Glicocorticóides são utilizados no tratamento de doenças auto-imunes e inflamatórias. Um novo composto, arilpirazola (L5) exibiu efeito antiinflamatórios e um perfil reduzido de efeitos colaterais. Avaliamos ações antiinflamatórias do L5 in vivo e os efeitos do L5 na estrutura e biomecânica ósseas em camundongos C57BL/6J. Prednisolona (Pred) e L5 reduziram o número de total leucócitos na dose de 2,1 mg/kg.pc/dia e 2,4 mg/kg.pc/dia, respectivamente. A Pred reduziu a massa corporal e o L5. Pred e L5 promoveram aumento na massa do coração. A Pred promoveu redução na massa muscular, enquanto que o L5 não teve efeito. Pred e L5 não alteraram o tecido adiposo. Na análise por microtomografia computadorizada o tratamento com L5 diminuiu BV/TV, Tb/Sp e DA, já a Pred reduziu apenas Tb/Sp. Pred e L5 não promoveram alteração no osso cortical. Pred não alterou parâmetros biomecânicos do fêmur e da tíbia e L5 reduziu energia em quebra da tíbia. Este estudo sugere que o L5 tem o mesmo potencial anti-inflamatório da Pred e que não se mostrou deletério à massa muscular. / Glucocorticoids are used to treat autoimmune and inflammatory diseases. A new compound, arilpirazola (L5) exhibited anti-inflammatory effect and reduced side effect profile. We evaluated the anti-inflammatory actions in vivo L5 and L5 on the effects of structure and biomechanical bone in mice C57BL/6J. Prednisone (Pred) and L5 reduced the overall number of leukocytes in a dose of 2.1 mg/kg.pc/day and 2.4 mg/kg.pc/day, respectively. The Pred decreased body mass and not L5. Pred and L5 caused an increase in heart mass. The Pred promoted reduction in muscle mass, while the L5 had no effect. Pred and L5 did not alter adipose tissue. The analysis by computed microtomography treatment with L5 decreased BV/TV, Tb/Sp and DA, since the only Pred reduced Tb/Sp. Pred and L5 did not promote changes in cortical bone. Pred has not altered biomechanical parameters of the femur and tibia and L5 reduced energy breaks the tibia. This study suggests that the L5 have the same potential anti-inflammatory Pred and was not deleterious to the muscle.

As enfermidades endócrinas, notadamente o hiperadrenocorticismo, têm grande importância dentre os quadros mórbidos que acometem a espécie canina. A produção excessiva de ACTH pode, nas adrenais, estimular o aumento não só de glicocorticóides, mas também de hormônios sexuais. Os objetivos do presente estudo foram: avaliar as concentrações séricas dos hormônios esteroidais sexuais (progesterona, 17-hidroxiprogesterona, testosterona e androstenediona), em cães com hiperadrenocorticismo de decurso natural (não iatrogênico) e em cães hígidos; e correlacionar as alterações do perfil esteroidal sexual em cães com hiperadrenocorticismo às manifestações clínicas tegumentares e sistêmicas. Foram utilizados 14 cães com hiperadrenocorticismo endógeno e 15 cães hígidos, os quais compuseram o Grupo controle. O Grupo 1 (animais com hiperadrenocorticismo) foi submetido às determinações bioquímicas, hematimétricas, exame de urina, ultra- sonografia abdominal e ao teste de supressão com dexametasona em dose baixa com colheita basal e oito horas após supressão. Tanto os animais doentes (Grupo 1) quanto aqueles hígidos do (Grupo 2) foram submetidos ao teste de estimulação com ACTH com determinação dos esteróides sexuais no momento zero e após uma hora da administração do fármaco. Os achados mais freqüentes nos animais doentes foram: polidpsia, poliúria, polifagia, cansaço fácil, intolerância ao exercício, abdômen abaulado, hepatomegalia e alterações dermatológicas. As alterações laboratoriais encontradas nos cães com hiperadrenocorticismo foram: hiperfosfatasemia alcalina, hipertrigliceridemia, hipercolesterolemia, leucocitose por neutrofilia, linfopenia, eosinofilia, monocitose, hipercortisolismo basal e após supressão com dexametasona. No exame de urina evidenciou-se hipostenúria, bacteriúria e glicosúria. Na ultra- sonografia, adrenomegalia e hepatomegalia foram os achados mais freqüentes. As determinações dos esteróides sexuais foram realizadas nos dois grupos e os valores detectados nos animais hígidos serviram de comparação com aqueles enfermos onde foram observados, no momento basal, aumentos de testosterona (três cães) e 17-hidroxiprogesterona (um cão). Após o estímulo com ACTH observou-se aumento da testosteronemia em três cães, da 17-OHP em cinco animais e em um hiperprogesteronemia. / The endocrine disorders, especially hyperadrenocorticism, has notorious importance among all the diseases that affect the canine species. The high production of ACTH can stimulate the adrenals to produce highly amount of glicocorticoid and sexual hormones. The aim of this study were: determine the serum concentration of sexual hormones (progesterone, 17-hydroxyprogesterone, testosterone and androstenedione) in dogs with natural hyperadrenocorticism (not iatrogenic) and in health dogs, and correlate the alterations between sexual steroids in dogs with hyperadrenocorticism and the clinical manifestations of skin and systemic. It was selected 14 dogs with natural hyperadrenocorticism and 15 healthy dogs that were the control group. The group 1 (dogs with hyperadrenocorticism) were submitted to bioquimical determination, CBC, urine test, abdominal ultrasonography and the low dose of dexamethasone suppression test, with two gather, basal and eight hours after use of dexamethasone. Both Group 1 and 2 were submitted to ACTH stimulation test with determination of sexual steroids at first moment (zero moment) and after one hour of ACTH. The most often find on group 1 (dogs with hyperadrenocorticism) were: polydpsia, polyuria, polyphagia, high exhaustion exercise intolerance, pot belly abdomen, hepatomegaly and the dermatologic alterations. The laboratorial alterations on Group 1 were: high alkaline phosphatase, high triglycerides, high cholesterol, leukocytosis, neutrofilia, linfopenia, eosinofilia, monocytosis, high basal cortisol and after suppression with dexamethasone. At the urine test hypostenuria, high prevalence of bacteria and glicosúria. At ultrasonography adrenomegaly and hepatomegaly were most frequently finds. The sexual steroids rating were done in both groups and the results of healthy dogs (Group 2) were used of reference values of comparison with sickness dogs (Group 1), at zero moment were seen the rise of values of testosterone (tree dogs) and 17-hydroxyprogesterone (one dog). After stimulations of ACTH were seen the rise of testosterone on tree dogs, the 17-hydroxyprogesterone in five dogs e the progesterone in one dog.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Este trabalho descreve a investigaÃÃo fitoquÃmica de Croton regelianus (Euphorbiaceae), visando o isolamento e caracterizaÃÃo estrutural de novos constituintes quÃmicos com potencial farmacolÃgico, bem como a investigaÃÃo da composiÃÃo quÃmica dos Ãleos essenciais e avaliaÃÃo de seu potencial biolÃgico. O estudo dos Ãleos essenciais das folhas de C. regelianus resultou na identificaÃÃo de 20 constituintes, correspondendo a mais de 98% da composiÃÃo de cada Ãleo, ambos constituÃdos exclusivamente por monoterpenos. O Ãleo essencial e o ascaridol, componente majoritÃrio, mostraram significante atividade frente Ãs larvas do Aedes aegypti e Artemia sp, e moderada atividade nematostÃtica contra ao fitonematÃide Meloidogyne incognita. Ambos, Ãleo essencial e ascaridol, tambÃm exibiram potente atividade anticancer. A investigaÃÃo quÃmica realizada com os extratos hexÃnico e etanÃlico das folhas e talos da referida espÃcie resultou no isolamento e caracterizaÃÃo de dez substÃncias. Do extrato hexÃnico das folhas foram isolados o triacontanol, fitol, -sitosterol, (3R, 4R, 6S)-3,6-dihidroxi-1-menteno, enquanto do extrato etanÃlico foi isolado o glicosÃdeo do -sitosterol. Do extrato hexÃnico dos talos isolou-se uma mistura dos esterÃides 6b-hidroxi-campest-4-en-3-ona e 6b-hidroxiestigmast-4-en-3-ona, alÃm de (4aS,8aS,)-4,4a,8a,9,10,10a-hexahidro-8a-hydroxi-1,1,4a,7-tetrametilfenantreno-2,6(1H,3H,)-diona. Do extrato etanÃlico obteve-se o sesquiterpeno 1a-hidroximetil-6b-hidroxi-4a-metil-7b-(1-metiletil)-4b,11b-epoxi-decahidroazuleno e a cumarina cleomiscosina A. A determinaÃÃo estrutural das substÃncias foi realizada atravÃs do uso de tÃcnicas espectromÃtricas como: infravermelho (IV), espectrometria de massa (EM e EM-IES) e ressonÃncia magnÃtica nuclear de hidrogÃnio (RMN 1H) e carbono-13 (RMN 13C), incluindo tÃcnicas bidimensionais (COSY, HSQC, HMBC, NOESY) e comparaÃÃo com dados descritos na literatura, enquanto a composiÃÃo quÃmica dos Ãleos essenciais estudados foi determinada por CG-EM e CG-DIC. O potencial citotÃxico das substancias isoladas foi avaliado frente Ãs linhagens de cÃlulas tumorais humanas: cÃlon (HCT8), mana (MDA-MB-435), leucemia (HL60) e cÃrebro (SF295), porÃm nÃo apresentaram atividade citotÃxica. / This work describes the phytochemical investigation of Croton regelianus (Euphorbiaceae), with the purpose to isolate and characterize new bioactive secondary metabolites, as well as, to investigate the chemical composition of the leaf essential oils and to evaluate its biological potential. The study of the leaf essential oils from samples collected at two different geographical sites resulted in the identification of 20 components. More than 98% of the chemical composition, exclusively monoterpenes, of each oil was determined. The essential oil and its major component, ascaridole, showed potent activity against the Aedes aegypti and Artemia sp larvae and moderate activity against the nematode Meloidogyne incognita. Both, the essential oil and ascaridole also exhibited potent anticancer activity. The phytochemical investigation of hexane and ethanol extracts from leaves and branch of C. regelianus conducted to the isolation and characterization of ten substances. From the hexane extract of the leaves were isolated triacontanol, phytol, b-sitosterol and (3R, 4R, 6S)-3,6-dihydroxy-1-menthene, while from ethanol extract were isolated the b-sitosterol glycoside. From the hexane extract of branch were isolated the steroidal mixture 6b-hydroxy-campest-4-en-3-one and 6b-hydroxyestigmast-4-en-3-one, and the (4aS,8aS,)-4,4a,8a,9,10,10a-hexahydro-8a-hydroxy-1,1,4a,7-tetramethylphenanthrene-2,6(1H,3H,)-dione. From the ethanol extract was obtained the sesquiterpene 1a-hydroxymethyl-6b-hydroxy-4a-methyl-7b-(1-methylethyl)-4b,11b-epoxy-decahydroazulene and the coumarin cleomiscosine A. The structure of all compounds were elucidated by spectroscopic methods, such as IR, LREIMS, HRESIMS, 1H and 13C NMR, and by comparison with published data for closely related compounds. Even though the cytotoxic properties of all compounds have been tested no one showed any activity.

A cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa (GC/MS) é na atualidade a técnica analítica de escolha para a detecção de esteróides androgênicos anabólicos (EAA) em amostras biológicas. Os EAA, apesar de determinarem alterações endócrinas e bioquímicas graves em seus usuários, são amplamente utilizados no âmbito esportivo. O presente trabalho teve como objetivo a validação de um método para a detecção de EAA e/ou seus produtos de iotransformação em urina e avaliação de seus efeitos tóxicos sobre os parâmetros séricos laboratoriais. O estudo foi realizado em 20 voluntários freqüentadores de academias da cidade de São Paulo (SP), os quais responderam a um questionário e cederam amostras de urina e sangue. Os dados obtidos dos 10 voluntários usuários de EAA (teste) foram estatisticamente comparados com os de 10 voluntários não usuários (controle). O método analítico validado apresentou-se adequado para a aplicação em programas de controle de dopagem no esporte e os dados séricos demonstraram aumento nos níveis de LDL (178,2 vs 117,6 mg/dL; p< 0.001) e queda nos de HDL (13,8 vs 44,6 mg/dL; p< 0.001), LH (0,45 vs 2,69 mUI/dL; p< 0.001) e FSH (0,67 vs 3,88 mUI/dL; p< 0.001) nos voluntários usuários de EAA. Os questionários demonstraram diferentes padrões de uso para os EAA, os quais eram obtidos sem receita médica em farmácias ou em lojas de suplementos alimentares e utilizados em associação com outros fármacos ou drogas de abuso. Os resultados desse trabalho demonstram alterações no perfil lipoprotéico e supressão do eixo hipofisário em usuários crônicos de EAA, além da necessidade da adoção de ações educativas junto à população expostas a tais substâncias. / Gas chromatography-mass spectrometry (GC/MS) has been applied as standard analytical method for detection of anabolic steroids (AAS) in biological samples. The AAS have been used extensively in sports, despite of their reported toxicological effects in biochemistry and endocrine profile. The aim of this study was the validation of an analytical method for the detection of AAS and their metabolites in urine samples and evaluation of their effects on blood laboratories parameters. The study was conducted with 20 volunteers of professionally equipped private gym in São Paulo. Urine and blood samples were drawn and a questionnaire was answered. The data from 10 active users of AAS (test group) was statistically compared to 10 nonusers (control group). The optimized method was shown to be suitable for sports antidoping control programs and significant differences were found in laboratory parameters of test group: increase of LDL (178,2 vs 117,6 mg/dL; p< 0.001) and reduction in HDL (13,8 vs 44,6 mg/dL; p< 0.001), LH (0,45 vs 2,69 mUI/dL; p< 0.001) and FSH (0,67 vs 3,88 mUI/dL; p< 0.001) serum levels. The questionnaire demonstrated distinct user\'s profile of AAS, which were bought in drugstores or food supplemental stores and were frequently used in association with other medicines and drugs of abuse. These results indicate that chronic anabolic steroids intakes cause an alteration in serum lipoprotein profile and suppression of the hypothalamus-pituitary glandgonad axis as well as the necessity of educational programs to people exposed to AAS.

O objetivo deste trabalho foi avaliar de maneira detalhada e sistemática os perfis hormonais sanguíneos, fecais, urinários e salivares das progestinas e estrógenos durante o ciclo estral induzido de ovinos. Foram colhidas amostras diárias durante um período de 60 dias de sete fêmeas adultas (n=8) saudáveis e sexualmente maduras. Antes do início da fase de colheita das amostras, todos os animais foram submetidos ao protocolo de tratamento hormonal para indução e sincronização do cio durante dozes dias. O primeiro ciclo ovariano de cada animal desse experimento, detectado logo após a indução do cio foi descartado e seus valores não foram utilizados nas análises hormonais, pois poderiam estar sob o efeito dos hormônios exógenos. A concentração dos progestágenos foi determinada pelas técnicas analíticas de Radioimunoensaio (RIE) e Enzimaimunoensaio (EIE) e os estrógenos por RIE. Houve correlações entre as concentrações de progesterona medidas nas matrizes sérica e fecal, sérica e salivar, fecal e salivar (r=0,90, p<0,0001; r=0,90, p<0,0001; r=0,92, p<0,0001, respectivamente) durante os ciclos estrais observados (n=15). Obtivemos correlação (r=0,74, p<0,0001) entre as concentrações dos estrógenos quantificados nas matrizes sérica e fecal, mas não entre estas concentrações e aquelas medidas na matriz salivar. Não obtivemos nenhuma correlação entre as concentrações medidas na matriz urinária com as quantificadas nas outras matrizes para nenhum dos hormônios estudados. Obtivemos correlação entre as concentrações de progesterona medidas na matriz fecal pelos métodos de RIE e EIE (r=0,78, p<0,0001) e também na matriz salivar pelos dois métodos empregados (r=0,81, p<0,0001). Os resultados do presente experimento indicam que os imunoensaios utilizados podem ser utilizados para a avaliação das concentrações de progestágenos nas matrizes fecal e salivar durante o ciclo estral em ovinos. / The aim of the present work was evaluate the hormonal profiles of progestins and estrogens in blood, feces, urine and saliva during the induced estral cycle in ovine. Samples were collected daily a 60-day period from eight adult (n=8) cycling ewes. The animals were previously submitted to a protocol of estrus induction and synchronization for twelve days. In order to avoid the effect of exogenous hormones, the first cycle immediately after the synchronization was not considered for hormonal analysis. Progestagen concentrations were quantified by two analytical techniques, radioimmunoassay (RIA) and enzyme immunoassay (EIA). Estrogen concentrations were assessed by radioimmunoassay. Correlations in progesterone concentrations were found to be significant for serum and feces, serum and saliva and feces and saliva (r=0.90, p<0.0001; r=0.90, p<0.0001; r=0.92, p<0.0001, respectively) during the estrous cycles (n=15). Estrogen concentrations in the serum and feces were also positively correlated (r=0.74, p<0.0001). Salivary concentrations of estrogens were not correlated with fecal or serum concentrations of the same hormone. No correlation was found between urinary concentrations and concentrations found in other matrixes for both progestagens and estrogens. Concentrations of progestagens obtained using RIA and EIA were correlated on feces (r=0.78, p<0.0001) and saliva (r=0.81, p<0.0001). Results indicate that both immunoassays used in the present experiment can be used to evaluate progestagen concentrations on fecal and salivary matrixes during the estrous cycle of sheep.

A reprodução em peixes é controlada pelo eixo hipotálamo-hipófise-gônadas e os fatores que alteram o funcionamento adequado deste eixo são chamados de disruptores endócrinos. Muitos metais têm o papel de disruptores endócrinos e dentre eles destaca-se o alumínio que, além de afetar o sistema endócrino de algumas espécies de peixes, pode alterar a deposição e/ou mobilização de substratos energéticos nestes animais. Sabe-se que o pH pode modular em muitos casos as respostas fisiológicas decorrentes da exposição de peixes a alguns metais, como é o caso do alumínio. Desta forma, o presente trabalho objetiva avaliar as possíveis alterações na fisiologia reprodutiva de duas espécies de peixes teleósteos continentais quando os mesmos são expostos às altas concentrações de alumínio e em pH ácido. Para avaliar estes efeitos foram conduzidos 2 tipos de experimentos: um crônico, realizado com fêmeas de uma espécie de desova total (sincrônica em grupo), Astyanax fasciatus (lambari), durante a sua fase reprodutiva, pelo período de 14 dias; e outro agudo, pelo período de 96 horas, com fêmeas de Oreochromis niloticus (tilápia), espécie de desova parcelada (assincrônica) também em fase reprodutiva. Foram determinadas as concentrações plasmáticas de hormônios esteróides como o cortisol, o estradiol e a 17 &#945; OHP utilizando-se kits de elisaimunoensaio; substratos energéticos, como proteínas e lipídios, no fígado, plasma e gônadas, assim como os principais íons plasmáticos (cálcio, potássio, cloro, magnésio e sódio) também foram analisados. Análises histológicas das gônadas, fígado e brânquias foram conduzidas com a finalidade de avaliar o efeito do alumínio e do pH ácido nestes tecidos. Os resultados do presente trabalho evidenciam que o alumínio e o pH ácido afetam a fisiologia reprodutiva de peixes teleósteos, mas o efeito deste metal está relacionado à estratégia reprodutiva dos animais. Os dados mostram que em peixes de desova total, como o lambari, os efeitos do alumínio são mais evidentes na fase de vitelogênese, alterando a ação dos estrógenos e os processos de mobilização de lipídios e proteínas em uma fase anterior à maturação final. Já na tilápia, os efeitos do alumínio e do pH ácido são mais evidentes na fase de maturação final e ovulação, uma vez que alterações foram observadas na concentração do progestágeno 17 &#945; OHP, precursor do MIS em peixes teleósteos. / Fish reproduction is controlled by the hypothalamic-pituitary-gonad axis and factors that alter the normal function of this axis are known as endocrine disrupters. Many metals act as endocrine disrupters, including aluminium, a metal that affects endocrine and metabolic parameters in fish. It is also known that the pH can alter the endocrine disruptor effect of metals such as aluminium in fish. Considering that, this work aims to analyze the alterations in the reproductive physiology of two freshwater teleosts exposed to high aluminium concentrations in an acidic pH environment. To evaluate these effects, two experiments were conducted: the first experiment was designed to evaluate chronic effects by using mature Astyanax fasciatus females, a group synchronic species over a 14 day period; the second experiment was aimed to assess acute effects over a 96 hour period using Oreochromis niloticus mature females, an asynchronous species. The plasma profile of the steroids hormones, cortisol, estradiol and 17 &#945; OHP were analyzed using EIA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) kits. Metabolic substrates as protein and lipids were analyzed in liver, gonads and plasma and the main plasmatic ions (potassium, sodium, chloride, magnesium and calcium) were also determined. Histological analyses were performed in liver, gonads and gills to evaluate the influence of aluminium on these organs. The results showed that aluminium as well as the acidic pH affects the reproductive physiology of the analyzed species, but the effects were different, according to the reproductive strategy of the respective species. Group synchronic species suffer from the aluminium effects in vitellogenic events, such as estradiol, lipid and protein concentrations in a period prior to final maturation. In contrast, the effects of aluminium and pH in tilapia were more evident in final maturation/ovulation processes than in vitellogenesis, as a result of alteration in the 17 &#945; OHP concentration, the MIS (maturation induction steroid) precursor in teleosts.

A redução dos hormônios gonadais seja pelo processo natural de falência folicular denominado nas humanas de menopausa, seja pela ooforectomia, está associado com aumento da incidência de doença cardiovascular em mulheres no período pós menopausa. O objetivo desse estudo é avaliar o efeito da ooforectomia e a suplementação com DHEA sobre a morfologia dos cardiomiócitos, a expressão de proteínas celulares envolvidas com crescimento e apoptose celular e a função cardíaca. A ooforectomia induz maior ganho de massa corporal e do coração, no entanto, a avaliação morfológica do VE mostrou que há uma redução da espessura dos cardiomiócitos e do número de núcleos. Ademais, o immunoblotting demonstrou uma diminuição na expressão das proteínas IR, IRS1 e AKT nos corações das ratas ooforectomizadas e os parâmetros hemodinâmicos foram semelhantes entre os grupos. O tratamento com DHEA reverteu a redução do número de núcleos sem interferir nos demais parâmetros avaliados. Os dados obtidos nos permite concluir que a ausência dos esteroides gonadais por si só resulta em modificações morfológicas dos cardiomiócitos que podem estar relacionados ao processo de apoptose sem afetar a função de bomba do coração e o uso do DHEA é capaz de reverter a redução numérica dos núcleos. / The reduction of gonadal hormones by menopause, the natural process of failure in the human follicle, or by surgical removal, is associated with increased incidence of cardiovascular disease in postmenopause women. The aim of this study is to evaluate the effect of oophorectomy and the DHEA supplementation on the morphology of cardiomyocytes, on the expression of proteins involved in cell growth, on apoptosis (IGF-1R, IR, IRS-1, PI3K, AKT, MAPKp42/44, JAK2) and on the cardiac function. Oophorectomy enhances both the body mass e heart weight, however the left ventricle showed a reduction in cardiomyocyte thickness by 15% and in the number of nuclei by 20%. Moreover the immunoblotting showed a decrease from 25 to 50% in the expression of IR, IRS-1 and AKT proteins in the hearts of oophorectomized rats. The hemodynamic parameters were similar between groups. Treatment with DHEA reversed the reduction in the number of nuclei with no change in the other parameters evaluated. Our data allow us to conclude that the absence of gonadal steroids per se induces morphological changes in the cardiomyocytes that may be related to apoptosis with no change on the heart pump function. The DHEA supplementation is able to reverse the reduced number of nuclei.

Orientadores: Sophie Françoise Mauricette Derchain, Liliana Aparecida Lucci de Ângelo Andrade / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T22:51:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sallum_LuisFelipeTrincasAssad_M.pdf: 2587982 bytes, checksum: 9d99399f9b04b5bff06068e52749a549 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Introdução: Evidências recentes sugerem que a estimulação hormonal dos esteróides pode estar envolvida no desenvolvimento e prognóstico das neoplasias de ovário. O estrogênio é um importante regulador do crescimento e diferenciação das células ovarianas, enquanto a progesterona pode oferecer proteção contra os efeitos mutagênicos do estrógeno, bloqueando o crescimento e induzindo a diferenciação e apoptose. No entanto, os dados atuais são limitados e os resultados conflitantes. Objetivo: Avaliar os padrões da expressão dos receptores de estrógeno (RE) e de progesterona (RP) em tumores borderline (TBO) e carcinomas de ovário. Foram avaliadas o tempo livre de doença (TLD) e a sobrevida total (ST) das mulheres com carcinoma em relação às expressões destes receptores esteróides. Métodos: Foi avaliada a expressão dos RE/RP em 172 carcinomas de ovário e 38 TBOs, em mulheres operadas de 1993 a 2008 na Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP, Brasil, e acompanhadas por até 60 meses. A expressão dos RE/RP foi avaliada por imunoistoquímica (IHQ) em microarranjo de tecidos (TMA). Para as análises estatísticas utilizamos os testes: Qui-quadrados (e exato de Fisher), modelo múltiplo linear generalizado (regressão logística), Cox de risco proporcional, representação de Kaplan Meyer e Mantel-Cox. Não foi possível calcular TLD e ST para os TBOs, pois não ocorreram mortes neste grupo. Resultados: Foram incluídos 28(73.7%) TOBs mucinosos e 10(26.3%) serosos. Os carcinomas de ovário foram compostos por 79(46%) serosos, 44(25.5%) mucinosos, 17(9.8%) endometrióides, 16(9.3%) mistos, 10(5.8%) de células claras, 4(2.4%) adenocarcinoma-SOE e 2(1.2%) de células transicionais. Entre os TBOs, 11(28.9%) foram positivos para a expressão do RE, em comparação com 61(35.5%) carcinomas (p=0.55). Dez (26.3%) dos TBOs e 47(27%) dos carcinomas foram positivos para RP (p=0.90). Nos TBOs, a expressão dos RE e RP foi maior nos serosos ao comparar com a dos mucinosos (p<0.01). Nos carcinomas, a expressão do RE foi maior nos serosos quando comparada com a dos mucinosos (p<0.01) e células claras (p<0.01), e endometrióides quando comparado com os mucinosos (p<0.01). A expressão do RP foi maior nos serosos quando comparada com a dos mucinosos (p<0.01), e endometrióides quando comparado com a dos mucinosos (p<0.01) e serosos (p=0.03). Considerando a expressão combinada dos receptores, a expressão do receptor foi maior nos serosos quando comparads com a dos mucinosos (p<0.01) e células claras (p=0.02), e nos endometrióides quando comparada com a dos mucinosos (p<0.01). Em geral, os tumores serosos e endometrióides foram preponderantementes RE/RP positivos, enquanto os tumores mucinosos e de células claras foram preponderantementes RE/RP negativos. Posteriormente, os tumores com padrões similares na expressão dos RE/RP foram agrupados e analisados: serosos com endometróides e mucinosos com células claras e outros. A expressão dos RE/RP nos carcinomas de ovário não teve nenhuma associação com a idade, estágio do tumor, grau, ascite e doença residual. TLD e ST não foram afetados pela expressão dos RE e RP. TLD não foi afetada por nenhuma das características clínico-epidemiológicas estudadas. ST foi significativamente maior (p<0.01) apenas em mulheres com doenças estádios II-IV e para aqueles com doença residual após a cirurgia (p=0,01). Conclusões: Em geral, os tumores serosos e endometrióides foram preponderantementes RE/RP, enquanto os tumores mucinosos e de células claras foram preponderantementes RE/RP negativos. TLD e ST não foram afetados pela expressão destes receptores / Abstract: Background: Recent lines of evidence suggest that steroid hormonal stimulation may be implicated in the development and prognosis of ovarian malignancies. Estrogen is an important regulator of growth and differentiation of ovarian cells, while progesterone may offer protection against the mutagenic effects of estrogens by blocking cell growth and inducing cell differentiation and apoptosis. However, current data are very limited, and study results are conflicting. Objective: Examine the patterns of estrogen (ER) and progesterone receptors (PR) in borderline tumors (BOTs) and ovarian carcinoma. The disease-free (DFS) and overall survivals (OS) of women with ovarian carcinoma were assessed as related to the expression of these steroid receptors. Methods: The expression of ER/PR was assessed in 172 ovarian carcinomas and 38 BOTs, treated from 1993 to 2008 at the State University of Campinas - UNICAMP, Brazil, and followed up for up to 60 months. ER/PR expression in carcinomas and BOTs was assessed with TMAbased immunohistochemistry. Statistical analysis comprised Chi-squares test (and Fisher's Exact), multivariate generalized linear model using the binomial distribution (logistic regression), Cox Proportional hazards, Kaplan-Meyer method and Mantel-Cox log-rank. We did not calculate DFS or OS for women with BOTS were not calculate because the number of events in that group was null. Results: Twenty-eight(73.7%) mucinous and 10(26.3%) serous BOTs were included. Ovarian carcinomas comprised 79(46%) serous, 44(25.5%) mucinous, 17(9.8%) endometrioid, 16(9.3%) mixed, 10(5.8%) clear-cell, 4(2.4%) adenocarcinoma-NOS and 2(1.2%) transitional cell. Of the BOTs, 11(28.9%) were positive for ER, compared to 61(35.5%) of the carcinomas (p=0.55). Ten cases (26.3%) of the BOTs and 47(27%) of the carcinoma (p=0.90). The expressions of ER and PR were higher in serous BOTs when compared to mucinous tumors (p<0.01). In carcinomas, ER expression was higher in serous compared to mucinous (p<0.01) and clear cell tumors (p<0.01), and in endometrioid compared with mucinous tumors (p<0.01). PR expression was higher in serous compared to mucinous (p<0.01) and in endometroid compared to mucinous (p<0.01) and serous tumors (p=0.03). Considering combined receptor status, receptor expression was higher in serous compared to mucinous (p<0.01) and clear cell tumors (p=0.02), and in endometrioid compared with mucinous tumors (p<0.01). Overall, serous and endometrioid tumors were predominantly ER/PR positive, whereas mucinous and clear-cell tumors were preponderantly ER/PR negative. Subsequently, tumors with similar patterns of ER/RP expression were gathered and analyzed: serous with endometrioid and mucinous with clear cell and others. ER/PR status of ovarian carcinomas bore no relation to the age, tumor stage, grade, ascites and residual disease. DSF and OS were not affected by the expression of ER and PR. DFS was not affected by any of the studied epidemiological and clinical features. OS was found to be significantly higher (p<0.01) only for women with disease stages II-IV and for those with residual disease after surgery (p=0.01). Conclusion: Overall, serous and endometrioid tumors were predominantly ER/PR positive, whereas mucinous and clear-cell tumors were preponderantly ER/PR negative. The ER/PR status of ovarian carcinomas bore no relation to the age, tumor stage, grade, ascites and residual disease. DSF and OS were not affected by the expression of these receptors / Mestrado / Oncologia Ginecológica e Mamária / Mestre em Ciências da Saúde

L’étude du lien entre l’exposition de l’Homme aux substances chimiques, notamment via son alimentation,et sa santé est un sujet de préoccupation majeure dans notre société qui présente des challenges multiples.Nous nous sommes attelés à l’un d’entre eux par la production de données analytiques fiables relatives à la contamination des denrées alimentaires et des fluides biologiques humains. Le développement de méthodes analytiques reposant sur des technologies en rupture, à même de s’adresser aux paris de la mesure de composés chimiques émergents (e.g. les retardateurs de flamme bromés) ou historiques mais sous le prisme de la sensibilité et du haut débit (e.g. les stéroïdes, les pesticides organochlorés, les dioxines et les polychlorobiphényles) a été au cœur de ce travail. Le couplage GC/APCI/MS sur système triple quadripolaire s’est imposé au cours de nos évaluations. L’association de la chromatographie en phase gazeuse et de l’ionisation chimique à pression atmosphérique a apporté un gain en sélectivité remarquable comparée aux approches traditionnellement retenues dans le domaine et a autorisé l’exploration des ultra-traces dans des matrices biologiques complexes. Cette géométrie nous a permis d’innover en pratiquant des séparations rapides sur colonne capillaire ultra-courte de 2,5 m. La vitesse de balayage et l’excellente sensibilité de l’analyseur de masse nous ont en outre donné accès à une analyse quantitative fiable et multi-paramètres. Ce travail ouvre d’excellentes perspectives vis-à-vis de la production de données d’exposition externe et interne élargies en réponse aux défis à venir entourant la caractérisation de l’exposome Humain. / The study of the link between Human exposure tochemical substances (notably via his food the intake) and Health, is a major concern in our society and poses many challenges. We endeavoured to address one of them by producing reliable analytical data on foodstuffs and human biological fluids contamination. The development of analytical methods based on breakthrough technologies, capable of challenging theemerging (e.g. brominated flame retardants) or historical compounds measurement but through the prism of sensitivity and high throughput (e.g. steroids,organochlorine pesticides, dioxins andpolychlorobiphenyls), was at the heart of our work.Using a GC/APCI/MS with a triple quadripole systememerged as a favorable choice as our evaluations progressed. The association of gas chromatography and atmospheric pressure chemical ionisation brought in a remarkable gain in terms of selectivity, compared to the approaches traditionally selected in this field, andauthorized ultra-trace exploration in complex biologicalmatrices. This geometry allowed us to innovate by performing fast separations on an ultra-short 2.5 mcolumn. Besides, the mass analyser scan speed and high sensitivity gave us access to a reliable and multiparameters quantitative analysis. This work opens up excellent perspectives for the production of expanded external and internal exposure data to meet the future challenges surrounding Human exposome characterisation.

Orientador: Marcos Nogueira Eberlin / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-27T06:43:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MartinsJunior_HelioAlves_D.pdf: 12398214 bytes, checksum: f76ac9572671aeed993f82ac2167745d (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A Espectrometria de Massas (MS) é uma das técnicas mais empregadas em aplicações bioanalíticas para detecção e quantificação inequívoca de compostos de interesse biológico, provendo informações de extrema relevância para o entendimento dos sistemas biológicos em geral. Neste trabalho, foram realizados estudos de quantificação de hormônios esteroidais por espectrometria de massas no campo da produção animal, por se tratar de uma técnica pouco difundida atualmente na área veterinária. A primeira parte do trabalho consistiu no estudo quantitativo do perfil de quatro hormônios esteroidais em soro de cães da raça Golden Retriever, portadores do gene da distrofia muscular de Duchenne (GRMD). Os animais foram acompanhados durante todas as fases do ciclo estral e os hormônios foram dosados para o entendimento da dinâmica destes compostos ao longo do ciclo. Os resultados comparativos dos níveis hormonais entre os grupos de estudo e o grupo controle apresentaram, pela primeira vez analisados por espectrometria de massas, informações relevantes sobre os níveis destes hormônios. Nossas observações impulsionaram uma importante discussão sobre a correlação das concentrações dos hormônios analisados frente aos sinais clínicos e desenvolvimento da patologia destes animais. A segunda parte deste trabalho consistiu no emprego da espectrometria de massas de alta resolução e exatidão para quantificação de dez hormônios esteroidais em plasma bovino. A metodologia desenvolvida foi aplicada ao estudo dos níveis plasmáticos dos hormônios em vacas clonadas por transferência nuclear de células somáticas (TNCS). Realizou-se um estudos comparativo da cinética dos níveis em plasma dos hormônios no ultimo mês de gestação dos animais clonados, em relação a animais inseminados por fertilização in vitro (FIV) e ao grupo controle, composto por animais de gestação natural. Os resultados mostraram haver alterações na esteroidogênese das vacas portadoras de embriões derivados de técnicas artificiais de gestação e biotecnologia. Foram observadas alterações significativas das rotas de biosíntese e concentrações de hormônios sexuais e corticóides no ultimo mês de gestação dos animais. Estas diferenças e desregulação do processo de biosíntese dos hormônios analisados, promovem alterações das concentrações de hormônios associados ao processo de sinalização de parto, ineficiente em animais clonados por TNCS / Abstract: Mass spectrometry (MS) is one of the most used techniques in bioanalytical applications for detection and unambiguous quantitation of biological compounds, providing information of greatest relevance for the understanding of biological systems. In this thesis, the tandem mass spectrometry has been applied for quantitation of steroid hormones in the field of animal production, as this technique still remains unusual in the veterinary science. The first part of this work consisted in the quantitative profiling study of four steroids in serum of X-linked Golden Retriever Muscular Dystrophy (GRMD) dogs. The animals were followed during all estrous cycle phases and the hormones were measured to understand the dynamics of these compounds over the estrous cycle. The results comparison among the studied carrier and affected groups versus the control group presented, for the first time by mass spectrometry, relevant information about the levels of these hormones. Our findings stimulated an important discussion about the correlation of the hormones concentrations against clinical signs and development of the pathology of these animals. In the second part of this thesis, the high resolution mass spectrometry was applied for quantification of ten steroid hormones in bovine plasma. The methodology was applied to investigate the steroid plasma levels in cloned-derived catlle by nuclear transfer of somatic cells (SCNT). A comparative study of the plasma steroid dynamics of naturally and artificially conceived bovine pregnancies approaching parturition was carried out. The results revealed changes in the steroidogenesis of recipient cows carrying artificially-derived (ART) conceptuses from biotechnology techniques. Significant changes in the steroids pathway as well as in the concentrations of corticosteroids and sex steroids over the last month of gestation were observed. The steroids pathway dysregulation considerably altered the steroids plasma steroid concentrations in the prior month of parturition contributing to the lack of partutition signaling observed in SCNT-derived pregnant cattle / Doutorado / Quimica Inorganica / Doutor em Ciências