger destructive immunopathological responses of the host which, in turn, lead to the destruction of the supporting periodontal tissue and may cause eventual loss of teeth. Scientific evidence indicates that microorganisms present in subgingival biofilms can cause direct and indirect damage to the periodontium. The indirect damage can be caused by the activation of host immune responses that result in the degeneration of the periodontal tissues. The treatment of periodontitis is based on the removal of pathogenic subgengival microbiota by scaling and root planing (RAR). However, systemic and local factors, such as areas of difficult access to periodontal instruments, may compromise the effectiveness of periodontal treatment. Therapeutic interventions involving different drugs to RAR treatment have been investigated. This study evaluates the effects of subgingival irrigation using 0.12% or 0.2% chlorhexidine (CHX) as adjuvant to mechanical treatment of periodontitis induced in rats. Periodontitis was induced by means of a cotton ligature tied subgengivally around the first lower left molar in ninety rats. The ligature was removed after seven days and the animals were divided into the following groups: 1) RAR group, scaling and root planing (RAR) and subgingival irrigation with 0.9% saline solution (n = 30); 2) RAR + 0.12% CHX, RAR group and irrigation with 0.12% CHX (n = 30); 3) RAR + 0.2% CHX group, RAR and irrigation with 0.2% CHX (n = 30). Ten animals from each group were sacrificed at 7, 15 and 30 days after treatment. The furcation region was analyzed histometrically to determine the area of bone loss. Data were analyzed using Kruskal-Wallis univariate analysis of variance (ANOVA) followed by the Dunn test (p<0.05). Both groups of chlorhexidine presented lower inflammation and better tissue repair throughout the experiment when compared with the RAR group. In the histometric analysis at 7, 15 and 30 days, the RAR group (4.58 ± 2.51 mm2, 4.21 ± 1.25 mm2, 3.49 ± 1.48 mm2) presented greater bone loss (p> 0.05) than the RAR + 0.12% CHX groups (1.86 ± 1.11 mm 2, 0.79 ± 0.27 mm 2, 0.34 ± 0.14 mm 2) and RAR + 0.2% CHX (1.14 ± 0.51 mm 2, 0.98 ± 0.40 mm 2, 0.41 ± 0.21 mm 2), respectively. Subgingival irrigation with chlorhexidine appears to have anti-inflammatory properties with histoprotective characteristics during the treatment of periodontitis.