Made available in DSpace on 2016-04-04T12:45:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 luana_lourenco_ioc_mest_2015.pdf: 2708180 bytes, checksum: 1ba7e6b26d3cc94cbe2e47f016f3d912 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Estudos prévios sobre os aspectos histopatológicos da leishmaniose tegumentar americana (LTA) causada por Leishmania (Viannia) braziliensis indicam que a carga parasitária, apesar de baixa, variava de acordo não só com a forma clínica, mas também com o tempo de evolução da doença. O insucesso do tratamento e a evolução para formas mais graves dependem de características do parasita e de aspectos da resposta imune do paciente, dentre outros. Os pacientes com a forma cutânea tendem a responder de forma satisfatória, mesmo com protocolo em que se usa baixa dose de antimoniato de meglumina. Entretanto, alguns desses casos demoram mais tempo para atingir a cura clínica ou recidivam ou ainda desenvolvem a forma mucosa. Este projeto teve como meta avaliar a carga parasitária inicial e fatores de virulência em lesões de pacientes com LTA, correlacionando com a forma clínica e resposta à terapêutica. Foram selecionados 82 pacientes com diagnóstico confirmado de LTA. A carga parasitária foi avaliada por PCR quantitativo (qPCR), utilizando-se como alvo genes de subunidade menor de RNA ribossomal (SSR). A análise da expressão gênica de GP63 deu-se pelo uso de RT-PCR e a imunolocalização de GP63 e LPG nas lesões foi conduzida por ensaios de imunoperoxidase. Os dados de quantificação da carga parasitária mostraram parasitismo maior nas lesões que evoluíram com boa resposta ao tratamento, enquanto que a expressão gênica de GP63 e a produção \201Cin situ\201D de GP63 e LPG foram mais significativas nos casos que evoluíram de forma desfavorável ao tratamento. Com isso podemos concluir que mais que a carga parasitária, a regulação de fatores de virulência no infiltrado inflamatório pode influenciar na evolução clínica da LTA causada por L.(V.) braziliensis / Previous studies on the histopathological aspects o f american cutaneous leishmaniasis (ACL) caused by Leishmania (V.) braziliensis indicate that the parasite load, although low, varied according not only to th e clinical form, but also with the disease progression. Treatment failure and progress ion to more severe forms depend on parasite characteristics and the aspects of pati ent immune response, among other factors. Patients with cutaneous form tend to respo nd satisfactorily, even with protocols that use low-dose meglumine antimoniate. However, some of these cases either take longer to reach clinical cure, relapse or even develop to mucosal form. This project aims to assess the initial parasite load an d virulence factors in patients with ACL injuries, correlating with the clinical present ation and response to therapy. We selected 82 patients with confirmed diagnosis of LT A. The parasitic load was measured by quantitative PCR (qPCR), using small su bunit ribosomal RNA (SSR) genes as targets. Analysis of GP63 gene expression was done by RT-PCR and immunolocalization of GP63 and LPG lesions was cond ucted by immunoperoxidase assays. The quantification of the parasite load dat a showed higher parasitism in lesions that evolved with good response to treatmen t, whereas gene expression of GP63 and "in situ" production of GP63 and LPG were more significant in cases that evolved unfavorably to treatment. Thus, we conclude d that rather than the parasite load, the regulation of virulence factors in the in flammatory infiltrate may be influencing the clinical course of ACL caused by L. (V.) braziliensis .

Made available in DSpace on 2016-04-12T12:39:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 vitor_vidal_ioc_dout_2015.pdf: 6590315 bytes, checksum: d6d795223559de178805e770f1f778fc (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / As calpaínas são cisteíno-peptidases intracelulares dependentes de cálcio classicamente citosólicas envolvidas em diversas funções moduladores da célula, como transdução de sinais, divisão celular, apoptose e diferenciação. Embora melhor caracterizadas em mamíferos, as calpaínas já foram descritas em insetos, nematódeos, plantas, fungos, protozoários e bactérias. No Trypanosoma cruzi, como nos demais tripanossomatídeos, já foi descrita a presença de uma ampla e diversa família de calpaínas em seu genoma, mas pouco se sabe a respeito das suas funções específicas. Portanto, o presente trabalho teve como objetivo buscar as sequências de calpaínas do T. cruzi em seu genoma no intuito de classificá-las, assim como avaliar a expressão gênica das sequências de maior similaridade com as calpaínas de mamíferos. Além disso, um anticorpo gerado contra uma sequência peptídica conservada entre as calpaínas selecionadas foi utilizado em ensaios de identificação, expressão e localização celular. Nesse contexto, as análises in silico identificaram ao todo 55 sequências relacionadas às calpaínas no genoma do T. cruzi. Em seguida, através de alinhamentos múltiplos e análise de domínios conservados, foi possível classificar as calpaínas em quatro grupos distintos de acordo com a presença de domínios conservados característicos desta família multigênica. Dos quatro grupos identificados, foi selecionado para aprofundamento do estudo aquele que possuía o maior número de domínios conservados e continha o domínio que alberga o sítio catalítico das calpaínas (conservado ou não) A análise de expressão gênica de um total de dezesseis genes selecionados por qPCR revelou a presença de seis genes com expressão aumentada nas formas clinicamente relevantes (amastigotas e tripomastigotas) em relação as formas epimastigotas, e cinco genes nesta última forma. Em paralelo, o anticorpo anti-calpaínas se mostrou reativo em ensaios de Western Blotting, citometria de fluxo e microscopia de eletrônica de transmissão. Os ensaios de Western Blotting revelaram uma calpaína específica em amastigotas e outra em tripomastigotas, além de outras sete de massas moleculares variadas presentes nas três formas do parasito. Os resultados de citometria de fluxo indicam maior marcação intracelular do anticorpo nas formas amastigotas e tripomastigotas em relação aos epimastigotas. Por fim, as análises ultraestruturais revelaram a presença das calpaínas em todo citoplasma, nas membranas de vesículas, na membrana plasmática, e no flagelo das diferentes formas do parasito. O estudo comparativo da expressão das calpaínas nas formas evolutivas do T. cruzi, assim como a determinação de sua localização celular, podem ajudar a determinar as funções gerais desta família multigênica no parasito / Calpains comprise a family of calcium dependent cy steine peptidases commonly present in cytoplasm implicated in a broad range of cellular modular functions such as signal transduction, cellular division, apoptosis and differentiation processes. Although well - characterized in mammals, these peptidases have also been described in insects, nematodes, plants, fungi, protozoa and bacteria . In Trypanosoma cruzi , as in other trypanosomatids, the presence of an extensive and diverse family of calpain s had already been described in its genome . However, the specific functions of these molecules are still unclear. In this context, the present study aimed to search calpain sequences in T. cruzi genome to classify the genes and to evaluate mRNA expression levels of the most conserved calpain sequences . In addition, an a ntibody against T. cruzi calpain was produced from a conserved sequence of trypanosomatid calpains to evaluate these proteases levels, also determining their ultrastructural localization. At first, in silico analysis revealed a total of 55 calpain sequence s in T. cruzi genome . Through multiple alignments and phylogenetic analysis of conserved domains in the se sequences, the calpains were sorted into four distinct groups characterized by the presence of classical domains of this multigenic family. After this in silico analysis, we decided to scrutiny the group that has the highest number of conserved domains and presents domain II, which contains the catalytic active site (either altered or conserved), in order to analyze mRNA and protein e xpression patterns in the different T. cruzi forms. The comparison of calpain mRNA abundance of sixteen genes by qPCR in the three distinct parasite forms revealed six genes with increased expression in the clinical relevant forms (amastigotes and trypomas tigotes) and five in the invertebrate form. S imultaneously , the anti - tritryp - calpain antibody was capable of recognizing reactive molecules in Western Blotting, flow citometry and transmission electron microscopy analysis. Altogether, Western Blotting anal ysis revealed seven calpains with different molecular masses present in the three forms of the parasite, while one specific calpain was detected either in amastigotes or tripomastigotes. Also, flow citometry results showed a higher intracellular expression in amastigotes and trypomastigotes in comparison with epimastigotes. Finally, ultrastructural analysis revealed the presence of theses proteases in the cytoplasm, vesicular membranes, plasma membranes and flagellum of the three life cycle forms. The compa rative study of calpain gene expression in the distinct T. cruzi forms, as well as the cellular localization of these molecules could be useful approaches to find out the calpain main functions in this parasite.

Made available in DSpace on 2016-04-27T12:28:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 ohanna_bezerra_ioc_mest_2015.pdf: 4663444 bytes, checksum: 4247a27130a3c1e033f6b0fe1051e5c3 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica provocada pelo patógeno intracelular obrigatório Mycobacterium leprae. Dado à baixa variabilidade desse bacilo, aliado à variedade de formas clínicas desenvolvidas na hanseníase, sugere-se que o componente genético do hospedeiro é o grande responsável pelo desenvolvimento da doença. Até o momento, polimorfismos de base única (SNPs) em diversos genes foram associados com a predisposição à hanseníase em estudos independentes em diferentes populações. Recentemente, SNPs no gene PKLR foram associados ao risco de desenvolvimento da hanseníase pelo nosso grupo. Na tentativa de melhor investigar o efeito de suscetibilidade desse gene a patógenos intracelulares, o presente estudo avaliou a associação de SNPs adicionais do PKLR com a hanseníase na população Brasileira e com a tuberculose na população de Moçambique. Os parâmetros funcionais relacionados aos marcadores do PKLR também foram avaliados. Inicialmente, foi feita uma seleção de SNPs a partir da busca nos dados do HapMap. Estes SNPs foram genotipados em um estudo de associação seguindo um desenho do tipo caso-controle na população do Rio de Janeiro. Os resultados mostraram uma associação significativa de suscetibilidade a hanseníase para os SNPs rs11264355, rs11264359, rs4620533 e rs4971072 na população do Rio de Janeiro, assim como para o haplótipo rs11264355G/rs11264359G/rs4620533G/rs49710729 Em seguida, os SNPs rs4620533 e rs4971072 foram usados para um segundo estudo de associação do tipo caso-controle em uma população de Moçambique, onde não foi verificada associação com a tuberculose. Paralelamente, foi realizado o sequenciamento do éxon 11 do PKLR em populações com diferentes backgrounds genéticos e o perfil de desequilíbrio de ligação destas populações foi caracterizado. O resultado expandiu a análise de SNPs deste trabalho e contribuiu para definir \201Ctag SNPs\201D ligados aos marcadores de risco. Em seguida, a relação genótipo-fenótipo foi avaliada através da análise de parâmetros sanguíneos e da atividade da enzima piruvato quinase (PK). Os genótipos associados no estudo genético mostraram estar relacionados com o aumento de ferritina em indivíduos sadios. Posteriormente, estes genótipos sugeriram associação com o aumento de haptoglobina em indivíduos sadios e em pacientes. Por fim, não foram observadas alterações nos níveis de atividade da PK em função dos genótipos. Os achados do presente estudo confirmam a associação genética do PKLR com suscetibilidade à hanseníase na população do Rio de Janeiro, assim como sugere a correlação entre os marcadores genéticos e os níveis de ferritina e haptoglobina. O dado genético integrado aos resultados funcionais sugere um potencial efeito biológico que poderia propiciar o risco ao desenvolvimento de doenças por patógenos intracelulares / Leprosy is a chronic infectious disease caused by the obligate intracellu lar pathogen Mycobacterium leprae . Given the low variability of the bacile with the variety of clinical phenotype exhibited in leprosy, it is suggested that the genetic componente of the host is responsable to leprosy development. Until now, single nucleot ide polymorphisms (SNPs) in many genes were associated with leprosy predisposition in independente studies and population. R ecently , SNPs in t he PKLR gene wer e associated with leprosy susceptibility by our group. Aiming to investigate the susceptibility to intracellular pathogens, this study evaluated the association of additional SNPs of the PKLR in a Brazilian population , followed by an case - control study with tuberculosis in a Mozambique population. F unctional parameters correlated to the polymorphic var iants were also evaluated. Initially, using the HapMap population data , we performed a n analysis to search for SNPs which were tested in an case - control association study. Results show ed a significant susceptibility associat ion with leprosy within SNPs rs1 1264355, rs11264 359, rs4620533 and rs4971072 in Rio de Janeiro population . In addition, we demonstrated that the haplotype rs11264355G/rs11264359G/rs4620533G/rs4971072G was significantly associated with leprosy susceptibility in this population. Then SN Ps rs4620533 and rs4971072 were tested in a case - control study with a Mozambique population and no association with TB was verified. In parall el, we sequenced the PKLR exon 11 in order to seek new SNPs in the region and characterize the linkage disequilibrium profile in populations with different genetic backgrounds. This result has expanded the SNPs analysis of this work and contributed to define "tag SNPs" linked to risk markers. Also the genotype - phenotype relationship was assessed by the analysis of blood parameters and p YRI vate kinase (PK) activity. The genotypes were correlated with increased ferritin and haptoglobin levels in healthy indivi duals and they were significantly associated with increased haptoglobin in leprosy patients. Posteriorly, no changes were observed in PK activit y within the genotypes . T his study confirmed the genetic association of PKLR with leprosy susceptibility in Rio de Janeiro population. Thus t h ese findings reinforces the genetic association of PKLR with leprosy in the population of Rio de Janeiro , as well as identified a correlation between the genetic markers and ferritin and haptoglobin level s. F unctional results suggest ed a potential biological effect of the variants that could provide risk to the development of intracellular pathogens . / 2016-06-22

Made available in DSpace on 2016-05-11T12:48:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 119.pdf: 1745768 bytes, checksum: 9bfd9cd691a8e94e12ca96a48d45f683 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Das espécies existentes de Listeria, a Listeria monocytogenes é considerada patogênica e está envolvida em casos de listeriose. O sorotipo 4b é mais comum entre cepas responsáveis por surtos e casos esporádicos de doença. Há dois tipos de listeriose: a invasiva que pode até afetar o SNC (SistemaNervoso Central) e, a não-invasiva. Existem vários registros da presença desse patógeno em leite e derivados como o queijo, assim como diversos surtos de doenças graves associadas à ingestão desses alimentos contaminados. A infecção patogênica por L. monocytogenes pode afetar indivíduos sadios, eprincipalmente aqueles pré-dispostos através de doenças que afetam o sistemaimunológico, como câncer ou AIDS, e também outros indivíduos susceptíveis como idosos, mulheres grávidas, recém-nascidos ou fetos. Na maioria dos casos os sintomas são diarréia, febre, dor de cabeça e mialgia, e em alguns casos gastroenterite. De acordo com a Resolução -RDC n. 12, de 02/01/2001,do Ministério da Saúde, foi estabelecida ausência de L. monocytogenes em 259 de amostra de queijo minas frescal. O objetivo principal deste trabalho foifazer o isolamento de L. monocytogenes em amostras de queijo tipo minas frescal, utilizando a caracterização fenotípica baseada na IS011290-1 e a caracterização molecular através da Multiplex-PCR otimizada por Doumith et al(2004). Foram utilizados os meios Oxford, Palcam e Cromogênico para cultura,e 5 pares de primers específicos para Multiplex-PCR. Das 30 amostras analisadas, 14 amostras (47 por cento) apresentaram Listeria spp. e 5 (17 por cento)apresentaram L. monocytogenes, que pertence ao grupo dos sorovares 1/2b,3b, 4b, 4d e 4e, sendo provavelmente o sorovar 112b elou 3b o encontrado nasamostras analisadas. Tanto a caracterização fenotípica como a caracterização molecular foram eficazes na identificação de L. monocytogenes, porém a primeira metodologia requer mais tempo para obtenção de resultados conclusivos

Made available in DSpace on 2016-05-16T12:51:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 guilherme_oliveira_ipec_mest_2013.pdf: 367173 bytes, checksum: 5d7981c2440bb9c06602493f281a31ae (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A leishmaniose tegumentar americana (LTA), em cães, costuma estar associada à resposta humoral baixa ou mesmo negativa, o que inviabiliza os métodos sorológicos convencionais, como ferramenta única no diagnóstico. A busca por métodos mais sensíveis no diagnóstico tem avançado muito com o emprego de métodos moleculares, e a técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) tem fornecido inúmeros resultados fundamentais nos estudos epidemiológicos. Métodos convencionais de diagnóstico parasitológico, não têm sido capazes de detectar a presença do parasito em outros sítios anatômicos diferentes da lesão cutânea, em cães naturalmente infectados por Leishmania (Viannia) braziliensis. Diante dos questionamentos sobre o papel do cão doméstico no ciclo de transmissão da LTA e sobre o valor de métodos diagnósticos aplicados na rotina, principalmente em áreas de sobreposição da forma tegumentar e visceral, faz-se necessário a avaliação desses animais sob diversos aspectos. O presente estudo teve como objetivo empregar a PCR específica associada à hibridização molecular e a técnica da reação em cadeia da polimerase com primer único em condições de baixa estringência (LSSP-PCR) visando detectar a presença de DNA parasitário e investigar a variabilidade genética de populações parasitárias presentes em diferentes tecidos de cães naturalmente infectados por L. (V.) braziliensis. Os animais foram selecionados entre os cães sororeatores para Leishmania procedentes de cidades do estado do Rio de Janeiro e encaminhados para eutanásia ao Laboratório de Pesquisa Clínica em Dermatozoonoses em Animais Domésticos do Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas da Fundação Oswaldo Cruz. Durante a necropsia, foram obtidas amostras de lesão cutânea, pele íntegra (região escapular e abdominal), baço, fígado e linfonodos (poplíteo e cervical) Os fragmentos teciduais foram submetidos ao isolamento parasitário e à extração de DNA. A detecção de DNA de L. (V.) braziliensis foi realizada através da amplificação, pela PCR específica, utilizando-se um par de iniciadores que amplificam a região variável dos minicírculos do DNA do cinetoplasto (kDNA) de espécies do subgênero Viannia. Os produtos positivos na PCR foram reamplificados, pela técnica de LSSP-PCR, utilizando-se um único iniciador do par específico, em condições de baixa temperatura de anelamento. O polimorfismo genético da região variável dos minicírculos foi avaliado através de métodos de análise numérica. Nove animais foram estudados. O isolamento parasitário foi possível somente nos fragmentos de lesão cultivados em todos os animais, no entanto com a aplicação das técnicas moleculares mencionadas, foi possível detectar DNA de L. (V.) braziliensis em pele íntegra de cães naturalmente infectados tendo sido, ao nosso conhecimento, o primeiro relato no Brasil. Foi também possível observar o tropismo diferenciado e a capacidade de disseminação parasitária para outros sítios anatômicos, além da lesão cutânea, no cão naturalmente infectado. Nossos resultados contribuirão para o diagnóstico e a epidemiologia da LTA canina no Rio de Janeiro fornecendo elementos na discussão da importância do papel do cão no ciclo de transmissão e subsídios para os programas de controle / In dogs, A merican tegumentary leishmaniasis (ATL) is usually associated to a low humoral response or even to negative results which turns not unfeasible the conventional serological methods. The search for more sensitive methods in the diagno sis has progressed by the use of molecular methods and, the technique of polymerase chain reaction (PCR) has been furnishing several results which can be consider of fundamental importance in epidemiological studies. Conventional methods of parasitologic al diagnosis have failed to detect the presence of the parasite anatomic sites others than the cutaneous lesion, in dogs naturally infected by Leishmania (Viannia) braziliensis. Regarding the questions on the rule of domestic dogs in the transmission cycle of ATL and, on the applicability of diagnostic methods mainly in areas where both visceral and tegumentary disease are found, the evaluation of these animals under different aspects is needed. The objective of this project is to apply specific PCR assays associated to molecular hybridization and the technique of Low - Stringency Specific - Single Primer – PCR (LSSP - PCR) in order to detect the presence of parasite DNA and evaluate the gen etic variability of parasite populations found in different tissues of dog s naturally infected by Leishmania (V.) braziliensis . The animals were selected among dogs which were Leishmania seropositive from cities of Rio de Janeiro state and referred for euthanasia to the Derm o zoo laboratory ( Laboratório de Pesquisa Clínica em Der matozoonoses em Animais Domésticos do Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas da Fundação Oswaldo Cruz ) . Samples were obtained from cutaneous lesions, health skin, spleen, liver and lymph nodes (popliteal and cervical). Tissue fragments were submitted to parasite isolation and to DNA extractions. The detection of L. (V.) braziliensis was performed by specific PCR assays, using a par of primers that amplify the variable region of the minicircles of the kinetoplast DNA (kDNA) from species of the Viannia subgenus. The positive PCR products were re - amplified by the technique of LSSP - PCR using a unique primer of the specific par, in low stringency conditions. The genetic polymorphism of the variable region of kDNA minicircles were investigated through numeri cal analysis methods. Nine animals were studied. The parasitic isolation was only possible in fragments cultured in lesion of all animals. U sing such methods, it was possible to detect L. (V.) braziliensis DNA in heath skin of dogs naturally infected. To o ur knowledge this is the first report in Brazil. It was also possible to observe the differentiate tropism and the capacity of parasite dissemination to other anatomic sites beyond the cutaneous lesion. Our results will contribute, at the same time, to the diagnosis and the epidemiology of canine ATL in Rio de Janeiro, providing basis for the discussion of the rule of the dog in the transmission cycle of ATL and, also providing subsidies to the control programs.

Made available in DSpace on 2016-05-16T12:51:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 ana_silva_ipec_mest_2014.pdf: 1928384 bytes, checksum: 1287f70af74eadaae8d3b63f32a3326e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A pneumonia é a terceira causa de morte global e a principal causa de morte nos pacientes HIV positivos. Com o advento de técnicas moleculares, a pneumonia viral tem sido identificado em até um terço dos casos. A OMS vem promovendo a vigilância em Infecção Respiratória Aguda Grave/Severe Acute Respiratory Infection (SARI), definida por febre, e tosse, e início de sintomas há menos de dez dias e hospitalização. Por sua vez, o MS promove a vigilância de Síndrome Respiratória Aguda Grave (SRAG), cuja definição passa pelo pré-requisito da Síndrome Gripal (SG). A SG é definida por início súbito de sintomas: tosse ou odinofagia e cefaléia ou mialgia ou artralgia. No intuito de explorar os aspectos clínicos e epidemiológicos da infecção respiratória, foi realizado um estudo prospectivo no INI-IPEC. Para cada paciente HIV positivo internado com tosse e febre há menos de 30 dias, foram pesquidos germes habituais, fungos e Mycobacterium spp em hemocultura, Mycobacteirum spp em escarro, Streptococcus pneumoniae e Legionella pneumophila sorotipo-1 em urina e vírus respiratórios pela técnica rt-PCR em swab nasofaríngeo. As características clínicas foram extraídas do prontuário até o desfecho do estudo, alta ou óbito. Do total de 49 pacientes incluídos, a mediana de idade foi de 38 anos e a maioria encontrava-se em fase avançada de imunodepressão pelo HIV, apesar de 78% já terem sido expostos à TARVc A mediana de início de sintomas foi de dez dias, 73% apresentavam Raio-X de tórax com infiltrado multilobar, 80% pontuaram zero ou one no escore de gravidade CRB65, 67% necessitaram de oxigenioterapia e/ou de VNI nas primeiras 72 horas de admissão, 31% evoluíram para VM e o óbito ocorreu em 18.3%. A carga viral indetectável foi protetora em relação ao desfecho óbito. Os fatores relacionados à mortalidade foram o nadir de CD4, a identificação microbiológica, a VM, o uso de aminas e a ocorrência de infecção hospitalar. A pontuação dois-quatro no CRB65 não foi significativamente associado ao óbito, mas o CRB65 acrescido da oximetria de pulso (SatO <90%) sim. Do total, 27 pacientes que preencheram o critério SARI, as características clínicas foram similares ao da população geral incluída nesse estudo e foram identificados nove vírus, porém, o Mycobacterium tuberculosis foi isoladamente o agente mais comum presente em seis pacientes, seguido pelo Streptococcus pneumoniae e Pneumocystis jirovecci presentes cada um em quatro pacientes. Os dois casos de Cryptococcus neoformans e a única Legionella pneumophila-1 ocorreram nos pacientes não-SARI. A expressão \2015início súbito de sintomas\2016 presente no critério do MS, não se aplica à população HIV/SIDA, devido à sobreposição de doenças e sintomas. Considerando como ponte de corte \201510 dias de início de sintomas\2016, houve a captação de 11 pacientes e 3 vírus Apenas um dos três influenza identificados foi captado por ambas as abordagens de vigilância. Os outros 2 casos deixaram de ser captados por apresentarem 20 e 30 dias de início de sintomas, respectivamente. A falta de uma clara definição no tempo de início de sintomas no critério proposto pelo MS pode prejudicar a padronização da vigilância de influenza na população HIV positiva, impossibilitando a comparação de incidências entre unidades, territórios ou com países que utilizem o critério da OMS. A possibilidade de excreção viral prolongada do influenza no paciente em fase de SIDA, aponta para a necessidade de revisão do critério SARI e SRAG nessa população. Em locais onde a tuberculose é endêmica, a infecção pelo Mycobacterium tuberculosis deve ser investigada mesmo em pacientes com < dez dias de início de sintomas / Pneumonia is the third global cause of death and among the HIV population is the leading one. Introduction of PCR technique enables viral detection in up to one third of the cases. WHO points at the need to strenghten Severe Acute Respiratory Infection surveillance, which has recently been redefined as: fever, and cough, and ten days of onset of symptons and need for hospitalization. On the other hand, brazilian Ministry of Health (MH) promotes surveillance on Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS), which primaraly involves the need to fill influenza-like illness case definition known as: ―suddenly onset‖ of fever and cough or odinophagia and one of the following symptons headache or myalgia or arthralgia. In order to explore the clinical and epidemiological aspects of respiratory infection in the HIV population, a prospective observational study was conducted at INI-IPEC. For each HIV positive patient hospitalized with fever and cough and up to 30 days of symptons onset, blood cultures were taken to explore bacterial, fungus and Mycobateria spp infection, sputum for Mycobacterium spp, urine for Streptococcus pneumonia and Legionella pneumophila-1 antigen detection and nasopharyngeal swabs for a panel of virus detection through rt-PCR. Clinical data were extracted from chart through a standardized questionnaire until death or hospital discharge. Among the 49 patients included, the median age was 38 years old and the majority of them presented at HIV associated late-stage disease, despite 78% being HAART exposed. The median time of symptons onset and hospital entry were ten days, 73% of them exhibited a multilobar X-Ray infiltrate and 80% scored zero or one point at CRB65 score. Despite the low scoring, 67% needed non-invasive ventilation support and/or oxygen therapy in the first 72 hours of admission, 31% underwent mechanical ventilation (MV) and overall mortality found were 18.3%. Factors associated with mortality were CD4 nadir cell count, microbiological identification, vasoactive drugs, MV and hospital-acquired infection. Scoring two-four points at CRB65 could not predict death but CRB65 + pulse oxymetria below 90% was significantltely associated with mortality. The clinical and epidemiologycal aspects of the 27 patients with SARI were similar to those of the whole population included and the microbiological agents identified, in descending order, were: nine virus, Mycobaterial tuberculosis (TB) was the main agent identified in six patients and Streptococcus pneumoniae and Pneumocystis jiroveccii each one in four patients. The two Cryptococcus neoformans and the only case of Legionella pneumphila-1 were identified only in non-SARI patients. The expression ―suddenly onset‖ of symptons, for SARS definition in Brazil, did not apply to HIV/AIDS population in this study, due to late-HIV associated disease and the overlaping of other opportunistic diseases. If one consider ―10 days of symptons onset‖, 11 patients could be retrieved and 3 virus identified. Only one out three influenza cases were captured by both approaches. The other 2 influenza slipped surveillance due to 20 and 30 days of onset of symptons, respectively. The lack of a clear cut-off on the brazilian SARS case-definition may jeopardize the standardization of SARS surveillance in the HIV/AIDS population, which, in turn, precludes incidence comparison between region and countries that relies on the OMS criteria. The possibility of prolonged viral shedding in this population points at the need for adapting SARS and SARI influenza surveillance for HIV/AIDS patients. In places were TB is endemic, Mycobaterium tuberculosis should be persued as a cause of respiratory illness in hospitalized HIV/AIDS patients, despite less than ten days of fever and cough.

Made available in DSpace on 2016-05-16T12:53:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 eliame_confort_ipec_dout_2009.pdf: 1662597 bytes, checksum: 2845404a7d2a515a0ca6f5220b3ccd21 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Avaliou-se o ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) com antígeno de Leishmania (V.) braziliensis para a investigação diagnóstica da leishmaniose tegumentar americana (LTA) em suas modalidades cutânea (LC) e cutâneomucosa (LCM) e avaliação da resposta terapêutica a partir de amostras de soro de pacientes atendidos no Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas (IPEC). O grupo I, LTA (n=153) foi formado com amostras de soros de pacientes com pelo menos um resultado positivo nos exames parasitológicos ou na reação em cadeia da polimerase (PCR), e o grupo II, controle (n=103), com amostras de indivíduos representativos da população do estudo, com suspeita inicial de LTA, mas com outro diagnóstico confirmado. As seguintes informações foram obtidas dos prontuários: avaliação clínica, dermatológica otorrinolaringológica; intradermorreação de Montenegro IDRM; pesquisa de Leishmania por exame direto e histopatológico, isolamento em meio de cultura, PCR e exames diretos com colorações especiais, inoculação em meios de cultura para fungos e micobactérias. As amostras foram obtidas nas fases de investigação diagnóstica e pós-tratamento em períodos definidos até dois anos. Comparou-se a sensibilidade do ELISA com a de cada um dos métodos parasitológicos, PCR e com a IDRM. Para avaliação da resposta terapêutica, amostras de 75 pacientes que se mantiveram com as lesões cicatrizadas durante o período do estudo constituíram o subgrupo cura terapêutica (ICT) e aquelas de 31 pacientes com recidivas constituíram o subgrupo recidiva pósterapêutica (IRT). A confiabilidade do teste avaliado pelo coeficiente de correlação intraclasse foi de 0,953 (IC 95%) Encontrou-se sensibilidade de 94,7%, especificidade de 95,1% e valores preditivos, positivo e negativo de 96,6% e 92,4% respectivamente. Não houve diferença com significância estatística entre as sensibilidades encontradas no ELISA, na PCR e na IDRM (CI= 95%, qui-quadrado pvalor= 0,140 e p-valor=0,498). O mesmo não ocorreu com os demais métodos parasitológicos (p-valor<0,001). A análise da resposta humoral à terapia demonstrou haver redução da resposta de anticorpos nos pacientes do subgrupo ICT significativamente menor aos seis meses após o tratamento (Wilcoxon; pvalor= 0,016) com 51,8% de pacientes não reatores ao final de dois anos após a terapia. Os demais se encontravam fracamente reatores. Ao contrário, no subgrupo IRT, houve pequena redução seguida de elevação dos valores de densidade otica atingindo patamares mais elevados na ocasião da recidiva. Comparando-se estes subgrupos (ICT e IRT) quanto à intensidade das reações e frequencia de reatores, em cada ponto do acompanhamento, encontraram-se diferenças a partir do sexto mês após a terapia e a cura clínica (Mann-Whitney; p-valor=0,046 e p-valor 0,009). Os resultados demonstram um bom desempenho do ELISA no diagnóstico diferencial de LTA e na avaliação da resposta terapêutica / Indirect Enzyme Immunoassay (EL ISA) was evaluated with Leishmania (V.) braziliensis antigen to the diagnostic workup of American Tegumentary Leishmaniasis (American Tegumentary Leishmaniasis - ATL ) in their cutaneous (CL) and mucocutaneous (MCL) modalities, and about the therapeutic res ponse from samples of serum from patients at the Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas (IPEC). Group I , ACL (n = 153) was formed with sera samples of patients with at least one positive result in parasitological examinations or in polymerase chain r eaction (PCR), and group II , control (n = 103), with samples of individuals representative of the study population, with initial suspicion of ACL, but with other confirmed diagnosis. The following information was obtained from medical records: clinical, de rmatological, and otorrinolaringology evaluation; measure in mm of Montenegro intradermoreaction (IDRM); search for Leishmania by direct examination and histopathology, isolation in culture media, PCR and direct examination with special staining and inocul ation in culture media for fungi and mycobacteria. Samples were obtained during the diagnostic workup and after treatment, in periods defined as up to two years. We compared the sensitivity of the ELISA with each of the individual parasitological methods, the PCR, and the IDRM. To evaluate the therapeutic response, samples of 75 patients who remained with the lesions healed during the study period were the therapeutic healing subgroup ( ICT ) and those 31 patients with recurrences were the post - therapy relaps e subgroup ( IRT ). The reliability of the test assessed by the intraclass correlation coefficient was 0.953 (95% CI). We found a sensitivity of 94.7% and 95.1% specificity, and positive and negative predictive values of 96.6% and 92.4%, respectively. There was no statistically significant difference between the sensitivities found in ELISA, PCR and IDRM (95% CI, Chi - square p - value = 0.140 and p - value = 0.498). The same did not happen with the remainder parasitological methods ( p - value <0.001). The analysis o f the humoral response to therapy have demonstrated a decrease of the antibody response in patients of subgroup ICT , significantly lower at six months after treatment (Wilcoxon; p - value = 0.016), with 51.8% of patients non reactors at the end of two years after the therapy. The others remained mild reactors. Contrarily, in subgroup IRT, a small reduction of the intensity of the reactions, was followed by the increase in the values of optical density that reached higher levels during recidive. Analyzed toget her, the results of samples from the IRT subgroup were significantly higher than those from the ICT subgroup (Mann - Whitney; p - value <0.0001). The intensity of reactions and the frequency of reactors there were reduce from the six months after the therapia sustaining this thendency afther the clinical cure. When comparing the intensity of reactions and frequency of reactors in each point of follow - up there were differences from the sixth month of therapy and clinical cure (Mann - Whitney; p - value = 0.046 and p - value 0.009). The results show a good performance of the ELISA in the differential diagnosis of ACL and the assessment of therapeutic response.

Made available in DSpace on 2016-05-16T12:57:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 pedro_silva_ioc_mest_2016.pdf: 1919123 bytes, checksum: 819b6d80dd4622a4af7c53113c7ccc3d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O Erythema Nodosum Leprosum (ENL) é um quadro de inflamação aguda súbita que afeta predominantemente pacientes do polo lepromatoso (LL) da hanseníase, podendo ocorrer antes, durante ou após a poliquimioterapia, sendo responsável por grande parte das incapacidades físicas associadas à doença. Não está totalmente esclarecido quais fatores são responsáveis desencadeamento do ENL. Alguns dados mostram que no ENL ocorre aumento da mobilização de neutrófilos para as lesões de pele, ativação de macrófagos e linfócitos T, juntamente com o aumento na secreção dos níveis séricos de TNF e IL-1\F062. Com o intuito de aprofundar os conhecimentos em torno da participação dos linfócitos T na patogênese na hanseníase lepromatosa e do ENL, no presente trabalho realizamos a caracterização ex vivo e in vitro em resposta ao estímulo com M. leprae de subpopulações de linfócitos T obtidas do sangue periférico de pacientes LL com ou sem ENL, bem como a avaliação da ação funcional destas subpopulações mediante a análise da frequência destas células produtoras das citocinas IFN-\F067, TNF e IL-10, por citometria de fluxo multiparamétrica. Ademais, fizemos análise da expressão de genes que codificam os fatores de transcrição críticos para a diferenciação de linfócitos T por meio da reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR). Voluntários sadios de área endêmica para a hanseníase foram incluídos em nosso estudo. Dentre os resultados obtidos, destacamos o aumento significativo na frequência de linfócitos T CD8+ de memória efetora produtores de TNF no grupo de pacientes que apresentou ENL Esse mesmo grupo também apresentou aumento significativo de linfócitos T CD4+ e CD8+ produtores de IL-10, especialmente em resposta ao antígeno. Contudo, esse fato ocorreu apenas nas subpopulações naïve e de memória central. Além disso, o grupo ENL apresentou redução na frequência de linfócitos T CD4+ e CD8+ produtores de IFN-\F067, assim como uma significativa redução na expressão dos fatores de transcrição STAT4 e TBX21. Por fim, observamos uma forte correlação positiva e altamente significativa entre o índice bacilar (IB) dos pacientes com ENL e a frequência de linfócitos T CD4+/TNF+. No mesmo grupo de pacientes, também observamos uma significativa correlação negativa entre o IB e a frequência de células CD4+ produtoras de IL-10. Nossos resultados corroboram outros achados sobre o desequilíbrio da resposta imune na gênese do ENL, e demonstram associação entre o IB e a frequência de células produtoras das citocinas pró-inflamatórias IFN-\F067 e TNF. Em suma, os dados obtidos e discutidos neste trabalho sugerem a contribuição precípua dos linfócitos T de memória, especificamente os CD8+ de memória efetora para a alteração transitória da resposta imune ao M. leprae, característica marcante no ENL / Erythema nodosum leprosum (ENL), a sudden episode of acute inflammation predominantly affecting lepromatous leprosy patients (LL), can occur before, during or after multidrug therapy, accounting for much of the physical disabilities associated with the disease. It is not clear which are the triggering factors for ENL. Some data from ENL patients show an increased migration of neutrophils into skin lesions, activation of macrophages and T lymphocytes, together with an increased secretion of TNF and IL-1\F062 serum levels. For a better understanding on the involvement of T lymphocytes in the pathogenesis in lepromatous leprosy and ENL, this study performed ex vivo and in vitro characterization of T cell subpopulations from blood in response to M. leprae from LL patients with or without ENL, as well as the evaluation of functional activity of these subpopulations, by analyzing the frequency of these cells producing IFN-\F067, TNF and IL-10 by multiparametric flow cytometry. Furthermore, we analyzed the expression of genes encoding transcription factors, which are critical for the differentiation of T lymphocytes by quantitative real time polymerase chain reaction (qRT-PCR). Healthy volunteers from endemic area for leprosy were included in our study. Among the results, we highlighted the significantly increased frequency of CD8+/TNF+ T effector memory cells among ENL patients This group also showed a significantly increased frequency of CD4+ and CD8+ IL-10+ producing T lymphocytes, particularly in response to antigen. However, this finding was only observed in naïve and central memory T cell subpopulations. Moreover, ENL group showed a reduced frequency of CD4+ and CD8+ IFN-\F067 producing cells, and a significantly reduced expression of STAT4 and TBX21 transcription factors. Finally, we observed positive and significant strong correlation between bacillary index (BI) of ENL patients and CD4+/TNF+ cells frequency. The same group also presented a significant negative correlation between IB and the frequency of CD4+/IL-10+ T cells. Our results corroborate other findings about the imbalanced immune response in ENL genesis, and show an association between IB and the frequency of T cells producing pro-inflammatory cytokines IFN-\F067 and TNF. Briefly, the data obtained and discussed in this work suggest the major contribution of memory T cells, specifically CD8+ effector memory cells, to transient alteration in the immune response to M. leprae, a hallmark of ENL

Made available in DSpace on 2016-05-16T12:58:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 mayara_mendes_ioc_mest_2015.pdf: 18720258 bytes, checksum: 851f7c777695319f02f2ed49fd8e85b8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O Eritema Nodoso Hansênico (ENH) consiste no estado de emergência mais importante da hanseníase e representa a principal causa de internações, acometendo a pele e muitos outros órgãos. A presença de infiltrados contendo células polimorfonucleares é frequentemente comum para este tipo de reação e está relacionada com o aumento da inflamação. Uma das características com o ENH é a resposta clínica ao tratamento com Talidomida (Tal), acompanhada por uma significativa redução no número de neutrófilos nas lesões e redução de citocinas pró-inflamatórias. Objetivo: Identificar o perfil de expressão gênica das lesões ENH, antes e após o tratamento com a Talidomida, em busca de um melhor entendimento dos mecanismos imunopatogênicos e quais alvos moleculares são modulados pela Talidomida. Materiais e Métodos: Biópsias da lesão de pele foram obtidas de quatro pacientes no momento do diagnóstico do ENH e 7 dias após tratamento com Tal e submetidas a análise de microarranjo. A partir desses resultados, os alvos moleculares foram selecionados para a validação, em novas biópsias de lesão de pele obtidas de dez novos pacientes, por RT-PCR em tempo real, western blotting (WB) e imunohistoquímica (IH) Resultados: Dentre os processos biológicos identificados na análise do microarranjo, os de maior significância estatística foram o de resposta imune e ferimentos. Para validação por RT-PCR em tempo real foram selecionados genes correlacionados a imunopatologia do ENH. A análise da expressão gênica mostrou um redução dos níveis de RNAm de TNC; VCAM1; THBS1; ADAM12; MMP1; Cyr61; CASP1; CD16 nas lesões ENH tratadas com Talidomida em comparação com o grupo ENH. As análises por WB e IH das lesões ENH revelaram que a expressão proteica da TNC, PTX3 e CD16a foram globalmente reduzidas nas lesões após o tratamento com Tal. Conclusão: Em resumo, nossos dados sugerem relevância clínica dos alvos moleculares (TNC, PTX3 e CD16a) na patogênese da injúria tecidual da hanseníase estudados no contexto da Talidomida, uma droga eficaz para o tratamento do ENH e responsável pela redução significativa do infiltrado neutrofílico. Dessa forma, nossos estudos indicam que a Talidomida pode modular negativamente a injúria através da diminuição da expressão de TNC que é altamente expressa durante os processos de cicatrização de feridas e inflamação; PTX3, um importante marcador de inflamação vascular; e CD16a expresso em neutrófilos e que reconhecem imunocomplexos / Erythema nodosum leprosum (ENL) is the most important critical state of leprosy and is the leading cause of hospitalization, affecting the skin and many other organs. The presence of infiltrates containing polymorphonuclear cells is frequently common for this type of reaction and is related to increased inflammation. One of ENL\2019s characteristics is the clinical response to treatment with Thalidomide (Thal), accompanied by a significant reduction in the number of neutrophils in lesions and pro-inflammatory cytokines. Objective: To identify the gene expression profile of ENL lesions before and after treatment with Thalidomide in search of a better understanding of immunopathogenic mechanisms and molecular targets which are modulated by Thalidomide. Materials and Methods: Biopsies of skin lesion were obtained of four patients at the time of being diagnosed with ENL and 7 days after treatment with Thalidomide, and subjected to microarray. From these results, the molecular targets were selected for validation in new biopsies of skin lesion obtained from ten new patients, by real time RT-PCR, western blotting (WB) and immunohistochemistry (IH) Results: Among the biological processes identified in the analysis of microarray, those with the highest statistical significance were the immune response and injury response. Genes correlated with immunopathology of ENL were selected for validation by real time RT-PCR. The analysis of gene expression showed reduction in levels of mRNA of TNC; VCAM1; THBS1; ADAM12; MMP1; Cyr61; CASP1; CD16 in ENL lesions treated with Thalidomide in comparison with the ENL group. The IH and WB analysis of ENL lesions revealed that the protein expressions of TNC, PTX3 and CD16a were globally reduced in tissue lesions after treatment with Thal. Conclusion: In summary, our data suggests clinical relevance of molecular targets (TNC PTX3 and CD16a) in the pathogenesis of tissue injury of leprosy studied in the context of Thalidomide, an effective drug for the treatment of ENL and responsible for a significant reduction in the neutrophil infiltration. Thus, our studies indicate that Thalidomide can modulate negatively to injury by decreasing the TNC expression that is highly expressed during the healing of wounds and inflammation; PTX3, an important marker of vascular inflammation; and CD16a expressed in neutrophils and recognizing immunocomplexes

Made available in DSpace on 2016-07-01T12:20:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 906.pdf: 1335777 bytes, checksum: 47b1473cd090edd0a2c8273edb76d8b6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2000 / Made available in DSpace on 2016-07-05T22:00:02Z (GMT). No. of bitstreams: 3 906.pdf.txt: 117789 bytes, checksum: 173535bf38187be37f57fe698f585adb (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 906.pdf: 1335777 bytes, checksum: 47b1473cd090edd0a2c8273edb76d8b6 (MD5) Previous issue date: 2000 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / O controle da leishmaniose depende da disponibilidade de métodos acurados e sensíveis para detecção das espécies de Leishmania. Duas abordagens moleculares foram avaliadas para o diagnóstico de leishmaniose tegumentar americana (LTA) em pacientes provenientes de zonas endêmicas de Pernambuco. Uma delas era gênero específica, enquanto que a outra era específica para o subgênero Viannia. Os limiares de detecção de DNA foram determinados e a sensibilidade e especificidade calculadas, sendo subsequentemente comparadas com outros testes diagnósticos mais convencionais. O limiar de detecção de DNA da PCR específica para o subgênero Viannia foi de 10 fg de DNA total, enquanto que o limiar de detecção para a PCR gênero específica foi de 1 pg de DNA total. Para a definição de caso de LTA adotou-se a presença de critérios clínico-epidemiológicos, associados à positividade em pelo menos um dos seguintes testes: pesquisa direta, exame histopatológico e isolamento por cultura. Dessa forma dos 98 pacientes inicialmente diagnosticados com base puramente clínico-epidemiológica, 87 foram considerados casos de LTA, e utilizados para o cálculo da sensibilidade. Trinta e um pacientes com lesões cutâneas de outras etiologias foram incluídos como controles para o cálculo da especificidade. A PCR gênero específica foi positiva em 60/67 das biópsias de LTA, resultando em uma sensibilidade de 89,6 por cento, enquanto que a PCR específica para o subgênero Viannia foi positiva em biópsias de 82/87 casos de LTA, resultando em uma sensibilidade de 94,3 por cento. Contudo, essas diferenças não foram significantes. Esse dado associado a outros, sugere que apenas o subgênero Viannia tem participação como agente etiológico de LTA em Pernambuco Ambas as PCRs demonstraram 100 por cento de especificidade. O diagnóstico através da pesquisa direta apresentou um percentual de positividade dentre os casos de LTA de 68,2 por cento, o exame histopatológico 89,9 porcento, o isolamento através de cultura 44,0 por cento e a imunofluorescência indireta 81,3 por cento. Visando a utilização em regiões endêmicas com poucos recursos foram realizados alguns experimentos preliminares bem sucedidos com PCR/hibridização com sondas não radioativas. Em conclusão, as abordagens moleculares avaliadas mostraram alta sensibilidade e especificidade, permitindo uma delas o diagnóstico ao nível do subgênero Vianna.