Como entre 25-50% dos isolados de Mycobacterium tuberculosis resistentes à INH não apresentam mutações nos genes katG, inhA, ahpC e kasA que possam justificar sua resistência, foi proposta a influência de mutações específicas no gene nat nos mecanismos de resistência e atividade da NAT. Todos os isolados obtidos (n=125) foram identificados e caracterizados através da amplificação pela PCR da IS6110 e por MIRU-VNTR, respectivamente. A determinação da concentração inibitória mínima (CIM) foi realizada pelo método REMA. Após triagem de mutações nos genes caracteristicamente envolvidos com resistência pela PCR-SSCP, seguida de seqüenciamento de DNA, foram selecionados 45 isolados para o estudo de mutações específicas (pela PCR e sequenciamento) e expressão gênica do mRNA do gene nat através da RT-PCR em tempo real. Confirmou-se que mutação no gene katG é a mais correlacionada com a resistência à INH, pois 68,4% das cepas resistentes apresentaram mutação neste gene. Mutações na região promotora do gene inhA, na região intergênica oxyR-ahpC e no gene kasA foram encontradas em 8,8%, 5,6% e 21,6% dos isolados, respectivamente. Mutações no gene nat, das quais 4 não haviam sido descritas previamente, foram encontradas em 40,0% dos isolados. Apesar dessas mutações causarem alterações na proteína, não foi observada uma relação direta com aumento na CIM. Também não foi observada relação entre a variação da expressão do mRNA do gene nat com os valores de CIM e com o número de mutações, tanto específicas do gene nat como em outros genes caracteristicamente relacionados com resistência à INH. / Since around 25-50% of the Mycobacterium tuberculosis strains resistant to INH do not present any mutation in katG, inhA, ahpC and kasA genes that could explain their resistance, we proposed to evaluate the influence of specific mutations in the nat gene in the mechanisms of resistance and in the activity of NAT. All strains were identified and characterized molecularly by the amplification by PCR of the IS6110 region and by MIRU-VNTR, respectively. The minimal inhibitory concentration (MIC) was performed using the REMA method. After screening of mutations in the resistant-related genes by PCR-SSCP followed by DNA sequencing, 45 strains were selected to be evaluated for specific mutations (by PCR and sequencing) and mRNA expression of nat by real time RT-PCR. It was showed that mutations in the katG gene were the most frequent and related to INH resistance since 68.4% of all resistant strains presented mutation in this gene. Mutations in the promoter region of inhA gene, oxyR-ahpC intergenic region and kasA gene were found in 8.8%, 5.6% and 21.6% of the strains, respectively. Mutations in the nat gene, four of them not previously described, were found in 40.0% of the strains. Although those mutations influence in the protein produced it was not observed a direct relation in an increase in CIM. It was also noted no relation between the expression of mRNA of nat gene neither with the MIC values nor with the number of mutations, both specific of nat gene as well in the other genes characteristically related to INH resistance.

Atualmente a alta incidência de isolados multirresistentes a antibióticos utilizados na clinica tem-se tornado alarmante. Estudos recentes demonstraram que um dos motivos que contribuem para o aumento da resistência a antibióticos em bactérias é a ocorrência de linhagens que apresentam o fenótipo mutador. Deficiências nos genes do complexo mut, que incluem os sistemas de reparo dependente de metilação (MMR do inglês methyl-directed mismatch repair), e o sistema de reparo oxidativo (GO) podem gerar linhagens com um fenótipo mutador, que, por sua vez, levam ao aumento das taxas mutacionais espontâneas. Isolados clínicos com fenótipo mutador foram descritos em amostras de Escherichia coli patogênica empregando-se a resistência para antibióticos como rifampicina, cloranfenicol e quinolonas mas não há registros de estudos envolvendo o possível impacto do fenótipo mutador sobre a frequência de mutações espontâneas que levem à resistência aos antibióticos beta-lactâmicos. No presente trabalho estudamos a ocorrência do fenótipo mutador frente à resistência aos antibióticos beta-lactâmicos de amplo uso clínico em linhagens de E. coli patogênicas de origem humana, incluindo 48 amostras de E. coli uropatogênica (UPEC) e 5 amostras de E. coli associadas a infecções entéricas. Foram utilizadas como controles positivos para o fenótipo mutador linhagens de E. coli K12 deficientes nos genes mutY ou mutS. Testes qualitativos revelaram a ocorrência de 6 amostras de UPEC e 2 amostras de EHEC com fenótipo mutador para cefalotina, ceftazidima e rifampicina. Entre as amostras estudadas, 3 linhagens de UPEC (amostras 29, 32 e 47) e 1 linhagem de EHEC (amostra 80) apresentaram fenótipo mutador frente à cefalotina e à ceftazidima confirmado em testes quantitativos com valores de mutação espontânea variando entre 0,68 x 10-4 e 0,8 x 10-6. Os resultados baseados em amplificação por PCR revelaram ausência de alterações estruturais em 3 genes do complexo mut (mutS, mutY e mutL) nos quatro isolados que apresentaram fenótipo mutador. O trabalho também envolveu a determinação dos níveis de resistência em clones derivados das 4 linhagens mutadoras após exposição à cefalotina ou à ceftazidima. As colônias obtidas também foram analisadas para a determinação da natureza de mutação que resultou na resistência aos antibióticos beta-lactâmicos. Os resultados obtidos apontam para aumento nos níveis de expressão de uma beta-lactamase para os derivados resistentes da amostra 32, possíveis alterações de permeabilidade do envoltório celular, e, indiretamente, modificação dos alvos celulares para esses antibióticos. Esses resultados revelam a elevada ocorrência do fenótipo mutador entre amostras de UPEC oriundas da clínica e destacam a importância do fenômeno sobre a ocorrência de resistência aos beta-lactâmicos de uso clínico. / Currently the high incidence of isolates with multiple resistance to antibiotics used in the clinic is alarming. Recent studies show that one of the reasons that may contribute to increased resistance in bacteria is the occurrence of strains with the mutator phenotype. Deficiencies in mut genes complex including methylation-dependent repair system (MMR from English methyl-directed mismatch repair) and oxidative repair system (GO) can generated strains with a mutator phenotype, which in turn leads to increasing spontaneous mutation rates. Clinical isolates with the mutator phenotype were reported among pathogenic Escherichia coli with antibiotics such as rifampicin, chloramphenicol and quinolones. Nonetheless, there are no studies describing the involvement of the possible impact of the mutator phenotype on the frequency of spontaneous mutations leading to resistance to beta-lactam antibiotics. In this work we studied the occurrence of the mutator phenotype leading toresistance to beta-lactam antibiotics use in clinics. For this purpose we tested a set of pathogenic E. coli strains of human origin, including 48 strains of uropathogenic E. coli (UPEC) and 5 strains of E. coli associated with enteric infections. As positive controls for the mutator phenotype we used E. coli K12 strains deficient in mutY or mutS genes. Qualitative tests revealed 6 UPEC samples and 2 EHEC strains with mutator phenotype for cephalothin, ceftazidime and rifampicin. Three UPEC strains (samples 29, 32 and 47) and one EHEC strain (sample 80) showed spontaneous mutation frequencies ranging from 0.68 x 10-4 to 0.8 x 10-6 to cephalothin and ceftazidime. The results based on PCR amplification revealed no structural changes in the mut gene complex (mutS, mutY and mutL) in the four mutator strains. The work also involved determination of the resistance level to cephalothin or ceftazidime of clones derived from the mutator strains. The colonies obtained were also analyzed to determine the nature of mutation leading to beta-lactam resistance. The results indicated increased expression levels of of a beta-lactamase in derivatives of the 32 strain, possible reduction in cell envelope permeability and, indirectly ,modification of cellular targets for these antibiotics. These results showed the high occurrence of mutator phenotype among UPEC strains derived from clinical settings and highlight the importance of the phenomenon on the occurrence of resistance to beta-lactam antibiotics in clinical use.

No presente trabalho avaliamos fenotípica e molecularmente isolados de P. vivax da Amazônia Ocidental Brasileira. A avaliação fenotípica de sensibilidade à cloroquina (CQ) foi realizada por meio do ensaio de maturação de esquizonte. A avaliação molecular efetuou-se por tipagem de cinco polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) não-sinônimos do gene pvmdr-1 (A266G, A1498G, A2722C, A2927T e T3226C) e variações no número de cópias deste gene. Em decorrência, o fenótipo de susceptibilidade à CQ nos 36 isolados analisados não foi estabelecido devido ao escasso desenvolvimento ex-vivo dos parasitos. Mutações na posição Y976F, potencialmente associada à resistência à CQ, não foram observadas nos 80 isolados testados. Além disso, 10% das amostras apresentaram a mutação F1076L, que frequentemente acompanha a mutação Y976F. Finalmente, apenas dois isolados (0,9%) dos 215 analisados apresentaram duas cópias do gene pvmdr-1, sugerindo que a duplicação gênica, potencial mecanismo de resistência à mefloquina, ainda não está disseminada nas populações de parasitos desta região. / In this study, we performed a molecular and phenotypic evaluation of isolates of P. vivax from Brazilian Western Amazon. The phenotypic evaluation of chloroquine (CQ) sensitivity was performed using the schizont maturation assay. The molecular evaluation was made by typing of five non-synonymous single nucleotide polymorphisms (SNPs) of the pvmdr-1 gene (A266G, A1498G, A2722C, T3226C and A2927T) and variations of the copy number of this gene. As a result, the CQ susceptibility phenotype in 36 isolates of P. vivax analyzed was not established, due to the scarce ex-vivo development of the parasites. Mutations at position Y976F, potentially associated with CQ resistance, were not observed in 80 isolates tested. In addition, 10% of the isolates had the mutation F1076L, which often accompanies the mutation Y976F. Finally, two isolates (0,9%), from a total of 215 had two copies of the pvmdr-1 gene, suggesting that the gene duplication, a potential mechanism of mefloquine resistance, is not spread in the parasites populations of this region.

Enterobactérias são importantes agentes de infecção podendo contaminar ambientes aquáticos poluídos por atividades antropogênicas, os quais podem ser importantes locais para a seleção e disseminação de bactérias resistentes aos antibacterianos (ATB) de uso na medicina humana e veterinária. O objetivo desse estudo foi monitorar a disseminação de enterobactérias resistentes aos ATB em ambientes aquáticos do estado de São Paulo. De 2009-2010, 135 enterobactérias resistentes à pelo menos um ATB, foram isoladas de rios, represas e estações de tratamento de esgoto. O fenótipo multirresistente (MR) foi predominante em 64% dos isolados, sendo que houve um predomino de E. coli (80%) e K. pneumoniae (48%). Oito porcento dos isolados apresentaram fenótipo ESBL (cefotaxima, CIM50 <font face=\"Symbol\">&#8805; 64 <font face=\"Symbol\">mg/ml) devido à presença de genes blaCTX-M-like, enquanto que a presença de genes qnr-like foi confirmada em 7% dos isolados resistentes à ciprofloxacina (CIM50 <font face=\"Symbol\">&#8805; 32<font face=\"Symbol\">mg/ml). A tipagem molecular revelou ausência de relação clonal entre os isolados de K. pneumoniae e E. coli. / Enterobacteria are important agents of infection may contaminate aquatic environments polluted by anthropogenic activities, which may be important sites for the selection and spread of bacteria resistant to antibiotics (ATB) for use in human and veterinary medicine. The aim of this study was to monitor the spread of enterobacteria resistant to ATB in aquatic environments of the state of Sao Paulo. From 2009-2010, 135 Enterobacteriaceae resistant to at least one ATB, were isolated from rivers, dams and sewage treatment plants. The phenotype resistant (MDR) was predominant in 64% of the isolates, and there was the predominance of E. coli (80%) and K pneumoniae (48%). Eight percent of the isolates showed ESBL phenotype (cefotaxime, MIC50 <font face=\"Symbol\">&#8805; 64 <font face=\"Symbol\">mg/ml) due to the presence of blaCTX-M-like, while the presence qnr-like gene was confirmed in 7% of isolates resistant to (ciprofloxacin MIC50 <font face=\"Symbol\">&#8805; 32<font face=\"Symbol\">mg/ml). Molecular typing revealed no clonal relationship among isolates of K. pneumoniae and E. coli.

Atualmente a alta incidência de isolados multirresistentes a antibióticos utilizados na clinica tem-se tornado alarmante. Estudos recentes demonstraram que um dos motivos que contribuem para o aumento da resistência a antibióticos em bactérias é a ocorrência de linhagens que apresentam o fenótipo mutador. Deficiências nos genes do complexo mut, que incluem os sistemas de reparo dependente de metilação (MMR do inglês methyl-directed mismatch repair), e o sistema de reparo oxidativo (GO) podem gerar linhagens com um fenótipo mutador, que, por sua vez, levam ao aumento das taxas mutacionais espontâneas. Isolados clínicos com fenótipo mutador foram descritos em amostras de Escherichia coli patogênica empregando-se a resistência para antibióticos como rifampicina, cloranfenicol e quinolonas mas não há registros de estudos envolvendo o possível impacto do fenótipo mutador sobre a frequência de mutações espontâneas que levem à resistência aos antibióticos beta-lactâmicos. No presente trabalho estudamos a ocorrência do fenótipo mutador frente à resistência aos antibióticos beta-lactâmicos de amplo uso clínico em linhagens de E. coli patogênicas de origem humana, incluindo 48 amostras de E. coli uropatogênica (UPEC) e 5 amostras de E. coli associadas a infecções entéricas. Foram utilizadas como controles positivos para o fenótipo mutador linhagens de E. coli K12 deficientes nos genes mutY ou mutS. Testes qualitativos revelaram a ocorrência de 6 amostras de UPEC e 2 amostras de EHEC com fenótipo mutador para cefalotina, ceftazidima e rifampicina. Entre as amostras estudadas, 3 linhagens de UPEC (amostras 29, 32 e 47) e 1 linhagem de EHEC (amostra 80) apresentaram fenótipo mutador frente à cefalotina e à ceftazidima confirmado em testes quantitativos com valores de mutação espontânea variando entre 0,68 x 10-4 e 0,8 x 10-6. Os resultados baseados em amplificação por PCR revelaram ausência de alterações estruturais em 3 genes do complexo mut (mutS, mutY e mutL) nos quatro isolados que apresentaram fenótipo mutador. O trabalho também envolveu a determinação dos níveis de resistência em clones derivados das 4 linhagens mutadoras após exposição à cefalotina ou à ceftazidima. As colônias obtidas também foram analisadas para a determinação da natureza de mutação que resultou na resistência aos antibióticos beta-lactâmicos. Os resultados obtidos apontam para aumento nos níveis de expressão de uma beta-lactamase para os derivados resistentes da amostra 32, possíveis alterações de permeabilidade do envoltório celular, e, indiretamente, modificação dos alvos celulares para esses antibióticos. Esses resultados revelam a elevada ocorrência do fenótipo mutador entre amostras de UPEC oriundas da clínica e destacam a importância do fenômeno sobre a ocorrência de resistência aos beta-lactâmicos de uso clínico. / Currently the high incidence of isolates with multiple resistance to antibiotics used in the clinic is alarming. Recent studies show that one of the reasons that may contribute to increased resistance in bacteria is the occurrence of strains with the mutator phenotype. Deficiencies in mut genes complex including methylation-dependent repair system (MMR from English methyl-directed mismatch repair) and oxidative repair system (GO) can generated strains with a mutator phenotype, which in turn leads to increasing spontaneous mutation rates. Clinical isolates with the mutator phenotype were reported among pathogenic Escherichia coli with antibiotics such as rifampicin, chloramphenicol and quinolones. Nonetheless, there are no studies describing the involvement of the possible impact of the mutator phenotype on the frequency of spontaneous mutations leading to resistance to beta-lactam antibiotics. In this work we studied the occurrence of the mutator phenotype leading toresistance to beta-lactam antibiotics use in clinics. For this purpose we tested a set of pathogenic E. coli strains of human origin, including 48 strains of uropathogenic E. coli (UPEC) and 5 strains of E. coli associated with enteric infections. As positive controls for the mutator phenotype we used E. coli K12 strains deficient in mutY or mutS genes. Qualitative tests revealed 6 UPEC samples and 2 EHEC strains with mutator phenotype for cephalothin, ceftazidime and rifampicin. Three UPEC strains (samples 29, 32 and 47) and one EHEC strain (sample 80) showed spontaneous mutation frequencies ranging from 0.68 x 10-4 to 0.8 x 10-6 to cephalothin and ceftazidime. The results based on PCR amplification revealed no structural changes in the mut gene complex (mutS, mutY and mutL) in the four mutator strains. The work also involved determination of the resistance level to cephalothin or ceftazidime of clones derived from the mutator strains. The colonies obtained were also analyzed to determine the nature of mutation leading to beta-lactam resistance. The results indicated increased expression levels of of a beta-lactamase in derivatives of the 32 strain, possible reduction in cell envelope permeability and, indirectly ,modification of cellular targets for these antibiotics. These results showed the high occurrence of mutator phenotype among UPEC strains derived from clinical settings and highlight the importance of the phenomenon on the occurrence of resistance to beta-lactam antibiotics in clinical use.

A situação epidemiológica da tuberculose (TB) no âmbito mundial e no Brasil ainda evidencia importante magnitude, acrescentando-se o problema crescente da Tuberculose Multiresistente (TBMR), as quais apresentam associação com as desigualdades sociais. Com a finalidade de contribuir para o conhecimento a respeito da TBMR e aprimorar as práticas de controle da doença, o presente estudo teve como objetivos: descrever o perfil de características sócio-demográficas e clínico-epidemiológicas dos pacientes portadores de tuberculose multirresistente, inscritos em um Centro de Referência para a Tuberculose do Estado de São Paulo, no período de agosto de 2002 a dezembro de 2009; e identificar, na trajetória percorrida pelos portadores de TBMR, inscritos no ano de 2009, nessa Unidade de Saúde, desde a percepção dos primeiros sinais e sintomas da TB até a constatação da multirresistência, aspectos que podem estar associados à ocorrência da multirresistência. O perfil sócio-demográfico e clínico-epidemiológico teve abordagem quantitativa, é descritivo, retrospectivo e seccional; os dados utilizados foram secundários e obtidos de fichas de notificação do Sistema de Informação da TBMR (Sistema TBMR, de âmbito nacional) e de prontuários dos pacientes matriculados na Instituição onde foi realizado o estudo. Na segunda etapa, o estudo teve abordagem qualitativa, tendo os depoimentos de alguns portadores de TBMR como matéria prima para a apreensão e a análise de aspectos da vida dos enfermos. A primeira etapa teve como população de estudo 188 pacientes e, para a segunda etapa, foram realizadas 19 entrevistas, que foram analisadas segundo técnica de análise de discurso apropriada. Para ambas as etapas do estudo foram observados os aspectos éticos. Os dados foram coletados no período de 22 de fevereiro a 15 de junho de 2010. Os resultados da primeira etapa do estudo revelam que 93,1% dos pacientes encontravam-se na faixa etária produtiva, 64,4% eram homens, a maior parte (34,6%) tinha de quatro a sete anos de escolaridade, 61,6% apresentavam precária inserção no mercado de trabalho; 74,2% eram procedentes do Município de São Paulo, com história de tratamentos anteriores para a TB (98,9%), 22,9% apresentavam etilismo e 28,2% tabagismo. A segunda etapa do estudo mostra que alguns aspectos podem ter contribuído para o desenvolvimento da TBMR, sobretudo relacionados às condições de vida e trabalho dos acometidos, além do acesso aos serviços de saúde. Em geral, as trajetórias percorridas pela maior parte dos pacientes revelam demora na busca da assistência, na realização e obtenção do resultado de exames e no diagnóstico da enfermidade; carência de informações sobre a doença e sobre os serviços de saúde que oferecem assistência. Conclui-se sobre a necessidade de expandir as políticas públicas de controle da doença e de ampliar a acessibilidade dos pacientes à assistência adequada. / The epidemiological situation of tuberculosis (TB) worldwide and in Brazil still shows significant magnitude, adding to the growing problem of multi-resistant tuberculosis (MRTB), which are associated with social inequalities. In order to contribute to the knowledge of the MRTB and improve the practices of disease control, this study had as objectives: to describe the profile of socio-demographic and clinical-epidemiological characteristics of patients with multi-resistant tuberculosis, enrolled in a Reference Center for Tuberculosis of State of Sao Paulo, in the period from August 2002 to December 2009; and identify the path travelled by the patients with MRTB, enrolled in the year 2009, this Health Unit, from perception of early signs and symptoms of TB up to find the multi-resistance, aspects that may be associated with the occurrence of multi-resistance. The socio-demographic profile and clinical-epidemiological had a quantitative approach, is descriptive, retrospective and sectional; the data used were secondary and obtained from reporting forms of the Information System of MRTB (MRTB system, nationwide) and Medical records of patients enrolled in the Institution where the study was conducted. In the second step, the study had a qualitative approach, having the declaration of some patients with MRTB as raw material for the seizure and analysis of aspects of life of the sick people. The first step was to study a population of 188 patients and, for the second step, 19 interviews were conducted, was analyzed by the technique of discourse analysis. For both steps of the study, were observed the ethical aspects. Data were collected in the period from February 22 to June 15 of 2010. The results of the first step of the study show that 93.1% the patients were in the productive age group, 64.4% were men, most part (34.6%) had four to seven years of study, 61.6% showed precarious insertion in the labor market; (74.2%) was from municipality of São Paulo, with history of previous treatment for TB (98.9%), 22.9% showed alcoholism and 28.2% smoking. The second step of the study shows that some aspects may have contributed to the development of MRTB, mainly related to living conditions and the work involved, in addition to access to health services. In general, the path travelled by most patients shows delay in seeking assistance, in realization of exams and obtaining of results, and in diagnosis of disease; lack of information about the disease and about the health services that provide assistance. It is concluded about the need to expand public policies to control the disease and to expand the accessibility of patients to appropriate assistance.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:26Z : No. of bitstreams: 1 Publico-277.pdf: 1313299 bytes, checksum: d9efa7c459ef573a430330551e19f390 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Introdução: A educação e a atualização dos profissionais da área da saúde devem ser consideradas fundamentais como estratégias para o controle da resistência microbiana e a garantia da segurança na assistência aos pacientes. Objetivos: Produzir um programa nacional de ensino a distância sobre medidas de prevenção e controle da resistência microbiana em serviços de saúde e avaliar o impacto da aplicação desse programa no conhecimento de profissionais da área de saúde. Avaliar a percepção e atitude de profissionais que atuam em comissões de controle de infecção sobre o programa de controle de infecção em suas instituições. Método: O estudo foi realizado na Comissão de Epidemiologia Hospitalar da Disciplina de Infectologia e Departamento de Informática e Saúde da Universidade Federal de São Paulo. Foi aplicada metodologia a distância utilizando a plataforma Moodle. Foram desenvolvidos dois cursos: RMcontrole, período entre 15 de outubro e 14 de dezembro de 2007, direcionado a profissionais da área da saúde em geral e ATMracional, período de 18 de fevereiro a 18 de abril de 2008, direcionado a profissionais prescritores de antimicrobianos (médicos e dentistas). Os profissionais deveriam inscrever-se pelo site do curso. A seleção dos alunos priorizou profissionais das regiões Centro-Oeste e Norte do país com atuação na área de controle de infecção hospitalar. O curso foi oferecido gratuitamente aos profissionais e financiado pela Organização Pan-Americana da Saúde e Agência Nacional de Vigilância Sanitária. O programa envolveu a produção de uma mídia impressa, um CD-ROM, enviados para o endereço do profissional, além da criação de site na internet. As atividades de cada aluno foram monitoradas por tutores especialistas no controle de infecção hospitalar e para a aprovação no curso foi exigida pontuação de 70% nas atividades e nas avaliações propostas. As avaliações dos alunos foram realizadas no final de cada módulo e no final do curso. Um questionário foi aplicado para obtenção de dados demográficos e epidemiológicos de cada profissional. Resultados: O total de profissionais inscritos para o curso RMcontrole foi 6256 e para o curso ATMracional foi 2856, dentre os quais foram selecionados 1172 e 917 profissionais para cada curso, respectivamente. A taxa de desistência no curso RMcontrole foi de 9,1% e no curso ATMracional foi de 8,0%, a taxa de aprovação foi 96,4% e 93,5%, respectivamente. Para a maioria dos participantes esta foi a primeira participação em um curso a distância, porém poucos referiram dificuldades com o estudo via internet. A ferramenta de estudo preferida pela maioria dos profissionais foi a apostila impressa, mas aproximadamente 20,0% dos profissionais preferiram estudar via internet. A avaliação dos participantes sobre o conteúdo do curso mostrou que, em relação à abrangência e atualização do tema, mais de 95,5% ficaram satisfeitos ou muito satisfeitos. Análise das pontuações em ambos os cursos mostrou que houve diferença entre as notas iniciais e finais, permitindo-nos concluir que houve aquisição de conhecimento (p< 0,001). Conclusões: Este foi o primeiro curso nacional, gratuito, para treinamento de profissionais da área da saúde sobre resistência microbiana. Acreditamos que o aprimoramento desta metodologia permitirá o acesso ao conhecimento técnico a um grupo maior número de profissionais e poderá se transformar em um importante instrumento de formação na área de prevenção e controle de infecções relacionadas à assistência à saúde e no enfrentamento aos desafios da resistência microbiana. A avaliação da percepção e atitude de profissionais que atuam em comissões de controle de infecção sobre o programa de controle de infecção em suas instituições destacou informações importantes que poderão ser utilizadas pelas autoridades brasileiras para direcionar estratégias de melhoria dos programas de controle de infecção hospitalar de cada região do país. / Background: Education and updating of health professionals should be considered as an integral part of strategies to resistance control and to maintain quality of care and patient safety. Objective: To develop and apply a Web-based program on infection control practices and antimicrobial resistance for healthcare workers involved with healthcare-acquired infection from different demographic Brazilian regions, and to assess the knowledge and perceptions of participants. To evaluate the perception and attitude of professionals working in committees hospital infection control registered for the course of the infection control program in their institutions. Method: The study was conducted at the Division of Infectious Diseases and Department of Informatics and Health of Federal University of São Paulo. Were developed and implemented two courses: RMcontrole, directed to health professionals in general and ATMracional, directed only antimicrobial prescribers (physicians and dentists). Professionals should register on line in the site of the course. The selection of students prioritized professionals from the Midwest and North of the country involved in the area of hospital infection control. The course was offered free to the professionals. The program involved production of a printed booklet and a CD-ROM sent to the address of work, beyond the creation of website. One of the features of this work was the use of e-learning platform Moodle. The activities of each student tutors were monitored by specialists in hospital infection control and to pass the course was required score of 70% in the proposed activities and assessments. Results: The total number of professionals registered for the course RMcontrole was 6256 and the course was ATMracional 2856, among whom were selected in 1172 and 917 professionals for each course respectively. The dropout rate in the course RMcontrole was 9.1% and ATMracional was 8.0%, the approval rate was 96.4% and 93.5% and disapproval rate was 3.6% and 6.5 %, respectively. For most participants this was the first participation in a distance course even so, few students reported difficulties with the study via the Internet. The study tool preferred by most professional was the book printed, but approximately 20.0% of professionals reported prefer to study via the Internet. The assessment of participants on the course content showed that in relation to the scope and update more than 95.5% were satisfied or extremely satisfied. The discussions between tutors and participants surpassed the mark of 1,000 posts in each course. Analysis of the scores in both courses showed that there was difference between the initial and final notes, allowing us to conclude that there was knowledge acquisition (p <0.001). Conclusion: This was the first free national program for training health professionals on microbial resistance. We believe that the improvement of this methodology will allow access to technical knowledge to a broader number of professionals and may become an important tool for training in prevention and control of infections related to health care and in facing the challenges of antimicrobial resistance. The evaluation of the perception and attitude of professionals working in infection control committees on the program of infection control in their institutions highlighted important information that could be used by the Brazilian authorities to direct strategies to improve the programs of hospital infection control in each region of the country. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

A situação epidemiológica da tuberculose (TB) no âmbito mundial e no Brasil ainda evidencia importante magnitude, acrescentando-se o problema crescente da Tuberculose Multiresistente (TBMR), as quais apresentam associação com as desigualdades sociais. Com a finalidade de contribuir para o conhecimento a respeito da TBMR e aprimorar as práticas de controle da doença, o presente estudo teve como objetivos: descrever o perfil de características sócio-demográficas e clínico-epidemiológicas dos pacientes portadores de tuberculose multirresistente, inscritos em um Centro de Referência para a Tuberculose do Estado de São Paulo, no período de agosto de 2002 a dezembro de 2009; e identificar, na trajetória percorrida pelos portadores de TBMR, inscritos no ano de 2009, nessa Unidade de Saúde, desde a percepção dos primeiros sinais e sintomas da TB até a constatação da multirresistência, aspectos que podem estar associados à ocorrência da multirresistência. O perfil sócio-demográfico e clínico-epidemiológico teve abordagem quantitativa, é descritivo, retrospectivo e seccional; os dados utilizados foram secundários e obtidos de fichas de notificação do Sistema de Informação da TBMR (Sistema TBMR, de âmbito nacional) e de prontuários dos pacientes matriculados na Instituição onde foi realizado o estudo. Na segunda etapa, o estudo teve abordagem qualitativa, tendo os depoimentos de alguns portadores de TBMR como matéria prima para a apreensão e a análise de aspectos da vida dos enfermos. A primeira etapa teve como população de estudo 188 pacientes e, para a segunda etapa, foram realizadas 19 entrevistas, que foram analisadas segundo técnica de análise de discurso apropriada. Para ambas as etapas do estudo foram observados os aspectos éticos. Os dados foram coletados no período de 22 de fevereiro a 15 de junho de 2010. Os resultados da primeira etapa do estudo revelam que 93,1% dos pacientes encontravam-se na faixa etária produtiva, 64,4% eram homens, a maior parte (34,6%) tinha de quatro a sete anos de escolaridade, 61,6% apresentavam precária inserção no mercado de trabalho; 74,2% eram procedentes do Município de São Paulo, com história de tratamentos anteriores para a TB (98,9%), 22,9% apresentavam etilismo e 28,2% tabagismo. A segunda etapa do estudo mostra que alguns aspectos podem ter contribuído para o desenvolvimento da TBMR, sobretudo relacionados às condições de vida e trabalho dos acometidos, além do acesso aos serviços de saúde. Em geral, as trajetórias percorridas pela maior parte dos pacientes revelam demora na busca da assistência, na realização e obtenção do resultado de exames e no diagnóstico da enfermidade; carência de informações sobre a doença e sobre os serviços de saúde que oferecem assistência. Conclui-se sobre a necessidade de expandir as políticas públicas de controle da doença e de ampliar a acessibilidade dos pacientes à assistência adequada. / The epidemiological situation of tuberculosis (TB) worldwide and in Brazil still shows significant magnitude, adding to the growing problem of multi-resistant tuberculosis (MRTB), which are associated with social inequalities. In order to contribute to the knowledge of the MRTB and improve the practices of disease control, this study had as objectives: to describe the profile of socio-demographic and clinical-epidemiological characteristics of patients with multi-resistant tuberculosis, enrolled in a Reference Center for Tuberculosis of State of Sao Paulo, in the period from August 2002 to December 2009; and identify the path travelled by the patients with MRTB, enrolled in the year 2009, this Health Unit, from perception of early signs and symptoms of TB up to find the multi-resistance, aspects that may be associated with the occurrence of multi-resistance. The socio-demographic profile and clinical-epidemiological had a quantitative approach, is descriptive, retrospective and sectional; the data used were secondary and obtained from reporting forms of the Information System of MRTB (MRTB system, nationwide) and Medical records of patients enrolled in the Institution where the study was conducted. In the second step, the study had a qualitative approach, having the declaration of some patients with MRTB as raw material for the seizure and analysis of aspects of life of the sick people. The first step was to study a population of 188 patients and, for the second step, 19 interviews were conducted, was analyzed by the technique of discourse analysis. For both steps of the study, were observed the ethical aspects. Data were collected in the period from February 22 to June 15 of 2010. The results of the first step of the study show that 93.1% the patients were in the productive age group, 64.4% were men, most part (34.6%) had four to seven years of study, 61.6% showed precarious insertion in the labor market; (74.2%) was from municipality of São Paulo, with history of previous treatment for TB (98.9%), 22.9% showed alcoholism and 28.2% smoking. The second step of the study shows that some aspects may have contributed to the development of MRTB, mainly related to living conditions and the work involved, in addition to access to health services. In general, the path travelled by most patients shows delay in seeking assistance, in realization of exams and obtaining of results, and in diagnosis of disease; lack of information about the disease and about the health services that provide assistance. It is concluded about the need to expand public policies to control the disease and to expand the accessibility of patients to appropriate assistance.

Enterobactérias são importantes agentes de infecção podendo contaminar ambientes aquáticos poluídos por atividades antropogênicas, os quais podem ser importantes locais para a seleção e disseminação de bactérias resistentes aos antibacterianos (ATB) de uso na medicina humana e veterinária. O objetivo desse estudo foi monitorar a disseminação de enterobactérias resistentes aos ATB em ambientes aquáticos do estado de São Paulo. De 2009-2010, 135 enterobactérias resistentes à pelo menos um ATB, foram isoladas de rios, represas e estações de tratamento de esgoto. O fenótipo multirresistente (MR) foi predominante em 64% dos isolados, sendo que houve um predomino de E. coli (80%) e K. pneumoniae (48%). Oito porcento dos isolados apresentaram fenótipo ESBL (cefotaxima, CIM50 <font face=\"Symbol\">&#8805; 64 <font face=\"Symbol\">mg/ml) devido à presença de genes blaCTX-M-like, enquanto que a presença de genes qnr-like foi confirmada em 7% dos isolados resistentes à ciprofloxacina (CIM50 <font face=\"Symbol\">&#8805; 32<font face=\"Symbol\">mg/ml). A tipagem molecular revelou ausência de relação clonal entre os isolados de K. pneumoniae e E. coli. / Enterobacteria are important agents of infection may contaminate aquatic environments polluted by anthropogenic activities, which may be important sites for the selection and spread of bacteria resistant to antibiotics (ATB) for use in human and veterinary medicine. The aim of this study was to monitor the spread of enterobacteria resistant to ATB in aquatic environments of the state of Sao Paulo. From 2009-2010, 135 Enterobacteriaceae resistant to at least one ATB, were isolated from rivers, dams and sewage treatment plants. The phenotype resistant (MDR) was predominant in 64% of the isolates, and there was the predominance of E. coli (80%) and K pneumoniae (48%). Eight percent of the isolates showed ESBL phenotype (cefotaxime, MIC50 <font face=\"Symbol\">&#8805; 64 <font face=\"Symbol\">mg/ml) due to the presence of blaCTX-M-like, while the presence qnr-like gene was confirmed in 7% of isolates resistant to (ciprofloxacin MIC50 <font face=\"Symbol\">&#8805; 32<font face=\"Symbol\">mg/ml). Molecular typing revealed no clonal relationship among isolates of K. pneumoniae and E. coli.

Como entre 25-50% dos isolados de Mycobacterium tuberculosis resistentes à INH não apresentam mutações nos genes katG, inhA, ahpC e kasA que possam justificar sua resistência, foi proposta a influência de mutações específicas no gene nat nos mecanismos de resistência e atividade da NAT. Todos os isolados obtidos (n=125) foram identificados e caracterizados através da amplificação pela PCR da IS6110 e por MIRU-VNTR, respectivamente. A determinação da concentração inibitória mínima (CIM) foi realizada pelo método REMA. Após triagem de mutações nos genes caracteristicamente envolvidos com resistência pela PCR-SSCP, seguida de seqüenciamento de DNA, foram selecionados 45 isolados para o estudo de mutações específicas (pela PCR e sequenciamento) e expressão gênica do mRNA do gene nat através da RT-PCR em tempo real. Confirmou-se que mutação no gene katG é a mais correlacionada com a resistência à INH, pois 68,4% das cepas resistentes apresentaram mutação neste gene. Mutações na região promotora do gene inhA, na região intergênica oxyR-ahpC e no gene kasA foram encontradas em 8,8%, 5,6% e 21,6% dos isolados, respectivamente. Mutações no gene nat, das quais 4 não haviam sido descritas previamente, foram encontradas em 40,0% dos isolados. Apesar dessas mutações causarem alterações na proteína, não foi observada uma relação direta com aumento na CIM. Também não foi observada relação entre a variação da expressão do mRNA do gene nat com os valores de CIM e com o número de mutações, tanto específicas do gene nat como em outros genes caracteristicamente relacionados com resistência à INH. / Since around 25-50% of the Mycobacterium tuberculosis strains resistant to INH do not present any mutation in katG, inhA, ahpC and kasA genes that could explain their resistance, we proposed to evaluate the influence of specific mutations in the nat gene in the mechanisms of resistance and in the activity of NAT. All strains were identified and characterized molecularly by the amplification by PCR of the IS6110 region and by MIRU-VNTR, respectively. The minimal inhibitory concentration (MIC) was performed using the REMA method. After screening of mutations in the resistant-related genes by PCR-SSCP followed by DNA sequencing, 45 strains were selected to be evaluated for specific mutations (by PCR and sequencing) and mRNA expression of nat by real time RT-PCR. It was showed that mutations in the katG gene were the most frequent and related to INH resistance since 68.4% of all resistant strains presented mutation in this gene. Mutations in the promoter region of inhA gene, oxyR-ahpC intergenic region and kasA gene were found in 8.8%, 5.6% and 21.6% of the strains, respectively. Mutations in the nat gene, four of them not previously described, were found in 40.0% of the strains. Although those mutations influence in the protein produced it was not observed a direct relation in an increase in CIM. It was also noted no relation between the expression of mRNA of nat gene neither with the MIC values nor with the number of mutations, both specific of nat gene as well in the other genes characteristically related to INH resistance.