Orientador: Leonilda Maria Barbosa dos Santos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T20:16:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Farias_AlessandrodosSantos_D.pdf: 4349733 bytes, checksum: 319c7b608b0ec53ed2bab3d2bbb43a23 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A Esclerose múltipla (EM) é a mais comum doença neurológica crônica que acomete adultos jovens. Apesar da etiologia da EM ser desconhecida, está bem descrito que a doença é resultante da combinação de uma pré-disposição genética associada a fatores ambientas. Nos últimos anos, tem sido evidenciada a hipótese da participação da vitamina D na evolução da EM e do modelo experimental, a encefalomielite experimental auto-imune (EAE). No presente estudo, fomos capazes de mostrar que a administração da vitamina D3 in vivo na EAE, assim como a transferência de células dendríticas tolerogênicas, induzidas pela vitamina D3 in vitro, aumentam significativamente a porcentagem das células reguladoras CD4+CD25+Foxp3+ e a expressão de IL-10 nos linfonodos, resultando na redução dos sinais clínicos nesses animais. Simultaneamente, há uma diminuição do numero de células nos infiltrados inflamatórios no sistema nervoso central, acompanhada da diminuição das citocinas proinflamatórias como a IL-17A, IFN'gama' e TNF'alfa'. Ainda, os animais tratados apresentam uma maior quantidade de IL-10 e TGF'beta'1 liberados no soro, quando comparados aos animais não tratados. Esses mecanismos contribuem ativamente para a criação de um microambiente no linfonodo que é capaz de suprimir a ativação das células auto-reativas, diminuindo a resposta inflamatória no sistema nervoso central. Ainda, fomos capazes de demonstrar que a maioria das mudanças neurológicas que acontece durante a fase aguda da EAE desaparecem quando a resposta inflamatória é controlada. No presente estudo avaliamos a expressão diferencial de proteínas no SNC em diferentes fases da EAE. Nossos resultados demonstram que várias proteínas estão diferencialmente expressas na fase aguda da doença em comparação aos animais naive como: as proteases e proteínas estruturais e metabólicas, que estão envolvidas na neurodegeneração. Essas alterações retornam aos níveis normais durante a fase de remissão da doença / Abstract: A growing body of evidence supports the hypothesis that vitamin D is an environmental factor important in the etiology of T-cell-mediated autoimmune diseases such as multiple sclerosis (MS). In the present study, evidence is provided that the in vivo administration of vitamin D3, as well as the adoptive transfer of vitamin D3-induced immature/tolerogenic dendritic cells lead to a significant increase of the percentage of CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells in the lymph nodes but, not in the blood or spleen, in the rat model of MS, the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). Simultaneously with the increase of this cell population the treatment with Vitamin D3 induced is a significant decrease in the number of auto-reactive T cells in the central nervous system, as well as the reduction of the expression of pro-inflammatory cytokines. Moreover, the treatment increases the level of IL-10 and TGF'beta'1 in the serum and in the lymph nodes. The adoptive transfer of vitamin D3-induced DC also induces a significant increase in the expression of IL-10 in the lymph nodes, with no change in the expression of TGF'beta'1. These mechanisms contribute actively to the generation of a microenvironment in the lymph nodes that suppress the activation of encephalitogenic T cells, which result in the downregulation of the inflammatory response in the central nervous system. Moreover, we provide evidence that most of neurological changes that take place during the clinical phase of EAE disappear when inflammatory response is controlled. We have identified protein expression in different phase of the EAE. The result demonstrated various proteins which are regulated during the acute phase of the disease, such as some enzymes and proteins from the neurodegenerative process, return to normal levels in the remission phase of the disease / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Mangaba tree (Hancornia speciosa Gomes) is a tropical fruit found in different regions of the country, being more abundant in areas of coastal tablelands and lowlands of Northeast region, where it is explored in an extractive way and it is suffering an accelerated process of erosion genetics. The development of methods for conservation of genetic resources still available it is essential. This work aimed at improving technical and scientific in vitro conservation by slow growth of mangaba tree. The work was done at the Laboratory of Plant Tissue Culture of Embrapa Coastal Tablelands. To evaluate the effect of sucrose and sorbitol nodal segments were inoculated in test tubes with 25 mL of MS medium supplemented with 1 mg.L-1 of indol acetic acid (IAA) and 1 mg.L-1 of benzylaminopurine (BAP) and different sorbitol concentrations (10; 20 and 40 g.L-1) combined with 0 and 15 g.L-1 of sucrose. To evaluate the effect of abscisic acid (ABA) and the recipient and sealing types, nodal segments were inoculated in "mayonnaise" flasks and in test tubes with 25 mL of MS medium supplemented with 30 g.L-1 of sucrose, containing 0 or 0.5 mg.L-1 of ABA combined with plastic lid and aluminum foil. To study the effect of the mannitol and cultivation time two mangaba accessions were inoculated on MS medium supplemented with 0; 5; 10; 15 and 20 g.L-1 of mannitol. The proline quantification was done in mangaba microcuttings from conservation medium containing 10 and 20 g.L-1 of sorbitol. In the recovery stage of the growth explants conserved in vitro for 120 days, in the previous experiments were inoculated on MS medium and the viability of crops evaluated at 30 and 60 days. It is feasible to maintain nodal segments in the absence of sucrose in the presence of 10 or 20 g.L-1 of sorbitol and nodal segments in the presence of 0.5 mg.L-1 of ABA in test tubes sealed with aluminum foil lid for 120 days. It is possible the conservation of seedlings germinated in vitro in MS culture medium with 15 and 20 g.L-1 of mannitol for 180 days. Larger proline accumulation is observed in stem than in leaves of mangaba tree. Explants maintained in the presence of 10 g.L-1 of sorbitol and sucrose absence and in the presence of 0.5 mg.L-1 of ABA at conservation present higher viability in the growth recovery. / A mangabeira (Hancornia speciosa Gomes) é uma frutífera tropical encontrada em diferentes regiões do país, sendo mais abundante em áreas de tabuleiros costeiros e baixadas litorâneas da Região Nordeste, onde é explorada de forma extrativista e vem sofrendo acelerado processo de erosão genética. O desenvolvimento de métodos de conservação dos recursos genéticos ainda disponíveis torna-se imprescindível. Este trabalho teve como objetivo o aprimoramento técnico-científico da conservação in vitro por crescimento lento de mangabeira. Os trabalhos foram desenvolvidos no Laboratório de Cultura de Tecidos de Plantas da Embrapa Tabuleiros Costeiros. Para avaliar o efeito da sacarose e sorbitol segmentos nodais foram inoculados em tubos de ensaio com 25 mL de meio de cultura MS suplementado com 1 mg.L-1 de ácido indol acético (AIA) e 1 mg.L-1 de benzilaminopurina (BAP) e diferentes concentrações de sorbitol (10; 20 e 40 g.L-1), combinadas com 0 e 15 g.L-1 de sacarose. Para avaliar o efeito do ácido abscísico (ABA), do tipo de recipiente e vedação os segmentos nodais foram inoculados em frascos tipo maionese e em tubos de ensaio com 25 mL de meio MS, suplementado com 30 g.L- 1 de sacarose, contendo 0 ou 0,5 mg.L-1 de ABA combinadas com tampa plástica e tampa de papel alumínio. Para o estudo do efeito do manitol e tempo de cultivo dois acessos de mangabeira foram inoculados em meio MS combinados com 0; 5; 10; 15 e 20 g.L-1 de manitol. Foi realizada a quantificação da prolina em microestacas provenientes de meio de conservação contendo 10 e 20 g.L-1 de sorbitol. Na etapa de recuperação do crescimento explantes conservados in vitro por 120 dias, nos experimentos anteriores foram inoculados em meio de cultura MS sendo a viabilidade das culturas avaliadas aos 30 e 60 dias. É viável a manutenção de segmentos nodais na ausência de sacarose e na presença de 10 ou 20 g.L-1 de sorbitol assim como de segmentos nodais na presença de 0,5 mg.L-1 de ABA em tubos de ensaio vedados com tampa de papel alumínio por 120 dias. É viável a conservação de plântulas germinadas in vitro em meio com 15 e 20 g.L-1 de manitol por 180 dias. Observa-se maior acúmulo de prolina em entre-nós do que em folhas de mangabeira. Explantes mantidos na presença de 10 g.L-1 de sorbitol e na ausência de sacarose e na presença de 0,5 mg.L-1 de ABA na fase de conservação apresentam maior viabilidade na recuperação do crescimento.

Orientadores: Ronei Luciano Mamoni, Maria Heloisa Souza Lima Blotta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T02:22:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_MariaCarolina_M.pdf: 3235698 bytes, checksum: 858844d8c2fb54db25e9acd5fcdbb327 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Pacientes com paracoccidioidomicose (PCM) apresentam supressão da resposta imunológica celular, caracterizada por testes de hipersensibilidade do tipo tardio negativos a antígenos do P. brasiliensis, alta taxa de apoptose de linfócitos e alta expressão de CTLA-4 (CD152) e alta produção de citocinas supressoras (IL-10 e TGF-b). Esses dados indicam a possível participação de células T regulatórias (CD4+CD25+ - Tregs) na PCM. O objetivo desse trabalho foi verificar se, e por qual mecanismo as células T regulatórias estão envolvidas nessa imunossupressão. Para isso, analisamos o número, fenótipo, assim como a atividade funcional das células regulatórias do sangue periférico de pacientes com PCM antes e após o tratamento antifúngico efetivo. O número e o fenótipo das células T regulatórias foram avaliados por citometria de fluxo, e os resultados demonstraram que pacientes com PCM ativa (DA) apresentam um maior número dessas células que pacientes tratados (DT) ou controles normais (C). Além disso, observamos uma maior expressão de CD95L, CTLA-4, LAP-1 e GITR em células regulatórias do grupo DA em relação aos grupos DT e C. A expressão do RNAm (quantificado por PCR em tempo real) para FoxP3, IL-10 e TGF-ß em CMSP ex vivo também foram maiores no grupo DA que nos controles e pacientes do grupo DT. Com o intuito de comparar a atividade funcional das células T regulatórias, analisamos o efeito da cocultura com células T regulatórias na resposta proliferativa de CMSP estimuladas com ConA. As células regulatórias do grupo DA exibiram uma atividade supressora maior que as provenientes do grupo DT ou C, de uma maneira dose dependente. Para verificar se o mecanismo por meio do qual as células regulatórias exercem sua atividade é dependente de contato, utilizamos um sistema "transwell". Os resultados demonstraram que a atividade supressora das células T regulatórias do grupo controle é dependente de contato, mas que essa atividade para as células provenientes dos pacientes do grupo DA é apenas parcialmente revertida com esse sistema. A adição de citocinas supressoras recombinantes (IL-10 e TGF-ß), assim como de anticorpos neutralizantes para essas citocinas nas coculturas, mostrou que a produção de citocinas regulatórias pode ser outro mecanismo utilizado pelas células regulatórias do grupo DA. Em conclusão, o número aumentado de células T regulatórias no sangue periférico de pacientes com DA, expressando altos níveis de moléculas associadas à atividade regulatória, ao lado da alta expressão do RNAm para FoxpP3, IL-10 e TGF-b, sugere uma participação dessa população de linfócitos na imunossupressão observada em pacientes com PCM ativa. Além disso, nossos resultados indicam que as células T regulatórias dependem principalmente do contato intercelular para exercer seus efeitos supressores, e que a produção de citocinas supressoras também está envolvida nesse processo. / Abstract: Patients with paracoccidioidomycosis (PCM) present suppression of cellular immune response characterized by negative DTH to P. brasiliensis antigens, elevated apoptosis of lymphocytes, high expression of CTLA-4, and production of IL-10 and TGF-ß. Together these data point towards the involvement of regulatory T cells (CD4+CD25+ - Tregs) in PCM. The aims of this study were to verify whether and how Tregs are involved in this immunosuppression, through the analysis of the number and the phenotype, as well as, the functional activity of Tregs cells from peripheral blood of patients before and after antifungal treatment. The number and phenotype of Tregs cells were evaluated by flow cytometry, and the results showed that PCM patients with active disease (AD) present higher number of Treg cells than patients after treatment (TD) or healthy controls (C). Furthermore, we observed higher expression of CD95L, CTLA-4, LAP-1 and GITR on Tregs from AD group, than in cells from TD and C groups. mRNA expression (quantified by qRT-PCR) for FoxP3, IL-10 and TGF-ß in ex vivo PBMC, were also higher in AD group than in controls and in TD group. In order to compare the functional activity of Tregs, we analyzed the effect of Treg cells on the proliferative response of PBMC stimulated with ConA. Tregs from AD group exhibited stronger regulatory activity than cells from TD and C groups, in a dose dependent manner. To verify the possible mechanism through which Tregs suppress the cell proliferation we utilized a transwell system, which showed that the contact is mandatory for regulatory activity of Treg cells from C group, but had only a partial involvement in cells from AD patients. The addition of IL-10 and TGF-ß and anti cytokines in the co-cultures showed that the production of immunoregulatory cytokines may be other mechanism used by Tregs. In conclusion, the increased number of Treg cells in peripheral blood of patients with active disease, expressing high levels of regulatory markers and suppressive activity, besides the high expression of Foxp3, IL-10 and TGF-ß mRNAs suggest the potential participation of this population in the immunosuppression observed during the disease. Moreover, our results indicate that Tregs act mainly by contact to exert their inhibitory effects, but the production of immunoregulatory cytokines are also involved. / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

A sepse é descrita como uma disfunção orgânica ameaçadora à vida secundária à resposta desregulada do organismo a uma infecção, e é responsável por uma alta e crescente taxa de internação hospitalar no Brasil e no mundo. Apesar da diminuição da mortalidade ao longo do tempo, efeitos da doença a longo prazo como infecções secundárias e mortes tardias têm sido observadas. A sepse caracteriza-se pela liberação de mediadores inflamatórios e posterior imunossupressão compensatória, e o distúrbio na homeostase pode causar danos às células e órgãos levando a um estado mais grave da doença. Os linfócitos T reguladores (Tregs) são células responsáveis pela tolerância periférica e modulação de processos inflamatórios e são essenciais na imunossupressão observada na sepse. Este trabalho teve por objetivo estudar a relação entre a atividade imunológica (quantificação de Tregs, monócitos e citocinas inflamatórias) e a susceptibilidade a novas infecções e mortalidade em pacientes sépticos admitidos na Unidade de Emergência do HC-FMRP-USP. Foram incluídos 33 pacientes sépticos e 34 controles saudáveis, entre outubro de 2014 e novembro de 2015. Os pacientes foram acompanhados durante a internação na admissão (D0), D2, D7, D14, D21 e D28, e 12 pacientes retornaram para avaliação pelo menos três meses após a alta. Os pacientes tiveram porcentagens de Treg em linfócitos CD4+ elevados em relação aos controles nos momentos D2 e retorno (p = 0,0004), sendo que no D2 pacientes que desenvolveram complicação infecciosa tiveram porcentagens significativamente menores que os que não desenvolveram complicação (p = 0,0015). Além disso, porcentagens altas de Treg na admissão (D0) correlacionaram-se inversamente com o tempo de internação dos pacientes sobreviventes (p = 0,0271). Valores absolutos de Treg nos pacientes estiveram significativamente elevados no retorno em relação à admissão (p = 0,0074). Pacientes no retorno tiveram maior porcentagem de monócitos CD163+ em relação aos controles (p = 0,036). Pacientes na admissão tiveram menor porcentagem demonócitos HLA-DR+ em relação aos controles e aos pacientes no retorno (p = 0,0057). Pacientes tiveram valores de IL-6, IL-8, IL-10 e ST2 superiores em relação aos controles em diversos momentos da internação e retorno (p < 0,0001, p < 0,0001, p = 0,0030 e p < 0,0001, respectivamente). Valores de ST2 na admissão correlacionaram-se com o escore SOFA (p = 0,0252), tempo de internação (p = 0,0105), presença de complicação infecciosa (p = 0,0356) e mortalidade (p = 0,0114) dos pacientes. Valores de IL-8 na admissão também se correlacionaram com a presença de complicação infecciosa (p = 0,0387). Podemos inferir, portanto, que apesar de uma inflamação exacerbada já na admissão dos pacientes, evidenciada por altos valores de citocinas inflamatórias, há um aumento posterior de células Treg, imunorreguladoras, no D2, e o mesmo foi benéfico em relação à recuperação mais rápida dos pacientes e instalação de uma nova infecção. Porém, a imunossupressão continua sendo exibida mesmo após a alta dos pacientes, como podemos observar com a alta porcentagem de Tregs e monócitos CD163+ e valores de IL-10 nos pacientes em retorno em relação aos controles. Além disso, muitos dos pacientes sobreviventes à primeira internação foram internados novamente, e alguns deles foram a óbito no ano seguinte. / Sepsis is defined by a life-threatening organ dysfunction caused by a dysregulated host response to infection, and it is responsible for a high and increasing rate of hospital admission in Brazil and worldwide. Despite the decrease in mortality over time, long-term disease effects such as secondary infections and late deaths have been observed. Sepsis is characterized by the release of inflammatory mediators and subsequent compensatory immunosuppression, and the homeostasis disorder can cause damage to cells and organs leading to a more severe disease state. Regulatory T lymphocytes (Tregs) are cells responsible for peripheral toleran ce and modulation of inflammatory processes and are essential in the immunosuppression observed in sepsis. This study aimed to investigate the relationship between immunological activity (quantification of Tregs, monocytes and inflammatory cytokines) and susceptibility to new infections and mortality in septic patients admitted to the HC-FMRP-USP Emergency Unit. Thirty-three septic patients and 34 healthy controls were included between October 2014 and November 2015. Patients were followed up at admission (D0) and during hospitalization at D2, D7, D14, D21 and D28, and 12 patients returned for evaluation at least three months after discharge. Patients had higher Treg percentages on CD4 + lymphocytes than had controls at D2 and on return (p = 0.0004), whereas in D2 patients who developed infectious complications had significantly lower percentages than those who did not develop complications (p = 0.0015). In addition, high percentages of Treg at admission (D0) correlated inversely with the length of hospital stay of surviving patients (p = 0.0271). Absolute values of Treg in patients were significantly elevated in the return relative to admission (p = 0.0074). Patients on return had a higher percentage of CD163 + monocytes than controls (p = 0.036). Patients on admission had a lower percentage of HLA-DR+ monocytes than controls and patients on return (p = 0.0057). Patients had higher IL-6, IL-8, IL-10 and ST2 levels than controls at various times ofhospitalization and return (p < 0.0001, p < 0.0001, p = 0.0030 and p < 0.0001, respectively). ST2 values at admission were correlated with SOFA score (p = 0.0252), length of hospital stay (p = 0.0105), presence of infectious complication (p = 0.0356) and mortality (p = 0.0114). IL-8 values at admission also correlated with the presence of infectious complication (p = 0.0387). We can infer, therefore, that despite exacerbated inflammation as soon as at the admission of the patients, demonstrated by high levels of inflammatory cytokines, there is a posterior increase of immunoregulatory Treg cells at D2, and that was beneficial in relation to the faster recovery of the patients and setting up of new infection. However, immunosuppression continues to appear even after discharge of patients, as can be observed with the high percentage of CD163 + monocytes, Tregs and L-10 levels in patients on return compared to controls. In addition, many of the patients surviving the first hospitalization were hospitalized again, and some of them died the following year.

Submitted by Alisson Mota (alisson.davidbeckam@gmail.com) on 2015-07-14T19:14:36Z No. of bitstreams: 1 Tese - Hélio Leonardo Moura Brandão.pdf: 1542142 bytes, checksum: e76ccfa3546a6ef2b4e73c44c40ab4fb (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-15T20:42:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Hélio Leonardo Moura Brandão.pdf: 1542142 bytes, checksum: e76ccfa3546a6ef2b4e73c44c40ab4fb (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-15T20:52:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Hélio Leonardo Moura Brandão.pdf: 1542142 bytes, checksum: e76ccfa3546a6ef2b4e73c44c40ab4fb (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-15T20:52:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Hélio Leonardo Moura Brandão.pdf: 1542142 bytes, checksum: e76ccfa3546a6ef2b4e73c44c40ab4fb (MD5) Previous issue date: 2011-04-20 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The goal of this study was develop a protocol of in vitro propagation of andiroba, copaiba, breu branco and rosewood, trough apical, leaves and petiole obtained from seedling. The seeds were treated by immersion for 24 hours in derosal (5ml.L-1), 30 minutes in sodium hypochlorite (0.85%), and then germinated in trays filled with washed sand and vermiculite. To explants in vitro establishment were tested 4 asepsis protocols composed of derosal (5ml.L-1), NaOCl (0.85%), ampicilin (500mg.L-1), cloraphenicol (500mg.L-1) and tween 20 (1ml.L-1), with 50 repetitions per treatment. To induce in vitro organogenesis was used MS medium supplemented with NAA, IAA, BAP and TDZ totalizing 24 treatments and 1 witness, with 10 repetitions each, the Tukey test was applied in 5% of significance. After the inoculation in flood hood chamber the explants were kept in B.O.D. with temperature of 30oC for three days, then taken to growth room with 16 hours of photoperiod, 25μ moles.m-2.s-1 radiation and 30oC temperature. To acclimatizing were tested 6 substrates (treatments) composed of combinations of washed sand, organic compound and clay with 10 repetitions. All the explants of andiroba, breu branco and rosewood were established in rates bigger than 81% with application of a protocol composed of ampicilin (500mg.L-1) and derosal (5ml.L-1), plus NaOCl (0,85%) and tween 20 (1ml.L-1). There was regeneration of apical source of andiroba, breu branco and rosewood trough application of NAA and BAP. Leaves and petiole of andiroba, breu branco and rosewood rooted with NAA supplementation, but there weren’t shooting formation. Wasn’t possible establish explants of copaiba. / O objetivo deste estudo foi elaborar protocolos de propagação in vitro para pau rosa, andiroba, copaíba e breu branco por meio de ápices caulinares, folhas e pecíolos obtidos de mudas. As sementes foram tratadas por imersão por 24h em derosal (5ml.L-1), e imersas por 30 min em hipoclorito de sódio (0,85%), depois germinaram em bandejas contendo areia lavada coberta por vermiculita. No estabelecimento in vitro dos explantes foram testados 4 protocolos de assepsia compostos por derosal (5ml.L-1), NaOCl (0,85%), ampicilina (500mg.L-1), clorafenicol (500mg.L-1) e tween 20 (1ml.L-1), com 50 repetições por tratamento. Na indução da organogênese in vitro foi utilizado meio MS suplementado com ANA, AIA, BAP e TDZ, totalizando 24 tratamentos mais o testemunha com 10 repetições por tratamento. As médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de significância. Após a inoculação em câmara de fluxo laminar, os explantes foram mantidos no escuro em B.O.D. com temperatura de 30ºC por três dias, e então levados para sala de crescimento com 16 horas de fotoperíodo e radiação de 25μ moles.m-2.s-1, com temperatura de 30ºC. Nos testes de climatização foram testados seis substratos compostos por combinações de areia argila e matéria orgânica, com 10 repetições. Todos os explantes foram estabelecidos em taxas superiores a 81% com a aplicação de um protocolo composto por ampicilina (500mg.L-1) e derosal (5ml.L-1), mais NaOCl (0,85%) e tween 20 (1ml.L-1). Houve regeneração de ápices de andiroba, breu branco e pau rosa com aplicação de ANA e BAP. Folhas e pecíolos de andiroba, breu branco e pau rosa enraizaram com a suplementação com ANA, mas não houve formação de brotos. Não foi possível estabelecer in vitro explantes de copaíba.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Disertacao Rosineide Paz.pdf: 1842827 bytes, checksum: 93bea8ae65d6c7f1ae7a270865a8828c (MD5) Previous issue date: 2005-08-11 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Cubiu (Solanum sessiliflorum Dunal), a genetic resource from western Amazon, presents a great potential for the modern agriculture, on account of its rusticity, good yield capacity and usage of its fruits in various diversified ways. On account of it being a sexual reproduction plant, it keeps a high genetic variability as to the agronomic importance characteristics which are not interesting in a commercial viewpoint, where the purpose is the evenness of the growing plants as well as their fructification. Micropropagation is an alternative for obtaining clones with desirable characteristics such as high productivity, superior quality or biotic and abiotic stress tolerance, providing a fast multiplication within a small physical space. The aim of the present study was to establish protocols for the in vitro culture of cubiu. Different mg/L concentrations of the BAP (0.0; 0.5; 1.0; 3.0; 5.0) and AIA (0.0; 0.5; 1.0; 2.0; 3.0) growth regulators and all possible combinations between them in MS medium were assessed in the in vitro induction and regeneration of cubiu sproutings and rooting. The experimental design was in random blocks with five replicates and 25 treatments, constituting a 5x5 factorial scheme. The best BAP and AIA mg/L combinations the following respectively: for leaves 1.0 plus 0.5 producing an average number of 8 leaves per explant; for sprountings 3.0 plus 0.5 producing an average number of 3.10 sprouts per explant; for the height of sproutings 3.0 plus 0.5 producing an average height of 4.17 cm; for root 1.0 plus 0.5 producing an average number of 8.45 roots and for the length of root 1.0 and 0.5 producing a 6.4 cm mean length. It was possible to micropropagate the S. sessiliflorum species adding BAP and AIA growth regulators to the MS medium, obtaining a larger number of sproutings as well as complete plants with well developed root system and ideal height for acclimatization. / O cubiu (Solanum sessiliflorum Dunal), recurso genético originário da Amazônia Ocidental, apresenta potencialidades para a agricultura moderna, dada a sua rusticidade, boa capacidade de produção e ao aproveitamento dos seus frutos de forma diversificada. Por ser uma planta de reprodução sexuada, mantém alta variabilidade genética quanto às características de importância agronômica, o que não é interessante do ponto de vista comercial, quando se objetiva a uniformização do crescimento e frutificação das plantas. Através da micropropagação é possível a obtenção de clones com características desejáveis como a alta produtividade, qualidade superior ou tolerância ao estresse biótico e abiótico, propiciando a multiplicação rápida e em pequeno espaço físico. Este trabalho teve como objetivo estabelecer protocolos para o cultivo in vitro do cubiu. Foram estudadas diferentes concentrações em mg/L dos reguladores de crescimento BAP (0,0; 0,5; 1,0; 3,0 e 5,0) e AIA (0,0; 0,5; 1,0; 2,0 e 3,0) e 25 combinações entre estes, em meio MS, na indução e regeneração in vitro de brotações e enraizamento do cubiu. O delineamento experimental foi em blocos casualizados com cinco repetições e 25 tratamentos, constituindo um esquema fatorial de 5x5. As combinações em mg/L de BAP e AIA com as melhores respostas foram respectivamente: para folhas 1,0 e 0,5 produzindo um número médio de 8 folhas por explante; para brotações 3,0 e 0,5 produzindo um número médio de 3,10 brotos por explante; para altura das brotações 3,0 e 0,5 produzindo altura média de 4,17 cm; para raiz 1,0 e 0,5 produzindo número médio de 8,45 raízes e para o comprimento da raiz 1,0 e 0,5 produzindo comprimento médio de 6,4 cm. Foi possível micropropagar a espécie S. sessiliflorum adicionando-se ao meio MS os reguladores de crescimento BAP e AIA, obtendo-se além de maiores números de brotações, plantas completas com sistema radicular e altura ideal para aclimatização.

Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-04-12T17:27:16Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kassyo Lobato Potenciano da Silva - 2017.pdf: 3631765 bytes, checksum: debcde89ec6bb553c1b37cafd56ee370 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-04-13T11:21:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kassyo Lobato Potenciano da Silva - 2017.pdf: 3631765 bytes, checksum: debcde89ec6bb553c1b37cafd56ee370 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-13T11:21:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kassyo Lobato Potenciano da Silva - 2017.pdf: 3631765 bytes, checksum: debcde89ec6bb553c1b37cafd56ee370 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The polymorphic fungi Fonsecaea pedrosoi and Cladophialophora carrionii are the main etiological agents of Chromoblastomycosis (CBM), a chronic cutaneous mycotic infection, which occurs mainly in humid tropical regions. The scarcity of effective therapeutic protocols added to the clinical polymorphism of CBM leads to prolonged therapies and a high relapse rate. There are few data on the molecular biology of F. pedrosoi and C. carrionii, although some virulence factors have already been described, revealing the need to explore the mechanisms used by these pathogens during infection. Iron is a vital micronutrient for all organisms, with the exception of some bacteria, participating in essential cellular processes, such as: DNA replication, oxidative stress, cellular respiration, oxygen transport, energy production, among others. During the infection, the host decreases the availability of iron to the pathogen to contain the advancement of the infection; while the pathogen activates mechanisms for obtain and use the metal to survive in the infected tissues, revealing a scenario of intense dispute. In order to characterize the presence of these systems in F. pedrosoi and C. carrionii, in sílico analyzes were performed, revealing the presence of orthologs for proteins involved in reductive iron assimilation, siderophore mediated uptake and regulators of capture and utilization strategies of the metal, these sequences containing conserved domains consistent with the predicted functions. The expression profile of transcripts demonstrated the induction of iron reducing scavengers, siderophore biosynthesis intermediates and the hapX positive regulator during iron deprivation, in addition to repressing the negative regulatory sreA. The production of siderophores was observed after qualitative approaches, and the siderophore ferricrocine was subsequently identified intra- and extracellularly in F. pedrosoi and C. carrionii. These siderophores were able to restore the growth of a mutant strain of ΔsidA from A. nidulans. Preferred iron sources were observed after growth assays and, in addition, some of these sources were used by F. pedrosoi and C. carrionii during infection in macrophages, demonstrating that these pathogens may have strategies for remodeling iron homeostasis for survival. / Os fungos polimórficos Fonsecaea pedrosoi e Cladophialophora carrionii são os principais agentes etiológicos da Cromoblastomicose (CBM), uma infecção micótica cutânea crônica, que ocorre principalmente em regiões tropicais úmidas. A escassez de protocolos terapêuticos eficazes somada ao polimorfismo clínico da CBM, conduzem a terapias prolongadas e elevada taxa de recidiva. Poucos são os dados a respeito da biologia molecular de F. pedrosoi e C. carrionii, embora alguns fatores de virulência já tenham sido descritos, salientando a necessidade de se explorar os mecanismos utilizados por estes patógenos durante a infecção. O ferro é um micronutriente vital para todos os organismos, com exceção de algumas bactérias, participando de processos celulares essenciais, tais como: replicação do DNA, combate ao estresse oxidativo, respiração celular, transporte de oxigênio, produção de energia, dentre outros. Durante a infecção o hospedeiro diminui a disponibilidade de ferro para o agente patogênico para conter o avanço da infecção; enquanto o patógeno ativa mecanismos de obtenção e utilização do metal para sobreviver nos tecidos infectados, revelando um cenário de intensa disputa. Com o objetivo de caracterizar a presença destes sistemas em F. pedrosoi e C. carrionii, análises in sílico foram realizadas, revelando a presença de ortólogas para proteínas envolvidas na assimilação redutiva de ferro, captação mediada por sideróforos e reguladores das estratégias de captação e utilização do metal, contendo estas sequências domínios conservados consistentes com as funções preditas. O perfil de expressão de transcritos demonstrou a indução de captadores redutivos de ferro, intermediários da biossíntese de sideróforos e do regulador positivo hapX durante a privação de ferro, além da repressão do regulador negativo sreA. A produção de sideróforos foi observada após abordagens qualitativas, sendo posteriormente identificado o sideróforo ferricrocina intra e extracelularmente em F. pedrosoi e C. carrionii. Estes sideróforos mostraram-se capazes de restaurar o crescimento de uma linhagem mutante de ∆sidA de A. nidulans. Fontes preferenciais de ferro foram observadas após ensaios de crescimento e, além disso, algumas destas fontes foram utilizadas por F. pedrosoi e C. carrionii durante infecção em macrófagos, demonstrando que estes patógenos podem possuir estratégias de remodelamento da homeostase de ferro para sobrevivência.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-14T20:03:38Z No. of bitstreams: 1 Tese - Arthur A. S. Cardoso.pdf: 1481154 bytes, checksum: 99e6a0a8d59270b411e965733a31f30d (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-14T20:03:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Arthur A. S. Cardoso.pdf: 1481154 bytes, checksum: 99e6a0a8d59270b411e965733a31f30d (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-15T14:30:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Arthur A. S. Cardoso.pdf: 1481154 bytes, checksum: 99e6a0a8d59270b411e965733a31f30d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-15T14:30:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Arthur A. S. Cardoso.pdf: 1481154 bytes, checksum: 99e6a0a8d59270b411e965733a31f30d (MD5) Previous issue date: 2016-07-15 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Amazon region is known to have a rich biodiversity, which also has a range of unexplored species and / or neglected by the scientific community, and such species may have a very strong economic potential for man. Even with a small fraction of this known biodiversity, it is estimated that the wealth of the Amazon flora comprises approximately 30,000 species, about 10% of plants from all over the planet. Hoeing inchi is a species native to the Amazon and with great potential for use in famacêutica and cosmetic industry, because it has high content of unsaturated fatty acids mono and polyunsaturated the oil extracted from its seed. However, despite several studies on the features and benefits of this oil are found in the literature, some information on the germination and planting need to be defined. Embrapa Western Amazon, located in the city of Manaus, has a Germplasm Bank of Plukenetia volubilis composed of several accesses. And this present work aims to study the germination process of weeding seeds inchi and to determine the best conditions of vegetative propagation in vivo and in vitro. / A região Amazônica é conhecida por possuir uma rica biodiversidade e ter uma gama de espécies pouco exploradas e/ou negligenciadas pela comunidade científica. Tais espécies podem apresentar um potencial econômico forte para o homem. Mesmo com uma pequena fração dessa biodiversidade conhecida, estima-se que a riqueza da flora Amazônica compreende aproximadamente 30.000 espécies, cerca de 10% das plantas de todo o planeta. Sacha inchi é uma espécie nativa da Amazônia com grande potencial de uso na indústria famacêutica e cosmética por possui alto teor de ácidos graxos insaturados mono e poli-insaturados no óleo extraído de sua semente. No entanto, apesar de vários estudos sobre as características e benefícios desse óleo serem encontrados na literatura, algumas informações sobre a germinação e propagação vegetativa precisam ser definidas. A Embrapa Amazônia Ocidental, situada no município de Manaus, possui um Banco de Germoplasma de Plukenetia volubilis composto por vários acessos. E este presente trabalho tem como objetivo estudar a germinação in vitro, os processos germinativos de sementes de sacha inchi assim como determinar as melhores condições da propagação vegetativa.

The increasing concerns launched by debates about climate changes added to the uncontrolled growth of world population have opened a market to natural inputs for a more sustainable agriculture. Taking those concerns together, it is very important to think in advance in terms of finding solutions to increase the food production, with improved quality and in a supposed changing environment. Natural substances such as seaweed biostimulants are coming up as inputs for crops yield and abiotic stress tolerance enhancement with increasing use in agriculture. In this scene, it is important to understand effects and mode of action of these substances on plant physiology to permit the development of consistent products and guarantee the delivery of solutions to growers that assist them in solving their needs. Therefore, this research was carried out aiming to understand the role of agrochemicals (classical plant growth regulators and seaweed biostimulants) on root development and hormonal relations of tomato \'Micro-Tom\' and Arabidopsis under water deficit conditions. Ascophyllum nodosum extracts (ANE) ability to stimulate endogenous hormonal responses in conditions of drought and osmotic stress was tested. We carried out experiments with two plant models: one is classically used in plant science studies and the other, a crop-like plant model whose scientific findings can be applied for several crops. We used tomato hormonal mutants and reporter lines grown in conditions of drought stress to study the effects of plant growth regulators and seaweed extracts on root growth and hormonal responses, respectively. Additionally, we tested in vitro the effects of these substances on root growth of Arabidopsis seedlings under osmotic stress conditions. The root development of tomato and Arabidopsis was negatively affected by the presence of water deficit caused by drought and osmotic stress, respectively. Gibberellins biosynthesis inhibitors only affected the root growth of gibberellin-deficient mutant (gib-3). Extracts of the same seaweed presented different effects on root growth of Arabidopsis seedlings and hormonal responsiveness in roots of tomato, possibly due to variability in their compositions. ANE A and B show opposite effects on root growth. ANE A promotes root growth, whereas ANE B shows inhibitory effects. These substances seem to have little influence on auxin responses in roots, however, they alter the balance between abscisic acid and ethylene under drought conditions. The standardization of the composition of seaweed extracts complemented with studies on their physiological and molecular effects in crops is crucial for the establishment of these agricultural inputs as one of the solutions for current and future requirements of food production. / As crescentes preocupações oriundas a partir dos atuais debates sobre mudanças climáticas somadas ao descontrolado crescimento da população mundial têm dado espaço para o uso de insumos agrícolas naturais, objetivando sustentabilidade na agricultura. Diante de tais preocupações, é importante pensar antecipadamente e encontrar maneiras de aumentar a produção e a qualidade de alimentos, em um ambiente de supostas mudanças climáticas. Substâncias naturais, como bioestimulantes à base de alga, estão ganhando relevância como melhoradores da produtividade e tolerância a estresses abióticos com crescentes usos na agricultura. Diante desse cenário, é importante compreender os efeitos e modos de ação dessas substâncias na fisiologia das plantas para permitir o desenvolvimento de produtos consistentes e garantir aos produtores soluções que atendam às suas necessidades. Portanto, este estudo foi realizado com o objetivo de entender o papel de agroquímicos (reguladores vegetais clássicos e biostimulantes à base da alga) sobre o desenvolvimento radicular e relações hormonais do tomateiro \'Micro-Tom\' e Arabidopsis sob condições de estresse hídrico. Foi testada a habilidade de extratos Ascophyllum nodosum (ANE) em estimular respostas hormonais em condições de seca e estresse osmótico. Foram realizados experimentos com duas plantas-modelo: Arabidopsis que é largamente utilizada em estudos científicos de plantas e o tomateiro \'Micro-Tom\', uma planta-modelo mais adequada para estudos aplicados à agricultura sob condições tropicais. Foram utilizados mutantes hormonais e linhas-repórter de tomate cultivadas em condições de seca para o estudo dos efeitos dos reguladores vegetias e extratos de alga no crescimento radicular e respostas hormonais, respectivamente. Além disso, foram testados in vitro os efeitos dessas substâncias no crescimento radicular de plântulas de Arabidopsis em condições de estresse osmótico. O desenvolvimento radicular do tomateiro e Arabidopsis foi negativamente afetado pela ocorrência do déficit hídrico causado por seca e estresse osmótico, respectivamente. Inibidores de giberelinas afetaram apenas o crescimento radicular do mutante com baixo nível endógeno giberelinas (gib-3). Extratos da mesma espécie de alga apresentaram diferentes efeitos no crescimento radicular de plântulas de Arabidopsis e resposta hormonal em raízes de tomateiro. ANE A e B aprensenta efeitos opostos no desenvolvimento de raízes. ANE A promove o crescimento radicular enquanto ANE A inibe. ANEs pouco influenciam as respostas auxínicas, contudo, essas substâncias alteram o balanço entre entre ácido abscísico e etileno sob condições de estresse hídrico por seca. A padronização da composição de extratos de alga somada aos estudos sobre os seus efeitos fisiológicos e moleculares em culturas é crucial para o estabelecimento desses insumos agrícolas como uma das soluções para as necessidades atuais e futuras da produção de alimentos.

O presente trabalho teve por objetivo avaliar a atuação de biorreguladores (ANA, BAP, TDZ e 2iP) no desenvolvimento morfogenético de microplantas de pupunheiras. Para tanto, a cada 28 dias aferiram-se o número de propágulos, o desenvolvimento radicular, o comprimento e a taxa de crescimento da parte aérea, número de folhas, oxidação, número de centros meristemáticos na região basal dos explantes e nas bainhas e/ou nos primórdios foliares dos propágulos, número de complexos celulares pró-embriogênicos e as rotas e padrões morfogênicos. Todos os experimentos foram conduzidos em delineamento inteiramente casualizado. Os dados qualitativos foram apresentados como porcentagens e médias gerais e os dados quantitativos foram submetidos à análise de regressão polinomial ou exponencial. As avaliações morfofisiológicas evidenciaram que o TDZ isoladamente favoreceu o desenvolvimento de gemas adventícias, embora curtas e por vezes, com acúleos. Embriões somáticos somente não se desenvolveram em tratamentos contendo a presença isolada de BAP, TDZ e 2iP, nos demais tratamentos observou-se um comportamento exponencial, cujo número foi reduzido e variou apenas em função do período de cultivo. Maior número de raízes foi observado no tratamento contendo ANA em associação ao BAP, embora o tratamento controle tenha induzido maior porcentagem de explantes enraizados e com maior comprimento, sendo o único a evidenciar ramificação. A presença isolada do TDZ promoveu maior comprimento da parte aérea e sua associação ao ANA promoveu a maior taxa de crescimento. O melhor desenvolvimento da parte aérea de microplantas e explantes de pupunheiras ocorreu em meio de cultura MS isento de biorreguladores ou em meio constituído pela associação entre ANA/TDZ aos 140 dias de cultivo, sendo que o acréscimo isolado das citocininas BAP, TDZ e 2iP no meio de cultura MS promoveu tardiamente a taxa máxima de crescimento. A adição isolada do 2iP no meio de cultura promoveu intensa oxidação nas primeiras folhas desenvolvidas das microplantas em explantes de pupunheiras e a aplicação isolada do TDZ ou associada à ANA promoveu anomalias como dobramento foliar e desenvolvimento de acúleos. O monitoramento das rotas e padrões morfogênicos evidenciou que embriões somáticos com origem multicelular originaramse diretamente na região central da base dos explantes nos tratamentos isentos de biorreguladores, na presença isolada de ANA e de TDZ ou na associação de ambos. Pró-embriões com origem unicelular foram induzidos também na presença isolada de ANA ou TDZ e nas associações ANA/BAP ou ANA/TDZ, sendo que pró-embriões com origem multicelular foram induzidos na presença isolada do TDZ a partir da atividade meristemática apical caulinar e a partir da (bi) polarização de elevado número de centros meristemáticos presentes na extremidade distal da base destes explantes. Gemas adventícias com origem multicelular diretamente da extremidade proximal da base dos explantes foram induzidas em maior freqüência no tratamento isento de biorreguladores e no tratamento contendo ANA/TDZ. Entre os primórdios foliares dos explantes, estas estruturas foram freqüentemente induzidas em tratamentos contendo a presença isolada de ANA. / This study aimed to evaluate the role of bioregulators (NAA, BAP, TDZ and 2iP) on the morphogenetic development of pejibaye microplants. For this, every 28 days, the number of propagules, the root development, the length and the growth rate of shoots, the number of leaves, the oxidation, the number of meristematic centers in the explants basal region and in the leaf sheaths and/or in the propagules leaf primordia, the number of pro-embryogenic cell complex and the morphogenic routes and patterns were measured. All experiments were conducted in a randomized design. Qualitative data were presented as percentages and general averages, and quantitative data were subjected to polynomial regression or exponential analysis. The morphophysiological evaluations showed that the TDZ alone favored the development of adventitious buds, although short, and sometimes with thorns. Only in the treatments with the isolated presence of BAP, TDZ and 2iP, somatic embryos were not developed. For the other treatments there was an exponential behavior, in which the number of somatic embryos was reduced and varied according only to the cultivation period. Although a greater number of roots was observed in the treatment, in which NAA was associated with BAP, the control treatment has induced the highest rate of rooted explants and with greater root length, and has been the single one that produced branches. The isolated presence of TDZ promoted the greater shoot length, and its association with ANA promoted the highest growth rate. The best shoot development of pejibaye microplants and explants occurred in the MS bioregulator-free culture medium of or in the medium with NAA/TDZ association, at140 days of cultivation. Moreover, the isolated addition of the cytokinins BAP, TDZ and 2iP in the medium, later promoted the highest growth rate. In pejibaye explants the addition of 2iP alone promoted intense oxidation of the first developed leaves and the application of TDZ alone or associated with ANA promoted anomalies such as folding leaf and thorn development. The monitoring of the morphogenetic routes and patterns showed that in the treatments that were bioregulator-free, or with the isolated presence of NAA and TDZ, or the association of both, somatic embryos, from multicellular origin, raised up directly in the central region of the explants base. Pro-embryos from unicellular origin were also induced in the isolated presence of NAA or in NAA/BAP and NAA/TDZ associations. Moreover, in the isolated presence of TDZ, pro-embryos from multicellular origin were induced from shoot apical meristem activity and from the (bi) polarization of a large number of meristematic centers in the distal extremity of the explants base. Adventitious buds with multicellular origin from the proximal extremity of the explants base were induced more frequently in the bioregulator-free treatment and in the treatment with NAA/TDZ. Between the leaf explants primordia, adventitious buds were often induced by the treatments with the isolated presence of ANA.