Orientador: Angelo Berchieri Junior / Coorientador: Oliveiro Caetano de Freitas Neto / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Antonio José Piantino Ferreira / Resumo: O tifo aviário é uma doença sistêmica provocada por Salmonella enterica subsp. enterica sorovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG), bactéria que não possui flagelos. Acredita-se que por não produzir flagelos, SG seria pouco reconhecido pelo sistema imune. Deste modo provocaria inflamação de menor intensidade na mucosa, atravessando as barreiras intestinais com mais facilidade e assim desencadeando enfermidade sistêmica severa. Com intuito de investigar essa hipótese, em estudo prévio, construiu-se um mutante de SG capaz de produzir flagelos (SG Fla+) o qual desencadeou resposta imune pro-inflamatória em células de cultivo, além de ter sido menos patogênico para as aves que a estirpe selvagem de SG. No entanto, notou-se que SG Fla+ tende a interromper a produção de flagelos após dois ou mais cultivos consecutivos em meio sólido, tornando-se fenotipicamente aflagelado (SG Fla-). O presente estudo teve por objetivo comparar a patogenicidade de SG Fla+, SG Fla- e SG para aves susceptíveis ao tifo aviário. No primeiro experimento, as taxas de mortalidade provocadas pelas estirpes e excreção fecal das mesmas foram avaliadas. Enquanto que no segundo ensaio, avaliou-se a capacidade de colonização cecal, invasão das estirpes em fígado e baço e ainda a presença e intensidade de lesões macro e microscópicas em órgãos. SG Fla+ provocou mortalidade inferior às estirpes aflageladas, quando utilizou-se o inóculo diluído (106 UFC). Os resultados da excreção fecal demonstram que SG Fla+ foi a estirpe mais excretada. Pôde-se observar que SG e SG Fla- foram recuperadas do conteúdo cecal em quantidades mais elevadas que SG Fla+. SG e SG Fla- foram isoladas mais cedo e em maiores quantidades que SG Fla+ em fígado e baço. No fígado verificou-se hepatomegalia, degeneração, congestão, alterações na coloração (amarelo-esverdeado a esverdeado), reatividade linfoide ... / Abstract: The fowl typhoid is a systemic disease of chickens caused by Salmonella enterica subsp. enterica serovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG), a microorganism that does not produce flagella. It is suggested that due to the absence of flagella SG is poorly recognized by the bird immune system. As a result, just a mild inflammation is induced in the gut mucosa, favoring the development of a severe systemic infection. In order to investigate this hypothesis, in a previous study, a mutant of SG capable of producing flagella (SG Fla+) was constructed. This mutant was able to trigger mRNA pro-inflammatory cytokines e chemokines in cultured cells and was less pathogenic to birds than the wild type strain. However, it was noticed that SG Fla+ trends to stop flagella production after culturing two or more times on solid medium, becoming non-flagelated (SG Fla-). The present study aimed at comparing the pathogenicity of SG Fla+, SG Fla- and SG to birds. In the first experiment, mortality rates caused by strains and fecal excretion were evaluated. In the second assay, the ability of strains in colonizing the ceca and invading liver and spleen were compared. In addition to this, the presence and intensity of macroscopic and microscopic lesions in organs were evaluated. When inoculated in the lower amount (106 CFU) SG Fla+ provoked less mortality than the non-flagellate strains. The results of fecal excretion indicate that SG Fla+ was more excreted than the other strains. It was observed that SG and SG Fla- were recovered from cecal contents in higher amounts than SG Fla+. SG Fla- and SG were isolated earlier and in higher amounts from liver and spleen. In the liver degeneration, congestion, changes in color (greenish-yellow to greenish), lymphoid reactivity and multifocal areas of necrosis were noticed. Spleen was enlarged and congested; foci of necrosis in the white pulp and lymphoid depletion were also ... / Mestre

Orientador: Angelo Berchieri Júnior / Coorientador: Paul Barrow / Banca: Guilherme Correa de Oliveira / Banca: Fabiana Horn / Banca: Raphael Lucio Andreatti Filho / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Resumo: S. Gallinarum (SG) provoca o tifo aviário, doença sistêmica com alta mortalidade em aves. Esse biovar é imóvel devido à falta de flagelos. Foi sugerido que a ausência de flagelo resultaria na indução de resposta pró-inflamatória de menor intensidade na mucosa intestinal, favorecendo o desenvolvimento da infecção sistêmica. Para investigar essa hipótese, um mutante de SG capaz de produzir flagelos (SG Fla+) foi construído. Analisou-se a capacidade deste mutante de invadir células epiteliais renais (CRGs), sobreviver em macrófagos da linhagem HD 11 e induzir a expressão de genes responsáveis por mediadores da resposta imune nestas células, em conjunto com outras estirpes de Salmonella spp. Aliado a isso, comparou-se a patogenicidade de SG Fla+ e SG para aves de uma linhagem para postura comercial, avaliando-se a mortalidade e as alterações macroscópicas. Os resultados demonstraram que o flagelo aumentou a capacidade de invasão das estirpes para CRGs, mas não alterou a sobrevivência de SG Fla+ no interior dos macrófagos HD 11. SG Fla+ induziu a maior aumento da expressão de CXCLi2, IL-6 e de iNOS em CRGs que as estirpes sem flagelos (p<0,05). A expressão de genes responsáveis por mediadores da resposta imune em macrófagos HD11 não esteve ligada a presença de flagelo. SG Fla+ provocou menores taxas de mortalidade que SG (p<0,05). Após 28 dias do desafio, SG Fla+ foi isolada no conteúdo de alguns cecos com alterações sugestivas de inflamação / Abstract: S. Gallinarum (SG) is the causative agent of fowl typhoid, a systemic disease responsible for high mortality rates in birds. This biovar is non-motile due to the lack of flagella. It has been proposed that the absence of flagellum would provoke less pro-inflammatory immune response in the gut, favoring the development of systemic infection. In order to investigate this, a SG mutant strain capable of producing flagella (SG Fla+) was constructed. The capability of this mutant and other Salmonella spp. strains in invading chicken kidney cells (CKCs), surviving in HD 11 macrophages and inducing inflammatory responses in these cells were assessed. In adittion, the pathogenicity of SG Fla+ and SG was comparatively assessed in commercial laying hens. Mortality rates and gross lesions were evaluated. The results shown that flagellum increased the invasiveness of strains to CKCs while its presence did not change the survival of SG Fla+ in HD11 macrophages. SG Fla+ induced higher levels of CXCLi2, IL- 6 and iNOS gene expression than non-flagellated strains did (p<0.05). The expression of genes responsible for mediators of immune responses in infected HD11 macrophages were not related to the presence of flagella. SG Fla+ caused lower mortality rates than SG (p<0.05). SG Fla+ was recovered from the contents of caeca which presented inflammation-like macroscopic alterations not observed in birds infected with SG / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-23Bitstream added on 2014-06-13T20:20:49Z : No. of bitstreams: 1 000735464.pdf: 1949620 bytes, checksum: 606a0ff66a766ef4da41725644d69aa5 (MD5) / Salmonella enterica subespécie enterica sorovar Gallinarum biovar Gallinarum (S. Gallinarum) é o agente causador do tifo aviário, uma doença septicêmica que afeta principalmente aves adultas. Enquanto que Salmonella enterica subespécie enterica sorovar Gallinarum biovar Pullorum (S. Pullorum) é o micro-organismo causador da pulorose, uma doença sistêmica de aves jovens que evolui para infecção persistente em algumas das que se recuperam da enfermidade. Essas bactérias são genética e fenotipicamente semelhantes, mas causam doenças distintas nos seus hospedeiros. Ainda não se sabe quais seriam as informações genéticas responsáveis pelas diferenças na patogenia e epidemiologia do tifo aviário e da pulorose. Com o intuito de investigar essas diferenças, realizou-se o presente estudo, o qual teve por objetivo a comparação dos genomas de S. Gallinarum 287/91, S. Pullorum 449/87 e de S. Pullorum RKS5078 para identificação de regiões de diferenças (“regions of difference” – RODs). Foram identificadas e caracterizadas 68 RODs, buscando correlacioná-las com a patogenicidade desses micro-organismos. Além disso, verificou-se a conservação de algumas dessas RODs em 25 estirpes de S. Gallinarum e 17 de S. Pullorum, todas isoladas de aves com tifo aviário ou pulorose. De modo geral, as RODs continham genes relacionados à funções celulares (reparo de DNA e desagregação de proteínas celulares), produção de energia e virulência. No presente estudo foi observado que a maioria das RODs conservadas era gerada por deleções que, putativamente, provocaram perda de sua função em S. Pullorum. Por esse motivo, foi possível sugerir que a diferente epidemiologia de S. Pullorum poderia ser decorrente de perdas gênicas e não de características adquiridas... / Salmonella enterica subspecie enterica serovar Gallinarum biovar Gallinarum (S. Gallinarum) is the causative agent of fowl typhoid, a septicaemic disease that affects mainly adult birds, whereas Salmonella enterica subespécie enterica serovar Gallinarum biovar Pullorum (S. Pullorum) causes pullorum disease, a systemic disease of young birds that can evolve for persistent infection in some of the birds that recovered. These two bacteria are genetic and phenotypically similar but cause distinct diseases. The genetic bases that would be responsible for these differences are still unknown. For this reason the present study was elaborated and aimed at comparing S. Gallinarum 287/91, S. Pullorum 449/87 and S. Pullorum RKS5078 whole genomes in order to identify regions of difference (RODs). In total, 68 RODs were identified and characterized attempting to correlate them with pathogenicity features of S. Gallinarum and S. Pullorum. Furthermore, the conservation status of some RODs was verified in 25 strains of S. Gallinarum and 17 strains of S. Pullorum, all of them isolated from birds with fowl typhoid or pullorum disease. Overall, the RODs have genes involved in cellular functions (as DNA repair and protein disaggregation), energy production and virulence. In the present study, it was noticed the majority of conserved RODs were generated by deletions in genes which, putatively, would lead to loss of their function in S. Pullorum. Consequently, it was feasible to suggest that S. Pullorum epidemiology would be a negative characteristic stemming from gene losses rather than acquired features...

Orientador: Angelo Berchieri Junior / Coorientador: Hélio José Montassier / Banca: Rosângela Zacarias Machado / Banca: Luiz Felipe Caron / Banca: Raphael Lucio Andreatti Filho / Banca: Marcelo Brocchi / Resumo: Salmonella Enteritidis (SE) causa doença transmitida por alimentos (DTA) em humanos. Carne de frango e ovos frequentemente estão associados a esses casos. O controle da infecção em aves, baseia-se em medidas de biossegurança, incluindo-se a vacinação. Tem sido comum a utilização de vacinas vivas (VV) e inativadas (Bacterinas - BA), porém pouco se sabe sobre os mecanismos imunes desencadeados pelas vacinas contra SE. Neste estudo, utilizaram-se quatroprogramas vacinais (VV; VV+VV; BA; VV+BA) em galinhas leves de variedade branca para postura de ovos de mesa, vacinadas com 5 e/ou 25 dias de vida, e desafiadas aos 45 dias de vida com SE. No dia anterior à infecção (1 DAI) e 1, 6 e 9 dias pós-infecção (DPI), cinco aves/grupo foram sacrificadas para amostragem. A população de linfócitos CD4+ e CD8+ foi avaliada por imuno-histoquímica em tonsilas cecais e fígado; citocinas foram quantificadas por RT-qPCR em tempo real em tonsilas cecais e baço; níveis de IgG e IgM foram mensurados por ELISA no soro e IgA em lavado intestinal. Os níveis de imunoglobulina (IgG, IgM e IgA) estavam significativamente mais altos em aves vacinadas com BA, do 1 DAI ao 9 DPI, em comparação aos grupos vacinados somente com VV. Os níveis de IFN-γ, na tonsila cecal, eram similares em todos os grupos após o desafio. Antes do desafio (1 DAI), IL-10 foi altamente expressa em baço de aves que receberam somente BA (25 dias de vida), sugerindo o desenvolvimento de resposta por linfócitos T CD4+ auxiliar 2 (Ta2), reforçado pelos altos níveis de IgG encontrados neste grupo (p<0.05). Os níveis de TGF-β4 e das citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNFSF15 eram bastante elevados no grupo que recebeu VV+VV. A vacinação por via oral com VV aumentou significativamente o fluxo de linfócitos T CD8+ para as tonsilas cecais após o desafio. Isso poderia... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Salmonella Enteritidis (SE) causes foodborne infection in humans. Poultry meat and eggs are frequently associated with these cases. The control of this bacterium is based on sanitary measures and mainly, vaccination of chicken flocks. Vaccine programs are used worldwide to control SE in poultry flocks. Live (LV) and killed vaccines (KV) are often combined, although few studies regarding immune mechanisms developed by SE vaccines are available. In this work, four vaccine programs were studied (LV; LV+LV; KV; LV+KV) in white layer-hens vaccinated at 5 and/or 25 days-old and challenged at 45 days-old with SE. At 1 day before (dbi) and 1, 6 and 9 days post-infection (DPI), five birds/group were sacrificed for sampling. The population of CD4+ and CD8+ T cells was evaluated by immunohistochemistry in caecal tonsils and liver, cytokines were quantified by real time RT-qPCR in caecal tonsils and spleen; IgG, IgM and IgA levels were measured by ELISA in serum and the latter in intestinal washes. The immunoglobulin levels (IgG, IgM and IgA) were significantly higher in birds vaccinated with KV, from 1 dbi to 9 DPI, than in groups that received only LV. In caecal tonsils, IFN-γ levels were similar in all groups after challenge. Before challenge (1 dbi), IL-10 was highly expressed in spleen of birds that received only KV (25 days-old), suggesting the development of the T CD4+ helper 2 (Th2) type of immune response, reinforced by high IgG levels against SE seen in this group (p<0.05). TGF-β4 and the proinflammatory cytokines IL-6 and TNFSF15 were higher in caecal tonsils in the group that received LV+LV. Vaccination by oral route with LV clearly increased the influx of CD8+ T cells in caecal tonsils after challenge. This could be correlated with the better control of SE noticed in groups that received at least one dose of LV, including... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Angelo Berchieri Júnior / Coorientador: Rafael Antonio Casarin Penha Filho / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Luiz Felipe Caron / Resumo: O tifo aviário é uma doença sistêmica causada por Salmonella enterica subesp. enterica sorovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG). Esta bactéria é altamente patogênica para aves em qualquer idade, causando mortalidade inclusive em aves adultas. No entanto, a progressão dos sinais clínicos em galinhas pode diferir entre as diferentes variedades de aves. Aves de variedade branca são consideradas mais resistentes e dificilmente se observa mortalidade. Aves de variedade vermelha são suscetíveis e desenvolvem quadros clínicos mais severos com altas taxas de mortalidade. O objetivo do presente estudo foi avaliar o desenvolvimento da doença e infiltrado de linfócitos T γδ durante a infecção por SG em diferentes variedades de aves. Neste trabalho, utilizaram-se 50 aves comerciais para postura de variedade branca e 60 aves comerciais para postura de variedade vermelha que foram distribuídas em quatro grupos: grupo A (controle de aves brancas), grupo B (aves brancas infectadas), grupo C (controle de aves vermelhas) e grupo D (aves vermelhas infectadas). As aves dos grupos B e D foram desafiadas aos 30 dias de vida com SG. Às 6 horas pós-infecção (6 hpi) e 1, 3 e 5 dias pós-infecção (dpi), três aves/grupo foram eutanasiadas para amostragem. A população de linfócitos T γδ foi avaliada por imuno-histoquímica em tonsilas cecais e fígado; citocinas foram quantificadas por RT-qPCR em tempo real em tonsilas cecais e baço e amostras de sangue para análises bioquímicas séricas. As lesões macroscópicas foram mais intensas nas aves do grupo D, a partir do 3º dpi, em comparação com as aves do grupo B. As contagens bacterianas no baço e fígado tiveram maiores quantidades nas aves do grupo D no 3° e 5° dpi. Após o 6° dpi, as aves do grupo D começaram a sucumbir ao tifo aviário, diferente das aves do grupo B, que não apresentaram nenhuma mortalidade. Aves do grupo B tiveram maiores quantidades das proteínas ... / Abstract: The fowl typhoid is a systemic disease of chickens caused by Salmonella enteric subsp. enteric serovar Gallinarum biovar Gallinarum. This bacterium is highly pathogenic for chickens at any age, causing mortality even in adult birds. The progress of clinical signs differs among different lines of chickens. White lines of chickens are considered resistant and hardly mortality is observed. Chickens of brown lines are more susceptible and develop severe clinical signs with high mortality rates. The aim of this study was to evaluate the development of the disease and γδ T cells influx during the infection with SG in different varieties of layer-hens. In this study, 50 commercial layer-hens of white lines were used and 60 commercial layer-hens of brown lines were divided into 4 groups: group A (control for white layers), group B (infected white layers), group C (control for brown layers) and group D (infected brown layers). Chickens in groups B and D were challenged at 30 days-old with SG. At 6 hours post-infection (6 hpi) and 1, 3 and 5 days post-infection (dpi), three hens per group were sacrificed for sampling. The population of γδ T cells was evaluated by immunohistochemistry in caecal tonsils and liver; cytokines were quantified by real time RT-qPCR in caecal tonsils and spleen and samples of serum were used for biochemistry analysis. The macroscopic lesions were more intense in the hens of group D, at 3 dpi, in comparation with the group B. The bacterial numbers in spleen and liver from chickens in the group D were higher at 3 and 5 dpi. After 6 dpi, the mortality caused by fowl typhoid, began in group D. Differently, group B had no mortality. The group B had higher amounts of the proteins ceruloplasmin, albumin and α1- acid glycoprotein, in comparation to group D, but did not show statistical difference (p>0.05). The protein levels PM=99.000 Da, PM=90.000 Da and transferrin were significantly higher in group B (p<0.05) at ... / Mestre

Orientador: Angelo Berchieri Junior / Banca: Nilce Maria Soares Queiroz Gama / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Resumo: Salmonella Gallinarum (SG) causa o Tifo Aviário, uma doença caracterizada por alta mortalidade e morbidade em aves. Salmonella Enteritidis (SE) é uma salmonela paratífica, capaz de acometer aves e mamíferos. Carne de aves e ovos são as principais fontes de transmissão de SE, causando doença transmitida por alimentos em humanos. O controle destas bactérias nas criações avícolas é feito através da combinação de medidas sanitárias e a vacinação das aves. As vacinas vivas mostram-se melhores do que as inativadas para combater esses sorotipos, no entanto, a proteção contra SE, é parcial. A cepa SG cobS cbiA é incapaz de sintetizar vitamina B12. A ausência dessa substância prejudicou a sobrevivência da bactéria no organismo parasitado, causando atenuação na virulência. Neste trabalho, foram avaliadas a mortalidade e a infecção sistêmica causadas por SG cobS cbiA em comparação com uma cepa selvagem de SG. Também foi avaliado seu potencial vacinal contra SG e SE em aves de postura e sua utilização para impedir a colonização cecal por SE em pintinhos de corte de um dia. As aves de postura foram vacinadas com uma dose aos cinco dias, ou com duas doses aos cinco e vinte e cinco dias de vida e foram desafiadas com as respectivas cepas de SG e SE aos 45 dias de vida. As aves que receberam tanto uma quanto duas doses da cepa vacinal foram parcialmente protegidas contra SG. A proteção contra SE foi significativa no grupo de aves que recebeu duas doses de SG cobS cbiA. Porém, a inoculação de SG cobS cbiA em pintinhos com um dia de vida não impediu a colonização do ceco por SE. A cepa SG cobS cbiA demonstrou ter potencial vacinal contra SG e SE. / Abstract: Salmonella Gallinarum (SG) causes Fowl Typhoid, a disease caracterized by high mortality and morbidity rates in poultry. Salmonella Enteritidis (SE) is a paratyphoid salmonelae that infects birds and mammals. Poultry meat and eggs are the main sources of transmission of SE, causing foodborne disease in humans. The control of these bacterias inside the avian breeding sites is done by the combination of sanitary measures and poultry vaccination. Live vaccines have demonstrated greater efficacy on the protection of poultry against these serovars than the killed vaccines, though, protection against SE is still partial. The strain SG cobS cbiA is uncapable to synthesize vitamin B12. The absence of this substance harmed the bacterial survival in the infected organism, causing attenuation of the virulence. On this work, the mortality and the sistemic infection by SG cobS cbiA were measured and compared with a wild strain of SG. It was also evaluated the potential use of the attenuated strain as a vaccine against SG and SE in laying hens and its utilization to prevent the colonization of the ceca by SE on 1-day-old chickens. The laying hens were vaccinated with one dose at 5- day-old, or with two doses at 5 and 25-day-old and were challenged at 45-day-old with the respective strain of SG or SE. The vaccination either with one or two doses was able to protect the birds against challenge with SG. The administration of two doses of SG cobS cbiA protected the laying hens against SE. Although, the inoculation of SG cobS cbiA by oral gavage on newly hatched chicks was unable to prevent the colonization of the ceca by SE. The protection confered by the strain SG cobS cbiA demonstrated its potential to be used as a vaccine. / Mestre

Orientador: Angelo Berchieri Júnior / Coorientador: Rafael Antônio Casarin Penha Filho / Banca: Oliveiro Caetano de Freitas Neto / Banca: Silvana Martinez Baraldi Artoni / Banca: Nilce Maria Soares / Banca: Ricardo de Albuquerque / Resumo: Salmonella constitui-se em um gênero de bactérias amplamente distribuídas na natureza que podem infectar seres humanos, aves, peixes, répteis e mamíferos, e causam doenças em animais e seres humanos. Salmonella enterica subsp. enterica sorovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG) é o agente etiológico do tifo aviário (TA). Este biovar é hospedeiro-específico de aves e se diferencia de outros sorovares por ser imóvel, causando uma doença septicêmica aguda, com alta taxa de morbidade e mortalidade, que afeta animais adultos, mas é muito patogênico para aves de qualquer idade e também um motivo de preocupação para a avicultura industrial, causando mortalidade que pode chegar a 80%. Programas de monitoramento baseado em testes sorológicos e bacteriológicos para controlar a disseminação desta bactéria e medidas de biossegurança são importantes, para o controle do tifo aviário. A vacinação é uma importante medida que pode ser aplicada como parte de um programa de biossegurança. Neste trabalho, as aves para postura comercial dos grupos A, B e C foram vacinadas com duas doses da estirpe atenuada de Salmonella Gallinarum cobS-cbiA- (SGcobS-cbiA-) e desafiadas na 16ª semana de vida com uma estirpe patogênica de SG (SG287/91). As aves dos grupos E e F foram vacinadas com três doses da estirpe SGcobS-cbiA- e desafiadas na 20ª semana de vida com a estirpe patogênica SG287/91. A mortalidade das aves vacinadas e de aves não-vacinadas foi observada após o desafio. Notou-se redução significativa nas taxas de mortalidade em todos os grupos de aves vacinadas com duas ou três doses da vacina viva, em relação às aves não vacinadas. Foi demonstrado uma forte proteção vacinal contra o tifo aviário em um modelo experimental que pode ser aplicado em aves comerciais à campo, complementando estudos prévios com a estirpe vacinal SGcobS-cbiA- / Abstract: Salmonella is a genus of bacteria widely distributed in nature that can infect poultry, humans, fishes, reptiles and mammals in general and often causes diseases in animals and humans. Fowl typhoid (FT) is the etiologic agent of Salmonella enterica serovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG). This non-motile biovar is host-specific and highly adapted to infect birds, causing an acute septicemic disease with high morbidity and mortality, which is very pathogenic to birds of any age, including adult birds and also a cause of concern for the poultry industry, causing mortality that can reach 80%. Monitoring program based on serological and bacteriological tests to prevent infection or to control the spread of the agent and biosecurity measures are important for the control of fowl typhoid. Vaccination is an important measure, which can be used as part of a global biosecurity. In the present work, commercial brown layer-hens in groups A, B, C and D were vaccinated twice with strain Salmonella Gallinarum ΔcobSΔcbiA (SGcobS-cbiA-) and challenged at 16th week of life with a pathogenic strain of SG (SG297/91). Layers in groups E, F and G were vaccinated with three doses of SGcobS-cbiA- and challenged at 20th week of life with a pathogenic strain SG287/91. The mortality rate was observed after challenge in all groups. It was observed the significant reduction of the mortality rate in all groups of vaccinated layer-hens with two and three doses of SGcobS-cbiA-, complementing previous studies / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-13Bitstream added on 2014-06-13T18:07:34Z : No. of bitstreams: 1 000749249.pdf: 1046785 bytes, checksum: 980862971c09d4a3a9559d7967701c51 (MD5) / Salmonella constitui-se em um gênero de bactérias amplamente distribuídas na natureza que podem infectar seres humanos, aves, peixes, répteis e mamíferos, e causam doenças em animais e seres humanos. Salmonella enterica subsp. enterica sorovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG) é o agente etiológico do tifo aviário (TA). Este biovar é hospedeiro-específico de aves e se diferencia de outros sorovares por ser imóvel, causando uma doença septicêmica aguda, com alta taxa de morbidade e mortalidade, que afeta animais adultos, mas é muito patogênico para aves de qualquer idade e também um motivo de preocupação para a avicultura industrial, causando mortalidade que pode chegar a 80%. Programas de monitoramento baseado em testes sorológicos e bacteriológicos para controlar a disseminação desta bactéria e medidas de biossegurança são importantes, para o controle do tifo aviário. A vacinação é uma importante medida que pode ser aplicada como parte de um programa de biossegurança. Neste trabalho, as aves para postura comercial dos grupos A, B e C foram vacinadas com duas doses da estirpe atenuada de Salmonella Gallinarum cobS-cbiA- (SGcobS-cbiA-) e desafiadas na 16ª semana de vida com uma estirpe patogênica de SG (SG287/91). As aves dos grupos E e F foram vacinadas com três doses da estirpe SGcobS-cbiA- e desafiadas na 20ª semana de vida com a estirpe patogênica SG287/91. A mortalidade das aves vacinadas e de aves não-vacinadas foi observada após o desafio. Notou-se redução significativa nas taxas de mortalidade em todos os grupos de aves vacinadas com duas ou três doses da vacina viva, em relação às aves não vacinadas. Foi demonstrado uma forte proteção vacinal contra o tifo aviário em um modelo experimental que pode ser aplicado em aves comerciais à campo, complementando estudos prévios com a estirpe vacinal SGcobS-cbiA- / Salmonella is a genus of bacteria widely distributed in nature that can infect poultry, humans, fishes, reptiles and mammals in general and often causes diseases in animals and humans. Fowl typhoid (FT) is the etiologic agent of Salmonella enterica serovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG). This non-motile biovar is host-specific and highly adapted to infect birds, causing an acute septicemic disease with high morbidity and mortality, which is very pathogenic to birds of any age, including adult birds and also a cause of concern for the poultry industry, causing mortality that can reach 80%. Monitoring program based on serological and bacteriological tests to prevent infection or to control the spread of the agent and biosecurity measures are important for the control of fowl typhoid. Vaccination is an important measure, which can be used as part of a global biosecurity. In the present work, commercial brown layer-hens in groups A, B, C and D were vaccinated twice with strain Salmonella Gallinarum ΔcobSΔcbiA (SGcobS-cbiA-) and challenged at 16th week of life with a pathogenic strain of SG (SG297/91). Layers in groups E, F and G were vaccinated with three doses of SGcobS-cbiA- and challenged at 20th week of life with a pathogenic strain SG287/91. The mortality rate was observed after challenge in all groups. It was observed the significant reduction of the mortality rate in all groups of vaccinated layer-hens with two and three doses of SGcobS-cbiA-, complementing previous studies

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-15Bitstream added on 2014-06-13T20:48:11Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_sam_dr_jabo.pdf: 714385 bytes, checksum: 8dea9f3890502c7e3fa86484716ab25e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A Salmonella Pullorum (SP) é muito semelhante à Salmonella Gallinarum (SG), agentes da Pulorose e Tifo aviário, respectivamente, sendo responsáveis por perdas econômicas no setor avícola. São salmonelas de composição antigênica similar e a distinção de ambas tem sido baseada em provas bioquímicas. Entretanto, este procedimento é laborioso e o surgimento de estirpes com comportamento bioquímico atípico tem estimulado a procura por outros métodos de diagnóstico, como os testes moleculares. No presente estudo, analisou-se o método descrito na literatura envolvendo o gene rfbS em conjunto com testes desenvolvidos com base nos genes speC e speF. O gene rfbS codifica a enzima que atua na parede celular de bactérias e tem sido utilizado para diferenciar SP e SG. Com o propósito de padronizar a PCR para ser utilizada na rotina laboratorial, empregou-se dois métodos de extração de DNA e diferentes concentrações de reagentes. Entretanto, tendo em vista a dificuldade de padronização encontrada desde o início, foi concomitantemente desenvolvida a PCR para os genes speC e speF. Estes dois últimos estão relacionados com a produção da enzima ornitina-descarboxilase, a qual é ativa em SP e inativa em SG. Após testes inicias, foi possível padronizar a PCR do gene speC com posterior utilização da técnica de tratamento enzimático com a enzima de restrição Eco RI. Tanto para o gene rfbS quanto para os genes speC e speF, os resultados encontrados permitiram a diferenciação de 13 amostras de SP e 20 de SG isoladas no Brasil e duas cepas ATCC. Sendo assim, as ações sanitárias e a tomada de decisão no campo podem ser conduzidas de maneira rápida e segura. / Salmonella Pullorum (SP) is very similar to Salmonella Gallinarum (SG). They are respectively agents of Pulorosis and Avian Typhoid, both diseases responsible for economic losses to poultry production. Due to the fact that both salmonellas have similar antigenic composition, their differentiation has been based in biochemical tests. However, this fact that this kind of procedure is very troublesome and the occurence of strains showing atypical behavior have stimulated the search for others diagnostic methods, such as molecular tests. In the present study, a method described in the literature using gene rfbS was analyzed together with tests developed based on genes speC and speF. Gene rfbS encodes an enzyme that acts on the cell wall of bacteria and has been used in the differentiation between SP and SG. In order to standardize the PCR procedure to be used in laboratory routine, two methods for DNA extraction were used, as well as different concentrations of the reagents. However, due to the difficulty in the standardization observed from the beginning of the study, a PCR procedure was developed for genes speC and speF. These genes are related to the production of the enzyme ornithine-descarboxilase, active in SP and inactive in SG. After the initial tests, PCR of gene speC was standardized, and later on it was coupled with the enzymatic treatment with restriction enzyme Eco RI. Results obtained for gene rfbS as well as for genes speC and speF enabled differentiation of 13 SP and 20 SG strains isolated in Brazil and two strains ATCC. So, the sanitary actions and the decisions in the livestock can to be conduced with safety and rapidity.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-22Bitstream added on 2014-06-13T20:44:56Z : No. of bitstreams: 1 penhafilho_rac_dr_jabo.pdf: 670109 bytes, checksum: 048e4ba89a0df3d41f36db27a93c0f9b (MD5) / Salmonella Enteritidis (SE) causa doença transmitida por alimentos (DTA) em humanos. Carne de frango e ovos frequentemente estão associados a esses casos. O controle da infecção em aves, baseia-se em medidas de biossegurança, incluindo-se a vacinação. Tem sido comum a utilização de vacinas vivas (VV) e inativadas (Bacterinas - BA), porém pouco se sabe sobre os mecanismos imunes desencadeados pelas vacinas contra SE. Neste estudo, utilizaram-se quatroprogramas vacinais (VV; VV+VV; BA; VV+BA) em galinhas leves de variedade branca para postura de ovos de mesa, vacinadas com 5 e/ou 25 dias de vida, e desafiadas aos 45 dias de vida com SE. No dia anterior à infecção (1 DAI) e 1, 6 e 9 dias pós-infecção (DPI), cinco aves/grupo foram sacrificadas para amostragem. A população de linfócitos CD4+ e CD8+ foi avaliada por imuno-histoquímica em tonsilas cecais e fígado; citocinas foram quantificadas por RT-qPCR em tempo real em tonsilas cecais e baço; níveis de IgG e IgM foram mensurados por ELISA no soro e IgA em lavado intestinal. Os níveis de imunoglobulina (IgG, IgM e IgA) estavam significativamente mais altos em aves vacinadas com BA, do 1 DAI ao 9 DPI, em comparação aos grupos vacinados somente com VV. Os níveis de IFN-γ, na tonsila cecal, eram similares em todos os grupos após o desafio. Antes do desafio (1 DAI), IL-10 foi altamente expressa em baço de aves que receberam somente BA (25 dias de vida), sugerindo o desenvolvimento de resposta por linfócitos T CD4+ auxiliar 2 (Ta2), reforçado pelos altos níveis de IgG encontrados neste grupo (p<0.05). Os níveis de TGF-β4 e das citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNFSF15 eram bastante elevados no grupo que recebeu VV+VV. A vacinação por via oral com VV aumentou significativamente o fluxo de linfócitos T CD8+ para as tonsilas cecais após o desafio. Isso poderia... / Salmonella Enteritidis (SE) causes foodborne infection in humans. Poultry meat and eggs are frequently associated with these cases. The control of this bacterium is based on sanitary measures and mainly, vaccination of chicken flocks. Vaccine programs are used worldwide to control SE in poultry flocks. Live (LV) and killed vaccines (KV) are often combined, although few studies regarding immune mechanisms developed by SE vaccines are available. In this work, four vaccine programs were studied (LV; LV+LV; KV; LV+KV) in white layer-hens vaccinated at 5 and/or 25 days-old and challenged at 45 days-old with SE. At 1 day before (dbi) and 1, 6 and 9 days post-infection (DPI), five birds/group were sacrificed for sampling. The population of CD4+ and CD8+ T cells was evaluated by immunohistochemistry in caecal tonsils and liver, cytokines were quantified by real time RT-qPCR in caecal tonsils and spleen; IgG, IgM and IgA levels were measured by ELISA in serum and the latter in intestinal washes. The immunoglobulin levels (IgG, IgM and IgA) were significantly higher in birds vaccinated with KV, from 1 dbi to 9 DPI, than in groups that received only LV. In caecal tonsils, IFN-γ levels were similar in all groups after challenge. Before challenge (1 dbi), IL-10 was highly expressed in spleen of birds that received only KV (25 days-old), suggesting the development of the T CD4+ helper 2 (Th2) type of immune response, reinforced by high IgG levels against SE seen in this group (p<0.05). TGF-β4 and the proinflammatory cytokines IL-6 and TNFSF15 were higher in caecal tonsils in the group that received LV+LV. Vaccination by oral route with LV clearly increased the influx of CD8+ T cells in caecal tonsils after challenge. This could be correlated with the better control of SE noticed in groups that received at least one dose of LV, including... (Complete abstract click electronic access below)