L’objectiu d’aquesta recerca és cercar evidències de la potencialitat del programa Llegim en parella, que proposa la tutoria entre iguals com a mètode per al desenvolupament de la competència lectora; centrant-nos en dos aspectes clau com són la comprensió lectora i l’autoconcepte lector. Es tracta d’un estudi amb un disseny de multiplicitat metodològica que ens possibilita fer una aproximació, per una banda quantitativa que ens permet identificar els canvis que es produeixin en cada una de les variables analitzades: comprensió i autoconcepte lector. Per després, amb una aproximació qualitativa realitzar l’anàlisi del procés –especialment de la interacció d’una submostra de parelles- que ens ajudi a reconèixer els moments i les actuacions responsables dels canvis detectats. L’estudi es realitza amb una mostra de 577 alumnes, dels quals 441 alumnes formen part del grup d’intervenció i 136 alumnes formen part del grup de comparació, i 20 mestres pertanyents a 10 centres educatius que, durant els cursos 2008-09, 2009-10 i 2010-11, estaven desenvolupant el programa Llegim en parella. La investigació se situa en el context natural de l’aula. Els resultats quantitatius ens indiquen que hi ha diferències significatives entre el pretest i el postest de tots els alumnes del grup d’intervenció per a la variable de comprensió lectora en les diferents modalitats de tutoria (fixa i recíproca), així com pels rols desenvolupats (tutor i tutorat). Els resultats de l’anàlisi del procés ens mostra que les millores es produeixen per la utilització de les estratègies lectores, tant cognitives com metacognitives que proposa l’estructura de les sessions del programa Llegim en parella, així com també per les ajudes en bastida que ofereixen els tutors als seus tutorats per a millorar la comprensió lectora. S’observa que les situacions més riques tenen lloc en la interacció que es produeix entre ambdós alumnes, per tal de resoldre les preguntes de comprensió inferencials i profundes formulades. Pel que fa a l’autoconcepte lector, els resultats quantitatius ens mostren que es produeixen diferències significatives entre el pretest i el postest dels alumnes que desenvolupen el rol de tutors, cosa que no es produeix en els tutorats, ni en l’alumnat que desenvolupa la tutoria recíproca. L’anàlisi de la interactivitat ens fa adonar que els alumnes tutors, pel fet de desenvolupar el seu rol, disposen d’elements per a la millora del seu autoconcepte lector i, en canvi, els alumnes tutorats generalment atribueixen les millores obtingudes a l’ajuda del tutor, no als seus propis esforços, i no es perceben com a millors lectors. Els alumnes participants en les tutories recíproques en disposar de la meitat de sessions per a desenvolupar un i altre rol, probablement no tenen prou temps per a mostrar canvis en el seu autoconcepte lector. Així mateix, es detecten els processos de reflexió metacognitiva com a factors que poden potenciar la millora de l’autoconcepte lector en fer més conscients els alumnes de les seves capacitats i possibilitats de millora. Paraules clau: educació inclusiva, aprenentatge cooperatiu, aprenentatge entre iguals, tutoria entre iguals, competència lectora, comprensió lectora, autoconcepte lector. / The goal of this research is to find evidence of the power of the programme Llegim en parella (Reading by pairs,) which proposes peer tutoring as a method to develop reading competence; focusing in two key aspects such as comprehension and a self-concept as a reader. The design involves a methodological multiplicity that permits first a quantitative approach, which allows the identification of the changes observed in each variable under study: reading comprehension and self-concept as a reader. Then, after these changes have been recorded, we can analize the process - especially the interaction in a subsample of pairs - through a qualitative approach that allows us to figure out the moments and the actions that induce the changes observed in the quantitative approach. We are using a sample of 577 students, of which 441 belong to the intervention group and 136 belong to the comparison group; and 20 teachers from 10 different education schools that during the academic years 2008-09, 2009-10 and 2010-11, were developing the programme Llegim en parella. This research takes place in the natural framework of the classroom. The quantitative results show significant differences between pre-test and post-test for all students in the intervention group on the reading comprehension variable under the different tutoring modes (fixed and reciprocal), and also under the different developed roles (tutor and tutee). The results of the analysis of the process show that the improvements are due to the application of reading strategies, either cognitives or metacognitives, proposed in the structure of the sessions of the programme Llegim en parella, and also due to the scaffolding help by the tutors to their tutee in order to improve their reading comprehension. We observe the richest situations in the interactions within pairs when trying to solve inferential and critical questions about comprehension. Regarding the self-concept as a reader, quantitative results show significant differences between pre-test and post-test for students developing the role of tutor, however it is not so for tutee nor for students developing reciprocal tutoring. The interactivity analysis shows that students in the role of tutors have elements to improve their self-concept as a reader, due to the development of their role, while tutee students normally explain their improvements by the tutor's help and not by their own effort, and they do not perceive themselves as better readers. Participants in the reciprocal tutoring probably do not have enough time to develop changes in their self-concept as a reader due to the fact that they spend half of the sessions in each role. However, we find that metacognitive reflexion processes can promote the improvement of self-concept as a reader and induce the students to become more conscious of their abilities and of their potential for improvement. Keywords: inclusive education, cooperative learning, peer learning, peer tutoring, reading competence, reading comprehension, self-concept as a reader. / El objetivo de esta investigación es hallar evidencias de la potencialidad del programa Llegim en parella, que propone la tutoría entre iguales como método para el desarrollo de la competencia lectora; centrándonos en dos aspectos esenciales como son la comprensión lectora y el autoconcepto lector. Se trata de un estudio con un diseño de multiplicidad metodológica que nos posibilita hacer una aproximación, por un lado cuantitativa que nos permite identificar los cambios que se produzcan en cada una de las variables analizadas: comprensión y autoconcepto lector. Para posteriormente, a través de una aproximación cualitativa realizar el análisis del proceso – especialmente de la interacción de una submuestra de parejas – que nos ayude a reconocer los momentos y las actuaciones responsables de los cambios detectados. El estudio se realiza con una muestra de 577 alumnos, de los cuales, 441 forman parte del grupo de intervención y 136 forman parte del grupo de comparación, y 20 profesores pertenecientes a 10 centros educativos que, durante los cursos 2008-09, 2009-10 y 2010-11, estaban desarrollando el programa Llegim en parella. La investigación se sitúa en el contexto natural de las aulas. Los resultados cuantitativos nos indican que hay diferencias significativas entre el pretest y el postest de todos los alumnos del grupo de intervención para la variable de comprensión lectora en las distintas modalidades de tutoría (fija y recíproca), así como según los roles desarrollados (tutor y tutorado). Los resultados del análisis del proceso nos muestran que las mejoras se producen debido a la utilización de las estrategias lectoras, tanto cognitivas como metacognitivas que propone la estructura de las sesiones del programa Llegim en parella, así como también por las ayudas andamiadas que ofrecen los tutores a sus tutorados para mejorar la comprensión lectora. Se observa que las situaciones más ricas se producen durante la interacción que se produce entre ambos alumnos, para poder resolver las preguntas de comprensión inferenciales y profundas formuladas. Por lo que se refiere al autoconcepto lector, los resultados cuantitativos nos muestran que se producen diferencias significativas entre el pretest y el postest de los alumnos que desarrollan el rol de tutores, hecho que no se produce en los tutorados, ni en el alumnado que lleva a cabo la tutoría recíproca. El análisis de la interactividad nos demuestra que los alumnos tutores, por el hecho de desarrollar su rol, disponen de elementos para la mejora de su autoconcepto lector y, en cambio, los alumnos tutorados atribuyen generalmente las mejoras obtenidas a la ayuda del tutor, no a sus propios esfuerzos, y no se perciben como mejores lectores. Los alumnos participantes en las tutorías recíprocas, al disponer de la mitad de sesiones para desarrollar un y otro rol, probablemente no tienen tiempo suficiente para mostrar cambios en su autoconcepto lector. Así mismo, se detectan los procesos de reflexión metacognitiva como factores que pueden potenciar la mejora del autoconcepto lector al permitir a los alumnos tomar conciencia de sus capacidades y posibilidades de mejora. Palabras clave: educación inclusiva, aprendizaje cooperativo, aprendizaje entre iguales, tutoría entre iguales, competencia lectora, comprensión lectora, autoconcepto lector.

Introducción: El Maltrato Psicológico (MP) del niño y adolescente es el componente principal de todas las formas de abuso y negligencia y una de las mayores contribuciones al sufrimiento humano. Juega un rol importantísimo en la formación de trastornos mentales de niños y adultos y afecta a las relaciones interpersonales. Esta tesis, redactada por compendio de artículos (de la Vega, de la Osa, Ezpeleta, Granero & Domènech, 2011; de la Vega, de la Osa, Ezpeleta, & Granero, 2012, in press) y presentada en el marco del doctorado europeo, tiene 2 objetivos principales: 1) estudiar los efectos diferenciales de los distintos tipos de MP y 2) estudiar el riesgo acumulado de sufrir más de un tipo MP. Un objetivo complementario, en colaboración con el Department of Health and Social Care de la Royal Holloway University of London, es estudiar las consecuencias a largo plazo del MP infantil (Anexo). Método: La muestra de 168 niños de entre 4 y 17 años, hijos de madres expuestas a violencia doméstica (VD) que acudían a un centro de violencia de género, es parte del proyecto “Estudio de las consecuencias de la violencia doméstica en los niños” (SEJ2005-01786, Ministerio de Educación y Ciencia). El criterio de admisión fue haber estado expuesto a VD al menos durante el último año, siendo 6,7 la media de años de exposición a VD. El 38,1% sufría el subtipo de MP aterrorizar, el 27,4% degradar y el 35,7% falta de disponibilidad emocional. Los niños podían sufrir más de un tipo de MP. El 60,7% eran varones. Se evaluó la psicopatología y el deterioro funcional a través de entrevista diagnóstica y de cuestionarios contestados por las madres y los niños. Los datos se analizaron con Ecuaciones de Regresión Generalizadas. Resultados: Los diferentes tipos de MP tienen efectos diferenciales tanto en la psicopatología como en el deterioro funcional de los niños. Los niños que sufren el subtipo de MP degradar tienen diez veces más riesgo de sufrir trastornos del estado de ánimo, presentan de media diez síntomas y más diagnósticos DSM, así como una media significativamente más alta en las escalas del CBCL6-18 de retraimiento, comportamiento agresivo, problema sociales, conducta de romper normas, así como en las escalas globales de problemas interiorizados, exteriorizados y totales. Los niños que sufren falta de disponibilidad emocional tienen siete veces más riesgo de sufrir el diagnóstico de depresión, una media significativamente más alta en la escala de retraimiento y en la de problemas interiorizados del CBCL y un mayor deterioro en el área de humor/emociones del CAFAS. A mayor número de MP sufridos, decrece linealmente la puntuación de funcionamiento (CGAS) y se incrementa significativamente, con una tendencia lineal positiva, el nivel de psicopatología (número de síntomas interiorizados y totales del DSM, número total de trastornos DMS y media total de las escalas de ansiedad-depresión, retraimiento, problemas de atención, conducta agresiva, problemas sociales, interiorizados y totales del CBCL). Discusión: Los resultados tienen implicaciones clínicas importantes para la prevención y el tratamiento y sugieren la importancia de tener en cuenta todos los subtipos de MP, identificándolos y evaluándolos cuidadosamente, interviniendo de manera personalizada según el tipo y número de MP sufridos por el niño. / Introduction: Psychological Maltreatment of children and adolescents is the main component of every kind of abuse and neglecting, and one of the biggest contributions to human suffering. It plays a very important role in the development of mental disorders in childhood and adolescence, and affects to interpersonal relationships. This thesis, written as a compendium of articles, and presented in the European PhD programme framework, has two main objectives: 1) to study the differential effects of the different types of PM, and 2) to study the accumulative risk of suffering more than one type of PM. A complementary objective, in collaboration with the Department of Health and Social Care de la Royal Holloway University of London, is to study the long-term outcomes of PM in childhood (Annex). Method: The sample consisted of 168 children between 4 and 17 years old, a 60.7% male, whose mothers were exposed to Intimate Partner Violence. This sample was collected through the project “Study of consequences of Intimate Partner Violence in children) (SEJ2005-01786, Ministry of Science and Education) The admission criteria was having been exposed to IPV at least during the last year. The average of exposition to IPV was 6.7 years. Prevalence of terrorizing in the sample was 38.1%, for spurning it was 27.4% and for denying emotional responsiveness it was 35.7%. Children could be exposed to more than one PM. Psychopathology and functional impairment was assessed through diagnostic interview and questionnaires answered by mothers and children. Data analyses were done through Generalized Estimated Equations. Results: Results show that different types of PM have differential effects both in children’s psychopathology and functioning. Children suffering spurning have ten times more risk of suffering mood disorders; they have on average ten DSM symptoms and one DSM disorder more, and a significantly increased average on withdrawal, aggressive behavior, social problems, rule-breaking behavior, and internalizing problems and total problems scales of the CBCL6-18. Children suffering denying emotional responsiveness have seven times more risk of suffering DSM depression disorder, a significantly increased average on withdrawal and internalizing problems scales of CBCL and a higher impairment at the mood/emotions scales of CAFAS. The more number of PM suffered by the child, the function score significantly decreases linearly (Shaffer y cols. 1983) and psychopathology increases in a positive linear trend (number of internalizing and total DSM symptoms, total number of DMS disorders and total average on the scales anxiety-depression, withdrawal, attention problems, aggressive behavior, social problems, internalizing and total problem of CBCL). Discussion: Results have important clinical implications for prevention and treatment and suggest the importance to accurately assess all the PM subtypes in order to make a personalized intervention according to the type and number of PM suffered by the child.

El dèficit de consciència (insight) i la inadequada atribució dels símptomes és un fenomen freqüent en l’esquizofrènia, relacionat amb baixa adherència al tractament i pitjor evolució. Es postula que en el dèficit d’insight es troben implicades les alteracions neuropsicològiques de l’esquizofrènia, tot i que no s’han trobat variables cognitives que es relacionin de manera consistent i estable. L’alteració de la memòria és un dèficit nuclear en l’esquizofrènia i és essencial per una adequada consciència del trastorn. Tot i això, ha estat poc estudiada i no s’han contemplat els diferents processos de memòria. Actualment, existeixen models d’exploració de memòria que poden distingir processos més dependents del lòbul frontal (memòria estratègica i prospectiva) que del temporal (memòria associativa). L’objectiu d’aquest estudi ha estat aportar evidència d’una relació significativa entre el dèficit d’insight i l’alteració de processos de memòria frontal en l’esquizofrènia. Aquestes troballes podrien tenir aplicació per tal de dissenyar propostes de rehabilitació cognitiva dirigides a millorar l’insight. S’han estudiat 54 pacients diagnosticats de trastorn psicòticsegons criteris DSM IV, en fase aguda ja estabilitzats. La simptomatologia clínica es va valorar amb l’escala PANSS i l’insight amb l’escala SUMD. Es va administrar una bateria neuropsicològica amb mesures de:QI estimat, memòria estratègica, prospectiva i associativa, funcions executives, visuoespacials i visuoconstructives i mesures considerades de control per no haver presentat prèviament relació amb l’insight. Es van realitzar correlacions entre mesures d’insight i neuropsicològiques i es van crear dos grups de subjectes en funció de puntuacions de l’escala SUMD, aquells amb ‘insight’ (< 3) i ‘no insight’ (>3), per comparar el nivell d’execució en proves cognitives (U de Mann-Whitney o t-Student). Finalment per tal de poder detectar les variables que millor explicaven l’insight, es va realitzar una anàlisi de regressió logística amb les diferents dimensions. El rendiment neuropsicològic de la mostra no presentava un nivell elevat de deteriorament, les majors alteracions es trobaven en funcions executives i memòria. El dèficit d’insight es distribuïa de la següent forma; 52,8%fallava en reconèixer la presència del trastorn mental, 39,6% no identificava els efectes de la medicació, 47,2% no reconeixia les conseqüències socials associades al trastorn, 39,6%no era conscient de la presència dels símptomes i 45,3%no atribuïa els símptomes a un trastorn mental.Pel que fa a la relació entre l’insight i mesures neuropsicològiques, es va evidenciar una correlació significativa entre la dimensió de consciència de conseqüències socials i la memòria estratègica i es van detectar diferències significatives entre els grups amb ‘insight’ i ‘no insight’ respecte el rendiment en memòria estratègica en les dimensions de consciència de trastorn mental i de conseqüències socials, amb millor rendiment en el grup ‘insight’.D’altra banda, es van detectar diferències significatives entre grups pel que fa ala capacitat d’inhibició en la dimensió d’atribució, amb pitjor capacitat d’inhibició en el grup ‘insight’. Es van poder identificar diferents models explicatius per les diferents dimensions d’insight. Models que van detectar una implicació de la memòria estratègica i prospectivaen la majoria de dimensions com a factors protectors d’insight conservat. La gravetat de la simptomatologia positiva i desorganitzada, així com bon rendiment en una prova de memòria i una visuoespacial, es van identificar com a factors de risc del dèficit d’insight. Aquests resultats indiquen que és necessari l’anàlisi dels perfils de memòria en l’estudi de la relació entre l’insight i variables cognitives en pacients psicòtics, especialment d’aquells amb major implicació frontal (memòria estratègica i prospectiva). També suggereixen que la relació entre l’insight i variables cognitives no és lineal, sino que està moderada per la simptomatologia positiva entre d’altres variables clíniques. Finalment, cal destacar la importància de l’estudi independent de les diferents dimensions de l’insight donat el caràcter multidimensional d’aquest. / Unawareness of mental disorder(insight) and inappropriate symptom attribution are common phenomenon in schizophrenia and they are related to low treatment compliance and worse evolution. It has been postulated that lack of insightis related to neuropsychological alterations in schizophrenia, although consistently related cognitive variables have not been found yet. Memory alteration is a nuclear deficit in schizophrenia while it is essential for appropriateawareness of disorder. However, it has not beenwidely studied and several memoryprocesses have not been considered. Currently, the processes that memory assessment models are able to distinguisharemore dependent of the frontal lobe (strategic and prospective memory) than of the temporal lobe (associative memory). The aim of this study was to provide evidence of the relation between lack of insightand alteration on frontal memory processes in schizophrenia. These findings could contribute to the design of cognitive rehabilitation programs addressed to improve insight. Fifty-four patients diagnosed from psychotic disease according to DSM-IV criteria were studied in already stabilized acute phase. Clinical symptomatology was assessed with PANSS scale and insight with SUMD scale. The administeredneuropsychological battery included the following measures: estimated QI, strategic, prospective and associative memory, executive functions, visuospatial and visuoconstructive functions and control measuresselected considering theirnot related with insight. Correlation analyses were performed between insight and neuropsychological measures. Subjects were divided in two groups depending on SUMD score (‘insight’<3 or ‘no insight’>3) in order to compare cognitive performance (Mann-Whitney U or Student-t). Finally, a logistic regression of the different insight dimensions was conducted in order to analyze which cognitive and clinical variables were involved. The neuropsychological performance of the sample did not show high deterioration level; the main alterations were evident in executive functions and memory. Lack of insightwas distributed as follows: 52.8% failed recognizing the presence of the mental disorder, 39.6% did not identify medication effects, 47.2% did not recognize social consequences related to the disease, 39.6% was not conscious of the presence of symptoms and 45.3% did not attribute symptoms to the mental disorder. Regarding the relation between insight and neuropsychological measures, it was evident a significant correlation between social consequences awareness dimension and strategic memory. In addition, regarding strategic memory, there were differences between ‘insight’ and ’lack of insight’ groups in mental disorder and social consequences dimensions, with better strategic memory on ‘insight’ compared to ‘lack of insight’ groups. Moreover, on attribution dimension, ’insight’ group showed worse inhibition ability than ‘no insight group’on attribution dimension. For insight dimensions, different explicative models could be identified. An involvement of strategic and prospective memory as conserved insight protective factor was detected in the majority of dimensions. The severity of the positive and disorganized symptomatology, as well as great performance in a memory and visuospatial task were identified as insight deficit risk factors. Results demonstrate that the analysis of memory profiles is necessary on the attempt to study the relation between insight and cognitive variables in psychotic patients, especially those with greater frontal implication as strategic and prospective memory. In addition, results suggest that the relation between insight and cognitive variables rather than being lineal, it is modeled by other clinical variables such as positive symptomatology. Finally, due to the multidimensional role of the insight, it is important to note the independent study of the different insight dimensions.

La transmissió cèl·lula a cèl·lula del VIH-1 és un mecanisme altament eficient de disseminació viral, i la seva rellevància durant la difusió in vivo en els llocs actius de replicació, és a dir, en els teixits limfoides primaris i secundaris, sembla probable. La transmissió d'antígens del VIH de cèl·lules infectades a cèl·lules T CD4+ no infectades es produeix a través de contactes cèl·lula a cèl·lula que requereixen exclusivament de la interacció entre la proteïna de l'embolcall del VIH gp120 i el receptor CD4 per induir la captació endocítica de partícules virals en compartiments resistents a la tripsina en la cèl·lula diana. No obstant això, no ha estat completament estudiat el destí dels antígens del VIH prèviament transferits i si la internalització de partícules del VIH mitjançant endocitosi pot donar lloc a una infecció productiva. En aquest treball es mostra com IgGb12, un inhibidor de la unió del virus a CD4, va impedir la infecció de les cèl·lules diana carregades amb el VIH suggerint que les partícules virals endocitades van necessitar tornar a la superfície i arribar novament l'espai extracel·lular per interaccionar amb el receptor CD4 i iniciar una infecció productiva. Estudis previs realitzats amb microscòpia confocal van trobar que les proteïnes clatrina i dinamina colocalitzaven amb les partícules del VIH a la cèl·lula diana. Tot i això, dynasore, un inhibidor de la escissió endosomal no va impedir ni la captura de virus, ni la fusió del virus amb la cèl·lula ni la replicació del virus després de la transferència cèl·lula a cèl·lula de partícules del VIH suggerint que la maduració endosomal no és necessària per cap etapa del cicle d'infecció del VIH. D'altra banda, la quantificació de la producció de DNA total va indicar que tots els agents anti-VIH inhibien la transmissió de virus lliure o cèl·lula a cèl·lula amb una potència similar descartant que la transmissió cèl·lula a cèl·lula pogués contribuir a la persistència del virus durant la teràpia antiretroviral. Finalment, es va observar que la transferència cèl·lula a cèl·lula d'antígens del VIH-1 era depenent del grau de polimerització de la actina de les cèl·lules diana CD4+ T. D'aquesta manera, les diferències fenotípiques en l'actina cortical entre les cèl·lules CD4+ T naive i memòria van determinar la eficiència de la transferència d'antígens virals induint diferents susceptibilitats a la infecció per VIH-1. Els nostres resultats reforcen la idea de que, després dels contactes cèl·lula a cèl·lula, els virus endocitats poden representar un reservori de partícules virals itinerant capaç d'induir la trans-infecció de les cèl·lules adjacents, però no poden induir una replicació eficient a partir dels compartiments endosomals. / La transmisión de célula a célula del VIH-1 es un mecanismo altamente eficiente de diseminación viral, y su relevancia durante la difusión in vivo en los sitios activos de replicación, es decir, en los tejidos linfoides primarios y secundarios, parece probable. La transmisión de antígenos del VIH de células infectadas a células T CD4+ no infectadas se produce a través de contactos célula a célula que requieren exclusivamente de la interacción entre la proteína de la envuelta del VIH gp120 y el receptor CD4 para inducir la captación endocítica de partículas virales en compartimientos resistentes a la tripsina en la célula diana. Sin embargo, no ha sido completamente estudiado el destino de los antígenos del VIH previamente transferidos y si la internalización de partículas del VIH mediante endocitosis puede dar lugar a una infección productiva. En este trabajo se muestra como IgGb12, un inhibidor de la unión del virus a CD4, impidió la infección de las células diana cargadas con el VIH sugiriendo que las partículas virales endocitadas necesitaron volver a la superficie y alcanzar nuevamente el espacio extracelular para interaccionar con el receptor CD4 e iniciar una infección productiva. Estudios previos realizados con microscopia confocal encontraron que las proteínas clatrina y dinamina colocalizaban con las partículas del VIH en la célula diana. A pesar de esto, dynasore, un inhibidor de la escisión endosomal no impidió ni la captura de virus, ni la fusión del virus con la célula ni la replicación del virus después de la transferencia célula a célula de partículas del VIH sugiriendo que la maduración endosomal no es necesaria para ninguna etapa del ciclo de infección del VIH. Por otra parte, la cuantificación de la producción de DNA total indicó que todos los agentes anti-VIH inhibían la transmisión de virus libre o célula a célula con una potencia similar descartando que la transmisión célula a célula pudiera contribuir a la persistencia del virus durante la terapia antiretroviral. Finalmente, se observó que la transferencia célula a célula de antígenos del VIH-1 era dependiente del grado de polimerización de la actina de las células diana CD4+ T. De esta manera, las diferencias fenotípicas en la actina cortical entre las células CD4+ T naive y memoria determinaron la eficiencia de la transferencia de antígenos virales induciendo distintas susceptibilidades a la infección por VIH-1. Nuestros resultados refuerzan la idea de que, después de los contactos célula a célula, los virus endocitados pueden representar un reservorio de partículas virales itinerante capaz de inducir la trans-infección de las células colindantes, pero no pueden inducir una replicación eficiente a partir de los compartimientos endosomales.

Estudios previos de nuestro grupo demostraron que la hipertensión portal causa una importante inhibición de RNA mensajeros y proteínas implicadas en neurotransmisión adrenérgica, acompañada de una marcada atrofia simpática de los nervios que rodean la vasculatura mesentérica. Esta atrofia simpática local podría estar contribuyendo a la vasodilatación arterial esplácnica de la hipertensión portal. La hipótesis que se estableció a partir de los resultados obtenidos asumía que durante la hipertensión portal, los cambios de presión detectados en la vasculatura esplácnica podrían promover una señal a través de la vía sensitiva aferente hasta los núcleos de regulación cardiovascular del tronco cerebral, donde se desencadenaría una respuesta eferente responsable de provocar la atrofia simpática. Los resultados de la primera parte del trabajo confirman esta hipótesis y apoyan el papel de la atrofia simpática en la vasodilatación arterial esplácnica de la hipertensión portal, demostrando que mediante el bloqueo de la señal aferente con la neurotoxina capsaicina, de ratas con ligadura de la vena porta (PVL), se consigue evitar la atrofia simpática y las alteraciones hemodinámicas simultáneamente. Además, en ratas PVL, en el ganglio mesentérico superior (SMG) que contiene los somas de las neuronas adrenérgicas que inervan el mesenterio, se demostró un aumento en la expresión de neuromoduladores tales como el factor de crecimiento neuronal NGF y su precusor proNGF y la molécula quimiorepelente Semaforina 3A (Sema3A). Sema3A se localizó en el espacio interneuronal, alrededor de las neuronas adrenérgicas colocalizando con fibras positivas a VAChT. Este aumento en la expresión de moduladores neuronales también se evitó en ratas PVL tratadas con capsaicina. En la segunda parte del trabajo, con el objetivo de confirmar la vía neuronal en la hipertensión portal, se estudiaron dos estructuras intermediarias: el ganglio nodoso donde se confirmó un aumento de la señal aferente sensitiva, vía el nervio vago en animales con hipertensión portal y las neuronas simpáticas colinérgicas preganglionares del núcleo intermediolateral de la médula espinal donde se observó presencia de Sema3A, sugiriendo el origen del aumento de la expresión de Sema3A del SMG en las neuronas colinérgicas preganglionares. Por otro lado, se profundizó en el estudio de alteraciones en la expresión de neuromoduladores implicados en las vías de crecimiento/regresión axonal y supervivencia/muerte neuronal en el SMG de ratas PVL. La expresión de la forma activa del receptor de NGF, la tirosina quinasa A (TrkA), que conduce a la activación de las vías de supervivencia y crecimiento neuronal, se reveló disminuida en ratas PVL comparando con sham. Sin embargo, las vías de apoptosis y de retracción axonal se encontraron estimuladas en ratas PVL, exhibiendo una sobreexpresión significativa de Sema3A y de su receptor Neuropilina1, junto con un aumento en la expresión del receptor de proNGF, el receptor de neurotrofinas p75, la caspasa7 activa, la poli(ADP-ribosa) polimerasa inactiva y Rho kinasa. Finalmente, se probó la administración de un agonista de TrkA, la amida gambógica, en ratas PVL con el fin de estimular la vía de crecimiento y proliferación en detrimento de la vía apoptótica. Los resultados mostraron una mejora de las alteraciones hemodinámicas y de la atrofia simpática, a través de la activación de las vías de supervivencia y la inhibición de la cascada apoptótica y regresión axonal mediada por Rho kinasa. En conclusión, estos resultados indican que la alteración adrenérgica y la atrofia simpática en la vasculatura mesentérica durante la hipertensión portal tiene su origen en alteraciones de la neuromodulación que conducen a regresión simpática post-ganglionar y a apoptosis que contribuyen a la vasodilatación esplácnica. / We have previously demonstrated that portal hypertension causes an important inhibition of messenger RNA and proteins implicated in adrenergic neurotransmission and a marked atrophy in the sympathetic nerves surrounding mesenteric vasculature. This sympathetic atrophy could be contributing to the splanchnic vasodilation of portal hypertension. Our hypothesis assumed that during portal hypertension, pressure changes detected in the splanchnic vascular área could promote a signal through the visceral afferent sensitive pathway to the cardiovascular regulatory nuclei of the brainstem, triggering from there an efferent response resulting in sympathetic atrophy. The present results confirm this hypothesis and support the role for sympathetic atrophy in splanchnic arterial vasodilation of portal hypertension, showing that by blocking the sensitive afferent signal with capsaicin, the splanchnic sympathetic atrophy can be prevented in those animals where, simultaneously, the hemodynamic alterations were normalized. Indeed, in the superior mesenteric ganglia (SMG) of PVL, which contains the somas of adrenergic neurons that innervate the mesenteric vasculature, an increase in neuronal modulators such as nerve growth factor (NGF), its precursor proNGF and the chimiorepelent Semaphorine 3A (Sema3A) molecule was demonstrated. Sema3A localized in the interneuronal space surrounding adrenergic neurons and colocalizing with VAChT positive fibers. This increment in neuronal modulators was also avoided in capsaicin treated PVL. In the second part of the study, the neural pathway of portal hypertension was confirmed through the analysis of two intermediate structures. An increase in neuronal afferent activity was demonstrated in the vagal nodose ganglia of PVL rats and presence of Sema3A in the cholinergic sympathetic preganglionic neurons of the intermediolateral nucleus of the spinal cord suggested that it was the origin of the increased expression of Sema3A in the SMG. We also investigated alterations on neuromodulators and signaling pathways that, in the SMG of PVL rats, lead to axonal regression or apoptosis. We found that the active form of tyrosine kinase receptor A (TrkA), leading to proliferation and survival signaling was decreased in PVL compared to sham rats. In contrast, the apoptotic and axonal retraction pathways were stimulated in PVL, demonstrated by a significant overexpression in Sema3A and its receptor Neuropilin1, together with an increase in the neurotrophic receptor p75, the active caspase7 and the inactive poly(ADP-ribose) polymerase kinase expression. Finally, we tested the administration of a TrkA agonist, gambogic amide, in PVL rats. Our results showed an amelioration of hemodynamic alterations and sympathetic atrophy, through the activation of survival pathways and the inhibition of the apoptotic cascade and axonal regression mediated by Rho kinase. In conclusion, these results suggest that the adrenergic alterations and sympathetic atrophy observed in mesenteric vessels during portal hypertension is caused by alterations on neuromodulation leading to postganglionic sympathetic regression and apoptosis contributing to splanchnic vasodilation.

El procés tumorigènic ha estat descrit com un procés gradual en el que les cèl·lules normals van acumulant alteracions genètiques que els hi confereixen avantatges selectives de creixement i les transformen cap a un fenotip maligne. Aquesta visió tant focalitzada en la cèl·lula tumoral ha anat evolucionant i actualment un tumor ja no és considerat exclusivament com una massa de cèl·lules tumorals, sinó que és vist com un teixit complex compost per multitud de cèl·lules no malignes que constitueixen l’estroma tumoral, imprescindible en les diferents etapes del procés carcinogènic. Constituït per una matriu extracel·lular que envolta diferents subtipus cel·lulars (cèl·lules angiogèniques, immunitàries i fibroblasts associats a carcinoma), les interaccions directes o indirectes que s’estableixen entre els seus components i les cèl·lules neoplàsiques són claus per a l’evolució del procés. Els fibroblasts associats a carcinoma o CAFs (“Carcinoma associated fibroblasts”), són els principals components de tumors sòlids com el de mama, pulmó o còlon; caracteritzats per un elevat grau de desmoplasia. Els CAFs, denominats també miofibroblasts per l’expressió de l’alfa actina del múscul llis (α-SMA), presenten una elevada heterogeneïtat tant a nivell molecular com genètic. La identificació de biomarcadors específics que en permetin la seva distinció de la resta de fibroblasts aliens al tumor, es presenta com un repte important tant en el pronòstic com en el tractament d’aquest tipus de tumors. El present treball es centra en els CAFs del càncer colorectal. Compara tant a nivell funcional com transcripcional els fibroblasts presents en les diferents demarcacions anatòmiques amb els que es pot trobar la cèl·lula neoplàsica al llarg de la progressió tumoral: els fibroblasts de la mucosa colònica normal adjacent al tumor primari (NCF), els fibroblasts associats al tumor primari (CAF-PT), i els fibroblasts associats a la metàstasi hepàtica (CAF-LM). Fent ús de la tecnologia dels microarrays, s’han analitzat els perfils d’expressió dels diferents fibroblasts per a identificar biomarcadors moleculars diferencials, útils com a possibles dianes terapèutiques. També s’han definit un seguit de signatures genètiques estromals amb valor pronòstic. Són dues les aproximacions que s’han dut a terme en aquesta tesi. Per una banda, tot i que s’ha vist que els miofibroblasts de les diferents localitzacions anatòmiques del carcinoma colorectal presenten un perfil transcriptòmic diferent, s’ha definit una signatura d’expressió gènica comú a les tres demarcacions i gradual al llarg de la seqüència de progressió tumoral. Així mateix, amb només 19 gens d’aquesta signatura comuna s’ha vist que es poden classificar els pacients afectats de carcinoma colorectal estadis II/III en funció del seu risc de recurrència. Per altra banda, i tenint en compte l’elevat grau d’heterogeneïtat dels miofibroblasts, l’ús de mostres aparellades de fibroblasts de tumor primari i de la mucosa normal, ha permès la identificació d’una signatura de gens diferencialment expressats entre ambdues poblacions. Conèixer gens diferencialment expressats pot ser molt útil alhora d’identificar possibles dianes terapèutiques, a l’estar presents en els fibroblasts associats a carcinoma del càncer colorectal però no en la resta de fibroblasts. A partir dels 108 gens desregulats, a més, s’ha identificat també un classificador genètic constituït únicament per 5 gens estromals i que proporciona una informació més acurada del risc de recurrència que les variables clíniques convencionals. L’anàlisi de la seva expressió sembla facilitar la selecció de pacients estadi II d’alt risc que podrien beneficiar-se amb el tractament de quimioteràpia adjuvant. Aquest classificador ha estat validat tant en dades d’expressió de microarrays independents (validació in silico), com mitjançant la tècnica de la qRT-PCR (PCR quantitativa a temps real); molt més manejable en la pràctica clínica diària. Així doncs, en aquesta tesi es mostra la importància que té l’estroma tumoral en el càncer colorectal, especialment els CAFs (independentment de la seva quantitat), i remarca la rellevància que té el seu estat transcripcional en la prognosi. Així mateix es corrobora que és un tipus cel·lular molt heterogeni i per tant, múltiples i diferents respostes biològiques es poden trobar presents alhora en un mateix tumor; sent el balanç net final entre aquestes respostes el que proveeix el valor pronòstic. / Tumorogenesis has been described as a multistep process where epithelial normal cells accumulate genetic alterations that confer them with selective advantages that transform them into a malignant phenotype. However, in recent years, the role of microenvironment has being getting more important and a tumour is not longer considered as a tumour cell mass, but as a complex tissue. Tumour microenvironment is the cellular environment in which the tumour exists, including angiogenic cells, immune cells, carcinoma associated fibroblasts and the extracellular matrix. The tumour and the surrounding microenvironment are closely related and interact with each other influencing and determining the tumour’s fate. Carcinoma associated fibroblasts (CAFs) are the main constitutors of that tumour stroma, especially in solid tumours such as breast, lung and colon; characterized by a high degree of desmoplasia. CAFs, also known as myofibroblasts due to their expression of α-smooth muscle actin (α-SMA), are highly heterogeneous both at molecular and genetic level. Identification of genetic/molecular markers specific of CAFs but not expressed in other fibroblasts, could be useful both in treatment and prognosis. The current work is focus on carcinoma associated fibroblasts from colorectal cancer (CAFs). It compares both at functional and transcriptional level, fibroblasts from different anatomic demarcations involved in colorectal tumour progression: fibroblasts from normal colonic mucosa adjacent to primary tumour (NCF), carcinoma associated fibroblasts from primary tumour (CAF-PT), and carcinoma associated fibroblasts from liver metastases (CAF-LM). Using microarray technology, analysis of gene expression profile from different fibroblasts has been performed in order to identify for differentially molecular biomarkers that could be useful as a therapeutic targets. As well as, prognostic stromal gene signatures have been defined. Two main approximations have been performed in this work. Firstly, although we have seen that myofibroblasts from different anatomic demarcations in colorectal cancer show different gene expression profile; we have been able to identify a common gene expression signature make up of genes whose expression is sequential and scalable in tumour progression (NCF-CAF-PT and CAF-LM). Only 19 of these common genes from the fibroblast progression signature are enough to classify colorectal cancer patients stage II/III in terms of risk recurrence. Additionally, and considering high heterogeneity of myofibroblasts, using matched samples of carcinoma associated fibroblasts from primary tumour and from normal colonic mucosa, allows us to identify a list of differentially expressed genes between both populations. Identification of differentially expressed genes in one population but not in the other could be useful to identify new molecular biomarkers and therapeutic targets specific for CAFs. We have refined the list of de-regulated gens defining a 5-gene stromal classifier which provides risk recurrence information more accurately than conventional clinical variables do; and also allows better identification of stage II colorectal cancer patients at high risk of recurrence, who could benefit with adjuvant treatment. The stromal classifier has been validated in microarray data from independent datasets (in silico validation) and also by means of qRT-PCR (quantitative real time PCR), more affordable in clinical practice. To summarize, this work shows how important tumour stroma is in colorectal cancer, specially, carcinoma associated fibroblasts. Their transcriptional state seems to be more relevant in colorectal cancer prognosis than their proportion in the tumour stroma. As well as, we confirm that CAFs are highly heterogeneous and different biological responses could be present at the same time in the same tumour determining the final prognosis.

El traumatismo cráneo encefálico (TCE) moderado y severo produce una gran variedad de alteraciones que pueden ser físicas, cognitivas y conductuales. Los cambios conductuales y emocionales son una de las secuelas más devastadoras del TCE. Diferentes trabajos señalan la disminución que provocan en la calidad de vida del paciente; de sus capacidades vitales, laborales, relacionales y afectivas; pero también el gran impacto que tienen en la familia ya que generan situaciones de gran dependencia que exigen una reorganización con la consiguiente sobrecarga del cuidador principal. El presente estudio fue realizado con pacientes afectos de traumatismo cráneo encefálico moderado y severo y sus familiares, con el objetivo de valorar los síntomas conductuales, su evolución en el tiempo y la repercusión que estos tienen en la funcionalidad del paciente y en la sobrecarga del cuidador. Se estudió un grupo de 150 pacientes mediante mediciones transversales y también mediante un seguimiento longitudinal a un año de un sub-grupo de 50 individuos. Las valoraciones se realizaron mediante entrevista clínica utilizando criterios DSM-IV-TR; así como a partir de la administración de escalas neuroconductuales tales como el Inventario Neuropsiquiátrico (NPI) y la Escala Comportamental de Sistemas Frontales (FrSBe). Los resultados permiten afirmar que alrededor de un 90% de los individuos, desde los primeros seis meses del traumatismo y hasta ocho años después de la lesión, presentan algún grado de psicopatología. Los síntomas predominantes son la apatía, la irritabilidad, la desinhibición y las alteraciones de la alimentación. Síntomas de tipo psicótico como alucinaciones, delirios y comportamientos motores aberrantes fueron infrecuentes en nuestra población. La valoración subjetiva de los familiares indica que hasta en un 32% de los individuos aparecen cambios positivos en la personalidad como ser más cariñoso, amable, abierto, expresivo de las emociones y sociable; pero también ser menos impulsivo e irritable. Los factores de riesgo para desarrollar alteraciones conductuales fueron la duración de la amnesia postraumática y la historia de consumo de tóxicos. En nuestro estudio, el diagnostico clínico de cambio orgánico de la personalidad según criterios DSM-IV-TR se correlacionó con la psicopatología medida con la escala NPI. Un resultado consistente fue la repercusión negativa que tienen las alteraciones conductuales en los familiares de los pacientes con TCE moderado y severo. Debido a la elevada prevalencia de psicopatología en estos pacientes y a la sobrecarga que genera en los familiares, se recomienda hacer una búsqueda activa de los trastornos conductuales en los servicios de daño cerebral y a realizar una adecuada intervención como parte del proceso integral neurorrehabilitador. / The moderate and severe traumatic brain injury (TBI) produces a variety of impairments that can be physical, cognitive and behavioral. Behavioral and emotional changes are one of the most devastating consequences of TBI. Different studies show that the behavioral disorders cause a decrease in the quality of life for patients, their life skills, but also their labor and social integration. They have a great impact on the family and caregiver burden because the high dependency situations that generate. This study was conducted with moderate and severe TBI patients and their families, with the aim of assessing the behavioral symptoms, their evolution over time and the impact they have on the functionality of the patient and caregiver burden. We studied a group of 150 patients with transverse measurements and also by a one-year longitudinal follow-up of a sub-sample of 50 subjects. The assessments were performed by clinical interview using DSM- IV -TR , as well as the administration of neurobehavioral scales such as the Neuropsychiatric Inventory ( NPI) and the Frontal Systems Behavior Scale (FrSBe). The results support that about 90 % of individuals, from the first six months after the injury and up to eight years after the injury, present some degree of psychopathology. The predominant symptoms are apathy, irritability, disinhibition and eating disorders. Psychotic symptoms such as hallucinations, delusions and aberrant motor behaviors were infrequent in our population. Subjective evaluation of the family members indicates that up to 32 % of individuals have some positive changes in personality as being more loving, kind , open, expressive of emotions and sociable, but also be less impulsive and irritable. Risk factors for developing behavioral disorders were the duration of posttraumatic amnesia and history of drug and alcohol consumption. In our study, the clinical diagnosis of organic personality change according to DSM -IV-TR correlated with psychopathology as measured by the NPI. A consistent finding was the negative impact that the behavioral disorders produce in relatives of patients with moderate and severe TBI. Due to the high prevalence of psychopathology in these patients and the burden generated to the family, it is recommended to actively search behavioral disturbances in brain injury services and appropriate intervention as part of comprehensive neurorehabilitation.

INTRODUCCIÓN: La localización radioguiada de lesiones no palpables de mama, conocida internacionalmente como ROLL, es una alternativa al método convencional de marcaje (arpón). Se puede realizar simultáneamente con la biopsia selectiva del ganglio centinela (GC) en pacientes con tumores clínicamente ocultos, conocida como técnica SNOLL. OBJETIVOS: Primario: Demostrar la utilidad de ROLL y SNOLL en pacientes con lesiones no palpables de mama (LNPM). Secundarios: Valorar la correcta localización intralesional del radiofármaco y analizar los márgenes de resección; evaluar los porcentajes de detección gammagráfica y quirúrgica del GC; valor de la ROLL en el diagnóstico de las LNPM con biopsia indeterminada; valorar la utilidad de la localización simultánea ROLL y GC (técnica SNOLL) en pacientes con cáncer no palpable de mama; valorar la utilidad de la localización simultánea ROLL y GC en pacientes tratadas con quimioterapia neoadyuvante (QTNA). MATERIAL Y MÉTODOS: Pacientes. Se distinguen 3 grupos: Grupo A pacientes con LNPM (69); Grupo B pacientes con cáncer no palpable de mama (27). Grupo C pacientes con cáncer de mama tratadas con QTNA (31). Protocolo exploratorio: 1) Administración intralesional, guiada mediante ecografía o mamografía estereotáxica, de macroagregados de albúmina marcados con 99mTC. En caso de detección simultánea del GC se administran nanocoloides-99mTc intratumoral (en grupo B) o subdermal (en grupo C). 2) Adquisición de imágenes gammagráficas para comprobar correcta colocación del radiofármaco a nivel intralesional e identificar el GC. 3) Exéresis quirúrgica de la lesión y del GC con la ayuda de una sonda gammadetectora. 4) Comprobación de la pieza quirúrgica (mamografía o inspección). Análisis anatomopatológico de la lesión primaria y de los bordes de resección. Parámetros estadísticos evaluados: valor predictivo negativo (VPN) y porcentaje falsos negativos (FN). RESULTADOS: Hubo correcta colocación intralesional del radiofármaco en 66/69 casos (95.6 %) en el grupo A, en los 27 casos (100%) del grupo B y en 30/31 casos (97%) en el grupo C. En el grupo A: La ROLL permitió resecar completamente la lesión en 21/32 de las malignas (66%). En el grupo B: los bordes de resección en el grupo B fueron libres en el 67% y cercanos en el 25%. Se identificó el GC en 26 casos (96%). El VPN fue del 100%. En el grupo C: Se identificó el GC en 28 casos (90%). El VPN fue del 87.5 % y el porcentaje de FN fue de 9.6 %. CONCLUSIONES: La técnica ROLL es una técnica de marcaje sencilla, segura y precisa para localizar lesiones no palpables de mama. Permite seleccionar la mejor vía de abordaje quirúrgico. La técnica SNOLL facilita la localización y exéresis quirúrgica de la lesión primaria no palpable debido a la elevada retención del radiotrazador en el punto de inyección y la migración del mismo por las vías de drenaje linfático permite la identificación del GC en un elevado porcentaje de pacientes. La BSGC en pacientes tratadas con QTNA predice el estado ganglionar axilar en un 85% de los casos y permite un análisis anatomopatológico exhaustivo del GC mejorando la identificación de las micrometástasis en los ganglios con cambios post-quimioterapia, aunque presenta una elevada tasa de FN. / INTRODUCTION: Radioguided non palpable breast lesion localization, known as ROLL, is an alternative to the standard preoperative method (wire-guide). Simultaneous SLNB and non palpable breast localization is feasible in patients with occult tumors, a procedure known as SNOLL. OBJECTIVES: Primary objective: To show the utility of ROLL and SNOLL in patients with non palpable breast lesions. Secondaries objectives: To assess the correct intralesional radiotracer localization and to analyze the status of surgical margins; to assess scintigraphic and intraoperative identification rates of sentinel lymph node (SLN); the utility of ROLL in the diagnoses of indeterminate non palpable breast lesions (NPBL); to assess the utility of the SNOLL in patients with non palpable breast tumors; to assess the utility of simultaneous of the ROLL and SLNB in patients with locally advanced breast cancer (LABC) treated with neoadjuvant chemotherapy (NC). MATERIAL AND METHODS: Patients. We have distinguished 3 groups: A patients with indeterminate NPBL (69); B patients with non palpable breast cancer (27). C patients with LABC treated with NC (31). Exploratory protocol: 1) Intralesional radiotracer injection guided by ultrasound or stereotactic mammography (human serum albumin macroaggregates labelled with 99mTc). Intratumoural (in group B) or subdermal (in group C) radiotracer (nanocolloids labelled with 99mmTc) injection was performed when simultaneous SLNB. 2) Scintigraphic scans were performed in order to verify the intralesional correct placement of radiotracer and to identify the SLN. 3) Surgical removal of the lesion and SLNB were performed using a gamma probe. 4) Removed specimen was verified by mammography control or macroscopic inspection. Anatomopathological analysis of the primary lesion and surgical margins was performed. Statistical parameters (negative predictive value-NPV- and false negative-FN rate) were evaluated. RESULTS: Intralesional placement of tracer was correct in 66/69 cases (95.6 %) of group A, in 27 cases of group B (100%) and in 30/31 cases (97%) of group C. ROLL allows complete removal of the lesion in 21/32 of the malign lesions (66%) in group A. In group B, surgical margins were free in 67% and closed in 25%. SLN was detected in 26 cases (96%). NPV was 100%. In group C: Intraoperative detection of SN was found in 28 cases (90%). NPV and FN were 87.5 % and 9.6 %. CONCLUSIONS: ROLL is a simple, safe and precise preoperative localization in non palpable breast lesions. ROLL allows the more appropriate surgical procedure. SNOLL allows the localization and surgical removal of the non palpable breast tumor due to high retention of tracer in the place of injection and its migration through the lymphatic channels allow the identification of SN in a high number of patients. The SLNB in patients with breast cancer treated with NC predicts the status of axillary region in 85% patients and allows an accurate anatomopathological analysis of SL, improving the identification of the micrometastases in nodes with chemotherapy changes, although it has a high rate of FN.

Dentro de los cánceres de pulmón de célula no pequeña se ha concentrado una gran cantidad de esfuerzos en los adenocarcinomas, tanto en la práctica clínica diaria como en la investigación básica. Por ello, este tipo histológico es uno de los tumores mejor caracterizados desde el punto de vista molecular y se han desarrollado diversas terapias dirigidas contra alteraciones genéticas frecuentes en el mismo, terapias que han conseguido mejoras objetivas en supervivencia y calidad de vida en subgrupos seleccionados de pacientes. En comparación, el carcinoma escamoso ha recibido una atención relativa y no existen fármacos específicos contra el mismo en uso clínico, ni se han identificado claros marcadores moleculares con valor predictivo o pronóstico. En este trabajo, se incluyeron 95 pacientes diagnosticados de carcinoma escamoso de pulmón del Hospital Universitario Quirón Dexeus y del Hospital Universitari General Germans Trias i Pujol. De todos ellos se recogieron los datos clínicos de edad, sexo, performance status (estado general), habito tabáquico, estadio clínico y TNM al diagnóstico. Los patólogos de ambos centros hicieron una selección de muestras tumorales a estudiar y tras valoración y macro o microdisección de las mismas, se analizaron 19 genes mediante cuatro técnicas de biología molecular buscando: mutaciones, amplificaciones y niveles de expresión génica, con el objetivo de realizar una caracterización molecular en este tipo de tumor analizando genes clave, así como identificar marcadores moleculares pronósticos o predictivos. Los resultados de la presente tesis apoyan la hipótesis que el carcinoma escamoso constituye una entidad diferenciada del adenocarcinoma desde el punto de vista molecular. Muchas alteraciones genéticas se hallan en porcentajes distintos en ambos tipos histológicos (como las mutaciones de EGFR o PIK3CA) y en algunos casos los subgrupos de alteraciones genéticas también difieren (como es el caso de las mutaciones de K-RAS, siendo la G12C mucho más frecuente en adenocarcinomas de fumadores). Finalmente, ciertas alteraciones parecen ser casi exclusivas del carcinoma escamoso (como la amplificación de FGFR1, PIK3CA o SOX2). En este trabajo se han identificado diversos marcadores con posible valor pronóstico en carcinoma escamoso que sería interesante validar en una cohorte más amplia de pacientes lo que permitiría, además, correlacionarlos con distintos tratamientos. En estadios I-IIIA se ha correlacionado la alta expresión de los genes SOX2 y EZH2 con una mejor Overall Survival (OS) y Progression Free Survival (PFS) de forma estadísticamente significativa. Por otro lado, en estadios avanzados, no mutaciones de K-RAS, co-amplificación de SOX2 + PIK3CA y elevada expresión de los genes SIAH2, BRCA1 y EZH2 correlacionaban, de forma estadísticamente significativa o quasi-significativa, con OS más larga. Estos tres últimos genes se asociaban también a mejor PFS. Todos estos marcadores se podrían integrar en firmas genéticas específicas con valor pronóstico para carcinoma escamoso. Por lo general, se considera al carcinoma escamoso como un subtipo histológico sin marcadores predictivos definidos y con un arsenal de terapias dirigidas limitado en comparación con el adenocarcinoma. Esta tesis demuestra que esta visión no se corresponde con la realidad. En efecto, un porcentaje muy elevado de pacientes con esta patología presenta alteraciones moleculares susceptibles de tratamiento con fármacos dirigidos en uso clínico (como los inhibidores de la tirosina quinasa) o en fases avanzadas de ensayos clínicos, entre los que podemos citar amplificaciones de FGFR1, AXL y MET o las mutaciones de PIK3CA. Sería interesante que se iniciaran más ensayos clínicos para determinar el beneficio terapéutico de tratamientos dirigidos e identificar biomarcadores de respuesta adicionales en carcinoma escamoso. / Within non-small-cell lung cancer, a great deal of research efforts have focused on adenocarcinomas, both in daily clinical practice and basic research. This histological type is therefore one of the best characterized tumors from the molecular point of view, and targeted therapies against common genetic alterations have been developed which have achieved improvements in survival and quality of life in selected subgroups of patients. In comparison, less attention has been paid to squamous cell carcinoma, and no targeted therapies exist against this subtype for clinical use; neither have any molecular markers with clear predictive or prognostic value been identified. In the present study, we included 95 patients diagnosed with squamous cell carcinoma of the lung from the Hospital Universitario Quirón Dexeus and Hospital Universitario Germans Trias i Pujol. Clinical data was collected for all patients: age, sex, performance status, smoking habits, and TNM stage at diagnosis. Pathologists from both hospitals selected the tumor samples to be studied and, after evaluation and macro- or micro-dissection, 19 genes were analyzed using four different molecular biology techniques to look for mutations, amplifications and gene expression levels, with the aim of molecularly characterizing this tumor type, analyzing key genes and identifying prognostic or predictive molecular markers. The results of this thesis support the hypothesis that squamous cell carcinoma of the lung is a distinct entity from adenocarcinoma from the molecular point of view. Many genetic alterations (such as EGFR or PIK3CA mutations) have different rates of detection between both histological types, and in some cases the subgroups of genetic alterations also differ (as in the case of K-RAS mutations, G12C being much more frequent in adenocarcinoma in smokers). Finally, some alterations appear to be almost exclusive to squamous cell carcinoma (such as FGFR1, PIK3CA and SOX2 amplification). In this paper we have identified several markers with potential prognostic value in squamous cell carcinoma which it would be interesting to validate in a larger cohort of patients, something which would also permit correlation of these markers with different treatments. In stages I-IIIA, high expression of EZH2 and SOX2 genes has been correlated with statistical significance with better overall survival (OS) and progression free survival (PFS). Similarly, in advanced stages, K-RAS wild type, co-amplification of PIK3CA + SOX2 and high expression of SIAH2, BRCA1 and EZH2 correlated, also statistically significantly or quasi-significantly, with longer OS. These last three genes were also associated with better PFS. All these markers could be integrated into specific genetic signatures with prognostic value in squamous cell carcinoma. In general, squamous cell carcinoma is considered to be a histological subtype without defined predictive markers and with a limited arsenal of targeted therapies when compared to adenocarcinoma. This thesis demonstrates that this view does not correspond to the reality. In fact, a high percentage of patients with this disease have molecular alterations which are susceptible to treatment with targeted drugs currently in clinical use (such as tyrosine kinase inhibitors) or under investigation in advanced phase clinical trials, such as FGFR1, AXL and MET amplifications or PIK3CA mutations, among others. It would be interesting to initiate more clinical trials to determine the therapeutic benefit of targeted therapies and identify additional biomarkers of response in squamous cell carcinoma of the lung.

Objetivo: La detección temprana del cáncer gástrico (CG) es crucial para el tratamiento y supervivencia del paciente. Sin embargo, la adherencia a programas de cribado del CG con los actuales métodos de screening es extremadamente baja. Este estudio fue diseñado para identificar y validar una firma de expresión de proteínas específicamente asociada a la malignización de la mucosa gástrica mediante el empleo de técnicas proteómicas de bajo coste. Métodos: Se llevó a cabo la detección de 120 citoquinas, 43 factores angiogénicos, 41 factores de crecimiento, 40 factors inflamatorios y 10 metaloproteasas mediante el empleo de micromatrices de proteínas basadas en anticuerpos disponibles comercialmente (RayBiotech, Inc.). Se analizaron 33 muestras pareadas divididas en un set de entrenamiento (n=11 pacientes) y un set de validación (n=22 pacientes) para la identificación de proteínas expresadas diferencialmente en la mucosa normal y tumoral de los pacientes. Resultados: El empleo de la cohorte de descubrimiento permitió la identificación de 21 proteínas con niveles de expresión significativamente alterados en las muestras tumorales respecto al tejido normal. Para analizar el funcionamiento de los 21 predictores en la clasificación de muestras desconocidas, llevamos a cabo un test de predicción ciega del fenotipo “CG” o “mucosa normal” en un set blindado de muestras. El empleo de esta cohorte independiente de validación demostró que la firma de 21 proteínas fue capaz de clasificar las muestras de mucosa gástrica como “CG” o “mucosa normal” con una sensibilidad del 82% (IC95% 59-94) y una especificidad del 73% (IC95% 49-89). Los valores predictivos positivos (CG) o negativos (mucosa normal) de la firma de 21 proteínas en la cohorte de validación fueron del 75% (IC95% 53-90) y del 80% (IC95% 56-94), respectivamente. La firma de 21 proteínas estuvo enriquecida con factores implicados en la respuesta inflamatoria/inmune y quimiotaxis. Conclusiones: El análisis de proteomas complejos en tejidos tumorales como el CG mediante el empleo de micromatrices de proteínas basadas en anticuerpos es una nueva herramienta de utilidad para definir firmas oncoproteómica específicamente asociadas con el proceso de malignización. Nuestro estudio fue capaz de identificar y validar una firma de 21 proteínas capaz de discriminar de manera sensible y específica la presencia de CG en la mucosa gástrica. Dado que la mayoría de los biomarcadores incluidos en la firma pertenecen a familias de proteínas secretadas al medio extracelular, los resultados obtenidos en este estudio justifican el desarrollo de nuevos estudios de validación de la firma oncoproteómica de 21 proteínas en la sangre para el diagnóstico y detección precoz del CG en una población asintomática. / Purpose: The early detection of gastric cancer (GC) is crucial for successful treatment and patient survival. However, compliance with current screening methods remains poor. This study aimed to identify and validate an accurate a tissue-based protein expression signature for GC detection using low-cost affinity proteomics. Methods: The detection of 120 cytokines, 43 angiogenic factors, 41 growth factors, 40 inflammatory factors and 10 metalloproteinases was performed using commercially available Human antibody microarray-based Arrays (RayBiotech, Inc.). There were 33 paired samples divided into a training set (n=11) and a validation set (n=22) for the identification of differentially expressed proteins between GC tissues and normal gastric mucosae. Results: Using a discovery cohort of matched pairs of tumor/normal gastric tissues we identified 21 proteins with significant differences in expression between malignant and normal samples. To assess the performance of the 21 predictors in the classification of unknown samples, we carried out a prediction for “GC” or “non-GC” phenotype in a blinded test set. Using this expanded independent validation cohort, the 21-protein expression signature classified gastric samples as “GC” or as “non-GC” with sensitivity of 82% (95% CI 59-94) and a specificity of 73% (95% CI 49-89). Positive predictive value and negative predictive value in this validation cohort was 75% (95% CI 53-90) and 80% (95% CI 56-94), respectively. The signature was significantly enriched in proteins involved in inflammatory/immune and chemotaxis responses. Conclusions: Antibody microarray analyses of complex proteomes in tissue-based studies can be useful tools to define cancer-associated protein signatures. This study identified and validated a 21-protein signature that accurately discriminated GC and noncancerous gastric mucosae. Because most of the biomarkers belonged to the secreted class of proteins, our results prompt the further blood-based development of the GC 21-protein expression signature for the diagnosis and early detection of GC in general population.