Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-07-14T12:02:06Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2779756 bytes, checksum: 37870637a8a01cd286e606554504636c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T12:02:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2779756 bytes, checksum: 37870637a8a01cd286e606554504636c (MD5) Previous issue date: 2016-03-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Terapias com células indiferenciadas são uma promissora ferramenta para aprimorar a reparação de diversos tecidos e órgãos. Muitos benefícios já foram demonstrados in vitro, entretanto, esforços têm sido dedicados para manter as células aplicadas in vivo no sítio em que se deseja a reparação, e, nesse contexto, biomateriais têm sido desenvolvidos. Assim, o objetivo do presente trabalho foi dispobilizar um método completo para obtenção, expansão e caracterização de células mesenquimais estromais (CME) oriundas da medula óssea de coelhos e avaliar o potencial de reparação óssea destas células quando utilizadas em associação com um novo biomaterial composto de hidroxiapatita e fibroína de seda (HAP/FS). Células mononucleares da medula óssea (CMMO) do úmero e fêmur de coelhos foram obtidas e, para avaliar sua taxa de proliferação, três meios de cultura diferentes foram testados. As CMMO também foram cultivadas em meios de indução osteogênico, condrogênico e adipogênico para comprovar a sua multipotencialidade. Em seguida, o biomaterial proposto foi caracterizado por difração de raios-x e microscopia eletronica de varredura, e seus efeitos na viabilidade celular e na ativação de leucócitos foram investigados. Finalmente, foi avaliada a habilidade deste biomaterial em atuar como um carreador de CME e o efeito da associação das CME ao biomaterial na reparação de defeitos ósseos na calvaria de coelhos também foi investigado. Os resultados mostraram que as técnicas aqui apresentadas fornecem um método completo para obtenção, expansão e caracterização de CME da medula óssea de coelhos de forma adequada e que a utilização destas células em associação com o compósito de HAP/SF teve um efeito benéfico na reparação dos defeitos em calvaria de coelhos. / Therapies based on undifferentiated cells has been shown to be a promising tool to improve the repair of various tissues and organs. Many benefits have been demonstrated in vitro already, however, efforts have been addressed to maintain the cells applied in vivo at the site where the reparation is desired, and, in this context, biomaterials have been developed. Therefore, the aim of this study was to provide a full method to harvest, expand and characterize mesenchymal stromal cells (MSCs) from rabbits’ bone marrow and to assess the bone repair potential of these cells when applied in combination to a new biomaterial composed of hydroxyapatite and silk fibroin (HAP/SF). Bone marrow mononuclear cells (BMMCs) were harvested from rabbits’ humerus and femur and their proliferation rate were tested using three different culture media. BMMCs were also cultured in osteogenic, chondrogenic and adipogenic media to prove their multipotentiality. Next, the biomaterial proposed was characterized by x-ray diffraction and scanning electron microscopy, and its effects on cell viability and leukocytes activation were assessed. Finally, the biomaterial ability to act as MSCs carrier was evaluated, and its effect, in combination with the proposed biomaterial, on the repair of bone defects in rabbits’ calvaria was also investigated. The results showed that the techniques presented here provide a full method for successful isolation, expansion and characterization of MSCs from rabbits’ bone marrow and the utilization of these cells combined to the HAP/SF composite have had a benefic effect on the defects repair in calvaria of rabbits.

Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-24T13:56:40Z No. of bitstreams: 1 2015-11-doutorado-allan-zimmermann.pdf: 1273033 bytes, checksum: 4c1e3537e5d30d25a69e372778e72de0 (MD5) / Approved for entry into archive by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-24T13:59:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015-11-doutorado-allan-zimmermann.pdf: 1273033 bytes, checksum: 4c1e3537e5d30d25a69e372778e72de0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-24T13:59:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015-11-doutorado-allan-zimmermann.pdf: 1273033 bytes, checksum: 4c1e3537e5d30d25a69e372778e72de0 (MD5) Previous issue date: 2015 / Introdução: Os biomateriais utilizados habitualmente em regeneração óssea não possuem potencial osteogênico e osteoindutivo, apesar de possuírem potencial osteocondutivo. Objetivo: Avaliar a associação entre células-tronco mesenquimais do tecido adiposo autólogo (CTM-TAA) e hidroxiapatita na regeneração óssea guiada da calvária de coelhos. Métodos: CTMTAA de seis animais foram associadas à hidroxiapatita e implantadas nas perdas ósseas pós-craniectomias de 12mm criadas bilateralmente na calvária de seis coelhos (grupo experimento - GE). No grupo controle (GC) o material de enxertia foi utilizado sem células. Em cada animal, uma das áreas de perda óssea foi coberta por uma membrana colágena. Após oito semanas os animais foram submetidos a óbito indolor induzido e a região das falhas ósseas avaliadas por histomorfometria. Resultados: O GE apresentou maior quantidade (p < 0,05) do tecido mineralizado vital e não vital (17,0% ± 5,3% e 25,9% ± 4,6%, respectivamente) comparado ao GC (9,8% ± 5,0% e 13,3% ± 2,3%, respectivamente). No GE nenhuma diferença foi observada entre os lados em que foram ou não utilizada as membranas colágenas (p > 0,05). Entretanto, uma diferença estatisticamente significante foi observada para GC (p < 0,05) relativamente à quantidade de tecido mineralizado vital no lado em que a membrana foi utilizadas. Conclusão: A associação entre CTM-TAA de coelhos e hidroxiapatita de origem bovina foi capaz de promover uma maior regeneração óssea da calvária de coelhos. O uso de membrana colágena de origem porcina não foi capaz de promover maior regeneração óssea do que o uso células-tronco associadas ao enxerto xenógeno. / Introduction: The biomaterials commonly used in bone regeneration lack osteoinductive and osteogenic potential despite these biomaterials possess osteoconductive potential. Objective: To evaluate the association of adult mesenchymal stem cells derived from adipose tissue (MSC-dAT) with xenogenic bone graft in bone regeneration in rabbit calvaria. Methods: MSCdAT from 12 animals were combined with hydroxyapatite and implanted in 12 mm bilateral bone defects created in the calvaria of six rabbits (experimental group - EG), whereas only hydroxyapatite was implanted in the defects created in another group of six animals (control group - CG). One of the grafted sides in each animal of both groups was covered by a collagen membrane. After eight weeks, the animals were sacrificed and the region of the bone defects was removed and evaluated by histomorphometry and immunohistochemistry. Results: Histomorphometrically, the EG showed higher amounts (p < 0.05) of vital and non-vital mineralized tissue (28.24% ± 6.17% and 27.79% ± 2.72%, respectively), compared to the CG (13.06% ± 5.24% and 13.52% ± 3.00%, respectively). In EG, no difference was observed (p > 0.05) in the amount of mineralized tissue between the side that was covered by the membrane versus the side without membrane coverage. On the other hand, a statistically significant difference (p < 0.05) was observed in the control group with regard to the amount of mineralized tissue between the sides with and without membrane coverage. Conclusions: These observations suggest that the association of MSC-dAT with a xenogenic bone graft was capable of promoting better bone regeneration compared to use of a xenograft alone. Use of a membrane did not produce an increase in the regenerative potential for the EG, in contrast to the CG.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-11-21Bitstream added on 2014-06-13T20:42:55Z : No. of bitstreams: 1 gimenes_r_dr_araiq.pdf: 2947108 bytes, checksum: f3c4ec92aee4a4b292c3bf0d47a82b2e (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Neste trabalho, foi conduzido um estudo sistemático da síntese de compósitos poli(fluoreto de vinilideno-trifluoretileno)/titanato de bário - P(VDF-TrFE)/BT - para uso em Regeneração Tecidual Guiada (GTR). Esta técnica osteopromotiva tem sido amplamente empregada em tratamentos do periodonto. A GTR emprega uma barreira física (membrana) para promover a formação de osso pela migração de células ósseas na região isolada. Desta forma, estas células são capazes de regenerar o defeito ósseo pela exclusão da competição com células não-osteogênicas na reabsorção do coágulo. Desta forma, membranas de compósitos polímero-cerâmica piezoelétrica podem promover osteogênese por meio de potenciais elétricos produzidos e prover proteção mecânica a região isolada. Membranas deste tipo podem ser consideradas como barreiras alternativas para GTR. Nesta direção, as propriedades estruturais e elétricas dos compósitos P(VDF-TrFE)/BT foram avaliadas, bem como, sua biocompatibilidade in vitro. Os compósitos foram preparados pela mistura de pós de titanato de bário e poli(fluoreto de vinilideno-trifluoretileno) (VDF = 80mol%) em meio de dimetilformamida (DMF0). As membranas de compósitos foram obtidos utilizando os seguintes métodos: espalhamento de solução sobre substrato (SC), deposição em spincoating (SP) e precipitação em água seguido de prensagem a quente (WHP). Compósitos obtidos por precipitação em água apresentaram microestrutura heterogênea e superfícies adequadas. Compósitos com fração volumétrica de 0,55 apresentaram os melhores valores de polarização remanescente e constante dielétrica relativa (33,1mC/cm2 e 78, respectivamente). Compósitos com fração volumétrica de 0,10 e 0,50 apresentaram coeficiente piezoelétrico d33 igual a 15,5 e ~0 pC/N respectivamente. P(VDF-TrFE)/BT demonstraram melhor biocompatibilidade in vitro... / In this work, a systematic study on synthesis of poly(vinylidene fluoride-trifluoroethylene)/barium titanate - P(VDF-TrFE)/BT - composites for used in Guided Tissue Regeneration (GTR) was carried out. This osteopromotive technique has been widely employed on periodontal treatment. GTR utilizes a physical barrier (membrane) to promote bone-forming cell to migrate into secluded space. Hereby, these cells are able to regenerate the osseous defect, by the exclusion of competing non-osteogenic soft tissue cells on reabsorption. The osteogenic process also can be enhanced by application of electrical energy (direct current or pulsed electromagnetic field). Thereby, membranes of polymer-ceramic piezoelectric composites can promote the osteogenesis by means of electrics potentials produced and to provide mechanical protection to the secluded space. This kind of membrane can be considered an alternative barrier to GTR. In this way, the structural and electrical properties of P(VDF-TrFE)/BT composites were evaluated, as well as, their in vitro biocompatibility. The composites were prepared by mixing Barium Titanate powders and P(VDF-TrFE) (VDF=80mol%) on dimethylformamide medium (DMF). Composites membranes were made by following methods: solvent casting (SC), spincoating (SP), and precipitation on water followed by hot pressing (WHP). Composites obtained by WHP showed heterogeneous microstructure and adequate surfaces. The composite of ceramic fraction of 0.55 presented the best values of remanent polarization and relative dielectric constant (33.1mC/cm2 and 78, respectively). The piezoelectric coefficient d33 was 15,5 and ~0 pC/N for composites with volumetric fraction of 0.10 and 0.50 respectively. P(VDF-TrFE)/BT presented better in vitro biocompatibility when compared to commercial e-PTFE GTR barrier. Therefore, P(VDF-TrFE)/BT membrane developed could be an alternative to be used in GTR.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-02-09Bitstream added on 2014-06-13T20:36:53Z : No. of bitstreams: 1 silva_vc_me_arafo.pdf: 1730174 bytes, checksum: ce33d44b50196aca4d9f0d95f23a7f81 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este trabalho teve como objetivo determinar as reações teciduais em lesões de furca Grau II em 2ºs pré-molares de cães após tratamento com matriz mineral óssea bovina e membrana absorvível e movimentação ortodôntica de translação para mesial. Foram criadas lesões de furca Grau II nos 2º pré-molares superiores de 4 cães, totalizando 8 lesões. Após 75 dias, estas foram tratadas pela técnica de Regeneração Tecidual Guiada com membrana absorvível associada ao preenchimento com matriz mineral óssea bovina. Deu-se início ao controle de placa com gel de clorexidina 0,2% 5 vezes por semana até o final do estudo. Após 2 meses do tratamento, os 2ºs pré-molares foram divididos aleatoriamente em dois grupos (teste e controle) e foi instalado aparelho ortodôntico em ambos os lados, sendo os 3ºs pré-molares e caninos superiores usados como ancoragem. No lado teste a movimentação ortodôntica foi realizada durante 3 meses. Os animais foram sacrificados, e os 2ºs pré-molares removidos em bloco e processados para análise histológica. Não houve diferenças estatisticamente significantes entre os grupos em relação a área total de preenchimento ósseo, de biomaterial e extensão linear de regeneração periodontal na superfície radicular. Porém, houve uma tendência do grupo teste apresentar maior quantidade óssea e menor quantidade de biomaterial, além de deslocamento do biomaterial para o lado de pressão na região de furca, no grupo teste. / The aim of this study was to establish the tissue reactions on Degree II furcation lesions in the 2nd premolars of dogs after treatment with bovine osseous mineral source, absorbable membrane and orthodontic movement of translation to mesial and also evaluate the effect of movement on the grafting material used. It was produced Degree II furcation lesions in upper second premolars of 4 dogs, resulting in 8 lesions. After75 days, they were treated by the method of Guided Tissue Regeneration with absorbable membrane associated with bovine osseous mineral source. The plaque control was started with 0,2% chlorhexidine gel, 5 times a week until the end of the study. After 2 months of treatment, the second premolars were randomly divided in two groups (test and control) and it was installed orthodontic appliance in both sides, using the third premolars and upper canine as anchorage. The orthodontic movement was achieved only in the test side, during 3 months. The animals were sacrificed and the second premolars were removed in block and processed for histological analysis. There weren't any differences that were statistically significant among the groups with relation to the total area of osseous filling, biomaterial and linear periodontal regeneration. However, there was a trend of the group to present more osseous amount and less biomaterial amount, besides the dislocation of the biomaterial for the furcation pressure side. The orthodontic movement could be done without intercurrences. Key- words: Periodontics; Guided tissue regeneration; Biocompatible materials; Orthodontic.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-12Bitstream added on 2014-06-13T18:51:06Z : No. of bitstreams: 1 borrasca_ag_me_araca.pdf: 4821350 bytes, checksum: d36c5037a99ffa9487215170ba0a1610 (MD5) / Proposição: O objetivo deste trabalho foi avaliar, qualitativa e quantitativamente, o comportamento da membrana de matriz óssea homógena desmineralizada e conservada em glicerina no processo de reparo ósseo de cavidades cirúrgicas preenchidas com osso autógeno realizadas em tíbias de ratos diabeticos. Material e Métodos: Foram utilizados 40 ratos (Rattus norvegicus albinus, Wistar) machos, com aproximadamente 250 gramas divididos em dois grupos: o grupo I (Controle) recebeu injeção de tampão citrato, pela via endovenosa e o grupo II (Diabético) recebeu pela via intravenosa injeção de estreptozotocina dissolvida no tampão citrato para induzir o diabetes. Após controle glicêmico, anestesia, depilação e antissepsia foi realizada uma incisão longitudinal nas regiões antero-laterais de cada tibia. Após exposição das tíbias, duas cavidades cirúrgicas de 2mm de diâmetro foram preparadas com trefina em baixa-rotação refrigerada, uma no membro posterior direito e outra no membro posterior esquerdo, sendo a primeira preenchida com o osso autógeno particulado coletado durante a realização das duas cavidades e a segunda preenchida com coágulo sanguíneo e ambas recobertas pela membrana. Aos 10 e 30 dias pós-operatórios os animais foram eutanaziados e as peças obtidas foram processadas laboratorialmente para a realização de cortes semi-seriados com seis micrômetros de espessura e corados pela hematoxilina e eosina para análise histomorfométrica. Resultados e Conclusão: Concluiu-se que a reparação óssea foi maior com o emprego dos enxertos ósseos no grupo controle, embora as diferenças não foram estatisticamente significantes em nenhum período estudado e que, aos 30 dias, o processo de reparo das tíbias preenchidas... / Purpose: The aim of this study was to evaluate histomorphometric the behavior of membrane of a demineralized homogenous bone matrix and preserved in glycerin in the process of bony repair of surgical cavities filled out with autogenous bone accomplished in tibias of diabetic rats. Materials and Methods: Forty male rats weighing approximately 250 g were selected and assigned to two groups, as follows. Group I (Control) received a citrate buffer injection intravenously while Group II (Diabetic) received an intravenous injection of streptozotocin dissolved in citrate buffer to induce diabetes. After glycemic control, anesthesia, shaving and antisepsis, a longitudinal incision was made in the anterolateral areas of each tibia. After exhibition of the tibias, two surgical cavities of 2mm of diameter were prepared with trefina in refrigerated low-rotation, one in the right posterior member, other in the left subsequent member, being the first filled out with particulate autogenous bone collected during the accomplishment of the two cavities and second filled out with sanguine coagulum and both covered with the membrane. Ten and thirty days postoperatively, the animals were euthanized and the anatomical pieces were submitted to routine laboratorial processing and serially sectioned to obtain 6-μm-thick sections, which were stained by hematoxylin and eosin for histomorphometric analysis. Results and Conclusions: We concluded in the ended of the bony repair was larger with the employment of the bone grafts in the group control, although the differences don't have statistics significance in any studied period and that to the 30 days, the process of repair of the tibias filled out by graft of the group control it was more favorable quality than of the tibias under the same treatment of the diabetic group although such differences have not been statistics significance and the membrane was biocompatible in all the analyzed groups.

Orientador: Elio Hitoshi Shinohara / Coorientador: Alessandra Marcondes Aranega / Banca: Roberta Okamoto / Banca: Daniela Atili Brandini de Weert / Banca: Nicolas Homsi / Banca: André Takahashi / Resumo: Proposição: O objetivo deste trabalho foi analisar histologicamente e histomorfometricamente o processo de reparo de defeitos ósseos em ratos diabéticos preenchidos com osso autógeno e recoberto por membranas de matriz óssea homógena ou politetrafluoretileno expandido (PTFe). Materiais e métodos: Para a obtenção da membrana homógena foram utilizados 40 animais saudáveis, não incluídos no grupo experimental. No experimento foram utilizados 120 ratos (Rattus norvegicus albinus, Wistar) machos, com peso aproximado de 250 gramas, divididos em dois grupos: o grupo I (IC), sem alterações sistêmicas (Controle) recebeu injeção de tampão citrato a 0,01M, ph 4,5, pela via endovenosa e o grupo II (Diabético) ou IID recebeu pela mesma via de administração (veia peniana) injeção de estreptozotocina (Sigma-Aldrich) dissolvida em tampão citrato a 0,01M, ph 4,5, em uma concentração de 35mg/Kg. Após controle glicêmico os ratos sem alterações sistêmicas (grupo controle) e diabéticos foram subdivididos em três subgrupos de experimentos: SM - a cavidade cirúrgica da tíbia esquerda foi preenchida com enxertos ósseos autógenos, não sendo recoberta por membrana, MH - a cavidade também preenchida com enxertos ósseos foi recoberta por membrana homógena e MX - o recobrimento foi feito com membrana sintética de PTFe. Os animais foram eutanaziados aos 10 e 60 dias e as tíbias foram submetidas ao processamento laboratorial de rotina para análise histológica e histométrica. Resultados: Aos 10 dias não foram encontradas diferenças estatisticamente significantes entre os diabéticos e não-diabéticos que tiveram suas feridas recobertas ou não com as membranas. No entanto, nesse tempo, o tecido ósseo do grupo diabético apresentou-se qualitativamente pior se comparado ao do grupo controle. Aos 60 dias constatou-se atraso... / Abstract: Purpose: To carry out histological and histomorphometric analysis of the bone repair process in diabetic rats filled with autogenous bone graft and covered with homogenous demineralized bone matrix membrane or expanded polytetrafluoroethylene membrane (e-PTF). Materials and Methods: In order to obtain the homogenous membrane, 40 healthy animals not included in the experimental group were used. In the experiment 120 male rats (Rattus norvegicus albinus, Wistar) weighing approximately 250g were divided into two groups. Group I (IC) had no systemic alterations (Control) and received an intravenous citrate buffer injection at 0.01 M, pH 4.5, while Group II (Diabetic) or IID received an intravenous injection of streptozotocin (Sigma-Aldrich) dissolved in citrate buffer at 0.01M, ph 4.5 in a concentration of 35 mg/kg. After glycemic control, the rats with no systemic alterations (Control group) and the diabetic rats were subdivided into three subgroups, as follows: SM - surgical cavity of left tibia was filled with autogenous bone grafting not covered by membrane; MH - bone grafting covered by homogenous membrane; and MX - bone grafting covered by expanded polytetrafluoroethylene membrane (e-PTFE). The animals were euthanized at 10 and 60 days and the tibiae were submitted to routine laboratorial processing for histological and histomorphometric analysis. Results: At 10 days, there were no statistically significant differences between diabetic and non-diabetic rats which had their wounds covered or not covered with the membranes. However, at 10 days the bone tissue of the diabetic group was qualitatively worse in comparison to that of the control group. At 60 days a delay was found in the bone repair process in wounds covered by membranes when compared to the group without membrane, regardless of the systemic state. At 60 days... / Doutor

Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Banca: Álvaro Francisco Bosco / Banca: Sonia Regina Panzarini Barioni / Resumo: Este estudo avaliou histomorfometricamente o processo de cicatrização em defeitos de fenestração periodontal, criados cirurgicamente em cães e tratados com Plasma Rico em Plaquetas (PRP) associado ou não ao uso de barreira de membrana. Defeitos de fenestração periodontal com 5 mm de diâmetro foram cirurgicamente criados nos caninos superiores de 12 cães. Os dentes foram divididos em 4 grupos: C (controle) - defeito preenchido somente com coágulo sangüíneo; M - defeito preenchido com coágulo sangüíneo e protegido com uma membrana de politetrafluoretileno expandido (PTFE-e) com reforço de titânio; PRP - defeito preenchido com PRP; PRP/M - defeito preenchido com PRP e protegido com uma membrana de PTFE-e com reforço de titânio. Os animais foram eutanasiados após 4 semanas. Medidas lineares e de área da cicatrização periodontal foram avaliadas e calculadas como porcentagem do defeito original. Os dados foram submetidos à análise estatística (análise de variância, p < 0,05). Nenhum espécime regenerou-se completamente com osso ou cemento. Formação de novo cemento foi significativamente maior nos Grupos PRP e PRP/M quando comparados ao Grupo C. Observou-se, também, significativa maior formação de novo cemento no Grupo PRP/M que no Grupo M. Dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que o PRP favoreceu a formação de novo cemento. A Regeneração Tecidual Guiada (RTG) não proporcionou efeitos adicionais ao uso do PRP no tratamento de defeitos de fenestração periodontal em cães. / Abstract: This study histomorphometrically analyzed the healing of periodontal fenestration defects surgically created in dogs and treated with Platelet-Rich Plasma (PRP) with or without a barrier membrane. A 5 mm diameter periodontal fenestration defect was made in each upper canine of 12 dogs. The teeth were divided into 4 groups: C (control) - defect filled with blood clot only; M - defect filled with blood clot and covered by a titanium-reinforced expanded polytetrafluoroethylene membrane (ePTFE); PRP - defect filled with PRP; PRP/M - defect filled with PRP and covered by a titanium-reinforced ePTFE. All animals were euthanized at 4 weeks post-operative. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect. Data were statistically analyzed (analysis of variance, p < 0.05). No defect completely regenerated with either bone or cementum. Cementum formation was significantly greater in groups PRP and PRP/M when both groups were compared to Group C. A significant greater cementum formation was also observed in Group PRP/M than in Group M. Within the limits of this study, it can be concluded that the PRP favored cementum formation. Guided Tissue Regeneration (GTR) did not promote any additional benefit to the use of PRP in the treatment of periodontal fenestration defects in dogs. / Mestre

Orientador: Maria Aparecida Zaghete Bertochi / Banca: Orivaldo Lopes da Silva / Banca: Neri Alves / Banca: Walter Katsumi Sakamoto / Banca: Cecilia Amelia de Carvalho Zavaglia / Resumo: Neste trabalho, foi conduzido um estudo sistemático da síntese de compósitos poli(fluoreto de vinilideno-trifluoretileno)/titanato de bário - P(VDF-TrFE)/BT - para uso em Regeneração Tecidual Guiada (GTR). Esta técnica osteopromotiva tem sido amplamente empregada em tratamentos do periodonto. A GTR emprega uma barreira física (membrana) para promover a formação de osso pela migração de células ósseas na região isolada. Desta forma, estas células são capazes de regenerar o defeito ósseo pela exclusão da competição com células não-osteogênicas na reabsorção do coágulo. Desta forma, membranas de compósitos polímero-cerâmica piezoelétrica podem promover osteogênese por meio de potenciais elétricos produzidos e prover proteção mecânica a região isolada. Membranas deste tipo podem ser consideradas como barreiras alternativas para GTR. Nesta direção, as propriedades estruturais e elétricas dos compósitos P(VDF-TrFE)/BT foram avaliadas, bem como, sua biocompatibilidade in vitro. Os compósitos foram preparados pela mistura de pós de titanato de bário e poli(fluoreto de vinilideno-trifluoretileno) (VDF = 80mol%) em meio de dimetilformamida (DMF0). As membranas de compósitos foram obtidos utilizando os seguintes métodos: espalhamento de solução sobre substrato (SC), deposição em spincoating (SP) e precipitação em água seguido de prensagem a quente (WHP). Compósitos obtidos por precipitação em água apresentaram microestrutura heterogênea e superfícies adequadas. Compósitos com fração volumétrica de 0,55 apresentaram os melhores valores de polarização remanescente e constante dielétrica relativa (33,1mC/cm2 e 78, respectivamente). Compósitos com fração volumétrica de 0,10 e 0,50 apresentaram coeficiente piezoelétrico d33 igual a 15,5 e ~0 pC/N respectivamente. P(VDF-TrFE)/BT demonstraram melhor biocompatibilidade in vitro...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this work, a systematic study on synthesis of poly(vinylidene fluoride-trifluoroethylene)/barium titanate - P(VDF-TrFE)/BT - composites for used in Guided Tissue Regeneration (GTR) was carried out. This osteopromotive technique has been widely employed on periodontal treatment. GTR utilizes a physical barrier (membrane) to promote bone-forming cell to migrate into secluded space. Hereby, these cells are able to regenerate the osseous defect, by the exclusion of competing non-osteogenic soft tissue cells on reabsorption. The osteogenic process also can be enhanced by application of electrical energy (direct current or pulsed electromagnetic field). Thereby, membranes of polymer-ceramic piezoelectric composites can promote the osteogenesis by means of electrics potentials produced and to provide mechanical protection to the secluded space. This kind of membrane can be considered an alternative barrier to GTR. In this way, the structural and electrical properties of P(VDF-TrFE)/BT composites were evaluated, as well as, their in vitro biocompatibility. The composites were prepared by mixing Barium Titanate powders and P(VDF-TrFE) (VDF=80mol%) on dimethylformamide medium (DMF). Composites membranes were made by following methods: solvent casting (SC), spincoating (SP), and precipitation on water followed by hot pressing (WHP). Composites obtained by WHP showed heterogeneous microstructure and adequate surfaces. The composite of ceramic fraction of 0.55 presented the best values of remanent polarization and relative dielectric constant (33.1mC/cm2 and 78, respectively). The piezoelectric coefficient d33 was 15,5 and ~0 pC/N for composites with volumetric fraction of 0.10 and 0.50 respectively. P(VDF-TrFE)/BT presented better in vitro biocompatibility when compared to commercial e-PTFE GTR barrier. Therefore, P(VDF-TrFE)/BT membrane developed could be an alternative to be used in GTR. / Doutor

Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar, histologicamente, o processo de cicatrização de defeitos de furca Classe II, criados cirurgicamente em cães e tratados com enxerto de osso autógeno (OA) associado ou não à barreira de sulfato de cálcio (SC). Os segundos, terceiros e quartos pré-molares mandibulares de 6 cães foram usados neste estudo. Defeitos de furca Classe II (5 mm de altura x 2 mm de profundidade) foram criados cirurgicamente e imediatamente tratados. Os dentes foram aleatoriamente divididos em 3 grupos: Grupo C (controle): o defeito foi preenchido somente com coágulo sanguíneo; Grupo OA (osso autógeno): o defeito foi preenchido com enxerto de OA; Grupo OA/SC (osso autógeno/sulfato de cálcio): o defeito foi preenchido com enxerto de OA e coberto com barreira de SC. Os retalhos foram suturados de forma a cobrir totalmente os defeitos. A eutanásia dos animais foi realizada aos 90 dias pós-operatórios. Foram obtidos cortes histológicos seriados mésio-distais, corados com HE ou Tricrômico de Masson. Cinco cortes de cada dente foram selecionados para análises histológica e histométrica. Foram avaliadas medidas lineares e medidas de área da cicatrização periodontal. Esses parâmetros foram apresentados como porcentagem do defeito original e transformados em arcoseno para análise estatística (ANOVA, p < 0,05). A regeneração periodontal ocorreu de forma similar nos três grupos, não sendo observada completa neoformação óssea e de tecido conjuntivo na maioria dos espécimes. Diferenças estatisticamente significativas não foram constatadas entre os três grupos em nenhum dos parâmetros avaliados. A cicatrização periodontal foi similar após o tratamento de defeitos de furca Classe II com enxerto de OA, enxerto de OA com barreira de SC ou debridamento cirúrgico somente. / Abstract: The purpose of this study was to histologically analyze the healing of surgically created Class II furcation defects treated using an autogenous bone (AB) graft with or without a calcium sulfate (CS) barrier. The second, third and fourth mandibular premolars of 6 mongrel dogs were used in this study. Class II furcation defects (5 mm in height x 2 mm in depth) were surgically created and immediately treated. Teeth were randomly divided into 3 groups: Group C (control): the defect was filled with blood clot; Group AB: the defect was filled with AB graft; Group AB/CS: the defect was filled with AB graft and covered by a CS barrier. Flaps were repositioned to cover all defects. The animals were euthanized at 90 days postoperative. Mesio-distal serial sections were obtained and stained with either H&E or Masson's Trichrome. Histometric, using image analysis software, and histologic analyses were performed. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect. Percentage data were transformed into arccosine for statistical analysis (ANOVA, p<0.05). Periodontal regeneration in the 3 groups was similar. Regeneration of bone and connective tissue in the furcation defects was incomplete in most of the specimens. Statistically significant differences were not found in any of the evaluated parameters among the groups. Periodontal healing was similar wheter using surgical debridement alone, AB graft, or AB graft with a CS barrier in the treatment of Class II furcation defects. / Mestre

O princípio da regeneração tecidual guiada (RTG) baseia-se na utilização de membranas biocompatíveis com a finalidade de impedir a migração dos tecidos conjuntivo e epitelial para a ferida, permitindo que células do ligamento periodontal repovoem a superfície radicular e regenerem o aparato de inserção do dente. A RTG tem sido utilizada em diversas situações clínicas para facilitar o reparo de defeitos ósseos e periodontais, sendo as membranas de politetrafluoretileno expandido (e-PTFE) as mais utilizadas. O objetivo deste estudo foi avaliar a biocompatibilidade in vitro de uma nova membrana do compósito de poli(vinilideno-trifluoretileno)/titanato de bário (P(VDF-TrFE)/BT). Para isso, osteoblastos, fibroblastos e queratinócitos, células com as quais a membrana entrará em contato durante o processo de RTG, foram cultivados sobre membranas de P(VDF-TrFE)/BT e PTFE (controle). Os seguintes parâmetros foram avaliados: 1) adesão celular por contagem em hemocitômetro; 2) proliferação celular por MTT e 3) adesão e morfologia celular por fluorescência, para as linhagens osteoblástica, fibroblástica e de queratinócitos; 1) medida do conteúdo de proteína total; 2) medida da atividade de fosfatase alcalina (ALP) e 3) formação de matriz mineralizada, para as linhagens osteoblástica e fibroblástica; 1) imunolocalização de ALP por fluorescência; 2) detecção histoquímica in situ da atividade de ALP e 3) expressão dos genes Runx2, Colágeno I (COL I), Ostepontina (OPN), ALP, Sialoproteína óssea (BSP), Osteocalcina (OC), Bax, Bcl-2 e Survivina (SUR) por PCR em tempo real, para a linhagem osteoblástica; 1) expressão dos genes Periostin (PRT), Periodontal Ligament Specific 17 (PDLs17), Calcium-binding protein (S100A4), Fibromodulina (FBM), Bax, Bcl-2 e SUR por PCR em tempo real, para a linhagem fibroblástica e 1) expressão dos genes Involucrina (IVL), Queratina 1 (QRT-1), Queratina 10 (QRT-10), Queratina 14 (QRT-14), Bax, Bcl-2 e SUR por PCR em tempo real, para a linhagem de queratinócitos. Os dados quantitativos foram submetidos ao teste estatístico Mann-Whitney (nível de significância: 5%). A adesão de células osteoblásticas foi semelhante entre P(VDF-TrFE)/BT e PTFE em 30 min, 2 e 4 h (p>0,05). A proliferação de células osteoblásticas foi maior em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 1, 7 e 10 dias (p<0,05). A epifluorescência indicou que as células osteoblásticas estavam aderidas e mais espraiadas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 30 min, 4 e 24 h. A imunofluorescência revelou presença de ALP apenas em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias. O conteúdo de proteína total foi semelhante entre as duas membranas em 10 dias (p>0,05) e maior sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias (p<0,05). Não houve diferença estatisticamente significante para atividade de ALP em 7 dias (p>0,05), entretanto em 10 e 14 dias (p<0,05) a atividade de ALP foi maior em culturas sobre o P(VDFTrFE)/ BT. A detecção histoquímica in situ revelou atividade de ALP apenas em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT, tanto aos 7 quanto aos 14 dias. A formação de matriz mineralizada ocorreu apenas em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT. A expressão dos genes Runx2, COL I, OPN, ALP, BSP, OC, Bax e SUR foi maior em células cultivadas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias (p<0,05). Não houve expressão de Bcl-2 em culturas sobre as duas membranas. A adesão de células fibroblásticas foi semelhante entre P(VDFTrFE)/ BT e PTFE em 30 min (p>0,05) e maior sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 2 e 4 h (p<0,05). A proliferação de células fibroblásticas foi estatisticamente semelhante entre as duas membranas em 3 dias (p>0,05) e maior em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 1 e 7 dias (p<0,05). Os ensaios de fluorescência direta revelaram que as células fibroblásticas estavam aderidas sobre as duas membranas, porém em estágios mais avançados de espraiamento sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 30 min, 2 e 4 h. O conteúdo de proteína total foi maior sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 10, 14 e 21 dias (p<0,05). Não se observou atividade de ALP em culturas fibroblásticas sobre as membranas de P(VDF-TrFE)/BT e PTFE aos 7 dias. Contudo, em 14 dias (p>0,05) a atividade de ALP foi semelhante entre as duas membranas e em 21 dias (p<0,05) foi estatisticamente significante em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT. Aos 21 dias não se notou formação de matriz mineralizada em ambas as membranas. A expressão dos genes PRT, PDLs17, S100A4, FBM, Bax e SUR foi maior em culturas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias (p<0,05). A expressão de Bcl-2 foi maior em células fibroblásticas cultivadas sobre o PTFE em 7 e 14 dias (p<0,05). A adesão de queratinócitos foi semelhante entre P(VDF-TrFE)/BT e PTFE em 30 min, 2 e 4 h (p>0,05). A proliferação de queratinócitos foi estatisticamente semelhante entre as duas membranas em 4, 7, 10 e 14 dias (p>0,05) e maior sobre culturas crescidas sobre P(VDF-TrFE)/BT em 1, 17 e 21 dias (p<0,05). Por fluorescência direta notou-se que células cultivadas sobre ambas as membranas exibiam morfologia predominantemente arredondada em 30 min, 4 e 24 h. A expressão do gene IVL foi semelhante em culturas crescidas sobre as duas membranas em 7 dias (p>0,05) e maior sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 14 dias (p<0,05). Os genes QRT-1, QRT -10 e QRT -14, Bax e SUR estavam mais expressos em culturas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias (p<0,05). A expressão de Bcl-2 foi maior em queratinócitos crescidos sobre o PTFE em 7 dias (p<0,05) e semelhante entre as duas membranas em 14 dias (p>0,05). Por favorecer eventos relacionados ao desenvolvimento tecidual, como a adesão, proliferação e diferenciação celular, a membrana de P(VDF-TrFE)/BT pode representar uma boa alternativa ao PTFE para procedimentos de RTG. / The principle of guided tissue regeneration (GTR) is based on the use of physical barrier to isolate periodontal defects of the gingival connective and epithelial tissues so that bone, periodontal ligament, and cementum can be regenerated from their own cells. RTG procedure has been used in many clinical situations to promote bone and periodontal regeneration. Membranes of expanded polytetrafluoroethylene (e-PTFE) are the most commonly used material for GTR. However, several membranes have been tested to be applied in GTR. The purpose of this study was to evaluate the in vitro biocompatibility of the membrane of poly(vinylidene-trifluoroethylene/barium titanate (P(VDF-TrFE)/BT) composite. For that, osteoblasts, fibroblasts and keratinocytes, cells that will interact with the membrane during RTG, were culture P(VDF-TrFE)/BT and PTFE (control) membranes for up to 21 days. The following parameters were evaluated: 1) cell adhesion by counting in hemocytometer, 2) cell proliferation and 3) cell morphology by fluorescent labeling, for osteoblastic, fibroblastic and keratinocyte lineages; 1) total protein content; 2) alkaline phosphatase (ALP) activity and 3) mineralized bone-like nodule formation, for osteblastic and fibroblastic lineages; 1) immunolocalization of ALP by fluorescent labeling; 2) histochemistry detection in situ of ALP activity and 3) gene expression of Runx2, Collagen I (COL I), Ostepontin (OPN), ALP, Bone Sialoprotein (BSP), Osteocalcin (OC), Bax, Bcl-2 and Survivin (SUR) by real-time PCR, for osteoblastic lineage; 1) gene expression of Periostin (PRT), Periodontal ligament specific (PDLs17), Calcium-binding protein (S100A4), Fibromodulin (FBM), Bax, Bcl-2 and SUR by real-time PCR, for fibroblastic lineage; 1) gene expression of Involucrin (IVL), Keratin-1 (QRT-1), Keratin-10 (QRT-10), Keratin-14 (QRT- 14), Bax, Bcl-2 and SUR days by real-time PCR, for keratinocyte lineage. Data were submitted to Mann-Whitney test (level of significance: 5%). The adhesion of osteoblastic cells was similar between P(VDF-TrFE)/BT and PTFE at 30 min, 2 and 4 h (p>0.05). Cell proliferation was higher in ostegenic cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT at 1, 7 and 10 days (p<0.05). Epifluorescence showed that osteoblastic cells grown on P(VDF-TrFE)/BT were more adhered and spread compared to PTFE at 30 min, 4 and 24 h. Immunofluorescence revealed the presence of ALP only in osteogenic cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days. Total protein content was similar between the membranes at 10 days (p>0.05) and higher on the P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days (p<0.05). There was no differences in ALP activity at 7 days (p>0.05). However, ALP activity was higher in osteogenic cultures on the P(VDF-TrFE)/BT at 10 and 14 days (p<0.05). The histochemistry reveals that only ostegenic cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT had ALP activity in situ at 7 and 14 days. Bone-like nodule formation occurred only in cultures on the P(VDF-TrFE)/BT at 21 days. Gene expression of Runx2, COL I, OPN, ALP, BSP, OC, Bax and SUR was higher in cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days (p<0.05). There was no expression of Bcl-2 in cultures on both membranes. The adhesion of fibroblastic cells was similar between P(VDFTrFE)/ BT and PTFE at 30 min (p>0.05) and greater in fibroblastic cultures on P(VDFTrFE)/ BT at 2 and 4 h (p<0.05). Cell proliferation was similar in fibroblastic cultures grown on both membranes at 3 days (p>0.05) and higher in cultures on P(VDF-TrFE)/BT at 1 and 7 days (p<0.05). Epifluorescence showed that fibroblastic cells grown on P(VDF-TrFE)/BT were more adhered and more spread compared to PTFE at 30 min, 4 and 24 h. Total protein content was greater on P(VDF-TrFE)/BT at 10, 14 and 21 days (p<0.05). There was no ALP activity in fibroblastic cultures grown on both membranes at 7 days. The ALP activity was similar between P(VDF-TrFE)/BT and PTFE at 14 day (p>0.05) and higher on P(VDFTrFE)/ BT at 21 days (p<0.05). Bone-like nodule formation was not observed in fibroblastic cultures on both membranes at 21 days. Gene expression of PRT, PDLs17, S100A4, FBM, Bax and SUR was higher in cultures on the P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days (p<0.05). Bcl- 2 expression was higher in fibroblastic cultures on the PTFE at 7 and 14 days (p<0.05). Keratinocyte adhesion was similar for P(VDF-TrFE)/BT and PTFE at 30 min, 2 and 4 h (p>0.05). Keratinocyte proliferation was statistically similar on both membranes at 4, 7, 10 and 14 days (p>0.05) and higher in cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT at 1, 17 and 21 days (p<0.05). Keratinocytes displayed a round morphology and was not observed any evidence of cell spreading at 30 min, 4 and 24 h. The gene expression of IVL was similar in cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT and PTFE at 7 days (p>0.05) and higher on the P(VDF-TrFE)/BT at 14 days (p<0.05). Genes expression of QRT-1, QRT-10, QRT-14, Bax and SUR was greater in keratinocytes grown on P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days (p<0.05). Bcl-2 expression was higher in keratinocytes cultured on PTFE at 7 days (p<0.05) and similar on both membranes at 14 days (p>0.05). Our study indicates that P(VDF-TrFE)/BT membrane promote events related to tissue development/regeneration, such as cell adhesion, proliferation and differentiation. Thus, the membrane of P(VDF-TrFE)/BT could be used as an advantageous alternative to PTFE in GTR procedures.