La búsqueda de fuentes naturales podría ser una alternativa viable para prevenir o tratar infecciones bacterianas, así mejorando la salud de los animales y obteniendo productos de origen animal más seguros. Esta Tesis se elaboró con el objetivo de evaluar la capacidad de reducir la adhesión bacteriana, en concreto de Escherichia coli enterotoxigénica (ETEC) K88 por parte de diferentes fuentes naturales, para prevenir colibacilosis en lechones. Las fuentes naturales seleccionadas consistieron en productos de origen vegetal (salvado de trigo, cascarilla de soja, pulpa de remolacha, algarroba (vaina+semilla, semilla), goma guar, arándanos, inulina, fructooligosacáridos y champiñones), de origen lácteo (casein glicomacropéptido) y subproductos de origen microbiano (mananoligosacáridos, el extracto de la fermentación de Aspergillus oryzae y exopolisacáridos), los cuales podrían ser considerados como candidatos para ser incluidos en las dietas de los lechones. La hipótesis sobre el papel anti-adhesivo del salvado de trigo (WB) en contra de enteropatógenos derivó de resultados previos de nuestro grupo y ha sido confirmado en los primeros dos ensayos de la presente Tesis. Por esta razón, consideramos que el WB merecía un fraccionamiento adicional para elucidar las moléculas anti-adhesivas involucradas en el reconocimiento de ETEC K88. Además, esta Tesis pretendió explorar la actividad anti-biofilm del WB en un modelo in vitro bien conocido de Staphylococcus aureus, pero también en su posible interferencia con los sistemas de comunicación bacteriana o, también conocidos como sistemas quorum sensing (QS). Con el fin de alcanzar estos objetivos principales, una serie de cuatro ensayos fueron diseñados. Los resultados expuestos en esta Tesis indican que los extractos solubles de casein glicomacropeptido, exopolisacáridos, algarroba (vaina+semilla) y WB podrían considerarse como posibles fuentes naturales para el desarrollo de nuevos aditivos para ser incorporados en las dietas de los lechones al destete y prevenir la colibacilosis post-destete. El interés particular fijado en las propiedades anti-adhesivas del WB llevó al fraccionamiento para comprender mejor el reconocimiento molecular (MW) del proceso de bloqueo que tiene lugar. El fraccionamiento del WB por peso molecular y cromatografía de exclusión molecular reveló que la actividad de bloqueo se mantiene en la fracción >300 kDa. La identificación por espectrometría de masas de algunas de las bandas más relevantes de bajo MW en esta fracción, reveló la presencia de varios inhibidores de proteasa que podrían estar implicados en los efectos de bloqueo presentados en contra de ETEC K88. Finalmente, se encontró que el extracto soluble de WB y la fracción >300 kDa fueron capaces de inhibir la formación de biofilm y también de destruir el biofilm previamente formado por parte de S. aureus. En ese mismo ensayo se demostró que el WB así como la fracciones >300 kDa y <300 kDa contienen cierta actividad lactanasa capaz de reducir la concentración de AHL en el medio. Toda la información recogida puede considerarse para el desarrollo de nuevos agentes anti-adhesion, anti-biofilm y quorum quenching a partir del salvado de trigo para prevenir infecciones bacterianas. / Looking for natural sources may be a feasible alternative to prevent or treat bacterial infections, thus enhancing animal health and obtaining safer animal products. This Thesis was devised with the aim of screening among natural sources their ability to reduce bacterial adhesion, in particular against enterotoxigenic Eschericha coli (ETEC) K88, to prevent colibacillosis in young pigs. The selected natural sources consisted of products of vegetable origin (wheat bran, soybean hulls, sugar beep pulp, locust bean and gum, guar gum. cranberry, inulin, fructooligosaccharides and mushrooms), dairy (casein glycomacropeptide) and microbial by-products (mannan-oligosaccharides, the fermented extract of Aspergillus oryzae and exopolysaccharides), which could be considered as candidates to be included in a piglet’s diet. The hypothesis on the anti-adhesive role of wheat bran (WB) against enteropathogens derived from previous results from our group and was subsequently confirmed in the first two trials of the current Thesis. For this reason we considered that WB deserved further fractionation to elucidate the putative anti-adhesive molecules involved in the ETEC K88 recognition. Moreover, this Thesis professed into exploring the anti-biofilm activity of WB in an in vitro well-known biofilm model of Staphylococcus aureus, but also in its possible interference with bacterial quorum-sensing (QS) systems. In order to achieve these main objectives a set of four trials were designed. Results exposed in this Thesis indicate that soluble extract of casein glycomacropeptide, exopolysaccharides, locust bean and WB should be considered as possible natural sources for the development of new additives to be included in weaned piglet’s diets and prevent post-weaning collibacillosis. The particular interest set on WB anti-adhesive properties led to the fractionation to gain understanding of the molecular recognition of the blocking process that takes place. The fractionation of WB by molecular weight (MW) and size-exclusion chromatography revealed that blocking activity is retained in the >300-kDa fraction. The identification of some relevant bands of low MW in this fraction by mass spectrometry revealed the presence of various protease inhibitors that could be implicated in the reported blocking effects against ETEC K88. Finally, it was found that the soluble extract of WB and the >300-kDa fraction were able to inhibit the biofilm formation and also the destruction the biofilm previously formed by S. aureus. In the same trials was demonstrated that WB as well as the >300 kDa and the <300 kDa contain certain lactanase activity able to reduce AHL concentration in the medium. All the gathered information can eventually pave the way for the development of novel anti-adhesion, anti-biofilm and quorum quenching therapeutic agents from wheat bran to prevent bacterial pathogenesis.

El objetivo principal de esta tesis consiste en la validación al castellano de un banco de estímulos audiovisuales que puedan servir de herramienta de inducción de diferentes emociones básicas en un entorno experimental. Se ha reunido en una batería 57 fragmentos de películas con capacidad para inducir emociones (PIE) que permitan a los investigadores elegir un estímulo adecuado a las características de su propio estudio. Para ello, se ha intentado verificar el grado en que se producía la emoción en población normal de habla española a través de diversas variables subjetivas y psicofisiológicas. Además, la mayoría de los estímulos que ofrece este instrumento han sido testados previamente en estudios internacionales anteriores (Gross y Levenson, 1995, Schaefer, Nils, Sanchez y Philippot, 2010) y muchos de ellos ya han formado parte de numerosas investigaciones sobre la emoción llevadas a cabo en otras lenguas (inglés y francés) en el ámbito de diferentes culturas. Para analizar la capacidad para inducir emociones de la versión española del instrumento, se han elegido variables que ofrecen un elevado consenso en el campo de la investigación y que vienen avaladas por diversos estudios a nivel internacional. En cuanto a la percepción subjetiva de la emoción, nos hemos basado en las emociones primarias descritas comúnmente en la literatura sobre este tema, creando un autoinforme para comprobar su grado de elicitación. En cuanto a las variables fisiológicas, el estudio recoge dos variables objetivas directamente relacionadas con los correlatos fisiológicos producidos por las emociones: la actividad electrodérmica y la frecuencia cardiaca. Esta tesis incluye dos estudios. Ambos se han llevado a cabo sobre 127 sujetos entre 17 y 69 años. El primer estudio, investiga la capacidad de producir emociones a nivel de experiencia subjetiva y, el segundo estudio, a nivel fisiológico mediante variaciones en la conductancia dermal y frecuencia cardiaca. El resultado final es una batería de películas inductoras de emociones con unas características propias para cada escena. Los resultados indican que la batería de películas ha mostrado capacidad para inducir emociones positivas y negativas, niveles elevados de arousal y variaciones en la percepción del control emocional. También ha mostrado capacidad para inducir emociones básicas subjetivas diferenciadas de miedo y diversión, aunque las emociones de tristeza y asco no se inducen de forma diferenciada respecto a ira, ni las emociones de ternura e ira respecto a tristeza. No obstante, sí se observa una elevada sensibilidad y especificidad para cada categoría emocional. Las respuestas fisiológicas inducidas por la batería de películas sólo fueron significativas para las categorías de miedo e ira. Los datos publicados incluyen las puntuaciones de cada escena para cada emoción básica valorada (miedo, ira, asco, alegría, ternura, tristeza y neutro) así como en las dimensiones de valencia afectiva, arousal y dominancia. Estas puntuaciones permiten elegir fácil y rápidamente el estímulo adecuado para cada investigación, mejorando la estandarización y facilitando los procesos de selección de estímulos cuando las necesidades de la investigación requieran elicitar una emoción. / The main objective of this thesis consists in the Spanish validation of an audiovisual stimuli pool which could be used as an induction tool for different basic emotions in an experimental environment. 57 film excerpts capable of inducing emotion have been gathered in a battery (PIE) which would allow researchers to choose a suitable stimulus depending on their research features. To this end, it has been attempted to verify the extent that emotion was evoked in the normal Spanish speaking population through various subjective and psycho-physiological variables. Moreover, most of the stimuli provided by this instrument have been previously tested in earlier international studies (Gross and Levenson, 1995; Schaefer, Nils, Sanchez and Philippot, 2010) and many of them have already been part of numerous studies on emotion conducted in other languages (English and French) within the scope of different cultures. In order to test the ability to induce emotions of the Spanish version of the instrument, variables which offer a high consensus in the field of research and supported by various international studies were chosen. As for the subjective perception of emotion, we have relied on primary emotions commonly described in the literature on this subject, creating a self-report test to check emotion elicitation. For physiological variables, the study includes two objective variables directly related to the physiological correlates produced by emotions: electro-dermal activity and heart rate. This thesis includes two studies. Both have been conducted on 127 subjects between 17 and 69 years. The first study investigated the ability to produce emotions as a subjective experience, the second study, at a physiological level by varying dermal conductance and heart rate. The final outcome is a battery of emotion-inducing films with particular characteristics for each video clip. The results indicate that the battery of films has demonstrated the capacity to induce positive and negative emotions, high levels of arousal and changes in emotional control perception. It has also shown ability to induce differentiated subjective basic emotions of fear and joy, but the emotions of sadness and disgust are not induced differentially with respect to anger, and emotions of tenderness and anger versus sadness. However, a high sensitivity and specificity are observed for each emotional category. The physiological responses induced by the films battery were only significant for the categories of fear and anger. The published data include the scores of each scene for every basic emotion assessed (fear, anger, disgust, joy, tenderness, sadness and neutral) as well as the dimensions of affective valence, arousal and dominance. These ratings quickly and easily allow choosing the right stimulus for each investigation, improving standardization and facilitating stimuli selection processes when research needs require emotion elicitation.

Resums pendents

La cirurgia de mínima invasió, en particular la cirurgia laparoscòpica, s'ha convertit en una opció de referència en molts procediments. Això és degut al seus beneficis ja provats en el pacient. No obstant això, per poder realitzar aquestes tècniques és obligat passar per un període d'aprenentatge, on els simuladors juguen un paper molt important en l'adquisició de noves habilitats quirúrgiques. Els objectius d'aquest estudi són descriure el desenvolupament d'un Simulador Laparoscòpic Caní (SLC) per veterinaris, validar el seu programa de formació i determinar la seva utilitat en l'adquisició de noves habilitats quirúrgiques, així com avaluar els problemes ergonòmics durant la realització de tasques de formació laparoscòpica utilitzant el SLC. Els diferents estudis d'aquest treball inclouen un total de 84 veterinaris amb diferent graus d' experiència en cirurgia laparoscòpica. El programa d'entrenament consistia en quatre tasques realitzades sobre el SLC: coordinació, trasllat d'objectes, tall i sutura. Diversos programes informàtics, així com imatges de tomografia d'ordinadors van ser utilitzats per a la realització del SLC. Com a mesures objectives de valoració, s'ha utilitzat el temps d'execució, l'escala GOALS (Global Operative Assessment of Laparoscopic Skills) i una llista de tasques específiques per avaluar el programa d'entrenament laparoscòpic. Quant a l'estudi d' ergonomia, es va analitzar l'activitat muscular mitjançant electromiografia de superfície i es van enregistrar els moviments de la mà mitjançant un guant virtual. El SLC ha tingut una bona acceptació preliminar en les tasques bàsiques de la laparoscòpia. Els resultats de les proves de validació mostraven que el SLC és adequat per l'entrenament i ensenyament de tasques bàsiques laparoscòpiques. És capaç de distingir el grau d'experiència laparoscòpica entre els veterinaris. Les tasques de tall i sutura mostraven un major grau d'activitat muscular. D'altra banda, el mànec axial mostrava millors postures ergonòmiques en comparació amb el mànec anellat durant les diferents tasques del programa de formació en el SLC. En conclusió, el SLC és una bona eina per a la formació en cirurgia laparoscòpica per a veterinaris, encara que té algunes limitacions inherents a tots els simuladors. A més a més, el SLC ha demostrat la seva validesa de continguts i constructiva amb el seu programa de formació laparoscòpica en veterinaris. Finalment, l'ergonomia laparoscòpica en veterinaris es veu afectada pel tipus de tasca, així com pels instruments utilitzats durant l'entrenament amb el SLC. / La cirugía de mínima invasión, en particular la cirugía laparoscópica, se ha convertido en una opción de referencia en muchos procedimientos. Esto es debido a sus ya demostrados beneficios para el paciente. Sin embargo, para poder realizar estas técnicas se requiere pasar por un periodo de aprendizaje, en el cual los simuladores juegan un papel muy importante en la adquisición de nuevas destrezas quirúrgicas. Los objetivos de este trabajo son describir el desarrollo de un Simulador Laparoscópico Canino (SLC) para veterinarios, validar su programa de entrenamiento y determinar su utilidad en la adquisición de nuevas habilidades quirúrgicas, así como evaluar los problemas ergonómicos durante la realización de tareas de entrenamiento laparoscópico utilizando el SLC. En los diferentes estudios de este trabajo se incluyeron un total de 84 veterinarios con diferente grado de experiencia en cirugía laparoscópica. El programa de entrenamiento consistió en cuatro tareas realizadas sobre el SLC: coordinación, transferencia de objetos, corte y sutura. Para la realización del SLC se utilizaron diversos programas informáticos, así como imágenes de tomografía computarizada. Como medidas objetivas de valoración, se ha utilizado el tiempo de ejecución, la escala GOALS (Global Operative Assessment of Laparoscopic Skills) y una lista de tareas específicas para evaluar el programa de entrenamiento laparoscópico. En cuanto al estudio de ergonomía, se analizó la actividad muscular mediante electromiografía de superficie y se registraron los movimientos de la mano mediante un guante virtual. El SLC tuvo una buena aceptación preliminar en las tareas básicas de laparoscopia. Los resultados de las pruebas de validación mostraron que el SLC es adecuado para el entrenamiento y la enseñanza en las tareas básicas laparoscópicas, siendo capaz de distinguir el grado de experiencia laparoscópica entre los veterinarios. Las tareas de corte y sutura mostraron mayor grado de actividad muscular. Por otro lado, el mango axial mostró mejores posturas ergonómicas en comparación con el mango anillado durante las diferentes tareas del programa de entrenamiento en el SLC. En conclusión, el SLC es una buena herramienta de formación en cirugía laparoscópica para veterinarios, aunque tiene algunas limitaciones inherentes a todos los simuladores. Además, el SLC ha demostrado su validez de contenidos y constructiva en su programa de formación laparoscópica en veterinarios. Finalmente, la ergonomía laparoscópica en veterinarios se ve afectada por el tipo de tarea, así como por el instrumental utilizado durante el entrenamiento en el SLC. / Minimally invasive surgery, including laparoscopy has become a reference option in many procedures. This is due to its proven benefits for the patient. However, to perform these techniques it is required to go through a learning period in which simulators play an important role in the acquisition of new surgical skills. The objectives of this work are to describe the development of a Canine Laparoscopic Simulator (CLS) for veterinarians, to validate the training program and determine its usefulness in the acquisition of new surgical skills and to assess ergonomic problems while performing laparoscopic training tasks using the CLS. A total of 84 veterinarians with different levels of experience in laparoscopic surgery were included in different studies of this work. The training program consisted of four tasks performed on the CLS: coordination, peg transfer, cutting and suturing. To build the CLS various informatics programs were used, as well as images of computer tomography. As objective measures of evaluation, we used time, GOALS (Global Operative Assessment of Laparoscopic Skills) scale and task-specific checklist to evaluate laparoscopic training tasks. To study the ergonomics, muscular activity was analyzed by surface electromyography, and hand movements were recorded using a virtual glove. The CLS had a good preliminary acceptance in basic laparoscopic tasks. The results of the validation tests showed that the CLS is suitable for training and educating in laparoscopic basic tasks, and is able to distinguish the degree of laparoscopic experience among veterinarians. The tasks of cutting and suturing showed greater muscular activity. On the other hand, the axial handle showed better ergonomic positions compared with ring handle during the different tasks of the training program in the CLS. In conclusion, the CLS is a good tool for the veterinarians' training in laparoscopic surgery, although it has some limitations inherent to all simulators. In addition, the CLS has proven its content and constructive validity in its program of laparoscopic training for veterinarians. Finally, laparoscopic ergonomics in veterinary is affected by the type of task, as well as by the instrument used during training in the CLS.

El present treball de tesi doctoral s'ha dirigit a aprofundir en el coneixement de la utilitat d'un paràmetre d'avaluació de la oxigenació regional, la saturació tissular d'oxigen (StO2), obtingut mitjançant una tecnologia d'espectrofotometria de llum propera a l'infraroig (Near-Infrared Spectroscopy,o NIRS), en el pacient crític amb sèpsia greu i xoc sèptic. Tot i tractar-se de quatre publicacions, la temàtica d'aquesta tesi doctoral es pot tractar en tres blocs: (1) Validació i protocol·lització de la mesura de StO2; (2) Estudi del valor de la StO2 com a predictor ràpid i no-invasiu d'alteracions en variables hemodinàmiques i oximètriques de caràcter global utilitzades al procés de reanimació; (3) Anàlisi del valor pronòstic de les variables de StO2 en els pacients en xoc sèptic. En un primer treball, realitzat en voluntaris sans, i amb l'objectiu de proposar uns paràmetres de mesura de la StO2 menys subjectes a variabilitat entre individus, es van comparar els valors de StO2 en diferents localitzacions musculars i a diferents profunditats de sensat. Donat que, a més del valor basal de StO2, l'avaluació de la resposta de la StO2 a un test d'isquèmia transitòria dóna informació sobre l'estat metabòlic i la funcionalitat endotelial del teixit estudiat, la mesura s'ha de fer en zones distals de les extremitats. En el present treball, la cara ventral de l'avantbraç i l'eminència tenar van ser les regions escollides per a la seva anàlisi. Els resultats obtinguts suggereixen que, en el procés de mesura de la StO2 i de les seves variables derivades d’un test d’oclusió vascular transitori, la combinació de la utilització de l’eminència tenar, amb un sensor de 15 mm i un test de provocació d’isquèmia amb un llindar de StO2 del 40% estan menys subjectes a variabilitat i donarien, per tant, resultats més consistents i comparables en els estudis clínics. El segon i tercer treballs es van dirigir a avaluar la correlació entre la StO2 i diferents variables oximètriques de caràcter global utilitzades com a objectius en el procés de reanimació del xoc. L'objectiu principal d'aquests treballs va ser testar la capacitat de predicció de la StO2 de l'alteració en variables d'oxigenació global, totes elles de caràcter invasiu. Els resultats obtinguts demostren que el valor absolut de StO2 és poc sensible a l’hora de descartar hipoperfusió global i, per tant, no seria una variable idònia per guiar la reanimació del xoc en substitució de les actuals variables d'oxigenació global. Tanmateix, la especificitat amb que la seva alteració es correlaciona amb la insuficient oxigenació dels teixits, juntament amb el seu caràcter ràpid i no-invasiu, podria fer de la tecnologia NIRS un sistema d’ajuda en la detecció precoç d’estats de hipoperfusió en situacions en les que no disposem encara de variables més invasives i/o de laboratori per a la detecció d’aquesta hipoperfusió tissular. Finalment, un quart treball va pretendre avaluar el valor pronòstic de les variables derivades de la StO2 en el procés de reanimació hemodinàmica, un cop s’haguessin restaurat els valors de pressió arterial mitjana. Els resultats obtinguts mostren que les variables de StO2 derivades d'un test d'isquèmia transitòria (tant la taxa de desoxigenació com la de reoxigenació) tenen valor pronòstic, independentment de l’estat macrocirculatori i/o d’oxigenació global. Per tant, la incorporació d’aquestes variables en el procés de reanimació, de forma complementària a les variables globals d'oxigenació, podria ser beneficiosa. Tanmateix, l'avaluació de la resposta d'aquestes variables als diferents tipus d'intervencions hemodinàmiques, així com l'anàlisi de l'impacte sobre el pronòstic de la seva inclusió en els algoritmes de reanimació, seran passes necessàries en el futur immediat per tal d'acostar aquesta tecnologia a la pràctica clínica. / The present thesis project has pretended to improve our knowledge on the usefulness of a regional oxygenation parameter, the tissue oxygen saturation (StO2), obtained by means of a novel spectroscopic technology (Near-Infrared Spectroscopy, or NIRS), in critically ill patients suffering from severe sepsis or septic shock. Although four publications complete this thesis, three main subjects might be depicted: (1) Validation and characterization of StO2 measurement; (2) Study of the StO2 value as a rapid and non-invasive predictor of alterations in global hemodynamic and oxygenation variables; (3) Analysis of the prognostic value of StO2 variables in septic shock patients. In a first study, in healthy volunteers, we aimed to propose a StO2 measurement process less subject to inter-individual variability. Therefore, we compared StO2 measurements in different muscular sites, and using different sensed depths. Since, in addition to StO2 steady-state value, StO2 changes in response to a transient ischemic challenge provide information about tissue metabolic state and endothelial integrity, its measurement needs to be performed on distal areas of the limbs. In the present study, the forearm and the thenar eminence were chosen for their analysis. The obtained results suggest that the combination of thenar eminence, a 15-mm probe and using a StO2 ischemic threshold of 40% is less subject to variability and, therefore, might result in more robust and comparable results in clinical studies. The second and third publications aimed to evaluate the correlation between StO2 and several global oxygenation variables used as septic shock resuscitation endpoints in clinical practice. The main objective of the study was to test the ability of StO2 to non-invasively predict alterations in global oxygenation variables. The observed results demonstrate that StO2 sensitivity is poor in order to rule out global tissue hypoperfusion, and therefore, might not be a reliable parameter to guide septic shock resuscitation process in substitution of current global oxygenation parameters. However, since StO2 alterations correlate with high specificity with tissue dysoxia, together with its rapid and non-invasive nature, NIRS technology might be a helpful tool in early detection of hypoperfusion states, when invasive or lab variables are not available yet. Finally, our fourth study was designed to evaluate the prognostic value of StO2 variables in the hemodynamic resuscitation process, once mean arterial pressure values have been normalized. The results of the study show that StO2 variables obtained during a transient ischemic challenge (both de-oxygenation and re-oxygenation rates) have prognostic implications, independently from the macrocirculatory state. Therefore, including these StO2 variables within the resuscitation process, complimentary to global oxygenation variables, might prove useful in terms of patients' outcome. However, StO2 response to further resuscitation interventions, as well as the impact of StO2 integration in future resuscitation algorithms, are mandatory in order to bring this technology closer to clinical practice.

La parálisis cerebral (PC) se define como un grupo de desórdenes del desarrollo del movimiento y la postura que cursa con déficit cognitivos, alteraciones emocionales, de conducta y sociales. Este trabajo ha tenido como objetivos analizar el efecto de un tratamiento de estimulación cognitiva sobre las capacidades cognitivas en niños con parálisis cerebral así como estudiar la relación entre el funcionamiento ejecutivo y la conducta a partir de las respuestas aportadas por padres y profesores. Dicha tesis se compone de dos estudios: -Estudio 1: Muestra de 15 niños con parálisis cerebral (PC), con una edad media de 8.80 años (DE: 2.51), clasificados mediante la escala Gross Motor Function Classification System (GMFCS) nivel I (n=6), nivel II (n=4), nivel III (n=2) y nivel V (n=3). Los déficit cognitivos fueron evaluados mediante la Escala de Inteligencia Wechsler para niños (WISC-IV) y la prueba Continuos Performance Test (CPT-II). Se administraron los cuestionarios para padres y profesores Behavior Rating Inventory of Executive Function (BRIEF) y la Escala de Evaluación de Conners (CPRS-48 y CTRS-28). Se realizó un programa de estimulación cognitiva 2 horas semanales durante 8 semanas. Se observaron diferencias estadísticamente significativas tras aplicar el tratamiento de estimulación cognitivo en el índice de Razonamiento Perceptivo del WISC-IV. No se obtuvieron diferencias pre y post-tratamiento en las puntuaciones de los cuestionarios Conners y BRIEF. Tampoco se hallaron diferencias en los resultados del WISC-IV en función del sexo o la escala GMFCS. El rendimiento cognitivo de los niños con PC mejora tras la aplicación de un programa de rehabilitación cognitiva. -Estudio 2: La muestra quedó formada por 46 niños con PC, con una edad media de 10,26 años (DE: 2,95). Los niños se distribuyeron en la escala GMFCS en nivel I (n=16), nivel II (n=3), nivel III (n=11), nivel IV (n=10) y nivel V (n=4). Los resultados mostraron una relación inversa entre el BRIEF y el ABAS-II, además, se obtuvieron discrepancias entre las respuestas aportadas por padres y profesores, tanto en el ABAS-II como en el BRIEF. Encontramos relación entre el funcionamiento ejecutivo y la conducta adaptativa en niños con PC. Hallamos discrepancias en las respuestas aportadas por padres y profesores. Por último, los datos muestran que a mayor afectación motora mayores dificultades en el hogar, en el autocuidado, en el control emocional y en la organización de materiales. / Cerebral palsy (CP) is defined as a group of developmental disorders of movement and posture that causes social cognitive deficits, emotional disturbances, and behavior. The main objectives of this work were to analyse the effect of cognitive stimulation treatment on the cognitive capabilities in children with cerebral palsy, as well as study the relationship between executive functioning and behavior in children with CP from the answers given by parents and teachers. - Research 1: Our sample consisted of 15 children with cerebral palsy, with a mean age of 8.80 ± 2.51 years, who were classified with the aid of the Gross Motor Function Classification System (GMFCS) on level I (n = 6), level II (n = 4), level III (n = 2) and level V (n = 3). Cognitive impairment was evaluated by means of the Wechsler Intelligence Scale for Children (WISC-IV) and the Continuous Performance Test (CPT-II). Both the questionnaires for parents and teachers from the Behavior Rating Inventory of Executive Function (BRIEF) and the Conners rating scales (CPRS-48 and CTRS-28) were administered. A cognitive stimulation programme was carried out at a rate of two hours a week for a total of eight weeks. Statistically significant differences were observed after applying the cognitive stimulation treatment in the perceptive reasoning index of the WISC-IV. No differences were obtained on the Conners and the BRIEF scores before and after the treatment. Neither were any differences found in the results on the WISC-IV according to sex or on the GMFCS. The cognitive performance of children with cerebral palsy improves after applying a cognitive rehabilitation programme. - Research 2: The sample consisted on 46 children with CP with a mean age of 10.26 years (SD: 2.95). 44 of the 46 children were distributed in Gross Motor Function Classification System (GMFCS) into level I (n = 16), level II (n= 3), level III (n = 11), level IV (n = 10) and level V (n = 4). The results showed a relationship between BRIEF and ABAS-II. Furthemore, discrepancies between the responses from parents and teachers, both in the ABAS-II and in the BRIEF, were obtained. We found a significative relationship between executive functioning in children with CP and adaptive behavior. We found discrepancies in the answers given by parents and teachers. Finally, the data showed that the higher motor impairment increases difficulties at home.

La heminegligencia visuo-espacial izquierda es un trastorno neurológico grave que afecta a dos tercios de los pacientes que han sufrido un ictus en la arteria cerebral media o posterior del hemisferio derecho. Es un déficit que interfiere de forma significativa en las actividades de vida diaria de los pacientes (vestido, higiene personal, alimentación, movilidad, entre otros); también se ha asociado con estancias hospitalarias más prolongadas y períodos de rehabilitación más largos. Frente a esta problemática, se han propuesto múltiples técnicas para aliviar, reducir o rehabilitar la heminegligencia visuo-espacial, no obstante, a día de hoy aún no se ha identificado un tratamiento plenamente eficaz. Los objetivos del presente trabajo fueron: 1) analizar si la administración de intervenciones combinadas, en pacientes que presentaban heminegligencia visuo-espacial izquierda, era más eficaz que la aplicación aislada de un único tratamiento; 2) estudiar la relación entre el tiempo de evolución post-ictus y la respuesta a dos tipos de tratamiento, único y combinado. El tratamiento único consistió en realizar ejercicios de rehabilitación cognitiva informatizada mediante la plataforma de telerehabilitación Guttmann, NeuroPersonalTrainer®; el tratamiento combinado estuvo compuesto por la realización de los mismos ejercicios junto con un dispositivo visual que llevaba el hemicampo derecho de cada ojo ocluido (técnica del right hemifield eye patching). El protocolo de exploración neuropsicológico para los tres estudios estuvo formado por: Bells Test, Figure Copying of Ogden, Line Bisection, Baking Tray Task y Reading Task. La repercusión funcional del tratamiento se valoró mediante The Catherine Bergego Scale. En el primer estudio 12 pacientes fueron distribuidos aleatoriamente en dos grupos de tratamiento: tratamiento único (n=7) y tratamiento combinado (n=5). En ambos casos, el tratamiento comprendió una media de 15 sesiones de 1 hora de duración. Los resultados mostraron diferencias intergrupales estadísticamente significativas en la comparación de las diferencias post-pre tratamiento en la prueba Reading Task. No se obtuvieron diferencias funcionales en The Catherine Bergego Scale. En el segundo estudio se mantuvo la estructura y la metodología del anterior con la finalidad de comprobar si el efecto obtenido, en el primer estudio, se mantenía o aumentaba con un tamaño muestral mayor. Se realizó un ensayo clínico aleatorizado realizado con 28 pacientes compuesto por dos grupos experimentales: el grupo que recibió el tratamiento único (n=15) y, el grupo que recibió el tratamiento combinado (n=13). Todos ellos también realizaron también 15 sesiones de 1 hora de duración de rehabilitación cognitiva informatizada. Tras el tratamiento, los dos grupos mostraron cambios significativos a nivel intragrupal en el protocolo de exploración neuropsicológico aunque no se obtuvieron diferencias intergrupales, ni en el protocolo de exploración ni en la escala funcional. En el tercer estudio 31 pacientes fueron aleatorizados en dos grupos de tratamiento: tratamiento único (n=18) y, tratamiento combinado (n=13). En esta ocasión, cada grupo de tratamiento fue dividido en función del tiempo que había transcurrido entre el ictus y el inicio del tratamiento (≤ 12 semanas vs. > 12 semanas). Los resultados indicaron cambios a nivel intragrupal en los cuatro grupos, sin embargo, no se obtuvieron diferencias intergrupales. Ni el tiempo transcurrido entre el ictus y el inicio del tratamiento, ni el tipo de tratamiento recibido, parecieron ser variables que influyan en la mejora de estos pacientes. / Visuo-spatial neglect is a serious neurological disorder that affects two thirds of patients who have suffered a stroke in the middle or posterior cerebral artery of the right hemisphere. It is a deficit that can significantly interfere with patient´s activities of daily living (dressing, personal hygiene, feeding, mobility, etc.). It has also been associated with larger hospital stays and longer periods of rehabilitation. For this reason, many techniques have been proposed to alleviate, reduce or rehabilitate visuo-spatial neglect, however, nowadays effective treatment has not yet been identified. The aims of this work were 1) to analyze whether the administration of combination treatment in patients with visuo-spatial neglect, was more efficacious than single treatment; 2) to study the relation between post-stroke time evolution and to analyze the patient´s response to two treatments, single treatment vs. combination treatment. The single treatment groups followed a cognitive rehabilitation program using the computer-based platform Guttman, NeuroPersonalTrainer®; the combination treatment group received the same cognitive rehabilitation program but in combination with a visual device incorporated into the right hemifield eye patching, in which the right hemifield of each lens was completely opaque. Visuo-spatial neglect was assessed using a specific exploration protocol (Bell Cancellation Test, Figure Copying of Odgen, Line Bisection, Baking Tray Task, and Reading Task). The functional effects of the treatment were assessed using the Catherine Bergego Scale. In the first study, 12 patients were randomized into two treatment groups: a single treatment group (n= 7) and a combination treatment group (n= 5). In both cases, the treatment consisted of a mean number of 15 sessions each lasting 1 hour. Significant between-group differences were observed when comparing the pre- and post-treatment scores for the Reading Task. No differences were observed in either group in the Catherine Bergego Scale administered at baseline and at the final intervention. In the second study the structure and methodology was maintained from the previous study in order to check whether the effect obtained was maintained or increased with increasing sample size. A randomized clinical trial with 28 patients composed of two experimental groups was performed: single treatment group (n= 15) and combination treatment group (n= 13). In both cases, the treatment consisted of a mean number of 15 sessions each lasting 1 hour. After treatment, both groups showed significant changes intragroup, but did not show differences between-group in the exploration protocol or the functional scale. 31 patients were randomized into two treatment groups: a single treatment group (n=18) and a combination treatment group (n=13). In both cases, the treatment consisted of a mean number of 15 sessions each lasting 1 hour. Each treatment group was divided according to the period that elapsed between the stroke and the start of treatment (≤ 12 weeks vs. > 12 weeks). The results obtained after applying these treatments indicated changes at intragroup level in the four groups analyzed. However, no between-group differences were found. No differences in either group were observed in the Catherine Bergego Scale. Neither the time elapsed between the stroke and the beginning of treatment nor the type of treatment received appear to be variables that influence the improvement of these patients.

Algunos tratamientos de elaboración y conservación de los alimentos lesionan las bacterias, de manera que pierden la capacidad para multiplicarse y no son detectadas por métodos de cultivo convencionales. La citometría de flujo es una técnica de análisis independiente del cultivo de los microorganismos, usada ampliamente para evaluar de manera rápida el estado fisiológico de células bacterianas individuales, siendo la integridad de membrana unos de los indicadores más habituales debido a su importancia en la supervivencia de éstas. Sin embargo, los resultados obtenidos mediante citometría de flujo se ven afectados por la presencia de partículas de las muestras alimentarias. En esta tesis, se evaluaron estrategias para desarrollar un ensayo por citometría de flujo basado en el uso del yoduro de propidio (YP), fluorocromo que no atraviesa las membranas intactas, combinado con un fluorocromo que penetra las membranas intactas, para detectar y cuantificar con precisión bacterias patógenas lesionadas. En el primer experimento, se ajustaron las concentraciones y las ratios de combinaciones de YP con SYTO 9, SYTO 24 y SYTO BC para mejorar la resolución de poblaciones de células sanas y muertas de Escherichia coli O157:H7, Salmonella Enteritidis y Listeria monocytogenes en suspensiones control. Esto permitió detectar células lesionadas en suspensiones expuestas a estreses relacionados con los alimentos. En el segundo experimento, se aplicaron las tinciones optimizadas a muestras de ensalada de pasta inoculadas con E. coli O157:H7. Asimismo, se compararon ocho pre-tratamientos basados en la filtración gruesa de las muestras homogeneizadas y en un paso de dilución/lavado, para evaluar la reducción de partículas interferentes y la recuperación de E. coli O157:H7 de la ensalada. El pre-tratamiento más favorable fue la combinación de la bolsa de homogenización con filtro de 63 µm y la filtración centrífuga a través de un filtro de 5 µm, ya que redujo la concentración de partículas interferentes tanto como diluir la muestra. Considerando que el objetivo principal de esta tesis fue detectar específicamente bacterias patógenas lesionadas, en el tercer experimento, la optimización se llevó a cabo para suspensiones control de E. coli O157:H7 en soluciones tampón comúnmente usadas en inmunoensayos, y teñidas con SYBR Green I, un fluorocromo con alta afinidad por los ácidos nucleicos, YP y un anticuerpo marcado con R-ficoeritrina (Ac-RFE). La adición de Ac-RFE no afectó notablemente la resolución de las poblaciones en comparación con la resolución conseguida con la tinción con SYBR Green I y YP, y permitió reconocer claramente las células de E. coli O157:H7. En el cuarto experimento, se evaluaron estrategias de filtración de señal analítica para reducir la adquisición de datos procedentes de partículas interferentes. Posteriormente, se aplicó el pre-tratamiento de muestra optimizado, la tinción para evaluar la integridad de membrana y la inmunodetección, y la filtración de señal analítica, para monitorizar los cambios de la integridad de membrana de E. coli O157:H7 inoculada en ensalada de pasta durante 14 días de almacenamiento en refrigeración (pH 4,5; 4°C). Con este protocolo optimizado, el límite de detección disminuyó a 5 log UFC/g. Además, se observó que la mayoría de células de E. coli O157:H7 estaban lesionadas al principio del almacenamiento, pero mostraban una membrana intacta al final, lo que sugiere que las células lesionadas repararon su membrana durante la exposición a ácido y refrigeración y, por lo tanto, sobrevivieron en la ensalada de pasta. En conclusión, el ensayo por citometría de flujo para la evaluación de la integridad de membrana y la inmunodetección desarrollado en esta tesis es una buena herramienta para monitorizar el efecto de tratamientos relacionados con los alimentos sobre el estado de la membrana de E. coli O157:H7, parámetro fisiológico relacionado con la presencia de células lesionadas. / Nowadays, one of the key factors driving consumer food choice is convenience. This has led to an increase in the ready-to-eat (RTE) meal market, with a consequent emergence of new food safety hazards, since food processing and preservation technologies that may be applied to these food products have a milder effect on microorganisms than traditional food processing strategies (e.g. pasteurization, sterilization). As a result, some of those technologies render injured bacteria, which may lose their ability to multiply and are therefore not detected by conventional plating. However, their presence in food must not be overlooked, due to their potential capacity to recover and pose a hazard to health in the case of pathogens. Flow cytometry is a culture-independent technique which has been widely used in bacterial research to rapidly assess the physiological state of individual cells, with membrane integrity being one of the most popular parameters due to its essential role in survival. However, flow cytometry results are largely affected by the interference of food particles. In this thesis, several strategies were evaluated to develop a flow cytometry assay, based on the use of the membrane-impermeant dye propidium iodide (PI) combined with a membrane-permeant dye, to accurately detect and enumerate injured pathogenic bacteria. In the first experiment, concentrations and ratios of combinations of PI with SYTO 9, SYTO 24, and SYTO BC were adjusted to improve resolution of healthy and dead Escherichia coli O157:H7, Salmonella Enteritidis and Listeria monocytogenes populations in control suspensions. This allowed detection of injured cells in suspensions exposed to food-related stresses. In the second experiment, optimized stainings were applied to RTE pasta salad samples inoculated with E. coli O157:H7. Moreover, eight different salad sample pre-treatments based on coarse filtration of homogenates and a dilution/wash step were compared in terms of background particle reduction and E. coli O157:H7 recovery. The most advantageous pre-treatment was the combination of a 63-µm filter blender bag and centrifugal filtration through a 5-µm filter, since it was equivalent to sample dilution in reducing background particle concentration. Considering that the ultimate goal of this thesis was to detect specific injured pathogen cells in RTE pasta salad, in the third experiment, optimization was carried out for E. coli O157:H7 control suspensions in buffers commonly used in immunoassays and stained with the high-affinity nucleic acid dye SYBR Green I, PI, and an R-phycoerythrin-labeled antibody (Ab-RPE). Addition of Ab-RPE did not remarkably affect population resolution compared with staining only with SYBR Green I and PI, and allowed clear recognition of E. coli O157:H7. Finally, in the fourth experiment, a range of signal filtering strategies were evaluated for reduced acquisition of flow cytometry data arising from interfering food particles. Then, optimized salad sample pre-treatment, combined membrane integrity and immunodetection staining, and signal filtering were applied to monitor the changes in membrane integrity of E. coli O157:H7 inoculated in pasta salad throughout 14-day refrigerated storage (pH 4.5, 4°C). With this optimized flow cytometry protocol, the limit of detection of the assay was reduced to 5 log CFU/g. Additionally, it was observed that most E. coli O157:H7 cells were injured at the beginning of refrigeration, but showed an intact membrane at the end, which suggests that injured cells repaired their membrane during exposure to refrigeration and acid stresses, and therefore survived in RTE pasta salad. In conclusion, the immunodetection and membrane integrity flow cytometry assay in food samples developed in this thesis is a good tool to monitor the effect of a number of food-related treatments on E. coli O157:H7 cell membrane state, a physiological parameter that can be related to the presence of injured cells.

L'anaplasmosi, la babesiosi i la besnoitiosi es troben entre les malalties bovines poc conegudes i estudiades a Catalunya. A dia d'avui, més enllà de descripcions i comunicacions puntuals no disposem de cap estudi epidemiològic que ens permeti conèixer el seu estat actual. Amb el propòsit d'iniciar aquests estudis es planteja el present treball de Tesi Doctoral, centrat en l'estudi d'Anaplasma spp., Babesia bigemina i Besnoitia besnoiti. La prevalença dels dos hemoparàsits es va determinar a través de l’anàlisi de sèrums de diferents poblacions bovines. La metodologia va consistir en tècniques d’ELISA. L’estudi estadístic dels resultats i de diferents factors de risc associats a l’animal, el maneig i localització de l’explotació es va realitzar amb un model lineal generalitzat. Les seroprevalences observades van ser aproximadament d’un 40 % per a l’anaplasmosi i un 54,4 % per a la babesiosi causada per B. bigemina. L’edat i la cria en extensiu es van establir com a factors determinants. L'estudi de B. besnoiti consta a la vegada de dues parts. En la primera part, es van analitzar sèrums de bovins procedents de les zones nord i sud de Catalunya. mitjançant una tècnica d’ELISA L’estudi estadístic de les dades es va basar en un model lineal generalitzat. Els resultats de seroprevalença obtinguts van ser d'un 64 %. En la segona part de l'estudi de B. besnoiti es van obtenir mostres de globus oculars i de sang de 206 animals sacrificats en dos escorxadors de la comarca de la Garrotxa. Es van observar els quists escleroconjuntivals en un 3,9 % dels animals estudiats, mentre que la seroprevalença en els mateixos animals va ser d'un 29,6 %. Les seroprevalences obtingudes per a les hemoparasitosis i la besnoitiosi bovina mostren que s’haurien d’incloure en el diagnòstic diferencial de les malalties bovines a la nostra zona. / Anaplasmosis, babesiosis and besnoitiosis are bovine diseases with limited information in Catalonia. Nowadays, except for brief descriptions, no epidemiological studies are available to know the current status. The main objective of this Doctoral Thesis is to initiate these studies focused on Anaplasma spp., Babesia bigemina and Besnoitia besnoiti. Hemoparasites seroprevalence were established by the analysis of samples from different cattle population. The methodology consisted in ELISA analysis of serum samples. The statistical study of the results and different risk factors from animals, management and geographic location were obtained using a generalized linear model. The overall seroprevalence to Anaplasma spp. was closely to 40 % and to B. bigemina was 54.4 %. Age and extensive management were determined as determinant factors. B. besnoiti study was divided in two parts. In the first one, serum samples from north and south areas from Catalonia were analysed by an ELISA technique. Data analysis was based on a generalized linear model. The seroprevalence was found to be 64 %. In the second part of B. besnoiti study, eyeball and blood samples were collected from 206 slaughtered cattle in two abattoirs from Garrotxa region. 3,9 % of studied animals showed sclero-conjunctival cysts, whereas the seroprevalence was 29,6 % in the same animals. The high seroprevalences detected for both hemoparasites and bovine besnoitia suggested they all should be included in differential diagnosis in bovine diseases in our area.

Estudios previos han identificado una mayor prevalencia de trastornos del vínculo materno-infantil en mujeres con depresión posparto. Sin embargo, no todas las madres deprimidas desarrollan una alteración en su vinculación temprana con sus infantes y aún hay poca información sobre cuáles factores son los más asociados a trastornos en el vínculo madre-bebé en madres deprimidas, particularment en población española durante el posparto. La presente tesis doctoral tuvo como principal objetivo el estudiar el proceso de vinculación temprana madre-infante en madres puérperas deprimidas y compararlas con madres sin depresión. Para cumplir el objetivo principal de la tesis, se desarrollaron tres estudios cada uno con su propio diseño, metodología y muestra. El primer estudio evaluó las propiedades psicométricas del Cuestionario de Vínculo en el posparto (PBQ, Brockington et al, 2001, 2006) en una muestra de 847 madres españolas a las 4-6 semanas de posparto. La muestra incluyó a 513 madres de población general y 327 madres de una muestra clínica, pacientes de un Programa de Psiquiatría Perinatal. La estructura original de 4 factores del PBQ no pudo ser replicada y un factor general fue identificado como la solución más estable. La versión española del PBQ reportó buenas propiedades psicométricas. El segundo estudio tuvo un diseño transversal e identificó una asociación entre un episodio depresivo mayor severo y no dar lactancia materna con perturbaciones en el vínculo materno-infantil en 77 madres diagnosticades con un episodio depresivo mayor a las 4-6 semanas de posparto. El estudio 2 permitió identificar una prevalencia del 33.8% de madres con perturbaciones en el vínculo materno-infantil en madres deprimidas usando el PBQ (puntaje total ≥26). El tercer estudio evaluó el vínculo materno-infantil en una muestra de 45 madres con trastornos mentales en el posparto. También permitió la comparación de las propiedades psicométricas de 3 cuestionarios que evalúan el vínculo materno-infantil: el PBQ, MPAS (Condon & Corkindale, 2006) y el MIBS (Taylor et al, 2005) y su utilidad en muestras clínicas. De los tres cuestionarios, el PBQ fue el que mostró las mejores propiedades psicométricas. Puntos de corte preliminares para identificar un trastorno en el vínculo materno-infantil fueron identificados para los 3 cuestionarios usando la Entrevista Birmingham para la Salud Mental Materna (Brockington et al 2006) como el estándar de oro. Las principales conclusiones identificaron que la severidad de la depresión y no brindar lactancia maternal están negativamente asociadas a perturbaciones en el vínculo materno-infantil en madres deprimidas. También las madres deprimidas reportaron una prevalencia mayor de perturbaciones en el vínculo materno-infantil que las madres con trastornos de salud mental y madres de la población general. El PBQ fue confirmado como un cuestionario válido y confiable para evaluar dificultades en el vínculo materno-infantil en madres puérperas españolas mostrando las mejores propiedades psicométricas cuando fue comparado con el MPAS y el MIBS. Asociaciones específicas entre la primiparidad, tratamiento psicofarmacológico, depresión (especialmente problemes de sueño, llanto debido a infelicidad e ideas suicidas) y la ansiedad fueron identificados Asociados con dificultades en el vínculo materno-infantil. / Previous studies have identified a higher prevalence of mother-infant bonding disorders in women that suffer from postpartum depression. Nevertheless not all the depressed mothers present a disturbance in their early relationship with their infants and there is few information that identifies the factors that are more related to a mother-infant bonding disorder in depressed mothers, specially in Spanish postpartum women. The present doctoral thesis had as main objective to study the early mother-infant bonding process in postpartum depressed mothers and compare them with mothers without depression. To fulfill the main objective of the thesis three studies were developed with their own particular design, methodology and population. The first study assessed the psychometric properties of the Postpartum Bonding Questionnaire (PBQ, Brockington et al, 2001, 2006) in a sample of 847 Spanish mothers at 4-6 weeks of postpartum. The total sample included 513 mothers from the general population and 327 mothers from a clinical sample, that attended a Perinatal Psychiatry Program. The original four-structure of the PBQ could not be replicated and a general factor was identified as the most stable solution. Good psychometric properties were reported in the Spanish version of the PBQ. The second study had a cross-sectional design and identified an association between the severity of postpartum depressive episode and not breastfeeding with early mother-infant bonding disturbances in 77 mothers diagnosed with a major depressive episode at 4-6 weeks of postpartum. Study 2 allowed to identify a prevalence of 33.8% of mother-infant bonding disturbances in depressed mothers using the PBQ (total score ≥26). The third study assessed the mother-infant bonding in a sample of 45 mothers with mental health disorders in the postpartum. It also allowed the comparison of the psychometric properties of three questionnaires that assess mother-infant bonding: PBQ, MPAS (Condon & Corkindale, 2006) and MIBS (Taylor et al, 2005) and their utility in clinical samples. Of the three questionnaires, the PBQ show the highest psychometric properties. Preliminary cutoff points to identify a mother-infant bonding disorder were identified for the 3 questionnaires with the use of the Birmingham Interview for Maternal Mental Health (Brockington et al 2006) as the gold standard. The main conclusions were that the severity of depression and not breastfeeding are negatively associated to mother-infant bonding disturbances (MIBD) in depressed mothers. Also the depressed mothers reported a higher prevalence of MIBD than mothers with mental health disorders and mothers from the general population. Also the PBQ was confirmed as a valid and reliable questionnaire to assess mother-infant bonding difficulties in Spanish postpartum mothers with the best psychometric properties when compared with the MPAS and the MIBS. Specific associations between primiparity, psychopharmacological treatment, depression (specifically sleeping problems, crying due to unhapinness and suicidal thoughts) and anxiety were also identified associated with mother-infant bonding difficulties.