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ContribuiÃÃo ao conhecimento quÃmico de plantas do Nordeste do Brasil: Cordia piauhiensis Fresen e Triphsia trifolia (Burm. f.) P.Wils / Contribution to Northeast the chemical Knowledge of plants of Brazil: Cordia piauhiensis Fresen e Triphasia trifolia (Burm. f.) P. WilsRenata Paiva dos Santos 04 September 2007 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A composiÃÃo quÃmica do Ãleo essencial das folhas e frutos de Triphasia trifolia
(Rutaceae) foi analisada por CG- DIC e CG-MS. Os constituintes majoritÃrios identificados para os Ãleos obtidos das folhas foram sabineno (39,2 e 33,8%) e mirceno (21,9 e 33,6%), enquanto os compostos majoritÃrios para o Ãleo dos frutos foram sabineno (35,5 e 22,8%), -pineno (21,2 e 29,9%) e -terpineno (18,4 e 12,9%). Os Ãleos das folhas apresentaram moderada atividade antimicrobiana. O decocto dos frutos tambÃm foi investigado levando ao isolamento das cumarinas isopimpinelina, (R)-biakangelicina e (S)-mexoticina. Das folhas foram isoladas as cumarinas (R)-biakangelicina, aurapteno, (S)-mexoticina, isosibiricina, isomerazina e coumurraina e, o flavonÃide vitexina. Todas cumarinas em CCD, mostraram atividade frente à enzima acetilcolinesterase. De Cordia piauhiensis Fresen (Boraginaceae), cinco saponinas triterpÃnicas foram isoladas. Suas estruturas foram caracterizadas como Ãcido 3-O-[-L-ramnopiranosil- (12)--D-glicopiranosil] pomÃlico, pomolato de 3-O-[-L-ramnopiranosil-(12)--Dglicopiranosil] 28-O--D-glicopiranosil-(16)--D-glicopiranosila, ursolato de 3-O-[- L-ramnopiranosil-(12)--D-glicopiranosil] 28-O--D-xilopiranosil-(12)- -Dglicopiranosil-( 16)--D-glicopiranosila, pomolato de 3-O-[-L-ramnopiranosil-(12)- -D-glicopiranosil] 28-O--D-glicopiranosila e oleanolato de 3-O-[-L-ramnopiranosil- (12)--D-glicopiranosil] 28-O--D-glicopiranosil-(16)--D-glicopiranosila. As estruturas foram estabelecidas usando uma combinaÃÃo das tÃcnicas de RMN 1D e 2D (1H- 1H-COSY, HMQC, HMBC, TOCSY e NOESY), ESIMS, alÃm de evidÃncias quÃmicas. / The chemical composition of the essential oils from leaves and fruits of Triphasia trifolia were analyzed by GC-FID and GC-MS. The major constituents identified for oils obtained from leaves were sabinene (39.2 and 33.8%) and myrcene (21.9 and 33.6%), while the prevalent compounds detected in fruit oils were sabinene (35.5 and 22.8%), -pinene (21.2 and 29.9) and -terpinene (18.4 and 12.9%). The leaf oils showed moderate antimicrobial activity. The fruit decoction was also investigated leading to the isolation of the coumarins isopimpinelin, (R)-byakangelicin and (S)-mexoticin. From the leaves the coumarins (R)-byakangelicin, aurapten, (S)-mexoticin, isosibiricin, isomerazin and coumurrayin and, the flavonoid vitexina were isolated. All coumarins showed cholinesterase inhibition on TLC test. From Cordia piauhiensis Fresen (Boraginaceae), five triterpenoid saponins were isolated. Their structures were characterized as 3-O--L-rhamnopyranosyl-(1_2)--Dglucopyranosyl pomolic acid, 3-O-[-L-rhamnopyranosyl-(12)--D-glucopyranosyl] pomolic acid 28-O-[-D-glucopyanosyl-(16)--D-glucopyranosyl] ester, 3-O-[-Lrhamnopyranosyl-( 12)--D-glucopyranosyl] ursolic acid 28-O-[-D-xilopyranosyl- (1_2)--D-glucopyanosyl-(16)--D-glucopyranosyl] ester, 3-O--L-rhamnopyranosyl- (12)--D-glucopyranosyl pomolic acid 28-O--D-glucopyranosyl ester and 3-O--Lrhamnopyranosyl-( 12)--D-glucopyranosyl oleanolic acid 28-O--D-glucopyranosyl- (16)--D-glucopyranosyl ester. The structures were established using a combination of 1D and 2D (1H-1H-COSY, HMQC, HMBC, TOCSY and NOESY) NMR techniques, ESIMS and chemical evidences.
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Produtividade e respostas fisiológicas de bovinos confinados suplementados com extrato de Yucca Schidigera durante a fase de entrada no confinamentoSousa, Osvaldo Alex de January 2019 (has links)
Orientador: Reinaldo Fernandes Cooke / Resumo: Esse experimento avaliou a suplementação de um ingrediente contendo saponina, manufaturado a partir do extrato purificado de Yucca schidigera [Micro-Aid (MA); DPI Global; Porterville CA], no desempenho, saúde e respostas fisiológicas em bezerros recém chegados em confinamento. Um total de 105 bezerros Angus x Hereford recém desmamados (75 machos e 30 femeas), provenientes de oito fazendas de cria, foram adquiridos em um leilão comercial no dia -2 e transportados (800 km; 12 h) até o local do experimento. Imediatamente após a chegada no dia -1 foi coletado o peso vazio, e os animais foram agrupados e alocados com acesso a vontade ao feno, suplemento mineral e água. No dia 0, os animais foram ranqueados por sexo, local de origem e peso vazio e alocados em uma das 21 baias (5 animais/baia; contendo uma ou duas fêmeas por baia). As baias receberam uma dieta completa (TMR) e um entre os três tratamentos (matéria natural): (1) 1 g /animal/dia de MA (M1; n=7), (2) 2 g /animal/dia de MA (M2; n=7), ou (3) sem suplementação de MA (CON; n=7). Os animais receberam a dieta completa calculada para conter 15% de sobra (matéria orgânica), e os tratamentos foram dispostos por cima da dieta durante o dia 0 ao 59. Os animais foram monitorados para sintomas de doença respiratória bovina (DRB) e coletou o consumo diário de cada baia. Os animais foram vacinados contra DRB no dia 0 e 21. O peso vazio final foi coletado no dia 60, e amostras de sangue foram coletadas nos dias 0, 2, 6, 10, 14, 21, 28... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre
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\"Estudo dos extratos dos frutos de Sapindus saponaria enriquecidos em saponinas e outros glicosídeos e sua aplicação em eletroforese capilar\" / \"Study of Sapindus saponaria fruit?s extracts rich on saponins and other glycosides and their application in capillary electrophoresis\"Guterres, Sheila Barreto 20 January 2006 (has links)
Os frutos de S. saponaria, espécie bastante abundante em São Carlos e outras regiões do Brasil são ricos em glicosídeos anfifílicos, ou seja, compostos por uma parte polar e outra apolar. Devido a esta peculiaridade tendem a formar espuma mostrando propriedades químicas semelhantes às dos tensoativos. Alguns destes glicosídeos pertencem à classe das saponinas e são constituídos por uma aglicona de estrutura carbônica a qual está ligada a uma ou duas cadeias de açúcar. O interesse pelas propriedades tensoativas deste glicosídeos motivou o estudo destas substâncias para uso em eletroforese capilar. Os frutos foram extraídos com metanol e fracionados em coluna cromatográfica preparativa utilizando sephadex LH-20 como fase estacionária. Após a eluição, as frações foram analisadas por espectrometria de massas e estudadas por eletroforese capilar. A eletroforese capilar de zona mostrou-se uma técnica viável para o estudo das frações obtidas. Embora um grau de pureza elevado não tenha sido alcançado, a fração B foi utilizada como aditivo para tampão em cromatografia eletrocinética micelar (MEKC) e uma interação diferenciada foi observada do nitrobenzeno com o tampão aditivado em relação ao tampão com SDS puro. / Sapindus saponaria is a very abundant species in São Carlos and others regions of Brazil. Fruits of S. saponaria have a high content of glycosides which possess well-defined regions of hydrophobic and hydrophilic feature denominated amphiphilic molecule. Thus, this can form a foam showing chemical proprieties equals to surfactants. Some glycosides belong to class of saponins and are composed of carbonic structure designates aglycone, which is linked in one or two sugar chains. The purpose of the present study was the use of glycosides due to their surfactants properties in further applications of capillary electrophoresis. The extraction of crude fruits was carried out with methanol and this extract was fractionated in Sephadex LH-20. The fractions were analyzed for mass spectrometry and studied in capillary electrophoresis (CE). This is a feasible technique for the study of fractions obtained. Although a high degree of purity was not reached, the fraction B were used as additive for the electrolyte background in MEKC. The nitrobenzene showed different interaction with micellar system in the electrolyte background with fraction B.
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Contribuição ao conhecimento químico de plantas do Nordeste do Brasil: Cordia piauhiensis Fresen e Triphsia trifolia (Burm. f.) P. Wils / Contribution to Northeast the chemical Knowledge of plants of Brazil: Cordia piauhiensis Fresen e Triphasia trifolia (Burm. f.) P. WilsSantos, Renata Paiva dos January 2007 (has links)
SANTOS, R. P.; PESSOA, O. D. L. Contribuição ao conhecimento químico de plantas do Nordeste do Brasil: Cordia piauhiensis Fresen e Triphsia trifolia (Burm. f.) P. Wils. 2007. 219 f. Tese (Doutorado em Química Orgânica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2007. / Submitted by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2014-10-10T20:13:31Z
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Previous issue date: 2007 / The chemical composition of the essential oils from leaves and fruits of Triphasia trifolia were analyzed by GC-FID and GC-MS. The major constituents identified for oils obtained from leaves were sabinene (39.2 and 33.8%) and myrcene (21.9 and 33.6%), while the prevalent compounds detected in fruit oils were sabinene (35.5 and 22.8%), -pinene (21.2 and 29.9) and -terpinene (18.4 and 12.9%). The leaf oils showed moderate antimicrobial activity. The fruit decoction was also investigated leading to the isolation of the coumarins isopimpinelin, (R)-byakangelicin and (S)-mexoticin. From the leaves the coumarins (R)-byakangelicin, aurapten, (S)-mexoticin, isosibiricin, isomerazin and coumurrayin and, the flavonoid vitexina were isolated. All coumarins showed cholinesterase inhibition on TLC test. From Cordia piauhiensis Fresen (Boraginaceae), five triterpenoid saponins were isolated. Their structures were characterized as 3-O--L-rhamnopyranosyl-(1_2)--Dglucopyranosyl pomolic acid, 3-O-[-L-rhamnopyranosyl-(12)--D-glucopyranosyl] pomolic acid 28-O-[-D-glucopyanosyl-(16)--D-glucopyranosyl] ester, 3-O-[-Lrhamnopyranosyl-( 12)--D-glucopyranosyl] ursolic acid 28-O-[-D-xilopyranosyl- (1_2)--D-glucopyanosyl-(16)--D-glucopyranosyl] ester, 3-O--L-rhamnopyranosyl- (12)--D-glucopyranosyl pomolic acid 28-O--D-glucopyranosyl ester and 3-O--Lrhamnopyranosyl-( 12)--D-glucopyranosyl oleanolic acid 28-O--D-glucopyranosyl- (16)--D-glucopyranosyl ester. The structures were established using a combination of 1D and 2D (1H-1H-COSY, HMQC, HMBC, TOCSY and NOESY) NMR techniques, ESIMS and chemical evidences. / A composição química do óleo essencial das folhas e frutos de Triphasia trifolia (Rutaceae) foi analisada por CG- DIC e CG-MS. Os constituintes majoritários identificados para os óleos obtidos das folhas foram sabineno (39,2 e 33,8%) e mirceno (21,9 e 33,6%), enquanto os compostos majoritários para o óleo dos frutos foram sabineno (35,5 e 22,8%), -pineno (21,2 e 29,9%) e -terpineno (18,4 e 12,9%). Os óleos das folhas apresentaram moderada atividade antimicrobiana. O decocto dos frutos também foi investigado levando ao isolamento das cumarinas isopimpinelina, (R)-biakangelicina e (S)-mexoticina. Das folhas foram isoladas as cumarinas (R)-biakangelicina, aurapteno, (S)-mexoticina, isosibiricina, isomerazina e coumurraina e, o flavonóide vitexina. Todas cumarinas em CCD, mostraram atividade frente à enzima acetilcolinesterase. De Cordia piauhiensis Fresen (Boraginaceae), cinco saponinas triterpênicas foram isoladas. Suas estruturas foram caracterizadas como ácido 3-O-[-L-ramnopiranosil- (12)--D-glicopiranosil] pomólico, pomolato de 3-O-[-L-ramnopiranosil-(12)--Dglicopiranosil] 28-O--D-glicopiranosil-(16)--D-glicopiranosila, ursolato de 3-O-[- L-ramnopiranosil-(12)--D-glicopiranosil] 28-O--D-xilopiranosil-(12)- -Dglicopiranosil-( 16)--D-glicopiranosila, pomolato de 3-O-[-L-ramnopiranosil-(12)- -D-glicopiranosil] 28-O--D-glicopiranosila e oleanolato de 3-O-[-L-ramnopiranosil- (12)--D-glicopiranosil] 28-O--D-glicopiranosil-(16)--D-glicopiranosila. As estruturas foram estabelecidas usando uma combinação das técnicas de RMN 1D e 2D (1H- 1H-COSY, HMQC, HMBC, TOCSY e NOESY), ESIMS, além de evidências químicas.
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Saponinas triterpênicas:biossíntese e atividade biológicaCosta, Fernanda de January 2014 (has links)
Saponinas triterpênicas incluem uma ampla variedade de moléculas com diversas aplicações farmacológicas. As saponinas das folhas de Quillaja brasiliensis, espécie nativa do Sul do Brasil, são estrutural e funcionalmente semelhantes às encontradas nas cascas da espécie chilena Quillaja saponaria, as quais são utilizadas atualmente como adjuvantes em formulações comerciais de vacinas. O perfil de acúmulo da fração imunoadjuvante de saponinas triterpênicas de Q. brasiliensis (QB-90) foi avaliado em resposta a diferentes fatores de estresse. O conteúdo de QB-90 em discos foliares aumentou significativamente com a aplicação de diferentes agentes de estresse osmótico. Também pôde ser observado aumento nos teores de saponinas pela exposição de discos foliares a ácido salicílico, ácido jasmônico, ultrassom e luz ultravioleta C. Experimentos com plântulas indicaram um aumento significativo nos teores de QB-90 com o aumento moderado de irradiância luminosa e pela aplicação de dano mecânico nas folhas. Os resultados obtidos apoiam o papel de defesa induzida que estes metabólitos apresentam in planta. Com o objetivo de avançar os estudos de atividade adjuvante de Q. brasiliensis e ampliar a extensão de antígenos testados, uma vacina contra poliovírus foi avaliada em camundongos. Resultados demonstraram que as formulações de vacinas contendo saponinas da espécie brasileira aumentaram níveis de anticorpos específicos IgG, IgG1 e IgG2a, sugerindo um estímulo de ambos tipos de resposta imune (Th1 e Th2). A resposta celular foi confirmada por ensaios de DTH e pela avaliação dos níveis de mRNA das citocinas IL-2 e IFN- em esplenócitos murinos. A resposta imune de mucosas foi demonstrada pelos aumentos nos níveis de IgA em bile, fezes e lavados vaginais. O segundo objeto de estudo desta Tese é a espécie Centella asiatica (L.) Urban, que também apresenta saponinas triterpênicas bioativas em suas partes aéreas. Uma enzima responsável pela glicosilação de ácido asiático e ácido madecássico foi parcialmente purificada. Usando técnicas de proteômica e dados de sequências de cDNA, a sequência completa do clone que codifica uma glicosiltransferase foi obtida. O produto gênico recombinante, UGT73AD1, foi funcionalmente expresso em Escherichia coli, purificado por cromatografia de afinidade por metal imobilizado e funcionalmente caracterizado. UGT73AD1 foi identificada como sendo uma glicosiltransferase triterpênica de ácidos carboxílicos, provavelmente envolvida na biossíntese de monodesmosídeos da espécie. / Triterpene saponins include a large variety of molecules that find several applications in pharmacology. The saponins from leaves of Quillaja brasiliensis, a native species from Southern Brazil, show structural and functional similarities to those of Quillaja saponaria barks, which are currently used as adjuvants in vaccine formulations. The accumulation patterns of an immunoadjuvant fraction of leaf triterpene saponins (QB-90) in response to stress factors were examined. The content of QB-90 in leaf disks was significantly increased by application of different osmotic stress agents. Higher yields of bioactive saponins were also observed upon exposure to salicylic acid, jasmonic acid, ultrasound and UV-C light. Experiments with shoots indicated a significant increase in QB-90 yields with moderate increases in white light irradiance and by mechanical damage applied to leaves. These results support a general induced defense role for these metabolites in planta. Aiming at advancing the studies of Q. brasiliensis adjuvant activity and amplifying the range of antigens tested, an inactivated virus-based vaccine against poliovirus was evaluated in mice. Results demonstrated that saponin formulations were able to enhance poliovirus- specific total IgG, IgG1 and IgG2a, suggesting stimulation of both Th1 and Th2 immune responses. Cellular response stimulation was confirmed by DTH assays and by evaluating the enhancement of IL-2 and IFN-γ cytokine mRNA expression in mice splenocytes. Mucosal immune responses demonstrated that the QB-90-adjuvanted vaccine enhanced IgA titers in bile, feces and vaginal washings. Centella asiatica (L.) Urban, a species accumulating triterpene bioactive saponins in its shoots, was also subject of study in this Thesis. An enzyme capable of glucosylating asiatic and madecassic acids was partially purified. Using proteomic methods and cDNA sequence data, a full-length cDNA clone encoding the glucosyltransferase was obtained. The recombinant gene product, UGT73AD1, was functionally expressed in Escherichia coli, purified by immobilized metal-affinity chromatography and functionally characterized. UGT73AD1 was identified as a triterpene carboxylic acid glucosyltransferase, likely involved in monodesmoside biosynthesis in C. asiatica.
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Contribuição ao estudo do metabolismo micromolecular de Xylaria sp., um fungo endofítico isolado de Sapindus saponaria / Study of the metabolism of Xylaria sp., na endophyte fungus isolated from the fruits of Sapindus saponariaSantos, Luiz Fernando Arruda 15 December 2006 (has links)
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Previous issue date: 2006-12-15 / Universidade Federal de Sao Carlos / This work reports the study of a surprising plant microorganism relationship, involving the plant Sapindus saponaria, which is rich in antigungal saponins, and an endophyte fungus isolated from the pericarpe of the fruits collected in the host plant, and identified as Xylaria sp. The main objective of this work was to understand the survival mechanism of this fungus in such inhospitable ambient. It was found that this fungus biotransforms the structure of the saponins present in S. saponaria, making it less toxic, allowing the fungus to survive in the plant tissue. The reaction involved in this survival mechanism was a hidroxilation at ring C of the aglicone skeleton of saponins present in S. saponaria. This study also had as objective the stablishment of a fast method for the isolation and identification of saponins and ASOG (Acyclic Sesquiterpene Oligoglycosides) present in the plant s fruits. For the isolation of these compounds, the Sephadex® LH-20 column showed to be very efficient and the mass spectrometry technique (ESI-MS) was used as a rapid method of identification of this substances. The Xylaria sp. fungus was cultivated in synthetic mediums for the isolation of secondary metabolites. The microorganism showed a great potential for the production of several compounds, especially the isocoumarins. The analytical tools used to monitor all the experiments reported here comprises chromatographic and spectrometric techniques as HPLC, GC, open column chromatography, MS and MS/MS, 1D NMR and 2D NMR. Mechanisms of fragmentation were tentativelly suggested for all compounds studied by mass spectrometry. / Esse trabalho relata o estudo de uma surpreendente relação planta-microrganismo envolvendo a planta Sapindus saponaria, uma espécie extremamente rica em saponinas, em concentrações elevadas, as quais são compostos que possuem ação antifúngica bastante acentuada e, e um fungo do gênero Xylaria. O trabalho em questão teve por objetivo compreender o mecanismo de sobrevivência deste fungo em um ambiente tão inóspito. A resposta encontrada para esta questão foi que o fungo realiza uma biotransformação na estrutura das saponinas presentes em S. saponaria, possibilitando assim a sobrevivência deste nos tecidos da planta. Trata-se de uma reação de hidroxilação localizada no esqueleto triterpênico das saponinas presentes em S. saponaria. Outro objetivo do estudo foi encontrar um método rápido para o isolamento e identificação de saponinas e OGSA (Oligoglicosídeos Sesquiterpênicos Acíclicos) presentes nos frutos da planta. Para o isolamento destes compostos a fase estacionária Sephadex® LH-20 apresentou grande eficiência e a técnica de espectrometria de massas (MS) foi utilizada como um método rápido para identificação destas substâncias. O fungo Xylaria sp. foi cultivado em meios sintéticos para isolamento de metabólitos secundários. O microrganismo apresentou grande potencial para produção de diversos compostos, dando destaque para a classe das isocumarinas. Para realização deste trabalho foram utilizadas técnicas cromatográficas e espectrométricas como HPLC, GC, cromatografia em coluna, MS e MS/MS, 1D NMR e 2D NMR. Foram realizadas propostas de fragmentação para todos os compostos estudados por espectrometria de massas.
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\"Estudo dos extratos dos frutos de Sapindus saponaria enriquecidos em saponinas e outros glicosídeos e sua aplicação em eletroforese capilar\" / \"Study of Sapindus saponaria fruit?s extracts rich on saponins and other glycosides and their application in capillary electrophoresis\"Sheila Barreto Guterres 20 January 2006 (has links)
Os frutos de S. saponaria, espécie bastante abundante em São Carlos e outras regiões do Brasil são ricos em glicosídeos anfifílicos, ou seja, compostos por uma parte polar e outra apolar. Devido a esta peculiaridade tendem a formar espuma mostrando propriedades químicas semelhantes às dos tensoativos. Alguns destes glicosídeos pertencem à classe das saponinas e são constituídos por uma aglicona de estrutura carbônica a qual está ligada a uma ou duas cadeias de açúcar. O interesse pelas propriedades tensoativas deste glicosídeos motivou o estudo destas substâncias para uso em eletroforese capilar. Os frutos foram extraídos com metanol e fracionados em coluna cromatográfica preparativa utilizando sephadex LH-20 como fase estacionária. Após a eluição, as frações foram analisadas por espectrometria de massas e estudadas por eletroforese capilar. A eletroforese capilar de zona mostrou-se uma técnica viável para o estudo das frações obtidas. Embora um grau de pureza elevado não tenha sido alcançado, a fração B foi utilizada como aditivo para tampão em cromatografia eletrocinética micelar (MEKC) e uma interação diferenciada foi observada do nitrobenzeno com o tampão aditivado em relação ao tampão com SDS puro. / Sapindus saponaria is a very abundant species in São Carlos and others regions of Brazil. Fruits of S. saponaria have a high content of glycosides which possess well-defined regions of hydrophobic and hydrophilic feature denominated amphiphilic molecule. Thus, this can form a foam showing chemical proprieties equals to surfactants. Some glycosides belong to class of saponins and are composed of carbonic structure designates aglycone, which is linked in one or two sugar chains. The purpose of the present study was the use of glycosides due to their surfactants properties in further applications of capillary electrophoresis. The extraction of crude fruits was carried out with methanol and this extract was fractionated in Sephadex LH-20. The fractions were analyzed for mass spectrometry and studied in capillary electrophoresis (CE). This is a feasible technique for the study of fractions obtained. Although a high degree of purity was not reached, the fraction B were used as additive for the electrolyte background in MEKC. The nitrobenzene showed different interaction with micellar system in the electrolyte background with fraction B.
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Fungos endofíticos associados à Passiflora incarnata e avaliação de seu potencial biotecnológico / Endophytic fungi associated with Passiflora incarnata evaluation of its biotechnological potentialSilva, Matheus Henrique Reis da [UNESP] 13 March 2017 (has links)
Submitted by MATHEUS HENRIQUE REIS DA SILVA null (matheush.reis@hotmail.com) on 2017-07-09T02:47:58Z
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Incluir o número do processo de financiamento nos agradecimentos da dissertação/tese.
Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto.
Agradecemos a compreensão. on 2017-07-13T19:22:36Z (GMT) / Submitted by MATHEUS HENRIQUE REIS DA SILVA null (matheush.reis@hotmail.com) on 2017-07-21T15:25:56Z
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Dissertação_publicação.pdf: 3294602 bytes, checksum: 0458f3a3b432485c88a1b6dd0524aed5 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-07-21T17:19:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2017-03-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Passiflora incarnata encontra-se entre as plantas medicinais mais estudadas no âmbito farmacológico, cujas propriedades medicinais são atribuídas principalmente aos seus fitoconstituintes, tais como compostos fenólicos, alcalóides e flavonoides. Já foi constatado que os fungos endofíticos, aqueles vivem no interior de plantas, compartilhando com as mesmas uma interação simbiótica. Estes endófitos estão presentes em todas as plantas e muitas vezes partilham dos mesmos metabólitos que sua hospedeira. Devido ao seu enorme potencial de exploração, os fungos endofíticos são considerados um dos mais importantes recursos para a obtenção de novos agentes terapêuticos, pois um grande número de metabólitos estruturalmente novos e biologicamente ativos tem sido relatado para esses organismos. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi isolar fungos endofíticos presentes em folhas de P. incarnata e avaliar seu potencial biotecnológico, quanto à presença de compostos fenólicos, flavonoides e atividade antioxidante. Das 120 folhas analisadas, um total de 315 fungos endofíticos foi obtido; foi possível identificar 16 táxons distintos, dentre eles Aspergillus spp., Fusarium spp., Penicillium spp., Curvularia spp., Phoma spp., Neurospora spp., Trichoderma spp e representantes dos Mucoromycotina. A maioria dos isolados não apresentou esporulação. Os 60 endófitos utilizados nos ensaios produziram ao menos um composto fitoquímico, 60% (n=36) foram positivos para saponinas, 76% (n=46) para flavonoides, 93% (n=56) para compostos fenólicos, apenas 3% (n=2) para taninos, e nenhum fungo apresentou alcalóides no filtrado. O teor de flavonoides e fenóis totais do extrato de n-Butanol, determinado espectrofotometricamente revelou que a maioria dos fungos analisados foram bons produtores destes compostos, com destaque para os isolados Trichoderma sp./LMA 1684 e Aspergillus sp. 1/LMA 1720, com 213,69 mg.g-1 e 187,3 mg.g-1 , respectivamente, para flavonoides totais expressos em rutina, enquanto para fenóis totais os isolados LMA 1713 e LMA 1824, ambos fungos não esporulantes, apresentaram os teores 184,94 mg.g-1 e 187,05 mg.g-1 , respectivamente. Todos os endófitos apresentaram atividade antioxidante frente ao radical livre DPPH. O extrato butanólico do fungo Aspergillus versicolor/LMA 1705 (94%) foi maior que o padrão BHT (90,27%) e rutina (91,98%). A fração AcOEt e BuOH de cincos fungos selecionados apresentou metabólitos com atividade antioxidante, entre as amostras, a fração BuOH do fungo Trichoderma sp./LMA 1684 mostrou a atividade de eliminação do radical livre DPPH mais baixa (valor de IC50 de 304,18 mg/mL ), enquanto a fração AcOEt do fungo Chaetomium sp./LMA 1793 com um valor de IC50 de 0,21 mg/mL exibiu uma atividade antioxidante maior que os controles positivo BHT (0,42 mg/mL ), Rutina (0,25 mg/mL ), e Ácido Ascórbico (0,23 mg/mL). Foi realizada CG-EM da fração acetato de etila em cinco fungos previamente selecionados e foi constatada a presença do metabólito orcinol (3,19%) em Aspergillus versicolor/LMA 1705, 4-metoximetilfenol (4,79%), Sorbicillina (33,59%) e ergosterol (23,08%), presentes em Trichoderma sp./LMA 1684 e isopropenil-1,4-dimetil-1,2,3,3a,4,5,6,7-octahidroazuleno no endófito Fusarium sp. 4. O estudo mostrou um grande potencial de aplicação em biotecnologia dos endofíticos de P. incarnata. / Passiflora incarnata is among the most studied medicinal plants in the pharmacological field, whose medicinal properties are attributed mainly to its phytochemicals, such as phenolic compounds, alkaloids and flavonoids. It has been found that endophytic fungi, which are those living inside plants, share a symbiotic interaction with their hosts. These endophytes are present in all plants and often share the same metabolites as the plants they live. Due to their enormous potential for exploitation, endophytic fungi are considered one of the most important resources for obtaining new therapeutic agents, since a large number of structurally new and biologically active metabolites have been reported from these microorganisms. In this context, the objective of this work was to isolate endophytic fungi present in leaves of P. incarnata and to evaluate their biotechnological potential, regarding the presence of phytochemicals, phenolic compounds, flavonoids and antioxidant activity. From a total of 120 leaves analyzed 315 endophytic fungi were obtained. It was possible to identify 16 distinct taxa, among them Aspergillus spp., Fusarium spp., Penicillium spp., Curvularia spp., Phoma spp., Neurospora spp., Trichoderma spp. and Mucoromycotina representatives. Many showed no sporulation at all. All 60 endophytes used in the trials produced at least one phytochemical compound, 60% (n = 36) were positive for saponin, 76% (n = 46) for flavonoids, 93% (n = 56) for phenolic compounds, only 3% (n = 2) for tannins, and no one presented alkali in the filtrate. The total flavonoid and phenol contents of the n-Butanol extract, spectrophotometrically determined, showed that most of the analyzed fungi were good producers of these compounds, especially the isolate Trichoderma sp./LMA 1684 and Aspergillus sp. 1/LMA 1720 213.69 mg.g-1 and 187.3 mg.g-1 respectively, for total flavonoids expressed in rutin, and for total phenols the isolate LMA sp. 6 and LMA sp. 26 with 184.94 mg.g-1 and 187.05 mg.g-1 respectively. All endophytes presented antioxidant activity against free radical DPPH. Butanolic extract of the fungus Aspergillus versicolor/LMA 1720 (94%) was higher than the BHT (90.27%) and routine (91.98%) standard. The AcOEt and BuOH fraction of five fungi presented metabolites with antioxidant activity, among the samples, the BuOH fraction of the Trichoderma sp./LMA 1684. showed the lowest free radical DPPH elimination activity (IC50 value of 304.18 mg/mL), while the AcOEt fraction of Chaetomium sp./LMA 1793 with an IC50 value of 0.21 mg/mL showed better antioxidant activity than the BHT (0.42 mg/mL), rutin (0.25 mg/mL), and ascorbic acid (0.23 mg/mL). CG-MS of the ethyl acetate fraction was performed in five previously selected fungi and the presence of the orcinol (3.19%) in Aspergillus versicolor/LMA 1705, 4-methoxymethylphenol (4.79%), Sorbicillin (33.59%) and ergosterol (23.08%), present in Trichoderma sp./LMA 1684 and isopropenyl-1,4-dimethyl-1,2,3,3a, 4,5,6,7-octahydroazulene in the endophyte Fusarium sp. 4/LMA 1719. This study highlighted a great biotechnological application of the P. incarnata endophytes.
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Saponinas triterpênicas:biossíntese e atividade biológicaCosta, Fernanda de January 2014 (has links)
Saponinas triterpênicas incluem uma ampla variedade de moléculas com diversas aplicações farmacológicas. As saponinas das folhas de Quillaja brasiliensis, espécie nativa do Sul do Brasil, são estrutural e funcionalmente semelhantes às encontradas nas cascas da espécie chilena Quillaja saponaria, as quais são utilizadas atualmente como adjuvantes em formulações comerciais de vacinas. O perfil de acúmulo da fração imunoadjuvante de saponinas triterpênicas de Q. brasiliensis (QB-90) foi avaliado em resposta a diferentes fatores de estresse. O conteúdo de QB-90 em discos foliares aumentou significativamente com a aplicação de diferentes agentes de estresse osmótico. Também pôde ser observado aumento nos teores de saponinas pela exposição de discos foliares a ácido salicílico, ácido jasmônico, ultrassom e luz ultravioleta C. Experimentos com plântulas indicaram um aumento significativo nos teores de QB-90 com o aumento moderado de irradiância luminosa e pela aplicação de dano mecânico nas folhas. Os resultados obtidos apoiam o papel de defesa induzida que estes metabólitos apresentam in planta. Com o objetivo de avançar os estudos de atividade adjuvante de Q. brasiliensis e ampliar a extensão de antígenos testados, uma vacina contra poliovírus foi avaliada em camundongos. Resultados demonstraram que as formulações de vacinas contendo saponinas da espécie brasileira aumentaram níveis de anticorpos específicos IgG, IgG1 e IgG2a, sugerindo um estímulo de ambos tipos de resposta imune (Th1 e Th2). A resposta celular foi confirmada por ensaios de DTH e pela avaliação dos níveis de mRNA das citocinas IL-2 e IFN- em esplenócitos murinos. A resposta imune de mucosas foi demonstrada pelos aumentos nos níveis de IgA em bile, fezes e lavados vaginais. O segundo objeto de estudo desta Tese é a espécie Centella asiatica (L.) Urban, que também apresenta saponinas triterpênicas bioativas em suas partes aéreas. Uma enzima responsável pela glicosilação de ácido asiático e ácido madecássico foi parcialmente purificada. Usando técnicas de proteômica e dados de sequências de cDNA, a sequência completa do clone que codifica uma glicosiltransferase foi obtida. O produto gênico recombinante, UGT73AD1, foi funcionalmente expresso em Escherichia coli, purificado por cromatografia de afinidade por metal imobilizado e funcionalmente caracterizado. UGT73AD1 foi identificada como sendo uma glicosiltransferase triterpênica de ácidos carboxílicos, provavelmente envolvida na biossíntese de monodesmosídeos da espécie. / Triterpene saponins include a large variety of molecules that find several applications in pharmacology. The saponins from leaves of Quillaja brasiliensis, a native species from Southern Brazil, show structural and functional similarities to those of Quillaja saponaria barks, which are currently used as adjuvants in vaccine formulations. The accumulation patterns of an immunoadjuvant fraction of leaf triterpene saponins (QB-90) in response to stress factors were examined. The content of QB-90 in leaf disks was significantly increased by application of different osmotic stress agents. Higher yields of bioactive saponins were also observed upon exposure to salicylic acid, jasmonic acid, ultrasound and UV-C light. Experiments with shoots indicated a significant increase in QB-90 yields with moderate increases in white light irradiance and by mechanical damage applied to leaves. These results support a general induced defense role for these metabolites in planta. Aiming at advancing the studies of Q. brasiliensis adjuvant activity and amplifying the range of antigens tested, an inactivated virus-based vaccine against poliovirus was evaluated in mice. Results demonstrated that saponin formulations were able to enhance poliovirus- specific total IgG, IgG1 and IgG2a, suggesting stimulation of both Th1 and Th2 immune responses. Cellular response stimulation was confirmed by DTH assays and by evaluating the enhancement of IL-2 and IFN-γ cytokine mRNA expression in mice splenocytes. Mucosal immune responses demonstrated that the QB-90-adjuvanted vaccine enhanced IgA titers in bile, feces and vaginal washings. Centella asiatica (L.) Urban, a species accumulating triterpene bioactive saponins in its shoots, was also subject of study in this Thesis. An enzyme capable of glucosylating asiatic and madecassic acids was partially purified. Using proteomic methods and cDNA sequence data, a full-length cDNA clone encoding the glucosyltransferase was obtained. The recombinant gene product, UGT73AD1, was functionally expressed in Escherichia coli, purified by immobilized metal-affinity chromatography and functionally characterized. UGT73AD1 was identified as a triterpene carboxylic acid glucosyltransferase, likely involved in monodesmoside biosynthesis in C. asiatica.
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Saponinas triterpênicas:biossíntese e atividade biológicaCosta, Fernanda de January 2014 (has links)
Saponinas triterpênicas incluem uma ampla variedade de moléculas com diversas aplicações farmacológicas. As saponinas das folhas de Quillaja brasiliensis, espécie nativa do Sul do Brasil, são estrutural e funcionalmente semelhantes às encontradas nas cascas da espécie chilena Quillaja saponaria, as quais são utilizadas atualmente como adjuvantes em formulações comerciais de vacinas. O perfil de acúmulo da fração imunoadjuvante de saponinas triterpênicas de Q. brasiliensis (QB-90) foi avaliado em resposta a diferentes fatores de estresse. O conteúdo de QB-90 em discos foliares aumentou significativamente com a aplicação de diferentes agentes de estresse osmótico. Também pôde ser observado aumento nos teores de saponinas pela exposição de discos foliares a ácido salicílico, ácido jasmônico, ultrassom e luz ultravioleta C. Experimentos com plântulas indicaram um aumento significativo nos teores de QB-90 com o aumento moderado de irradiância luminosa e pela aplicação de dano mecânico nas folhas. Os resultados obtidos apoiam o papel de defesa induzida que estes metabólitos apresentam in planta. Com o objetivo de avançar os estudos de atividade adjuvante de Q. brasiliensis e ampliar a extensão de antígenos testados, uma vacina contra poliovírus foi avaliada em camundongos. Resultados demonstraram que as formulações de vacinas contendo saponinas da espécie brasileira aumentaram níveis de anticorpos específicos IgG, IgG1 e IgG2a, sugerindo um estímulo de ambos tipos de resposta imune (Th1 e Th2). A resposta celular foi confirmada por ensaios de DTH e pela avaliação dos níveis de mRNA das citocinas IL-2 e IFN- em esplenócitos murinos. A resposta imune de mucosas foi demonstrada pelos aumentos nos níveis de IgA em bile, fezes e lavados vaginais. O segundo objeto de estudo desta Tese é a espécie Centella asiatica (L.) Urban, que também apresenta saponinas triterpênicas bioativas em suas partes aéreas. Uma enzima responsável pela glicosilação de ácido asiático e ácido madecássico foi parcialmente purificada. Usando técnicas de proteômica e dados de sequências de cDNA, a sequência completa do clone que codifica uma glicosiltransferase foi obtida. O produto gênico recombinante, UGT73AD1, foi funcionalmente expresso em Escherichia coli, purificado por cromatografia de afinidade por metal imobilizado e funcionalmente caracterizado. UGT73AD1 foi identificada como sendo uma glicosiltransferase triterpênica de ácidos carboxílicos, provavelmente envolvida na biossíntese de monodesmosídeos da espécie. / Triterpene saponins include a large variety of molecules that find several applications in pharmacology. The saponins from leaves of Quillaja brasiliensis, a native species from Southern Brazil, show structural and functional similarities to those of Quillaja saponaria barks, which are currently used as adjuvants in vaccine formulations. The accumulation patterns of an immunoadjuvant fraction of leaf triterpene saponins (QB-90) in response to stress factors were examined. The content of QB-90 in leaf disks was significantly increased by application of different osmotic stress agents. Higher yields of bioactive saponins were also observed upon exposure to salicylic acid, jasmonic acid, ultrasound and UV-C light. Experiments with shoots indicated a significant increase in QB-90 yields with moderate increases in white light irradiance and by mechanical damage applied to leaves. These results support a general induced defense role for these metabolites in planta. Aiming at advancing the studies of Q. brasiliensis adjuvant activity and amplifying the range of antigens tested, an inactivated virus-based vaccine against poliovirus was evaluated in mice. Results demonstrated that saponin formulations were able to enhance poliovirus- specific total IgG, IgG1 and IgG2a, suggesting stimulation of both Th1 and Th2 immune responses. Cellular response stimulation was confirmed by DTH assays and by evaluating the enhancement of IL-2 and IFN-γ cytokine mRNA expression in mice splenocytes. Mucosal immune responses demonstrated that the QB-90-adjuvanted vaccine enhanced IgA titers in bile, feces and vaginal washings. Centella asiatica (L.) Urban, a species accumulating triterpene bioactive saponins in its shoots, was also subject of study in this Thesis. An enzyme capable of glucosylating asiatic and madecassic acids was partially purified. Using proteomic methods and cDNA sequence data, a full-length cDNA clone encoding the glucosyltransferase was obtained. The recombinant gene product, UGT73AD1, was functionally expressed in Escherichia coli, purified by immobilized metal-affinity chromatography and functionally characterized. UGT73AD1 was identified as a triterpene carboxylic acid glucosyltransferase, likely involved in monodesmoside biosynthesis in C. asiatica.
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