Apresento nesta dissertação, que é inspirada nos Estudos Culturais, análises discursivas sobre representações de natureza, e outras que considero estarem a elas articuladas, na nova versão da série televisiva (reproduzida em vídeos comercializados inclusive nos supermercados brasileiros) o Sítio do Picapau Amarelo, produzida pela TV Globo. Esta série, tal como as outras que a antecederam e que foram veiculadas pela TV Tupi (1951), TV Cultura (1964), TV Bandeirantes (1967) e TV Globo (1977), é uma adaptação das obras infanto-juvenis de mesmo nome, escritas por José Bento Monteiro Lobato, na primeira metade do século XX. Neste estudo, considero tal série, a partir de análises conduzidas por Kellner (2001 e 1995), Giroux (2003, 2001 e 1995), Steinberg (1997), como uma importante pedagogia cultural. Nele detenho-me, especialmente, nos episódios: O Saci, As caçadas de Pedrinho e O poço do Visconde, nos quais a mata, os arredores do sítio e outros cenários “naturais” são bastante destacados. A partir deles, discuto: os modos de endereçamento da nova série televisiva; o modo como se lida na série com a dicotomia tantas vezes assumida entre alta e baixa cultura, bem como com situações que envolvem e colocam em oposição o urbano e o rural, o global e o local; e com as representações de natureza, que a configuram ora como ameaçadora, ora como ameaçada em muitos desses episódios. Destaco que, para o desenvolvimento das análises, foram também considerados os textos das histórias de Lobato e uma das antigas séries (veiculada pela TV Globo nos anos de 1977 a 1986), a qual se constituiu em um extenso (foi apresentada durante nove anos) e muito apreciado programa televisivo para crianças.

Os remanescentes das reduções Jesuíticas dos Guarani dos séculos XVII e XVIII, formam um importante Patrimônio Cultural comum à Argentina, Brasil, Paraguai e Uruguai. Representam uma das etapas de maior influência na formação histórica das sociedades aí existentes. A Redução de São Miguel Arcanjo foi um dos trinta povos missioneiros da Província Jesuítica do Paraguai e teve sua instalação no sítio atual em 1687. Seus remanescentes hoje fazem parte do Patrimônio Nacional, através do tombamento federal efetuado em 1938, e foram declarados como Patrimônio da Humanidade pela UNESCO em 1983. No Brasil, o processo de reconhecimento da importância do legado missioneiro data de muitas décadas. Inicialmente, foi feita uma ação de preservação dos remanescentes do antigo povo de São Miguel Arcanjo pelo Governo do Estado do Rio Grande do Sul em 1925-1927, obra que garantiu a preservação deste monumento. Em 1938 o Serviço do Patrimônio Histórico e Artístico Nacional (SPHAN) iniciou a sua primeira grande obra de restauração. Na mesma época, foi construído o Museu das Missões, projetado pelo arquiteto Lucio Costa, para abrigar a coleção de arte sacra barroco-missioneira existente. Este trabalho objetiva avaliar as primeiras ações de salvaguarda realizadas nos remanescentes de São Miguel, à luz da evolução dos critérios internacionais de preservação do patrimônio cultural - anteriores, contemporâneos e posteriores às intervenções, demonstrando a correção e a atualidade conceitual das mesmas. A partir da contextualização histórica do monumento e da sistematização das informações sobre as obras nele empreendidas, procurou-se averiguar a consonância com os preceitos de restauração da época em que foram realizadas bem como o seu avanço em relação às modernas teorias de preservação. A análise empreendida demonstrou que, embora tecnicamente possa haver críticas, os conceitos utilizados foram coerentes e podem ser considerados atuais. Em função destas ações precursoras é possível se ter a possibilidade de apreciar um monumento desta representatividade e importância para a história da arquitetura e da restauração. / The remainders of the Jesuit reductions of the Guarani in the XVII and XVIII centuries, form an important Cultural Patrimony common to Argentina, Brazil, Paraguay and Uruguay. Representing one of the larger influence stages there in the historical formation of the existent societies. The Reduction of São Miguel Arcanjo was one of the thirty missioneiros people of the Jesuit Province of Paraguay and had installation in the current site in 1687. Their remainders today are part of the National Patrimony, through the federal land registration made in 1938, and declared as Patrimony of the Humanity by UNESCO in 1983. In Brazil, the recognition process of the missioneiro legacy importance dates from a lot of decades. Initially, it was made a preservation action for old remainders from São Miguel Arcanjo by the Government of the Rio Grande do Sul State in 1925-1927, work that guaranteed the preservation of this monument. In 1938 the Service of the National Historical Artistic and Patrimony (SNHAP) began its first great restoration work. In the same time, the Missions Museum was built, projected by the architect Lucio Costa, to shelter the collection of sacred art Baroque-missioneira existent. This paper aims at to evaluate the first safeguard actions accomplished in São Miguel's remainders, to the light of the international evolution criteria of the cultural patrimony preservation - previous, contemporary and subsequent for the interventions, demonstrating the correction and the conceptual present time of the same ones. Starting from the historical monument contextualization and systematization of the works in its undertaken, it was tried to discover the consonance with the precepts of restoration of the period in that it was accomplished as well as its progress in relation to the modern preservation theories. The undertaken analysis demonstrated that, although technically it can have critics, the used concepts were coherent and they can be considered current. In function of these precursory actions we have the possibility to appreciate a monument of this representative and importance for the architecture history and restoration.

Submitted by Milena Rubi ( ri.bso@ufscar.br) on 2017-11-07T17:07:00Z No. of bitstreams: 1 SANTOS_Carlos_2017.pdf: 906783 bytes, checksum: bccefa4afd7b8ef5d98df40bff297122 (MD5) / Approved for entry into archive by Milena Rubi ( ri.bso@ufscar.br) on 2017-11-07T17:07:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 SANTOS_Carlos_2017.pdf: 906783 bytes, checksum: bccefa4afd7b8ef5d98df40bff297122 (MD5) / Approved for entry into archive by Milena Rubi ( ri.bso@ufscar.br) on 2017-11-07T17:07:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 SANTOS_Carlos_2017.pdf: 906783 bytes, checksum: bccefa4afd7b8ef5d98df40bff297122 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-07T17:07:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SANTOS_Carlos_2017.pdf: 906783 bytes, checksum: bccefa4afd7b8ef5d98df40bff297122 (MD5) Previous issue date: 2017-05-09 / Não recebi financiamento / The productive capacity is conventionally estimated by anamorphic or polymorphic calculated site curves; however, these curves have some limitations. Due to these limitations, the objective of this work was to evaluate the creation of growth curves for site classification by the nonlinear quantile regression method and to compare them with the curves generated by the algebraic difference method. The database was collected in two mesoregions of the state of São Paulo (Paulista and Bauru Metropolitan Macro), with 460 measurements in 98 plots with distinct periods in Eucalyptus sp. The site curves were adjusted according to the Chapman-Richards model using the algebraic difference method for anamorphic and polymorphic curves and nonlinear quantum regression (RNLQ). The results of this work allowed to conclude that the site curves adjusted by the RNLQ method are superior to the curves generated by the algebraic difference method by graphical analysis of the residuals with smaller ranged of the errors and greater homogeneity and residual standard error with lower values in the classes in general. / A capacidade produtiva é estimada convencionalmente por meio de curvas de sítio calculadas de forma anamórfica ou polimórfica, contudo, estas curvas possuem algumas limitações. Devido a estas limitações, o objetivo deste trabalho foi avaliar a criação de curvas de crescimento para classificação de sítio pelo método de regressão não linear quantílica e compará-las com as curvas geradas pelo método da diferença algébrica. A ba se de dados foi coletada em duas mesorregiões do estado de São Paulo (Macro Metropolitana Paulista e Bauru), com 460 medições em 98 parcelas com períodos distintos em Eucalyptus sp. As curvas de sítio foram ajustadas segundo modelo de Chapman-Richards pelo método da diferença algébrica para curvas anamórficas e polimórficas e regressão não linear quantílica (RNLQ). Os resultados deste trabalho permitiram concluir que as curvas de sítio ajustadas pelo método da RNLQ são superiores às curvas geradas pelo método da diferença algébrica pela análise gráfica dos resíduos com menor amplitude dos erros e maior homogeneidade e erro padrão residual com menores valores nas classes em geral.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Santa Maria, in the state of Rio Grande do Sul, is a city whose urban development has been strongly influenced by the presence of the railway and the activities associated to it, directly or indirectly, since the end of 19th century. With the termination of railway activities engendered by the federal government in the 1990s, the Railroad Site of Santa Maria, located in the central region of the city, has undergone a process entailing the abandonment of the site, the heritagization of urban spaces and real estate, and, subsequently, a program of urban revitalization which continues to be in progress currently. In this context, the objective of this thesis is to understand how the residents of the Railroad Site of Santa Maria have perceived the transformations of this urban space over the last twenty years. By employing an ethnographic method, consisting of direct observations in the streets and interviews with residents of the Railroad Site in 2012 and 2013, it was possible to identify conflicts and convergences between the daily city practices and the actions undertaken by public agencies. Likewise, it was possible to discern transformations and continuities in the ways that residents have used spaces and heritages and produced representations of the Railroad Site of Santa Maria, in addition to identifying modes of recognition and appropriation of material remnants of the railway as a historical and cultural heritage of Santa Maria and Rio Grande do Sul. / Santa Maria, no interior do Rio Grande do Sul, é uma cidade cujo desenvolvimento urbano foi muito influenciado pela presença da ferrovia e das atividades a ela vinculadas, direta ou indiretamente, desde o final do século XIX. Com o cessar das atividades ferroviárias geridas pelo governo federal na década de 1990, o Sítio Ferroviário de Santa Maria, localizado na região central da cidade, passou por um processo que compreendeu o abandono da área, a patrimonialização de espaços urbanos e de imóveis e o programa de revitalização urbana atualmente em curso. Diante desse contexto, a proposta desta dissertação consiste em compreender como os moradores do Sítio Ferroviário de Santa Maria vem percebendo as transformações neste espaço urbano no período dos últimos vinte anos. Por meio do método etnográfico, realizando observações diretas no espaço da rua e efetuando entrevistas com moradores do Sítio Ferroviário nos anos de 2012 e 2013, foi possível reconhecer conflitos e convergências entre as práticas cotidianas da cidade e as ações empreendidas pelo poder público. Da mesma forma, foi possível apreender transformações e permanências nas maneiras que os moradores usam espaços e patrimônios, produzindo representações acerca do Sítio Ferroviário de Santa Maria, e identificar modos de reconhecimento e de apropriação dos remanescentes materiais da ferrovia santa-mariense como patrimônio histórico e cultural do município de Santa Maria e do estado do Rio Grande do Sul.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:42:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 852162 bytes, checksum: 18350a1fa68989163ff6494b7784f27a (MD5) Previous issue date: 2012-07-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Fragile X syndrome is the most common inherited cause of intellectual disability with an estimated prevalence of 1 in 3600 males and 1 in 4000 to 6000 females, where it causes moderate to severe intellectual and social impairment together with syndromic features including large ears and head, long face and macroorchidism. It is most often is caused by expansion of a CGG trinucleotide repeat array in the 5' UT region of the FMR-1 gene at Xq27.3. This locus corresponds to a fragile site which can be observed in the metaphase chromosome following selective culture conditions. In this study we analyze two brothers with clinical indicative of fragile X syndrome. Peripheral blood lymphocytes were studied after 96 hrs culture periods at 37°C in RPMI 1640 (supplemented with 5% fetal serum bovine, 20 mM HEPES, 2mM glutamine and 1% M-PHA), LymphoGrow® and PB-MAX®. Two bottles for each medium was prepared for cultures with antagonists, and in each one 0,25 μg/mL fluorodeoxyuridine (FUdR) or 8 μg/mL methotrexate (Mtx) were added 72 hrs after the start of culture. Cultures were harvested after 95 hrs and 45 minutes using standard methods following exposure to 0,1 μg/mL colcemid for 15 minutes. Slides were stained with Giemsa 5% for fra(X) screening and G banding was employed for confirmation of the Xq27.3 fragile site. Lymphocytes growing in RPMI 1640, LymphoGrow and PB-MAX responded equivalently to the addition of antagonists. According to the F test at the level of 5% probability, there were no significant differences between the average number of metaphases in the three mediums in combination with FUdR. Similarly, in the three mediums methotrexate treatment was very toxic and resulted in insufficient number of analyzable cells. No fra(X) were detected in the cultures with this treatment. A total of 208 metaphases for brother 1 and 205 for brother 2 were scanned of which 21% and 20%, respectively, were positive for fra(X). These results of fragile X expression in brothers are in agreement with the estimate expression in affected males ranging from 10-40% and corroborate those of other studies which reported that men of the same family tend to have similar frequencies of fra(X). The procedures for induction of fragile site and cytogenetic analysis showed to be adequate in order to identify the presence of FRAXA in the analyzed brothers with clinical suspicion of fragile X syndrome. / A Síndrome do X frágil é a principal causa de retardo mental hereditário com prevalência estimada de 1 em cada 3600 homens e 1 em cada 4000 a 6000 mulheres. Essa síndrome provoca comprometimento intelectual e social moderado a severo, associado com características como cabeça e orelhas grandes, rosto alongado e macroorquidismo. A causa mais frequente dessa desordem é a expansão do trinucleotídeo CGG localizado na região 5' UT do gene FMR-1, em Xq27.3. Esse loco corresponde a um sítio frágil que pode ser visualizado em cromossomos metafásicos sob condições seletivas de cultura. Neste estudo analisamos dois irmãos com indicativo clínico da Síndrome do X frágil. Linfócitos oriundos de sangue periférico foram avaliados após 96 h de cultura a 37°C em meio RPMI 1640 (suplementado com 5% de FBS, 20 mM de HEPES, 2 mM de glutamina e 1% M-PHA), LymphoGrow® e PB-MAX®. Para as culturas com antagonista, dois tubos de cada meio disponível foram preparados, e em cada um, 0,25 μg/mL de fluorodeoxiuridina (FUdR) ou 8 μg/mL de metotrexato (Mtx) foram adicionados 72 h após o início da cultura. As culturas foram colhidas após 95 h e 45 min utilizando-se métodos de rotina, após exposição a 0,1 μg/mL de colcemide durante 15 min. As lâminas foram coradas com Giemsa 5% para rastreamento de cromossomos fra(X), e a técnica de bandeamento G foi empregada para a confirmação do sítio frágil na região Xq27.3. Os linfócitos cultivados nos meios RPMI 1640, LymphoGrow e PB-MAX responderam de forma equivalente à adição dos antagonistas. Não houve diferença significativa pelo teste F a 5% de probabilidade entre o número médio de metáfases observado nos três meios em combinação com FUdR. Do mesmo modo, nos três meios o tratamento com metotrexato foi muito tóxico e resultou em número insuficiente de células analisáveis. Nessas culturas com Mtx não foram detectados cromossomos fra(X). Um total de 208 metáfases para irmão 1 e 205 para o irmão 2 foram analisadas, das quais 21% e 20%, respectivamente, foram positivas para X frágil. Esses dados estão de acordo com a estimativa de expressão em homens afetados que varia de 10-40% e corroboram com os de outros estudos que reportaram que homens da mesma família tendem a apresentar frequências similares de fra(X). Os procedimentos para a indução de sítio frágil e análise citogenética mostraram-se adequados para identificação de FRAXA nos irmãos analisados com indicativo clínico da Síndrome do X frágil.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1655871 bytes, checksum: 7d0213ba4f9cfcbc052053c9cd7fbc98 (MD5) Previous issue date: 2012-05-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The present study aimed to determine the rate of surgical site infection (SSI) in small animals surgery department at the Veterinary Hospital of the Federal University of Viçosa (UFV-VH) and associate this incidence to the following risk factors: surgery wound classification according to their potential contamination, antimicrobial prophylaxis, antimicrobial therapy and number of people present in the operating room during the procedure. For this, the residents were previously trained to standardize the diagnosis of SSI, as well as obtaining the data mentioned above. Animals from the surgical routine of the UFV-VH were included in the study, without changing it, from August 2, 2010 to July 01, 2011. During this period 401 animals were included, with 21 of them presenting ISC, determining an infection rate of 5.24%. After statistical analysis, an association was found between the incidence of SSI and a group of surgeries characterized by presenting contamination risk higher than 5%, which were the potentially contaminated, contaminated and infected surgeries, combined into a single group. Other risk factors evaluated showed no association with SSI, however, on the amount of people present in the surgery room, in absolute values, an SSI rate of 2.84 times higher was detected for surgeries in which the operating room had more than four people. Additionally, we aimed at using the same sample in the same period, to identify bacteria on the surgical wounds diagnosed with SSI in the UFV-VH, and trace its antimicrobial resistance profile. Thus, samples were collected from the 21 patients diagnosed with ISC, which were initially processed to obtain pure cultures. These 21 samples resulted in 61 isolates, which underwent biochemical tests for phenotypic characterization and subsequently by conventional PCR for their genotypic characterization. It was also determined the minimum inhibitory concentration for the most frequently antimicrobials used in the UFV-VH used as follows: amoxicillin/clavulanic acid, cephalothin, tetracycline, ampicillin and oxacillin for Gram-positive and amoxicillin/clavulanic acid, tetracycline, ampicillin and enrofloxacin for Gram negative. It was verified the occurrence of 12 genera of bacteria on the surgical wounds diagnosed with SSI in the UFV-VH, and 63,93% were characterized as Gram-negative and that among these, the genus Escherichia presented with greater frequency. Among the Gram-positive bacteria (36,07%) the genera Staphylococcus has been found in larger quantities. In this genus, resistance to oxacilin was determined in 76,47% of the samples and positive results for the coagulase test were verified. Finally, among all identified genera, greater resistance to ampicillin was detected, followed by tetracycline, cephalothin, enrofloxacin and amoxicillin/clavulanic acid. / O presente estudo teve como objetivo determinar a taxa de infecção do sítio cirúrgico (ISC) na Clínica Cirúrgica de Pequenos Animais do Hospital Veterinário da Universidade Federal de Viçosa (HVT-UFV) e associar essa incidência com os seguintes fatores de risco: classificação da ferida cirúrgica de acordo com seu potencial de contaminação, realização de profilaxia antimicrobiana, prescrição de terapia antimicrobiana e quantidade de pessoas presentes na sala de cirurgia no momento do procedimento. Para isso os médicos veterinários residentes passaram por treinamento prévio para padronizar o diagnóstico de ISC, assim como a obtenção dos dados acima citados. Foram utilizados os animais atendidos na rotina cirúrgica do HVT-UFV sem alterá-la, no período de 02 de agosto de 2010 a 01 julho de 2011. Neste período foram incluídos no estudo 401 animais, entre cães e gatos, dos quais 21 apresentaram ISC, determinando uma taxa de infecção de 5,24%. Após análise estatística dos dados, foi verificada associação entre incidência de ISC e cirurgias com risco de contaminação maior que 5%, sendo estas denominadas cirurgias potencialmente contaminadas, contaminadas e infectadas, reunidas em um único grupo. Os demais fatores de risco avaliados não apresentaram associação com a ocorrência de ISC, porém, em relação à quantidade de pessoas presentes na sala de cirurgia detectou-se, em valores absolutos, uma taxa de ISC 2,84 vezes maior na sala em que estavam presentes mais de quatro pessoas. Objetivou-se ainda com a utilização da mesma amostra e no mesmo período, identificar as bactérias presentes nas feridas cirúrgicas com diagnóstico de ISC no HVT-UFV, assim como traçar seu perfil de resistência aos antimicrobianos. Diante disso, foram coletadas amostras dos 21 pacientes com diagnóstico positivo de ISC, as quais foram processadas para obtenção de culturas puras. A partir dessas 21 amostras foram obtidos 61 isolados, os quais passaram por testes bioquímicos para sua caracterização fenotípica e posteriormente por sequenciamento genético para sua caracterização genotípica. Foi também determinado o perfil de resistência aos antimicrobianos utilizados na Clínica Cirúrgica de Pequenos Animais do HVT-UFV, os quais foram analisados da seguinte forma: amoxicilina/ácido clavulânico, cefalotina, tetraciclina, oxacilina e ampicilina para as bactérias Gram positivas e amoxicilina/ácido clavulânico, tetraciclina, ampicilina e enrofloxacino paras as Gram negativas. Após análise dos dados obtidos pode-se verificar a ocorrência de 12 gêneros de bactérias presentes nas feridas cirúrgicas diagnosticadas com ISC no HVT-UFV. Caracterizaram-se como Gram negativas 63,93% das bactérias identificadas, e dentre estas, o gênero Escherichia foi observado em maior número. Entre as bactérias caracterizadas como Gram positivas (36,07%), o gênero Staphylococcus foi verificado em maior quantidade. Neste gênero foi detectada resistência à oxacilina em 76,47% dos isolados e resultados positivos para o teste da coagulase. Por fim, dentre todos os antimicrobianos testados, a ampicilina foi o antimicrobiano que apresentou maior número de isolados resistentes, seguida pela tetraciclina, cefalotina, enrofloxacino e amoxicilina/ácido clavulânico.

The present research has the aim of analyzing the inter relations of the geomorphologic features and the morph dynamic processes in the evolution of the urban site from Garanhuns-PE. This way, supplying subsides for the implantations of public policies, which contemplate the implantation of a model of usage and sustainable occupation of soil. During the research, technologies of remote sensing and SIG were used, to create a referential geologic data bank which was supplied by matricidal data from INPE/DGI, INCRA and |Banco de Dados Geomorfométricos| from Brazil, SRTM archives from EMBRAPA (Project Brazil in Landscape) and vectorial information from CPRM and IBGE. What makes possible the interpretation of the space phenomena which are occurring in the studied perimeter and represent them through Thematic Letters and 3D Images. From the referred maps and 3D models, it was possible to make the correlations between the physical features of the geographic space and its action system. Making possible the identification and monitoring from the public departments of the main risk areas, to the human occupation of the landscape because of the susceptibility to the morph dynamic process. Among the areas, these are highlighted: Liberdade, Heliópolis, Novo Heliópolis, Parque Fênix, COHAB III, São José, Santo Antônio and Magano. Since their high rate of susceptibility to mass movements. / A presente pesquisa tem como finalidade realizar uma análise das inter-relações das feições geomorfológicas e dos processos morfodinâmicos na evolução do sítio urbano de Garanhuns-PE. Dessa forma, fornecer subsídios para implantação de políticas públicas, que contemplem a implantação de um modelo de uso e ocupação sustentável do solo. No transcorrer da pesquisa foram utilizadas as tecnologias do Sensoriamento Remoto e SIG, para confecção de um banco de dados georreferenciado, o qual foi alimentado com dados matriciais do INPE/DGI, INCRA e Banco de Dados Geomorfométricos do Brasil, arquivos SRTM da EMBRAPA (Projeto Brasil em Relevo) e informações vetoriais da CPRM e do IBGE. O que possibilitou a interpretação dos fenômenos espaciais que estão ocorrendo no perímetro de estudo e representa-los através de Cartas Temáticas e Imagens 3D. A partir dos referidos mapas e modelos 3D foi possível realizar as correlações entre as características físicas do espaço geográfico e seu sistema de ações. Tornando possível a identificação e o monitoramento pelos órgãos municipais das principais áreas de riscos, para ocupação antrópica da paisagem devido sua suscetibilidade aos processos morfodinâmicos. Dentre essas áreas destacaram-se os bairros: Liberdade, Heliópolis, Novo Heliópolis, Parque Fênix, COHAB III, São José, Santo Antônio e Magano. Devido seu alto índice de susceptibilidade a movimentos de massas.

Most intra-abdominal infections such as acute appendicitis require surgical intervention. The use of antimicrobials, however, is essential in the treatment complementation and reduction of surgical site infection (SSI). The present study aims to make a critical analysis of the use of antimicrobials use, anatomopathological stage and surgical site infection after appendectomy. It were analyzed the demographic data, antimicrobial scheme chosen, the beginning of antimicrobial, usage time and evolution as the SSI associated with the anatomopathological stage of resected appendices. 233 patients were evaluated between 14 years and 78 years with male predominance (135 / 57.94%) and in the third decade of life (72 / 30.90%). In 139 patients (59.65%) surgical time was up to two hours with a predominance of Phlegmonous Acute Appendicitis (91 / 39.05%) and Necrotizing Acute Appendicitis (88 / 37.76%). The antimicrobial scheme most used was a combination of Ampicillin/Sulbactam totalizing 127 (54.50%) patients. Most patients had the start of the antimicrobial scheme in anesthetic induction (212 /90.94%). Regarding the usage time of antimicrobials, the prevalence was of less than 24 hours of use (122 / 52.36%) and 16 (6.87%) presented SSI. Based on the anatomopathological classification on nonnecrotic appendices, 145 (62.23%) patients should have used a single antimicrobial dose or at maximum for 24 hours. Of patients with non-necrotic appendix, only 60 (41.37%) used one dose; 15 (10.34%) used 2 to 4 doses and 70 (48.29%) used more than four doses of antimicrobial. In 16 (6.87%) patients considered with normal appendix were used more than four doses of antimicrobials. In the analysis of the SIRI SSI in perspective, no patient presented with SIRI 0 SSI (4 / 5.79%) patients presented with an SIRI SSI (9 / 5.88%) patients had 2 SIRI SSI and (1 / 12.5) 3 SIRI SSI presented. Based on anatomopathological association (necrotic and non-necrotic) of resected appendices for clinical suspicion of acute appendicitis and the use of antimicrobials, we can conclude: there was unnecessary use of more than one dose of antimicrobials in patients with uncomplicated appendicitis. / A maioria das infecções intra-abdominais, como apendicite aguda, necessita de intervenção cirúrgica. O uso de antimicrobianos, entretanto, é fundamental na complementação do tratamento e redução de infecção do sítio cirúrgico (ISC). O presente estudo tem como objetivo fazer uma análise crítica entre o uso de antimicrobianos, o estádio anátomo-patológico e infecção do sítio cirúrgico após apendicectomia. Foram analisados os dados demográficos, esquema de antimicrobiano escolhido, início do antimicrobiano, tempo de uso e evolução quanto a ISC associada com o estádio anátomo-patológico dos apêndices ressecados. Foram avaliados 233 pacientes entre 14 anos e 78 anos, com predominância do sexo masculino (135 / 57,94%) e na terceira década de vida (72 / 30,90%). Em 139 pacientes (59,63%) o tempo cirúrgico foi de uma a duas horas, com predominância da Apendicite Aguda Flegmonosa (91 / 39,05%) e Apendicite Aguda Necrosante, (88 / 37,76%). O esquema antimicrobiano mais utilizado foi a associação de Ampicilina /Sulbactam, totalizando 127 (54,50%) pacientes. A maioria dos pacientes teve o início do esquema antimicrobiano à indução anestésica, (212 / 90,94%). Em relação ao tempo de uso do antimicrobiano, a prevalência foi de menos de 24 horas de uso, (122 / 52,36%) e 14 (6,01%) apresentaram ISC. Baseado na classificação anátomo-patológica em apêndices não-necrosados, 145 (62,24%) pacientes deveriam ter usado antimicrobiano em dose única ou no máximo por 24 horas. Dos pacientes com apêndice não-necrosados apenas 60 (41,37%) usaram uma dose; 15 (10,34%) usaram de 2 a 4 doses e 70 (48,29%) usaram mais de 4 doses de antimicrobianos. Em 16 (6,87%) pacientes considerados com o apêndice normal foram usadas mais de 4 doses de antimicrobianos. Na análise das ISC sob perspectiva do Índice de Risco de Infecção Cirúrgica (IRIC), nenhum paciente com IRIC 0 apresentou ISC; (4 /5,79%) dos pacientes com IRIC 1 apresentaram ISC;( 9 / 5,88%) dos pacientes IRIC 2 apresentaram ISC e (1/ 12,5%) IRIC 3 apresentaram ISC. Baseado na associação entre o anátomo-patológico (necrosados e não necrosados) dos apêndices ressecados por suspeita clínica de apendicite aguda e o uso de antimicrobianos, podemos concluir que: houve uso desnecessário de mais de uma dose de antimicrobianos nos pacientes com apendicite não complicada. / Mestre em Ciências da Saúde

As enzimas diidroorotato desidrogenases (DHODHs) são flavo-enzimas que catalisam a oxidação do diidroorotato em orotato na quarta etapa da biossíntese de novo de nucleotídeos de pirimidina. Durante a rápida proliferação celular em mamíferos, a via de salvação de pirimidinas é insuficiente para suprir deficiências na síntese de nucleotídeos. Além disso, certos parasitas não possuem a via de salvação e contam somente com a biossíntese de novo para a produção de nucleotídeos. Por esta razão, DHODH se tornou um excelente alvo na busca por inibidores que interrompam a síntese de nucleotídeos. As enzimas DHODHs de E. coli (EcDHODH) e de X. fastidiosa (XfDHODH) são membros da classe 2 das DHODHs e encontram-se associadas à membrana citoplasmática através de uma extensão em seu N-terminal, enquanto que DHODH de T. cruzi (TcDHODH), membro da classe 1 de DHODHs, é uma proteína citosólica. Neste trabalho, usamos uma combinação de metodologias de biologia molecular e bioquímica com técnicas espectroscópicas para obter informações estruturais e funcionais acerca da enzima DHODH. Assim, Ressonância Paramagnética Eletrônica (RPE) associada à marcação de spin sítio dirigida (SDSL) e simulação espectral foram empregadas para estudar a interação da EcDHODH com modelos de membrana. Mudanças na dinâmica estrutural das vesículas induzidas pela enzima foram monitoradas via marcadores de spin localizados em diferentes posições ao longo da cadeia acil de fosfolipídios. Além disso, técnicas de DNA recombinante e mutações sítio dirigidas foram utilizadas para produzir mutantes de EcDHODH no qual um sondas paramagnéticas foram seletivamente ligadas em resíduos localizados na extensão N-terminal da proteína para experimentos subseqüentes de RPE-SDSL. Esses são os primeiros experimentos de marcação de spin sítio dirigida realizados no Brasil e com os quais monitoramos a dinâmica experimentada na região do N-terminal. Além disso, várias tentativas foram feitas para se expressar e purificar a enzima XfDHODH e a estabilidade estrutural da enzima TcDHODH na presença de um de seus inibidores naturais, o orotato, foi monitorada através de experimentos de Dicroísmo Circular (CD). / Dihydroorotate dehydrogenases (DHODHs) are flavin-containing enzymes which catalyse the conversion of (S)-dihydroorotate to orotate, in the fourth step of the de novo biosynthesis of pyrimidine nucleotides. In rapidly proliferating mammalian cells, pyrimidine salvage pathway is insufficient to overcome deficiencies for nucleotide synthesis. Moreover certain parasites lack salvage enzymes, relying solely on the de novo pathway to produce nucleotides. Thus, DHODH has turned out an excellent target to the development of inhibitors that block nucleotide biosynthesis. E. coli DHODH (EcDHODH) and X. fastidiosa DHODH (XfDHODH) are class 2 DHODHs found associated to cytosolic membranes through an N-terminal extension, whereas T. cruzi DHODH (TcDHODH) is a class 1 DHODH localizated in the cytoplasm. In the present work, we used a combination of molecular biology and biochemical methodologies with spectroscopic techniques to obtain structural and functional information on DHODH. On one hand, Electronic Paramagnetic Resonance (EPR) associated with Site-directed Spin Labeling (SDSL) and spectral simulation were employed to study the interaction of EcDHODH with vesicles. Changes in vesicle dynamic structure induced by the enzyme were monitored via spin labels located at different positions along the phospholipid acyl chain and via spin labels located at enzyme specific positions. On the other hand, DNA techniques and site-directed mutagenesis were used to produce mutants of EcDHODH where a nitroxide spin probe was selectively attached to some residues located at the protein N-terminal extension for subsequent EPR-SDSL experiments. These are the first site-directed spin labeling experiments performed in Brazil and the spectra allowed us to monitor dynamics experienced by those residues at the EcDHODH N-terminal domain. Furthermore, molecular biology and biochemical assays were employed with the objective of expressing and purifying XfDHODH and Circular Dichroism (CD) was utilized to probe the structural stability of TcDHODH in the presence of its natural inhibitor (orotate).

O trabalho ora apresentado foi concebido como tendo dois objetivos. O primeiro, mais geral, foi implementar uma nova metodologia para o estudo de mudanças conformacionais em proteínas, ou seja, de sua dinâmica estrutural. A técnica de marcação de spin sítio dirigida aliada à ressonância paramagnética eletrônica (SDSL-RPE) são os pilares desse novo método que faz, agora, parte do conjunto de técnicas disponíveis no Grupo de Biofísica Molecular Sérgio Mascarenhas do Instituto de Física de São Carlos (USP). O segundo objetivo, mais específico, representou o caminho efetivamente tomado para que se alcançasse o objetivo geral. Para isso, foi proposto o estudo da correlação estrutura e função de dois sistemas biológicos muito interessantes. O primeiro deles envolveu o estudo do movimento das hélices que compõem a estrutura da proteína ligante de cálcio S100A12 humana (HS100A12) induzido pelos íons cálcio e zinco. Sabendo que a proteína S100A12 humana além de ligar íons Ca+2, apresenta afinidade por outros metais divalentes, como os íons Zn+2 e Cu+2, e que a formação de diferentes oligômeros da proteína é governada pela concentração dos íons Ca+2 e Zn+2, realizamos estudos espectroscópicos utilizando a técnica de dicroísmo circular a fim de investigarmos a estabilidade térmica da proteína HS100A12 na presença e ausência dos íons cálcio e zinco. Mudanças conformacionais na estrutura da HS100A12 foram monitoradas através da construção de uma série de mutantes (simples e duplos) em que resíduos nas hélices B, C e D foram trocados por cisteínas, subsequentemente marcadas com a sonda magnética MTSSL e submetidas às análises de SDSL-RPE. Estas consistiram na medida do espectro de RPE dos vários mutantes em temperatura ambiente para estudarmos os efeitos da presença dos íons sobre a dinâmica experimentada pela sonda nas diversas posições. Além disso, efetuamos medidas de distância entre duas sondas seletivamente inseridas na estrutura protéica, procurando assim complementar o entendimento acerca do efeito da presença dos íons sobre a proteína. Por fim, devido ao fato da proteína HS100A12 estar envolvida em alguns eventos de sinalização celular e interação com o receptor para produtos de glicosilação (RAGE), decidimos também, estudar a interação da proteína com modelos de biomembranas, utilizando monocamadas de Langmuir. O outro problema de interesse utilizou a lizosima do fago T4, uma proteína padrão, da qual uma variedade de mutantes é produzida rotineiramente a fim de obtermos mais detalhes a respeito da sua correlação estrutura e função e tornar mais sólido o entendimento da técnica SDSL. Inicialmente, realizamos um estudo com a suposta criação de uma cavidade no \"core\" hidrofóbico da porção C-terminal da enzima, quando mutamos a Leu 133 por Ala e/ou Gly, ou seja, quando trocamos um resíduo grande por um de menor volume, pois se acredita que a proteína sofra um reajuste estrutural com o intuito de preencher o espaço vazio criado por essa substituição. Para isso, propusemos estudar por SDSL o movimento da α-hélice H inserindo o marcador de spin na posição vizinha ao resíduo mutado. Adicionalmente, realizamos um experimento de \"transmutação\" com a enzima T4L, a fim de investigar a natureza das contribuições para os diferentes modos dinâmicos experimentados pelo marcador de spin quando introduzido em sítios topologicamente semelhantes. / The work presented here was conceived with two main objectives. The first one, more general, involved the implementation of a new methodology for the study of conformational changes in proteins, i.e., its structural dynamics. The technique of Site-directed Spin Labeling combined with Electronic Paramagnetic Resonance (SDSL-EPR) are the pillars of this new method, which is now part of the set of techniques available at the Grupo de Biofísica Molecular Sérgio Mascarenhas, Instituto de Física de São Carlos (USP). The second objective, more specific, represented the path actually taken to achieve the overall goal. Therefore, it was proposed to study the structure-function correlation in two interesting biological systems. The first involved the study of the movement of the helices that form the structure of the human calcium binding protein S100A12 (HS100A12) induced by calcium and zinc ions. Knowing that, besides Ca+2, human S100A12 has also affinity for other divalent metals, such as Zn+2 and Cu+2 ions, and that the formation of different protein oligomers is governed by the concentration of Ca+2 and Zn+2, we performed spectroscopic studies using circular dichroism (CD) to investigate the thermal stability of protein HS100A12 in the presence and absence of calcium and zinc. Conformational changes in the structure of HS100A12 were monitored by producing a series of mutants (singles and doubles) in which residues in helices B, C and D were replaced by cysteine and subsequently labeled with a magnetic probe MTSSL and then analyzed via SDSL-EPR. The latter consisted of the EPR spectra measurement of many mutants at room temperature to study the effects of the presence of ions on the dynamics experienced by the probe in different positions. In addition, we performed measurements of the distance between two probes inserted in the protein structure, thereby, seeking to improve the understanding of the effect of the ions presence on the protein. Finally, due to the fact that HS100A12 is involved in some events of cell signaling and interaction with the Receptor for Advanced Glycation End Products (RAGE), we also decided to study the interaction of protein with models of biomembranes using Langmuir monolayers. In the other problem of interest, we used a variety of mutants of the enzyme T4 lysozyme, a protein standard, in order to obtain more details about its structure-function correlation and make more solid the understanding of SDSL technique. Initially, we conducted a study about the alleged creation of a cavity in the hydrophobic C-terminal portion of the enzyme, when we replaced the Leu 133 by Ala and/or Gly, or when we changed a large residue for a smaller one, because it is believed that the protein undergoes a structural adjustment in order to fill the gap created by this substitution. For this, we studied by SDSL the α-helix H motion, inserting the spin label in a neighbor position of the mutated residue. Additionally, we performed an experiment of \"transmutation\" with the enzyme T4L in order to investigate the nature of contributions for different dynamic modes experienced by the spin label when it is introduced in topologically similar sites.