Os sarcomas de partes moles constituem um grupo diverso de neoplasias que podem surgir nos tecidos conjuntivos praticamente de qualquer região do corpo. A ressonância magnética (RM) é atualmente o exame de escolha para detecção, estadiamento regional e acompanhamento desses tumores. A segmentação das lesões a partir das imagens de RM da rotina permite extrair dados quantitativos, que tem potencial para adicionar informações a análise. O propósito do estudo é avaliar a reprodutibilidade da segmentação manual de sarcomas de partes moles em imagens de RM de pacientes com diagnóstico definitivo confirmado por meio da histopatologia. Como objetivo secundário foi realizada a comparação da segmentação manual e semiautomática a fim de validar a segmentação semiautomática como método alternativo para segmentação desses tumores. Foi estudada uma coorte retrospectiva de 15 pacientes consecutivos com diagnóstico confirmado de sarcoma de partes moles acompanhados em nosso serviço, no período de janeiro de 2006 até janeiro de 2016, com imagens de RM adquiridas previamente ao tratamento e disponíveis para análise no formato DICOM. Foi utilizado o software 3D Slicer para realizar as segmentações pelos métodos manual e semiautomático. Três radiologistas fizeram as segmentações de forma independente e às cegas para permitir avaliação interobservador. Os resultados obtidos demonstram haver alta reprodutibilidade intraobservador com coeficiente de similaridade de Dice entre as segmentações variando de 0,849 a 0,979 e as distâncias Hausdorff variando de 3,53 mm a 20,96 mm e uma boa reprodutibilidade interobservador com coeficientes de similaridade de Dice variando de 0,741 a 0,972 e distâncias Hausdorff variando de 5,83 a 60,84 mm. Foi encontrada uma concordância substancial entre as segmentações realizadas pelo método semiautomático quando comparadas com as segmentações realizadas pelo método manual com coeficientes de similaridade de Dice variando de 0,871 a 0,973 e distâncias Hausdorff variando de 5,43 mm a 31,75 mm. Em relação ao tempo de segmentação não houve diferença estatisticamente significativa do método semiautomático quando comparado ao método manual (p>0,05). Também foram calculados os volumes obtidos nas diferentes segmentações e houve concordância quase perfeita entre as duas segmentações manuais realizadas pelo radiologista 1, entre as segmentações realizadas pelo radiologista 1 e pelo radiologista 2, entre as segmentações realizadas pelo radiologista 1 e pelo radiologista 3, e entre a segmentação manual e semiautomática realizadas pelo radiologista 1, sendo obtidos coeficientes de correlação intraclasse (ICC) entre 0,9927 e 0,9990. Os resultados obtidos demonstram boa reprodutibilidade intra e interobservador da segmentação manual utilizando o software 3D Slicer validando dessa forma esse método como ferramenta confiável para servir de padrão de referência em futuros estudos quantitativos desses tumores. Foi encontrada concordância quase perfeita entre as segmentações realizadas pelo método semiautomático quando comparadas com as segmentações realizadas pelo método manual, mas nossos resultados não demonstraram diferença significativa de tempo de segmentação do método semiautomático em relação ao método manual. / Soft tissue sarcomas constitute a diverse group of neoplasms that can arise in the connective tissues from virtually any region of the body. Magnetic resonance imaging (MRI) is currently the examination of choice for detection, regional staging and followup of these tumors. The segmentation of the lesions from the routine MR images allows the extraction of quantitative data, which has the potential to add information to the analysis. The purpose of the study is to evaluate the reproducibility of manual segmentation of soft tissue sarcomas in MRI images of patients with definitive diagnosis confirmed by histopathology. As a secondary objective, a comparison of manual and semiautomatic segmentation was performed to validate semiautomatic segmentation as an alternative method for segmentation of these tumors. We studied a retrospective cohort of 15 consecutive patients with confirmed diagnosis of soft tissue sarcoma accompanied at our service from January 2006 to January 2016 with MR images acquired prior to treatment and available for analysis in the DICOM format. The software was used 3D Slicer to perform segmentation by manual and semiautomatic methods. Three radiologists did the segmentations independently and blindly to allow inter-observer evaluation. The results obtained show high intraobserver reproducibility with Dice similarity coefficient between the segmentations ranging from 0.849 to 0.979 and Hausdorff distances ranging from 3.53 mm to 20.96 mm and good interobserver reproducibility with Dice similarity coefficients ranging from 0.741 to 0.972 and Hausdorff distances varying from 5.83 to 60.84 mm. A substantial agreement was found between the segmentations performed by the semiautomatic method when compared to the segmentations performed by the manual method with Dice similarity coefficients ranging from 0.871 to 0.973 and Hausdorff distances ranging from 5.43 mm to 31.75 mm. Regarding the segmentation time, there was no statistically significant difference of the semiautomatic method when compared to the manual method (p> 0.05). The volumes obtained in the different segmentations were also calculated and there was almost perfect agreement between the two manual segmentations performed by the radiologist 1, between the segmentations performed by radiologist 1 and radiologist 2, between the segmentations performed by radiologist 1 and radiologist 3, and between The manual and semi-automatic segmentation performed by the radiologist 1, and intraclass correlation coefficients (ICC) between 0.9927 and 0.9990 were obtained. The results obtained demonstrate good intra and interobserver reproducibility of the manual segmentation using 3D Slicer software, thus validating this method as a reliable tool to serve as a reference standard in future quantitative studies of these tumors. Almost perfect agreement was found between the segmentations performed by the semiautomatic method when compared to the segmentations performed by the manual method, but our results did not show a significant difference in segmentation time of the semiautomatic method in relation to the manual method.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / As algas marinhas sÃo consideradas uma rica fonte de molÃculas bioativas. Neste trabalho a alga marinha vermelha Gracilaria caudata foi submetida a extraÃÃo aquosa a quente de seus polissacarÃdeos e apresentou rendimento de 32,8%. Os polissacarÃdeos extraÃdos de G. caudata (PGC) apresentaram 1% de Ãtomos de enxofre e um grau de sulfataÃÃo de 0,13. A massa molar de PGC foi determinada por cromatografia de permeaÃÃo em gel e mostrou ser da ordem de 2,5 x 105 g.mol-1. A anÃlise quÃmica feita por Infravermelho e RessonÃncia MagnÃtica Nuclear de PGC revelou que esse composto pertence à uma galactana tipo Ãgar, constituÃdo basicamente por resÃduos alternantes de β-D-galactose e 3,6 α-L-anidrogalactose com grupamentos hidroxila substituÃdos por Ãsteres de sulfato, metil e piruvato. As propriedades antitumorais de PGC foram investigadas in vitro e in vivo. A citotoxicidade de PGC foi avaliada in vitro pelo ensaio do metil tiazolil tetrazolium (MTT). Esse ensaio demonstrou que PGC apresentou valores de CI50 (concentraÃÃo inibitÃria mÃdia) maiores que 25 μg.mL-1 para todas as cÃlulas testadas, sendo considerado nÃo tÃxico. A atividade antitumoral in vivo de PGC contra cÃlulas de Sarcoma 180 transplantadas em camundongos foi avaliada e demonstrou efeito anticÃncer em ambas as vias de administraÃÃo intraperitoneal e oral. PGC reduziu significativamente o crescimento do tumor em 47,59 e 53,53% nas doses de 25 e 50 mg.kg-1 quando administrado intraperitonealmente. A administraÃÃo oral de 50 e 100 mg.kg-1 de PGC causou taxas de inibiÃÃo de 37,27 e 35,98%, respectivamente. O polissacarÃdeo extraÃdo de G. caudata (25 mg.kg-1) potencializou o efeito antitumoral apresentado pelo 5-FU (10 mg.kg-1) de 37,22 para 70,74% quando administrados conjuntamente. As anÃlises histopatolÃgicas do fÃgado e rim mostraram que esses ÃrgÃos foram moderadamente afetados pelo tratamento com PGC. Contudo, nenhuma alteraÃÃo significativa nos parÃmetros marcadores de toxicidade renal (urÃia) ou hepÃtica (AST e ALT) foi observada. Os resultados obtidos apÃs tratamento por via ip. demonstraram que PGC aumentou o peso relativo do baÃo, induziu hiperplasia de folÃculos linfoides, aumentou a percentagem de neutrÃfilos e reverteu a leucopenia ocasionada por 5-FU, sugerindo que a atividade antitumoral pode estar relacionada Ãs suas propriedades imunomodulatÃrias. / Seaweeds are considered an important source of bioactive molecules. In this work the red marine alga Gracilaria caudata was submitted to aqueous extraction of their polysaccharides and presented a recovery of 32.8%. The extracted polysaccharides of G. caudata (PGC) had 1% of sulfur atoms and a degree of sulfation of 0.13. The molar mass of PGC was determined by gel permeation chromatography and the molar mass detected was 2.5 x 105 g.mol-1. Chemical analysis made by spectroscopic methods such as Infrared and Nuclear Magnetic Resonance of PGC demonstrated to belong to the agar type galactan family, mainly constituted by alternating residues of β-D-galactose and 3,6-α-L-anhydrogalactose with the hydroxyl groups substituted by ester sulfate, methyl groups and pyruvic acid acetal. Seaweed polysaccharides have recently been shown to act as antitumor agents. The antitumor properties of the polysaccharides extracted from G. caudata (PGC) were investigated in vitro and in vivo. The cytotoxicity of PGC was evaluated in vitro by the methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay. This assay demonstrated that PGC had IC50 values greater than 25 μg.mL-1 for all tested cells, being considered non-toxic. The in vivo antitumor activity of PGC against Sarcoma 180 cells transplanted in mice was evaluated and showed anticancer effect in both oral and intraperitoneal routes of administration. PGC significantly reduced tumor growth in 47.59 and 53.53% at the doses of 25 and 50 mg.kg-1 when administered intraperitoneally. The oral administration of 50 and 100 mg.kg-1 of PGC caused inhibition rates of 37.27 and 35.98%, respectively. Interestingly, PGC (25 mg.kg-1) enhanced the antitumor effect presented by 5-fluorouracil (10 mg.kg-1) from 37.22 to 70.74%. The histopathological analysis of liver and kidney showed that both organs were moderately affected by PGC treatment. Though, no significant changes in renal (urea) or liver (enzymatic activity of Alanine and Aspartate aminotransferase) parameters were observed. Results demonstrated that PGC administered by intraperitoneal route increased the relative spleen weight, induced a hyperplasia of lymphoid folicules, enhanced the neutrophil percentage and reverted the leucopeny induced by 5-FU, suggesting that the observed antitumor activity could be related to its immunomodulatory properties.

A cisplatina é um dos mais efetivos agentes antitumorais, porém seu uso clínico é limitado principalmente pela nefrotoxicidade. A terapia adjuvante com antioxidantes tem sido sugerida como estratégia de proteção contra a toxicidade induzida pela cisplatina nos tecidos saudáveis, e a eficácia de diferentes antioxidantes tem sido demonstrada em diversos modelos experimentais. Entretanto, a maioria dos compostos descritos como citoprotetores não foi ainda avaliada em modelos experimentais portadores de tumores e não há um consenso sobre o impacto da terapia antioxidante na atividade antitumoral da cisplatina. Além disso, há poucos dados sobre o efeito de muitos destes citoprotetores sobre a saúde humana, sendo que alguns podem apresentar atividade pró-oxidante sob determinadas condições. Nossos estudos anteriores demonstraram que o beta-bloqueador carvedilol protege eficazmente contra a nefrotoxicidade induzida pela cisplatina em ratos. No presente estudo foram explorados dois novos aspectos da proteção exercida pelo carvedilol: (a) o efeito da carvedilol na atividade antitumoral da cisplatina e (b) os mecanismos moleculares de proteção. O primeiro aspecto foi avaliado in vivo em camundongos portadores de Sarcoma 180. Neste modelo, quatro grupos (n=8) de camundongos Swiss, machos adultos, inoculados com uma suspensão de células de Sarcoma 180 (via subcutânea) foram submetidos aos seguintes tratamentos: (I) Grupo Controle: carboximetilcelulose 0,5% (0,10mL/ animal 30g, via oral ou v.o, 1 vez ao dia, por 3 dias) e solução salina (0,75mL/animal 30g, intraperitoneal ou i.p. no primeiro dia) ; (II) Grupo Cisplatina (Cisp): cisplatina (25 mg/kg, i.p., no primeiro dia); (III) Grupo Carvedilol+Cisplatina (CV+Cisp): carvedilol (10 mg/kg, v.o, 1 vez ao dia, por 3 dias) e cisplatina (25 mg/Kg, i.p., no primeiro dia); e (IV) Grupo Carvedilol (CV): carvedilol (10 mg/kg, v.o., 1 vez ao dia, por 3 dias). A função renal (uréia e creatinina plasmáticas), e a análise histopatológica do tecido renal comprovaram o dano renal induzido pela cisplatina e a nefroproteção exercida pelo carvedilol. A biodistribuição da platina (ICP-MS) e a atividade antitumoral da cisplatina (índice de remissão tumoral e curva de sobrevida) não foram alteradas pelo carvedilol. O carvedilol não protegeu contra a mutagenicidade (avaliada em sangue periférico) e contra a mielossupressão induzidas pela cisplatina. O ensaio de TUNEL e análise imuno-histoquímica da caspase-3 clivada e da proteína pró-apoptótica Bax comprovaram a proteção do carvedilol contra a apoptose que foi induzida pela cisplatina no tecido renal, porém a proteína anti-apoptótica Bcl-xL permaneceu inalterada nos quatro grupos. O envolvimento da atividade antioxidante do carvedilol no mecanismo de proteção foi demonstrado pelos ensaios de peroxidação lipídica e GSH no tecido renal. Os estudos mecanísticos foram realizados em modelo in vitro com células HK-2 (de rim humano normal) divididas em quatro grupos de tratamento: (I) Controle: salina tamponada com fosfato (PBS); (II) Cisp: 25?M de cisplatina; (III) CV+Cisp: 50?M de carvedilol e 25 ?M de cisplatina; (IV) CV: 50 ?M de carvedilol. Foi observada diminuição da morte celular por apoptose e da expressão das proteínas caspase-3, pro-caspase-9 e Bax no grupo CV+Cisp quando comparado ao grupo Cisp. Assim como nos estudos in vivo, não houve alteração na expressão da ii proteína Bcl-xL. A atividade da proteína SIRT-1 apresentou-se aumentada no grupo CV+Cisp e inalterada nos demais. Adicionalmente, o mecanismo antioxidante do carvedilol foi associado ao sequestro dos íons ferrosos, mas não ao sequestro de radicais livres. Em conclusão, a atividade nefroprotetora do carvedilol está associada a mecanismos antioxidantes provavelmente decorrentes do sequestro de íons ferrosos. O mecanismo nefroprotetor do carvedilol não diminui a atividade antitumoral da cisplatina, o que sugere que mecanismos distintos sejam responsáveis pela nefrotoxicidade e pela atividade antitumoral da cisplatina. Ainda, o estresse oxidativo parece desempenhar papel central na nefrotoxicidade, o que não acontece na atividade antitumoral, que tem sido associada principalmente a danos ao DNA nuclear. Estes resultados sugerem que a terapia antioxidante pode ser uma alternativa segura na proteção dos tecidos saudáveis durante a quimioterapia com cisplatina. / Cisplatin is one of the most effective anticancer agents; however, its clinical use is limited mainly by its nephrotoxicity. The adjuvant therapy with antioxidants has been suggested as a strategy of protection against the toxicity induced by cisplatin in healthy tissues and the efficacy of different antioxidants has been demonstrated in several experimental models. However, most of these compounds described as cytoprotectors have never been tested in tumor-bearing models, and there is not a consensus on the impact of the antioxidant therapy on the antitumor activity of cisplatin. Moreover, there are few data about the effect of many of these compounds on human health; some can even display pro-oxidant activity under certain conditions. Our previous studies have demonstrated that the beta-blocker carvedilol efficiently protects against the nephrotoxicity induced by cisplatin in rats. In the present study two new aspects of the protection of carvedilol were explored: (a) the effect of carvedilol on the antitumoral effect of cisplatin and (b) the molecular mechanisms of protection. The first aspect was evaluated in vivo in Sarcoma-180-tumor-bearing mice. In this model, four groups groups (n=8) of Swiss, adult mice, inoculated with Sarcoma-180 cells (subcutaneous via) were treated as follows: (I) Control group: carboxymethylcellulose 0.5% (0.10mL/ 30g animal, oral, once a day, 3 days) and saline solution (0.75mL/30g animal, intraperitoneal or ip, on the first day); (II) Cisplatin group (Cisp): cisplatin 25mg/kg, i.p., on the first day; (III) Carvedilol + Cisplatin group (CV+Cisp): carvedilol (10mg/kg, oral, once a day, 3 days) and cisplatin (25 mg/kg, i.p., on the first day); (IV) Carvedilol group (CV): carvedilol (10mg/kg, oral, once a day, 3 days). The renal function (plasmatic BUN and creatinine) and the renal histopathology, showed the renal damage induced by cisplatin and the nephroprotection of carvedilol. The biodistribution of platinum (ICP-MS) and the antitumor activity of cisplatin (tumor remission index and survival curve) were not altered by carvedilol. Carvedilol did not protect against the mutagenicity (evaluated in the peripheral blood) and the bone marrow suppression induced by cisplatin. TUNEL assay and the imunnohistochemical analyses of the cleaved caspase-3 and the proapoptotic protein Bax showed the protection of carvedilol against the apoptosis induced by cisplatin in the renal tissue; however, the anti-apoptotic protein Bcl-xL remained unaltered in the four groups. The involvement of the antioxidant activity of carvedilol in the protective mechanism was demonstrated by lipid peroxidation and GSH assays in the renal tissue. The mechanistic studies were performed in vitro in HK-2 cells (from normal human kidney) divided into four groups of treatment: (I) Control: phosphate buffered saline (PBS); (II) Cisp: 25?M cisplatin; (III) CV+Cisp: 50?M carvedilol and 25 ?M cisplatin; and (IV) CV: 50 ?M carvedilol. Reduced cell death by apoptosis and reduced expression of caspase-3, pro- caspase-9 and Bax were observed in CV+Cisp as compared to Cisp. Similarly to the in vivo studies, no alterations in the expression of Bcl-xL were observed. The activity of SIRT-1 was increased in the group CV+Cisp, but was unaltered in all the other groups. Additionally, the antioxidant mechanism of carvedilol was associated with the scavenging of ferrous ions but not with the scavenging of free radicals. In conclusion, the nephroprotective activity of carvedilol is associated with antioxidant iv mechanisms which probably results from the scavenging of ferrous ions. The nephroprotective mechanism of carvedilol does not reduce the antitumor activity of cisplatin, which suggests that distinct mechanisms are responsible for the nephrotoxicity and the antitumor activity of cisplatin. Moreover, the oxidative stress might play a central role in the nephrotoxicity, but this does not happen in the antitumor activity, which has been associated mainly with nuclear DNA damage. These findings suggest that the antioxidant therapy might be a safe alternative to protect healthy tissues during cisplatin chemotherapy.

O sarcoma de Ewing (SE) é um tumor caracterizado por possuir células indiferenciadas, de origem neuroepitelial. É o segundo tumor ósseo maligno mais comum em crianças e adolescentes. O tratamento consiste na aplicação de quimioterapia neoadjuvante, seguida da cirurgia e a quimioterapia adjuvante ou radioterapia. Contudo, a disseminação deste tumor é muito intensa, e mesmo em pacientes onde a metástase não ocorreu, podem haver células tumorais circulantes. Além disso, a sobrevida de 5 anos que cerca de 70% dos pacientes que não apresentam metástase no momento do diagnóstico atingem, cai para 25% nos pacientes que apresentam metástase. A migração e invasão celular dos tecidos vizinhos e vasos sanguíneos, a adesão celular e a proliferação são processos essenciais para que a metástase tumoral aconteça. Dentre as reguladoras da mobilidade, adesão celular e proliferação estão as GTPases da família Rho, que possuem entre suas quinases efetoras, ROCK1 e ROCK2. Assim, as proteínas ROCK induzem inúmeras respostas celulares que envolvem a regulação de muitas proteínas associadas ao citoesqueleto. Estudos evidenciam que respostas sinalizadas por ROCK agravam fenótipos associados ao câncer e outras doenças. O presente trabalho teve como objetivo verificar a expressão dos genes ROCK1 e ROCK2 em amostras tumorais e linhagens celulares de SE, e os efeitos in vitro da inibição farmacológica de ambas as quinases. O estudo da expressão gênica de ROCK1 e ROCK2 em amostras de pacientes com SE (n=18) revelaram uma hipoexpressão de ambos genes, tanto nas amostras de pacientes com SE quanto nas linhagens celulares SK-ES-1 e RD-ES. Não foi encontrada nenhuma relação das expressões gênicas com os dados clínicos. Contudo, a presença do gene de fusão EWS-FLI1 parece estar associada com menor expressão de ROCK1. Verificou-se que a proliferação celular, a capacidade clonogênica e o ciclo celular não se alteraram significativamente nas linhagens celulares de SE após os diferentes tratamentos com as drogas GSK429286 (inibidor de ROCK1), SR3677 (inibidor de ROCK2) e Hidroxifasudil (pan-inibidor). Porém, apesar de não significativo, observou-se um tênue aumento na migração e invasão celular após o tratamento com as drogas. Nossos dados indicam que ROCK1 e ROCK2 podem possuir um papel na tumorigênese do SE, e ainda estar relacionadas com os mecanismos de migração e invasão celular, processos importantes para a metástase tumoral. / Ewing\'s sarcoma (ES) is characterized by undifferentiated cells of neuroepithelial origin. It is the second most common malignant bone tumor in children and adolescents. Standard treatment consists of preoperative chemotherapy, followed by surgery and postoperative chemotherapy and/or radiotherapy. However, the spread of the tumor is very high and even in patients where the metastasis has not occurred, there may be circulating tumor cells. Furthermore, the 5-year survival which about 70% of patients without metastases at diagnosis achieve, falls to 25% in patients with metastases. Migration and invasion into adjacent tissues and blood vessels, cell adhesion and proliferation are essential for tumor metastasis to occur. Among the regulators of the processes are the Rho family of GTPases, which have as their effector kinases, ROCK1 and ROCK2. Thus, ROCK induce numerous cellular responses involving the regulation of many proteins associated with the cytoskeleton. Studies show that responses regulated by ROCK aggravate phenotypes associated with cancer and other diseases. This study aimed to verify the expression of ROCK1 and ROCK2 genes in ES tumor samples and to evaluate the effects of their pharmacological inhibition in vitro. Gene expression analysis showed lower expression of ROCK in both, patient samples (n=18) and the SK-ES- 1 and RD-ES cell lines. There was no relation of gene expression with clinical data. Nonetheless, the presence of EWS-FLI1 fusion appears to be associated with lower expression of ROCK1. Cell proliferation, clonogenic capacity and the cell cycle were not affected after different treatments with GSK429286 (ROCK1 inhibitor), SR3677 (ROCK2 inhibitor) and Hydroxyfasudil (pan-inhibitor). However, although not significant, there was a tenuous increase in cell migration and invasion following treatment with the drugs. Our data suggest that ROCK1 and ROCK2 might have a role in ES tumorigenesis and may be related im part to migration and invasion cell mechanisms, important processes for tumor metastasis.

Metastases pulmonares isoladas de sarcomas de partes moles ocorrem em 20%-50% dos pacientes, e 70% destes pacientes apresentarão doença limitada aos pulmões. A ressecção cirúrgica é bem aceita como tratamento padrão nas metastases de sarcomas de partes moles confinadas aos pulmões, com muitos estudos relatando sobrevida em cinco anos de 305-40%, ssndo que o fator preditor de sobrevida é a ressecção completa. O objetivo deste estudo é determinar as variáveis clínicas e demográficas relacionadas ao tratamento e associadas com a sobrevida global a longo prazo (90 meses) nos pacientes submetidos a metastasectomia pulmonar de sarcomas de partes moles. Uma revisão retrospectiva foi realizada nos pacientes com metastases pulmonares que foram submetidos à toracotomia para ressecção das metástases, após o tratamento do tumor primário. Os dados foram coletados de acordo com as características do tumor primário, dados demográficos, tipo de tratamento e evolução. Pacientes (n=77) com sarcomas de partes moles previamente tratados foram submetidos a um total of 122 toracotomias e 273 nódulos ressecados. O seguimento mediando de todos os pacientes foi de 36.7 meses (variação: 10-138 meses). O índice de complicações pós-peratórias foi 9.1%, e a mortalidade em 30 dias de 0%. A sobrevida global em 90 meses para todos os pacientes foi de 34.7%. A análise multivariada identificou o número de metástases, o intervalo livre de doença, e ressecção completa, como fatores prognósticos independentes para a sobrevida global. Estes resultados confirmam que a metastasectomia pulmonar é um procedimento seguro e com potencial curativo para pacientes com tumors primários tratados. Um grupo seleto de pacientes pode apresentar uma sobrevida a longo prazo interessante após a ressecção pulmonar / Isolated pulmonary metastases from soft tissue sarcomas occur in 20%-50% of these patients, and 70% of these patients will have disease limited only to the lungs. Surgical resection is well accepted as a standard approach to treat metastases from soft tissue sarcomas isolated to the lungs, with many studies reporting overall 5-year survival ranging from 30% to 40%, and the most consistent predictor of survival in these patients is complete resection. The aim of this study is to determine demographics and clinical treatment-related variables associated with long-term (90-month) overall survival in patients with lung metastases undergoing pulmonary metastasectomy from soft tissue sarcomas. A retrospective review was performed of patients who were admitted with lung metastases and underwent thoracotomy for resection, after treatment of the primary tumor. Data were collected regarding primary tumor features, demographics, treatment, and outcome. Patients (n=77) with preview soft tissue sarcomas treated, were submitted to a total of 122 thoracotomies and 273 nodules resected. Median follow-up time of all patients was 36.7 months (range: 10-138 months). The postoperative complication rate was 9.1%, and the 30-day mortality rate was 0%. The 90-month overall survival rate for all patients was 34.7%. Multivariate analysis identified the number of metastases resected, disease-free interval, and complete resection as the independent prognostic factors for overall survival. These results confirm that lung metastasectomy is a safe and potentially curative procedure for patients with treated primary tumors. A select group of patients can achieve long-term survival after lung resection

Ao longo do processo de progressão tumoral, se observa alteração na expressão de glicoconjugados contendo oligossacarídeos N-ligados. Uma das formas mais comuns de glicosilação aberrante observada em células transformadas e em tumores humanos é representada por (poli)lactosaminas presentes em oligossacarídeos N-ligados. Estes glicanos são ligantes de galectina-3. Com o objetivo de identificar a expressão e distribuição dos ligantes de galectina-3 associados a processos fisiopatológicos, como a transformação maligna, desenvolvemos uma proteína quimérica, a galectina-3 conjugada a fosfatase alcalina (Gal-3/FA). Observamos que a Gal-3/FA possui a mesma especificidade de galectina-3 e que pode ser usada como sonda em ensaios de overlay e ensaios de imunoistoquímica. Entre os ligantes de galectina-3 identificamos a ?1 integrina, mediador de processos biológicos dependentes da interação célula-matriz como a migração celular. Linhagens de células de origem mesenquimal derivadas de tumores induzidos com metilcolantreno de animais selvagens (linhagens S11 e S12) e nulizigoto (linhagem ?12) para o gene da galectina-3 foram estabelecidas. Avaliamos a capacidade migratória dessas células e os nossos resultados mostraram que células que expressam galectina-3 são mais migratórias em superfícies de laminina-1. Este dado sugere que a galectina-3 seja um modulador positivo do processo de migração celular em superfícies de laminina-1. No entanto, o mecanismo pelo qual a galectina-3 medeia esse processo não é conhecido. Células que possuem fenótipo mais migratório apresentam um estado intermediário de adesão. Nós observamos que a galectina-3 se encontra nos complexos focais. Na presença de galectina-3 observamos diminuição de FAK fosforilado e recrutamento da fosfatase SHP-2 para os complexos focais. A diminuição de FAK fosforilado no lamelipódio leva ao turnover dos complexos focais e ao aumento da migração celular. Analisamos também a via de sinalização e observamos que a galectina-3 não ativa PAK. Contudo, o inibidor de PI3quinase, wortmanina, inibiu o efeito pró-migratório de galectina-3. Esses dados reforçam a noção do papel de galectina-3 na modulação do processo de migração de fibroblastos transformados, funcionando como uma molécula / Altered expression of cell surface N-linked oligosaccharides are often associated with malignant transformation of cells. One of the most common forms of aberrant glycosylation in transformed cells and human tumors is the highly elevated ?1,6 branching of N-linked oligosaccharides caused by increased expression of N-acetylglucosaminytransferase V (Mgat5). Galectin-3, a ?-galactoside binding protein, binds preferentially to poly-N-acetyllactosamines, which are the products of Mgat5. In order to exploit this hallmark of cancer cells, we have developed a tool for in situ identification of these tumors associated glycoconjugates. Human galectin-3 was fused to bacterial alkaline phosphatase, generating a hybrid molecule displaying both the carbohydrate binding properties of galectin-3 and enzymatic activity of alkaline phosphatase (Gal-3/FA). Gal-3/FA has the same fine of galectin-3 which was confirmed in direct binding assays. The tool presented herein was therefore useful for several immunoenzymatic assays, and will allow to establish whether the expression pattern of galectin-3 ligands have any physiological or clinical significance. We have identified ?1 integrin as a galectin-3 ligand. ?1 integrins are the actual effector of cell adhesion and migration. We have established cell lines from methylcholantrene-induced sarcomas from both wild type and galectin-3 null mice. In this system, galectin-3 null cells were less migratory than control cells in laminin-1. When galectin-3 was transiently expressed in galectin-3 null sarcoma cells, it inhibited cell adhesion to laminin-1 and stimulate the migratory response to laminin-1. The addition of exogenous galectin-3 also enhanced the migratory capacity of ?12 cells in a carbohydrate dependent way. Galectin-3 was found in focal contacts of ?12 cells where it may interact with many glycoproteins containing polyllactosamines on the cell surface. Here we showed that ?1 integrins are among them. Exogenously added galectin-3 led to a decrease in phosphorylated-FAK in lamellipodia and increased the recruitment of Shp-2 phosphatase of migrating cells. The effect of galectin-3 in migration was not dependent on the activation of the p21-activated kinase (PAK). Wortmannin inhibited the increased migration elicited by galectin-3, suggesting the involvement of the PI3-kinase signaling in the galectin-3 pathway. We propose that extracellular galectin-3 bound ?1integrins and disrupted the focal adhesion plaque, thus favoring cell migration.

O sarcoma de aplicação felino (SAF) tornou-se um grande desafio para a Medicina Veterinária atual. Sua primeira descrição foi em 1991 e desde então inúmeros estudos estão sendo realizados objetivando a elucidação da etiologia e etiopatogenia do SAF. Esta pesquisa avaliou a eficácia do protocolo quimioterápico em SAF em dois grupos de animais: grupo I - com procedimento cirúrgico; grupo II - sem procedimento cirúrgico; avaliando a sobrevida destes pacientes. O diagnóstico de sarcoma de aplicação foi obtido através do histórico clínico de vacinação ou administração prévia no local do aparecimento do nódulo/formação inicial e da colheita de material para citologia, histopatologia e/ou imunohistoquímica. O diagnóstico de sarcoma de aplicação operável ou não foi proposto pelo pesquisador ao analisar os exames complementares, o estado geral do animal e pela avaliação das imagens da tomografia computadorizada. Os pacientes, nos quais o procedimento cirúrgico não foi viável, receberam como tratamento somente a aplicação de quimioterápico e para os operáveis após o procedimento cirúrgico foi instituído também o mesmo protocolo de quimioterapia. As imagens provindas da tomografia computadorizada também foram utilizadas na avaliação da resposta tumoral, redução ou manutenção do volume inicial, aos protocolos de tratamento instituídos. Para realização do projeto foram utilizados 12 felinos, encaminhados ao Serviço de Cirurgia de Pequenos Animais do Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo. A partir do diagnóstico de sarcoma de aplicação não-operável, deu-se início ao protocolo quimioterápico de doxorrubicina não-encapsulada, na dose de 1 a 1.5mg/kg, intravenosa, a cada 21 dias, num total de quatro aplicações. E para os animais operados o protocolo de quimioterapia foi iniciado no 10º dia de pós-operatório. Antes de cada administração de quimioterapia foram realizados exames laboratoriais para verificar a condição clínica do paciente e as alterações oriundas do uso da quimioterapia, que pudessem impedir a aplicação no momento. O exame tomográfico foi passível de ser realizado em sete animais. A diferença da medida do volume tumoral pela tomografia foi estatisticamente significante em relação ao exame físico. Obteve-se melhor planejamento cirúrgico pela avaliação conjunta do exame físico e tomográfico. / The feline injection-site sarcoma (FISS) becomes a big challenge for Veterinary Medicine nowadays. Its first description was in 1991, and since then several studies have been done aiming to find out the FISS´s etiology and etiopathology. The object of this project is to demonstrate the effectiveness of chemotherapy protocols in FISS´s treatment in two groups of animals: one only with surgery and other without, where was evaluated the overall survival. The FISS diagnosis was obtained through to clinical data of vaccination or other injectable administration in the local of FISS appearance and with results of cytology, histopathology and/or immunohistochemical exams. Clinical data were collected on all patients, including any history of previous injection and complementary exams (computed tomography, cytology, and biopsy). The researcher with clinical data and exams results classified the tumors as resectable or nonresectable. With the clinical data and the results of the complementary exams the best treatment was applied. The patients with nonresectable tumors were treated with chemotherapy alone. The surgery was performed at "conform tumors surgery" in the patients in witch it was possible, and then chemotherapy was begun at 10-15 days before surgery. The treatment response was evaluated using tomography images too. The project selected 12 animals that were directed to Small Animal Surgery Service - HOVET - Faculty of Veterinary Medicine and Zootechny of University of São Paulo - São Paulo - Brazil. Chemotherapy protocol was with doxorubicin non-encapsulate at 1-1,5 mg/kg IV each 21 days/ 4 cycles. Chemotherapy was performed 10-15 days before in patients that they had made surgery. Complementary blood exams were made before each chemotherapy application with the intention to verify patient clinical condition and with intension to detect chemotherapy collaterals effects. The tomography exam was realized in 7 patients. The measurement of differences in clinical`s and tomography`s tumor volume was statistically significant (p=0,018). The surgery planning was better when the evaluation utilized the clinical data and the tomography exam.

Fujinami sarcoma virus encodes a 140/000 m.w. polypeptide (P140) which has been correlated as the agent of transformation in host chicken fibroblasts and mammalian fibroblasts. To conclusively identify the role of P140 in the transformation process it will be necessary to obtain intact/ purified P140. The availability of an antibody monoclonally specific to the N-terminal gag encoded portion of P140 suggested a one-step immunoaffinity purification of P140. After purification of the antibody out of mouse ascites fluid, by 50% ammonium sulfate fractionation and ion exchange chromatography, antibody was linked to a Sepharose 4-B matrix activated with cyanogen bromide. The anti-pl9 affinity matrix bound intact P140 as a doublet relative to a polyclonal anti-pl9. Chaotropic agents, high pH and low pH treatments all failed to elute the bound P140 from the affinity matrix. Failing the purification of intact P140 a method of partial proteolysis was used to produce varying sized fragments of P140/ with the goal of purifying these fragments for further work on the role of P140. Trypsin alone in a limited proteolysis produced small, unstable peptides too close in size distribution to be effectively purified. Chymotrypsin alone produced a broad range of more stable peptides, with a predominance of a 45,000 m.w. peptide. Chymotrypsin-trypsin consecutive proteolysis produced a very stable 35,000 m.w. peptide. Gel filtration of the chymotryptic peptides was ineffective as the peptides coraplexed and were not fractionated. Ion exchange chromatography fractionated the complexing chymotryptic peptides, making possible the purification of these peptides. The stable 45,000 m.w. peptide retained some kinase activity, as it phosphorylated the substrate enolase, similar to but less intense than intact P140. A 30,000 m.w. peptide only phosphorylating after ion exchange did not phosphorylate enolase. / Science, Faculty of / Microbiology and Immunology, Department of / Graduate

INTRODUÇÃO: O mixofibrossarcoma (MFS) é um dos mais frequentes sarcomas de partes moles (SPM) em idosos que afeta principalmente as extremidades. Historicamente, é um grupo de tumores heterogêneos. Clinicamente está caracterizado por apresentar uma alta incidência de recorrência local (RL) e um conhecimento limitado sobre a sua capacidade de metástase. O índice de RL após a ressecção cirúrgica é relativamente maior quando comparado com outros SPM. Não existe um consenso em como identificar os pacientes com maior risco. O objetivo deste estudo foi analisar os fatores de prognóstico dos pacientes diagnosticados com MFS em uma instituição única. MÉTODOS: Foram analisados retrospectivamente os prontuários de 75 pacientes com diagnóstico confirmado de MFS nas extremidades, que foram submetidos a tratamento cirúrgico, nos últimos 25 anos. Comparamos idade, sexo, tamanho e localização do tumor, grau histológico segundo a Fédération Nationale des Centres de Lutte Contre le Cancer (FNCLCC) e o estádio segundo a American Joint Committee on Cancer (AJCC). A média de idade foi 49,7 anos. A localização foi: membro superior (25,4%), membro inferior (66,6%) e pelve (8%). Os pacientes apresentaram baixo, intermediário e alto grau, em: 29,3%, 24% e 46,7% dos tumores, respectivamente. Pelo tamanho foram categorizados em: =/< 5 cm (13,3%), > 5 e <10 cm (42,7%), > 10 e <15 cm (9%) e =/> 15 cm (18,7%). Em total, 26,7% receberam radioterapia pós-operatória. As margens foram livres em 76% e comprometidas em 24%. A análise da regressão de Cox bivariada foi utilizada para determinar as associações entre os fatores clínicos e de tratamento com a RL. RESULTADOS: O tempo médio de seguimento foi 30.7 meses. O 26,7% dos pacientes apresentaram RL. Metástase foi reportada em 27 (36%) pacientes. O local mais comum de metástase foi: pulmão (92,6%) e gânglios linfáticos (18,5%). O tempo médio de sobrevida dos pacientes com metástase foi 21,2 meses. Os fatores preditivos para RL foram: margens comprometidas (hazard ratio 5.47, 95% intervalo de confiança, 2.23-13.40, P < 0.001) e metástase (hazard ratio 10.24, 95% intervalo de confiança, 3.53-26.68, P < 0.001). Os fatores preditivos da sobrevida livre de RL foram: grau histológico, margens comprometidas (hazard ratio 3.18, 95% intervalo de confiança, 1.51-6.70, P =0.001), e metástase (hazard ratio 15.23, 95% intervalo de confiança, 5.57-41.61, P= 0.001). Os fatores preditivos de sobrevida em geral foram: RL (hazard ratio 5.13, 95% intervalo de confiança, 2.15-12.24, P < 0.001), e metástase (hazard ratio 540.97, 95% intervalo de confiança, 5.04-58112.03, P < 0.001). CONCLUSÃO: As margens cirúrgicas comprometidas e a metástase estão diretamente associadas com a RL. O grau histológico do tumor, as margens comprometidas, a RL e a metástase, são fatores de pior prognóstico no MFS / BACKGROUND AND AIMS: Myxofibrosarcoma (MFS) is one of the most common soft tissue sarcomas (STS) in elderly patients and it primarily affects the extremities. They are a historically heterogeneous group of tumors. The clinical course of MFS is characterized by a high incidence of local recurrences (LR), but knowledge about distant metastasis is sparse. MFS is reported to have a higher risk of LR following definitive surgical excision relative to other STS. There is no agreement on how to identify patients at major risk. The objectives of this study were to analyze the prognostic factors and outcomes of patients with MFS treated at a single institution. METHODS: We retrospectively reviewed the records of 75 patients with pathologically confirmed MFS of the extremities who underwent surgery in the last 25 years. We compared the age, sex, tumor size and location, Fédération Nationale des Centres de Lutte Contre le Cancer (FNCLCC) grade and the American Joint Committee on Cancer (AJCC) stage. Median age was 49.7 years (range, 1 to 88 y). Site of disease was: upper extremity (25.4%), lower extremity (66.6%) and pelvic (8%). Patients had low, intermediate and high-grade, in: 29.3%, 24% and 46.7% of tumors, respectively. Tumors were categorized as =/< 5 cm (13.3%), > 5 and < 10 cm (42.7%), > 10 and < 15 cm (9%) and =/> 15 cm (18.7%). In total, 26.7% received postoperative radiotherapy. All patients underwent surgery. Margins were negative in 76% and positive in 24%. Bivariate Cox regression analysis was utilized to determine associations between clinical and treatment factors with LR. RESULTS: Median follow-up time was 30.7 months (range, 1.8 to 383.8 m). We found a 26.7% of LR. Distant metastasis was reported in 27 (36%) patients. The most common sites of metastasis were: lung (92.6%) and lymph nodes (18.5%). The overall survival rate in patients with metastasis was 21.2 months (range, 4.8 to 114.8 m). Predictors of LR were: positive margins (hazard ratio 5.47, 95% confidence interval, 2.23-13.40, P < 0.001) and distant metastasis (hazard ratio 10.24, 95% confidence interval, 3.53-26.68, P < 0.001). Predictors of overall survival free of LR were: grade, positive margins (hazard ratio 3.18, 95% confidence interval, 1.51-6.70, P =0.001), and distant metastasis (hazard ratio 15.23, 95% confidence interval, 5.57-41.61, P= 0.001). Predictors of overall survival were grade, LR (hazard ratio 5.13, 95% confidence interval, 2.15-12.24, P < 0.001), and distant metastasis (hazard ratio 540.97, 95% confidence interval, 5.04-58112.03, P < 0.001). CONCLUSION: In this institutional series of MFS, positive margins and distant metastasis were significantly associated with a higher risk of LR. Tumor grade, LR, positive margins and distant metastases were significant predictors of overall survival poor prognosis

Human chorionic gonodotropin (HCG) affected in various ways cell cultures infected with strains of Rous sarcoma virus (RSV). The cell cultures studied were chick embryo fibroblasts (CEF), normal rat kidney cells infected with temperature-sensitive mutant (LA31-NRK) and a wild type RSV (B77-NRK). HCG increased the rate of transformation and viral titer of CEF cells infected with RSV, but not B77-NRK. HCG increased significantly transformation rates of LA31-NRK, only if the temperature sensitive transformation process was first delayed by incubation at non-permissive temperatures. It is suggested that some postinfective, pretransformational event(s) may operate before viralmediated transformation rates are increased by HCG.